CN108424437B - 一种递送分子及纳米颗粒、制备方法、用途 - Google Patents

一种递送分子及纳米颗粒、制备方法、用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供的一种递送分子及纳米颗粒、制备方法、用途，所述递送分子包括细胞穿膜肽，在所述细胞穿膜肽的C端或N端链接有聚精氨酸，所述递送分子可以与siRNA等核苷酸、蛋白质、DNA结合形成直径为600nm大小的纳米颗粒，可以转染入细胞内和动物模型体内，并将siRNA递送至细胞内，释放出siRNA发挥治疗作用，表明本发明所述的递送分子无论在细胞水平和动物水平上，均可以将递送物递送至细胞内或动物体内，并释放递放物发挥作用，所述递送分子无毒，递送效率高。

Description

一种递送分子及纳米颗粒、制备方法、用途
技术领域
本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种递送分子及纳米颗粒、制备方法、用途。
背景技术
由于细胞具有复杂的膜系统，导致多核苷酸及其它细胞膜不可渗透性的药物向活细胞内递送时受到限制。常用的反义、RNAi及基因疗法的药物是相对较大的亲水性聚合物且常带较高负电荷，而亲水性和较高负电荷两种物理特征都严重的限制了这些药物跨越细胞膜直接扩散。因此，多核苷酸以及其他药物的递送的主要障碍是跨细胞膜向细胞质或核的递送。
目前，已经开发出能在体外实现适度有效递送多核苷酸至细胞内的众多转染试剂，然而使用这些相同转染试剂在体内传递多核苷酸很复杂且因体内毒性、不利的血清相互作用或不良靶向而变得无效。用于体内递送小核酸的另一种手段是将核酸连接于小靶向分子、脂质或固醇上，尽管使用上述共轭物已经观测到一定的递送及活性，但利用上述的方法需要极大的核酸剂量，导致毒性和严重的副作用。如siRNA等药物目前在应用上存在的最大问题是在细胞水平siRNA的运送效率低，而在动物水平上运送效率更低，若提高治疗效果则需要加大siRNA的量，而这样就会增加siRNA的毒性。因此，目前对于如何提高siRNA等药物的递送效率以及降低其毒性是siRNA等药物应用的关键。因此，目前递送多核苷酸等药物跨细胞膜所要解决的问题为：(1)递送分子的有毒性；(2)多核苷酸等药物在低剂量下递送效率低。
为提供一种无毒、多核苷酸等药物在低剂量下递送效率高的递送分子，科研人员提出了不同的方法，包括脂质、聚阳离子纳米颗粒和基于肽的制剂，但是这些技术中仅少数在体内有效且已经达到临床水平。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的递送系统存在毒性以及递送效率低的问题，从而提供一种无毒且递送效率高的递送分子及纳米颗粒、制备方法、用途。
本发明提供了一种递送分子，包括细胞穿膜肽，在所述细胞穿膜肽的C端或N端链接有聚精氨酸。
优选的，在所述细胞穿膜肽的C端链接有聚精氨酸。由于所述细胞穿膜肽的C端含有多个正电荷氨基酸，尤其是transpotan C端含有多个正电荷氨基酸，是结合siRNA的主要部位，所以将聚精氨酸连载C端。
所述的递送分子，所述聚精氨酸如dRn表示，所述dR为精氨酸，所述7≤n≤10。
所述的递送分子，所述n＝9。
所述的递送分子，所述细胞穿膜肽选自透膜肽Transpotan、透膜肽PTD、缺陷病毒蛋白转到肽TAT、源于果蝇触角基因同源结构域的十六肽Penetratin、SynB1、SynB3、PTD-4、PTD-5、D-Tat、MAP、SBP、FBP、MPG、Pep-1或Pep-2中的任意一种。
所述的递送分子，所述细胞穿膜肽为透膜肽Transpotan。
本发明提供了一种纳米颗粒，包括：
递送物；和所述的递送分子。
所述的纳米颗粒，所述递送物选自肽、蛋白质、核酸、药物、前药或治疗分子。优选的，所述递送物选自短肽、核酸或治疗分子。
所述的纳米颗粒，所述核酸选自siRNA、miRNA、DNA质粒或其类似物。
所述的纳米颗粒，所述siRNA的正义链为5-GGAUCUUAUUUCUUCGGAGdTdT-3，反义链5-CUCCGAAGAAAUAAGAUCCdTdT-3。
本发明提供了一种制备权所述的纳米颗粒的方法，将所述的递送分子和递送物于缓冲液中混合，即得。
所述的方法，所述的递送分子与递送物siRNA按摩尔比8-16:1混合。
