CN116134052A - 多特异性抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种多特异性抗体，其包含两个特异性结合间皮素的基于抗体的结合结构域(MSLN‑BD)；和至少一个特异性结合CD3的基于抗体的结合结构域(CD3‑BD)；其中所述多特异性抗体不包含免疫球蛋白Fc区多肽，并且其中当通过SPR测量时，每个所述MSLN‑BD结合间皮素(MSLN)的单价解离常数(KD)的范围为0.5至20nM。本发明还涉及编码所述多特异性抗体的核酸序列、包含所述核酸序列的载体、包含所述核酸序列或所述载体的宿主细胞，以及生产所述多特异性抗体的方法。此外，本发明涉及包含所述多特异性抗体的药物组合物及其使用方法。

Description

多特异性抗体
技术领域
本发明涉及一种多特异性抗体，其包含两个特异性结合间皮素的基于抗体的结合结构域(MSLN-BD)；和至少一个特异性结合CD3的基于抗体的结合结构域(CD3-BD)；其中所述多特异性抗体不包含免疫球蛋白Fc区多肽，并且其中当通过SPR测量时，每个所述MSLN-BD结合间皮素(MSLN)的单价解离常数(KD)的范围为0.5至20nM。本发明还涉及编码所述多特异性抗体的核酸序列、包含所述核酸序列的载体、包含所述核酸序列或所述载体的宿主细胞，以及生产所述多特异性抗体的方法。此外，本发明涉及包含所述多特异性抗体的药物组合物及其使用方法。
背景技术
尽管癌症的治疗取得了相当大的进展，但癌症仍然是一个尚未得到满足的主要医疗需求。近年来，随着各种分子类型的免疫疗法的出现，在癌症治疗中取得了一些最实质性的进展，包括但不限于：单克隆抗体(mAb)、双特异性抗体(bsAb)、重组蛋白、和嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)疗法。这些疗法通过以下方式诱导抗肿瘤免疫：a)主动将免疫效应细胞导向肿瘤驻留细胞，和/或b)刺激免疫效应细胞，和/或c)解除肿瘤介导的免疫抑制。这些免疫疗法通常利用肿瘤驻留细胞(例如，恶性细胞、肿瘤脉管系统细胞、基质细胞、免疫细胞等)的特异性抗原的过表达(与肿瘤外位点相比)，将它们的药理活性靶向肿瘤。在这些抗原中，肿瘤相关抗原(TAA)包含恶性细胞选择性过表达的细胞表面蛋白。通过以高亲和力(affinity)结合TAA，免疫疗法可以在一定程度上将其免疫调节活性限制在肿瘤细胞和免疫效应细胞之间的免疫突触。
一类常见的TAA结合免疫治疗剂是mAb，其通过调理肿瘤细胞并通过表达Fcγ受体(FcγR)的细胞(主要是自然杀伤(NK)细胞)触发抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)来引发抗肿瘤免疫。其他TAA结合免疫治疗剂利用细胞毒性T淋巴细胞(CTL)来诱导恶性细胞的靶向清除，例如CAR-T细胞以及同时与T细胞抗原CD3结合的bsAb(TAA/CD3 bsAb)。
虽然TAA-(再)靶向CTL和常规TAA/CD3 bsAb的治疗效用已经过临床验证，但剂量限制性毒性(DLT)通常会阻止以最大有效剂量(MED)给药或导致治疗中断，从而导致疗效有限。
DLT的一个原因是，常规TAA/CD3 bsAb也通常与细胞因子释放综合征(CRS)相关，推测是由于抗CD3结构域的过度活性。免疫疗法的肿瘤外活性导致健康组织中促炎细胞因子的分泌，这可导致不良的安全性。此外，尽管TAA/CD3bsAb能有效地耗尽TAA过表达细胞，但它们是通过募集和刺激CTL来做到这一点的，无论这些细胞是否表达识别肿瘤抗原的T细胞受体(TCR)(即肿瘤反应性T细胞)。因此，TAA/CD3 bsAb不是刺激或重新激活宿主的天然抗肿瘤免疫，而是不加选择地刺激CTL，潜在地造成安全风险。
虽然此类DLT产生的确切途径可有所不同，但通常可通过增强药理学活性的肿瘤定位来最小化或消除免疫疗法相关毒性的风险。
几乎只在癌细胞上表达的TAA，如癌胚瘤抗原，被称为纯净TAA(clean TAA)。也在正常的非癌细胞上表达——通常与癌细胞相比水平较低——的TAA被认为是非纯净TAA。由于TAA/CD3 bsAb方法的高效性，非纯净TAA是一个挑战，因为它们会损伤同样表达TAA的非肿瘤细胞。间皮素(MSLN)是非纯净TAA的一个实例；它不仅在肿瘤细胞上表达，也在各种其他组织中表达，尽管水平较低。因此，当靶向非纯净TAA时，需要新的疗法来提高TAA/CD3bsAb方法对肿瘤组织的选择性，并最小化脱肿瘤/靶向效应(off tumor/on targeteffect)。这尤其适用于MSLN/CD3 bsAb方法。
间皮素(MSLN)已被提议作为可靶向治疗MSLN+实体癌，例如间皮瘤的肿瘤相关抗原(TAA)。许多其他类型的癌症也是MSLN+，包括某些形式的卵巢癌和胰腺癌，以及三阴性乳腺癌。目前间皮瘤的治疗标准包括肿瘤切除、化疗和放疗，以及减少体液和疼痛管理等缓解措施。针对持续生长的肿瘤的免疫疗法包括使用PD-1/PD-L1阻断剂，如pembrolizumab和nivolumab，或抗CTLA4抗体，如ipilimumab，用于刺激免疫系统，以及VEGF抑制剂，如贝伐单抗(bevacizumab)，用于阻断血管新生。虽然这些疗法已经取得了临床成功，但它们具有更高的全身副作用风险。因此，需要一种靶向MSLN的特异性方法。
已经进行了或正在进行大量临床前和早期临床研究，以评估通过几种不同方法靶向MSLN的可行性，包括基于抗体的药物和CAR-T细胞。基于抗体的药物包括用以下药剂靶向MSLN表达细胞：抗MSLN片段SS1P免疫毒素与化疗药物如培美曲塞(pemetrexed)和顺铂(cisplatin)一起或与PE38偶联；阿麦妥单抗(Amatuximab)，一种诱导ADCC的嵌合单克隆抗体；抗体药物缀合物，例如anetumab ravtansine(BAY 94-9343:抗MSLN+微管蛋白抑制剂DM4)或DMOT4039A(抗MSLN+抗有丝分裂单甲基auristatin E)以抑制肿瘤生长。HPN536是一种多特异性结合物(抗MSLN+抗CD3+抗白蛋白)，具有更长的半衰期，它似乎可以在体内和体外重新引导T细胞杀伤表达MSLN的靶细胞，并且食蟹猴似乎对其耐受性良好。几种抗MSLN嵌合抗原受体(CAR)-T疗法也被很好地耐受，包括瞬时mRNA转染的CAR-T(RNA CARTmeso)和用自杀基因(iCasp9m28z)工程化的CAR-T。到目前为止，对大多数抗MSLN疗法的反应是不太大的，这表明治疗实体肿瘤存在挑战。
对于抗MSLN疗法，该问题因MSLN脱落到癌症患者的血清中而进一步复杂化，在血清中它被称为可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)。对MSLN具有高亲和力的抗体也强烈结合SMRP，这显著抵消了它们的活性，降低了对癌细胞的有效剂量。
因此，需要能够在SMRP的存在下有效定位于肿瘤并促进T细胞反应的新分子。
具有至少三个结合结构域的多特异性抗体(其中两个结构域特异性结合间皮素(MSLN-BD)，一个结构域特异性结合CD3(CD3-BD)，其中两个MSLN-BD的结合亲和力在良好平衡的范围内)理论上可以解决许多前述的安全性和有效性方面的限制。这种多特异性抗体理论上能够引起高肿瘤定位和选择性提高，这可以为多种癌症提供更安全且更有效的治疗。此外，这种分子将进一步限制联合施用额外免疫疗法以增强患者反应的需要，支持开发的简易性并使治疗成本最小化。然而，由于其分子结构、其组分抗原结合结构域的性质、其可生产性和/或不良的生物物理性质的问题，用于治疗用途的多特异性抗体的实施已经变得很复杂。综上所述，仍然明显需要新型多特异性抗体，这些抗体表现出更高的肿瘤细胞定位并引起有效的T细胞激活，同时具有可容忍的毒理学特征，并且具有适合于药物开发的生物物理特性。
此外，尽管已经存在许多对MSLN和/或CD3具有特异性的抗体，但这些多特异性抗体的复杂性和特殊要求需要开发具有量身定做的特性的新型抗体域。
因此，尽管对于患有癌症的患者有许多治疗选择，但是仍然需要有效和安全的治疗剂，并且需要以更有针对性的方式优先使用它们。免疫调节生物制剂由于其作用方式而为癌症的治疗提供了有前途的方法，但是，整体免疫刺激以及这种免疫调节对病理相关细胞和部位没有任何限制，会导致许多副作用和明显的毒性，这有可能导致患者的发病率和死亡率增加。因此，本发明的目的是提供一种药物，以改善对增生性疾病，特别是癌症的治疗。
发明内容
本发明的目的是提供一种药物，以改善对增生性疾病，特别是癌症的治疗。特别地，本发明的一个目的是提供一种具有增加的靶向效力从而改善毒理学特征的药物。
第一方面，本发明涉及一种多特异性抗体，其包含：
a)两个特异性结合间皮素的基于抗体的结合结构域(MSLN-BD)；和
b)至少一个特异性结合CD3的基于抗体的结合结构域(CD3-BD)；
其中所述多特异性抗体不包含免疫球蛋白Fc区多肽，并且其中当通过SPR测量时，每个所述MSLN-BD结合间皮素(MSLN)的单价解离常数(KD)的范围为0.5至20nM。
第二方面，本发明涉及一种特异性MSLN结合结构域。
第三方面，本发明涉及一种核酸序列或两种核酸序列，其编码本发明的多特异性抗体或特异性MSLN结合结构域。
第四方面，本发明涉及一种载体或两种载体，其包含本发明的所述核酸序列或所述两种核酸序列。
第五方面，本发明涉及一种宿主细胞或多种宿主细胞，其包含本发明的所述载体或所述两种载体。
第六方面，本发明涉及一种生产本发明的多特异性抗体或特异性结合结构域的方法，包括：(i)提供本发明的一种核酸序列或两种核酸序列或本发明的一种载体或两种载体，表达所述一种核酸序列或多种核酸序列或所述一种载体或多种载体，并从所述表达系统中收集所述多特异性抗体或所述特异性结合结构域，或者(ii)提供本发明的一种宿主细胞或多种宿主细胞，培养所述一种宿主细胞或多种宿主细胞；并从细胞培养物中收集所述多特异性抗体或所述特异性结合结构域。
第七方面，本发明涉及一种药物组合物，其包括本发明的多特异性抗体和药学上可接受的载体。
第八方面，本发明涉及本发明的多特异性抗体用于治疗疾病，特别是人类疾病，更特别是选自癌症、炎性疾病和自身免疫疾病的人类疾病，其中所述多特异性抗体是包含三个或四个结合结构域的单链蛋白质。
第九方面，本发明涉及本发明的多特异性抗体用于治疗疾病，特别是人类疾病，更特别是选自癌症、炎性疾病和自身免疫疾病的人类疾病，其中所述多特异性抗体是包含三个或四个结合结构域的异源二聚体蛋白质。
第十方面，本发明涉及一种用于治疗疾病，特别是人类疾病，更特别是选自癌症、炎性疾病和自身免疫疾病的人类疾病的方法，包括施用上述定义的本发明的单链多特异性抗体的步骤，所述单链多特异性抗体包含三个或四个结合结构域。
第十一方面，本发明涉及一种用于治疗疾病，特别是人类疾病，更特别是选自癌症、炎性疾病和自身免疫疾病的人类疾病的方法，包括施用上述定义的本发明的异源二聚体多特异性抗体的步骤，所述异源二聚体多特异性抗体包含三个或四个结合结构域。
分别单独地或组合地在以下各项中概述的本发明的方面、有利特征和优选实施方案进一步有助于解决本发明的目的：
1.一种多特异性抗体，其包含：
a)两个特异性结合间皮素的基于抗体的结合结构域(MSLN-BD)；和
b)至少一个特异性结合CD3的基于抗体的结合结构域(CD3-BD)；
其中所述多特异性抗体不包含免疫球蛋白Fc区多肽，并且其中当通过SPR测量时，每个所述MSLN-BD结合间皮素(MSLN)的单价解离常数(KD)的范围为0.5至20nM。
2.根据项目1所述的多特异性抗体，其中通过针对靶细胞的T细胞驱动细胞毒性试验测定，在至少200ng/ml，特别是至少300ng/ml，特别是至少400ng/ml，特别是至少500ng/ml可溶性间皮素的存在下，所述多特异性抗体用于杀死靶细胞的EC50增加不超过25倍，其中，通过流式细胞术测定，所述靶细胞的MSLN表达水平比MeT-5A细胞(ATCC CRL-9444)高6至8倍。
3.根据项目1所述的多特异性抗体，其中通过针对靶细胞和MeT-5A细胞的T细胞驱动细胞毒性试验测定，所述多特异性抗体能够杀死靶细胞，其EC50比杀死MeT-5A细胞的EC50小至少10倍，特别是至少20倍，特别是至少25倍，其中，通过流式细胞术测定，所述靶细胞的MSLN表达水平比所述MeT-5A细胞(ATCC CRL-9444)高6至8倍。
4.根据项目1至3中任一项所述的多特异性抗体，其中当通过SPR测量时，每种所述MSLN-BD结合间皮素(MSLN)的单价解离常数(KD)的范围为0.5至15nM，特别是范围为0.6至10nM，特别是范围为0.7至5nM。
5.一种多特异性抗体，其包含：
a)两个特异性结合间皮素的基于抗体的结合结构域(MSLN-BD)；和
b)至少一个特异性结合CD3的基于抗体的结合结构域(CD3-BD)；
其中所述多特异性抗体不包含免疫球蛋白Fc区多肽，并且其中当通过SPR测量时，每个所述MSLN-BD结合间皮素(MSLN)的单价解离常数(KD)的范围为0.1至5nM。
6.根据项目5所述的多特异性抗体，其中通过针对靶细胞的T细胞驱动细胞毒性试验测定，在至少200ng/ml，特别是至少300ng/ml，特别是至少400ng/ml，特别是至少500ng/ml可溶性间皮素的存在下，所述多特异性抗体用于杀死靶细胞的EC50增加不超过50倍，其中，通过流式细胞术测定，所述靶细胞的MSLN表达水平比MeT-5A细胞(ATCC CRL-9444)高6至8倍。
7.根据项目5或6中任一项所述的多特异性抗体，其中当通过SPR测量时，每种所述MSLN-BD结合间皮素(MSLN)的单价解离常数(KD)的范围为0.1至3nM，特别是范围为0.15至2nM，特别是范围为0.2至1nM。
8.根据前述项目中任一项所述的多特异性抗体，其中每个所述MSLN-BD特异性结合人间皮素。
9.根据前述项目中任一项所述的多特异性抗体，其中每个所述MSLN-BD与MSLN的I区、II区和/或III区结合，优选与MSLN的I区和/或II区结合，特别是与MSLN的I区结合。
10.根据项目1至9中任一项所述的多特异性抗体，其中所述两个MSLN-BD结合MSLN上的相同表位。
11.根据项目1至4及8至10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述MSLN-BD包含：
(i)分别为SEQ ID NO:1、2(或10)和3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，和分别为SEQID NO:4、5和6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；或者分别为SEQ ID NO:11、12和13的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，和分别为SEQ ID NO:14、15和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；和
(ii)VH3或VH4结构域框架序列FR1至FR4；特别是VH3结构域框架序列FR1至FR4；和
(iii)VL结构域，其包含VL框架，所述VL框架包含Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1或Vκ3FR1至FR3，特别是Vκ1FR1至FR3，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4，和VλFR4，特别地，VλFR4包含与SEQ ID NO:132至SEQ ID NO:139中的任意一个具有至少70％、80％或90％同一性的氨基酸序列，更特别地，VλFR4选自SEQ ID NO:132至SEQ ID NO:139中的任意一个，特别是根据SEQ ID NO:132或139的VλFR4。
12.根据项目1至4及8至11中任一项所述的多特异性抗体，其中所述MSLN-BD包含：
a.1)分别为SEQ ID NO:1、2(或10)和3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，
b.1)分别为SEQ ID NO:4、5、和6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.1)与氨基酸序列SEQ ID NO:7至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.1)与氨基酸序列SEQ ID NO:9至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.2)分别为SEQ ID NO:1、2(或10)和3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，
b.2)分别为SEQ ID NO:4、5、和6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.2)与氨基酸序列SEQ ID NO:8至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.2)与氨基酸序列SEQ ID NO:9至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.3)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.3)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.3)与氨基酸序列SEQ ID NO:17至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.3)与氨基酸序列SEQ ID NO:18至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.4)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.4)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.4)与氨基酸序列SEQ ID NO:19至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.4)与氨基酸序列SEQ ID NO:21至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.5)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.5)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.5)与氨基酸序列SEQ ID NO:20至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.5)与氨基酸序列SEQ ID NO:21至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.6)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.6)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.6)与氨基酸序列SEQ ID NO:22至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.6)与氨基酸序列SEQ ID NO:24至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.7)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.7)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.7)与氨基酸序列SEQ ID NO:23至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.7)与氨基酸序列SEQ ID NO:24至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列。
13.根据项目5至10中任一项所述的多特异性抗体，其中所述MSLN-BD包含：
(i)分别为SEQ ID NO:25、26和27的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，和分别为SEQ IDNO:28、29和30的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；和
(ii)VH3或VH4结构域框架序列FR1至FR4；特别是VH3结构域框架序列FR1至FR4；和
(iii)VL结构域，其包含VL框架，所述VL框架包含Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1或Vκ3FR1至FR3，特别是Vκ1FR1至FR3，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4，和VλFR4，特别地，VλFR4包含与SEQ ID NO:132至SEQ ID NO:139中的任意一个具有至少70％、80％或90％同一性的氨基酸序列，更特别地，VλFR4选自SEQ ID NO:132至SEQ ID NO:139中的任意一个，特别是根据SEQ ID NO:132或139的VλFR4。
14.根据项目5至10及13中任一项所述的多特异性抗体，其中所述MSLN-BD包含：
a.1)分别为SEQ ID NO:25、26、和27的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.1)分别为SEQ ID NO:28、29、和30的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.1)与氨基酸序列SEQ ID NO:31至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.1)与氨基酸序列SEQ ID NO:33至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.2)分别为SEQ ID NO:25、26、和27的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.2)分别为SEQ ID NO:28、29、和30的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.2)与氨基酸序列SEQ ID NO:32至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.2)与氨基酸序列SEQ ID NO:33至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.3)分别为SEQ ID NO:25、26、和27的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.3)分别为SEQ ID NO:28、29、和30的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.3)与氨基酸序列SEQ ID NO:34至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.3)与氨基酸序列SEQ ID NO:36至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.4)分别为SEQ ID NO:25、26、和27的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.4)分别为SEQ ID NO:28、29、和30的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.4)与氨基酸序列SEQ ID NO:35至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.4)与氨基酸序列SEQ ID NO:36至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列。
15.根据项目11至14中任一项所述的多特异性抗体，其中所述VH结构域包含C51氨基酸残基(AHo编号)，且所述VL结构域包含C141氨基酸残基(AHo编号)。
16.根据项目8至15中任一项所述的多特异性抗体，其中每个所述MSLN-BD均与食蟹猴MSLN交叉反应，特别是通过SPR测量，与食蟹猴MSLN结合的单价KD在0.2至75nM范围内，特别是在0.3至60nM范围内，特别是0.4至50nM，特别是0.5至40nM。
17.根据前述项目中任一项所述的多特异性抗体，其中所述CD3-BD与CD3ε结合。
18.根据前述项目中任一项所述的多特异性抗体，其中所述抗体包含一个或两个CD3-BD，特别是一个CD3-BD。
19.根据前述项目中任一项所述的多特异性抗体，其中通过SPR测量，所述CD3-BD结合CD3ε的单价KD小于50nM，特别地KD为0.5至50nM，特别地KD为1至40nM，特别地KD为2至30nM。
20.根据前述项目中任一项所述的多特异性抗体，其中所述CD3-BD包括：
(i)分别为SEQ ID NO:45、46和47的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，位于人抗体VH框架，特别是VH3框架中；和
(ii)分别为SEQ ID NO:48、49、和50的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，位于人抗体VL框架中，其中VL框架包括Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1框架，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4和Vλ框架4。
21.根据项目20所述的多特异性抗体，其中所述CD3-BD包含：
(i)VH结构域，其包含SEQ ID NO:51、140、141或142的氨基酸序列；和
(ii)VL结构域，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。
22.根据前述项目中任一项所述的多特异性抗体，其中所述抗体还包含至少一个人血清白蛋白结合结构域(hSA-BD)，特别是一个hSA-BD。
23.根据项目22所述的多特异性抗体，其中所述hSA-BD包含
(i)分别为SEQ ID NO:53、54和55的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，位于人抗体VH框架，特别是VH3框架中；和
(ii)分别为SEQ ID NO:56、57、和58的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，位于人抗体VL框架中，其中VL框架包括Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1框架，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4，特别是Vκ1FR4，以及Vλ框架4；
或
(i)分别为SEQ ID NO:63、64和65的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，位于人抗体VH框架，特别是VH3框架中；和
(ii)分别为SEQ ID NO:66、67、和68的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，位于人抗体VL框架中，其中VL框架包括Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1框架，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4，特别是Vκ1FR4，以及Vλ框架4；
或
(i)分别为SEQ ID NO:63、64和65的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，位于人抗体VH框架，特别是VH3框架中；和
(ii)分别为SEQ ID NO:66、67、和68的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，位于人抗体VL框架中，其中VL框架包括Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1框架，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4，特别是Vκ1FR4，以及Vλ框架4。
24.根据项目22或23所述的多特异性抗体，其中所述hSA-BD包含：
(i)VH结构域，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列，和VL结构域，其包含SEQ IDNO:60的氨基酸序列；或者
(ii)VH结构域，其包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列，和VL结构域，其包含SEQ IDNO:62的氨基酸序列；或者
(ii)VH结构域，其包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列，和VL结构域，其包含SEQ IDNO:70的氨基酸序列；或者
(iv)VH结构域，其包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列，和VL结构域，其包含SEQ IDNO:72的氨基酸序列；或者
(v)VH结构域，其包含SEQ ID NO:79或143的氨基酸序列；和VL结构域，其包含SEQID NO:80或144的氨基酸序列；或者
(vi)VH结构域，其包含SEQ ID NO:81或145的氨基酸序列；和VL结构域，其包含SEQID NO:82或146的氨基酸序列。
25.根据项24所述的多特异性抗体，其中所述VH结构域包含C51氨基酸残基(AHo编号)，且所述VL结构域包含C141氨基酸残基(AHo编号)。
26.根据前述项目中任一项所述的多特异性抗体，其中所述结合结构域独立地选自由以下组成的组：Fab、Fv、scFv、dsFv、scAb、和STAB。
27.根据项26所述的多特异性抗体，其中每个所述结合结构域独立地选自：
(a)VL结构域和VH结构域的同源对(Fv片段)；或者
(b)由寡肽或多肽接头连接的VL结构域和VH结构域的同源对(scFv片段)。
28.根据前述项目中任一项所述的多特异性抗体，其中所述多特异性抗体的形式选自由以下组成的组：串联scDb(Tandab)、线性二聚体scDb(LD-scDb)、环状二聚体scDb(CD-scDb)、串联tri-scFv、三体(Fab-(scFv)2)、Fab-Fv2、三抗体(triabody)、scDb-scFv、四抗体(tetrabody)、双-双抗体(di-diabody)、CODV、串联-di-scFv、串联tri-scFv、Fab-(scFv)2、Fab-Fv2、或与异二聚Fc结构域以外的异二聚化结构域的N-和/或C-末端融合的CODV、和MATCH。
29.根据项目1至28中任一项所述的多特异性抗体，其中所述抗体不包含CH1和/或CL区。
30.根据前述项目中任一项所述的多特异性抗体，其中所述抗体是scDb-scFv、三体、MATCH，特别是其中所述多特异性抗体是MATCH或三体形式，更特别是其中所述多特异性抗体是MATCH形式，更特别是其中所述多特异性抗体是MATCH3或MATCH4。
31.根据项目1至30所述的多特异性抗体，其中所述多特异性抗体是单链蛋白质。
32.根据项31所述的多特异性抗体，其中所述单链蛋白质包含由以下组成的氨基酸序列：
(i)第一VL结构域，
(ii)第一多肽接头，
(iii)第一VH结构域，
(iv)第二多肽接头，
(v)第二VL结构域，
(vi)第三多肽接头，以及
(vii)第二VH结构域，
以所述的顺序一个接一个地排列，
其中所述第一VL结构域与所述第二VH结构域缔合形成第一结合结构域，且所述第二VL结构域与所述第一VH结构域缔合形成第二结合结构域，
并且其中所述单链蛋白质还包含
(viii)第三结合结构域，其由通过第四多肽接头连接的第三VL结构域和第三VH结构域形成，其中所述第三结合结构域在C-末端或N-末端通过第五多肽接头与所述氨基酸序列融合，
其中所述三个结合结构域具有以下特异性：
a)第一结合结构域特异性结合人CD3(CD3-BD)；并且
b)第二和第三结合结构域特异性结合间皮素(MSLN-BD)。
33.根据项目32所述的多特异性抗体，其中所述单链蛋白质还包含hSA-BD，其由通过第六多肽接头连接的第四VL结构域和第四VH结构域形成，其中所述hSA-BD在C-末端或N-末端通过第七多肽接头与所述氨基酸序列融合。
34.根据项目1至30所述的多特异性抗体，其中所述多特异性抗体是异源二聚体蛋白，所述异源二聚体蛋白包含第一和第二单链蛋白，其中，所述第一单链蛋白包含第一氨基酸序列，所述第一氨基酸序列由以下组成(从N末端至C末端)：
(ia)第一VL结构域，
(iia)第一多肽接头，以及
(iiia)第二VL结构域，并且
其中所述第二单链蛋白包含第二氨基酸序列，所述第二氨基酸序列由以下组成(从N末端至C末端)：
(ib)第一VH结构域，
(iib)第二多肽接头，以及
(iiib)第二VH结构域，并且
其中所述第一VL结构域与所述第一或所述第二VH结构域缔合形成第一结合结构域，且所述第二VL结构域与所述VH结构域中的另一个缔合形成第二结合结构域，
并且，其中所述第一和所述第二单链蛋白中的至少一个还包含
(iv)第三结合结构域，其由通过第三多肽接头连接的第三VL结构域和第三VH结构域形成，其中所述第三结合结构域通过第四多肽接头与所述第一或所述第二氨基酸序列融合，
并且，其中任选地，所述第一和所述第二单链蛋白中的至少一个还包含
(v)第四结合结构域，其由通过第五多肽接头连接的第四VL结构域和第四VH结构域形成，其中所述第四结合结构域通过第六多肽接头与所述第一或所述第二氨基酸序列融合，
其中所述三个或任选地四个结合结构域具有以下特异性：
a)一个基于抗体的结合结构域特异性结合人CD3(CD3-BD)；
b)另两个基于抗体的结合结构域特异性结合间皮素(MSLN-BD)，并且当存在任选的第四结合结构域时，
c)剩余的结合结构域特异性结合人血清白蛋白(hSA-BD)。
35.根据项目34所述的多特异性抗体，其中所述任选的第四结构域存在，并且其中所述第一和第二结合结构域之一是CD3-BD，并且所述第一和第二结合结构域中的另一个是hSA-BD。
36.根据项目34或35所述的多特异性抗体，其中所述任选的第四结构域存在，并且其中所述第三结合结构域与所述第一或第二氨基酸序列融合，并且所述第四结合结构域与所述两个氨基酸序列中的另一个融合。
37.根据项目34至36中任一项所述的多特异性抗体，其中所述异源二聚体蛋白中包含的任何结合结构域排外性地仅由排列在所述第一和第二单链蛋白中的免疫球蛋白可变结构域组成。
38.根据项目34至37中任一项所述的多特异性抗体，其中除了所述第一和第二VL和VH结构域之外，所述异源二聚体蛋白质不包含第一和第二蛋白质相互作用结构域的同源对，其中所述第一蛋白质相互作用结构域被包含在所述第一单链蛋白中，并且其中所述第二蛋白质相互作用结构域被包含在所述第二单链蛋白中。
39.根据项目34至38中任一项所述的多特异性抗体，其中所述第一单链蛋白和所述第二单链蛋白以平行方向异源二聚化，即，所述第一VL结构域与所述第一VH结构域缔合，并且所述第二VL结构域与所述第二VH结构域缔合。
40.根据项目34至38中任一项所述的多特异性抗体，其中所述第一单链蛋白和所述第二单链蛋白以反平行方向异源二聚化，即，所述第一VL结构域与所述第二VH结构域缔合，并且所述第二VL结构域与所述第一VH结构域缔合。
41.根据项目34至40中任一项所述的多特异性抗体，其中
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:83的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:83的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:84的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:85的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:85的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:86的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:87的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:88的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:89的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:90的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:91的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:92的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:93的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:93的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:94的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:95的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:96的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:97的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:97的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:98的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:98的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:99的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:99的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:100的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:100的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:101的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:101的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:102的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:102的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:103的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:103的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:104的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:104的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:105的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:105的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:106的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:106的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:107的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:107的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:108的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:108的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:108的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:109的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:109的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:110的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:110的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:111的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:111的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:111的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:112的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:112的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:113的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:113的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:114的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:115的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:115的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:116的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:116的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:117的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:117的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:118的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:118的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:119的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:119的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:120的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:120的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:121的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:121的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:122的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:122的氨基酸序列组成；或者
所述第一单链蛋白质包含与SEQ ID NO:123的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:123的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:123的氨基酸序列组成；并且
所述第二单链蛋白质包含与SEQ ID NO:124的氨基酸序列具有至少90、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，更特别地包含SEQ ID NO:124的氨基酸序列，尤其是由SEQID NO:124的氨基酸序列组成。
42.根据前述项目中任一项所述的多特异性抗体，其中所述抗体可变结构域中的至少一个包含源自亲本兔抗体的CDR区域。
43.根据前述项目中任一项所述的多特异性抗体，其中MSLN-BD中的至少一个和CD3-BD能够同时结合它们各自的抗原，特别是其中两个MSLN-BD和CD3-BD能够同时结合它们各自的抗原。
44.根据项目11至15中任一项所定义的MSLN结合结构域。
45.一种核酸序列或两种核酸序列，其编码项目1至43中任一项所述的多特异性抗体或项目44的MSLN结合结构域。
46.一种载体或两种载体，其包含项目45的所述一种核酸序列或所述两种核酸序列。
47.一种宿主细胞或多种宿主细胞，其包含项目46的所述一种载体或所述两种载体。
48.一种生产项目1至43中任一项所述的多特异性抗体或项目44的MSLN结合结构域的方法，包括(i)提供项目45的一种核酸序列或两种核酸序列或项目46的一种载体或两种载体，表达所述一种核酸序列或多种核酸序列或所述一种载体或多种载体，并从所述表达系统中收集所述多特异性抗体或所述MSLN结合结构域，或者(ii)提供根据项目47的一种宿主细胞或多种宿主细胞，培养所述一种宿主细胞或多种宿主细胞；并从细胞培养物中收集所述多特异性抗体或所述MSLN结合结构域。
49.一种药物组合物其包含项目1至43中任一项所述的多特异性抗体和药学上可接受的载体。
50.根据项目1至43中任一项所述的多特异性抗体，其用于治疗疾病，特别是人类疾病，更特别是选自癌症、炎性疾病和自身免疫疾病的人类疾病的方法。
51.根据项目1至43中任一项所述的多特异性抗体，用于治疗根据项目50的疾病，其中所述疾病是癌症，特别是选自间皮瘤、胰腺癌和卵巢癌的癌症。
52.一种用于治疗疾病，特别是人类疾病，更特别是选自癌症、炎性疾病和自身免疫疾病的人类疾病的方法，包括施用项目1至43中任一项所述的多特异性抗体的步骤。
53.根据项目52所述的方法，其中所述疾病是癌症，特别是选自间皮瘤、胰腺癌和卵巢癌的癌症。
附图说明
图1显示了抗MSLN scFv PRO1783、PRO1922、PRO1925、PRO2306、PRO2309和参照抗体阿麦妥单抗与来自表达高水平人MSLN的H226细胞系的细胞的质膜的结合。在竞争性ELISA(“cELISA”)中测试了PRO1783、PRO1922、PRO1925、PRO2306、PRO2309和阿麦妥单抗与H226细胞系的结合。在cELISA中，分别使用HRP偶联蛋白L和HRP偶联抗人IgG抗体检测了与H226细胞结合的PRO1783、PRO1922、PRO1925、PRO2306、PRO2309和阿麦妥单抗。光密度(OD450nm-690nm)表示为以nm为单位的抗体浓度的函数。请注意，仅拟合了具有递增值的浓度。PRO1783的EC50值大约比参考抗体阿麦妥单抗的值高6倍。PRO1925、PRO2306、PRO2309的EC50值与PRO1783在同一范围内，而PRO1922的EC50值与阿麦妥单抗接近。
图2显示了抗MSLN scFv PRO1783和参照抗体阿麦妥单抗与来自表达食蟹猴MSLN的CHO细胞系的细胞的质膜的结合。在cELISA中检测了PRO1783和阿麦妥单抗与表达食蟹猴MSLN的CHO细胞系的质膜结合。分别通过HRP偶联蛋白L和HRP偶联抗人IgG抗体检测了PRO1783和阿麦妥单抗的结合。光密度(OD450nm-690nm)表示为以nm为单位的抗体浓度的函数。阿麦妥单抗以及PRO1783均显示出与食蟹猴MSLN结合。
图3显示了抗MSLN scFv PRO1783、PRO1922和PRO1925对人MSLN/MUC16相互作用的阻断。在cELISA中测试了PRO1783、PRO1922、PRO1925和阿麦妥单抗阻断人MSLN/MUC16相互作用的效力。光密度(OD450nm-690nm)表示为以nm为单位的抗体浓度的函数。PRO1783的IC50为0.5nM，而参考抗体阿麦妥单抗更有效地中和了MSLN/MUC16相互作用(IC50＝0.014nM)。PRO1925的IC50与PRO1783相似，而PRO1922的IC50与阿麦妥单抗的IC50更接近。
图4显示了hMSLN/mMSLN的嵌合变体。以深灰色突出显示的结构域是人MSLN序列被相应的小鼠序列替换的片段。片段VI对应于最靠近质膜的MSLN胞外结构域的C-末端部分。片段I和II对应于MSLN的I区；片段III和IV对应于MSLN的II区；片段V和VI对应于MSLN的III区。
图5显示了不同的MATCH格式。(左)反平行MATCH4格式的结构，其中每条链上形成异二聚体的相互分开的(split)的可变结构域以与其互补MATCH链上的相关可变结构域相反的N-末端至C-末端的顺序排列。(右)scMATCH3格式的示例性结构，其中相互分开的可变结构域位于单个肽链上，组装成三特异性分子。替代方案例如VL2-VL1-VH1-VH2-scFv也在scMATCH3格式概念的范围内。用于连接结构域的Gly-Ser接头用线表示。表17描述了所生产的不同分子中包含的结构域以及它们在分子中的位置(结构域1至4)。结构域编号与权利要求中定义的结合结构域编号不相关。
图6显示了在人血清白蛋白的存在下，PRO2000和PRO1872的细胞毒性活性和对CD8+T细胞活化的作用。(A)特异性杀伤高MSLN表达的癌细胞(H226细胞)。在表达高水平间皮素的癌细胞上，观察到PRO2000的靶细胞杀伤效力比PRO1872优秀75倍。(B)特异性杀伤低MSLN表达的间皮细胞(MeT-5A细胞)。对于来自健康间皮组织的表达低水平间皮素的细胞(MeT-5A；ATCC CRL-9444)，单价间皮素结合蛋白PRO1872显示出最好的杀伤效力。(C)在高MSLN表达癌细胞(H226细胞)存在下的CD8+T细胞活化，及(D)在低MSLN表达间皮细胞(MeT-5A细胞)存在下的CD8+T细胞活化。观察到了类似的CD8+T细胞活化数据。使用了来自供体#1的PBMC。在靶细胞和CD8+T细胞开始与相应分子孵育40小时后，通过流式细胞术对它们进行分析，并使用S形曲线4PL拟合(GraphPad Prism)拟合数据。
