CN116115540A - 一种皮肤抗衰老组合物、应用与日化品 - Google Patents
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Abstract
本发明属于日化新材料领域，公开了一种皮肤抗衰老组合物，包括椰油酰水解胶原钾、六肽‑11、羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物，椰油酰水解胶原钾、六肽‑11、羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物的比例为0.5～5：0.3‑2：0.2‑1：0.5‑2。本发明的组合物实现了从内因、外因方面协助皮肤角质层活性增加、降低外界因素对皮肤的影响，提高椰油酰水解胶原钾的功能，显著减缓了皮肤的衰老进程、一定程度上有效祛除了皮肤衰老迹象。本发明的第二个目的在于提供含有上述皮肤抗衰老组合物的应用。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种皮肤抗衰老组合物、应用与日化品。
背景技术
随着生活水平的提高，皮肤护理越来越成为人们关注的重要事项。其中，皮肤衰老问题持续困扰着广大消费者，为此商家也不断尝试推出功效更好的护肤产品。
衰老虽然是内在的自发过程，但外界条件可以加速或延缓这种过程的进行，皮肤衰老的原因包括如下两个方面：
内因：皮肤角质功能低下，角质层水分降低引起角质层肥厚，导致皮肤失去柔韧性，生皱纹、真皮胶原蛋白纤维减少、胶原蛋白纤维束构造紊乱；
外因：紫外线引起的MMP活化或增多、表皮透明质酸减少。
D1：专利CN 112933028 A公布了一种含抗初老组合物的润肤水，制备原料包括抗初老组合物、皮肤调理剂、保湿剂和水；所述抗初老组合物包括姜花根提取物、黄岑根提取物和可可籽提取物；所述皮肤调理剂包括乳酸杆菌发酵溶胞产物、皱波角叉菜提取物和乙酰壳糖胺。该含抗初老组合物的润肤水促进细胞外基质合成，改善皮肤水合程度，减少经皮水分流失，减少皮肤细纹，改善皮肤粗糙，还能抑制酪氨酸酶的活性，减少黑色素产生，改善肤色不均匀，提亮肤色。
D2：专利CN 114732765 A公布了一种抗衰老祛皱的组合物，按照重量份计，包括以下组分：棕榈酰肽-环糊精包合物脂质体1～5份、葡萄籽提取物1～2份、迷迭香提取物1～2份、视黄醇棕榈酸酯0.5～1份、羟基频哪酮视黄酸酯0.5～1份。该抗衰老祛皱组合物通过对活性多肽进行包合，实现了对活性成分的保护，提高了稳定性，抗衰老祛皱效果良好且持久，具备良好的市场推广价值。
D3：专利CN 115105453 A公布了一种具有抗菌、消炎和修复功能的护肤品，按重量份计，至少包括：A组分：水65～85份、保湿剂6～10份、活性多肽1～5份、胶原蛋白0.05～0.15份；B组分：植物提取物1～2.5份、植物籽油4～7份、乳化剂5～8份、增稠剂0.3～0.8份和柔润剂0.5～1份。所述活性多肽为棕榈酰五肽、肌肽、九肽-1和乙酰基六肽-8的混合物。通过调控活性多肽、植物提取物和植物籽油添加加的种类和重量，使护肤品达到较好的抗菌、消炎、清除自由基和抗氧化的效果，尤其对于过敏肌肤、毛囊炎和皮肤炎症具有较好的治疗和修复效果。活性多肽、植物提取物和植物籽油能够起到肌肤镇静、深度舒缓肌肤、使肌肤达到完全自然放松的状态，提高肌肤活力。
可以理解的，葡萄籽提取物、羟基频哪酮视黄酸酯、胶原蛋白对于抗衰是有正面作用的。
D4：CN112603849A公开了一种抗衰老组合物，涉及化妆品技术领域。所述抗衰老组合物，包含以下重量份的组分：3-甘油抗坏血酸1-10份、椰油酰水解胶原钾1-10份、水解贝壳硬蛋白1-10份和维生素C1-10份。本发明提供的抗衰老组合物，无刺激性、保湿性好，可为肌肤直接补充胶原蛋白。此外，本发明还提供了包含所述抗衰老组合物的精华液，具有抑制弹性蛋白酶活性，提升皮肤活力和弹性，抑制角质化异常导致的角质层脱落不均，能够增加胶原蛋白密度，有效抑制和消除肌肤皱纹的效果。