所述的方法，所述的递送分子与递送物siRNA按摩尔比8:1混合。
本发明提供了一种药物组合物，含有所述的递送分子或所述的纳米颗粒。
本发明提供了一种试剂盒，含有所述的递送分子或所述的纳米颗粒。
本发明所述的递送分子、所述的纳米颗粒、所述的药物组合物或所述的试剂盒在制备预防或治疗疾病的药物中的用途。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的一种递送分子，包括细胞穿膜肽，在所述细胞穿膜肽的C端或N端链接有聚精氨酸，所述递送分子可以与siRNA等核苷酸、蛋白质、DNA结合形成直径为600nm大小的纳米颗粒，并将siRNA递送至细胞内，并释放出siRNA发挥治疗作用，表明所述的递送分子无论在细胞水平和动物水平上，均可以将递送物递送至细胞内或动物体内，并释放递放物发挥作用，所述递送分子无毒，递送效率高。
2.本发明提供的一种纳米颗粒，包括：递送物和所述的递送分子，所述递送物选自肽、蛋白质、核酸、药物、前药或治疗分子。
3.本发明提供的一种纳米颗粒，所述递送物为siRNA，所述siRNA的正义链为5-GGAUCUUAUUUCUUCGGAGdTdT-3，反义链5-CUCCGAAGAAAUAAGAUCCdTdT-3，所述纳米颗粒可以转染感染流感病毒的细胞和动物中，并释放出siRNA，siRNA均可以发挥显著的抑制流感病毒的作用，表明所述纳米颗粒可以在细胞水平和动物水平上发挥抑制流感病毒的作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实验例1中的凝胶电泳图；
图2是本发明实验例2中的不同静置时间下制备的纳米颗粒的粒径大小柱状图；
图3是本发明实验例3中的4种细胞系转染装配荧光染料标记的绿色荧光蛋白基因的特异性siRNA(siGFP)的纳米颗粒后的荧光显微镜图；
图4是本发明实验例4中的转染不同浓度纳米颗粒后的MDCK细胞内流感病毒NP蛋白的浓度，其中B-actin为内参蛋白，M1为流感病毒M1蛋白；
图5是本发明实验例4中的转染不同浓度纳米颗粒后的小鼠体内的流感病毒的滴度值的柱状图；
图6是本发明实验例5中4组小鼠内体重变化曲线图；
图7是本发明实验例5中4组小鼠肺内的流感病毒的滴度值的柱状图；图8是本发明实验例6中T9(dR)和透膜肽Transpotan递送siRNA分子的转运效率结果图。在A549细胞上transpotan+dR9对siRNA分子的转运效率高于单独的tranpotan,***p<0.005。
具体实施方式
实施例1递送分子T9(dR)
本实施例提供的一种递送分子T9(dR)，其细胞穿膜肽选择透膜肽Transpotan(神经肽N末端和黄蜂毒素细胞膜结合区的复合物)，在透膜肽Transpotan的C端链接有9聚精氨酸(dR9)形成复合肽，其氨基酸序列如下：GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKILdRdRdRdRdRdRdRdRdR，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。将上述复合肽命名为T9(dR)。上述复合肽由金斯瑞公司制备而成。
实施例2递送分子T7(dR)
本实施例提供的一种递送分子T7(dR)，其细胞穿膜肽选择透膜肽Transpotan(神经肽N末端和黄蜂毒素细胞膜结合区的复合物)，在透膜肽Transpotan的N端链接有7聚精氨酸(dR7)形成复合肽，其氨基酸序列如下：dRdRdRdRdRdRdRGWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKIL，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。将上述复合肽命名为T7(dR)。上述复合肽由金斯瑞公司制备而成。
实施例3递送分子T10(dR)
本实施例提供的一种递送分子T10(dR)，其细胞穿膜肽选择透膜肽Transpotan(神经肽N末端和黄蜂毒素细胞膜结合区的复合物)，在透膜肽Transpotan的C端链接有10聚精氨酸(dR10)形成复合肽，其氨基酸序列如：GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKILdRdRdRdRdRdRdRdRdRdR。将上述复合肽命名为T10(dR)。上述复合肽由金斯瑞公司制备而成。