图7显示了在人血清白蛋白的存在下，PRO2000和PRO1872的细胞毒性活性和对CD8+T细胞活化的作用。(A)特异性杀伤低MSLN表达癌细胞(H292细胞)。在表达低水平间皮素的癌细胞上，观察到PRO1872的靶细胞杀伤效力比PRO2000优秀7倍。(B)特异性杀伤中等MSLN表达的癌细胞(HPAC细胞)。对于表达中等间皮素水平的癌细胞，单价和二价间皮素结合剂PRO1872和PRO2000均显示出相似的杀伤效力。(C)在低MSLN表达癌细胞(H292细胞)存在下的CD8+T细胞活化，及(D)在中等MSLN表达癌细胞(HPAC细胞)存在下的CD8+T细胞活化。观察到了类似的CD8+T细胞活化数据，除了在HPAC细胞的存在下，PRO2000明显比PRO1872更有效(4倍)之外。使用了来自供体#1的PBMC。在靶细胞和CD8+T细胞开始与相应分子孵育40小时后，通过流式细胞术对它们进行分析，并使用S形曲线4PL拟合(GraphPad Prism)拟合数据。
图8显示了在存在或不存在sMSLN的情况下，PRO2000和PRO1872的细胞毒性活性和对CD8+T细胞活化的作用。(A至C)PRO2000和PRO1872对H226靶细胞的细胞毒活性。在不存在sMSLN(A)、存在50ng/ml sMSLN(B)或存在500ng/ml sMSLN(C)的情况下，对H226细胞的特异性杀伤。与PRO1872相比，PRO2000的杀伤效力受sMSLN浓度增加的影响较小(D至F)。在相应条件下，观察到了类似的CD8+T细胞活化数据。在存在H226细胞，但无sMSLN(D)、存在50ng/ml sMLSN(E)或存在500ng/ml sMLSN(F)时，CD8+T细胞活化。使用了来自供体#2的PBMC。在靶细胞和CD8+T细胞开始与相应分子孵育40小时后，通过流式细胞术对它们进行分析，并使用S形曲线4PL拟合(GraphPad Prism)拟合数据。
图9显示了在不存在或存在100ng/ml sMSLN时PRO2000、PRO2100和PRO1872的细胞毒性活性：在不存在sMSLN(A)或存在100ng/ml sMSLN(B)时对H226细胞的特异性杀伤；在不存在sMSLN(C)或存在100ng/ml sMSLN(D)时对Met-5A细胞(ATCC CRL-9444)的特异性杀伤。使用了来自供体#3的PBMC。在靶细胞开始与相应分子孵育40小时后，通过流式细胞术对它们进行分析，并使用S形曲线4PL拟合(GraphPad Prism)拟合数据。
图10显示了PRO2562、PRO2566、PRO2567和PRO2660对高MSLN表达癌细胞(H226细胞)、中等MSLN表达癌细胞(OVCAR-3细胞)和低MSLN表达癌细胞(Met-5A细胞)的细胞毒性活性。使用帕利珠单抗(palivizumab)作为阴性对照(“对照”)。
图11显示了对于特异性杀伤H226细胞(A)、特异性杀伤OVCAR3细胞(B，左侧)和特异性杀伤Met-5A细胞(B，右侧)的PRO2562、PRO2566、PRO2567、PRO2660和单价参考抗体PRO1872的EC50值的汇总。
图12显示了在不存在或存在50ng/ml sMSLN或500ng/ml sMSLN的情况下，PRO2562、PRO2566、PRO2567、PRO2660和单价参照抗体PRO1872针对H226细胞的细胞毒性活性。
图13显示了在不存在或存在50ng/ml sMSLN或500ng/ml sMSLN的情况下，PRO2562、PRO2566、PRO2567、PRO2660和单价参照抗体PRO1872特异性杀伤H226细胞的EC50值的汇总。
图14显示了MATCH分子与表达不同间皮素细胞表面水平的靶细胞系的结合。通过流式细胞术测定了PRO2000、PRO2100和PRO1872与(A)高间皮素表达的H226细胞、(C)中等间皮素表达的HPAC细胞、(B)低间皮素表达的H292癌细胞和(D)低间皮素表达的间皮细胞MeT-5A(ATCC CRL-9444)的结合，以及PRO2562、PRO2566、PRO2567和PRO2660与(E)高间皮素表达的H226细胞、(F)中等间皮素表达的OVCAR-3细胞和(G)低间皮素表达的间皮细胞MeT-5A(ATCC CRL-9444)的结合，并使用S形曲线4PL拟合(GraphPad Prism)拟合数据。
图15显示了相对于对照条件，用分子PRO2000(biMSLN.CD3)治疗导致H292异种移植物模型的肿瘤生长抑制。(A)在存在或不存在biMSLN.CD3治疗时肿瘤生长的纵向分析。这些线条描绘了中间值。将1×107H292肿瘤细胞和1×107PBMC共植入动物皮下，从第5天开始静脉内给药治疗，每5天重复一次，直到实验结束。(B)第40天的数据显示为散点图。每个点对应一只动物，数据以平均值和标准偏差显示。在双向重复测量ANOVA后，进行Tukey多重比较测试，并相对于帕利珠单抗对照(Ctrl，下面的线)或无处理(上面的线)描述每个数据集的显著性。ns＝不显著；*,p<0.05；**,p<0.01,***,p<0.001。灰色的火花线表示y轴上的0。
图16显示了相对于对照条件，用分子PRO2000(biMSLN.CD3)治疗导致人胰腺癌(HPAC)异种移植模型的肿瘤生长抑制。(A)在浓度增加的PRO2000(biMSLN.CD3)存在下肿瘤生长的纵向分析。这些线条描绘了中间值。将1x 107HPAC肿瘤细胞和2.5x 106PBMC共植入动物皮下，从第5天开始静脉内给药治疗，每5天重复一次，直到实验结束。(B)在浓度增加的PRO2000(biMSLN.CD3)存在下，以及作为对比，在浓度增加的RO1872(MSLN.CD3)存在下，肿瘤生长的相应纵向分析。这些线条描绘了中间值。使用帕利珠单抗作为阴性对照。*,p<0.05；****,p<0.0001；*****,p<0.00001。(C)图中(B)所示的一部分，仅显示最低剂量随时间的变化。
具体实施方式
已知的基于MSLN/CD3 bsAb的免疫疗法通常具有剂量限制性毒性和有限的体内功效。因此，在医学领域中需要新的基于MSLN/CD3 bsAb的免疫疗法，其具有比目前可用的方法更低或没有剂量限制性毒性和更高的功效。
本发明提供了一种多特异性抗体，其包含两个间皮素结合结构域(MSLN-BD)和至少一个CD3结合结构域(CD3-BD)的组合，其中MSLN-BD对MSLN的结合亲和力被调节，使得其能够在高MSLN表达的靶细胞上有效定位，而低MSLN表达的健康间皮细胞则很少受影响。由于存在两个MSLN-BD，它们被包埋在不具有免疫球蛋白Fc区多肽的明确限定且紧凑的多结构域抗体结构中，联合MSLN和CD3结合亲和力之间的良好平衡，这些多特异性抗体表现出很高的靶向效力，同时表现出很低的肿瘤外副作用。本发明的多特异性抗体的紧凑的二价设计(这是基于经典IgG结构的二价多特异性抗体所不能实现的)，以及它们良好调节的MSLN和CD3结合亲和力，是实现预期选择性和功效特性的关键特征。
通过利用亲合力(avidity)效应，本发明的多特异性抗体能够以高度抗原密度依赖性的方式通过两个MSLN-BD结合靶细胞。同时，本发明的多特异性抗体能够通过CD3-BD与CD3结合来诱导T细胞活化和肿瘤细胞杀伤。由于其对高MSLN表达细胞的选择性增强，导致有效的肿瘤定位，本发明的多特异性抗体能够进行治疗，而不造成由T细胞的非特异性活化引起的剂量限制性毒性。
此外，令人惊讶地发现，在高水平的可溶性间皮素(这在患者血清中经常观察到)的存在下，杀伤高MSLN表达靶细胞的效力没有明显降低。此外，如实施例和附图所示，包含(a)两个MSLN结合结构域，和(b)至少一个CD3-BD并具有上述设计和抗原结合亲和力的本发明多特异性抗体显示了进一步的有益特性。此外，延长半衰期的抗hSA结构域的任选添加不仅使给药方便，而且应该会促进分子向肿瘤微环境的递送。
因此，本发明的多特异性抗体提供了优于常规组合物和疗法的独特治疗优势。
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。
除非另有说明，否则术语“包括”和“包含”在本文中以开放式且非限制性的含义使用。关于这些后面的实施方案，术语“包含”因此包括范围较窄的术语“由......组成”。
除非本文另外指出或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的背景下(特别是在以下权利要求的背景下)，术语“一”和“一个”以及“该”和类似的引用应被解释为涵盖单数和复数。例如，术语“一个细胞”包括多个细胞，包括其混合物。当化合物、盐等使用复数形式时，这也被认为是指单一化合物、盐等。
一方面，本发明涉及一种多特异性抗体，其包含：
a)两个特异性结合间皮素的基于抗体的结合结构域(MSLN-BD)；和
b)至少一个特异性结合CD3的基于抗体的结合结构域(CD3-BD)；
其中所述多特异性抗体不包含免疫球蛋白Fc区多肽，并且其中当通过SPR测量时，每个所述MSLN-BD结合间皮素(MSLN)的单价解离常数(KD)的范围为0.1至20nM。
如本文所用，术语“抗体”等包括：完全抗体或其单链；及其任何抗原结合片段(即“抗原结合部分”)或单链；以及包含抗体CDR、VH区或VL区的分子(包括但不限于多特异性抗体)。天然存在的“完全抗体”是糖蛋白，包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链都由重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链都由轻链可变区(在本文缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其间散布着更为保守的区，称为框架区(FR)。每个VH和VL都由三个CDR和四个FR组成，它们从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。
本文所用术语“免疫球蛋白Fc区”是指重链恒定区的CH2和CH3结构域。
如本文所用，术语抗体的“结合结构域”、“其抗原结合片段”、“抗原结合部分”等是指完全抗体的一个或多个片段，其保留了与给定的抗原(例如，MSLN、CD3、hSA)特异性结合的能力。抗体的抗原结合功能可以通过完整抗体的片段来执行。在一些实施方案中，本发明的多特异性抗体的结合结构域选自由以下组成的组：Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；F(ab)2片段，包含通过铰链区二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；单结构域抗体(dAb)片段(Ward等人,1989Nature 341:544-546)，其由VH结构域组成；分离的互补决定区(CDR)、单链Fv、dsFv、scAb、STAB、单结构域抗体(sdAb或dAb)、单结构域重链抗体、和单结构域轻链抗体、VHH、VNAR、基于鲨鱼的VNAR结构的单结构域抗体、和基于替代支架的结合结构域包括但不限于基于锚蛋白的结构域、fynomer、avimer、anticalin、纤连蛋白(fibronectin)和构建在抗体恒定区中的结合位点(例如f-star技术(F-star’s ModularAntibody TechnologyTM))。合适地，本发明的结合结构域是单链Fv片段(scFv)或单抗体可变结构域。在一个优选的实施方案中，本发明的结合结构域是单链Fv片段(scFv)。在特定实施方案中，如在Fv或scFv片段中，抗原结合片段的两个可变结构域，通过结构域间的二硫键稳定，特别是其中所述VH结构域在51位(AHo编号)包含单个半胱氨酸残基，并且所述VL结构域在141位(AHo编号)包含单个半胱氨酸残基。
术语“互补决定区”(“CDR”)是指使用许多著名方案中的任何一种确定边界的氨基酸序列，这些著名方案包括以下描述的那些：Kabat等人(1991),“Sequences of Proteinsof Immunological Interest,”5th Ed.Public Health Service,National Institutesof Health,Bethesda,MD(“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)；ImMunoGenTics(IMGT)编号(Lefranc,M.-P.,The Immunologist,7,132-136(1999)；Lefranc,M.-P.等人,Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003)(“IMGT”编号方案)，以及Honegger&Plückthun,J.Mol.Biol.309(2001)657-670(“AHo”编号方案)描述的编号方案。例如，对于经典形式，在Kabat下，重链可变结构域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；轻链可变结构域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。在Chothia下，VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；VL中的氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。通过结合Kabat和Chothia两者的CDR定义，CDR由人VH中的氨基酸残基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)以及人VL中的氨基酸残基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)组成。在IMGT下，VH中的CDR氨基酸残基编号大约为26-35(HCDR1)、51-57(HCDR2)和93-102(HCDR3)，VL中的CDR氨基酸残基编号大约为27-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和89-97(LCDR3)(根据“Kabat”编号)。在IMGT下，可以使用程序IMGT/DomainGap Align确定抗体的CDR。
在本发明的背景下，除非另外特别指出，否则使用由Honegger&Plückthun(“AHo”)建议的编号系统(Honegger&Plückthun,J.Mol.Biol.309(2001)657-670)。具体地，根据AHo编号方案，将以下残基定义为CDR：LCDR1(也称为CDR-L1)：L24-L42；LCDR2(也称为CDR-L2)：L58-L72；LCDR3(也称为CDR-L3)：L107-L138；HCDR1(也称为CDR-H1)：H27-H42；HCDR2(也称为CDR-H2)：H57-H76；HCDR3(也称为CDR-H3)：H108-H138。为了清楚起见，根据Honegger&Plückthun的编号系统考虑了在天然存在的抗体中，在不同VH和VL亚家族两者中，特别是在CDR中发现的长度多样性，并提供了序列中的缺口。因此，在给定的抗体可变结构域中，通常并非所有位置1至149都被氨基酸残基占据。
如本文所用，术语“结合特异性”是指单个抗体与一种抗原决定簇反应而不与不同的抗原决定簇反应的能力。如本文所用，术语“与……特异性结合”或“特异于”是指可测量且可再现的相互作用，例如靶标与抗体之间的结合，其是在存在分子(包括生物分子)的异质群体的情况下，存在靶标的决定因素。例如，与一个靶标(可以是表位)特异性结合的抗体是与该靶标结合比与其他靶标结合的亲和力(affinity)更大、亲合力(avidity)更大、更容易和/或持续时间更长的抗体。以其最一般的形式(并且当未提及规定标准时)，“特异性结合”是指抗体区分目标靶标和无关分子的能力，例如根据本领域已知的特异性测定法所确定的。此类测定法包括但不限于蛋白质印迹、ELISA、RIA、ECL、IRMA、SPR(表面等离子体共振)测试和肽扫描。例如，可以进行标准ELISA测定。可以通过标准显色(例如，具有辣根过氧化物的二抗和具有过氧化氢的四甲基联苯胺)进行评分。某些孔中的反应通过光密度(例如在450nm下)进行评分。典型背景(＝阴性反应)可能约为0.1OD；典型的阳性反应可能约为1OD。这意味着阳性和阴性分数之间的比可以是10倍或更高。在另一个实例中，可以进行SPR测定，其中背景和信号之间有至少10倍，特别是至少100倍的差异表明特异性结合。通常，使用一组约三至五个不相关分子例如奶粉、转铁蛋白等，而非使用单一参照分子，来进行结合特异性的确定。
合适地，本发明的抗体是分离的抗体。如本文所用，术语“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合MSLN和CD3的分离的抗体基本上不含特异性结合除MSLN和CD3以外的抗原的抗体，而特异性结合MSLN、CD3和人血清白蛋白的分离的抗体基本上不含特异性结合除MSLN、CD3和人血清白蛋白以外的抗原的抗体)。此外，分离的抗体可基本不含其他细胞材料和/或化学物质。
合适地，本发明的抗体是单克隆抗体。如本文所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指氨基酸序列基本相同或源自相同遗传来源的抗体。单克隆抗体组合物对某个具体表位显示结合特异性和亲和力，或对多个特定表位显示结合特异性和亲和力。
本发明的抗体包括但不限于嵌合的、人的和人源化的抗体。
术语“嵌合抗体”(或其抗原结合片段)是一种抗体分子(或其抗原结合片段)，其中(a)恒定区或其一部分被改变、替换或交换，以使抗原结合位点(可变区)与不同的或改变的类别、效应子功能和/或种类的恒定区相连，或与一个完全不同的分子相连，该分子赋予嵌合抗体新的特性，例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等；或者(b)可变区或其一部分被改变、替换或交换为具有不同的或改变的抗原特异性的可变区。例如，可以通过将小鼠抗体的恒定区替换为人免疫球蛋白的恒定区来对其进行修饰。由于被人恒定区替换，因此嵌合抗体可以保留其识别抗原的特异性，同时与原始小鼠抗体相比对人类的抗原性降低。
如本文所用，术语“人抗体”(或其抗原结合片段)旨在包括具有可变区的抗体(及其抗原结合片段)，其中框架区和CDR区均源自人源序列。此外，如果抗体包含恒定区，则恒定区也源自这种人序列，例如人种系序列或人种系序列的突变形式。本发明的人类抗体及其抗原结合片段可包含非由人类序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。人抗体的该定义特别排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可以使用本领域已知的各种技术来生产人抗体，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol,227:381(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol,222:581(1991))。Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,p.77(1985)；Boemer等人,J.Immunol,147(l):86-95(1991)中描述的方法也可用于制备人单克隆抗体。还参见van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol,5:368-74(2001)。可以通过将抗原施用于转基因动物来制备人抗体，该转基因动物已经被修饰，以响应抗原攻击而产生此类抗体，但其内源基因座已被禁用，例如，免疫的xenomice(关于XENOMOUSETM技术，参见例如美国专利号6,075,181和6,150,584)。关于通过人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体的信息，还参见例如Li et al,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。
如本文所用，“人源化”抗体(或其抗原结合片段)是保留了非人抗体的反应性，同时对人类的免疫原性较低的抗体(或其抗原结合片段)。例如，这可以通过以下方法来实现：保留非人CDR区，并将抗体的其余部分替换为人类对应物(即恒定区和可变区的框架部分)。可以在人框架序列以及源自另一哺乳动物物种的种系的CDR序列内进行另外的框架区修饰。本发明的人源化抗体可包含非由人序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变，或保守取代以促进稳定性或制备)。参见，例如，Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855,1984；Morrison和Oi,Adv.Immunol.,44:65-92,1988；Verhoeyen等人,Science,239:1534-1536,1988；Padlan,Molec.Immun.,28:489-498,1991；和Padlan,Molec.Immun.,31:169-217,1994。人体工程技术的其他实例包括但不限于美国专利号5,766,886中公开的Xoma技术。
如本文所用，术语“重组人源化抗体”包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有人类抗体，例如从转化为表达人源化抗体的宿主细胞中分离的抗体，例如从转染瘤(transfectoma)中分离的抗体，以及通过涉及将人类免疫球蛋白基因序列的全部或部分剪接至其他DNA序列的任何其他方式而制备、表达、产生或分离的抗体。
合适地，本发明的抗体或其抗原结合片段是人源化的。合适地，本发明的抗体是人源化的并且包含源自兔的CDR。
如本文所用，术语“多特异性抗体”是指与至少两个或更多个不同靶标(例如，MSLN和CD3)上的两个或更多个不同表位结合的抗体。术语“多特异性抗体”包括双特异性、三特异性、四特异性、五特异性和六特异性。如本文所用，术语“双特异性抗体”是指与两个不同靶标(例如，MSLN和CD3)上的两个不同表位结合的抗体。如本文所用，术语“三特异性抗体”是指与三个不同靶标(例如，MSLN、CD3和hSA)上的三个不同表位结合的抗体。
术语“表位”是指能够与抗体特异性结合的蛋白质决定簇。表位通常由分子的化学活性表面基团(例如氨基酸或糖侧链)组成，通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。“构象”表位和“线性”表位的区别在于，在存在变性溶剂的情况下，与前者的结合丧失，而与后者的结合不丧失。
如本文所用，术语“构象表位”是指，当多肽链折叠形成天然蛋白时，在表面上聚集在一起的抗原氨基酸残基。
术语“线性表位”是指一种表位，其中蛋白质和相互作用分子(例如抗体)之间的所有相互作用点均沿蛋白质的一级氨基酸序列线性发生(连续)。
如本文所用，术语“识别”是指发现其构象表位并与之相互作用(例如结合)的抗体其抗原结合片段。
如本文所用，术语“亲和力”是指在单个抗原位点上抗体和抗原之间的相互作用的强度。在每个抗原性位点内，抗体“臂”的可变区通过弱的非共价力与抗原在许多位点相互作用；相互作用越大，亲和力越强。
“结合亲和力”通常是指分子的(例如，抗体的)单个结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”或“与……结合”是指反映结合对的成员(例如抗体片段和抗原)之间的1：1相互作用的内在结合亲和力。分子X与其伴侣Y的亲和力通常可以用解离常数(KD)表示。亲和力可以通过本领域已知的常规方法来测量，包括本文所述的方法。低亲和力抗体通常会缓慢结合抗原并倾向于易于解离，而高亲和力抗体通常会更快地结合抗原并倾向于保持更长的结合时间。本领域已知测量结合亲和力的多种方法，其中任何一种方法均可用于本发明的目的。下面描述用于测量结合亲和力，即结合强度的具体说明性和示例性实施方案。
本文所用的术语“Kassoc”、“Ka”或“Kon”是指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率，而本文所用的术语“Kdis”、“Kd”或“Koff”是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。在一个实施方案中，本文所用的术语“KD”是指解离常数，其由Kd与Ka之比(即Kd/Ka)获得，并表示为摩尔浓度(M)。在一个实施方案中，根据本发明的“KD”或“KD值”或“KD”或“KD值”通过使用表面等离子体共振测定法来测量。如第[0168]节所述，通过表面等离子体共振(SPR)测量测定重组人间皮素(人MSLN)和重组食蟹猴MSLN(食蟹猴MSLN)的亲和力。如第[0196]节所述，通过SPR测定对重组人CD3的亲和力。
合适地，本发明的多特异性抗体对于MSLN特异性是二价的。
合适地，本发明的多特异性抗体对于CD3特异性是单价、二价或多价的。在一个实施方案中，本发明的多特异性抗体对于CD3特异性是二价的。在一个优选的实施方案中，本发明的多特异性抗体对于CD3特异性是单价的。
术语“多价抗体”是指具有不止一个价(valency)的单个结合分子，其中“价”被描述为与相同靶分子上的表位结合的抗原结合部分的数目。这样，单个结合分子可以结合靶分子上的一个以上结合位点。多价抗体的实例包括但不限于二价抗体、三价抗体、四价抗体、五价抗体等。
如本文所用，术语“单价抗体”是指与靶分子(例如CD3)上的单个表位结合的抗体。此外，如本文所用，术语“结合结构域”或“单价结合结构域”是指与靶分子(例如CD3)上的单个表位结合的结合结构域。
如本文所用，术语“二价抗体”是指与两个相同靶分子，例如CD3靶分子上的两个表位结合的抗体。
本发明的多特异性抗体的两个MSLN-BD与MSLN细胞外部分的任意区域结合，例如与MSLN的I区、II区和/或III区结合。优选地，本发明多特异性抗体的两个MSLN-BD结合MSLN的I区和/或II区，特别是MSLN的I区。MSLN附着于细胞表面，I区是MSLN最远离细胞表面的部分。
本发明多特异性抗体的两个MSLN-BD结合MSLN靶分子上相同或不同的表位。优选地，本发明多特异性抗体的两个MSLN-BD结合MSLN靶分子上的相同表位。如本文所用，术语“相同表位”指相同蛋白质上能够特异性结合抗体的独特蛋白质决定簇，其中这些独特的蛋白质决定簇是相同的，即由具有相同三维结构特征以及相同电荷特征的相同化学活性表面分子群组(如氨基酸或糖侧链)所组成。术语“不同的表位”，在本文中与特定的蛋白质靶结合使用时，是指相同蛋白质上能够特异性结合抗体的独特蛋白质决定簇，其中这些独特的蛋白质决定簇是不相同的，即由具有不同三维结构特征以及不同电荷特征的不同化学活性表面分子群组(如氨基酸或糖侧链)所组成。这些不同的表位可以是重叠的或非重叠的。
本发明的发明人现已令人惊讶地发现，例如，三特异性分子(biMSLN高KDxCD3xhSA)PRO2000、PRO2562、PRO2565、PRO2566和PRO2567能够高效杀伤靶细胞(通过流式细胞术测定，靶细胞的MSLN表达水平比健康MeT-5A细胞(ATCC CRL-9444)高约7倍)，EC50比杀伤所述MeT-5A细胞的EC50低至少25倍，如在针对所述靶细胞和所述MeT-5A细胞的T细胞驱动的细胞毒性试验中所确定的(参见例如表31)。因此，尽管PRO2000、PRO2562、PRO2566和PRO2567对高MSLN表达的靶细胞表现出非常高的杀伤效力，但它们对健康细胞的杀伤效力低得多，这表明使用PRO2000、PRO2562、PRO2566和PRO2567的治疗具有潜在的大治疗窗。与此相反，三特异性参照分子PRO1872(MSLN低KDxCD3xhSA)包含一个MSLN-BD，该MSLN-BD的结合亲和力(KD)比PRO2000、PRO2562、PRO2566和PRO2567的MSLN-BD好5倍以上，而参照分子PRO1872杀伤所述高MSLN表达靶细胞和所述健康Met-5A细胞的效力没有显著差异。这一发现表明，在癌症患者的治疗中使用本发明的多特异性抗体的治疗窗显著增加。此外，本发明的发明人惊奇地发现，在杀伤靶细胞方面(通过流式细胞术测定，靶细胞的MSLN表达水平比所述健康MeT-5A细胞高约7倍)，三特异性分子PRO2000、PRO2562、PRO2566和PRO2567(biMSLN高 KDxCD3xhSA)的EC50值在50ng/ml可溶性间皮素(sMSLN)存在下，增加不超过6倍，在500ng/ml可溶性间皮素(sMSLN)存在下，增加不超过40倍，如在针对所述靶细胞的T细胞驱动的细胞毒性试验中所确定的。另一方面，三特异性参照分子PRO1872(MSLN低KDxCD3xhSA)杀伤所述靶细胞的EC50值在50ng/ml sMSLN存在下增加了几乎8倍，在500ng/ml sMSLN存在下增加了超过75倍。因此，三特异性分子PRO2000、PRO2562、PRO2566和PRO2567对高MSLN表达靶细胞的高杀伤效力仅受到高浓度sMSLN的轻微影响。另一方面，三特异性分子PRO2000,、PRO2562、PRO2566和PRO2567对健康细胞的杀伤能力在高浓度sMSLN存在下进一步降低(数据未显示)，表明它们在临床中使用的治疗窗口甚至会因sMSLN的存在而增加。这是一个重要的发现，因为在患者中经常观察到高血浆水平的可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)。对于PRO2000的CD8+T细胞活化能力，本发明人获得了类似的有利结果。上述发现甚至是更令人惊讶的，因为不能先验地预期在复杂的多靶、多细胞情况下，所有四个结合结构域保持功能而不在空间上的或以其他方式相互抑制。
用于本发明的多特异性抗体的合适的MSLN-BD是本公开中提供的结合结构域。本发明的间皮素-BD包括但不限于其序列列于表1中的人源化MSLN结合结构域。
用于本发明的多特异性抗体的合适的CD3-BD是本公开中提供的结合结构域。本发明CD3-BD包括但不限于其序列列于表3中的人源化CD3结合结构域。
合适地，本发明的多特异性抗体具有两种不同的特异性(MSLN和CD3)。合适地，本发明的多特异性抗体是双特异性抗体，其对于MSLN是二价的。本发明的多特异性抗体可以包含其他一个特异性(三特异性抗体)或多个特异性(四特异性或五特异性或六特异性抗体)。在一个实施方案中，多特异性抗体是双特异性的(MSLN和CD3)。在另一个实施方案中，多特异性抗体是三特异性的(MSLN、CD3和hSA)。
合适地，本发明的抗体不包含免疫球蛋白Fc区多肽。
为了在相同或更低分子量下，增加特异性/功能性的数量，使用包含抗体片段的抗体是有利的，例如Fv、Fab、Fab’和F(ab’)2片段以及其他抗体片段。这些较小的分子保留了完整抗体的抗原结合活性，并且与完整的免疫球蛋白分子相比，还表现出改善的组织渗透性和药代动力学特性。尽管相对于完整的免疫球蛋白，此类片段似乎显示出许多优势，但它们还受到血清清除率高的困扰，因为它们缺少在体内具有长半衰期的Fc结构域(Medasan等人,1997,J.Immunol.158:2211-2217)。具有较低分子量的分子能更有效地穿透靶标组织(例如实体癌)，因此有希望在相同或较低剂量下改善功效。
发明人惊奇地发现，向本发明的多特异性抗体中添加人血清白蛋白结合结构域(hSA-BD)不会干扰其它结合结构域结合其各自靶标的能力。这一发现是令人惊讶的，因为不能先验地预期在复杂的多靶、多细胞体内情况下，所有四个结合结构域保持功能而不在空间上的或以其他方式相互抑制。
合适地，本发明的多特异性抗体可以包含对人血清白蛋白具有特异性的另一结合结构域。在一个实施方案中，所述多特异性抗体包含:(i)两个MSLN-BD；(ii)至少一个CD3-BD；和(iii)至少一个hSA-BD。
术语“hSA”特别是指具有UniProt ID号P02768的人血清白蛋白。人血清白蛋白(hSA)是人血清中66.4kDa的丰富蛋白(占总蛋白的50％)，由585个氨基酸组成(Sugio,Protein Eng,Vol.12,1999,439-446)。多功能hSA蛋白与其结构相关联，该结构允许结合并运输许多代谢物，例如脂肪酸、金属离子、胆红素和某些药物(Fanali,Molecular Aspectsof Medicine,Vol.33,2012,209-290)。血清中的HSA浓度约为3.5-5g/dL。白蛋白结合抗体及其片段可用于例如延长与其缀合的药物或蛋白质的体内血清半衰期。
在一些实施方案中，hSA-BD源自单克隆抗体或抗体片段。
用于本发明的多特异性抗体的合适的hSA-BD是本公开中提供的结合结构域。本发明hSA-BD包括但不限于其序列列于表4中的人源化hSA结合结构域。
特别是，本发明的hSA-BD特异性结合人血清白蛋白。
用于本发明的多特异性抗体的其他合适的hSA-BD包含或源自选自由以下组成的组的抗体：(i)结合血清白蛋白的多肽(参见，例如，Smith等人,2001,BioconjugateChem.12:750-756；EP0486525；US6267964；WO 2004/001064；WO 2002/076489；和WO 2001/45746)；(ii)Holt等人,Protein Engineering,Design&Selection,vol 21,5,pp283-288、WO 2004/003019、WO 2008/096158、WO 2005/118642、WO 2006/0591056和WO 2011/006915中描述的抗血清白蛋白结合单可变结构域；(iii)WO 2009/040562、WO 2010/035012和WO2011/086091中描述的抗血清白蛋白抗体。
本发明的其他可变结构域包括已突变、但仍在CDR区中与表1、3和4中描述的序列中描述的CDR区具有至少80、70、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列。本发明的其他可变结构域包括突变氨基酸序列，其中当与表1、3和4中描述的序列中描述的CDR区相比时，CDR区中已经突变的氨基酸不超过1、2、3、4或5个。
合适地，本发明的结合结构域的VH结构域属于VH3或VH4家族。在一个实施方案中，本发明的结合结构域包含属于VH3家族的VH结构域。在本发明的语境中，术语“属于VHx家族(或VLx家族)”是指框架序列FR1至FR3与所述VHx家族(或VLx)显示最高程度的同源性。VH和VL家族的实例在Knappik等人,J.Mol.Biol.296(2000)57-86或在WO 2019/057787中给出。属于VH3家族的VH结构域的具体实例由SEQ ID NO:129表示，属于VH4家族的VH结构域的具体实例由SEQ ID NO:130表示。特别是，取自SEQ ID NO:129的框架区FR1至FR3属于VH3家族(表7，非粗体标记的区域)。合适地，本文所用的属于VH3家族的VH是一种VH，其包含与SEQID NO:129的FR1至FR3具有至少85％，特别是至少90％，更特别是至少95％序列同一性的FR1至FR3。VH3序列的其他实例，以及VH4序列的其他实例可以在Knappik等人,J.Mol.Biol.296(2000)57/-86中或WO 2019/057787中找到。合适地，本发明的hSA-BD包括：Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1或Vκ3框架，特别是Vκ1框架FR1至3，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4、和VλFR4，特别是VλFR4。合适的Vκ1框架FR1至3以及示例性的VλFR4在SEQID NO:131中给出(表7，FR区域以非粗体标记)。Vκ1序列的其他实例，以及Vκ2、Vκ3或Vκ4序列的其他实例可以在Knappik等人,J.Mol.Biol.296(2000)57-86中找到。合适的Vκ1框架FR1至3包含与对应于FR1至3并选自SEQ ID NO:131的氨基酸序列(表7，FR区以非粗体标记)具有至少70、80、90、95％同一性的氨基酸序列。合适的VλFR4如SEQ ID NO:132至SEQ IDNO:138和SEQ ID NO:139中所述，包含单个半胱氨酸残基，特别是在如下情形下：其中第二个单个半胱氨酸存在于相应的VH链中，特别是VH的51位(AHo编号)，用于形成结构域间二硫键。在一个实施方案中，本发明的VL结构域包含VλFR4，所述VλFR4与选自SEQ ID NO:132至SEQ ID NO:139中任意一个的氨基酸序列，特别是与SEQ ID NO:132或139具有至少70、80、或90％同一性。
本发明的结合结构域包括表1、3和4中所列的VH结构域。合适地，本发明的结合结构域包含表1、3和4中的一个中列出的VH氨基酸序列，其中框架序列(例如，不是CDR的序列)中已经突变(其中，作为各种非限制性实例，突变是添加、取代或缺失)的氨基酸不超过20个。合适地，本发明的结合结构域包含表1、3和4中的一个中列出的VH氨基酸序列，其中框架序列(例如，不是CDR的序列)中已经突变(其中，作为各种非限制性实例，突变是添加、取代或缺失)的氨基酸不超过15个，特别是不超过10个，特别是不超过5个。本发明的其他结合结构域包括已突变、但仍在VH区中与表1、3和4中的一个中描述的相应序列中描述的VH区具有至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，包括包含表1、3和4所示序列之一的至少5至140位(AHo编号)，特别是至少3至145位的VH结构域。
特别是，本发明的结合结构域包括表1、3和4之一中列出的VL结构域。合适地，本发明的结合结构域包含表1、3和4中的一个中列出的VL氨基酸序列，其中框架序列(例如，不是CDR的序列)中已经突变(其中，作为各种非限制性实例，突变是添加、取代或缺失)的氨基酸不超过20个。合适地，本发明的结合结构域包含表1、3和4中的一个中列出的VL氨基酸序列，其中框架序列(例如，不是CDR的序列)中已经突变(其中，作为各种非限制性实例，突变是添加、取代或缺失)的氨基酸不超过15个，特别是不超过10个，特别是不超过5个。本发明的其他结合结构域包括已突变、但仍在VL区中与表1、3和4中描述的序列中描述的VL区具有至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％同一性的氨基酸序列，包括包含表1、3和4所示序列之一的至少5至140位(AHo编号)，特别是至少3至145位的VL结构域。
在本发明的语境中，术语“本发明的结合结构域”既涉及结合结构域本身，即独立于多特异性语境，又特别涉及包含在多特异性构建体中的结合结构域，例如包含在双特异性、三特异性或四特异性构建体中的结合结构域之一。
合适地，本发明的结合结构域选自由以下组成的组：Fab、Fv、scFv、dsFv、scAb、和STAB。
合适地，本发明的结合结构域是scFv抗体片段。
本发明的多特异性抗体可以是任何合适的形式。
合适地，多特异性抗体的结合结构域可操作地连接。本发明的多特异性抗体的结合结构域能够同时结合它们各自的抗原或受体。本文中使用的术语“同时”是指MSLN-BD中的至少一个和CD3-BD的同时结合。在特定情况下，例如在靶细胞的细胞表面上具有高密度MSLN的情况下，三个结合结构域，即两个MSLN-BD和CD3-BD，也可能同时结合。
本发明的多特异性抗体包含两个MSLN-BD和至少一个CD3-BD，其中所述MSLN-BD和所述CD3-BD彼此可操作地连接。
如本文所用，术语“可操作地连接”是指两个分子(例如，多肽、结构域、结合结构域)连接，从而各自保留功能活性。无论两个分子是直接连接还是间接连接(例如，通过接头，通过部分，通过接头连接到部分)，它们都可以是“可操作地连接”。术语“接头”是指任选地位于本发明的结合结构域或抗体片段之间的肽或其他部分。可以使用多种策略将分子共价连接在一起。这些包括但不限于蛋白质或蛋白质结构域的N-末端和C-末端之间的多肽连接，通过二硫键的连接，以及通过化学交联剂的连接。在该实施方案的一方面，接头是通过重组技术或肽合成产生的肽键。对于要连接两条多肽链的特定情况，选择合适的接头取决于各种参数，包括但不限于两条多肽链的性质(例如，它们是否天然寡聚)、要连接的N-末端和C-末端之间的距离(如果知道)和/或接头对蛋白水解和氧化的稳定性。此外，接头可以包含提供柔韧性的氨基酸残基。
在本发明的语境中，术语“多肽接头”是指连接两个结构域的通过肽键连接的由氨基酸残基链组成的接头，每个结构域与接头的一端连接。多肽接头的长度应足以连接两个分子，以使它们彼此之间具有正确的构象，从而保持所需的活性。在特定的实施方案中，多肽接头具有2至30个氨基酸残基(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸残基)的连续链。此外，选择包含在多肽接头中的氨基酸残基应表现出不会显著干扰多肽活性的特性。因此，整体上接头肽不应表现出与多肽活性不一致的电荷，或干扰内部折叠，或与一种或多种单体中的氨基酸残基形成键或其他相互作用，这将严重阻碍受体单体结构域的结合。在特定的实施方案中，多肽接头是非结构化的多肽。有用的接头包括甘氨酸-丝氨酸或GS接头。如本领域技术人员将理解的，“Gly-Ser”或“GS”接头是指串联的甘氨酸和丝氨酸的聚合物(包括例如(Gly-Ser)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n和(GGGS)n其中n是至少一的整数)、甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-丝氨酸聚合物以及其他柔性接头，例如用于shaker钾离子通道的系链，以及多种其他柔性肽接头。甘氨酸-丝氨酸聚合物是优选的，因为这两个氨基酸都是相对非结构化的，因此可以用作组分之间的中性系链。其次，丝氨酸是亲水的，因此能够溶解可能是球状甘氨酸链的物质。第三，已显示相似的链可有效连接重组蛋白(如单链抗体)的亚基。
合适地，多特异性抗体的形式选自本领域已知的任何合适的多特异性形式，例如至少双特异性形式，其不包含免疫球蛋白Fc区，作为非限制性实例，包括基于以下的形式：串联scDb(Tandab)、线性二聚体scDb(LD-scDb)、环状二聚体scDb(CD-scDb)、串联tri-scFv、三体(Fab-(scFv)2)、Fab-Fv2、三抗体(triabody)、scDb-scFv、四抗体(tetrabody)、双-双抗体(di-diabody)、CODV、串联-di-scFv、串联tri-scFv、Fab-(scFv)2、Fab-Fv2、或与异二聚Fc结构域以外的异二聚化结构域的N-和/或C-末端融合的CODV、和MATCH(描述于WO2016/0202457；Egan T.等人,MABS 9(2017)68-84)和DuoBodies(由Duobody technology制备的双特异性IgGs)(MAbs.2017Feb/Mar；9(2):182-212.doi:10.1080/19420862.2016.1268307)。特别合适的是，多特异性抗体是单链双抗体(scDb)-scFv或MATCH。
在一个实施方案中，本发明的多特异性抗体不包含CH1和/或CL区域。
在另一个实施方案中，本发明的多特异性抗体的形式选自由以下组成的组：scDb-scFv、三抗体(triabody)和三体(tribody)。特别适合用于本文的是scDb-scFv，特别是其中所述MSLN-BD和所述CD3-BD中的一个是scDb的形式，并且所述MSLN-BD是与所述scDb可操作地连接的scFv。
术语“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的抗体片段，这些片段包含与同一条多肽链中的VL连接的VH(VH-VL)。通过使用接头，该接头太短以至于不允许同一条链上的两个结构域之间配对，这些结构域被迫与另一条链的互补结构域配对，以产生两个抗原结合位点。双抗体可以是二价或双特异性的。双抗体在例如EP 404 097、WO 93/01161、Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)、和Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993)中更充分地描述。三抗体和四抗体也描述于Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)。
双特异性scDb，特别是双特异性单体scDb，特别是包含两个可变重链结构域(VH)或其片段和两个可变轻链结构域(VL)或其片段，它们通过接头L1、L2和L3以以下顺序连接VHA-L1-VLB-L2-VHB-L3-VLA、VHA-L1-VHB-L2-VLB-L3-VLA、VLA-L1-VLB-L2-VHB-L3-VHA、VLA-L1-VHB-L2-VLB-L3-VHA、VHB-L1-VLA-L2-VHA-L3-VLB、VHB-L1-VHA-L2-VLA-L3-VLB、VLB-L1-VLA-L2-VHA-L3-VHB或VLB-L1-VHA-L2-VLA-L3-VHB，其中VLA和VHA结构域共同形成第一抗原的抗原结合位点，VLB和VHB共同形成第二抗原的抗原结合位点。
接头L1特别是2-10个氨基酸，更特别是3-7个氨基酸，最特别是5个氨基酸的肽，并且接头L3特别是1-10个氨基酸，更特别是2-7个氨基酸，最特别是5个氨基酸的肽。在特定实施方案中，接头L1和/或L3包含一个或两个单元的四个(4)甘氨酸氨基酸残基和一个(1)丝氨酸氨基酸残基(GGGGS)n，其中n＝1或2，特别是n＝1。
中间接头L2特别是10-40个氨基酸，更特别是15-30个氨基酸，最特别是20-25个氨基酸的肽。在具体实施方案中，所述接头L2包含一个或多个单元的四个(4)甘氨酸氨基酸残基和一个(1)丝氨酸氨基酸残基(GGGGS)n，其中n＝1、2、3、4、5、6、7或8，特别是n＝4。
在一个实施方案中，本发明的多特异性抗体是scDb-scFv。术语“scDb-scFv”是指抗体形式，其中单链Fv(scFv)片段通过柔性Gly-Ser接头与单链双抗体(scDb)融合。在一个实施方案中，所述柔性Gly-Ser接头是2-40个氨基酸，例如2-35、2-30、2-25、2-20、2-15、2-10个氨基酸，特别是10个氨基酸氨基酸的肽。在特定实施方案中，所述接头包含一个或多个单元的四个(4)甘氨酸氨基酸残基和一个(1)丝氨酸氨基酸残基(GGGGS)n，其中n＝1、2、3、4、5、6、7或8，特别是n＝2。
在本发明的一个实施方案中，本发明的多特异性抗体是WO 2016/0202457；EganT.,等人,MABS 9(2017)68-84中描述的MATCH形式。特别地，在该实施方案中，本发明的多特异性抗体是MATCH3或MATCH4形式。
本发明的多特异性抗体可以使用本领域已知的任何方便的抗体制备方法来制备(关于双特异性构建体的生产，例如参见Fischer,N.&Leger,O.,Pathobiology 74(2007)3-14；关于双特异性双抗体和串联scFv的生产，例如参见Hornig,N.&
Figure BDA0004113623330000461
-Schwarz,A.,Methods Mol.Biol.907(2012)713-727和WO 99/57150)。用于制备本发明的双特异性构建体的合适方法的具体实例还包括Genmab技术(参见Labrijn等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA110(2013)5145-5150)和Merus技术(参见de Kruif等人,Biotechnol.Bioeng.106(2010)741-750)技术。用于生产包含功能性抗体Fc部分的双特异性抗体的方法在本领域中也是已知的(参见，例如，Zhu等人,Cancer Lett.86(1994)127-134)；和Suresh等人,Methods EnzyMol.121(1986)210-228)。
这些方法通常涉及单克隆抗体的产生，例如通过将骨髓瘤细胞与小鼠的脾细胞融合，该小鼠已经用杂交瘤技术用所需抗原免疫(参见，例如，Yokoyama等人,Curr.Protoc.Immunol.Chapter 2,Unit 2.5,2006)或通过重组抗体工程技术(库克隆或噬菌体展示/酵母展示)(参见，例如，Chames&Baty,FEMS Microbiol.Letters 189(2000)1-8)，以及使用已知的分子克隆技术，将两种或多种不同单克隆抗体的抗原结合结构域或者其片段或部分组合，以得到双特异性或多特异性构建体。
可以使用本领域已知的方法通过将组成结合特异性缀合来制备本发明的多特异性分子。例如，可以单独生成双特异性分子的每种结合特异性，然后将其彼此缀合。当结合特异性是蛋白质或肽时，可使用多种偶联剂或交联剂进行共价结合。交联剂的实例包括蛋白质A、碳二亚胺(carbodiimide)、N-琥珀酰亚胺基-5-乙酰基-硫代乙酸酯(SATA)、5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、邻苯二甲酰亚胺(oPDM)、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)和磺基琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯(磺基-SMCC)(参见例如，Karpovsky等人,1984J.Exp.Med.160:1686；Liu,M A等人,1985Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:8648)。其他方法包括Paulus,1985BehringIns.Mitt.NO.78,118-132；Brennan等人,1985Science 229:81-83和Glennie等人,1987J.Immunol.139:2367-2375中描述的方法。缀合剂是SATA和磺基-SMCC，两者均可从Pierce Chemical有限公司(Rockford,111)获得。
当结合特异性是抗体时，它们可以通过两条重链的C末端铰链区的巯基键缀合。在一个特别的实施方案中，在缀合之前，将铰链区修饰为包含奇数个巯基残基，例如一个。
或者，可以在相同载体中编码两个或更多个结合特异性，并在相同宿主细胞中表达和装配。当双特异性分子是mAb X mAb、mAb X Fab、Fab X F(ab')2或配体X Fab融合蛋白时，此方法是特别有用的。本发明的多特异性抗体可以是包含一个单链抗体和结合决定簇的单链分子，或者可以是包含两个结合决定簇的单链多特异性抗体。多特异性抗体可以包含至少两个单链分子。制备多特异性抗体和分子的方法描述于例如美国专利号5,260,203；美国专利号5,455,030；美国专利号4,881,175；美国专利号5,132,405；美国专利号5,091,513；美国专利号5,476,786；美国专利号5,013,653；美国专利号5,258,498；和美国专利号5,482,858中。
多特异性抗体与其特异性靶标的结合可以通过例如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(REA)、FACS分析、生物测定(例如生长抑制)或蛋白质印迹测定来确认。这些测定中的每一种通常通过采用对目标复合物具有特异性的标记试剂(例如抗体)来检测特定目标蛋白质-抗体复合物的存在。
在另一方面，本发明提供了一种核酸，其编码本发明的多特异性抗体或其片段或其结合结构域。可以对此类核酸序列进行优化以在哺乳动物细胞中表达。
术语“核酸”在本文中与术语“多核苷酸”互换使用，并且是指一种或多种单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。该术语涵盖含有已知核苷酸类似物或修饰的骨架残基或连接(linkage)的核酸，它们是合成的、天然存在的和非天然存在的，具有与参照核酸相似的结合特性，并且以类似于参照核苷酸的方式代谢。此类类似物的实例包括但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性甲基磷酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(PNA)。除非另有说明，否则特定的核酸序列还隐含地涵盖其保守修饰的变体(例如简并密码子取代)和互补序列，以及明确指出的序列。具体而言，如下所述，简并密码子取代可以通过生成这样的序列来实现，即在所述序列中，一个或多个选定(或全部)密码子的第三位置被混合碱基和/或脱氧肌苷(deoxyinosine)残基取代(Batzer等人,NucleicAcid Res.19:5081,1991；Ohtsuka等人,J.Biol.Chem.260:2605-2608,1985；和Rossolini等人,Mol.Cell.Probes 8:91-98,1994)。
本发明提供了基本上纯化的核酸分子，其编码多肽，所述多肽包含上述多特异性抗体的区段或结构域。当从合适的表达载体表达时，由这些核酸分子编码的多肽能够表现出抗原结合能力或本发明的多特异性抗体的能力。