其说明书记载：实验数据显示椰油酰水解胶原钾能够显著防止活性氧对成纤维细胞造成的损伤，且能够增生成纤维细胞,胶原蛋白由成纤维细胞合成。在合成过程中，维生素C是胶原蛋白聚合的必需成分。在和维生素C联用的过程中，能够产生叠加效果，进一步促进胶原蛋白的生成。另外实验数据还显示椰油酰水解胶原钾能够显著增加真皮层中胶原蛋白的含量。胶原蛋白密度上升效果,通过增加胶原蛋白密度，有效抑制和消除肌肤皱纹，通过提升肌肤弹性，能够有效提升胶原蛋白制造能力，恢复肌肤弹性焕发肌肤生动饱满的健康状态。实验数据结果表明椰油酰水解胶原钾能够使Ⅰ型胶原蛋白含量提升约6倍，Ⅲ型胶原蛋白含量提升约1.7倍。
根据其实施例记载，如下：
其相应的实施例和对比例的对比效果在说明书有记载；
不同周期(w)的皮肤弹性R2的变化如下表：
| 实施例5 | 0.533 | 0.789 | 48.03 |
| 对比例1 | 0.541 | 0.683 | 26.25 |
| 对比例2 | 0.537 | 0.701 | 30.54 |
| 对比例3 | 0.535 | 0.706 | 31.96 |
| 对比例4 | 0.532 | 0.713 | 34.02 |
| 对比例5 | 0.531 | 0.650 | 22.41 |
| 对比例6 | 0.536 | 0.640 | 19.40 |
| 对比例7 | 0.540 | 0.661 | 22.41 |
| 对比例8 | 0.534 | 0.540 | 1.12 |
其不同周期(w)的皮肤平均粗糙度如下表：
| 样品 | 第0周 | 第4周 | 平均变化率(％) |
| 实施例1 | 24.53 | 17.38 | 29.15 |
| 实施例2 | 24.43 | 16.96 | 30.58 |
| 实施例3 | 24.38 | 16.56 | 32.08 |
| 实施例4 | 24.32 | 16.16 | 33.55 |
| 实施例5 | 24.31 | 15.67 | 35.54 |
| 对比例1 | 24.36 | 18.94 | 22.25 |
| 对比例2 | 24.33 | 18.69 | 23.18 |
| 对比例3 | 24.31 | 18.37 | 24.43 |
| 对比例4 | 24.29 | 17.98 | 25.98 |
| 对比例5 | 24.32 | 19.39 | 20.27 |
| 对比例6 | 24.34 | 19.64 | 19.31 |
| 对比例7 | 24.51 | 19.41 | 20.81 |
| 对比例8 | 24.3 | 24.3 | 0.00 |
可见椰油酰水解胶原钾、水解贝壳硬蛋白的功能近似(可见对比例2和3)，并且水解贝壳硬蛋白在用量较少的情况下其效用略强于椰油酰水解胶原钾；
椰油酰水解胶原钾、水解贝壳硬蛋白在共同使用的情况下能够和3-甘油抗坏血酸、维生素C能够产生较强的内部协同效应。
CN115501135A公开了一种抗衰功效组合物，包括补骨脂酚：0.1份～2份；多肽：0.001份～0.5份；透明质酸及其盐类：0.05份～3份，以上份数为质量份数。本发明可以从不同的皮肤层发挥抗皱作用，起到协同增效的功能，其中利用补骨脂酚发挥的长效抗皱紧致功效，刺激I型胶原蛋白和III胶原蛋白的生成，利用透明质酸及其盐类抑制炎症反应、清除自由基等生理功能，与HA的保湿、成膜作用相结合，可增强皮肤弹性，紧致皮肤，达到抗皱消炎、嫩肤防衰老的功效。本发明组合物除了皱纹、紧致的功效外，在表皮厚度增加表现非常突出，能够修复皮肤屏障，改善皮肤的粗糙度