实施例4递送分子PTD9(dR)
本实施例提供的一种递送分子PTD9(dR)，其细胞穿膜肽选择透膜肽PTD，在透膜肽PTD的C端链接有9聚精氨酸(dR9)形成复合肽，其氨基酸序列如下：RQIKWFQNRRMKWKKdRdRdRdRdRdRdRdRdR。将上述复合肽命名为PTD9(dR)。上述复合肽由金斯瑞公司制备而成。
实施例5递送分子TAT9(dR)
本实施例提供的一种递送分子TAT9(dR)，其细胞穿膜肽选择透膜肽TAT，在透膜肽TAT的C端链接有9聚精氨酸(dR9)形成复合肽，其氨基酸序列如下：YGRKKRRQRRRdRdRdRdRdRdRdRdRdR。将上述复合肽命名为TAT9(dR)。上述复合肽由金斯瑞公司制备而成。
实施例6递送分子SynB1-9(dR)
本实施例提供的一种递送分子SynB1-9(dR)，其细胞穿膜肽选择透膜肽SynB1，在透膜肽SynB1的C端链接有9聚精氨酸(dR9)形成复合肽，其氨基酸序列如下：RGGRLSYSRRRFSTSTGRdRdRdRdRdRdRdRdRdR，其氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。将上述复合肽命名为SynB1-9(dR)。上述复合肽由金斯瑞公司制备而成。
实施例7siRNA的设计
本实施例设计和筛选抑制流感病毒保守基因的siRNA，经过比对各个亚型的流感病毒基因片段，发现A型流感病毒的NP基因片段在所有亚型的流感病毒中最保守，因此以H1N1亚型流感病毒NP基因片段(如SEQ ID NO：3所示)为模板，用Invitrogen公司的siRNA设计开放软件设计出针对NP基因片段具有特异性的siRNA:正义链5-GGAUCUUAUUUCUUCGGAGdTdT-3和反义链5-CUCCGAAGAAAUAAGAUCCdTdT-3。通过由IDT公司制备而成。
实施例8纳米颗粒的制备
采用实施例1制备的递送分子T9(dR)和实施例7制备的siRNA制备纳米颗粒，包括如下步骤：
将递送分子T9(dR)和siRNA按照摩尔比8:1在TAE缓冲液(40mM Tris–HCl，1v/v％乙酸(acetic acid)，1mM EDTA)中混合，然后在室温25℃下静置20分钟，即得。
实施例9纳米颗粒的制备
采用实施例1制备的递送分子T9(dR)和实施例7制备的siRNA制备纳米颗粒，包括如下步骤：
将递送分子T9(dR)和siRNA按照摩尔比12:1在TAE缓冲液中混合，然后在室温下静置15分钟。
实施例10纳米颗粒的制备
采用实施例1制备的递送分子T9(dR)和实施例7制备的siRNA制备纳米颗粒，包括如下步骤：
将递送分子T9(dR)和siRNA按照摩尔比16:1在TAE缓冲液中混合，然后在室温下静置60分钟。
实验例1
采用实施例1制备的递送分子T9(dR)和绿色荧光蛋白基因的特异性siRNA(siGFP)(正义链：siRNA5’-AAGCUGACCCUGAAGUUCAdTdT-3,和反义链5’-UGAACUUCAGGGUCAGCUUdTdT-3’，通过IDT公司制备而成)制备纳米颗粒，将递送分子T9(dR)和siRNA分别按照摩尔比16:1、8:1、4:1、2:1、1:2在TAE缓冲液中混合，同时设置对照组为仅含5摩尔的siRNA溶液，然后在室温下静置20分钟，通过凝胶电泳阻滞的方法验证不同摩尔比下的T9(dR)和siRNA是否能够形成复合体，结果如图1所示，证实T9(dR)和siRNA的结合是非特异性结合，从图中可以看到当T9(dR)：siGFP的摩尔比小于8:1时siGFP未与T9(dR)结合，当T9(dR)：siGFP的摩尔比大于或等于8:1时siGFP与T9(dR)可以有效结合。
实验例2
采用实施例1制备的递送分子T9(dR)和实施例7制备的siRNA制备纳米颗粒，将递送分子T9(dR)和siRNA按照摩尔比8:1在TAE缓冲液中混合，然后在室温下分别静置15、30、60分钟，然后测量所形成的纳米颗粒大小，在25℃条件下，在Zetasizer Nano机器上测形成的纳米颗粒大小，结果如图2所示，表明T9(dR)和siRNA在TAE缓冲液中能够形成不同直径大小的纳米颗粒，随着作用时间的延长形成的纳米颗粒越大。