本发明中还提供了多核苷酸，其编码表1、3和4中列出的本发明的多特异性抗体的结合结构域的至少一个CDR区并且通常编码所有三个CDR区。由于密码子的简并性，多种核酸序列将编码所述免疫球蛋白氨基酸序列的每一个。
多核苷酸序列可以从头通过固相DNA合成或通过PCR诱变编码本发明的多特异性抗体或其片段或其结合结构域的现有序列(例如，以下实施例中描述的序列)来产生。核酸的直接化学合成可以通过本领域已知的方法来完成，例如Narang等人,1979,Meth.EnzyMol.68:90的磷酸三酯法；Brown等人,Meth.EnzyMol.68:109,1979的磷酸二酯法；Beaucage等人,Tetra.Lett.,22:1859,1981的二乙基亚磷酰胺法；和美国专利号4,458,066的固体支撑法。通过PCR将突变引入多核苷酸序列中可以通过例如如下文献中描述的方法来进行：PCR Technology:Principles和Applications for DNAAmplification,H.A.Erlich(Ed.),Freeman Press,NY,N.Y.,1992；PCR Protocols:AGuide to Methods和Applications,Innis等人(Ed.),Academic Press,San Diego,Calif,1990；Mattila等人,Nucleic Acids Res.19:967,1991；和Eckert等人,PCR Methods和Applications 1:17,1991。
本发明还提供了表达载体和宿主细胞，用于生产本发明的多特异性抗体或其片段或其结合结构域。
术语“载体”旨在指能够转运已与其连接的另一种多核苷酸的多核苷酸分子。载体的一种类型是“质粒”，其是指环状双链DNA环，其中可以连接其他DNA区段。载体的另一种类型是病毒载体，其中可以将其他DNA区段连接到病毒基因组中。某些载体能够在它们导入的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离体(episomal)哺乳动物载体)。在导入宿主细胞后，其他载体(例如非游离体哺乳动物载体)可以被整合到宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。
此外，某些载体能够指导与其可操作地连接的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称为“表达载体”)。通常，在重组DNA技术中有用的表达载体通常是质粒的形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可以互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，本发明旨在包括具有等同功能的此类其他形式的表达载体，例如病毒载体(例如复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)。在该具体背景下，术语“可操作地连接”是指两个或更多个多核苷酸(例如，DNA)片段之间的功能关系。通常，它是指转录调节序列与转录序列的功能关系。例如，如果在合适的宿主细胞或其他表达系统中，启动子或增强子序列刺激或调节编码序列的转录，则它与该编码序列可操作地连接。通常，与转录序列可操作地连接的启动子转录调控序列与转录序列在物理上是连续的，即，它们是顺式的。但是，某些转录调控序列，例如增强子，不必在物理上连续或位于其增强转录的编码序列的附近。
可以使用各种表达载体来表达编码多特异性抗体链或结合片段的多核苷酸。基于病毒的表达载体和非病毒表达载体均可用于在哺乳动物宿主细胞中生产抗体。非病毒载体和系统包括质粒、游离体载体(通常具有用于表达蛋白质或RNA的表达盒)和人工染色体(参见例如Harrington等人,Nat Genet.15:345,1997)。例如，可用于在哺乳动物(例如人)细胞中表达MSLN结合多核苷酸和多肽的非病毒载体包括pThioHis A、B和C、pcDNA3.1/His、pEBVHis A、B和C(Invitrogen,San Diego,Calif.)、MPS V载体和本领域已知的用于表达其他蛋白质的许多其他载体。有用的病毒载体包括基于逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒的载体，基于SV40、乳头瘤病毒、HBP爱泼斯坦巴尔病毒(HBP Epstein Barr virus)、牛痘病毒载体和塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus，SFV)的载体。参见Brent等人，同上；Smith,Annu.Rev.MicroBiol.49:807,1995；和Rosenfeld等人,Cell68:143,1992。
表达载体的选择取决于要在其中表达所述载体的预期宿主细胞。通常，表达载体包含与编码多特异性抗体链或片段的多核苷酸可操作地连接的启动子和其他调控序列(例如，增强子)。在一个实施方案中，采用诱导型启动子来防止插入序列在非诱导条件下的表达。诱导型启动子包括例如阿拉伯糖、lacZ、金属硫蛋白启动子或热激启动子。转化生物体的培养物可以在非诱导条件下扩增，而不会使群体偏向于表达产物被宿主细胞更好地耐受的编码序列。除启动子外，有效表达多特异性抗体链或片段还可能需要或期望其他调控元件。这些元件通常包括ATG起始密码子和相邻的核糖体结合位点或其他序列。另外，可以通过包含适合使用中的细胞系统的增强子来增强表达的效率(参见，例如，Scharf等人,Results Probl.Cell Differ.20:125,1994；和Bittner等人,Meth.Enzymol.,153:516,1987)。例如，可以使用SV40增强子或CMV增强子来增加在哺乳动物宿主细胞中的表达。
表达载体还可以提供分泌信号序列位置，从而与由插入的本发明的多特异性抗体或其片段或其结合结构域序列所编码的多肽形成融合蛋白。更经常地，将插入的本发明的多特异性抗体或其片段或其结合结构域序列与信号序列连接，然后包含在载体中。用于接收编码多特异性抗体轻链和重链可变结构域的结合结构域的序列的载体有时也编码恒定区或其部分。
术语“重组宿主细胞”(或简称为“宿主细胞”)是指已将重组表达载体引入其中的细胞。应当理解，这些术语不仅旨在指特定的对象细胞，而且还指该细胞的后代。因为由于突变或环境影响，在后代中可能发生某些修饰，所以此类后代实际上可能与亲本细胞不同，但仍包括在本文所用的术语“宿主细胞”的范围内。
用于携带和表达本发明的多特异性抗体或其片段或其结合结构域的宿主细胞可以是原核或真核的。大肠杆菌是一种可用于克隆和表达本发明的多核苷酸的原核宿主。其他适用的微生物宿主包括杆菌，例如枯草芽孢杆菌，以及其他肠杆菌科，例如沙门氏菌、沙雷氏菌和各种假单胞菌。在这些原核宿主中，还可以制备表达载体，其通常包含与宿主细胞相容的表达控制序列(例如，复制起点)。另外，将存在任意数量的多种众所周知的启动子，例如乳糖启动子系统、色氨酸(trp)启动子系统、β-内酰胺酶启动子系统或噬菌体λ的启动子系统。启动子通常控制表达(任选地与操纵子序列一起)，并具有核糖体结合位点序列等，用于启动和完成转录和翻译。其他微生物，例如酵母，也可以用于表达本发明的MSLN结合多肽。还可以将昆虫细胞与杆状病毒载体结合使用。
在一个实施方案中，使用哺乳动物宿主细胞来表达和生产本发明的多特异性抗体或其片段或其结合结构域。例如，它们可以是表达内源性免疫球蛋白基因的杂交瘤细胞系，也可以是具有外源性表达载体的哺乳动物细胞系。这些包括任何正常的终将死亡的(mortal)或者正常或异常的永生的动物或人类细胞。例如，已经开发了许多能够分泌完整免疫球蛋白的合适宿主细胞系，包括CHO细胞系、各种Cos细胞系、HeLa细胞、骨髓瘤细胞系、转化的B细胞和杂交瘤。哺乳动物组织细胞培养物表达多肽的用途在Winnacker,FROMGENES TO CLONES,VCH Publishers,N.Y.,N.Y.,1987中大体地描述。用于哺乳动物宿主细胞的表达载体可以包括表达控制序列，例如复制起点、启动子和增强子(参见，例如，Queen等人,Immunol.Rev.89:49-68,1986)，和必要的加工信息位点，例如核糖体结合位点、RNA剪接位点、聚腺苷酸化位点和转录终止子序列。这些表达载体通常含有源自哺乳动物基因或哺乳动物病毒的启动子。合适的启动子可以是组成型、细胞类型特异性、阶段特异性和/或可调节的或可调控的。有用的启动子包括但不限于金属硫蛋白启动子、组成型腺病毒主要晚期启动子、地塞米松诱导型MMTV启动子、SV40启动子、MRP polIII启动子、组成型MPS V启动子、四环素诱导型CMV启动子(例如人立即早期CMV启动子)、组成型CMV启动子和本领域已知的启动子-增强子组合。
引入包含目的多核苷酸序列的表达载体的方法取决于细胞宿主的类型。例如，氯化钙转染通常用于原核细胞，而磷酸钙处理或电穿孔可用于其他细胞宿主。(大体上参见Sambrook等人，同上)。其他方法包括，例如电穿孔、磷酸钙处理、脂质体介导的转化、注射和显微注射、弹道法(ballistic method)、病毒体、免疫脂质体、聚阳离子核酸缀合物、裸DNA、人工病毒体、与疱疹病毒结构蛋白VP22的融合体(Elliot和O'Hare,Cell 88:223,1997)、试剂增强的DNA吸收和离体转导。为了长期、高产量地生产重组蛋白，通常需要稳定的表达。例如，可以使用本发明的表达载体制备稳定表达本发明的多特异性抗体或其片段或其结合结构域的细胞系，所述表达载体包含病毒复制起点或内源性表达元件和选择标记基因。引入载体后，可以使细胞在丰富的培养基中生长1-2天，然后将其转换为选择性培养基。选择标记的目的是赋予对选择的抗性，并且其存在允许成功表达引入序列的细胞在选择培养基中生长。有抗性的、稳定转染的细胞可以使用适合细胞类型的组织培养技术使增殖。因此，本发明提供了一种生产本发明的抗体或其抗原结合片段的方法，其中所述方法包括培养宿主细胞的步骤，所述宿主细胞包括编码本发明的抗体或其抗原结合片段的核酸或载体，由此表达本公开的所述抗体或其片段。
一方面，本发明涉及一种生产本发明的多特异性抗体或其结合结构域或其片段的方法，该方法包括培养宿主细胞的步骤，所述宿主细胞表达编码本发明的多特异性抗体或其结合结构域或其片段的核酸。特别地，本发明涉及一种生产本发明的多特异性抗体或其结合结构域或其片段的方法，所述方法包括(i)提供编码本发明的多特异性抗体或其结合结构域的一种核酸序列或两种核酸序列，或编码本发明的多特异性抗体或其结合结构域的一种载体或两种载体，表达所述一种核酸序列或多种核酸序列或所述一种载体或多种载体，并从表达系统中收集所述多特异性抗体或所述结合结构域，或者(ii)提供表达编码本发明多特异性抗体或其结合结构域的核酸的一种宿主细胞或多种宿主细胞，培养所述一种宿主细胞或多种宿主细胞；并从细胞培养物中收集所述多特异性抗体或所述结合结构域。
另一方面，本发明涉及一种药物组合物，其包括本发明的多特异性抗体和药学上可接受的载体。药学上可接受的载体增强或稳定组合物，或促进组合物的制备。药学上可接受的载体包括生理上相容的溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。
本发明的药物组合物可以通过本领域已知的多种方法来施用。施用途径和/或方式取决于所需结果。施用可以是静脉内、肌肉内、腹膜内或皮下施用，或在靶部位附近施用。药学上可接受的载体应适合于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、脊髓或表皮施用(例如通过注射或输注)。取决于施用途径，活性化合物(即本发明的多特异性抗体)可以用一种材料包被，以保护该化合物免受酸和可能使该化合物失活的其他自然条件的影响。
本发明的药物组合物可以根据本领域众所周知的和常规实践的方法制备。参见，例如，Remington:The Science和Practice of Pharmacy,Mack Publishing Co.,20thed.,2000；和Sustained和Controlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson,ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。药物组合物优选在GMP条件下制造。通常，在本发明的药物组合物中采用治疗有效剂量或有效剂量的本发明的多特异性抗体。通过本领域技术人员已知的常规方法将本发明的多特异性抗体配制成药学上可接受的剂型。调整剂量方案以提供最佳的所需反应(例如治疗性反应)。例如，可以施用单次推注，可以随时间施用数个分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。以剂量单位形式配制肠胃外组合物以易于施用和剂量均匀是特别有利的。本文所用的剂量单位形式是指适合作为待治疗受试者的单位剂量的物理上离散的单位；每个单位包含经计算可与所需的药物载体一起产生所需的治疗效果的预定量的活性化合物。
可以改变本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以便获得活性成分的量，所述活性成分的量可以针对特定患者、组合物和施用方式有效地实现所需治疗反应，而对病人无毒。所选择的剂量水平取决于多种药代动力学因素，包括所使用的本发明的特定组合物或其酯、盐或酰胺的活性、施用途径、施用时间、所使用的特定化合物的排泄速率、治疗的持续时间、与所使用的特定组合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料、所治疗的患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康状况和既往病史等因素。
本发明的多特异性抗体通常多次施用。单剂之间的间隔可以是每周、每月或每年。间隔也可以是不规则的，如通过测量患者中本发明的多特异性抗体的血液水平所指示的。或者，本发明的多特异性抗体可以作为缓释制剂施用，在这种情况下，需要较少的频繁施用。剂量和频率取决于抗体在患者中的半衰期。通常，人源化抗体的半衰期比嵌合抗体和非人抗体的半衰期更长。施用的剂量和频率可以根据治疗是预防性的还是治疗性的而变化。在预防性应用中，在很长一段时间内以相对不频繁的间隔施用相对较低的剂量。一些患者终生持续接受治疗。在治疗应用中，有时需要以相对较短的间隔施用相对较高的剂量，直到疾病的进展减少或终止，并且优选直到患者显示出疾病症状的部分或完全缓解。此后，可以对患者施用预防方案。
一方面，本发明涉及用作药物的本发明的多特异性抗体或本发明的药物组合物。在合适的实施方案中，本发明提供了多特异性抗体或药物组合物，其用于治疗有此需要的受试者的增生性疾病，特别是癌症。
另一方面，本发明提供了多特异性抗体或药物组合物，其用于生产用于治疗增生性疾病，特别是癌症的药物。
另一方面，本发明涉及多特异性抗体或药物组合物用于治疗有此需要的受试者的增生性疾病，特别是癌症中的用途。
另一方面，本发明涉及多特异性抗体或药物组合物在制备用于治疗有此需要的受试者的增生性疾病，特别是癌症的药物中的用途。
另一方面，本发明涉及一种治疗受试者的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的多特异性抗体。在合适的实施方案中，本发明涉及治疗受试者的增生性疾病，特别是癌症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的多特异性抗体。
术语“受试者”包括人类和非人类动物。非人类动物包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，例如非人类灵长类动物、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物和爬行动物。除非另有说明，否则术语“患者”或“受试者”在本文中可互换使用。
如本文所用，术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”、“治疗(treat)”、“治疗(treated)”等是指获得期望的药理和/或生理效果。就部分或完全治愈疾病和/或归因于该疾病的不良影响或延迟疾病进展而言，该作用可能是治疗性的。如本文所用，“治疗”涵盖对哺乳动物例如人类的疾病的任何治疗，并且包括：(a)抑制疾病，即阻止其发展；和(b)减轻疾病，即引起疾病消退。
术语“治疗有效量”或“有效量”是指当施用于哺乳动物或其他受试者以治疗疾病时足以引起对疾病的这种治疗的剂的量。“治疗有效量”将根据剂、疾病及其严重程度以及被治疗受试者的年龄、体重等而变化。
在一个实施方案中，增生性疾病是癌症。术语“癌症”是指以异常细胞的快速且不受控制的生长为特征的疾病。癌细胞可以局部扩散，也可以通过血液和淋巴系统扩散到身体的其他部位。术语“肿瘤”和“癌症”在本文可互换使用，例如，两个术语均涵盖实体和液体(例如扩散或循环的)肿瘤。如本文所用，术语“癌症”或“肿瘤”包括恶变前以及恶性癌症和肿瘤。本文使用的术语“癌症”是指广泛的肿瘤，包括所有实体和血液恶性肿瘤。此类肿瘤的例子包括但不限于：良性或特别是恶性肿瘤、实体瘤、脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳腺癌、腹部癌(例如胃肿瘤)、食道癌、卵巢癌、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌(例如非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、阴道癌、甲状腺癌、黑素瘤(例如不可切除的或转移性黑素瘤)、肾细胞癌、肉瘤、胶质母细胞瘤、多发性骨髓瘤或胃肠道癌尤其是结肠癌或结直肠腺瘤、头颈部肿瘤、子宫内膜癌、Cowden综合征、Lhermitte-Duclos病、Bannayan-Zonana综合征、前列腺增生、赘生物尤其是上皮特征的赘生物优选乳癌癌或鳞状细胞癌、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病(例如费城染色体阳性慢性骨髓性白血病)、急性淋巴细胞性白血病(例如费城染色体阳性急性淋巴细胞性白血病)、非霍奇金淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、白血病及其任意组合。在优选的实施方案中，癌症是选自间皮瘤、胰腺癌和卵巢癌的癌症。
本发明的多特异性抗体或本发明的组合物抑制实体瘤的生长，但也抑制液体瘤的生长。在另一个实施方案中，增生性疾病是实体瘤。术语“实体瘤”尤其是指乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、腹部癌(尤其是胃癌)、子宫颈癌、肺癌(例如非小细胞肺癌和小细胞肺癌)和头颈部肿瘤。此外，取决于肿瘤类型和所使用的特定组合，可以获得肿瘤体积的减小。本发明的多特异性抗体或本发明的组合物还适合于预防患有癌症的受试者中的肿瘤的转移扩散和微转移瘤(micro metastases)的生长或发展。
序列列表(根据AHo编号方案而指定的突变，根据Numab CDR定义而定义的CDR)
表1.本发明的低亲和力MSLN结合结构域的实例。
Figure BDA0004113623330000571
Figure BDA0004113623330000581
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表2.参考MSLN结合结构域的实例。
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Figure BDA0004113623330000691
表3.本发明的CD3结合结构域的实例。
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Figure BDA0004113623330000701
Figure BDA0004113623330000711
表4.本发明的人血清白蛋白(hSA)结合结构域的实例。
Figure BDA0004113623330000712
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表5.本发明的多特异性分子的实例。
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Figure BDA0004113623330000961
表6.参考多特异性分子的实例。
Figure BDA0004113623330000962
Figure BDA0004113623330000971
表7.与本发明有关的其他序列。
Figure BDA0004113623330000972
Figure BDA0004113623330000981
Figure BDA0004113623330000991
在本申请的全文中，如果说明书的文本(例如，表1至表7)与序列表之间存在差异，则以说明书的文本为准。
应当理解，为清楚起见在单独的实施方案的背景下描述的本发明的某些特征也可以在单个实施方式中组合提供。相反，为简洁起见在单个实施方案的背景下描述的本发明的各种特征也可以单独地或以任何合适的子组合的形式提供。与本发明有关的实施方案的所有组合都被本发明特别是涵盖，并且在本文中公开，就好像每个组合都被单独地明确地公开了一样。另外，各种实施方案及其元素的所有子组合也被本发明特别是涵盖，并且在本文中公开，就好像每个这样的子组合都在本文中被单独地明确地公开了一样。
本发明不限于本文所述的具体实施方案的范围。实际上，除了本文描述的那些之外，根据前面的描述，本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见。这些修改旨在落入所附权利要求的范围内。
在各自的专利法允许的范围内，本文引用的所有专利、申请、出版物、测试方法、文献和其他材料均通过引用的方式并入本文。
下列实施例举例说明了上述发明，但并不意图以任何方式限制本发明的范围。相关领域技术人员已知的其他测试模型也可以确定所要求保护的发明的有益效果。
实施例
实施例1：抗MSLN分子的生成和药效学表征：
第一步，应鉴定对MSLN具有中至低结合亲和力的抗MSLN抗体片段。抗MSLN抗体片段应适用于多特异性抗体形式，特别是MATCH3和MATCH4抗体形式。
本发明的抗MSLN结合结构域的鉴定、选择和生产
本发明的人源化scFv抗MSLN结合结构域的鉴定、选择、人源化和生产与专利申请PCT/EP2018/064630中描述的scFv抗CD3结合结构域类似地进行，该专利申请通过援引并入本文。
从具有所需性质，特别是所需亲和力的数种鉴定的单克隆抗体中，按照以下程序生产scFv分子。
人源化与表达：
通过将CDR植入λ-封端的Vk1/VH3 Fv支架上并任选植入特定的兔框架残基，将兔抗体人源化。每个scFv都设计为N-端-VL-肽接头-VH-C-端方向(肽接头：(G4S)4)。
从头合成了重组氨基酸序列，并使用CHOgro瞬时转染试剂盒(Mirus)在CHO-S细胞中表达了scFv构建体。在37℃表达5-7天(细胞活力<70％)后，通过离心收获培养物，并通过Protein L或A亲和层析从澄清的培养上清液中纯化蛋白质，如果需要，随后使用SuperdexS200柱通过尺寸排阻色谱法(SEC)进行精制步骤。
质量控制：
为控制生产材料的质量，使用了标准分析方法，如SE-HPLC、UV280和SDS-PAGE。
SE-HPLC
SE-HPLC分析将样本与运行缓冲液(ShodexTM KW402.5–4F:250mM NaCl,50mMNaOAc(Cat.#:A 1045),pH 6.0；ShodexTM KW403–4F:35mM NaH2PO4(Cat.#:A3905),15mMNa2HPO4(Cat.#:A1372),300mM NaCl,pH 6.0)一起，以0.35mL/min的流速，通过ShodexTM(Showa Denko,Cat.#:554–1740)KW402.5–4F色谱柱(对于scFv分析)或ShodexTM(ShowaDenko,Cat.#:554–1741)KW403–4F色谱柱(MATCH蛋白质分析)。通过λ＝280nm处的吸光度检测洗脱蛋白。
SDS-PAGE
通过SDS-PAGE分析，将变性蛋白加载到MiniPROTEAN TGXTM(Bio-RadLaboratories,Cat.#:4569036)预制凝胶上，并用考马斯亮蓝溶液对电泳后的蛋白进行染色，从而评估蛋白的特性和降解。分子量标准：BioRad PrecisionTM Plus(Cat.#:161-03/04)。
表8汇总了所生产的单链抗体分子的生产数据。
抗间皮素scFv抗体PRO1783、PRO1925、PRO2306、PRO2309(低亲和力)和PRO1922的药效学表征
评估了人源化抗间皮素scFv抗体PRO1783的主要药效学特性，包括在SPR中测定与重组人和食蟹猴MSLN的结合动力学和亲和力，在cELISA中评估与人和食蟹猴MSLN表达细胞系的质膜结合，以及在cELISA中评估对MSLN/MUC16的阻断作用。此外，还评估了人源化抗MSLN scFv PRO1922、PRO1925、PRO2306和PRO2309的主要药效学特性，包括在SPR中测定与重组人MSLN的结合动力学和亲和力，在cELISA中评估与人MSLN表达细胞系的质膜结合，以及在cELISA中评估对MSLN/MUC16的阻断作用(PRO1922和PRO1925)。表9至13汇总了结果。
SPR测定对人和食蟹猴MSLN的亲和力
在T200设备(Biacore,GE Healthcare)上通过SPR分析，测定了scFv PRO1783(源自单克隆抗体54-01-G02)对重组人和食蟹猴MSLN的亲和力。在本实验中，使用标准胺偶联程序将重组人和食蟹猴MSLN(分别购自Peprotech和Sino Biological)固定在CM5传感器芯片的不同流动池上。然后，将scFv抗体PRO1783以90至0.12nM的浓度注射到流动池中5min，并使蛋白质解离12min。解离(kd)和缔合(ka)速率常数以及平衡解离常数(KD)由BiacoreT200评估软件(GE Healthcare)采用一对一Langmuir结合模型计算得出。如上所述，通过SPR评估了scFv PRO1922和PRO1925的亲和力，但使用的浓度范围为15-0.12nM。如上所述，通过SPR评估了scFv PRO2306和PRO2309的亲和力，但使用的浓度范围为90-0.35nM。
如表9所示，在SPR中，PRO1783以较低的纳摩尔范围(KD＝2.91nM)的亲和力与重组人MSLN结合。在SPR中，PRO1922、PRO1925、PRO2306和PRO2309以较高的亚纳摩尔范围的亲和力与重组人MSLN结合。SPR测定也显示了PRO1783与重组食蟹猴MSLN的结合，但亲和力降低(KD＝30.06nM，表10)。
通过cELISA评估与MSLN表达细胞系的结合
与高水平表达人MSLN的细胞(H226细胞系)的结合
在H226癌细胞上，通过cELISA评估了抗MSLN scFv抗体PRO1783与质膜MSLN的结合。简言之，将20000个表达MSLN的NCI-H226细胞或HEK293T(MSLN阴性)分布到平底组织培养96孔板中。第二天，在溢出模式下用每孔450μl洗涤缓冲液(PBS，0.2％BSA)洗涤板3次，加入50μl的PRO1783和抗MSLN参考抗体阿麦妥单抗的系列稀释溶液的各点，并将板在室温(RT)下在温和搅拌下孵育1.5h。用450μl洗涤缓冲液洗涤3次后，向每个孔中加入50μl HRP偶联的蛋白L或HRP偶联的抗人IgG抗体。在室温下于章动混合器上孵育1h后，用每孔450μl的洗涤缓冲液将板洗涤3次，然后加入50μl TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺，KPL)。显影10min后，通过向每个孔中加入50μl的1M HCl终止酶促反应，并以690nm作为参考波长在450nm读取板。
表11显示了评估PRO1783与表达高水平MSLN的H226细胞系的质膜结合的实验结果。发现PRO1783与H226细胞系结合的EC50浓度为1.44nM，与参考抗体阿麦妥单抗获得的值相比大约逊色6倍(比较相对EC50值，表11)。发现PRO1925、PRO2306和PRO2309与H226细胞结合的EC50值与PRO1783的值大致相同。发现PRO1922与H226细胞结合的EC50值与阿麦妥单抗的值大致相同。当在cELISA中检测间皮素阴性HEK293T细胞时，未检测到阿麦妥单抗、PRO1783、PRO1922、PRO1925、PRO2306和PRO2309的结合(数据未显示)。使用H226细胞系的cELISA中PRO1783、PRO1922、PRO1925、PRO2306、PRO2309和阿麦妥单抗的浓度-响应曲线示于图1。
与表达食蟹猴MSLN的细胞(CHO重组细胞系)的结合
使用表达食蟹猴MSLN的重组CHO细胞系，在cELISA中检测了抗MSLN scFv抗体PRO1783与食蟹猴MSLN的交叉反应性。将20000个表达食蟹猴MSLN的CHO细胞或CHO-K1细胞(食蟹猴MSLN阴性)分布到平底组织培养96孔板中。第二天，按照使用H226细胞系的cELISA方案所述，洗涤平板并加入PRO1783和抗MSLN参考抗体阿麦妥单抗的系列稀释液。在RT温和搅拌下孵育1.5h后，再次洗涤平板，并加入HRP偶联的蛋白L或HRP偶联的抗人IgG抗体，分别检测PRO1783和阿麦妥单抗的结合。在室温下用章动混合器孵育1小时后，洗涤平板，并向每个孔中加入TMB。显影10min后，通过向每个孔中加入50μl的1M HCl终止酶促反应，并以690nm作为参考波长在450nm读取板。
使用表达食蟹猴MSLN的CHO细胞系进行cELISA的结果见表12。发现PRO1783与质膜食蟹猴MSLN结合的EC50浓度为12nM，其明显逊色于参考抗体阿麦妥单抗(相对EC50＝0.03)。另一方面，当与对质膜人MSLN的结合相比时，PRO1783的半数最大结合浓度明显增加，这与SPR分析的结果一致，表明PRO1783与重组食蟹猴MSLN蛋白的亲和力降低。使用表达食蟹猴MSLN的CHO细胞系的cELISA中PRO1783和阿麦妥单抗的浓度-反应曲线示于图2。当在cELISA中检测CHO-K1野生型细胞时，未检测到阿麦妥单抗和PRO1783的结合(数据未显示)。
竞争ELISA评估MSLN/MUC16相互作用的中和
在竞争ELISA中评估了抗MSLN scFv抗体PRO1783、PRO1922和PRO1925阻断MSLN/MUC16相互作用的效力。加入50μl含1μg/ml MUC16的PBS，在4℃下过夜，对ELISA板进行包被。第二天，在溢流模式下用每孔450μl洗涤缓冲液洗涤板3次，向每个孔中加入300μl封闭缓冲液，在室温下在章动混合器上1h。然后，在封闭缓冲液中稀释生物素化的MSLN，使最终浓度达到1ng/ml。接下来，在含生物素化MSLN的阻断缓冲液中滴定PRO1783、PRO1922、PRO1925和阿麦妥单抗，并在室温下在章动混合器上孵育1h。以溢流模式使用每孔450μl洗涤缓冲液洗涤ELISA板3次，并向ELISA板中加入50μl的PRO1783、PRO1922、PRO1925和阿麦妥单抗的滴定曲线的各浓度，一式两份。在室温下，在温和搅拌下将平板孵育1.5h。每孔用450μl洗涤缓冲液洗涤3次后，向ELISA板的每孔中加入50μl的10ng/ml链霉亲和素-polyHRP40。在RT下孵育1h后，用450μl洗涤缓冲液将平板洗涤3次，并在加入50μl TMB后显影5至10分钟。最后，通过加入50μl的1M HCl终止酶促反应，并以690nm作为参考波长在450nm读取板。
竞争ELISA的结果示于表13。发现PRO1783阻断人MSLN/MUC16相互作用的IC50浓度为0.5nM，逊色于参照抗体阿麦妥单抗，如IC50相对值所示。因此，在中和人MSLN/MUC16相互作用方面，PRO1783的效力不如参考抗体阿麦妥单抗。PRO1922和PRO1925可阻断人MSLN/MUC16相互作用，IC50值显著低于PRO1783。竞争ELISA中PRO1783、PRO1922、PRO1925和阿麦妥单抗的浓度-响应曲线示于图3。
参考抗MSLN分子PRO1795的生产和药效学表征：
使用对MSLN具有高结合亲和力的抗MSLN结合结构域PRO1795作为参考结合结构域。
以类似于本发明的抗MSLN结合结构域和本文所述的抗CD3分子的方式，进行人源化参考抗MSLN结合结构域PRO1795的鉴定、选择、人源化和生产。
此外，评估了PRO1795的主要药效学特性，包括在SPR中测定与重组人和食蟹猴MSLN的结合动力学和亲和力，在cELISA中评估与人和食蟹猴MSLN表达细胞系的质膜结合，以及在cELISA中评估对MSLN/MUC16的阻断作用。表9至13汇总了结果。
表8.scFv的制备。
Figure BDA0004113623330001051
*亲和捕获后的纯度；没有进行SE-HPLC
SEC:尺寸排阻色谱法
NA:不适用
表9：SPR中抗MSLN scFv PRO1783、PRO1922、PRO1925、PRO2306、PRO2309和参照抗MSLN scFv PRO1795与人MSLN的结合动力学和亲和力。
Figure BDA0004113623330001061
表10：SPR中抗MSLN scFv PRO1783和参照抗MSLN scFv PRO1795与食蟹猴MSLN的结合动力学和亲和力。
Figure BDA0004113623330001071
表11：抗MSLN scFv PRO1783、PRO1922、PRO1925、PRO2306、PRO2309和参照抗MSLNscFv PRO1795与表达高水平人MSLN的H226细胞系的质膜结合。
Figure BDA0004113623330001072
Figure BDA0004113623330001081
表12：抗MSLN scFv PRO1783和参照抗MSLN scFv PRO1795与表达食蟹猴MSLN的CHO细胞系的质膜结合。
Figure BDA0004113623330001082
Figure BDA0004113623330001091
表13：在竞争ELISA中通过抗MSLN scFv PRO1783、PRO1922、PRO1925和参照抗MSLNscFv PRO1795阻断人MSLN/MUC16相互作用。
Figure BDA0004113623330001092
抗MSLN兔IgG克隆54-01-G02(低亲和力抗MSLN scFv结构域PRO1783的前体克隆) 的表位定位：
通过cELISA评估与人/小鼠MLSN变体的结合
为了精确确定所选抗MSLN兔IgG的结合区域，通过cELISA评估了与HEK293T细胞的结合水平(图4)，该HEK293T细胞瞬时转染了MSLN胞外结构域(ECD)的七种人/小鼠变体(V5标记)。板用每孔25000个细胞包被平底聚D-赖氨酸处理化96孔板。第二天，用相应的构建体转染细胞，并在37℃、5％CO2下孵育。24h后，用450μl洗涤缓冲液(PBS，0.2％BSA)洗涤细胞，加入样本(250ng/ml rIgG或抗V5标签抗体系列稀释)，在室温(RT)下在温和搅拌下1.5h。用450μl洗涤缓冲液洗涤3次后，向每个孔中加入50μl的HRP偶联的山羊和兔IgG抗体。在室温下于章动混合器上孵育1h后，用每孔450μl的洗涤缓冲液将板洗涤3次，然后加入50μl TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺，KPL,Cat.No.53-00-00)。显影10min后，通过向每个孔中加入50μl的1M HCl终止酶促反应，并以690nm作为参考波长在450nm读取板。计算相对于抗V5抗体结合的结合水平。与参考抗体(抗V5标签)相比，rIgG与特定变体的结合水平明显降低，则表明rIgG表位位于被相应小鼠序列取代的人MSLN片段内。
在cELISA中检测抗MSLN兔IgG克隆54-01-G02(低亲和力抗MSLN scFv结构域PRO1783的前体克隆)时，观察到与嵌合人/小鼠变体V1(人MSLN ECD的最远端区域)的结合降低(相对于V5参考抗体的结合降低至65％，表14)，而54-01-G02与所有其他变体的结合超过90％。这些数据表明，人MSLN的V1区域代表了54-01-G02结合的重要区域。然而，由于即使在不存在V1区域的情况下，54-01-G02仍可与人MSLN实质性结合，因此人MSLN ECD的其他区域也参与54-01-G02的结合(表14)。关于兔IgG 5422-H03(高亲和力抗MSLN scFv结构域PRO1795的前体克隆)，在使用人MSLN ECD的嵌合人/小鼠变体的cELISA中未能鉴定出结合区(数据未显示)。
表14：兔IgG克隆54-01-G02与h/m MSLN变体转染的HEK293T细胞结合的概述。
Figure BDA0004113623330001101
实施例2：抗CD3分子的生产和检测：
人源化抗CD3结合结构域28-21-D09 sc04的鉴定、选择、人源化以及生产和表征如专利申请PCT/EP2018/064630中所述进行，该专利申请通过援引并入本文。
实施例3：抗hSA分子的生产和检测：
人源化抗hSA结合结构域19-01-H04-sc03和23-13-A01-sc03的鉴定、选择、人源化以及生产和表征如专利申请EP19206959.9中所述进行，该专利申请通过援引并入本文。人源化抗hSA结合结构域19-04-A10-sc02(PRO2155)的鉴定、选择、人源化以及生产和表征如专利申请EP19206959.9中所述进行。下文简要概述了抗hSA scFv PRO2155的表征。
抗hSAscFv 19-04-A10-sc02(PRO2155)的表征
结合亲和力和物种交叉反应性
在pH 7.4和pH 5.5条件下，在T200设备(Biacore，Cytiva)上通过SPR分析测定了选定结构域19-04-A10-sc02与人血清白蛋白(hSA,Sigma-Aldrich A3782)的结合动力学(包括亲和力)。将hSA分子共价固定在羧甲基化葡聚糖表面(CM5传感器芯片,Biacore,Cytiva)，并注射每种scFv分子的滴定系列作为分析物。在每个分析物注射循环后，将传感器芯片上的每个流动通道再生(甘氨酸pH 2.0)，并注射新浓度的scFv分子。使用多循环动力学分析法，用11种浓度(0.044至45nM(1:2)，在相关运行缓冲液(PBS 0.05％Tween-20，或PBS 0.05％Tween-20，pH 5.5)中稀释)，测定了与hSA的结合动力学。使用一对一Langmuir结合模型，用Biacore分析软件(Biacore Evaluation software Version 3.2,Cytiva)计算表观解离常数(kd)和缔合速率常数(ka)以及表观解离平衡常数(KD)，根据相对Chi2监测拟合质量。结合水平计算为达到的最大稳定性结合，归一化为理论Rmax。
如上所述，还测定了选定scFv对食蟹猴血清白蛋白(cSA,Molecular InnovationsCYSA)和小鼠血清白蛋白(mSA,Sigma-Aldrich A3559)的结合动力学，不同之处在于使用cSA或mSA代替hSA。表15汇总了在pH 5.5和pH 7.4下对hSA、mSA和cSA的结合动力学。
表15：血清白蛋白结合性scFv分子PRO2155(结构域19-04-A10-sc02)对hSA、cSA和mSA的亲和力测量总结。
Figure BDA0004113623330001121
*双相结合通过1:1的整体校正进行校正，导致最大反应较低
生物物理表征
HSA-结构域19-04-A10-sc02(PRO2155)和19-04-A10-sc06(sc02结构域含VL-VH二硫化物，VL-T141C/VH-G51C，AHo编号；PRO2317)进行了为期四周的稳定性研究，其中将scFv配制在10mg/ml的水性缓冲液(50mM NaCiP,150mM NaCl,pH 6.4)中，并在<-80℃、4℃和40℃温度下储存四周。通过研究过程中不同时间点的SE-HPLC峰面积的整合，评估了制剂中单体和低聚物的组分。表16总结了单体含量(％)和相对于d0的％单体损失。在整个研究过程中，通过280nm UV-Vis测量监测了蛋白浓度的变化。由于未观察到任何样本相对于d0有明显的蛋白质含量损失，因此未显示数据。通过nDSF(NanoTemper)分析了热稳定性，测定解折叠开始时间(Tonset)和解折叠中点(Tm)。DSF结果示于表16。
表16：19-04-A10-sc02和19-04-A10-sc06抗hSA结构域的四周稳定性研究。
Figure BDA0004113623330001122
Figure BDA0004113623330001131
NA:未测量
实施例4：本发明的多特异性构建体的生产和药效动力学表征(biMSLN低亲和力xCD3 x  hSA构建体)：
分子结构
MATCH是由Numab发明的一种形式，它只包含由不同接头连接的可变结构域，只允许匹配结构域对的特定配对(Egan TJ等人,Novel multi-specific heterodimericantibody format allowing modular assembly of variable domain fragments.MABS 9(2017)68-84)。这种形式特别适合于方便地筛选抗原结合结构域的不同组合，以获得最佳的协同性。MATCH可在哺乳动物细胞中重组表达。对于纯化，可以使用常规的亲和层析步骤。
MATCH分子的结构如图5所示。MATCH4格式要求二聚体亚单位由2个相互分开的可变结构域对的核心组成，每个各自的亚单位具有串联定位的2个VL结构域或2个VH结构域，从而驱动两条蛋白质链的异二聚化。各自的MATCH4链上形成二聚体的串联可变结构域以与其对应链反向平行的N-端-C-端方向组织。这两条链在哺乳动物细胞中共同表达为具有完全功能的四特异性分子。如图5所示，在可变结构域之间使用传统Gly-Ser接头将它们连接。通常，MATCH分子中使用不同的接头长度(参见表5中MATCH分子的序列列表)。此外，如图5所示，反向平行MATCH4形式适合于在核心结构域之一中引入二硫键。相应的MATCH3格式(未显示)以类似的方式构建和组织，除了在两个相互分开的可变结构域对的核心上只连接一个scFv结合结构域，而不是像MATCH4那样有两个scFv结合结构域。
类似于MATCH4和MATCH3格式，scMATCH3格式仅由通过不同接头连接的可变结构域组成，如图5(右)所示。然而，在这种形式中，相互分开的可变结构域位于单个肽链(sc)上，其组装成全功能三特异性分子，如图5(右)所示。如同MATCH4和MATCH3格式，scMATCH3分子也可以在哺乳动物细胞中重组表达，并且对于它们的纯化，可以使用常规的亲和层析步骤。
结合两至三种用λ-封端的Fv支架人源化的兔抗体、根据本发明的反向平行四特异性MATCH4分子以及仅具有一种高亲和力MSLN-BD的参考三特异性scMATCH3分子，如表17中所总结的那样进行设计。
制造
使用CHOgro瞬时转染试剂盒(Mirus)在CHO-S细胞中表达MATCH构建体。在37℃表达5-7天(细胞活力<70％)后，通过离心收获培养物，并通过Protein L或A亲和层析从澄清的培养上清液中纯化蛋白质，如果需要，随后使用Superdex S200柱，在含300mM蔗糖的50mM磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液(pH 6.5)中，通过尺寸排阻色谱法(SEC)进行精制步骤。通过SE-HPLC分析评估SEC组分的单体含量，并混合单体含量>95％的组分。为控制生产材料的质量，使用了标准分析方法，如SE-HPLC、UV280和SDS-PAGE。
表18汇总了所生产的分子的生产细节。
多特异性抗体的药效动力学表征
以下部分描述了示例性多特异性分子的特性，这些分子对于人MSLN病毒是单价的或二价的，对于人CD3ε是单价的，且对于人血清白蛋白(hSA)是单价的。在SPR中检测了二价抗MSLN抗体PRO2000、PRO2100、PRO2562、PRO2566、PRO2567和PRO2660(即biMSLNxCD3xhSA)和一价抗MSLN抗体PRO1872(即MSLN低KDxCD3xhSA)，以评估它们在SPR中与重组人MSLN和人CD3ε的结合动力学和亲和力。
SRP检测对人MSLN的亲和力
通过在T200设备(Biacore,GE Healthcare)上进行SPR分析，测定多特异性抗MSLN抗体对重组人MSLN的亲和力。在本实验中，如上所述，将重组人MSLN(购自Peprotech)固定在CM5传感器芯片上。如上所述，将多特异性抗体注射到流动池中，并计算结合动力学以及平衡解离常数(KD)。
在无亲合力(avidity)的情况下，通过在T200设备上进行SPR分析，测定了多特异性抗MSLN抗体对重组人MSLN的亲和力(Biacore,GE Healthcare)。在本实验中，如上所述，将专有的抗骨架兔IgG(PRO2679)固定在CM5传感器芯片上。通过注射20秒在各自的流动池中捕获多特异性抗体。随后，如上所述，将重组人MSLN(购自Peprotech)注射到流动池中，并计算结合动力学及平衡解离常数(KD)。
如表19所示，在SPR中，单价抗MSLN抗体PRO1872与重组人MSLN结合，结合亲和力在亚纳摩尔范围内(KD＝0.187nM)。对于相应的抗MSLN scFv抗体PRO1795，发现了相似的与人MSLN结合的亲和力(KD＝0.321nM，结构域54-22-H03-sc01，数据未显示)。二价抗MSLN抗体PRO2000在较低纳摩尔范围显示出与重组人MSLN的结合亲和力(KD＝1.06nM)，优于相应抗MSLN scFv抗体PRO1783所发现的结合亲和力(KD＝2.91nM，结构域54-01-G02-sc01，表9)。在本试验中，PRO2562、PRO2566和PRO2567与人MSLN的亲和力非常相似，KD值在1.39至1.52nM的低nM范围内。
SPR检测对人CD3ε的亲和力
通过在T200设备(Biacore,GE Healthcare)上进行SPR分析，测定多特异性抗MSLN抗体对重组人CD3ε的亲和力。在本实验中，通过胺偶联的方式将人重组CD3ε蛋白(SinoBiological)固定在CM5传感器芯片(GE healthcare)上。以30μl/min的流速向流动池中注入抗MSLN多特异性抗体在HBS-T+缓冲液(10mM HEPES,150mM NaCl,和0.05％Tween 20,pH7.4)中的系列稀释液5min。使抗体与CM5芯片上的CD3ε解离12min。每次注射循环后，通过注射一次10mM甘氨酸HCl(pH 2)使表面再生。使用一对一Langmuir结合模型，用Biacore分析软件(BIAevaluation,GE Healthcare)计算表观解离(kd)和缔合(ka)速率常数和表观解离平衡常数(KD)，并基于Chi2和U-值监测拟合的质量，其中Chi2是曲线拟合质量的量度。由于使用一对一Langmuir结合模型的拟合显示曲线拟合质量次优，因此还使用双态反应模型计算KD。该模型描述了分析物与固定配体的1:1结合，随后是使复合物稳定的构象变化。
抗MSLN抗体PRO1872和PRO2000都是CD3ε的单价抗体，并且具有相同的抗CD3结构域(28-21-D09-sc04)，如表20所示，在SPR中它们结合重组人CD3ε的结合亲和力相似，在纳摩尔范围内(PRO1872,KD＝12.1nM；PRO2000,KD＝20.0nM)。PRO2562、PRO2566、PRO2567和PRO2660对重组人CD3ε的亲和力稍好，KD值在2.97至6.45nM的较低nM范围内。
SPR检测pH5.5时对人血清白蛋白的亲和力
通过在T200设备(Biacore,GE Healthcare)上进行SPR，评估对人血清白蛋白(hSA,Sigma Aldrich,cat.A3782)的结合动力学。通过胺偶联将HSA固定在传感器芯片(CM5传感器芯片，GE healthcare)上。向流动池中注射0.7至180nM范围的抗MSLN多特异性抗体在运行缓冲液(PBS-Tween20，pH 5.5)中稀释的系列稀释液5min。解离时间设为12min。如上所述，使用一对一的Langmuir结合模型计算表观解离常数(kd)和缔合速率常数(ka)以及表观解离平衡常数(KD)。
如表21所示，在SPR中，抗MSLN抗体PRO1872(抗hSA结构域：23-13-A01-sc02)与重组hSA结合，结合亲和力在亚纳摩尔范围内(KD＝0.175nM)。PRO2562、PRO2566、PRO2567和PRO2660对重组hSA的亲和力略低，KD值在5.71至8.80nM的较低nM范围内。
表17：MATCH4分子和参考scMATCH3分子的结构。
Figure BDA0004113623330001161
Figure BDA0004113623330001171
Figure BDA0004113623330001181
Figure BDA0004113623330001191
*AHo编号
表18：MATCH4分子的制备
Figure BDA0004113623330001201
Figure BDA0004113623330001211
SEC:尺寸排阻色谱法
NA:不适用
表19：SPR中示例性抗MSLN多特异性抗体与人MSLN的结合动力学和亲和力。
Figure BDA0004113623330001212
 
Figure BDA0004113623330001221
表20：SPR中示例性抗MSLN多特异性抗体与人CD3ε的结合动力学和亲和力。
Figure BDA0004113623330001222
*ka和kd指是来自双态拟合模型的ka1和kd1，为了清楚起见，省略ka2和kd2，以及KD1和KD2
表21：SPR中pH 5.5时示例性抗MSLN多特异性抗体对hSA的结合动力学和亲和力。
Figure BDA0004113623330001231
示例性MATCH4分子的生物物理表征
通过nDSF检测储存稳定性和熔融温度
对MATCH4分子进行了为期28天的稳定性研究，其中将分子以1mg/mL配制在水性缓冲液(50mM柠檬酸磷酸盐缓冲液，含300mM蔗糖，pH 6.5)中，并在-80℃、4℃和40℃储存28天。通过研究过程中不同时间点的SE-HPLC峰面积的整合，评估了制剂中单体和低聚物的组分。表22总结了单体含量(％)和相对于第0天的％单体损失。在整个研究过程中，通过280nmUV-Vis测量监测了蛋白浓度的变化，并示于表23中。通过nDSF(NanoTemper)分析了热稳定性，测定解折叠开始时间(Tonset)、解折叠中点(Tm)和散射开始温度。Tm结果(包括两次/三次重复测量的标准偏差(SD))见表24。
在28天培养后，所有四种MATCH4分子均表现出良好的稳定性特征，仅表现出轻微的单体含量损失或蛋白质含量损失。在-80℃和4℃的温度以及重复冻融(5x)后(在SE-HPLC/UV测量前对第28天/-80℃样本进行)，单体含量没有明显变化。
表22：在1mg/mL时MATCH4分子的储存稳定性评估(28天)，通过SE-HPLC测量单体含量变化。
Figure BDA0004113623330001241
Figure BDA0004113623330001251
*测量前，对在-80℃下储存了28天的样品，进行了5次反复的冷冻/解冻循环，40℃样品中的低分子量物质未被整合，因为峰无法解卷积(肩)
表23：在1mg/mL时MATCH4分子的储存稳定性评估(28天)，通过UV(280nm)测量蛋白质含量变化。
Figure BDA0004113623330001252
Figure BDA0004113623330001261
表24：MATCH4分子的nDSF。
Figure BDA0004113623330001262
实施例5：靶细胞系细胞表面间皮素密度的测定：
介绍
一个目的是比较多特异性分子(在间皮素结合方面是单价或二价的)靶向细胞表面间皮素水平不同的细胞系的能力。因此，在不同细胞系上定量了质膜间皮素的表达。
方法