进一步的，所述的多肽包含乙酰基六肽-8、蜂毒素、蛇毒肽(二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐)、芋螺肽(精氨酸/赖氨酸多肽)中的一种或几种。
作为改进，所述的多肽包含能够促进胶原蛋白和弹性蛋白生产的多肽。
进一步的，所述的多肽包含棕榈酰三肽-1、棕榈酰五肽-4、棕榈酰三肽-5中的一种或几种。
作为改进，所述的多肽包含金属离子载体的多肽。
进一步的，所述的多肽包含蓝铜肽。
D5：CN115487110A公开了一种具有抗衰功效的组合物，包含楝树提取物、多肽、腺苷、鼠李糖、酵母提取物、补骨脂酚、狗脊提取物、低级醇以及水。
其说明书记载：作为优选，按照质量份数计，所述组合物包含80-120份楝树提取物，100-200份多肽，50-100份腺苷，100-200份鼠李糖，60-100份酵母提取物，50-100份补骨脂酚，40-100份狗脊提取物、200-600份低级醇以及水80-655份。
可以理解多肽对于抗衰是有正面作用的。
上述的配方，并未明确指出其可能从皮肤衰老的内因和外因方面均可达到较好的抗衰老效果。
因此，如何提供一种同时具备从内因和外因两方面抗皮肤衰老的化妆品或有效组合物是具有重要实际意义的问题，也是本发明所要解决的技术问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种具备从内因和外因两方面抗皮肤衰老的有效组合物。本发明提供了一种适用于化妆品的皮肤抗衰老组合物，实现了从内因、外因方面协助皮肤角质层活性增加、降低外界因素对皮肤的影响，提高椰油酰水解胶原钾的功能，显著减缓了皮肤的衰老进程、一定程度上有效祛除了皮肤衰老迹象。
本发明的第二个目的在于提供含有上述皮肤抗衰老组合物的应用。
为达到第一个发明目的，本发明采用以下技术方案：
一种皮肤抗衰老组合物，包括一种皮肤抗衰老组合物，包括椰油酰水解胶原钾、六肽-11、羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物，椰油酰水解胶原钾、六肽-11、羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物的比例为0.5～5：0.3-2：0.2-1：0.5-2。
优选地，按照重量份计，包括以下组分：椰油酰水解胶原钾0.5～2份，六肽-11 0.5～1份，羟基频哪酮视黄酸酯0.3～0.7份，葡萄籽提取物0.8～1.4份。
优选的，上述的一种皮肤抗衰老组合物，按照重量份计，包括以下组分：椰油酰水解胶原钾0.5～1份，六肽-11 0.6～0.9份，羟基频哪酮视黄酸酯0.4～0.6份，葡萄籽提取物0.9～1.2份。
需要说明的是：本发明所述的椰油酰水解胶原钾、六肽-11、羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物各成分均指代实际使用的商品名，非纯含量组分；
具体来说：
椰油酰水解胶原钾：商品名为HUZUMI HADA，供应商为SEIWA KASEI；
六肽-11：商品名为ZPC Tighten032S，供应商为湃肽生物科技有限公司；
羟基频哪酮视黄酸酯：商品名为Granactive Retinoid，供应商为GrantIndustries；
葡萄籽提取物：商品名为Grape Seed Extract，供应商为Morechem Co，.LTD；
即：一种皮肤抗衰老组合物，包括一种皮肤抗衰老组合物，包括HUZUMI HADA、ZPCTighten032S、Granactive Retinoid、Grape Seed Extract，HUZUMI HADA、ZPCTighten032S、Granactive Retinoid、Grape Seed Extract的重量比例为0.5～5：0.3-2：0.2-1：0.5-2。
