CN116063502A - 抗ntb-a抗体和相关组合物以及方法 - Google Patents

抗ntb-a抗体和相关组合物以及方法 Download PDF

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Abstract

公开特异性结合于NTB‑A的抗体，包括抗体药物结合物。还公开使用所述抗NTB‑A抗体以检测或调节表达NTB‑A的细胞的活性(例如抑制增殖)的方法，以及用于诊断或治疗与表达NTB‑A的细胞相关的疾病或病症(例如癌症)的方法，所述疾病或病症是例如多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤(non‑Hodgkin lymphoma)以及急性骨髓白血病。

Description

抗NTB-A抗体和相关组合物以及方法
序列表
命名为NTBA-00303PR_ST25.txt，并且具有29千字节大小的序列表以引用的方式并入。
背景技术
NTB-A，单向I型膜糖蛋白，还称作SLAMF6，是属于CD2/SLAM亚科的免疫球蛋白总科(Ig-SF)成员。参见例如Bottino等人,实验医学杂志(J.Exp.Med.)194:235-246,2001。NTB-A的特征在于其胞外部分中，N末端V型域后接C2型域，而胞质内部分含有三个基于酪氨酸的基元：两个免疫受体基于酪氨酸的交换基元(ITSM；TxYxxV/I)和经典免疫受体基于酪氨酸的抑制基元(ITIM；I/V/L/SxYxxL)。参见同上。通过其ITSM基元，NTB-A与和SLAM相关的蛋白质SH2D1A的SH2域以及相关的尤文氏(Ewing's)肉瘤活化转录物(EAT)2结合。参见Bottino等人,前述；Falco等人,欧洲免疫学杂志(Eur.J.Immunol.)34:1663-1672,2004；Flaig等人,免疫学杂志(J.Immunol.)172:6524-6527,2004。
NTB-A在自然杀伤(NK)细胞、类NK T细胞、T细胞、单核细胞、树突状细胞、B细胞以及嗜酸性粒细胞上表达。参见Salort JD.等人,免疫学快报(Immunology Letters)129-136,2011；Matesanz-Isabel等人,免疫学快报(Immunology Letters)104-112,2011；Munitz等人,免疫学杂志(Journal of Immunology)174:110-118,2005；Bottino等人,实验医学杂志(Journal of Experimental Medicine)194(3):235-246；2001。NTB-A可通过同种型相互作用(即作为自身配体)起作用，并且已显示NTB-A通过传信充当NK细胞功能的正调控剂，诱导NK细胞细胞毒性。参见例如，参见Bottino等人,前述；Falco等人,前述；Flaig等人,前述。也已显示NTB-A在来自慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和B细胞淋巴瘤患者的B细胞上表达。参见Korver等人,英国血液学杂志(British Journal of Haematology)137:307-318,2007。
附图说明
图1展示小鼠20F3重链可变区、无回复突变的人类受体中具有小鼠CDR(加框)的人源化序列以及人源化变异体HA至HE的序列比对。CDR如由卡巴特(Kabat)所定义。
图2展示小鼠20F3轻链可变区、无回复突变的人类受体中具有小鼠CDR(加框)的人源化序列以及人源化变异体LA至LD的序列比对。CDR如由卡巴特所定义。
图3展示在NSG小鼠中的MM.1R细胞系中的多发性骨髓瘤散播性异种移植研究的结果。剂量在图上指明。ADC是人源化20F3 PBD抗体药物结合物。
图4展示在NSG小鼠中的U-266细胞系中的多发性骨髓瘤散播性异种移植研究的结果。剂量在图上指明。ADC是人源化20F3 PBD抗体药物结合物。
图5展示在NSG小鼠中的EJM细胞系中的多发性骨髓瘤散播性异种移植研究的结果。剂量在图上指明。ADC是人源化20F3 PBD抗体药物结合物。
图6展示在SKID小鼠中的HNT-34细胞系中的AML皮下异种移植研究的结果。剂量在图上指明。ADC是人源化20F3 PBD抗体药物结合物。
图7展示在NSG小鼠中的MM.1R细胞系中的多发性骨髓瘤散播性异种移植研究的结果。剂量在图上指明。ADC是人源化20F3奥瑞他汀(auristatin)抗体药物结合物。
图8展示在NSG小鼠中的U-266细胞系中的多发性骨髓瘤散播性异种移植研究的结果。剂量在图上指明。ADC两者均为人源化20F3奥瑞他汀抗体药物结合物。
图9展示在NSG小鼠中的EJM细胞系中的多发性骨髓瘤散播性异种移植研究的结果。剂量在图上指明。ADC两者均为人源化20F3奥瑞他汀抗体药物结合物。
图10展示在SKID小鼠中的HNT-34细胞系中的AML皮下异种移植研究的结果。剂量在图上指明。ADC两者均为人源化20F3奥瑞他汀抗体药物结合物。
图11展示在SCID小鼠中的Raji细胞系中的非霍奇金淋巴瘤皮下异种移植研究的结果。剂量在图上指明。ADC两者均为人源化20F3奥瑞他汀抗体药物结合物。
图12展示在SCID小鼠中的WSU-DLCL2细胞系中的非霍奇金淋巴瘤皮下异种移植研究的结果。剂量在图上指明。ADC两者均为人源化20F3奥瑞他汀抗体药物结合物。
具体实施方式
定义
“抗体-药物结合物”是指与细胞毒性剂或细胞生长抑制剂结合的抗体。通常，抗体-药物结合物结合于细胞表面上的靶抗原(例如NTB-A)，随后抗体-药物结合物内化进入细胞并且释放药物。
“多肽”或“多肽链”是通过肽键接合的氨基酸残基的聚合物，无论天然或是合成产生。少于约10个氨基酸残基的多肽通常称为“肽”。
“蛋白质”是包含一种或多种多肽链的大分子。蛋白质还可包含非肽组分，如碳水化合物基团。碳水化合物和其它非肽取代基可通过生成蛋白质的细胞添加至蛋白质，并且将随细胞类型变化。蛋白质在本文中依据其氨基酸主链结构定义；如碳水化合物基团的取代基一般未指定，但仍然可存在。
术语“氨基端”和“羧基端”表示多肽内的位置。在上下文允许的情况下，参考多肽的特定序列或部分使用这些术语，以表示邻近度或相对位置。举例来说，位于多肽内的参考序列的羧基端的某一序列接近参考序列的羧基端定位，但未必处于完整多肽的羧基端。
术语“抗体”指示通过身体对存在抗原的反应生成，并且结合于抗原，以及抗原结合片段和其经工程改造变异体的免疫球蛋白。因此，术语“抗体”包括例如完整单克隆抗体(例如使用杂交瘤技术生成的抗体)和抗原结合抗体片段，如F(ab')2和Fab片段。也包括基因工程改造完整抗体和片段，如嵌合抗体、人源化抗体、单链Fv片段、单链抗体、双功能抗体、微型抗体、线性抗体、多价或多特异性(例如双特异性)杂交抗体等等。因此，术语“抗体”扩张性地用以包括任何包含抗体的抗原结合位点并且能够特异性结合于其抗原的蛋白质。术语“抗体”还包括抗体自身(“裸抗体”)或与细胞生长抑制药物或细胞毒性药物结合的抗体。
术语“基因工程改造抗体”意指其中氨基酸序列已从天然抗体的氨基酸序列变化的抗体。由于重组DNA技术在抗体生成中的关联性，抗体不必局限于天然抗体中发现的氨基酸序列，抗体可经重新设计以获得所期望特性。可能变化有许多，并且范围是改变仅一个或若干个氨基酸到例如可变区或恒定区的完全重新设计。一般改变恒定区以改善或更改例如以下特性：补体结合(complement fixation)、与细胞的相互作用以及其它效应功能。通常，改变可变区以改善抗原结合特性、改善可变区稳定性或减小免疫原性风险。
“抗体的抗原结合位点”是抗体足以结合于其抗原的那部分。最小此类区通常是可变域或其经基因工程改造变异体。单域结合位点可由骆驼抗体(参见Muyldermans和Lauwereys,J.Mol.Recog.12:131-140,1999；Nguyen等人,欧洲分子生物学杂志(EMBO J.)19:921-930,2000)或由其它物种的VH域生成，以产生单域抗体(“dAb”；参见Ward等人,自然(Nature)341:544-546,1989；Winter等人的美国专利第6,248,516号)。通常，抗体的抗原结合位点包含结合于共同表位的重链可变(VH)域和轻链可变(VL)域两者。在本发明的上下文内，抗体可包括除抗原结合位点以外的一种或多种组分，例如抗体的第二抗原结合位点(其可结合于同一或不同表位或结合于同一或不同抗原)、肽连接子、免疫球蛋白恒定区、免疫球蛋白铰链、两亲性螺旋(参见Pack和Pluckthun,生物化学(Biochem.)31:1579-1584,1992)、非肽连接子、寡核苷酸(参见Chaudri等人,FEBS快报(FEBS Letters)450:23-26,1999)、细胞生长抑制药物或细胞毒性药物等等，并且可为单体或多聚蛋白质。包含抗体的抗原结合位点的分子实例在所属领域中已知，并且包括例如Fv、单链Fv(scFv)、Fab、Fab'、F(ab')2、F(ab)c、双功能抗体、微型抗体、纳米抗体、Fab-scFv融合体、双特异性(scFv)4-IgG以及双特异性(scFv)2-Fab。(参见例如Hu等人,癌症研究(Cancer Res.)56:3055-3061,1996；Atwell等人,分子免疫学(Molecular Immunology)33:1301-1312,1996；Carter和Merchant,现代生物技术观点(Curr.Opin.Biotechnol.)8:449-454,1997；Zuo等人,蛋白质工程(Protein Engineering)13:361-367,2000；以及Lu等人,免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)267:213-226,2002)。
