CN116102577A - 一种高纯度他克莫司及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药技术领域，具体公开一种高纯度他克莫司及其制备方法。本发明通过将他克莫司发酵液分离所得的菌丝体经短链醇溶剂和盐溶液浸泡，初步去除菌丝体中含有的色素及其它蛋白质杂质，然后用切割分子量为200Da‑300Da的纳滤浓缩器浓缩除去离子以及小分子杂质后，向浓缩液中加入十二烷基苯磺酸钠，改变他克莫司和杂质在母液和晶体中的分配比，增大杂质在母液的溶解度，使得他克莫司充分结晶析出，进一步去除发酵过程中所产生的次级代谢产物，提高目的产物的质量，最后经动态轴向压缩柱进行纯化分离，充分去除子囊霉素和二氢他克莫司等类似物杂质，大幅度提高了他克莫司的纯度，最终得到含量可达99.98％以上的高纯度他克莫司。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种高纯度他克莫司及其制备方法。
背景技术
他克莫司(tacrolimus)，是一种大环内酯类的免疫抑制剂，广泛应用于肝脏、胰腺、肾脏、心脏和肺等实体器官移植后的抗排异治疗。他克莫司于1993年6月7日首次在日本批准上市，商品名为Prograf，随后相继在英国、美国、德国等几十个国家上市，开发剂型有胶囊剂、注射剂和软膏剂。
现代工业主要采用筑波链霉菌、链霉菌等进行微生物发酵，将发酵液进行提取纯化获得他克莫司。由于他克莫司的结构复杂，发酵液中还含有他克莫司类似物，如子囊霉素和二氢他克莫司。因此，难以通过常规的纯化技术纯化得到高纯度的他克莫司。
目前，高纯度他克莫司的制备方法有：将发酵液通过XAD1180树脂进行多次纯化后，收集他克莫司纯度高的部分，用乙酸乙酯萃取，浓缩，加入乙酸乙酯、环己烷和水进行结晶，并重复结晶2-3次，得到纯度为99.84％的他克莫司产品，收率仅为32.6％。该方法步骤繁琐，需用树脂进行多次纯化和多次重结晶，产品收率很低，仅有32.6％左右。还有文献报道，将他克莫司发酵液用二氯甲烷萃取，萃取液浓缩后再用乙酸乙酯结晶。该方法的缺点是萃取剂二氯甲烷不但毒性大，而且沸点低，萃取剂回收率低，造成生产成本较高。因此，研发一种操作简单、收率和纯度均较高的他克莫司的制备方法，对于扩大他克莫司在医药领域的进一步开发和应用具有十分重要的意义。
发明内容
针对现有制备他克莫司的方法存在的操作繁琐、成本高，以及制备得到的他克莫司的收率和纯度较低的问题，本发明提供一种高纯度他克莫司及其制备方法，其主要通过将他克莫司发酵液过滤浸泡、纳滤浓缩、结晶，以及高压层析-液相色谱分离，依次去除他克莫司中杂质及色素，有效提高了他克莫司的纯度和收率。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：
一种高纯度他克莫司的制备方法，包括如下步骤：
步骤a，将他克莫司发酵液分离所得的菌丝体加入短链醇溶剂浸泡，得醇浸泡液；向所述醇浸泡液中加入无机盐溶液，继续浸泡，固液分离，得盐浸泡液；
步骤b，将所述盐浸泡液用切割分子量为200Da-300Da的纳滤浓缩器进行浓缩，得纳滤液；
步骤c，向所述纳滤液中加入十二烷基苯磺酸钠，混合均匀，加入纯化水，结晶，固液分离，洗涤，干燥，得他克莫司粗粉；
步骤d，将所述他克莫司粗粉用极性溶剂溶解后，加入纯化水，混合均匀，加入动态轴向压缩柱中，以极性溶剂和纯化水的混合溶液为层析液进行洗脱，收集目标组分，得层洗液；其中，所述动态轴向压缩柱的填料为UniSil10-120C8 UItra Plus，所述极性溶剂为乙醇、甲醇或乙腈中至少一种；
步骤e，将所述层析液浓缩至无极性溶剂，得浓缩液；向所述浓缩液中加入乙酸酯类溶剂进行萃取，将萃取液浓缩至干，加入乙醇溶液溶解，结晶，固液分离，洗涤，干燥，得他克莫司产品。