同时，本发明还公开了一种如上任一所述的皮肤抗衰老组合物作为日用品中皮肤抗衰老活性成分的用途。
最后，本发明还公开了一种日化品，含有0.1～20wt％的的如上任一所述的皮肤抗衰老组合物。
优选地，含有1.5～10wt％的的如上任一所述的皮肤抗衰老组合物。
在上述的日化品中，所述日化品为洁面乳、洗面奶、面膜中的一种。
在上述的日化品中，所述日化品的剂型为喷雾、乳液或膏霜。
所述日化品还含有保湿剂、增稠剂、防腐剂。
本发明化妆品中可用的保湿剂包括但不限于小分子保湿剂如银耳多糖、甘油、透明质酸钠、1,2-丙二醇、丁二醇甘油、丙二醇、丁二醇、甲基丙二醇、乳酸、乳酸钠、吡咯烷酮羧酸钠(PCA-Na)、尿素、赤藓糖醇、木糖醇、鼠李糖、甘露糖、山梨醇、海藻糖、棉籽糖、麦芽四糖、菊粉、艾素糖、酵母提取物、小分子肽、甘油葡糖苷、聚甘油等，高分子保湿剂如透明质酸、普鲁兰多糖、银耳多糖、β-葡聚糖、γ-聚谷氨酸钠、酸豆籽多糖、小核菌胶、芦芭胶、芦芭油等。
本发明化妆品中可用的增稠剂包括但不限于月桂醇、肉豆蔻醇、C12-15醇、C12-16醇、癸醇、己醇、辛醇、鲸蜡醇、硬脂醇、山嵛醇、月桂酸、C18-36酸、亚油酸、亚麻酸、肉豆蔻酸、硬脂酸、山嵛酸、黄原胶、海藻糖、卡波姆、椰油二乙醇酰胺、椰油单乙醇酰胺、椰油单异丙醇酰胺、椰油酰胺、月桂酰-亚油酰二乙醇酰胺、月桂酰-豆蔻酰二乙醇酰胺、异硬脂二乙醇酰胺、亚油二乙醇酰胺、豆蔻二乙醇酰胺、豆蔻单乙醇酰胺、油二乙醇酰胺、棕榈单乙醇酰胺、蓖麻油单乙醇酰胺、芝麻二乙醇酰胺、大豆二乙醇酰胺、硬脂二乙醇酰胺、硬脂单乙醇酰胺、硬脂单乙醇酰胺硬脂酸酯、硬脂酰胺、油酸钾、硬脂酸钾。
本发明化妆品中可用的防腐剂包括但不限于苯氧乙醇、苯甲醇、尼泊金酯、对羟基苯乙酮、乙基己基甘油、甘油癸酸酯、山梨坦辛酸酯、甘油十一碳烯酸酯。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
首先，单就各组分的单独功能来说：
椰油酰水解胶原钾是椰油酰氯与胶原蛋白多肽(来源于鱼鳞)的反应产物，比胶原蛋白多肽的渗透性更强，其通过连一个脂肪酸，生成了胶原蛋白衍生物，提升了其原有胶原蛋白的渗透性；成纤维细胞是胶原蛋白合成的开始，对维护健康皮肤拥有非常大的作用，椰油酰水解胶原钾作为本配方的主要成分，其能够改善角质层水分，恢复角质功能，提高真皮胶原蛋白纤维含量；
六肽11与抗氧化基因(nrf2、keap1)表达相关；六肽-11与葡萄籽提取物可保护细胞免受氧化应激介导的过早衰老，六肽-11可激活人体内源性抗氧化通路，在受到ROS(氧自由基)信号刺激后，存在于细胞质中的Keap1-Nrf2结合体会随之分解，Nrf2会由细胞质转移至细胞核中与与抗氧化反应元件(ARE)结合，激活下游基因的转录，进而翻译出一系列相关蛋白，保护细胞免受氧化应激而凋亡。
葡萄籽提取物是天然提取物，具有非常优异的抗氧化活性，花青素具有紫外线遮蔽功能，同时，葡萄籽提取物中的花青素、儿茶素兼具弹性蛋白酶、胶原蛋白酶的抑制作用，降低弹性蛋白以及胶原蛋白降解。
羟基频哪酮视黄酸酯是由视黄酸和频哪醇脱水缩合形成的，相比于视黄三兄弟(醇、醛、酸)，其稳定性更高、刺激性小，而且由于分子量小，易于透皮吸收，可以直接与视黄酸受体(RARs)结合，刺激转化生长因子(TGF)的合成来刺激纤维细胞的活性，诱导胶原蛋白和纤连蛋白的合成，并抑制角质形成细胞产生胶原蛋白酶，阻断胶原酶的活性，增长转化生长因子(TGF)和形成前胶原蛋白来刺激胶原蛋白和糖胺聚糖(GAG)的合成，增强皮肤弹性。具体功效如下：改善细纹和皱纹；抗氧化；淡化表皮色素、降低皮肤粗糙度、减少老年斑、减少皮肤脱皮；治疗痤疮；控油抑制皮脂分泌；促进胶原蛋白生成；相比视黄醇稳定性更高、刺激更低。
从微胶原、六肽11、葡萄籽提取物、羟基频哪酮视黄酸酯四者之间的协同关系来说，具体原理如下：