术语“免疫球蛋白”是指由一种或多种大体上由免疫球蛋白基因编码的多肽组成的蛋白质。免疫球蛋白的一种形式构成脊椎动物体内固有(即天然)抗体的基本结构单元。此形式是四聚体并且由两对相同的免疫球蛋白链组成，每对具有一个轻链和一个重链。在每一对中，轻链和重链可变区(VL和VH)共同主要负责结合于抗原，并且恒定区主要负责抗体效应功能。在高等脊椎动物体内已鉴别五种免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgD以及IgE)。IgG占主要类别；其通常作为血浆中发现的次最大量蛋白质存在。在人类中，IgG由四种子类组成，名为IgG1、IgG2、IgG3以及IgG4。每一免疫球蛋白重链具有由针对物种中的给定子类基本上恒定的恒定区蛋白质域(CH1、铰链、CH2以及CH3；IgG3还含有CH4域)组成的恒定区。编码人类和非人类免疫球蛋白链的DNA序列在所属领域中已知。(参见例如Ellison等人,DNA1:11-18,1981；Ellison等人,核酸研究(Nucleic Acids Res.)10:4071-4079,1982；Kenten等人,美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)79:6661-6665,1982；Seno等人,核酸研究(Nuc.Acids Res.)11:719-726,1983；Riechmann等人,自然(Nature)332:323-327,1988；Amster等人,核酸研究(Nuc.Acids Res.)8:2055-2065,1980；Rusconi和Kohler,自然(Nature)314:330-334,1985；Boss等人,核酸研究(Nuc.Acids Res.)12:3791-3806,1984；Bothwell等人,自然(Nature)298:380-382,1982；van der Loo等人,免疫遗传学(Immunogenetics)42:333-341,1995；Karlin等人,分子进化杂志(J.Mol.Evol.)22:195-208,1985；Kindsvogel等人,DNA 1:335-343,1982；Breiner等人,基因(Gene)18:165-174,1982；Kondo等人,欧洲免疫学杂志(Eur.J.Immunol.)23:245-249,1993；以及基因银行(GenBank)寄存编号J00228)。为检视免疫球蛋白结构和功能，参见Putnam,血浆蛋白质(ThePlasma Proteins),第V卷,学术出版公司(Academic Press,Inc.),49-140,1987；和Padlan,分子免疫学(Mol.Immunol.)31:169-217,1994。术语“免疫球蛋白”在本文中以其常用含义使用，取决于上下文表示完整抗体、其组成链或链的片段。
全长免疫球蛋白“轻链”(约25kDa或214个氨基酸)在氨基端由可变区基因编码(编码约110个氨基酸)，并且在羧基端由κ或λ恒定区基因编码。全长免疫球蛋白“重链”(约50kDa或446个氨基酸)由可变区基因(编码约116个氨基酸)和γ、μ、α、δ或ε恒定区基因(编码约330个氨基酸)编码，后者将抗体的同种型分别定义为IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过具有约12个或更多个氨基酸的“J”区接合，并且重链还包括具有约10个更多个氨基酸的“D”区。(通常参见基础免疫学(Fundamental Immunology)(Paul编,Raven出版社(Raven Press),纽约,第2版1989),第7章)。
免疫球蛋白轻链或重链可变区(在本文中也分别称作“轻链可变域”(“VL域”)或“重链可变域”(“VH域”))由间杂有三个“互补决定区”(或“CDR”)的“框架”区组成。框架区用来对准CDR以便特异性结合于抗原的表位。因此，术语“CDR”是指主要负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。从氨基端到羧基端，VL和VH域两者均包含以下框架(FR)和CDR区：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。氨基酸到每一可变区域的指定是根据卡巴特,免疫学感兴趣的蛋白质的序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)(美国国家卫生研究院(National Institutes of Health),马里兰州贝塞斯达(Bethesda,MD),1987和1991)的定义。卡巴特还提供广泛使用的编号定则(卡巴特编号)，其中不同重链之间或不同轻链之间的相对应残基指定为相同编号。VL域的CDR1、CDR2以及CDR3在本文中也分别称为CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；VH域的CDR1、CDR2以及CDR3在本文中也分别称为CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3。如果如此提及，CDR的指定可根据
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(Lefranc等人,发展和比较免疫学(Developmental&Comparative Immunology)27:55-77；2003)，代替卡巴特。
除非上下文另外规定，否则术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术生成的抗体。术语“单克隆抗体”是指来源于单克隆的抗体，包括任何真核、原核或噬菌体克隆，并且不是产生抗体的方法。本文所述的抗体是单克隆抗体。
术语“人源化VH域”或“人源化VL域”是指包含一些或所有完全或大体上来自非人类供体免疫球蛋白(例如小鼠或大鼠)的CDR以及完全或大体上来自人类免疫球蛋白序列的可变域框架序列的免疫球蛋白VH域或VL域。提供CDR的非人类免疫球蛋白称作“供体”并且提供框架的人类免疫球蛋白称作“受体”。在一些实例中，人源化抗体将在人类可变域框架区内保留一些非人类残基，以增加适当结合特性(例如当抗体经人源化时，框架中的突变可为保留结合亲和力所需的)。
“人源化抗体”是包含人源化VH域和人源化VL域中的一种或两种的抗体。免疫球蛋白恒定区不必存在，但如果它们存在，那么它们完全或大体上来自人类免疫球蛋白恒定区。
当相应CDR之间至少60％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的相对应残基(如由卡巴特(或IMGT)所定义)一致时，人源化抗体中的CDR是“大体上来自”非人类抗体中的相对应CDR。在CDR大体上来自非人类免疫球蛋白的人源化VH域或VL域的特定变异中，人源化VH域或VL域的CDR在所有三个CDR中相对于相对应非人类VH或VL CDR具有不超过六个(例如不超过五个、不超过四个、不超过三个、不超过两个或也不超过一个)氨基酸取代(优选保守性取代)。当至少约80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的由卡巴特定义的相对应残基一致时，抗体VH或VL域的可变区框架序列或(如果存在)免疫球蛋白恒定区的序列分别“大体上来自”人类VH或VL框架序列或人类恒定区。因此，除CDR外，人源化抗体的所有部分完全或大体上来自天然人类免疫球蛋白序列的相对应部分。
抗体通常以经分离形式提供。这意味着抗体通常是至少50％w/w纯的干扰蛋白质和其它由其制造或纯化产生的污染物，但不排除抗体与过量医药学上可接受的载剂或其它意图促进其用途的媒剂组合的可能性。有时抗体是至少60％、70％、80％、90％、95或99％w/w纯的干扰蛋白质和来自制造或纯化的污染物。抗体，包括经分离抗体，可与细胞毒性剂结合并且作为抗体药物结合物提供。