相对于现有技术，本发明提供的高纯度他克莫司的制备方法，通过将他克莫司发酵液分离所得的菌丝体经短链醇溶剂和无机盐溶液浸泡，初步去除菌丝体中含有的色素及其它蛋白质杂质，然后用切割分子量为200Da-300Da的纳滤浓缩器浓缩除去离子以及小分子杂质后，向浓缩液中加入十二烷基苯磺酸钠，改变他克莫司和杂质在母液和晶体中的分配比，增大杂质在母液的溶解度，使得他克莫司充分结晶析出，进一步去除发酵过程中所产生的次级代谢产物，提高目的产物的质量，最后以填料为UniSil 10-120C8 UItra Plus的动态轴向压缩柱进行纯化分离，充分去除子囊霉素和二氢他克莫司等类似物杂质，大幅度提高了他克莫司的纯度，最终得到含量可达99.98％以上的高纯度他克莫司产品。
本发明仅通过浸泡、纳滤、结晶以及高压层析等简单工艺就可将他克莫司发酵液中的色素、离子、蛋白质和类似物杂质分离除去，且纯化效率高，有利于实现快速、大量生产精制他克莫司产品的目的，产品纯度可达到99.98％以上，提高了临床用药的安全性，且无需经过大孔吸附树脂多次纯化，有效简化了他克莫司的制备工艺，降低了生产成本，具有极高的推广应用价值。
优选的，步骤a中，所述短链醇溶剂为甲醇、乙醇或异丙醇中至少一种。
优选的，步骤a中，所述无机盐溶液为质量浓度20％-25％的硫酸铝溶液、黄血盐溶液或硫酸锌溶液中至少一种。
优选的，步骤a中，所述醇浸泡液中短链醇溶剂的含量为70％-75％。
优选的，步骤a中，所述无机盐溶液的加入量为醇浸泡液体积的4％-6％。
优选的，步骤a中，浸泡时间均为2h-3h。
优选的短链醇溶剂、无机盐以及加入量，可充分去除菌丝体中含有的色素及其它蛋白质杂质。
优选的，步骤b中，浓缩至效价10万μg/mL-15万μg/mL。
优选的浓缩液浓度，有利于提高他克莫司的纯度和收率，同时，还有利于减少后续结晶时纯化水的加入量。
优选的，步骤c中，所述十二烷基苯磺酸钠与纳滤液的质量体积比为0.02-0.05:1，其中，质量单位g，体积单位mL。
优选的，步骤c中，所述纯化水与纳滤液的体积比为0.75-1.0:1。
优选的，步骤c中，所述纯化水采用缓慢加入的方式，加入时间控制为1h-2h。
优选的，步骤c中，结晶温度为15℃-35℃，结晶时间为12h-24h。
优选的十二烷基苯磺酸钠、纯化水的加入量以及结晶条件，可使他克莫司充分结晶析出，且减少晶体中夹杂杂质的含量，提高他克莫司与杂质的分离效果，进而有利于提高后续高压层析的纯化效果和效率。
进一步地，步骤c中，采用45wt％-50wt％的乙醇溶液对滤饼进行洗涤。
优选的，步骤d中，所述他克莫司粗粉的上样量为柱体积的0.8％-1.0％，其中，上样量的单位为g，柱体积的单位为mL。
优选的，步骤d中，所述极性溶剂与他克莫司粗粉的体积质量比为8-12:1，其中，体积单位mL，质量单位g。
优选的，步骤d中，所述纯化水的加入量为溶解液体积的20％-25％。
优选的，步骤d中，所述层析液中极性溶剂的含量为55wt％-65wt％。
优选的，步骤d中，层析流速为5BV/h-6BV/h。
优选的，步骤d中，所述动态轴向压缩柱的直径为80mm，填料的粒径10μm，填料的孔径为
填料的高度为250mm。
优选的高压层析条件，有利于将他克莫司与杂质，尤其是子囊霉素和二氢他克莫司等类似物进行有效分离，在较短的时间内取得较好的分离效果，提高分离效率。
需要说明的是，步骤d中，动态轴向压缩柱的填装步骤为：将900g色谱填料用2.5L异丙醇匀浆得到匀浆液，将匀浆液加入动态轴向压缩柱，排出异丙醇并压实色谱填料，完成动态轴向压缩柱的填装，然后用层析液平衡动态轴向压缩柱。
需要说明的是，步骤d中，层析过程中用高效液相色谱监测，收集子囊霉素＜0.1％，二氢他克莫司＜0.1％的层析液。