针对于内因(皮肤角质功能低下，角质层水分降低引起角质层肥厚，导致皮肤失去柔韧性，生皱纹、真皮胶原蛋白纤维减少、胶原蛋白纤维束构造紊乱)导致的皮肤衰老的问题，本发明的组合物解决皮肤衰老的问题主要注意以下三个方面：
一方面，促进成纤维细胞生成、激活成纤维细胞的活性；因为成纤维细胞是合成胶原蛋白、透明质酸等物质的主要生产者；
一方面，抑制胶原蛋白、纤连蛋白等蛋白分解，而抑制蛋白的分解的最重要的途径就是抑制蛋白酶的活性；
一方面，抑制细胞氧化应激而凋亡；
基于该方向，本发明的方案在基于内因导致的皮肤衰老的问题的原理在于：
1.通过椰油酰水解胶原钾和羟基频哪酮视黄酸酯，两者均具有促进成纤维细胞生成的功能，其中羟基频哪酮视黄酸酯还具有抑制胶原蛋白酶生成的功能；通过椰油酰水解胶原钾和羟基频哪酮视黄酸酯实现成纤维细胞的活力恢复和成纤维细胞再生的目的；
2.通过羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物来抑制基质金属蛋白酶活性、胶原蛋白酶活性的功能，实现降低胶原蛋白分解的目的。
3.通过六肽-11、葡萄籽提取物来提高细胞抗氧化能力，激活人体内源性抗氧化通路，降低细胞氧化刺激的凋亡速度。
通过实验，可以发现，椰油酰水解胶原钾和羟基频哪酮视黄酸酯两者在功能上虽然存在重合，但是两者具有协同作用；六肽11、葡萄籽提取物两者在功能上虽然存在重合，但是两者也具有协同作用。羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物两者在功能上虽然存在重合，但是两者也具有协同作用。
针对外因(紫外线引起的MMP活化或增多、表皮透明质酸减少)导致的皮肤衰老的问题，《日光照射对皮肤的影响和防护技术介绍》，姜义华等著一文中有阐述了紫外线、红外线、可见光对皮肤的影响，并针对上述影响给出的解决机制在于：在传统日光防护措施，即在抵抗UVA和UVB的基础上，有必要采用相对应的措施，抑制炎症性衰老进程、抑制基质金属蛋白酶(MMP)、抑制AhR和TRPV1等措施来协同抑制UVA、UVB、IRA等所引发的光化学、光生物学效应，更全面地降低对皮肤的伤害；
基于该方向，本发明选择了上述四种物质的组合，上述四种物质其机理作用如下：
1.遮蔽UVB和UVA，在强紫外线的环境下仅采用本发明的组合物来达到完美的抗衰效果是不现实的，需要使用专用的抵抗UVA和UVB的日化品；本组合物的主要作用在于在受到环境因素影响后的肌肤的修复问题；因此，在本发明的组合物中，通过加入葡萄籽提取物，其内含有对于阳光遮蔽力比较强的花青素，能够协同专用的抵抗UVA和UVB的日化品，降低UVA和UVB对皮肤的影响，或，在非恶劣的环境下，提高皮肤对较为微弱的UVA和UVB的抵抗力；
2.抗氧化，抗氧化是降低皮肤炎症，抑制炎症型衰老的重要手段，本发明中，采用葡萄籽提取物作为主要成分，结合羟基频哪酮视黄酸酯，可有效解决炎症性衰老的问题；同时，我们发现羟基频哪酮视黄酸酯对于葡萄籽提取物的抗氧化、降低肌肤炎症是有明显的促进作用的；同时，结合六肽-11，可降低细胞的氧化应激凋亡速度；
3.如内因所述的促进成纤维细胞生成、抑制成纤维细胞死亡、激活成纤维细胞的活性，采用了椰油酰水解胶原钾和羟基频哪酮视黄酸酯进行协同解决；
4.如内因所述的抑制胶原蛋白、纤连蛋白等蛋白分解，采用了羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物来协同实现；
5.如内因所述的抑制细胞氧化刺激的凋亡速度，采用六肽-11、葡萄籽提取物来协同实现。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
第一部分组合物功效测试
实施例1～5
一种皮肤抗衰老组合物，配方如表1所示。
表1
皮肤抗衰老组合物的制备方法包括如下步骤：将四者原料混合均匀即可。