抗体与其靶抗原的特异性结合意指至少106、107、108、109或1010M-1的亲和力。特异性结合是可侦测地较高的量值，并且可从与至少一种不相关标靶发生的非特异性结合区分开。特异性结合可为特定官能团之间形成键或特定空间拟合(例如锁与钥匙类型)的结果，而非特异性结合通常是范德华力(van der Waals force)的结果。
术语“表位”是指抗原上与抗体结合的位点。表位可由连续氨基酸或经一种或多种蛋白质的三级折叠并接的不连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位在暴露于变性溶剂时通常保留，而由三级折叠形成的表位在用变性溶剂处理时通常丢失。呈独特空间构象的表位通常包括至少3个并且更通常至少5个或8到10个氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括例如x射线晶体学和2维核磁共振。参见例如分子生物学方法(Methods in MolecularBiology),第66卷,Glenn E.Morris编(1996)中的表位定位方案(Epitope MappingProtocols)。
识别相同或重叠表位的抗体可在简单免疫检定中鉴别，所述免疫检定展示一种抗体与另一种抗体竞争结合靶抗原的能力。抗体的表位还可由抗体结合于其抗原的鉴别接触残基的x射线晶体学定义。
或者，如果抗原中减少或去除一种抗体的结合的所有氨基酸突变减少或去除另一种抗体的结合，那么两种抗体具有相同表位(前提是此类突变不产生抗原结构的整体更改)。如果减少或去除一种抗体的结合的一些氨基酸突变减少或去除另一种抗体的结合，那么两种抗体具有重叠表位。
抗体之间的竞争通过以下检定确定：其中受测试的抗体抑制参考抗体与共同抗原的特异性结合(参见例如Junghans等人,癌症研究(Cancer Res.)50:1495,1990)。如果过多测试抗体抑制参考抗体的结合，那么测试抗体与参考抗体竞争。竞争是根据实例中提供的形式评估。通过竞争检定鉴别的抗体(竞争抗体)包括与参考抗体结合于相同表位的抗体，和结合于足够接近参考抗体结合的表位的相邻表位以发生位阻的抗体。通过竞争检定鉴别的抗体还包括通过促使靶蛋白中的构象改变，进而防止参考抗体与和测试抗体所结合的表位不同的表位结合来间接与参考抗体竞争的抗体。
术语“表达单元”和“表达盒”在本文中可互换地使用，并且表示编码目标多肽和能够提供核酸区段在宿主细胞中的表达的核酸区段。表达单元通常包含转录启动子、编码目标多肽的开放阅读框架以及转录终止子，所有呈可操作配置。除转录启动子和终止子以外，表达单元可进一步包括其它核酸区段，例如强化子或聚腺苷酸化信号。
如本文所用的术语“表达载体”是指线形或圆形核酸分子，包含一个或多个表达单元。除一个或多个表达单元外，表达载体还可包括额外核酸区段，例如一个或多个复制起点或一个或多个可选标记。表达载体一般来源于质粒或病毒DNA，或可含有两种的元件。
在本文所述的抗体或其它蛋白质中，参考对应于由SEQ ID NO指定的氨基酸残基的氨基酸残基包括此类残基的翻译后修饰。
术语“患者”包括接受预防性或治疗性治疗的人类和其它哺乳动物个体。
在通过给予如本文所述的抗NTB-A抗体治疗表达NTB-A的病症的情形下，术语“有效量”是指此类抗体足以抑制表达NTB-A的病症的一种或多种症状的出现或改善所述症状的量。有效量的抗体以“有效疗程”给药。术语“有效疗程”是指给药的抗体的量与足以实现病症的预防性或治疗性治疗的剂量频率的组合。
出于将氨基酸取代分类为保守性或非保守性的目的，将以下氨基酸取代视为保守性取代：丝氨酸经苏氨酸、丙氨酸或天冬酰胺取代；苏氨酸经脯氨酸或丝氨酸取代；天冬酰胺经天冬氨酸、组氨酸或丝氨酸取代；天冬氨酸经谷氨酸或天冬酰胺取代；谷氨酸经谷氨酰胺、赖氨酸或天冬氨酸取代；谷氨酰胺经精氨酸、赖氨酸或谷氨酸取代；组氨酸经酪氨酸或天冬酰胺取代；精氨酸经赖氨酸或谷氨酰胺取代；甲硫氨酸经异亮氨酸、亮氨酸或缬氨酸取代；异亮氨酸经亮氨酸、缬氨酸或甲硫氨酸取代；亮氨酸经缬氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸取代；苯丙氨酸经酪氨酸或色氨酸取代；酪氨酸经色氨酸、组氨酸或苯丙氨酸取代；脯氨酸经苏氨酸取代；丙氨酸经丝氨酸取代；赖氨酸经谷氨酸、谷氨酰胺或精氨酸取代；缬氨酸经甲硫氨酸、异亮氨酸或亮氨酸取代；以及色氨酸经苯丙氨酸或酪氨酸取代。保守性取代也可意指相同类别的氨基酸之间的取代。类别如下：第I组(疏水性侧链)：met、ala、val、leu、ile；第II组(中性亲水性侧链)：cys、ser、thr；第III组(酸性侧链)：asp、glu；第IV组(碱性侧链)：asn、gin、his、lys、arg；第V组(残基影响链定向)：gly、pro；以及第VI组(芳香族侧链)：trp、tyr、phe。
如果两种氨基酸序列的氨基酸残基在最大对应性对准时相同，那么两种氨基酸序列具有“100％氨基酸序列一致性”。序列比较可使用标准软件程序进行，如包括于LASERGENE生物信息学计算程序组中的那些，其由DNASTAR(威斯康星州麦迪逊)生成。用于通过测定最佳化对准比较两种核苷酸或氨基酸序列的其它方法为所属领域的技术人员所熟知。(参见例如Peruski和Peruski,互联网和新生物学：基因组学和分子研究的工具(TheInternet and the New Biology:Tools for Genomic and Molecular Research)(ASM出版公司(ASM Press,Inc.1997))；Wu等人(编),“核酸和蛋白质的信息超级公路和计算机数据库(Information Superhighway and Computer Databases of Nucleic Acids andProteins)”,在基因生物技术方法(Methods in Gene Biotechnology)123-151(CRC出版公司(CRC Press,Inc.)1997)中；Bishop(编),人类基因组计算指南(Guide to Human GenomeComputing)(第2版,学术出版公司(Academic Press,Inc.)1998))。如果两种氨基酸序列相对于彼此具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列一致性，那么将这两种氨基酸序列视为具有“大体序列一致性”。
序列一致性百分比用通过卡巴特编号定则最大限度地对准的抗体序列测定。在对准后，如果对象抗体区(例如重链或轻链的整个可变域)与参考抗体的相同区进行比较，那么对象与参考抗体区之间的序列一致性百分比是对象和参考抗体区中由相同氨基酸占据的位置的数目除以两个区的经对准位置的总数，其中不计数间隙，乘以100以转换成百分比。
“包含”一种或多钟所述要素的组合物或方法可包括其它未特别叙述的要素。举例来说，包含抗体的组合物可仅含有抗体或与其它成分组合。
值的范围的指示包括范围内或限定范围的所有整数。
抗体效应功能是指由Ig的Fc区贡献的功能。此类功能可为例如抗体依赖性细胞毒性、抗体依赖性细胞吞噬作用或补体依赖性细胞毒性。此类功能可通过例如Fc区结合于具有吞噬或溶胞活性的免疫细胞上的Fc受体来实现，或通过Fc区结合于补体系统的组分来实现。通常，由结合Fc的细胞或补体组分介导的效应导致抑制和/或耗尽靶向NTB-A的细胞。抗体的Fc区可募集表达Fc受体(FcR)的细胞并且使其与经抗体包覆的靶细胞并置。表达IgG的表面FcR(包括FcγRIII(CD16)、FcγRII(CD32)以及FcγRIII(CD64))的细胞可充当用于毁坏经IgG包覆的细胞的效应细胞。此类效应细胞包括单核细胞、巨噬细胞、自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞。IgG接合FcγR活化抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。ADCC是通过CD16+效应细胞通过分泌膜孔形成蛋白质和蛋白酶介导，而吞噬作用是通过CD32+和CD64+效应细胞介导(参见基础免疫学(FundamentalImmunology),第4版,Paul编,Lippincott-Raven,纽约,1997,第3、17以及30章；Uchida等人,实验医学杂志(J.Exp.Med.)199:1659-69,2004；Akewanlop等人,癌症研究(CancerRes.)61:4061-65,2001；Watanabe等人,乳癌研究与治疗(Breast Cancer Res.Treat.)53:199-207,1999)。除ADCC和ADCP以外，结合细胞的抗体的Fc区也可活化补体经典路径并且引发补体依赖性细胞毒性(CDC)。补体系统的C1q在抗体与抗原络合时结合于抗体的Fc区。Clq结合于结合细胞的抗体可起始涉及C4和C2的蛋白水解活化以产生C3转化酶的事件级联。C3通过C3转化酶切割成C3b使得包括C5b、C6、C7、C8以及C9的末端补体组分能够活化。共同地，这些蛋白质在经抗体包覆的细胞上形成攻击膜的络合物孔。这些孔破坏细胞膜完整性，杀死靶细胞(参见免疫生物学(Immunobiology),第6版,Janeway等人,加兰科学(GarlandScience),纽约,2005,第2章)。