使用Quantum Simply Cellular anti-human IgG试剂盒(Bangs Laboratories)通过FC(流式细胞术)评估了表达不同水平间皮素的癌细胞系和健康间皮组织上的抗体结合能力(ABC)。简言之，按照制造商的说明，使用Lightning-Link Rapid conjugation试剂盒(Expedeon)将1mg抗间皮素抗体(7D9.3,Genentech)与Alexa Fluor 488偶联。受体密度值报告为抗体结合能力(ABC)。ABC值源自使用Quantum Simply Cellular beads anti-human IgG(Bangs Laboratories,Inc.)生成的标准曲线。这些磁珠由四种微球群组成，每种微球群与每个磁珠上不同数量的抗人IgG分子缀合。作为第一步，在结合位点数量最多的磁珠群上检测浓度递增的Alexa Fluor 488标记的抗间皮素抗体，以测定饱和抗体浓度，在定量过程中使用该浓度，如制造商方案所述。然后，按照制造商的说明，用相应的饱和浓度的Alexa Fluor 488标记的抗间皮素抗体对磁珠和测试样本进行染色，并在与测试样本相同的日期和相同的光电倍增管设置下运行。为了计算ABC值，使用NovoExpress软件(ACEA生物科学公司)分析了四种Quantum Simply Cellular磁珠群的几何平均值。使用基于QuickCal v.2.3Excel电子表格的分析模板(Bangs Laboratories,Inc)通过线性回归创建标准曲线。R平方值通常≥0.99。从标准曲线内插(interpolate)计算Alexa Fluor 488-anti-mesothelin抗体标记的样品的ABC值。
结果
使用Quantum Simply Cellular beads测定了三种癌细胞系(H226,H292 andHPAC)和一种源自健康间皮组织的细胞系(MeT-5A；(
Figure BDA0004113623330001271
CRL-9444TM)；供应商：ATCC)的质膜上的间皮素密度。表25所示为获得的数据。H226细胞表现出最高的表达水平，其次是HPAC细胞系，其表达低4倍。H292和MeT-5A细胞系上的间皮素表达水平相当，比在H226细胞的细胞表面上观察到的表达低8至10倍。
表25：癌细胞上的间皮素密度表示为每个细胞系的抗体结合能力(ABC)的平均值，并通过流式细胞术进行定量。
Figure BDA0004113623330001281
实施例6：细胞毒性测定(T细胞驱动的靶细胞耗竭)：
介绍
为了评估与MSLN低KDxCD3xhSA相比，biMSLN高KDxCD3xhSA选择性指导T细胞杀伤间皮素表达细胞的能力，在人PBMC存在的情况下，使用细胞表面表达不同间皮素密度的细胞系进行了细胞毒性试验。此外，本试验还评估了可溶性间皮素(sMSLN)的存在对分子效力的影响。MSLN低KDxCD3xhSA三特异性分子同时结合癌细胞上的间皮素和CD3ε，导致T细胞上的CD3ε交联，并激活信号级联，触发T细胞激活(CD69上调，细胞因子分泌)和细胞毒性颗粒释放，最终导致靶细胞杀伤。
方法
血细胞分馏
根据制造商的说明书，使用淋巴细胞分离培养基Lymphoprep(StemcellTechnologies)从健康志愿者的新鲜血液中分离人外周血单个核细胞(PBMC)。在这组实验中，使用了来自三个不同供体(供体#1、供体#2和供体#3)的血液。不同供体的血液性质有很大差异，尤其是其中所含CD8+T细胞的数量和反应性。因此，这些血液来源的CD8+T细胞样本的杀伤效力在很大范围内有所不同。如本文公开的实施例中所观察到的，在相同靶细胞的存在下，相同测试分子具有不同的杀伤效力和CD8+T细胞活化效力。
简而言之，用人PBMC分离缓冲液(PBS,2％FCS,2mM EDTA)以1:2稀释血液，并加到含有推荐量的Lymphoprep培养基的Leucosep管中。将LeucoSep管在室温下以800g不中断地离心30分钟。然后，收集含有PBMC的细胞层并用人PBMC分离缓冲液洗涤两次，并在室温下使用红细胞裂解缓冲液裂解红细胞5分钟。然后将分离的人细胞用各自的分离缓冲液洗涤一次，并用测定培养基(RPMI-1640，10％FCS)洗涤一次。除去血小板后，将分离的PBMC以每毫升3x106个活细胞的密度重新悬浮在测定培养基中。
基于流式细胞术的体外细胞毒性试验(FC试验)和CD8+T细胞活化：
使用三种癌细胞系：H226细胞(高间皮素密度)、HPAC细胞(中等间皮素密度)和H292细胞(低间皮素密度)，以及源自健康间皮组织的MeT-5A细胞系(低间皮素密度)作为靶细胞。将预先用PKH67标记并在75μl测定培养基(RPMI-1640，10％FCS)中稀释的5000个活靶细胞添加到96孔板中。适用时，使用含有50、100或500ng/ml可溶性间皮素的检测缓冲液。将25μl在测定培养基中稀释的6倍浓缩的测试蛋白添加到合适的孔中。将150000个稀释在50μl测定培养基中的存活效应细胞(PBMC)加入到每个孔中(E:T比为30:1)，并将板在室温下在nutating混合器上混合板，然后在37℃、5％CO2下孵育。40h后，将细胞用胰蛋白酶消化，重悬于染色缓冲液(PBS，2％BCS，2mM EDTA)中，并转移至非结合板中。
对细胞进行不同标记物如CD69、CD8、CD4、CD11c和Annexin-V的染色。为了进行分析，重点是凋亡和死亡的靶细胞以及活化的CD8+T细胞。通过绿色荧光(PKH67)鉴定靶细胞，并通过Annexin-V APC分析其活力。通过检测其表面的CD8(抗CD8 PerCP-Cy5.5)来鉴定效应细胞(CD8+细胞)。最后，通过定量CD69表达(抗CD69 PE)来检测CD8+T细胞的活化。使用CD4来区分CD8+和CD4+T细胞。使用CD11c对单核细胞和树突状细胞进行染色，并改进对靶细胞的圈门(gating)。对于除Annexin-V之外的所有标记物，将细胞在RT下温和搅拌孵育30min。用染色缓冲液洗涤细胞一次，用Annexin结合缓冲液洗涤一次，并且在搅拌下在室温下将Annexin-V染色进行30分钟。用Annexin-V结合缓冲液洗涤细胞一次，并在Novocyte流式细胞仪上进行流式细胞术分析。
根据以下公式计算特异性靶细胞裂解的百分比：
Figure BDA0004113623330001301
活化的CD8+T细胞的百分比与CD69+CD8+T细胞的比例相对应。
基于LDH释放的细胞毒性：
LDH(乳酸脱氢酶)从胞质溶胶中释放是细胞死亡的标志。建立了一种比色LDH释放测定法(Roche)，以检查目标lead分子介导的细胞毒性。使用两种癌细胞系：H226细胞(高间皮素密度)和OVCAR-3细胞(中等间皮素密度)，以及源自健康间皮组织的MeT-5A细胞系(低间皮素密度)作为靶细胞。向96孔板中加入10,000个活的靶细胞，粘附过夜。次日，向含hSA的缓冲液中的每个孔中加入300,000个活的效应细胞(PBMC)(E:T比为30:1)。从50nM开始，以5倍稀释梯级添加图中所示的相应分子。在适用的情况下，向孔中加入最终浓度为0ng/mL的sMSLN、50ng/mL的sMSLN和500ng/mL的sMSLN。40小时后，取出上清液进行LDH释放分析，并对细胞进行T细胞标记物染色，包括活化。
特异性裂解的百分比计算如下：
1.从所有OD值中减去媒介物背景的平均OD值
2.计算％细胞毒性＝((样本-自发杀伤)/(最大杀伤-自发杀伤))*100
注：自发杀伤：效应细胞+未处理(未治疗)的靶细胞的平均OD值；
注：最大杀伤：1％ Triton试剂处理40h的靶细胞的平均OD值。
结果
使用基于流式细胞术的细胞毒性试验评估了MATCH分子PRO2000(MATCH-4:biMSLN高KDxCD3xhSA)和PRO1872(scMATCH-3:MSLN低KDxCD3xhSA)的细胞毒性潜力和对CD8+T细胞活化的影响。使用高间皮素表达细胞系H226和源自健康组织的低间皮素表达MeT-5A细胞获得的数据见表26和27，MATCH分子的浓度响应曲线见图6。这两种分子对高间皮素表达的H226细胞都有很强的作用。二价间皮素靶向PRO2000的效力是一价间皮素靶向PRO1872的75倍。相反，在表达低间皮素水平的MeT-5A细胞上，一价间皮素结合分子PRO1872显示出比PRO2000高16倍的靶细胞杀伤效力。在高表达细胞中，PRO2000的杀伤效力(EC50)为0.07pM，PRO1872为5.31pM，而在MeT-5A细胞中，PRO2000的EC50为144.70pM，PRO1872为8.88pM。在相应条件下观察到了类似的CD8+T细胞活化数据。
此外，在分别表达中、低间皮素水平的另外两种靶癌细胞系(HPAC细胞和H292细胞)上测试了PRO2000和PRO1872的细胞毒性活性和对CD8+T细胞活化的作用(表27和图7)。如前所述，对于低间皮素表达的细胞，PRO1872比靶向间皮素的二价分子PRO2000更有效。相比之下，PRO2000和PRO1872对HPAC细胞(中等间皮素密度)具有相似的效力。对于HPAC，PRO2000的杀伤效力为40.75pM，PRO1872为30.26pM，而对于低间皮素表达的H292细胞，PRO2000的EC50为652.2pM，PRO1872为91.03pM。在相应条件下观察到类似的CD8+T细胞活化数据，除了在HPAC细胞存在下PRO2000的效力比PRO1872高4倍。
几项研究报道，癌症患者中可溶性间皮素的血清浓度为数百ng/ml。因此，我们评估了可溶性间皮素的存在对分子杀伤靶细胞的能力的影响。
使用高间皮素表达的H226细胞，在不存在或存在50ng/ml或500ng/ml可溶性间皮素(sMSLN)的情况下，比较了MATCH分子PRO2000和PRO1872的细胞毒性潜力和对CD8+T细胞活化的影响。获得的数据见表28和29，分子的浓度响应曲线见图8。可溶性间皮素以剂量依赖的方式对两种分子的效力产生负面影响。在存在500ng/ml sMSLN的情况下，与不存在sMSLN时观察到的效力相比，二价间皮素靶向PRO2000(其对间皮素的单价结合亲和力低于PRO1872)的杀伤效力降低了17倍。相比之下，对间皮素具有更好的单价亲和力的间皮素单价分子PRO1872的效力在存在500ng/ml sMSLN的情况下比不存在sMSLN时低106倍。在相应条件下，观察到类似的CD8+T细胞活化数据。
此外，对PRO2000的变体PRO2100也进行了表征，以表明这两种分子具有杀伤靶细胞的同等效力。在PRO2100中，已将一个潜在的糖基化位点突变，以防止糖基化。
在高表达间皮素的H226细胞和低表达间皮素的间皮细胞MeT-5A存在下，使用基于流式细胞术的细胞毒性试验比较MATCH4分子PRO2000和PRO2100的细胞毒性潜力。PRO1872也包括在内。获得的数据见表30，浓度响应曲线见图9。所测试的分子中均没有显示出对低表达间皮素的MeT-5A细胞的杀伤。在存在H226靶细胞的情况下，PRO2000和PRO2100在不存在或存在sMSLN的情况下显示出非常相似的杀伤能力。在不存在sMSLN的情况下，PRO2000的效力为0.7pM，PRO2100的效力为1.54pM。在存在100ng/ml sMSLN的情况下，效力变化了2倍(PRO2100为3.56pM)和5倍(PRO2000为3.45pM)。相比之下，在不存在sMSLN的情况下，对间皮素具有更好单价亲和力的分子PRO1872的效力分别比PRO2100和PRO2000低10倍和20倍(EC50PRO1872＝13.38pM)。此外，在存在100ng/ml sMSLN的情况下，PRO1872的效力低10倍。
基于以上获得的数据，如方法部分中概述的，通过LDH释放评估了其他示例性MATCH分子PRO2567、PRO2566、PRO2562、和PRO2660(MATCH-4:biMSLN高KDxCD3xhSA)的细胞毒性潜力。当检查PRO2567、PRO2566和PRO2562时，相对于PRO2660，这些分子对高MSLN表达的H226细胞表现出更高的效力和相似的剂量反应曲线(图10)。在中等OVCAR-3表达细胞上观察到这些分子的效力轻微降低，当使用Met-5A细胞作为低MSLN表达靶细胞时，观察到活性进一步降低(图10)。这些数据总结在总结图11中，其中给出了各实验的EC50值，包括与作为参考的PRO1872的比较。我们观察到，当使用H226细胞作为靶细胞时，PRO2567、PRO2566、PRO2562和PRO2660的EC50值似乎低于对PRO1872观察到的EC50值(图11A)。我们在OVCAR-3细胞上观察到PRO2567、PRO2566和PRO2562的类似趋势(图11B)。当通过计算平均Met-5AEC50和平均H226 EC50值之间的x倍差来检查活性窗口时，我们观察到PRO2567、PRO2566和PRO2562的活性窗口明显大于PRO1872的活性窗口(见表31)。
在存在50和500ng/mL sMSLN的情况下，检测了先导分子的效力的变化和剂量反应曲线(图12)。我们观察到MATCH4 biMSLN高KDxCD3xhSA分子在存在sMSLN的情况下保持其效力。例如，PRO2566和PRO2567，与PRO1872相比，在存在sMSLN的情况下保持它们的效力，即使是在高sMSLN浓度下(从0到500ng/mL，效力变化x倍：14.2倍和23.8倍vs.78.2倍；参见表32)。在总结图13中，证明了绝对EC50值的差异。虽然PRO2566和PRO2567的EC50值相对不受sMSLN添加的影响，但单价PRO1872的EC50值受sMSLN添加的影响相对较大。虽然PRO2660似乎对sMSLN更敏感，但与PRO1872相比，它仍然不太敏感。这些数据证明在存在sMSLN的情况下，MATCH4 biMSLN高KDxCD3xhSA形式在保留足够的抗肿瘤效力方面是优越的。
实施例7：MATCH分子与靶细胞的结合
介绍
为了支持使用表达不同细胞表面密度的间皮素的靶细胞(H226、HPAC、H292、OVCAR-3和MeT-5A)获得的细胞毒性数据，通过流式细胞术评估了MATCH分子与这些细胞系中至少两种的细胞结合。测试了示例性的MATCH4分子PRO2000、PRO2100、PRO2562、PRO2566、PRO2567和PRO2660，以确认分子均具有相似的结合特性。scMATCH3 PRO1872也包括在内，以便进行比较。
方法
用100μl PBS洗涤细胞两次，并用范围为50，000至0.005pM的PRO1872、PRO2000、PRO2100、PRO2562、PRO2566、PRO2567或PRO2660在染色缓冲液(PBS，2％ BCS热灭活，2mMEDTA)中的五倍系列稀释液孵育。用染色缓冲液洗涤细胞两次，通过蛋白质L-PE(2μg/ml)观察MATCH4分子的结合。将平板在室温下在章动混合器上孵育30分钟，用染色缓冲液洗涤两次，以200g离心5分钟，并重新悬浮在最终体积为50μl的染色缓冲液中。使用Novocyte流式细胞仪装置，通过流式细胞术分析每孔20,000个事件的PE信号，并使用NovoExpress软件(ACEABiosciences)分析数据。通过减去空白(零抗体浓度)来校正MATCH分子的平均荧光强度(MFI)值的非特异性结合。使用GraphPad Prism Data Analysis Software(GraphPadSoftware)用四参数逻辑曲线拟合分析ΔMFI数据，并计算达到50％靶细胞结合(EC50)所需的目标分子浓度。
结果
通过流式细胞术评估了PRO2000、PRO2100和PRO1872与不同细胞系的结合。观察到半数最大结合时的浓度(EC50)和所达到的最大结合值(MFI)见表33，相应的滴定曲线见图14(A-D)。PRO2000和PRO2100对所有测试细胞系都显示出相当的结合数据。与PRO1872相比，PRO2000和PRO2100对高表达间皮素的癌细胞H226的结合高3倍，对中等表达间皮素的癌细胞HPAC的结合好1.5至2倍，对低表达间皮素的癌细胞H292的结合低2倍。这些数据与细胞毒性试验中获得的数据相互关联。每个测试分子所观察到的最大结合证实了细胞系在细胞表面间皮素表达方面的等级。
此外，如上所述，还评估了MATCH4分子PRO2567、PRO2566、PRO2562和PRO2660(biMSLNxCD3xhSA)与不同细胞系的细胞结合。观察到半数最大结合时的浓度(EC50)和所达到的最大结合值(MFI)见表34，相应的滴定曲线见图14(E-G)。先导MATCH4分子PRO2567、PRO2566和PRO2562结合高MSLN表达的H226细胞的EC50与PRO2000和PRO2100相当(比较表33和表34)。当评估与表达中等MSLN水平的OVCAR-3细胞的结合时，我们进一步观察到所有MATCH4分子(PRO2567、PRO2566、PRO2562和PRO2660)的EC50结合均降低。二价MATCH4分子的EC50结合的降低是由于OVCAR-3细胞上MSLN的表达水平较低(如获得的最大MFI值指示)，降低了亲合力(avidity)效应对结合强度的贡献。关于低MSLN表达的Met-5A细胞，我们发现，与H226和OVCAR-3细胞相比，Met-5A细胞的最大MFI值明显较低，EC50值比结合H226细胞的EC50值低了约5倍。对于PRO2000和PRO2100，我们也获得了类似的结果。可以推测，Met-5A细胞上的MSLN局部集中在膜微区，导致MATCH4分子的结合紧密并由亲合力(avidity)驱动，并因此导致EC50值较低，而最大MFI值保持低值，是因为这些细胞上MSLN的总体表达较低。
总之，先导MATCH4分子PRO2567、PRO2566、PRO2562的EC50结合与PRO2000和PRO2100获得的细胞结合数据相当。在细胞毒性实验中也观察到了与中等MSLN表达的OVCAR-3细胞的结合强度的降低，这可能是由于亲合力(avidity)的丧失，在细胞毒性实验中发现，与杀伤高MSLN表达的H226细胞相比，MATCH4分子杀伤OVCAR-3细胞的能力降低。
表26：在H226和Met-5A细胞存在下杀伤靶细胞和CD8+T细胞活化的能力。
Figure BDA0004113623330001351
表27：在H292和HPAC细胞存在下杀伤靶细胞和CD8+T细胞活化的能力。
Figure BDA0004113623330001352
Figure BDA0004113623330001361
表28：在不存在或存在可溶性间皮素的情况下H226靶细胞杀伤的能力。
Figure BDA0004113623330001362
表29：在不存在或存在可溶性间皮素的情况下，当存在H226靶细胞的情况下CD8+T细胞活化的能力。
Figure BDA0004113623330001363
Figure BDA0004113623330001371
表30：在不存在或存在可溶性间皮素的情况下，杀伤靶细胞的能力。
Figure BDA0004113623330001372
表31：PRO2561、PRO2566、PRO2567、PRO2660和PRO1872对表达不同水平MSLN的靶细胞的细胞杀伤能力的概述。
Figure BDA0004113623330001373
表32：在不同水平的可溶性MSLN存在下，PRO2561、PRO2566、PRO2567、PRO2660和PRO1872的细胞杀伤能力的概述。
Figure BDA0004113623330001381
表33：PRO2000、PRO2100和PRO1872对H226、H292、Met-5A和HPAC细胞的结合。
Figure BDA0004113623330001382
表34：先导MATCH4分子PRO2567、PRO2566、PRO2562和PRO2660对H226、OVCAR-3和Met-5A细胞的结合。
Figure BDA0004113623330001391
实施例8：PRO2000(biMSLN高KDxCD3xhSA)体内抑制肿瘤生长：
介绍
在Charles River Laboratories进行了两项体内间皮素表达细胞系异种移植实验，以确定PRO2000(biMSLN高KDxCD3xhSA)有效控制肿瘤生长的能力(相对于对照动物)。一项实验检测了H292异种移植模型的肿瘤生长抑制，另一项实验检测了HPAC异种移植模型的肿瘤生长抑制。
方法
动物
在适合于人性化小鼠工作的条件下繁殖并饲养来自Charles RiverLaboratories的雌性NCG小鼠。两项研究都使用了8-12周龄的动物。
研究设计
治疗组(H292组，每组n＝5-6；HPAC组，每组n＝10)动物在侧腹皮下共植入1x107H292 NSCLC肿瘤细胞和1x 107PBMC或1x 107HPAC肿瘤细胞和2.5x 106PBMC。5天后，给动物静脉注射目标分子，每5天增加剂量，直到实验结束。在实验过程中，使用测径器定期监测动物的肿瘤生长和体重减轻。当对照组中的平均肿瘤体积为800mm3时或在40天时(以先发生者为准)，对动物实施安乐死。根据Charles River Laboratories的动物健康和福利条例，对动物进行监测和安乐死。
结果
我们使用PBMC/H292共植入模型评估了PRO2000(biMSLN高KDxCD3xhSA)在促进肿瘤生长抑制方面的功效，如方法中所述。H292细胞表达中等水平的MSLN，并且是从非小细胞肺癌建立的。如图15所示，静脉注射多剂量水平的PRO2000。作为比较，我们使用帕利珠单抗(抗RSV抗体)作为对照IgG治疗，以及在没有PBMC(无治疗)的情况下移植肿瘤细胞。我们观察到，对照条件导致肿瘤自然发展(浅灰色线，图15A)。相对于对照组，使用1和5mg/kg的PRO2000(biMSLN.CD3)分子进行治疗导致肿瘤生长抑制(分别为图15A中的黑线和深灰线)。我们使用双向ANOVA，随后使用Tukey多重比较检验，检验了治疗的显著性；第40天的数据如图15B所示，每个点代表一只动物。相对于帕利珠单抗治疗的动物(ctrl)和未治疗的动物，两个较高剂量(1mg/kg和5mg/kg)导致显著较低的肿瘤体积。最低剂量(0.2mg/kg)似乎是次优的，因为这些比较与帕利珠单抗治疗的动物相比不显著。对整体动物健康似乎没有不利影响，因为动物体重在整个实验中相对稳定(数据未显示)。总之，这些数据表明，多特异性抗体PRO2000(biMSLN高KDxCD3xhSA)在体内具有肿瘤生长抑制活性，并且是癌症免疫治疗的有前途的概念性候选物。
使用PBMC/HPAC共植入模型，进一步评估了PRO2000(biMSLN高KDxCD3xhSA)在促进肿瘤生长抑制方面的功效，如方法中所述。与H292相比，HPAC肿瘤细胞表达更高水平的MSLN。与H292模型类似，我们观察到对照条件下的自然发展(图16，帕利珠单抗)，以及在测试条件下的剂量依赖性肿瘤生长抑制。我们使用双向ANOVA，随后使用Tukey多重比较检验，检验了治疗的显著性。我们观察到，与最低剂量的单价MSLN靶向分子PRO1872(MSLNxCD3xhSA)相比，最低剂量的PRO2000(biMSLN高KDxCD3xhSA)在多个时间点上导致显著的肿瘤生长抑制。该数据表明，对于表达较高水平MSLN的细胞，PRO2000(biMSLN高KDxCD3xhSA)的基于亲合力(avidity)的活性导致效力提高。
                         序列表
<110>  努玛治疗有限公司
<120>  多特异性抗体
<130>  116736P877PC
<150>  EP20177337.1
<151>  2020-05-29
<160>  151
<170>  PatentIn version 3.5
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1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe Asp Pro Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  20
<211>  122
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  20
Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe Asp Pro Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  21
<211>  111
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  21
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>  22
<211>  122
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  22
Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Tyr Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe Asp Pro Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  23
<211>  122
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  23
Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Tyr Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe Asp Pro Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  24
<211>  111
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  24
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>  25
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  25
Gly Phe Ser Phe Ser Thr Thr Tyr Tyr Met Cys
1               5                   10
<210>  26
<211>  18
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  26
Cys Thr Asn Thr Ala Ser Ser Val Arg Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala
1               5                   10                  15
Lys Gly
<210>  27
<211>  12
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  27
Arg Asp Met Gly Phe Ala Asp Tyr Ala Leu Asn Leu
1               5                   10
<210>  28
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  28
Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Ser Leu Ala
1               5                   10
<210>  29
<211>  7
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  29
Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1               5
<210>  30
<211>  13
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  30
Gln Ser Thr Asp Tyr Thr Thr Ser Thr His Arg Asn Ser
1               5                   10
<210>  31
<211>  122
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  31
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Thr Thr
            20                  25                  30
Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
        35                  40                  45
Ile Gly Cys Thr Asn Thr Ala Ser Ser Val Arg Thr Tyr Tyr Ala Thr
    50                  55                  60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg Asp Met Gly Phe Ala Asp Tyr Ala Leu Asn Leu Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  32
<211>  122
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  32
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Thr Thr
            20                  25                  30
Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
        35                  40                  45
Ile Gly Cys Thr Asn Thr Ala Ser Ser Val Arg Thr Tyr Tyr Ala Thr
    50                  55                  60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg Asp Met Gly Phe Ala Asp Tyr Ala Leu Asn Leu Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  33
<211>  112
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Ser
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Asp Tyr Thr Thr Ser
                85                  90                  95
Thr His Arg Asn Ser Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>  34
<211>  122
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Thr Thr
            20                  25                  30
Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp
        35                  40                  45
Ile Gly Cys Thr Asn Thr Ala Ser Ser Val Arg Thr Tyr Tyr Ala Thr
    50                  55                  60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg Asp Met Gly Phe Ala Asp Tyr Ala Leu Asn Leu Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  35
<211>  122
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Thr Thr
            20                  25                  30
Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp
        35                  40                  45
Ile Gly Cys Thr Asn Thr Ala Ser Ser Val Arg Thr Tyr Tyr Ala Thr
    50                  55                  60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg Asp Met Gly Phe Ala Asp Tyr Ala Leu Asn Leu Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  36
<211>  112
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Ser
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Asp Tyr Thr Thr Ser
                85                  90                  95
Thr His Arg Asn Ser Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>  37
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  37
Gly Ile Ser Val Ser Asn Asp Tyr Tyr Met Cys
1               5                   10
<210>  38
<211>  17
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  38
Cys Ile Ser Thr Tyr Ile Gly Asn Thr His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  39
<211>  14
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  39
Lys Asn Ala Gly Tyr Pro Gly Tyr Arg Tyr Ala Ile Asp Leu
1               5                   10
<210>  40
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  40
Gln Ala Ser Glu Ser Ile Gly Asn Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  41
<211>  7
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  41
Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1               5
<210>  42
<211>  10
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  42
Gln Ser Thr Asp Tyr Gly Asp Ser Tyr Ile
1               5                   10
<210>  43
<211>  123
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Ser Val Ser Asn Asp
            20                  25                  30
Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
        35                  40                  45
Ile Gly Cys Ile Ser Thr Tyr Ile Gly Asn Thr His Tyr Ala Ser Trp
    50                  55                  60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val
65                  70                  75                  80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Lys Asn Ala Gly Tyr Pro Gly Tyr Arg Tyr Ala Ile Asp Leu
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  44
<211>  109
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  44
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Gly Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Asp Tyr Gly Asp Ser
                85                  90                  95
Tyr Ile Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105
<210>  45
<211>  10
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  45
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser
1               5                   10
<210>  46
<211>  16
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  46
Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1               5                   10                  15
<210>  47
<211>  12
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  47
Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser Asn Ile
1               5                   10
<210>  48
<211>  13
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  48
Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210>  49
<211>  7
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  49
Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1               5
<210>  50
<211>  13
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  50
Leu Gly Ser Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val
1               5                   10
<210>  51
<211>  119
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  51
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>  52
<211>  114
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  52
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn
            20                  25                  30
Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg
        35                  40                  45
Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65                  70                  75                  80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys
                85                  90                  95
Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val
            100                 105                 110
Leu Gly
<210>  53
<211>  10
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  53
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asn Ala Met Gly
1               5                   10
<210>  54
<211>  16
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  54
Ile Ile Ser Val Gly Gly Phe Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1               5                   10                  15
<210>  55
<211>  14
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  55
Arg Asp Arg His Gly Gly Asp Ser Ser Gly Ala Phe Tyr Leu
1               5                   10
<210>  56
<211>  13
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  56
Gln Ser Ser Glu Ser Val Tyr Ser Asn Asn Gln Leu Ser
1               5                   10
<210>  57
<211>  7
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  57
Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser
1               5
<210>  58
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  58
Ala Gly Gly Phe Ser Ser Ser Ser Asp Thr Ala
1               5                   10
<210>  59
<211>  121
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  59
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asn
            20                  25                  30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
        35                  40                  45
Gly Ile Ile Ser Val Gly Gly Phe Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Asp Arg His Gly Gly Asp Ser Ser Gly Ala Phe Tyr Leu Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  60
<211>  112
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  60
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Tyr Ser Asn
            20                  25                  30
Asn Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
        35                  40                  45
Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65                  70                  75                  80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Phe Ser Ser
                85                  90                  95
Ser Ser Asp Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>  61
<211>  121
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  61
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asn
            20                  25                  30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Tyr Ile
        35                  40                  45
Gly Ile Ile Ser Val Gly Gly Phe Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Asp Arg His Gly Gly Asp Ser Ser Gly Ala Phe Tyr Leu Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  62
<211>  112
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  62
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Tyr Ser Asn
            20                  25                  30
Asn Gln Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
        35                  40                  45
Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65                  70                  75                  80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Gly Phe Ser Ser
                85                  90                  95
Ser Ser Asp Thr Ala Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>  63
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  63
Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr Trp Ile Cys
1               5                   10
<210>  64
<211>  17
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  64
Cys Val Phe Thr Gly Asp Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  65
<211>  12
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  65
Arg Pro Val Ser Val Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Leu
1               5                   10
<210>  66
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  66
Gln Ala Ser Gln Ile Ile Ser Ser Arg Ser Ala
1               5                   10
<210>  67
<211>  7
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  67
Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser
1               5
<210>  68
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  68
Gln Cys Thr Tyr Ile Asp Ser Asn Phe Gly Ala
1               5                   10
<210>  69
<211>  121
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  69
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
            20                  25                  30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