对比例1～13
一种组合物，配方如表2所示。
表2
上述对比例的各原料的功效介绍：
补骨脂酚：抗氧化、抗炎，同时业内均有共识，其在抗衰老方面具有和视黄醇具有类似的功效；
姜花根提取物：抗氧化剂，抗炎剂，同时，其也是一款皮肤调理剂；
黄岑根提取物：抗氧化剂，抗炎剂(黄芩苷黄芩素其主要作用)；
迷迭香提取物：抗氧化剂，抗炎剂，对胶原蛋白酶和弹性蛋白酶有抑制作用；
重组III型人源化胶原蛋白：抗炎修复效果，能够为皮肤补充胶原蛋白；
水解贝壳硬蛋白：增生成纤维细胞；
乙酰基六肽-8：具有皮肤渗透性，能够补充胶原蛋白并且抑制皱纹，是肉毒杆菌的替代品；
蓝铜肽：抗氧化性、抗炎、有效促进胶原蛋白的产生，增加血管生长和抗氧化能力，并刺激葡糖胺聚糖产生，帮助皮肤恢复自我修补的能力。
各原材料的信息如下：
补骨脂酚：商品名为
补骨脂酚纳米脂质体，供应商为
浦瑞生物；
视黄醇棕榈酸酯：商品名为NB-960，供应商为广州市泛海精细化工有限公司；
姜花根提取物：商品名为SAKADIKIUM，供应商为广州市百好博有限公司；
黄岑根提取物：商品名为VITASOURCE，供应商为PROVITAL；
迷迭香提取物：商品名为NB-371，供应商为广州市泛海精细化工有限公司；
重组III型人源化胶原蛋白：商品名为重组人胶原蛋白III型，供应商为武汉科昕生物；
水解贝壳硬蛋白：商品名为Pearlami塔希提黑珍珠，供应商为奥尔本米乐；
乙酰基六肽-8：商品名为
KZ02Y01，供应商为山东济肽生物科技有限公司；
蓝铜肽：商品名为
XH01Y02，供应商为山东济肽生物科技有限公司。
效果证明实验
性能测试1：DPPH自由基清除率测试
外界及机体自身的因素可以导致自由基的产生，自由基具有极强的氧化能力，它们通过氧化反应攻击任何生物分子，与脂质、糖类、蛋白质、脱氧核糖核酸等大分子物质发生各种氧化反应，引起变性、交联、断裂等氧化损伤，进而导致细胞结构和功能的破坏，以及机体组织的损伤和器官的病变，在皮肤上就表现为老化，皱纹等。因此DPPH自由基清除率是抗皱功效的一个重要指标之一。
取实施例对比例制备的抗衰老组合物，采用去离子水稀释至5％；然后各取2mL与8mL1×10-4mol/L的DPPH-乙醇溶液混合，震荡均匀后置于25℃的暗处避光反应30min，再将混合液置于离心机中，7000rpm离心5min，取离心后的上清液于517nm波长下测量吸光度A1；取2mL无水乙醇进行相同的操作，测量吸光度A2；取2mL去离子水进行相同的操作，测量吸光度A3；以维生素C溶液作为阳性对照，每组设置3组平行实验计算平均值，根据DPPH清除率公式计算不同组别的抗衰修复组合物的自由基清除能力。
测试结果可参考表3；
表3实施例和对比例的自由基清除能力的测试结果
| 自由基清除率/％ | |
| 实施例1 | 79 |
| 实施例2 | 89 |
| 实施例3 | 86 |
| 实施例4 | 82 |
| 实施例5 | 84 |
| 实施例6 | 81 |
| 对比例1 | 80 |
| 对比例2 | 82 |
| 对比例3 | 69 |
| 对比例4 | 60 |
| 对比例5 | 74 |
| 对比例6 | 81 |
| 对比例7 | 78 |
| 对比例8 | 67 |
| 对比例9 | 72 |
| 对比例10 | 84 |
| 对比例11 | 77 |
| 对比例12 | 80 |
| 对比例13 | 82 |
测试结果分析：
通过以上结果分析可见，在抗氧化活性方面，上述实施例和大部分的对比例在抗氧化活性方面并没有明显区别，需要注意的是在缺失羟基频哪酮视黄酸酯或葡萄籽提取物后，其抗氧化活性具有较为明显的降低，说明，在抗氧化方面，羟基频哪酮视黄酸酯或葡萄籽提取物扮演着最重要的作用。
性能测试2：弹性蛋白酶活性抑制测试