术语“抗体依赖性细胞毒性”(或“ADCC”)是用于诱导细胞死亡的机制，其取决于经抗体包覆的靶细胞与具有溶胞活性的免疫细胞(还称作效应细胞)的相互作用。此类效应细胞包括自然杀伤细胞、单核细胞/巨噬细胞以及嗜中性粒细胞。效应细胞通过其抗原组合位点连接至结合于靶细胞的Ig的Fc区。由于效应细胞活性发生经抗体包覆的靶细胞的死亡。
术语“抗体依赖性细胞吞噬作用”(或“ADCP”)是指一种过程，经抗体包覆的细胞通过所述过程通过结合于Ig的Fc区的吞噬免疫细胞(例如巨噬细胞、嗜中性粒细胞以及树突状细胞)完全或部分地内化。
术语“补体依赖性细胞毒性”(或“CDC”)是指用于诱导细胞死亡的机制，其中结合标靶的抗体的Fc区活化一系列酶反应，最终在靶细胞膜中形成孔。通常，抗原-抗体络合物，如经抗体包覆的靶细胞上的抗原-抗体络合物结合并且活化补体组分C1q，其转而活化补体级联，导致靶细胞死亡。补体的活化还可导致补体组分在靶细胞表面上沉积，其通过结合白细胞上的补体受体(例如CR3)促进ADCC。
“细胞毒性效应”是指耗尽、去除和/或杀死靶细胞。“细胞毒性剂”是指对细胞具有细胞毒性效应的制剂。细胞毒性剂可与抗体结合，或与抗体组合给药。
“细胞生长抑制效应”是指抑制细胞增殖。“细胞生长抑制剂”是指对细胞具有细胞生长抑制效应的制剂，由此抑制细胞特定亚群的生长和/或扩增。细胞生长抑制剂可与抗体结合，或与抗体组合给药。
术语“医药学上可接受”意指得到联邦监管机构或州政府批准或可批准或在美国药典(U.S.Pharmacopeia)或其它公认的药典中列出供用于动物，并且更确切地说用于人类。术语“医药学上可相容的成分”是指与抗NTB-A抗体调配的医药学上可接受的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒剂。
短语“医药学上可接受的盐”是指医药学上可接受的有机盐或无机盐。示范性盐包括硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、丁二酸盐、顺丁烯二酸盐、龙胆酸盐、反丁烯二酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、葡糖二酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐以及双羟萘酸盐(即1,1'亚甲基双-(2羟基3萘甲酸盐))。医药学上可接受的盐可涉及包括另一种分子，如乙酸根离子、丁二酸根离子或其它抗衡离子。抗衡离子可为任何使母体化合物上的电荷稳定的有机或无机部分。此外，医药学上可接受的盐在其结构中可具有多于一个带电原子。多个带电原子是医药学上可接受的盐的一部分的实例可具有多个抗衡离子。因此，医药学上可接受的盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡离子。
除非以其它方式从上下文显而易见，否则当值表示为“约”X或“大约”X时，所陈述的X值将理解为精确到±10％。
糖基化取决于用以表达抗体的宿主细胞。因为用于表达作为潜在疗法的重组抗体的细胞类型很少是天然细胞，因此在非天然细胞中以重组方式表达的抗体与在其天然细胞中表达的相同主要重链和轻链序列的抗体之间可发生抗体的糖基化型式的显著变化。啮齿动物源的哺乳动物细胞系(如SP2/0、CHO或BHK)能够赋予与人类糖基化具有一些相似性的糖基化。然而，一些人类组分可能缺失(如2,6-键联唾液酸化)，并且可能存在通常不在人类中发现的多种其它组分，如通常不存在于人类细胞中的末端唾液酸(例如NeuGc)，或以人类细胞中通常不存在的方式(Gal-Gal结构)连接到另一半乳糖的末端半乳糖。CHO细胞中表达的重组IgG与在小鼠骨髓瘤细胞中表达的重组免疫球蛋白相比一般较少半乳糖化。因此，CHO细胞中生成的重组IgG可含有与在小鼠骨髓瘤细胞系中生成的rIgG相比较高含量的GO聚糖。
抗体的糖基化结构可通过常规的碳水化合物分析技术来分析，包括凝集素色谱法、NMR、质谱分析、HPLC、凝胶渗透色谱法、单糖组成分析、依序酶消化以及具有脉冲电流计检测的高性能阴离子交换色谱，其使用高pH阴离子交换色谱基于电荷分离寡糖。出于分析目的释放寡糖的方法包括酶处理(通常使用肽-N-糖苷酶F/内-β-半乳糖苷酶进行)、使用苛刻碱性环境去除以释放主要O-键联结构，以及使用无水肼的化学法以释放N-和O-键联寡糖。
因此，以重组方式表达的抗体的糖基化型式可为以下细胞类型的特征，其中进行表达(例如CHO)并且通过以上技术中的任一种可区别不同于其它细胞类型，尤其其它物种(如小鼠和人类)的细胞。
在本发明的上下文中的溶剂合物是本发明的化合物通过与溶剂分子配位形成呈固体或液体状态的络合物的那些形式。水合物是溶剂合物的一种特别形式，其中配位与水进行。在本发明的上下文中优选的溶剂合物是水合物。
具体实施方式
I.综述
本发明尤其提供特异性结合于NTB-A的20F3抗体，以及其嵌合、镶饰和人源化形式。还提供与20F3抗体竞争结合，或与20F3抗体结合于相同表位的抗体。所述抗体适用于例如治疗和诊断各种表达NTB-A的癌症，以及用于检测NTB-A(例如检测细胞上的NTB-A表达)。还提供使用本发明的抗体，包括裸抗体和结合抗体用于此类治疗、诊断以及NTB-A检测的方法。
II.靶分子
除非另外指示，否则NTB-A意指人类NTB-A。示范性人类序列指定SEQ ID NO:1(Swiss Prot Q96DU3)。已知四种剪接变异体同工型。成熟胞外区以Q96DU3的残基22到226为界。同工型4中的较短胞外域具有C2域和两个ITSM基元，并且缺乏残基18到121，其包括免疫球蛋白域。
除非以其它方式从上下文显而易见，否则提及NTB-A意指根据除可切割信号肽(Q96DU3的氨基酸1到21)以外的完整蛋白质的至少蛋白质的胞外域。
食蟹猕猴NTB-A(SEQ ID NO:2)(cyno-NTB-A)与人类NTB-A(SEQ ID NO:1)具有84.6％氨基酸一致性和93.3％氨基酸相似性。
III.抗体
A.结合特异性和功能特性
本公开尤其涉及名为20F3的小鼠抗体，和20F3抗体的嵌合、镶饰和人源化形式，以及与20F3抗体竞争结合于NTB-A的抗体和与20F3抗体结合于相同表位的抗体。20F3抗体结合于人类NTB-A(SEQ ID NO:1)的标准形式、人类同工型4以及食蟹猕猴NTB-A。这些结合特征表明其表位位于同工型4中缺乏的NTB-A的区段外部(残基128到226内)，并且处于完全或大体上保留于人类与食蟹猕猴NTB-A形式之间的表位。
人源化HDLD 20F3抗体在Ramos细胞上具有约2nM的人类NTB-A同工型1的Kd。20F3抗体的其它人源化形式优选具有与HDLD 20F3抗体大体上相同的Kd或其Kd的2、3或5倍系数内的Kd。在抗原结合竞争检定中，人源化HDLD抗体在Ramos细胞上具有约12nM的人类NTB-A的EC50。一些人源化抗体具有HDLD人源化20F3抗体的EC50的2、3、5或6倍内的EC50。优选人源化20F3抗体针对结合于人类NTB-A与鼠20F3结合于相同表位和/或与其竞争结合。在本申请中如本文其它处，EC50和Kd可根据实例的方法测量。
B.人源化抗体
人源化抗体是经基因工程改造的抗体，其中来自非人类“供体”抗体的CDR移植到人类“受体”抗体序列中(参见例如Queen,US 5,530,101和5,585,089；Winter,US 5,225,539；Carter,US 6,407,213；Adair,US 5,859,205；以及Foote,US 6,881,557)。受体抗体序列可为例如成熟人类抗体序列、此类序列的复合物、人类抗体序列的共同序列或生殖系区序列。可针对在可变区框架中与供体序列的高度序列一致性选择人类受体序列，以匹配受体与供体CDR以及其它指标之间的标准形式。针对20F3的重链适合的受体序列包括IGHV7-4-1-IGHJ6。因此，人源化抗体是具有完全或大体上来自供体抗体的CDR以及(如果存在)完全或大体上来自人类抗体序列的可变区框架序列和恒定区的抗体。类似地，人源化重链具有通常所有三个完全或大体上来自供体抗体重链的CDR，以及(如果存在)大体上来自人类重链可变区框架和恒定区序列的重链可变区框架序列和重链恒定区。类似地，人源化轻链具有通常所有三个完全或大体上来自供体抗体轻链的CDR，以及(如果存在)大体上来自人类轻链可变区框架和恒定区序列的轻链可变区框架序列和轻链恒定区。当相应CDR之间至少80％、85％、90％、95％或100％的相对应残基(如由卡巴特所定义)一致时，人源化抗体中的CDR是大体上来自非人类抗体中的相对应CDR。当至少80％、85％、90％、95％或100％的由卡巴特所定义的相对应残基一致时，抗体链的可变区框架序列或抗体链的恒定区大体上分别来自人类可变区框架序列或人类恒定区。