        35                  40                  45
Val Gly Cys Val Phe Thr Gly Asp Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp
    50                  55                  60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val
65                  70                  75                  80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Pro Val Ser Val Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Leu Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  70
<211>  110
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  70
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ile Ile Ser Ser Arg
            20                  25                  30
Ser Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Ile Asp Ser Asn
                85                  90                  95
Phe Gly Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>  71
<211>  121
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  71
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
            20                  25                  30
Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp
        35                  40                  45
Val Gly Cys Val Phe Thr Gly Asp Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp
    50                  55                  60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val
65                  70                  75                  80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Pro Val Ser Val Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Leu Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  72
<211>  110
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  72
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ile Ile Ser Ser Arg
            20                  25                  30
Ser Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Ile Asp Ser Asn
                85                  90                  95
Phe Gly Ala Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210>  73
<211>  10
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  73
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn
1               5                   10
<210>  74
<211>  16
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  74
His Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
1               5                   10                  15
<210>  75
<211>  13
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  75
Arg Gly Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu
1               5                   10
<210>  76
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  76
Gln Ala Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala
1               5                   10
<210>  77
<211>  7
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  77
Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser
1               5
<210>  78
<211>  10
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  78
Gln Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr
1               5                   10
<210>  79
<211>  120
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  79
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly His Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  80
<211>  109
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  80
Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr
                85                  90                  95
Thr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105
<210>  81
<211>  120
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  81
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly His Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  82
<211>  109
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  82
Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr
                85                  90                  95
Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105
<210>  83
<211>  510
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  83
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Arg Ser Ser Ser Asp
                85                  90                  95
Ile Asp Asn Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Thr Ile Asn Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Tyr Cys Ala Arg Glu Ile Arg Ser Gly Trp Val Asp Tyr Gly Phe Ser
225                 230                 235                 240
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
            260                 265                 270
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
        275                 280                 285
Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
    290                 295                 300
Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr
305                 310                 315                 320
Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
                325                 330                 335
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
            340                 345                 350
Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser
        355                 360                 365
Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
    370                 375                 380
Ser Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
385                 390                 395                 400
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
                405                 410                 415
Ser Phe Ser Ser Ser Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
            420                 425                 430
Lys Cys Leu Glu Trp Val Gly Cys Val Phe Thr Gly Asp Gly Thr Thr
        435                 440                 445
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
    450                 455                 460
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
465                 470                 475                 480
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Pro Val Ser Val Tyr Tyr Tyr Gly
                485                 490                 495
Met Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
            500                 505                 510
<210>  84
<211>  492
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  84
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Arg Ser Ser Ser Asp
                85                  90                  95
Ile Asp Asn Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Thr Ile Asn Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Tyr Cys Ala Arg Glu Ile Arg Ser Gly Trp Val Asp Tyr Gly Phe Ser
225                 230                 235                 240
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
            260                 265                 270
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser
        275                 280                 285
Gln Ile Ile Ser Ser Arg Ser Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
    290                 295                 300
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val
305                 310                 315                 320
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
                325                 330                 335
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys
            340                 345                 350
Thr Tyr Ile Asp Ser Asn Phe Gly Ala Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln
    370                 375                 380
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
385                 390                 395                 400
Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe
                405                 410                 415
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser
            420                 425                 430
Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
        435                 440                 445
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
    450                 455                 460
Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr
465                 470                 475                 480
Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
                485                 490
<210>  85
<211>  510
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  85
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Arg Ser Ser Ser Asp
                85                  90                  95
Ile Asp Asn Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Thr Ile Ala Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Tyr Cys Ala Arg Glu Ile Arg Ser Gly Trp Val Asp Tyr Gly Phe Ser
225                 230                 235                 240
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
            260                 265                 270
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
        275                 280                 285
Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
    290                 295                 300
Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr
305                 310                 315                 320
Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
                325                 330                 335
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
            340                 345                 350
Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser
        355                 360                 365
Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
    370                 375                 380
Ser Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
385                 390                 395                 400
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
                405                 410                 415
Ser Phe Ser Ser Ser Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
            420                 425                 430
Lys Cys Leu Glu Trp Val Gly Cys Val Phe Thr Gly Asp Gly Thr Thr
        435                 440                 445
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
    450                 455                 460
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
465                 470                 475                 480
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Pro Val Ser Val Tyr Tyr Tyr Gly
                485                 490                 495
Met Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
            500                 505                 510
<210>  86
<211>  492
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  86
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Ser Asn
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Arg Ser Ser Ser Asp
                85                  90                  95
Ile Asp Asn Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Thr Ile Ala Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Tyr Cys Ala Arg Glu Ile Arg Ser Gly Trp Val Asp Tyr Gly Phe Ser
225                 230                 235                 240
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
            260                 265                 270
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser
        275                 280                 285
Gln Ile Ile Ser Ser Arg Ser Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
    290                 295                 300
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val
305                 310                 315                 320
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
                325                 330                 335
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys
            340                 345                 350
Thr Tyr Ile Asp Ser Asn Phe Gly Ala Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln
    370                 375                 380
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
385                 390                 395                 400
Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe
                405                 410                 415
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser
            420                 425                 430
Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
        435                 440                 445
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
    450                 455                 460
Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr
465                 470                 475                 480
Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
                485                 490
<210>  87
<211>  510
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  87
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His
        355                 360                 365
Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
385                 390                 395                 400
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
                405                 410                 415
Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
            420                 425                 430
Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr
        435                 440                 445
Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
    450                 455                 460
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
465                 470                 475                 480
Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro
                485                 490                 495
Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
            500                 505                 510
<210>  88
<211>  492
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  88
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln
    370                 375                 380
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
385                 390                 395                 400
Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe
                405                 410                 415
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser
            420                 425                 430
Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
        435                 440                 445
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
    450                 455                 460
Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr
465                 470                 475                 480
Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
                485                 490
<210>  89
<211>  515
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  89
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His
        355                 360                 365
Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu Val Gln Leu Val
385                 390                 395                 400
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
                405                 410                 415
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val
            420                 425                 430
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn Ala
        435                 440                 445
Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile
    450                 455                 460
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
465                 470                 475                 480
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly Gly
                485                 490                 495
Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            500                 505                 510
Val Ser Ser
        515
<210>  90
<211>  499
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  90
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
    370                 375                 380
Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
385                 390                 395                 400
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser
                405                 410                 415
Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
            420                 425                 430
Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
        435                 440                 445
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
    450                 455                 460
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala
465                 470                 475                 480
Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr
                485                 490                 495
Val Leu Gly
<210>  91
<211>  515
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  91
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Cys Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His
        355                 360                 365
Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu Val Gln Leu Val
385                 390                 395                 400
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
                405                 410                 415
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val
            420                 425                 430
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn Ala
        435                 440                 445
Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile
    450                 455                 460
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
465                 470                 475                 480
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly Gly
                485                 490                 495
Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            500                 505                 510
Val Ser Ser
        515
<210>  92
<211>  499
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  92
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Cys Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
    370                 375                 380
Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
385                 390                 395                 400
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser
                405                 410                 415
Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
            420                 425                 430
Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
        435                 440                 445
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
    450                 455                 460
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala
465                 470                 475                 480
Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr
                485                 490                 495
Val Leu Gly
<210>  93
<211>  515
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  93
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His
        355                 360                 365
Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu Val Gln Leu Val
385                 390                 395                 400
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
                405                 410                 415
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val
            420                 425                 430
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn Ala
        435                 440                 445
Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile
    450                 455                 460
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
465                 470                 475                 480
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly Gly
                485                 490                 495
Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            500                 505                 510
Val Ser Ser
        515
<210>  94
<211>  492
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  94
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln
    370                 375                 380
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
385                 390                 395                 400
Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe
                405                 410                 415
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser
            420                 425                 430
Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
        435                 440                 445
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
    450                 455                 460
Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr
465                 470                 475                 480
Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
                485                 490
<210>  95
<211>  510
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  95
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His
        355                 360                 365
Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
385                 390                 395                 400
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
                405                 410                 415
Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
            420                 425                 430
Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr
        435                 440                 445
Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
    450                 455                 460
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
465                 470                 475                 480
Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro
                485                 490                 495
Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
            500                 505                 510
<210>  96
<211>  499
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  96
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
    370                 375                 380
Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
385                 390                 395                 400
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser
                405                 410                 415
Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
            420                 425                 430
Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
        435                 440                 445
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