实验例3
纳米颗粒的制备：采用实施例1制备的递送分子T9(dR)与荧光染料Cy3标记的绿色荧光蛋白基因的特异性siRNA(siGFP)(正义链：siRNA5’-AAGCUGACCCUGAAGUUCAdTdT-3,和反义链5’-UGAACUUCAGGGUCAGCUUdTdT-3’，通过IDT公司制备而成)按照摩尔比8:1在TAE缓冲液中混合，然后在室温25℃下静置30分钟，得到含有纳米颗粒的悬浮液，备用。
细胞系的培养：MDCK、A549、RAW、293T，上述细胞均购买自ATCC，MDCK培养在含有10％胎牛血清的MEM培养基中，A549、RAW、293T培养在含有10％胎牛血清的的DMEM培养基中，培养基和血清均购自Gbico公司。
转染：分别将A549和MDCK细胞铺在6孔板中，每孔5x105个细胞,分别将RAW9和293T细胞铺在6孔板中，每孔1x106个细胞，上述铺孔板的4种细胞均在第二天弃去培养基后用PBS洗细胞，然后换opti-MEM培养基，随后加入上述制备的含有纳米颗粒的悬浮液进行转染，于转染后6小时弃去opti-MEM培养基，换新鲜的生长培养基，于24小时后在倒置荧光显微镜下观察结果，并拍照分析。
通过荧光显微镜观察，结果如图3所示，结果表明T9(dR)能够转运siRNA(siGFP)进入MDCK、A549、RAW、293T细胞内。
实验例4纳米颗粒对于流感病毒的抑制
取实验例3中培养的MDCK细胞铺六孔板，每孔细胞密度为5x105个细胞/孔，于37℃、5％CO2培养箱放置培养，然后在第二天用不同浓度的装配有siRNA的纳米颗粒转染MDCK细胞，具体采用实施例8制备的纳米颗粒，浓度分别为2.5pmol、5pmol、10pmol、20pmol，实验例3制备的装配Cy3标记的siGFP的纳米颗粒用于做对照，浓度为20pmol，转染后6小时，分别与流感病毒毒株甲型H1N1流感病毒鼠肺株PR8株(购买自中国疾病预防控制中心病毒预防控制研究所，由中国中医科学院中药研究所ABSL-2生物安全试验室鸡胚传代，-80℃保存)混匀，MOI值为1，于37℃、5％CO2培养箱放置培养24小时后，收集细胞并用PBS清洗细胞，然后加入RIPA裂解液室温作用1个小时，后准备细胞蛋白质样品，用western-blot实验方法检测蛋白样品中流感病毒NP蛋白的表达量，结果如图4所示。
取20只Balb/C小鼠感染1x104PFU的PR8H1N1流感病毒，6小时后尾静脉注射实施例8制备的纳米颗粒悬浮剂(T9(dR)和siRNA的复合体)，于感染后72小时，将小鼠麻醉颈部脱臼致死，将肺脏取出置于无菌PBS中研磨后离心取上清液，按照标准空斑形成实验检测上清液中流感病毒滴度，结果如图5所示。
由图4-图5所示，结果表明T9(dR)能够转运针对流感病毒NP基因的特异性siRNA，转运的siRNA在细胞内释放出来，能够抑制流感病毒的复制，且随着siRNA的浓度的递增，对流感病毒的抑制作用越强。
实验例5
取32只Balb/C小鼠平均分成4组，一组经尾静脉注射200μL PBS(pH值为7.4)；第二组经尾静脉注射20pmol针对GFP的特异性siRNA和T9(dR)的复合物(实验例3制备的纳米颗粒siGFP)；第三组经尾静脉注射5pmol流感病毒NP基因片段特异性siRNA和T9(dR)复合物(实施例8制备的纳米颗粒siNP)；第四组经尾静脉注射50pmol流感病毒NP基因片段特异性siRNA和T9(dR)复合物(实施例8制备的纳米颗粒siNP)。6小时后，所有小鼠经鼻腔感染1x104PFU流感病毒甲型H1N1流感病毒鼠肺株PR8株(原病毒滴度为4х108空斑形成单位(PFU)/毫升)。然后每天称重，感染后72小时，所有小鼠被CO2致死，取出肺脏，然会用标准空斑形成实验测肺脏中流感病毒滴度，结果如图6-7所示，图6为4组小鼠体重变化曲线图，由图中可以看到，采用实施例8制备的纳米颗粒处理的小鼠的体重减轻明显小于PBS对照组和siGFP对照组小鼠的体重，说明在小鼠动物模型中T9(dR)转运的流感病毒NP基因片段特异性siRNA能够抑制流感病毒复制。图7为4组小鼠的肺内流感病毒的滴度结果柱状图，从图7中可以看出，50pmol的siNP处理的小鼠肺内流感病毒的滴度比PBS处理的小鼠肺内流感病毒低100倍。