尽管人源化抗体通常并入所有六个来自小鼠抗体的CDR(优选如由Kabator
Figure BDA0003820558790000131
所定义)，但其也可用少于所有来自小鼠抗体的CDR(例如至少3个、4个或5个)CDR制得(例如Pascalis等人,免疫学杂志(J.Immunol.)169:3076,2002；Vajdos等人,分子生物学杂志(Journal of Molecular Biology),320:415-428,2002；Iwahashi等人,分子免疫学(Mol.Immunol.)36:1079-1091,1999；Tamura等人,免疫学杂志(Journal of Immunology),164:1432-1441,2000)。
可基于氨基酸对CDR构象和/或结合于抗原的可能影响选择来自人类可变区框架残基的某些氨基酸用于取代。此类可能影响是通过建模、检验特定位置的氨基酸的特性或实验观测特定氨基酸的取代或突变诱发的效果来研究。
举例来说，当在鼠可变区框架残基与所选择人类可变区框架残基之间的氨基酸不同时，当合理地预期氨基酸在以下情况下时人类框架氨基酸可经来自小鼠抗体的等效框架氨基酸取代：
(1)直接非共价结合抗原，
(2)与CDR区相邻，
(3)以其它方式与CDR区相互作用(例如在CDR区的约
Figure BDA0003820558790000132
内)；
(4)介导重链与轻链之间的相互作用，或
(5)是小鼠链中体细胞突变的结果。
(6)是糖基化位点。
来自类别(1)到(3)的框架残基有时替代地称为标准和微调(vernier)残基。定义确定CDR环的构象的供体CDR环标准类别的框架残基有时称为标准残基(Chothia和Lesk,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)196,901-917(1987)，Thornton和Martin分子生物学杂志(J.Mol.Biol.),263,800-815,1996)。一层支持抗原结合环构象，在微调抗体对抗原的适配中起一定作用的框架残基有时称为微调残基(Foote和Winter,1992,分子生物学杂志(JMol Bio.)224,487-499)。
本发明提供20F3抗体和其人源化、嵌合以及镶饰形式。本发明提供小鼠20F3抗体的人源化形式，包括五个示范性人源化重链成熟可变区(HA、HB、HC、HD以及HE)(SEQ ID NO:5到9)和四个示范性人源化轻链(LA、LB、LC以及LD)(SEQ ID NO:15到18)，其可以不同排列组合用于适当结合。在这些排列中，优选HDLD，因为其具有结合特性的最佳组合和可接受的回复突变数。HDLD还保留与cyno-NTB-A的结合。HDLD在细胞培养中还具有良好的产率并且展现极少凝集。EC50在小鼠20F3的EC50倍数内并且比HDLD具有较少回复突变的其它组合包括HCLB、HCLD、HDLB以及HELB。
本发明提供鼠20F3抗体的人源化形式，其中抗体包含SEQ ID NO:3的3个重链CDR和SEQ ID NO:13的3个轻链CDR，其中CDR如由卡巴特所定义。本发明还提供鼠20F3抗体的人源化形式，其中抗体包含SEQ ID NO:3的3个重链CDR和SEQ ID NO:13的3个轻链CDR，其中CDR如由IMGT所定义。卡巴特重链CDR如阐述于SEQ ID NO:10到12中，并且卡巴特轻链CDR如阐述于SEQ ID NO:19到21中。
Figure BDA0003820558790000141
重链CDR如阐述于SEQ ID NO：22到24中，并且
Figure BDA0003820558790000142
轻链CDR如阐述于SEQ ID NO:25到27中。
本发明提供鼠20F3抗体的人源化形式，其中轻链框架区衍生自人类生殖系供体序列vhIGKV3-11和外显子hIGKJ4并且重链衍生自人类生殖系供体序列hIGHV7-4-1和外显子hIGHJ6。因此，本文所述的人源化抗体可使用人类生殖系供体序列hIGKV3-11和外显子hIGKJ4用于轻链可变区以及人类生殖系供体序列IGHV7-4-1和外显子hIGHJ6用于重链可变区进行人源化。CDR可如卡巴特或IMGT所定义。
本发明提供HDLD人源化抗体的变异体，其中人源化重链成熟可变区展示与SEQ IDNO:8至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的一致性，并且人源化轻链成熟可变区展示与SEQ ID NO:18至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的序列一致性。优选地，在此类抗体中，保留HDLD中的一些或所有回复突变。在一些抗体中，至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或所有12个以下可变区框架位置如所指定经占据：H2由I占据，H44由D占据，H46由K占据，H73由K占据，H76由N占据，L1由Q占据，L5由S占据，L21由M占据，L46由P占据，L47由W占据，L58由V占据，L71由Y占据；编号是通过卡巴特编号系统。此类人源化抗体的CDR区优选与如由卡巴特所定义HDLD的CDR区大体上一致，HDLD的CDR区与小鼠供体抗体的CDR区相同。在一个实施例中，人源化抗体包含有包含SEQ ID NO:8的3个CDR和与SEQ IDNO:8的可变区框架具有至少95％一致性的可变区框架的重链。在另一实施例中，人源化抗体包含有包含SEQ ID NO:18的3个CDR和与SEQ ID NO:18的可变区框架具有至少95％一致性的可变区框架的轻链。
本发明提供HDLD人源化抗体的变异体，其中人源化重链成熟可变区展示与SEQ IDNO:8至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的一致性，并且人源化轻链成熟可变区展示与SEQ ID NO:18至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的序列一致性。在一些抗体中，以下可变区框架位置如所指定经占据：H2由I占据，H38由R或K占据，H44由D或G占据，H46由K或E占据，H68由V或A占据，H73由K占据，H76由N或S占据，H91由Y或F占据，L1由Q或E占据，L5由S或T占据，L21由M或L占据，L46由P占据，L47由W占据，L58由V或I占据，并且L71由Y占据；编号是通过卡巴特编号系统。此类人源化抗体的CDR区优选与如由卡巴特所定义HDLD的CDR区大体上一致，HDLD的CDR区与小鼠供体抗体的CDR区相同。在一个实施例中，人源化抗体包含有包含SEQ ID NO:8的3个CDR和与SEQ ID NO:8的可变区框架具有至少95％一致性的可变区框架的重链。在另一实施例中，人源化抗体包含有包含SEQ IDNO:18的3个CDR和与SEQ ID NO:18的可变区框架具有至少95％一致性的可变区框架的轻链。
在人源化20F3抗体展示自示范性HDLD人源化抗体的任何变异的限度内，此类其它变异的一种可能是可变区框架中的额外回复突变。可得到在其它示范性人源化重链或轻链成熟可变区中回复突变的任何或所有位置(即1、2或所有3个H38由K占据，H68由A占据，H91由F占据)。然而，此类额外回复突变不是优选的，因为它们一般来说不改善亲和力并且引入更多可产生增加的免疫原性风险的小鼠残基。变异体包括HALA、HALB、HALC、HALD、HBLA、HBLB、HBLC、HBLD、HCLA、HCLB、HCLC、HCLD、HDLA、HDLB、HDLC、HELA、HELB、HELC以及HELD。
另一种可能变异是用来自人类CDR序列，通常来自用于设计示范性人源化抗体中的人类受体序列的CDR的相对应残基取代小鼠抗体CDR中的某些残基。在一些抗体中，仅需要CDR的一部分(即结合所需的CDR残基的子集，称为SDR)以保留人源化抗体中的结合。不接触抗原并且不在SDR中的CDR残基可基于先前研究通过分子建模和/或凭经验鉴别。在此类人源化抗体中，在一种或多种供体CDR残基不存在的位置处，占据所述位置的氨基酸可为占据受体抗体序列中相对应位置的氨基酸。CDR中的供体氨基酸包括的此类受体取代的数目反映竞争考量的平衡。此类取代潜在地有利于减少人源化抗体中小鼠氨基酸的数目并且因此减少潜在免疫原性。然而，取代还可导致亲和力改变，并且优选避免亲和力显著降低。
尽管不是优选的，但可进行其它氨基酸取代，例如在不与CDR接触的框架残基中，或甚至CDR内一些潜在的接触CDR的残基氨基酸。通常变异体人源化序列中进行的替换相对于经替换HDLD氨基酸是保守的。优选地，相对于HDLD的替换(无论是否保守)对结合亲和力或人源化mAb的效能(即其结合人类NTB-A和抑制癌细胞生长的能力)无实质性效应。
变异体通常通过小数目(例如轻链或重链成熟可变区或这两者中通常不超过1、2、3、5或10个)的替换、缺失或插入而不同于HLD的重链和轻链成熟可变区序列。