优选的，步骤e中，所述乙酸酯类溶剂为乙酸乙酯或乙酸丁酯中的一种或两种。
优选的，步骤e中，所述乙酸酯类溶剂与浓缩液的体积比为0.8-1.0:1。
优选的，步骤e中，所述乙醇溶液的浓度为45wt％-50wt％，溶解后体系中他克莫司的效价为15μg/mL-30万μg/mL。
优选的，步骤e中，所述结晶的温度为2℃-8℃，结晶时间为4h-6h。
示例性的，步骤e中，采用45wt％-50wt％的乙醇溶液对滤饼进行洗涤。
优选的萃取溶剂和结晶条件可进一步提高他克莫司的纯度。
需要说明的是，步骤e中，采用酒精计检测浓缩液中是否含有极性溶剂。
本发明还提供了一种高纯度他克莫司，由上述任一项所述的高纯度他克莫司的制备方法制得。
本发明通过简单工艺有效提高了他克莫司的纯度，使他克莫司纯度达99.98％以上，从而提高了他克莫司的临床应用的安全性，适合工业化规模生产，对于扩大他克莫司在医药领域的开发和应用具有十分重要的意义，市场前景广阔。
附图说明
图1为实施例1步骤d的制备色谱图；
图2为实施例1步骤e制备得到的他克莫司产品的色谱图；
图3为实施例2步骤d的制备色谱图；
图4为实施例2步骤e制备得到的他克莫司产品的色谱图；
图5为实施例3步骤d的制备色谱图；
图6为实施例3步骤e制备得到的他克莫司产品的色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
为了更好的说明本发明，下面通过实施例做进一步的举例说明。
以下实施例中所使用的动态轴向压缩柱的制备方法为：将900g粒径10μm的UniSil10-120C8 UItra Plus硅胶填料用2.5L异丙醇匀浆得到匀浆液，将匀浆液加入动态轴向压缩柱(高度650mm，直径80mm)，排出异丙醇并压实色谱填料，填料的填装高度为250mm，完成动态轴向压缩柱的填装，然后用层析液平衡动态轴向压缩柱。
实施例1
本实施例提供一种高纯度他克莫司的制备方法，包括如下步骤：
步骤a，取发酵单位为1024μg/mL的他克莫司发酵液50L，将他克莫司发酵液进行真空抽滤，留取菌丝体，将菌丝体加入浸泡罐中，向浸泡罐中加入40L无水乙醇，用酒精计检测浸泡液中乙醇含量72％，室温浸泡2h，再向发酵罐中加入2L硫酸铝溶液(450g硫酸铝溶于2L去离子水)，室温浸泡2h，采用板框过滤器进行过滤，留取浸泡液40L；
步骤b，将上述浸泡液加入D2540纳滤浓缩器中进行预浓缩，再转入D1812纳滤浓缩器浓缩至效价138450μg/mL，浓缩液体积300mL；
步骤c，向所述浓缩液中加入6g十二烷基苯磺酸钠，搅拌，缓慢加入纯化水225mL，加入时间控制为1h，加水结束后室温结晶14h，过滤，用50％乙醇溶液淋洗滤饼，真空干燥箱40℃干燥，得粗粉41.95g；
步骤d，每批粗粉取10g，用100mL无水乙醇溶解，再加入25mL纯化水，然后上样至1.25L的动态轴向压缩柱中，以60％乙醇水溶液进行层析，层析流速为5VB/h，收集顶峰平台部分层析液，合并所有层析液，体积为8200mL，效价4095μg/mL；
步骤e，将层析液浓缩至无乙醇，加入700mL乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩至干，趁热加入172mL的50％乙醇水溶液溶解，降温至6℃，结晶5h，抽滤，用50％乙醇溶液淋洗滤饼，真空干燥箱40℃干燥，得他克莫司产品23.15g，HPLC纯度99.99％，二氢他克莫司0.01％，总收率45.12％。
本实施例步骤d的制备色谱图如图1所示，步骤e制备得到的他克莫司产品的色谱图如图2所示。
实施例2
本实施例提供一种高纯度他克莫司的制备方法，包括如下步骤：