实验例6T9(dR)对siRNA的转运效率
取实验例3培养的A549细胞铺在6孔板中，每孔5×105个细胞，取8nmol的Transpotan 2μl和8nmol的实施例1制备的递送分子T9(dR)2μl分别与1nmol的Cy3标记siRNA在TAE缓冲液中混匀后室温下静置20分钟，然后取含有相应量siRNA的siRNA复合体加入上述六孔板中培养的A549细胞中，24小时后加入活细胞染色试剂NucBlue Live CellStain reagent(Life Technologies)，30分钟后在倒置荧光显微镜下观察红色荧光，用软件ImageJ分析有红色荧光的细胞数确定siRNA的转运效率，检测结果如图8所示，在A549细胞上递送分子T9(dR)对递送siRNA分子的转运效率高于单独的透膜肽Transpotan，***p<0.005，可知采用递送分子T9(dR)向细胞中递送siRNA相对单独使用透膜肽Transpotan递送siRNA的转运效率显著。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Figure BDA0001573197500000121
Figure BDA0001573197500000131
Figure BDA0001573197500000141
Figure BDA0001573197500000151
Figure BDA0001573197500000161
序列表
<110> 青岛农业大学
<120> 一种递送分子及纳米颗粒、制备方法、用途
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工合成(artificial synthesis)
<400> 1
Gly Trp Thr Leu Asn Ser Ala Gly Tyr Leu Leu Gly Lys Ile Asn Leu
1 5 10 15
Lys Ala Leu Ala Ala Leu Ala Lys Lys Ile Leu Arg Arg Arg Arg Arg
20 25 30
Arg Arg Arg Arg
35
<210> 2
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工合成(artificial synthesis)
<400> 2
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Gly Trp Thr Leu Asn Ser Ala Gly Tyr
1 5 10 15
Leu Leu Gly Lys Ile Asn Leu Lys Ala Leu Ala Ala Leu Ala Lys Lys
20 25 30
Ile Leu
<210> 3
<211> 1565
<212> DNA
<213> H1N1亚型流感病毒NP基因(H1N1-NP)
<400> 3
agcaaaagca gggtagataa tcactcactg agtgacatca aaatcatggc gtcccaaggc 60
accaaacggt cttacgaaca gatggagact gatggagaac gccagaatgc cactgaaatc 120
agagcatccg tcggaaaaat gattggtgga attggacgat tctacatcca aatgtgcacc 180
gaactcaaac tcagtgatta tgagggacgg ttgatccaaa acagcttaac aatagagaga 240
atggtgctct ctgcttttga cgaaaggaga aataaatacc tggaagaaca tcccagtgcg 300
gggaaagatc ctaagaaaac tggaggacct atatacagga gagtaaacgg aaagtggatg 360
agagaactca tcctttatga caaagaagaa ataaggcgaa tctggcgcca agctaataat 420
ggtgacgatg caacggctgg tctgactcac atgatgatct ggcattccaa tttgaatgat 480