可通过常规方法检定抗体的特异性结合，包括免疫检定，其包括使用如以下技术的检定系统：蛋白质印迹、放射免疫检定、ELISA、“夹心”免疫检定、免疫沉淀检定、沉淀素检定、凝胶扩散沉淀素检定、免疫放射测量检定、荧光免疫检定、蛋白A免疫检定以及补体结合检定。此类检定是常规并且在所属领域中众所周知(参见例如Ausubel等人编,1994,现代分子生物学实验技术(Current Protocols in Molecular Biology),第1卷,约翰·威利父子公司(John Wiley&sons,Inc.),纽约)。实例中的饱和结合方案可用以测定特异性结合。
可通过竞争性结合检定或以其它方式选择具有相同的或重叠的表位特异性的抗体中的任一种作为示范性抗体，如小鼠20F3抗体。抗体之间的竞争是由测试抗体与参考抗体(此处为小鼠20F3)竞争特异性结合于人类NTB-A的能力来评估。小鼠20F3参考抗体具有SEQ ID No.3和13的重链和轻链成熟可变区并且具有IgG1κ同种型。优选的抗体与20F3抗体具有相同的表位特异性。所属领域的技术人员能够使用各种方法鉴别抗体所结合的表位。举例来说，基于阵列的寡肽扫描或肽扫描分析使用来自靶抗原的重叠和不重叠区段的寡核苷酸-肽序列的库，并且测试其结合所关注的抗体的能力。参见例如Geysen等人,美国国家科学院院刊(PNAS)81:3998-4002(1984)。非线性表位可使用例如CLIPSTM技术鉴别，基于阵列的寡肽扫描的变化形式。参见例如Timmerman等人,开放疫苗杂志(Open Vaccine J.)2:56-67(2009)。抗原蛋白质也可经突变诱发，并且随后用以分析所关注的抗体对其的结合。可使用蛋白质系统性定点突变诱发或可制得突变库并且用以筛检抗体结合。突变库可购自例如整体分子(Integral Molecular)。可使用酰胺氢/氘交换MS鉴别表位。将所关注的抗原放置于氘化水中并且用氘核标记。随后用蛋白酶消化蛋白质并且对所得肽片段进行质谱分析。还在抗体存在下评估抗原，并且肽片段标记的不同指示抗体结合区域。
IV.选择恒定区
包含VH和/或VL域的抗NTBA抗体可连接到免疫球蛋白恒定区(例如人类免疫球蛋白恒定区)的至少一部分。举例来说，一些抗NTB-A抗体包含第一和第二多肽链，其中第一多肽链包含连接到免疫球蛋白重链恒定区的至少一部分的如本文所述的VH域，并且第二多肽链包含连接到免疫球蛋白轻链恒定区的至少一部分的如本文所述的VL域。通常，VH或VL域的氨基端连接到免疫球蛋白恒定区或其部分。在包含第一和第二多肽链的抗体的特定变异中，第一和第二多肽链具有对应于完整天然抗体的重链和轻链的域结构，例如第一多肽(重)链具有VH-CH1-铰链-CH2-CH3的氨基端到羧基端域结构，并且第二多肽(轻)链具有VL-CL的氨基端到羧基端域结构。
一些抗NTB-A抗体是包含VH域、VL域以及单个多肽链内连接的免疫球蛋白恒定区的至少一部分(例如缺乏CH1域的重链恒定区)的单链抗体。举例来说，VH和VL域可以VH/VL或VL/VH(氨基端/羧基端)定向构筑为单链Fv(scFv)，其中scFv(通常氨基端)连接到重链恒定区，例如包含CH2和CH3域但缺乏CH1域的恒定区。scFv通常通过连接子连接到恒定区，例如衍生自免疫球蛋白铰链区的连接子。
恒定区的选择在某种程度上可取决于是否期望抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性、抗体依赖性细胞吞噬作用和/或补体依赖性细胞毒性。举例来说，人类同位素IgG1和IgG3具有强的补体依赖性细胞毒性，人类同种型IgG2弱的补体依赖性细胞毒性，并且人类IgG4缺乏补体依赖性细胞毒性。人类IgG1和IgG3还诱发比人类IgG2和IgG4更强的细胞介导的效应功能。轻链恒定区可为λ或κ。示范性重链和轻链恒定区由SEQ ID No.27、28以及29提供。抗体可表达为例如含有两个轻链和两个重链的四聚体、表达为独立重链、轻链、表达为Fab、Fab'、F(ab')2以及Fv，或表达为其中重链和轻链可变域通过间隔子连接的单链抗体。另外，必要时恒定区可为突变的。在一些方面，天然人类恒定区的突变形式相对于天然人类恒定区将具有减少的对Fcγ受体的结合。
人类恒定区在不同个体之间展示同种异型(allotypic)变异和同族同种异型(isoallotypic)变异，即恒定区在一个或多个多型性位置处在不同个体间可不同。同族同种异型与同种异型不同之处在于识别同族同种异型的血清结合于一种或多种其它同种型的非多型性区。
轻链和/或重链的氨基或羧基端处的一个或若干个氨基酸，如重链的C端赖氨酸，在一定比例或所有分子中可缺失或衍生化。可在恒定区中进行取代以减少或增加如补体介导的细胞毒性或ADCC的效应功能(参见例如Winter等人,美国专利第5,624,821号；Tso等人,美国专利第5,834,597号；以及Lazar等人,美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)103:4005,2006)，或延长人类中的半衰期(参见例如Hinton等人,生物化学杂志(J.Biol.Chem.)279:6213,2004)。
示范性取代包括天然氨基酸的氨基酸取代，在氨基酸位置234、235、237、239、267、298、299、326、330或332处引入半胱氨酸残基，优选地人类IgG1同种型中的S239C突变(US20100158909；Fc区的编号是根据EU索引)。在一些方面，存在额外半胱氨酸残基允许形成链间二硫键。此类链间二硫键形成可导致位阻，由此降低Fc区-FcγR结合相互作用的亲和力。在IgG恒定区的Fc区中或接近Fc区引入的半胱氨酸残基还可充当治疗剂的结合位点(即使用硫醇特异性试剂偶合细胞毒性药物，如药物的顺丁烯二酰亚胺衍生物)。治疗剂的存在导致位阻，由此进一步降低Fc区-FcγR结合相互作用的亲和力。在位置234、235、236和/或237中任一处的其它取代降低对Fcγ受体，尤其FcγRI受体的亲和力(参见例如US 6,624,821、US 5,624,821)。
抗体的活体内半衰期还可影响其效应功能。可增大或减小抗体的半衰期以改变其治疗性活性。FcRn是结构上类似于与β2-微球蛋白非共价结合的MHC I类抗原的受体。FcRn调节IgG的代谢和其跨越组织的转胞吞作用(transcytosis)(Ghetie和Ward,免疫学年鉴(Annu.Rev.Immunol.)18:739-766,2000；Ghetie和Ward,免疫学研究(Immunol.Res.)25:97-113,2002)。IgG-FcRn相互作用在pH 6.0下(细胞内囊泡的pH)但不在pH 7.4下(血液的pH)发生；此相互作用使得IgG能够再循环回到循环(Ghetie和Ward,2000,前述；Ghetie和Ward,2002,前述)。已映射人类IgG1上涉及FcRn结合的区(Shields等人,生物化学杂志(J.Biol.Chem.)276:6591-604,2001)。在人类IgG1的Pro238、Thr256、Thr307、Gln311、Asp312、Glu380、Glu382或Asn434位置处的丙氨酸取代促进FcRn结合(Shields等人,前述)。具有这些取代的IgG1分子具有更长的血清半衰期。因此，这些经修饰IgG1分子可以能够进行其效应功能，并且因此相较于未经修饰的IgG1历经更长时间段发挥其治疗性功效。用于增强对FcRn结合的其它示范性取代包括250位置处Gln取代和/或428位置处Leu取代。针对恒定区中的所有位置使用EU编号。
共价连接到保守Asn297的寡糖涉及IgG的Fc区结合FcγR的能力(Lund等人,免疫学杂志(J.Immunol.)157:4963-69,1996；Wright和Morrison,生物技术趋势(TrendsBiotechnol.)15:26-31,1997)。此糖型对IgG的工程改造可显著增加IgG介导的ADCC。向此糖型添加二等分N-乙酰基葡糖胺修饰(Umana等人,自然·生物技术(Nat.Biotechnol.)17:176-180,1999；Davies等人,生物技术与生物工程(Biotech.Bioeng.)74:288-94,2001)或从此糖型去除海藻糖(Shields等人,生物化学杂志(J.Biol.Chem.)277:26733-40,2002；Shinkawa等人,生物化学杂志278:6591-604,2003；Niwa等人,癌症研究(Cancer Res.)64:2127-33,2004)是IgG Fc工程改造的两个实例，其改善IgG Fc与FcγR之间的结合，由此增强Ig介导的ADCC活性。