实验方法参考《苦木生物碱对弹性蛋白酶的抑制活性评价》，杨文文等人著，1.2节方法中记载。
实施例和对比例对应的样品均采用去离子水稀释至总浓度为2％。
实验步骤如下：
溶液配制：弹性蛋白酶PBS溶解，配成10U/mL溶液，-40℃保存备用，使用前用PBS稀释至2.5U/mL。
底物(N-琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-p-硝基苯胺)用10％DMSO(DMSO:PBS＝1:9)溶解，配制成10mmol/L溶液，-80℃保存备用，使用前稀释至200μmol/L。
对弹性蛋白酶的抑制活性测定:取配制好的酶液135μL、15μL样品溶液(2％浓度的样品)加入至1.5mL离心管中，37℃保温反应5min后加入150μL底物，同时设100％酶活性对照组(等体积DMSO代替样品)、空白底物组(等体积10％DMSO代替底物)、空白对照组，37℃保温反应60min后，离心(10000r/min,5min)，取上清液200μL于96孔酶标孔中，405nm读取吸光值。反应总体积为300μL，药物在反应体系中的终浓度为0.5mmol/L。
按照以下公式计算药物对弹性蛋白酶的抑制率；
抑制率(％)＝100*[1-(A药物一A空白底物)/A100％酶活]；
测试结果参考表4；
表4实施例和对比例的弹性蛋白酶活性抑制率
测试结果分析：
以实施例4为基准，可见对比例1-4的抑制效果弱于实施例4，具体来说：
对比例1＞对比例2＞对比例4＞对比例3，说明两点：1.从单一角度来说，抑制蛋白酶的作用，椰油酰水解胶原钾是最弱的；其他三者都有较为重要的抑制蛋白酶活性的作用；同时，以对比例1和3为例，当羟基频哪酮视黄酸酯显著增加时，蛋白酶活性抑制率并未显示明显增加，这说明在本发明的配方中，羟基频哪酮视黄酸酯以0.2的比例存在是较佳的；同时，对比例3可证明，缺失羟基频哪酮视黄酸酯对于整体活性抑制率影响较为明显，虽然只降低了0.19，但是可见其重要性；2.从综合作用的角度来说，以对比例2和对比例4为例，虽然六肽-11、葡萄籽提取物具或多或少具有抑制蛋白酶活性的作用，但是当其中一者用量很少的时候，其活性抑制效果弱于三者同时以合适比例存在的结果，因此本发明的对比例2和4可证明三者在蛋白酶活性抑制方面具有协同性；
对比例5-13，是针对于同类物替换的原则进行的实验，在本发明的筛选实验中，我们发现，作为删选的对象，其与实施例4的配方用量完全相同的情况，其无法达到如实施例4的最优的蛋白酶的抑制结果。可见，本发明的椰油酰水解胶原钾、羟基频哪酮视黄酸酯、六肽11、葡萄籽提取物是经过若干次实验、筛选得到的最优配方。
第二部分应用配方及其性能测试
将本发明的配方以5％的浓度加入到精华液配方中；配方参考下表5；
表5应用配方表
其中，羟基频哪酮视黄酸酯、HAZUMI-HADA、六肽-11、葡萄籽提取物的总重量为5份。控制羟基频哪酮视黄酸酯、椰油酰水解胶原钾、六肽-11、葡萄籽提取物四者有效成分按照上述的实施例和对比例。
其制备过程如下：
1：将A项加入乳化锅升温，均质分散好；
2：将B项预先混合好，再加入乳化锅，均质分散好；
3：降温至40度加入C项，搅拌分散好。
将实施例4和对比例1、2、3、4、5、11、12分别加入到上述的配方中，得到多个样品，实施例4对应的样品为样品1；对比例1、2、3、4、5、11、12对应的样品为对比样品1-7；
针对样品1和对比样品1-4分别进行淡化皱纹效果评价实验；
测试项目3：淡化皱纹效果评价实验
寻找80名志愿者，年龄在18-50周岁，将志愿者随机分为8组，每组10人，测试对应的样品为样品1以及对比样品1-7；测试前使用VISIA面部图像分析仪拍摄照片，随后请志愿者连续使用待测样品，每日使用2次，连续使用28天，在第4周进行回访，用VISIA拍摄面部照片并进面部拍照，随后以仪器软件计算出使用前后面部皱纹改善率；