步骤a，取发酵单位为1117μg/mL的他克莫司发酵液50L，将他克莫司发酵液进行真空抽滤，留取菌丝体，将菌丝体加入浸泡罐中，向浸泡罐中加入45L无水甲醇，用酒精计检测浸泡液中甲醇含量75％，室温浸泡2h，再向发酵罐中加入2L黄血盐溶液(475g硫酸铝溶于2L去离子水)，室温浸泡2h，采用板框过滤器进行过滤，留取浸泡液45L；
步骤b，将上述浸泡液加入D2540纳滤浓缩器中进行预浓缩，再转入D1812纳滤浓缩器浓缩至效价148450μg/mL，浓缩液体积300mL；
步骤c，向所述浓缩液中加入15g十二烷基苯磺酸钠，搅拌，缓慢加入纯化水300mL，加入时间控制为2h，加水结束后室温结晶16h，过滤，用50％乙醇溶液淋洗滤饼，真空干燥箱40℃干燥，得粗粉40.95g；
步骤d，每批粗粉取10g，用100mL无水甲醇溶解，再加入25mL纯化水，然后上样至1.25L的动态轴向压缩柱中，以60％甲醇水溶液进行层析，层析流速为6VB/h，收集顶峰平台部分层析液，合并所有层析液，体积为9000mL，效价3892μg/mL；
步骤e，将层析液浓缩至无甲醇，加入700mL乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩至干，趁热加入175mL的50％乙醇水溶液溶解，降温至8℃，结晶6h，抽滤，用50％乙醇溶液淋洗滤饼，真空干燥箱40℃干燥，得他克莫司产品25.18g，HPLC纯度99.98％，子囊霉素0.02％，总收率45.01％。
本实施例步骤d的制备色谱图如图3所示，步骤e制备得到的他克莫司产品的色谱图如图4所示。
实施例3
本实施例提供一种高纯度他克莫司的制备方法，包括如下步骤：
步骤a，取发酵单位为1098μg/mL的他克莫司发酵液50L，将他克莫司发酵液进行真空抽滤，留取菌丝体，将菌丝体加入浸泡罐中，向浸泡罐中加入50L异丙醇，用酒精计检测浸泡液中异丙醇含量71％，室温浸泡2h，再向发酵罐中加入2L硫酸锌溶液(500g硫酸锌溶于2L去离子水)，室温浸泡2h，采用板框过滤器进行过滤，留取浸泡液50L；
步骤b，将上述浸泡液加入D2540纳滤浓缩器中进行预浓缩，再转入D1812纳滤浓缩器浓缩至效价145450μg/mL，浓缩液体积300mL；
步骤c，向所述浓缩液中加入8g十二烷基苯磺酸钠，搅拌，缓慢加入纯化水275mL，加入时间控制为1.5h，加水结束后室温结晶12h，过滤，用50％乙醇溶液淋洗滤饼，真空干燥箱40℃干燥，得粗粉40.05g；
步骤d，每批粗粉取10g，用100mL乙腈溶解，再加入25mL纯化水，然后上样至1.25L的动态轴向压缩柱中，以55％乙腈水溶液进行层析，层析流速为5VB/h，收集顶峰平台部分层析液，合并所有层析液，体积为7900mL，效价4495μg/mL；
步骤e，将层析液浓缩至无乙腈，加入700mL乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩至干，趁热加入168mL的50％乙醇水溶液溶解，降温至6℃，结晶5h，抽滤，用50％乙醇溶液淋洗滤饼，真空干燥箱40℃干燥，得他克莫司产品25.08g，HPLC纯度99.98％，二氢他克莫司0.02％，总收率45.68％。
本实施例步骤d的制备色谱图如图5所示，步骤e制备得到的他克莫司产品的色谱图如图6所示。
对比例1
本对比例提供一种高纯度他克莫司的制备方法，与实施例1步骤相同，不同的仅是动态轴向压缩柱的填料不同，具体步骤如下：
步骤a，取发酵单位为1024μg/mL的他克莫司发酵液50L，将他克莫司发酵液进行真空抽滤，留取菌丝体，将菌丝体加入浸泡罐中，向浸泡罐中加入40L无水乙醇，用酒精计检测浸泡液中乙醇含量72％，室温浸泡2h，再向发酵罐中加入2L硫酸铝溶液(450g硫酸铝溶于2L去离子水)，室温浸泡2h，采用板框过滤器进行过滤，留取浸泡液40L；