人类IgG1 Fc区的暴露于溶剂的氨基酸的系统性取代已产生具有变更的FcγR结合亲和力的IgG变异体(Shields等人,生物化学杂志(J.Biol.Chem.)276:6591-604,2001)。当与亲本IgG1相比时，涉及在Thr256/Ser298、Ser298/Glu333、Ser298/Lys334或Ser298/Glu333/Lys334处的Ala取代的这些变异体的子集展现对FcγR的结合亲和力增加以及ADCC活性增加(Shields等人,2001,前述,Okazaki等人,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)336:1239-49,2004)。
通过在Lys326和Glu333处的取代可改善抗体的补体结合活性(C1q结合和CDC活性)(Idusogie等人,免疫学杂志(J.Immunol.)166:2571-2575,2001)。在人类IgG2主链上的相同取代可将对C1q结合不充分并且严重缺乏补体活化活性的抗体同种型转化成可结合Clq并且调节CDC的抗体同种型(Idusogie等人,前述)。也已应用若干种其它方法改善抗体的补体结合活性。举例来说，IgM的18-氨基酸羧基端尾部段接枝于IgG的羧基端极大地增强其CDC活性。这甚至在IgG4的情况下观测到，IgG4通常不具有可检测的CDC活性(Smith等人,免疫学杂志(J.Immunol.)154:2226-36,1995)。另外，用Cys取代位于接近IgG1重链的羧基端的Ser444诱导IgG1的尾对尾二聚合，相较于单体IgG1具有200倍的CDC活性升高(Shopes等人,免疫学杂志(J.Immunol.)148:2918-22,1992)。另外，对Clq具有特异性的双特异性双功能抗体构筑体同样赋予CDC活性(Kontermann等人,自然·生物技术(Nat.Biotech.)15:629-31,1997)。
补体活性可通过使重链的氨基酸残基318、320以及322中的至少一个突变成具有不同侧链的残基(如Ala)来减小。其它经烷基取代的非离子残基，如Gly、Ile、Leu或Val，或此类芳香族非极性残基，如Phe、Tyr、Trp以及Pro替代这三个残基中的任一个也降低或消除Clq结合。Ser、Thr、Cys以及Met可用于残基320和322处，但不用于318，以降低或消除Clq结合活性。318(Glu)残基由极性残基取代可改变但不消除Clq结合活性。用于Ala替换残基297(Asn)导致去除溶胞活性但仅稍微降低(约三倍更弱)对C1q的亲和力。此更改破坏糖基化位点和补体活化所需的碳水化合物的存在。此位点处的任何其它取代也破坏糖基化位点。以下突变和其任何组合也减少Clq结合：D270A、K322A、P329A以及P311S(参见WO 06/036291)。
对人类恒定区的提及包括具有任何天然同种异型或占据天然同种异型中多型性位置的残基的任何排列的恒定区。另外，相对于天然人类恒定区可存在至多1、2、5或10个突变，如上文所指示的那些，以减少Fcγ受体结合或增加对FcRn的结合。
V.核酸和生成方法
本发明进一步提供编码上文所述的VH和/或VL域中的任一种，包括包含连接到额外多肽区段(例如对应于免疫球蛋白恒定区的多肽区段)的VH和/或VL域的多肽的核酸。通常，核酸还编码将氨基端融合到包含VH和/或VL域的成熟多肽的信号肽。核酸上的编码序列可以可操作方式与调节序列连接，以确保表达编码序列，如启动子、强化子、核糖体结合位点、转录终止信号等等。核酸可以经分离形式存在或可克隆至一种或多种载体中。核酸可通过例如固态合成或重叠寡核苷酸的PCR来合成。编码VH域和VL域(例如在包含独立重链和轻链的抗体的情况下)的核酸可例如在表达载体内接合为一个连续核酸，或可分离，例如各自克隆至其自身的表达载体中。
抗NTB-A抗体通常通过编码一种或多种抗体链的一种或多种核酸的重组表达生成。重组聚核苷酸构筑体通常包括表达控制序列，其可操作地连接于包含VH和/或VL域的一种或多种多肽链的编码序列，包括天然相关或异源启动子区。优选地，表达控制序列是载体中能够转型或转染真核宿主细胞的真核启动子系统。在载体已并入至适当宿主中时，将宿主保持于适合于核苷酸序列的高水平表达以及交叉反应抗体的收集和纯化的条件下。
对于表达包含第一和第二多肽链(例如重链和轻链)的抗体，所述两种多肽链可从用于表达整个抗体分子的宿主细胞中的独立载体共表达。或者，两种多肽链可从用于表达整个抗体分子的宿主细胞中的同一载体中的独立表达单元共表达。
哺乳动物细胞是用于表达编码免疫球蛋白或其片段的核苷酸区段的优选宿主。参见Winnacker,从基因到克隆(From Genes To Clones),(VCH出版社,纽约,1987)。在所属领域中已开发多种能够分泌完整异源蛋白质的适合的宿主细胞系，并且包括CHO细胞系(例如DG44)、各种COS细胞系、HeLa细胞、HEK293细胞、L细胞以及包括Sp2/0和NS0的无抗体生成骨髓瘤。优选地，细胞是非人类细胞。这些细胞的表达载体可包括表达控制序列，如复制起点、启动子、强化子(Queen等人,免疫学评论(Immunol.Rev.)89:49,1986)以及必需的处理信息位点，如核糖体结合位点、RNA剪接位点、聚腺苷酸化位点以及转录终止序列。优选的表达控制序列是来源于内源基因、细胞巨化病毒、SV40、腺病毒、牛乳头瘤病毒等的启动子。参见Co等人,免疫学杂志(J.Immunol.)148:1149,1992。
在表达后，抗体可根据所属领域中的标准程序纯化，包括HPLC纯化、管柱色谱法、凝胶电泳等等(一般参见Scopes,蛋白质纯化(Protein Purification)(施普林格出版社(Springer-Verlag),纽约,1982))。
VI.抗体药物结合物
抗NTB-A抗体可与细胞毒性部分或细胞生长抑制部分结合以形成抗体药物结合物(ADC)。尤其适合于结合抗体的部分是细胞毒性剂(例如化学治疗剂)、前药转化酶、放射性同位素或化合物、或毒素(这些部分统称为治疗剂)。举例来说，抗NTB-A抗体可结合于细胞毒性剂，如化学治疗剂，或毒素(例如细胞生长抑制或杀细胞剂，例如相思豆毒素、蓖麻毒素A、绿脓杆菌外毒素或白喉毒素)。适用的细胞毒性剂类别的实例包括例如DNA小沟结合剂、DNA烷化剂以及微管蛋白抑制剂。示范性细胞毒性剂包括例如奥瑞他汀、喜树碱、卡奇霉素(calicheamicin)、倍癌霉素(duocarmycin)、依托泊苷(etoposide)、类美登素(例如DM1、DM2、DM3、DM4)、紫杉烷、苯二氮
Figure BDA0003820558790000211
(例如吡咯并[1,4]苯二氮
Figure BDA0003820558790000212
、吲哚啉并苯二氮
Figure BDA0003820558790000213
以及恶唑啶并苯二氮
Figure BDA0003820558790000214
，包括吡咯并[1,4]苯二氮
Figure BDA0003820558790000215
二聚体、吲哚啉并苯二氮
Figure BDA0003820558790000216
二聚体以及恶唑啶并苯二氮
Figure BDA0003820558790000217
二聚体)以及长春花生物碱。
抗NTB-A抗体可结合于前药转化酶。前药转化酶可以重组方式融合到抗体或使用已知方法以化学方式与抗体结合。示范性前药转化酶是羧基肽酶G2、β-葡糖苷酸酶、青霉素-V-酰胺酶、青霉素-G-酰胺酶、β-内酰胺酶、β-葡糖苷酶、硝基还原酶(nitroreductase)以及羧基肽酶A。
用于使治疗剂结合到蛋白质，并且尤其结合到抗体的技术是众所周知的。(参见例如Alley等人,化学生物学新见(Current Opinion in Chemical Biology)2010 14:1-9；Senter,癌症杂志(Cancer J.),2008,14(3):154-169)。除非治疗剂从抗体分离(例如通过水解、蛋白水解降解或切割试剂)切下，否则治疗剂可以降低其活性的方式与抗体结合。在一些方面，治疗剂通过可切割连接子附接到抗体，所述可切割连接子在表达NTB-A的癌细胞的细胞内环境中对切割敏感但大体上对胞外环境不敏感，使得结合物在通过表达NTB-A的癌细胞内化时从抗体切开(例如在核内体中，或例如凭借pH敏感性或蛋白酶敏感性，在溶酶体环境中或caveolear环境中)。在一些方面，治疗剂还可通过不可切割连接子附接到抗体。
通常ADC包含细胞毒性剂或细胞生长抑制剂与抗NTB-A抗体之间的连接子区。如上文所提及，通常，连接子可在细胞内条件下可切割，因此在细胞内环境中(例如溶酶体或核内体或caveolea内)连接子的切割使治疗剂从抗体释放。连接子可为例如通过细胞内肽酶或蛋白酶，包括溶酶体或核内体蛋白酶切割的肽基连接子。切割剂可包括组织蛋白酶B和D以及纤维蛋白溶酶(参见例如Dubowchik和Walker,医药疗法(Pharm.Therapeutics)83:67-123,1999)。最典型的是可通过存在于表达NTB-A的细胞中的酶切割的肽基连接子。举例来说，可使用可通过在癌变组织中高度表达的硫醇依赖性蛋白酶组织蛋白酶-B切割的肽基连接子(例如包含Phe-Leu或Val-Cit肽的连接子)。