具体结果参考表7；
表7使用前后志愿者面部皱纹改善率
| 面部皱纹改善率 | |
| 样品1 | 36％ |
| 对比样品1 | 28％ |
| 对比样品2 | 30％ |
| 对比样品3 | 25％ |
| 对比样品4 | 26％ |
| 对比样品5 | 22％ |
| 对比样品6 | 17％ |
| 对比样品7 | 19％ |
结果分析：
通过测试结果可以发现，实施例4的皱纹淡化率是最好的，对比样品1-4其皱纹淡化率并不佳，我们推测其原因在于：
对比例1和对比例3可以证明，椰油酰水解胶原钾和羟基频哪酮视黄酸酯作为主要的促进成纤维细胞生成、提高成纤维细胞活力的主要成分，两者以较为合适的比例同时存在时，会优于两者单一形式或者一者以极少量的形式存在，其可能的原因在于：两者对于成纤细胞的保护方向不同导致，前者从防止氧化对成纤维细胞造成的损伤，增生成纤维细胞的角度其作用，后者从刺激转化生长因子(TGF)的合成来刺激纤维细胞的活性的角度去提升成纤维细胞的活性，所以从这个角度来说，全方位的对成纤维细胞的保护、刺激和增生是实现胶原蛋白有效合成的非常重要的手段；
对比例2、4以及上述的测试项目2可以证明，六肽11、羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物三者在于蛋白酶抑制、细胞应激凋亡方面有较好的协同效果，同时，该协同效果反映到应用测试中，就会表现为皱纹的减少；本发明中选择六肽11、羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物作为用于抑制蛋白酶活性、抑制细胞凋亡的有效成分，其主要原因在于：1.六肽-11与葡萄籽提取物可保护细胞免受氧化应激介导的过早衰老，六肽-11可激活人体内源性抗氧化通路，在受到ROS(氧自由基)信号刺激后，存在于细胞质中的Keap1-Nrf2结合体会随之分解，Nrf2会由细胞质转移至细胞核中与与抗氧化反应元件(ARE)结合，激活下游基因的转录，进而翻译出一系列相关蛋白，保护细胞免受氧化应激而凋亡；2.羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物在抑制胶原蛋白酶、弹性蛋白酶活性抑制方面各自有独立的功效且配合使用时，具有较好的协同效果。
同时，通过对比样品5-7可以证明，其他类似物在降低皱纹、提高胶原蛋白量的方面不及本发明的配方。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (7)
1.一种皮肤抗衰老组合物，其特征在于，包括椰油酰水解胶原钾、六肽-11、羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物，椰油酰水解胶原钾、六肽-11、羟基频哪酮视黄酸酯、葡萄籽提取物的比例为0.5～5：0.3-2：0.2-1：0.5-2。
2.根据权利要求1所述的一种皮肤抗衰老组合物，其特征在于，按照重量份计，包括以下组分：椰油酰水解胶原钾0.5～2份，六肽-11 0.5～1份，羟基频哪酮视黄酸酯0.3～0.7份，葡萄籽提取物0.8～1.4份。
3.如权利要求1或2所述的皮肤抗衰老组合物作为日用品中皮肤抗衰老活性成分的用途。
4.一种日化品，其特征在于，含有0.1～20wt％的如权利要求1或2所述的皮肤抗衰老组合物。
5.根据权利要求4所述的日化品，其特征在于，含有1.5～10wt％的如权利要求1或2所述的皮肤抗衰老组合物。
6.根据权利要求4所述的日化品，其特征在于，所述日化品为洁面乳、洗面奶或面膜。
7.根据权利要求4所述的日化品，其特征在于，所述日化品的剂型为喷雾、乳液或膏霜。
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