步骤b，将上述浸泡液加入D2540纳滤浓缩器中进行预浓缩，再转入D1812纳滤浓缩器浓缩至效价141450μg/mL，浓缩液体积300mL；
步骤c，向所述浓缩液中加入6g十二烷基苯磺酸钠，搅拌，缓慢加入纯化水225mL，加入时间控制为1h，加水结束后室温结晶14h，过滤，用50％乙醇溶液淋洗滤饼，真空干燥箱40℃干燥，得粗粉40.95g；
步骤d，每批粗粉取10g，用100mL无水乙醇溶解，再加入25mL纯化水，然后上样至1.25L的动态轴向压缩柱(COSMOSIL C18 10μm，
)中，以60％乙醇水溶液进行层析，层析流速为5VB/h，收集顶峰平台部分层析液，合并所有层析液，体积为8500mL，效价3075μg/mL；
步骤e，将层析液浓缩至无乙醇，加入700mL乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩至干，趁热加入170mL的50％乙醇水溶液溶解，降温至6℃，结晶5h，抽滤，用50％乙醇溶液淋洗滤饼，真空干燥箱40℃干燥，得他克莫司产品20.45g，HPLC纯度99.25％，二氢他克莫司0.32％，子囊霉素0.43％，总收率39.94％。
步骤d中动态轴向压缩柱的制备方法为：将900g粒径10μm的COSMOSIL C18硅胶填料用2.5L异丙醇匀浆得到匀浆液，将匀浆液加入动态轴向压缩柱(高度650mm，直径80mm)，排出异丙醇并压实色谱填料，填料的填装高度为250mm，完成动态轴向压缩柱的填装，然后用层析液平衡动态轴向压缩柱。
对比例2
本对比例提供一种高纯度他克莫司的制备方法，与实施例3步骤相同，不同的仅是步骤c中结晶不加入十二烷基苯磺酸钠，具体步骤如下：
步骤a，取发酵单位为1098μg/mL的他克莫司发酵液50L，将他克莫司发酵液进行真空抽滤，留取菌丝体，将菌丝体加入浸泡罐中，向浸泡罐中加入50L异丙醇，用酒精计检测浸泡液中异丙醇含量71％，室温浸泡2h，再向发酵罐中加入2L硫酸锌溶液(500g硫酸锌溶于2L去离子水)，室温浸泡2h，采用板框过滤器进行过滤，留取浸泡液50L；
步骤b，将上述浸泡液加入D2540纳滤浓缩器中进行预浓缩，再转入D1812纳滤浓缩器浓缩至效价135450μg/mL，浓缩液体积300mL；
步骤c，向所述浓缩液中缓慢加入纯化水275mL，加入时间控制为1.5h，加水结束后室温结晶12h，过滤，用50％乙醇溶液淋洗滤饼，真空干燥箱40℃干燥，得粗粉30.05g；
步骤d，每批粗粉取10g，用100mL乙腈溶解，再加入25mL纯化水，然后上样至1.25L的与实施例3相同的动态轴向压缩柱中，以55％乙腈水溶液进行层析，层析流速为5VB/h，收集顶峰平台部分层析液，合并所有层析液，体积为5900mL，效价4095μg/mL；
步骤e，将层析液浓缩至无乙腈，加入700mL乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩至干，趁热加入170mL的50％乙醇水溶液溶解，降温至6℃，结晶5h，抽滤，用50％乙醇溶液淋洗滤饼，真空干燥箱40℃干燥，得他克莫司产品14.08g，HPLC纯度99.59％，二氢他克莫司0.15％，子囊霉素0.23％，其他杂质0.03％，总收率25.65％。
对比例3
本对比例提供一种高纯度他克莫司的制备方法，具体步骤如下：
步骤a，取发酵单位为1024μg/mL的他克莫司发酵液50L，将他克莫司发酵液进行真空抽滤，留取菌丝体，将菌丝体加入浸泡罐中，向浸泡罐中加入40L无水乙醇，用酒精计检测浸泡液中乙醇含量72％，室温浸泡2h，再向发酵罐中加入2L硫酸铝溶液(450g硫酸铝溶于2L去离子水)，室温浸泡2h，采用板框过滤器进行过滤，留取浸泡液；