    450                 455                 460
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala
465                 470                 475                 480
Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr
                485                 490                 495
Val Leu Gly
<210>  97
<211>  515
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  97
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Cys Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His
        355                 360                 365
Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu Val Gln Leu Val
385                 390                 395                 400
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
                405                 410                 415
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val
            420                 425                 430
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn Ala
        435                 440                 445
Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile
    450                 455                 460
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
465                 470                 475                 480
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly Gly
                485                 490                 495
Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            500                 505                 510
Val Ser Ser
        515
<210>  98
<211>  492
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  98
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Cys Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln
    370                 375                 380
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
385                 390                 395                 400
Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe
                405                 410                 415
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser
            420                 425                 430
Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
        435                 440                 445
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
    450                 455                 460
Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr
465                 470                 475                 480
Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
                485                 490
<210>  99
<211>  510
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  99
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Cys Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His
        355                 360                 365
Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
385                 390                 395                 400
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
                405                 410                 415
Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
            420                 425                 430
Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr
        435                 440                 445
Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
    450                 455                 460
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
465                 470                 475                 480
Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro
                485                 490                 495
Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
            500                 505                 510
<210>  100
<211>  499
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  100
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Cys Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
    370                 375                 380
Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
385                 390                 395                 400
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser
                405                 410                 415
Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
            420                 425                 430
Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
        435                 440                 445
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
    450                 455                 460
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala
465                 470                 475                 480
Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr
                485                 490                 495
Val Leu Gly
<210>  101
<211>  515
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  101
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Cys Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His
        355                 360                 365
Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu Val Gln Leu Val
385                 390                 395                 400
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
                405                 410                 415
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val
            420                 425                 430
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn Ala
        435                 440                 445
Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile
    450                 455                 460
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
465                 470                 475                 480
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly Gly
                485                 490                 495
Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            500                 505                 510
Val Ser Ser
        515
<210>  102
<211>  499
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  102
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Cys Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
    370                 375                 380
Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
385                 390                 395                 400
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser
                405                 410                 415
Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
            420                 425                 430
Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
        435                 440                 445
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
    450                 455                 460
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala
465                 470                 475                 480
Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr
                485                 490                 495
Val Leu Gly
<210>  103
<211>  515
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  103
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His
        355                 360                 365
Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu Val Gln Leu Val
385                 390                 395                 400
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
                405                 410                 415
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val
            420                 425                 430
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn Ala
        435                 440                 445
Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile
    450                 455                 460
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
465                 470                 475                 480
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly Gly
                485                 490                 495
Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            500                 505                 510
Val Ser Ser
        515
<210>  104
<211>  492
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  104
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln
    370                 375                 380
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
385                 390                 395                 400
Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe
                405                 410                 415
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser
            420                 425                 430
Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
        435                 440                 445
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
    450                 455                 460
Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr
465                 470                 475                 480
Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
                485                 490
<210>  105
<211>  518
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  105
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu
        355                 360                 365
Asp Asp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
    370                 375                 380
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu Val
385                 390                 395                 400
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
                405                 410                 415
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met
            420                 425                 430
Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His
        435                 440                 445
Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg
    450                 455                 460
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met
465                 470                 475                 480
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
                485                 490                 495
Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr
            500                 505                 510
Leu Val Thr Val Ser Ser
        515
<210>  106
<211>  496
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  106
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn
            20                  25                  30
Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg
        35                  40                  45
Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65                  70                  75                  80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys
                85                  90                  95
Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val
            100                 105                 110
Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
        115                 120                 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
145                 150                 155                 160
Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
                165                 170                 175
Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr
            180                 185                 190
Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
        195                 200                 205
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
    210                 215                 220
Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser
225                 230                 235                 240
Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
    370                 375                 380
Gly Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val
385                 390                 395                 400
Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn
                405                 410                 415
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu
            420                 425                 430
Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
        435                 440                 445
Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
    450                 455                 460
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn
465                 470                 475                 480
Asn Val Glu Asn Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
                485                 490                 495
<210>  107
<211>  518
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  107
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu
        355                 360                 365
Asp Asp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
    370                 375                 380
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu Val
385                 390                 395                 400
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
                405                 410                 415
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met
            420                 425                 430
Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His
        435                 440                 445
Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg
    450                 455                 460
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met
465                 470                 475                 480
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
                485                 490                 495
Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr
            500                 505                 510
Leu Val Thr Val Ser Ser
        515
<210>  108
<211>  489
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  108
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn
            20                  25                  30
Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg
        35                  40                  45
Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65                  70                  75                  80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys
                85                  90                  95
Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val
            100                 105                 110
Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
        115                 120                 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
145                 150                 155                 160
Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
                165                 170                 175
Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr
            180                 185                 190
Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
        195                 200                 205
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
    210                 215                 220
Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser
225                 230                 235                 240
Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ala Leu Gln Met Thr Gln
    370                 375                 380
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys
385                 390                 395                 400
Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln
                405                 410                 415
Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu
            420                 425                 430
Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp
        435                 440                 445
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
    450                 455                 460
Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn Val Glu Asn Val Phe Gly
465                 470                 475                 480
Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
                485
<210>  109
<211>  513
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  109
Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr
                85                  90                  95
Thr Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
        115                 120                 125
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
    130                 135                 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser
145                 150                 155                 160
Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
                165                 170                 175
Ile Gly His Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala
            180                 185                 190
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
        195                 200                 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
    210                 215                 220
Ala Arg Gly Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly
225                 230                 235                 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
            260                 265                 270
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu
        275                 280                 285
Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    290                 295                 300
Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser
305                 310                 315                 320
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
                325                 330                 335
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
            340                 345                 350
Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser Asn Ile Trp
        355                 360                 365
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
385                 390                 395                 400
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser
                405                 410                 415
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro
            420                 425                 430
Gly Lys Cys Leu Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr
        435                 440                 445
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn
    450                 455                 460
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
465                 470                 475                 480
Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu
                485                 490                 495
Asp Asp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
            500                 505                 510
Ser
<210>  110
<211>  501
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  110
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr
        355                 360                 365
Lys Val Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
385                 390                 395                 400
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val
                405                 410                 415
Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser
            420                 425                 430
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro
        435                 440                 445
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
    450                 455                 460
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser
465                 470                 475                 480
Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys
                485                 490                 495
Val Thr Val Leu Gly
            500
<210>  111
<211>  513
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  111
Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr
                85                  90                  95
Thr Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
        115                 120                 125
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
    130                 135                 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser
145                 150                 155                 160
Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
                165                 170                 175
Ile Gly His Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala
            180                 185                 190
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
        195                 200                 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
    210                 215                 220
Ala Arg Gly Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly
225                 230                 235                 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
            260                 265                 270
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu
        275                 280                 285
Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    290                 295                 300
Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser
305                 310                 315                 320
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
                325                 330                 335
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
            340                 345                 350
Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser Asn Ile Trp
        355                 360                 365
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
385                 390                 395                 400
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser
                405                 410                 415
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro
            420                 425                 430
Gly Lys Cys Leu Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr
        435                 440                 445
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn
    450                 455                 460
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
465                 470                 475                 480
Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu
                485                 490                 495
Asp Asp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
            500                 505                 510
Ser
<210>  112
<211>  494
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  112
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr
        355                 360                 365
Lys Val Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met
    370                 375                 380
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
385                 390                 395                 400
Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala
                405                 410                 415
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ser
            420                 425                 430
Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
        435                 440                 445
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp
    450                 455                 460
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp
465                 470                 475                 480
Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
                485                 490
<210>  113
<211>  515
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  113
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His
        355                 360                 365
Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu Val Gln Leu Val
385                 390                 395                 400
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
                405                 410                 415
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val
            420                 425                 430
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn Ala
        435                 440                 445
Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile
    450                 455                 460
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
465                 470                 475                 480
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly Gly
                485                 490                 495
Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
            500                 505                 510
Val Ser Ser
        515
<210>  114
<211>  499
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  114
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
    370                 375                 380
Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
385                 390                 395                 400
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser
                405                 410                 415
Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
            420                 425                 430
Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
        435                 440                 445
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
    450                 455                 460
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala
465                 470                 475                 480
Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr
                485                 490                 495
Val Leu Gly
<210>  115
<211>  516
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  115
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Ser
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Asp Tyr Thr Thr Ser
                85                  90                  95
Thr His Arg Asn Ser Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
    130                 135                 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser
145                 150                 155                 160
Phe Ser Thr Thr Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
                165                 170                 175
Gly Leu Glu Trp Ile Gly Cys Thr Asn Thr Ala Ser Ser Val Arg Thr
            180                 185                 190
Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
        195                 200                 205
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
    210                 215                 220
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Met Gly Phe Ala Asp Tyr Ala
225                 230                 235                 240
Leu Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
            260                 265                 270
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
        275                 280                 285
Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala
    290                 295                 300
Pro Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro
305                 310                 315                 320
Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
                325                 330                 335
Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
            340                 345                 350
Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser
        355                 360                 365
His Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
    370                 375                 380
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu Val Gln Leu
385                 390                 395                 400
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
                405                 410                 415
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp
            420                 425                 430
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn
        435                 440                 445
Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr
    450                 455                 460
Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
465                 470                 475                 480
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly
                485                 490                 495
Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            500                 505                 510
Thr Val Ser Ser
        515
<210>  116
<211>  493
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  116
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Ser
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Asp Tyr Thr Thr Ser
                85                  90                  95
Thr His Arg Asn Ser Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
    130                 135                 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser
145                 150                 155                 160
Phe Ser Thr Thr Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
                165                 170                 175
Gly Leu Glu Trp Ile Gly Cys Thr Asn Thr Ala Ser Ser Val Arg Thr
            180                 185                 190
Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
        195                 200                 205
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
    210                 215                 220
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Met Gly Phe Ala Asp Tyr Ala
225                 230                 235                 240
Leu Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro
            260                 265                 270
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln
        275                 280                 285
Ala Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
    290                 295                 300
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser
305                 310                 315                 320
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
                325                 330                 335
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
            340                 345                 350
Gln Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys
        355                 360                 365
Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
    370                 375                 380
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
385                 390                 395                 400
Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala Trp
                405                 410                 415
Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ser Ala
            420                 425                 430
Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
        435                 440                 445
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe
    450                 455                 460
Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp Cys
465                 470                 475                 480
Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
                485                 490
<210>  117
<211>  516
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  117
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Ser
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Asp Tyr Thr Thr Ser
                85                  90                  95
Thr His Arg Asn Ser Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val
    130                 135                 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser
145                 150                 155                 160
Phe Ser Thr Thr Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
                165                 170                 175
Gly Leu Glu Trp Ile Gly Cys Thr Asn Thr Ala Ser Ser Val Arg Thr
            180                 185                 190
Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
        195                 200                 205
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
    210                 215                 220
Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Met Gly Phe Ala Asp Tyr Ala
225                 230                 235                 240
Leu Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
            260                 265                 270
Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
        275                 280                 285
Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala
    290                 295                 300
Pro Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro
305                 310                 315                 320
Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
                325                 330                 335
Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
            340                 345                 350
Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser
        355                 360                 365
His Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly
    370                 375                 380
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu Val Gln Leu
385                 390                 395                 400
Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
                405                 410                 415
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp
            420                 425                 430
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn
        435                 440                 445
Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr
    450                 455                 460
Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
465                 470                 475                 480
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly
                485                 490                 495
Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val
            500                 505                 510
Thr Val Ser Ser
        515
<210>  118
<211>  493
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  118
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Ser
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Thr Asp Tyr Thr Thr Ser
                85                  90                  95
Thr His Arg Asn Ser Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val
    130                 135                 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser
145                 150                 155                 160
Phe Ser Thr Thr Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
                165                 170                 175
Gly Leu Glu Trp Ile Gly Cys Thr Asn Thr Ala Ser Ser Val Arg Thr
            180                 185                 190
Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
        195                 200                 205
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
    210                 215                 220
Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Met Gly Phe Ala Asp Tyr Ala
225                 230                 235                 240
Leu Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro
            260                 265                 270
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln
        275                 280                 285
Ala Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
    290                 295                 300
Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser
305                 310                 315                 320
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
                325                 330                 335
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
            340                 345                 350
Gln Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys
        355                 360                 365
Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
    370                 375                 380
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
385                 390                 395                 400
Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala Trp
                405                 410                 415
Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ser Ala
            420                 425                 430
Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
        435                 440                 445
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe
    450                 455                 460
Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp Cys
465                 470                 475                 480
Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
                485                 490
<210>  119
<211>  515
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  119
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
        275                 280                 285
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro
    290                 295                 300
Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr
305                 310                 315                 320
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
                325                 330                 335
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Cys Ser Leu Arg Ala Glu Asp
            340                 345                 350
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His
        355                 360                 365
Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Glu Val Gln Leu Val
385                 390                 395                 400
Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
                405                 410                 415
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val
            420                 425                 430
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile Gly His Ile Asn Ala
        435                 440                 445
Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile
    450                 455                 460
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
465                 470                 475                 480
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ala Gly Gly
                485                 490                 495
Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr
            500                 505                 510
Val Ser Ser
        515
<210>  120
<211>  499
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  120
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Cys Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
        355                 360                 365
Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
    370                 375                 380
Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
385                 390                 395                 400
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser
                405                 410                 415
Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys
            420                 425                 430
Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
        435                 440                 445
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
    450                 455                 460
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala
465                 470                 475                 480
Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr
                485                 490                 495
Val Leu Gly
<210>  121
<211>  513
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  121
Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr
                85                  90                  95
Thr Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
        115                 120                 125
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly
    130                 135                 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser
145                 150                 155                 160
Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
                165                 170                 175
Ile Gly His Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala
            180                 185                 190
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
        195                 200                 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
    210                 215                 220
Ala Arg Gly Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly
225                 230                 235                 240
Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln
            260                 265                 270
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu
        275                 280                 285
Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    290                 295                 300
Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser
305                 310                 315                 320
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
                325                 330                 335
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
            340                 345                 350
Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser Asn Ile Trp
        355                 360                 365
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
385                 390                 395                 400
Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser
                405                 410                 415
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro
            420                 425                 430
Gly Lys Cys Leu Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr
        435                 440                 445
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn
    450                 455                 460
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
465                 470                 475                 480
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu
                485                 490                 495
Asp Asp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser
            500                 505                 510
Ser
<210>  122
<211>  501
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  122
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr
        355                 360                 365
Lys Val Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
385                 390                 395                 400
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val
                405                 410                 415
Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser
            420                 425                 430
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro
        435                 440                 445
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
    450                 455                 460
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser
465                 470                 475                 480
Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys
                485                 490                 495
Val Thr Val Leu Gly
            500
<210>  123
<211>  513
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  123
Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr
                85                  90                  95
Thr Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
        115                 120                 125
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly
    130                 135                 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser
145                 150                 155                 160
Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
                165                 170                 175
Ile Gly His Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala
            180                 185                 190
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
        195                 200                 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
    210                 215                 220
Ala Arg Gly Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly
225                 230                 235                 240
Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln
            260                 265                 270
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu
        275                 280                 285
Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
    290                 295                 300
Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser
305                 310                 315                 320
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
                325                 330                 335
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