gcaacttatc agaggacaag agctcttgtt cgcaccggaa tggatcccag gatgtgctct 540
ctgatgcaag gttcaactct ccctatgagg tctggagccg caggtgctgc agtcaaagga 600
gttggaacaa tggtgatgga attggtcagg atgatcaaac gtgggatcaa tgatcggaac 660
ttctggaggg gtgagaatgg acgaaaaaca agaattgctt atgaaagaat gtgcaacatt 720
ctcaaaggga aatttcaaac tgctgcacaa aaagcaatga tggatcaagt gagagagagc 780
cggaacccag ggaatgctga gttcgaagat ctcacttttc tagcacggtc tgcactcata 840
ttgagagggt cggttgctca caagtcctgc ctgcctgcct gtgtgtatgg acctgccgta 900
gccagtgggt acgactttga aagagaggga tactctctag tcggaataga ccctttcaga 960
ctgcttcaaa acagccaagt gtacagccta atcagaccaa atgagaatcc agcacacaag 1020
agtcaactgg tgtggatggc atgccattct gccgcatttg aagatctaag agtattaagc 1080
ttcatcaaag ggacgaaggt gctcccaaga gggaagcttt ccactagagg agttcaaatt 1140
gcttccaatg aaaatatgga gactatggaa tcaagtacac ttgaactgag aagcaggtac 1200
tgggccataa ggaccagaag tggaggaaac accaatcaac agagggcatc tgcgggccaa 1260
atcagcatac aacctacgtt ctcagtacag agaaatctcc cttttgacag aacaaccatt 1320
atggcagcat tcaatgggaa tacagaggga agaacatctg acatgaggac cgaaatcata 1380
aggatgatgg aaagtgcaag accagaagat gtgtctttcc aggggcgggg agtcttcgag 1440
ctctcggacg aaaaggcagc gagcccgatc gtgccttcct ttgacatgag taatgaagga 1500
tcttatttct tcggagacaa tgcagaggag tacgacaatt aaagaaaaat acccttgttt 1560
ctact 1565

Claims (8)

1.一种递送分子，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种纳米颗粒，其特征在于，包括：
递送物；
权利要求1所述的递送分子。
3.根据权利要求2所述的纳米颗粒，其特征在于，所述递送物选自肽、核酸或药物。
4.根据权利要求3所述的纳米颗粒，其特征在于，所述核酸选自siRNA、miRNA或DNA质粒。
5.一种制备权利要求2-4任一项所述的纳米颗粒的方法，其特征在于，将权利要求1所述的递送分子和递送物于缓冲液中混合，即得。
6.一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1所述的递送分子或权利要求2-4任一所述的纳米颗粒。
7.一种试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的递送分子或权利要求2-4任一所述的纳米颗粒。
8.权利要求1所述的递送分子、权利要求2-4任一所述的纳米颗粒、权利要求6所述的药物组合物或权利要求7所述的试剂盒在制备药物递送系统中的用途。
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