步骤b，将上述浸泡液加入浓缩器中进行减压浓缩，浓缩至乙醇含量1％，浓缩液体积为7L；向所述浓缩液中加入7L乙酸乙酯，搅拌1.5h萃取，萃取液体积为5.5L，效价8820μg/mL，将萃取液用浓缩器进行减压浓缩至膏状，加入250mL无水乙醇溶解，效价132450μg/mL，体积300mL
步骤c，向所述浓缩液中加入6g十二烷基苯磺酸钠，搅拌，缓慢加入纯化水225mL，加入时间控制为1h，加水结束后室温结晶14h，过滤，用50％乙醇溶液淋洗滤饼，真空干燥箱40℃干燥，得粗粉31.24g；
步骤d，每批粗粉取10g，用100mL无水乙醇溶解，再加入25mL纯化水，然后上样至1.25L的与实施例1相同的动态轴向压缩柱中，以60％乙醇水溶液进行层析，层析流速为5VB/h，收集顶峰平台部分层析液，合并所有层析液，体积为6200mL，效价4395μg/mL；
步骤e，将层析液浓缩至无乙醇，加入700mL乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩至干，趁热加入166mL的50％乙醇水溶液溶解，降温至6℃，结晶5h，抽滤，用50％乙醇溶液淋洗滤饼，真空干燥箱40℃干燥，得他克莫司产品14.25g，HPLC纯度99.56％，二氢他克莫司0.13％，子囊霉素0.31％，总收率27.83％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤a，将他克莫司发酵液分离所得的菌丝体加入短链醇溶剂浸泡，得醇浸泡液；向所述醇浸泡液中加入无机盐溶液，继续浸泡，固液分离，得盐浸泡液；
步骤b，将所述盐浸泡液用切割分子量为200Da-300Da的纳滤浓缩器进行浓缩，得纳滤液；
步骤c，向所述纳滤液中加入十二烷基苯磺酸钠，混合均匀，加入纯化水，结晶，固液分离，洗涤，干燥，得他克莫司粗粉；
步骤d，将所述他克莫司粗粉用极性溶剂溶解后，加入纯化水，混合均匀，加入动态轴向压缩柱中，以极性溶剂和纯化水的混合溶液为层析液进行洗脱，收集目标组分，得层洗液；其中，所述动态轴向压缩柱的填料为UniSil C8 UItra Plus，所述极性溶剂为乙醇、甲醇或乙腈中至少一种；
步骤e，将所述层析液浓缩至无极性溶剂，得浓缩液；向所述浓缩液中加入乙酸酯类溶剂进行萃取，将萃取液浓缩至干，加入乙醇溶液溶解，降温结晶，固液分离，洗涤，干燥，得他克莫司产品。
2.如权利要求1所述的高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，步骤a中，所述短链醇溶剂为甲醇、乙醇或异丙醇中至少一种；和/或
步骤a中，所述无机盐溶液为质量浓度20％-25％的硫酸铝溶液、黄血盐溶液或硫酸锌溶液中至少一种。
3.如权利要求2所述的高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，步骤a中，所述醇浸泡液中短链醇溶剂的含量为70％-75％；和/或
步骤a中，所述无机盐溶液的加入量为醇浸泡液体积的4％-6％；和/或
步骤a中，浸泡时间均为2h-3h。
4.如权利要求1所述的高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，步骤b中，浓缩至效价10万μg/mL-15万μg/mL。
5.如权利要求1所述的高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，步骤c中，所述十二烷基苯磺酸钠与纳滤液的质量体积比为0.02-0.05:1，其中，质量单位g，体积单位mL；和/或