            340                 345                 350
Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser Asn Ile Trp
        355                 360                 365
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
    370                 375                 380
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
385                 390                 395                 400
Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser
                405                 410                 415
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro
            420                 425                 430
Gly Lys Cys Leu Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr
        435                 440                 445
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn
    450                 455                 460
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
465                 470                 475                 480
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu
                485                 490                 495
Asp Asp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser
            500                 505                 510
Ser
<210>  124
<211>  494
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  124
Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn
                85                  90                  95
Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Ser Gln Ser Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln
    130                 135                 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu
145                 150                 155                 160
Ser Ser Tyr Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu
                165                 170                 175
Glu Tyr Ile Gly Tyr Ile Ser Lys Ile Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser
            180                 185                 190
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
        195                 200                 205
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
    210                 215                 220
Phe Cys Ala Arg Gly Ser Ser Ser Gly Gly Tyr Leu Asp Asp Gly Phe
225                 230                 235                 240
Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
                245                 250                 255
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser
            260                 265                 270
Ser Leu Ser Ala Arg Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala
        275                 280                 285
Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
    290                 295                 300
Lys Pro Pro Lys Phe Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly
305                 310                 315                 320
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Arg Asp Phe Thr Leu
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
            340                 345                 350
Gln Val Tyr Asp Ser Asn Asn Val Glu Asn Val Phe Gly Cys Gly Thr
        355                 360                 365
Lys Val Thr Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met
    370                 375                 380
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
385                 390                 395                 400
Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn Asn Tyr Leu Ala
                405                 410                 415
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ser
            420                 425                 430
Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
        435                 440                 445
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp
    450                 455                 460
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys Ser Ser Ala Asp
465                 470                 475                 480
Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
                485                 490
<210>  125
<211>  756
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  125
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ile Ile Ser Ser Arg
            20                  25                  30
Ser Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Gln Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Ile Asp Ser Asn
                85                  90                  95
Phe Gly Ala Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
        115                 120                 125
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu
    130                 135                 140
Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
145                 150                 155                 160
Ala Trp Ile Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser
                165                 170                 175
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
            180                 185                 190
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr
        195                 200                 205
Phe Cys Ala Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser Asn Ile Trp
    210                 215                 220
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
225                 230                 235                 240
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile
                245                 250                 255
Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg
            260                 265                 270
Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Ser Asn Asn Tyr
        275                 280                 285
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile
    290                 295                 300
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
305                 310                 315                 320
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
                325                 330                 335
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Ala Cys Ser Ser
            340                 345                 350
Ala Asp Cys Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
        355                 360                 365
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
    370                 375                 380
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
385                 390                 395                 400
Ser Phe Ser Ser Ser Tyr Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
                405                 410                 415
Lys Cys Leu Glu Trp Val Gly Cys Val Phe Thr Gly Asp Gly Thr Thr
            420                 425                 430
Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
        435                 440                 445
Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
    450                 455                 460
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Pro Val Ser Val Tyr Tyr Tyr Gly
465                 470                 475                 480
Met Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
                485                 490                 495
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
            500                 505                 510
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln
        515                 520                 525
Ala Ser Glu Ser Ile Gly Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
    530                 535                 540
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser
545                 550                 555                 560
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
                565                 570                 575
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
            580                 585                 590
Gln Ser Thr Asp Tyr Gly Asp Ser Tyr Ile Phe Gly Thr Gly Thr Lys
        595                 600                 605
Val Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
    610                 615                 620
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
625                 630                 635                 640
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
                645                 650                 655
Ala Ser Gly Ile Ser Val Ser Asn Asp Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg
            660                 665                 670
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Cys Ile Ser Thr Tyr
        675                 680                 685
Ile Gly Asn Thr His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile
    690                 695                 700
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
705                 710                 715                 720
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asn Ala Gly Tyr
                725                 730                 735
Pro Gly Tyr Arg Tyr Ala Ile Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            740                 745                 750
Thr Val Ser Ser
        755
<210>  126
<211>  20
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  126
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1               5                   10                  15
Gly Gly Gly Ser
            20
<210>  127
<211>  5
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  127
Gly Gly Gly Gly Ser
1               5
<210>  128
<211>  2
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<220>
<221>  重复
<222>  (1)..(1)
<223>  接头(GmS)n，m选自2、3和4，n选自2、3、4、5和6
<220>
<221>  重复
<222>  (1)..(2)
<223>  接头(GmS)n，m选自2、3和4，n选自2、3、4、5和6
<400>  128
Gly Ser
1
<210>  129
<211>  122
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  129
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ala Asn
            20                  25                  30
Tyr Tyr Pro Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
        35                  40                  45
Ile Gly Cys Ile Tyr Gly Gly Ser Ser Asp Ile Thr Tyr Asp Ala Asn
    50                  55                  60
Trp Thr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65                  70                  75                  80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg Ser Ala Trp Tyr Ser Gly Trp Gly Gly Asp Leu Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  130
<211>  124
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  130
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Lys Val Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Ser
            20                  25                  30
Tyr Trp Ile Cys Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
        35                  40                  45
Ile Gly Cys Thr Phe Val Gly Ser Ser Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asn
    50                  55                  60
Trp Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Ser Ser Lys Asn Gln
65                  70                  75                  80
Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg His Pro Ser Asp Ala Val Tyr Gly Tyr Ala Asn Asn
            100                 105                 110
Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  131
<211>  108
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  131
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Val
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Ser Tyr Gly Asn Tyr Gly
                85                  90                  95
Asp Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
            100                 105
<210>  132
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  132
Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
1               5                   10
<210>  133
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  133
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
1               5                   10
<210>  134
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  134
Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Ile Ile Leu Gly
1               5                   10
<210>  135
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  135
Phe Gly Glu Gly Thr Glu Leu Thr Val Leu Gly
1               5                   10
<210>  136
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  136
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
1               5                   10
<210>  137
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  137
Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu Gly
1               5                   10
<210>  138
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  138
Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Ala Leu Gly
1               5                   10
<210>  139
<211>  11
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  139
Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
1               5                   10
<210>  140
<211>  119
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  140
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Cys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>  141
<211>  119
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  141
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>  142
<211>  119
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  142
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Ala Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Ala Ser Tyr Ala Ser Gly Pro Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Cys Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Gly Trp Thr Gly Thr Ser His Ser Asn Ile Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
        115
<210>  143
<211>  120
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  143
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly His Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  144
<211>  109
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  144
Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Cys Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr
                85                  90                  95
Thr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105
<210>  145
<211>  120
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  145
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Arg Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly His Ile Asn Ala Gly Asp Ile Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
    50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Gly Ala Gly Gly Phe Ser Thr Gly Pro Phe Lys Leu Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>  146
<211>  109
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  146
Ala Phe Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Asn Ser Arg
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Cys Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Tyr Gly Gly Ser Ser Thr
                85                  90                  95
Thr Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105
<210>  147
<211>  5
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<220>
<221>  重复
<222>  (1)..(5)
<223>  通用接头(GSGGS)n，n等于或大于1
<400>  147
Gly Ser Gly Gly Ser
1               5
<210>  148
<211>  5
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<220>
<221>  重复
<222>  (1)..(5)
<223>  通用接头(GGGGS)n，n等于或大于1
<400>  148
Gly Gly Gly Gly Ser
1               5
<210>  149
<211>  4
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<220>
<221>  重复
<222>  (1)..(4)
<223>  通用接头(GGGS)n，n等于或大于1
<400>  149
Gly Gly Gly Ser
1
<210>  150
<211>  9
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<400>  150
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1               5
<210>  151
<211>  5
<212>  PRT
<213>  人工序列
<220>
<223>  基于人工抗体的或抗体相关的序列
<220>
<221>  重复
<222>  (1)..(5)
<223>  通用接头(GGGGS)n，n选自1、2、3、4、5、6、7和8
<400>  151
Gly Gly Gly Gly Ser
1               5

Claims (15)

1.一种多特异性抗体，其包含：
a)两个特异性结合间皮素的基于抗体的结合结构域(MSLN-BD)；和
b)至少一个特异性结合CD3的基于抗体的结合结构域(CD3-BD)；
其中所述多特异性抗体不包含免疫球蛋白Fc区多肽，并且其中当通过SPR测量时，每个所述MSLN-BD结合间皮素(MSLN)的单价解离常数(KD)的范围为0.5至20nM，特别地范围为0.6至10nM。
2.根据权利要求1所述的多特异性抗体，其中所述MSLN-BD包括
(i)分别为SEQ ID NO:1、2(或10)和3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，和分别为SEQ IDNO:4、5和6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；或者分别为SEQ ID NO:11、12和13的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，和分别为SEQ ID NO:14、15和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；和
(ii)VH3或VH4结构域框架序列FR1至FR4；特别是VH3结构域框架序列FR1至FR4；和
(iii)VL结构域，其包含VL框架，所述VL框架包含Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1或Vκ3FR1至FR3，特别是Vκ1FR1至FR3，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4，和VλFR4，特别地，VλFR4包含与SEQ ID NO:132至SEQ ID NO:139中的任意一个具有至少70％、80％或90％同一性的氨基酸序列，更特别地，VλFR4选自SEQ ID NO:132至SEQ ID NO:139中的任意一个，特别是根据SEQ ID NO:132或139的VλFR4。
3.根据权利要求1或2所述的多特异性抗体，其中所述MSLN-BD包括
a.1)分别为SEQ ID NO:1、2(或10)和3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，
b.1)分别为SEQ ID NO:4、5、和6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.1)与氨基酸序列SEQ ID NO:7至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.1)与氨基酸序列SEQ ID NO:9至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.2)分别为SEQ ID NO:1、2(或10)和3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，
b.2)分别为SEQ ID NO:4、5、和6的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.2)与氨基酸序列SEQ ID NO:8至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.2)与氨基酸序列SEQ ID NO:9至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.3)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.3)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.3)与氨基酸序列SEQ ID NO:17至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.3)与氨基酸序列SEQ ID NO:18至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.4)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.4)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.4)与氨基酸序列SEQ ID NO:19至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.4)与氨基酸序列SEQ ID NO:21至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.5)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.5)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.5)与氨基酸序列SEQ ID NO:20至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.5)与氨基酸序列SEQ ID NO:21至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.6)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.6)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.6)与氨基酸序列SEQ ID NO:22至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.6)与氨基酸序列SEQ ID NO:24至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列；
或
a.7)分别为SEQ ID NO:11、12、和13的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，
b.7)分别为SEQ ID NO:14、15、和16的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，
c.7)与氨基酸序列SEQ ID NO:23至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VH序列，和
d.7)与氨基酸序列SEQ ID NO:24至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％相同的VL序列。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多特异性抗体，其中所述CD3-BD与CD3ε结合。
5.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体，其中所述抗体包含一个CD3-BD，其中通过SPR测量，所述CD3-BD结合CD3ε的单价KD为0.5至50nM，特别为1至40nM，特别为2至35nM。
6.根据权利要求4或5所述的多特异性抗体，其中所述CD3-BD包括
(i)分别为SEQ ID NO:45、46和47的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，位于人抗体VH框架，特别是VH3框架中；和
(ii)分别为SEQ ID NO:48、49、和50的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，位于人抗体VL框架中，其中VL框架包括Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1框架，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4和Vλ框架4，
特别地，其中所述CD3-BD包含
(i)VH结构域，其包含SEQ ID NO:51、140、141或142的氨基酸序列，和
(ii)VL结构域，其包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。
7.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体，其中所述抗体还包含至少一个人血清白蛋白结合结构域(hSA-BD)，特别是一个hSA-BD，特别是其中所述hSA-BD包含
(i)分别为SEQ ID NO:53、54和55的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，位于人抗体VH框架，特别是VH3框架中；和
(ii)分别为SEQ ID NO:56、57、和58的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，位于人抗体VL框架中，其中VL框架包括Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1框架，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4，特别是Vκ1FR4，以及Vλ框架4；
或
(i)分别为SEQ ID NO:63、64和65的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，位于人抗体VH框架，特别是VH3框架中，和
(ii)分别为SEQ ID NO:66、67、和68的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，位于人抗体VL框架中，其中VL框架包括Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1框架，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4，特别是Vκ1FR4，以及Vλ框架4；
或
(i)分别为SEQ ID NO:73、74和75的HCDR1、HCDR2、和HCDR3序列，位于人抗体VH框架，特别是VH3框架中，和
(ii)分别为SEQ ID NO:76、77、和78的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，位于人抗体VL框架中，其中VL框架包括Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1框架，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4，特别是Vκ1FR4，以及Vλ框架4；
特别地，其中其中所述hSA-BD包含
(i)VH结构域，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列，和
(ii)VL结构域，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；
或
(i)VH结构域，其包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列，和
(ii)VL结构域，其包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；
或
(i)VH结构域，其包含SEQ ID NO:79或143的氨基酸序列，和
(ii)VL结构域，其包含SEQ ID NO:80或144的氨基酸序列；
或
(i)VH结构域，其包含SEQ ID NO:81或145的氨基酸序列，和
(ii)VL结构域，其包含SEQ ID NO:82或146的氨基酸序列。
8.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体，其中所述抗体不包含CH1和/或CL区。
9.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体，其中
所述第一单链蛋白质包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列，特别是由氨基酸序列SEQ IDNO:101组成，并且
所述第二单链蛋白质包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列，特别是由氨基酸序列SEQ IDNO:102组成；或者
所述第一单链蛋白质包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列，特别是由氨基酸序列SEQ IDNO:109组成，并且
所述第二单链蛋白质包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列，特别是由氨基酸序列SEQ IDNO:110组成；或者
所述第一单链蛋白质包含SEQ ID NO:111的氨基酸序列，特别是由氨基酸序列SEQ IDNO:111组成，并且
所述第二单链蛋白质包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列，特别是由氨基酸序列SEQ IDNO:112组成；或者
所述第一单链蛋白质包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列，特别是由氨基酸序列SEQ IDNO:119组成，并且
所述第二单链蛋白质包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列，特别是由氨基酸序列SEQ IDNO:120组成；或者
所述第一单链蛋白质包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列，特别是由氨基酸序列SEQ IDNO:121组成，并且
所述第二单链蛋白质包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列，特别是由氨基酸序列SEQ IDNO:122组成；或者
所述第一单链蛋白质包含SEQ ID NO:123的氨基酸序列，特别是由氨基酸序列SEQ IDNO:123组成，并且
所述第二单链蛋白质包含SEQ ID NO:124的氨基酸序列，特别是由氨基酸序列SEQ IDNO:124组成。
10.一种核酸序列或两种核酸序列，其编码权利要求1至9中任一项所述的多特异性抗体。
11.一种载体或两种载体，其包含权利要求10的所述一种核酸序列或所述两种核酸序列。
12.一种宿主细胞或多种宿主细胞，其包含权利要求11的所述一种载体或所述两种载体。
13.一种生产权利要求1至9中任一项所述的多特异性抗体的方法，包括(i)提供权利要求10的一种核酸序列或两种核酸序列或权利要求11的一种载体或两种载体，表达所述一种核酸序列或多种核酸序列或所述一种载体或多种载体，并从所述表达系统收集所述多特异性抗体，或者(ii)提供根据权利要求12的一种宿主细胞或多种宿主细胞，培养所述一种宿主细胞或所述多种宿主细胞；并从细胞培养物中收集所述多特异性抗体。
14.一种药物组合物其包含权利要求1至9中任一项所述的多特异性抗体和药学上可接受的载体。
15.根据权利要求1至9中任一项所述的多特异性抗体，其用于治疗疾病，特别是人类疾病，更特别地，人类疾病选自癌症、炎性疾病和自身免疫疾病，特别地，癌症选自间皮瘤、胰腺癌和卵巢癌，
特别地，其中所述多特异性抗体是
包含三个或四个结合结构域的单链蛋白质，或者
包含三个或四个结合结构域的异源二聚体蛋白质。
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