步骤c中，所述纯化水与纳滤液的体积比为0.75-1.0:1。
6.如权利要求1或5所述的高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，步骤c中，所述纯化水采用缓慢加入的方式，加入时间控制为1h-2h；和/或
步骤c中，结晶温度为15℃-35℃，结晶时间为12h-24h。
7.如权利要求1所述的高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，步骤d中，所述他克莫司粗粉的上样量为柱体积的0.8％-1.0％，其中，上样量的单位为g，柱体积的单位为mL；和/或
步骤d中，所述极性溶剂与他克莫司粗粉的体积质量比为8-12:1，其中，体积单位mL，质量单位g；和/或
步骤d中，所述纯化水的加入量为溶解液体积的20％-25％。
8.如权利要求1或7所述的高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，步骤d中，所述层析液中极性溶剂的含量为55wt％-65wt％；和/或
步骤d中，层析流速为5BV/h-6BV/h；
步骤d中，所述动态轴向压缩柱的直径为80mm，填料的粒径10μm，填料的孔径为
填料的高度为250mm。
9.如权利要求1所述的高纯度他克莫司的制备方法，其特征在于，步骤e中，所述乙酸酯类溶剂为乙酸乙酯或乙酸丁酯中的一种或两种；和/或
步骤e中，所述乙酸酯类溶剂与浓缩液的体积比为0.8-1.0:1；和/或
步骤e中，所述乙醇溶液的浓度为45wt％-50wt％，溶解后体系中他克莫司的效价为15μg/mL-30万μg/mL；和/或
步骤e中，所述降温结晶的温度为2℃-8℃，结晶时间为4h-6h。
10.一种高纯度他克莫司，其特征在于，由权利要求1-9任一项所述的高纯度他克莫司的制备方法制得。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Zhao Hui Inventor after: Ju Jiaxue Inventor after: Wu Maohua Inventor after: Liu Cuili Inventor after: Zhao Jianhui Inventor after: Zhao Jianqiang Inventor after: Zhang Zhijiang Inventor after: Sun Binglin Inventor after: Tian Xin Inventor after: Cheng Qidong Inventor after: Li Tingting Inventor after: Gu Yanfei Inventor after: An Ning Inventor before: Zhao Hui Inventor before: Liu Cuili Inventor before: Zhao Jianhui Inventor before: Zhao Jianqiang Inventor before: Zhang Zhijiang Inventor before: Tian Xin Inventor before: Cheng Qidong Inventor before: Li Tingting Inventor before: An Ning Inventor before: Ju Jiaxue Inventor before: Wu Maohua |
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| CB03 | Change of inventor or designer information |