可切割连接子可为pH敏感的，即对某些pH值下的水解敏感。通常，pH敏感的连接子可在酸性条件下水解。举例来说，可使用可在溶酶体中水解的酸不稳定连接子(例如腙、缩氨基脲、氨硫脲、顺乌头酸酰胺、原酸酯、缩醛、缩酮等等)。(参见例如美国专利第5,122,368号；第5,824,805号；第5,622,929号；Dubowchik和Walker,医药疗法(Pharm.Therapeutics)83:67-123,1999；Neville等人,生物化学(Biol.Chem.)264:14653-14661,1989)。此类连接子在中性pH条件下相对稳定，如血液中的那些，但在低于pH 5.5或5.0，溶酶体的估算pH下不稳定。
其它连接子在还原条件下可切割(例如二硫化物连接子)。二硫化物连接子包括可使用N-丁二酰亚胺基-S-乙酰基硫乙酸酯(N-succinimidyl-S-acetylthioacetate；SATA)、N-丁二酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)propionate；SPDP)、N-丁二酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丁酸酯(N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)butyrate；SPDB)和N-丁二酰亚胺基-氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫基)甲苯(N-succinimidyl-oxycarbonyl-alpha-methyl-alpha-(2-pyridyl-dithio)toluene；SMPT)、SPDB以及SMPT形成的连接子。(参见例如Thorpe等人,癌症研究(CancerRes.)47:5924-5931,1987；Wawrzynczak等人,在免疫结合物：放射成像和癌症疗法中的抗体结合物(Immunoconjugates:Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy ofCancer)中(C.W.Vogel编,牛津大学出版社(Oxford U.Press),1987。还参见美国专利第4,880,935号)。
连接子还可为丙二酸酯连接子(Johnson等人,抗癌研究(Anticancer Res.)15:1387-93,1995)、顺丁烯二酰亚胺基苯甲酰基连接子(Lau等人,生物有机医药化学(Bioorg-Med-Chem.)3:1299-1304,1995)或3'-N-酰胺类似物(Lau等人,生物有机医药化学3:1305-12,1995)。
连接子还可为不可切割连接子，如马来酰亚氨基-亚烷基-或顺丁烯二酰亚胺-芳基连接子，其直接附接到治疗剂并且通过抗体的蛋白水解降解释放。
通常，连接子大体上对胞外环境不敏感，意指当ADC存在于胞外环境(例如血浆)中时，ADC样品中不超过约20％、通常不超过约15％、更通常不超过约10％并且甚至更通常不超过约5％、不超过约3％或不超过约1％的连接子切割。连接子是否大体上对胞外环境不敏感可例如通过以下确定：用血浆单独培育(a)ADC(“ADC样品”)和(b)相同摩尔量的非结合抗体或治疗剂(“对照样品”)持续预定时间段(例如2、4、8、16或24小时)，并且随后比较如通过例如高效液相色谱所测量的存在于ADC样品中的非结合抗体或治疗剂的量与存在于对照样品中的非结合抗体或治疗剂的量。
连接子还可促进细胞内化。连接子在结合于治疗剂时(即在如本文所述的ADC或ADC衍生物的连接子-治疗剂部分的环境中)可促进细胞内化。或者，连接子在结合于治疗剂和抗NTB-A抗体时(即在如本文所述的ADC的环境中)可促进细胞内化。
抗NTB-A抗体可通过抗体的杂原子结合到连接子。这些杂原子可以其天然状态存在于抗体上或可引入至抗体中。在一些方面，NTB-A抗体将通过赖氨酸残基的氮原子结合到连接子。在其它方面，NTB-A抗体将通过半胱氨酸残基的硫原子结合到连接子。使连接子和药物-连接子结合于抗体的方法在所属领域中已知。
示范性抗体-药物结合物包括奥瑞他汀类抗体-药物结合物，意指药物组分是奥瑞他汀药物。已显示奥瑞他汀结合微管蛋白干扰微管动态以及核和细胞分裂，并且具有抗癌活性。通常奥瑞他汀类抗体-药物结合物在奥瑞他汀药物与抗NTB-A抗体之间包含连接子。连接子可为例如可切割连接子(例如肽基连接子)或不可切割连接子(例如通过抗体的降解释放的连接子)。奥瑞他汀包括MMAF和MMAE。示范性奥瑞他汀的合成和结构描述于美国公开第7,659,241号、第7,498,298号、第2009-0111756号、第2009-0018086号以及第7,968,687号中，其中每一个出于所有目的以全文引用的方式并入本文中。
其它示范性抗体-药物结合物包括类美登素抗体-药物结合物，意指药物组分是类美登素药物，和苯二氮
Figure BDA0003820558790000232
抗体药物结合物，意指药物组分是苯二氮
Figure BDA0003820558790000233
(例如吡咯并[1,4]苯二氮
Figure BDA0003820558790000234
二聚体、吲哚啉并苯二氮
Figure BDA0003820558790000235
二聚体以及恶唑啶并苯二氮
Figure BDA0003820558790000236
二聚体)。
诸位发明人已发现包含PBD药物-连接子的靶向人源化NTB-A的ADC尤其有效。
用于本发明中的优选PBD由式I表示。PBD药物组分的优选立体化学如式Ia中所示：
Figure BDA0003820558790000231
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物；其中下标n是1或3。
式I(或其医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物)的PBD二聚体通常通过连接子单元LU连接到抗体。连接子单元用以在标靶位点(例如癌细胞内部)处释放式I(或其医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物)的PBD二聚体。用于本发明中的PBD药物-连接子化合物在下文中通过式II(优选如IIa中所示的立体化学)表示，其中LU是连接子单元。连接子单元可为例如可切割肽连接子单元(例如包含缬氨酸-丙氨酸肽的连接子)或可切割二硫化物连接子单元：
Figure BDA0003820558790000241
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物；其中下标n是1或3。
用于本发明中的优选PBD药物-连接子化合物由下文的式III表示：
Figure BDA0003820558790000242
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物；其中下标n是1或3并且下标m是2到5的整数。
药物-连接子的PBD药物组分的优选立体化学如下文式IIIa中所示：
Figure BDA0003820558790000243
SGD-1910PBD药物-连接子的PBD药物和连接子组分的优选立体化学如下文式IIIb中所示：
Figure BDA0003820558790000244
PBD药物-连接子结合到20F3抗体，包括其镶饰、嵌合以及人源化形式，以产生靶向NTB-A的抗体-药物结合物。举例来说，抗体可结合到式II或式III的药物-连接子。示范性靶向NTB-A的抗体-药物结合物展示于下文式IV、IVa以及IVb中：
Figure BDA0003820558790000251
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物；其中下标n是1或3；下标m是2到5的整数；并且下标p是1到4的整数。
本发明提供组合物，包括包含抗NTBA抗体药物结合物的医药组合物，包括本文特定例示的那些。组合物通常包括一群抗体药物结合物分子。
药物负载-“p”
参看式IV、IVa以及IVb的靶向NTB-A的抗体-药物结合物，下标p表示抗体分子的药物负载(附接到抗体分子的药物分子数)并且是整数值。在包含一群抗体-药物结合物分子的组合物中，平均药物负载(例如群体中每个抗体的药物-连接子分子的平均数)是至关重要的品质属性，因为其决定可递送到靶细胞的药物的量。平均药物负载可为整数或非整数值，但通常是非整数值。
在一些方面，抗体-药物结合物组合物的不均匀性将取决于用以使药物-连接子分子结合到抗体分子的结合技术。举例来说，在一些方面，用以使药物-连接子分子结合到抗体分子的结合技术将产生相对于药物-连接子分子在抗体上的分布和/或相对于抗体分子上药物-连接子的数目不均匀的抗体-药物结合物组合物(例如当使用非定点技术通过链间二硫基结合时)。在其它方面，用以结合药物-连接子分子的结合技术将产生相对于药物-连接子分子在配体分子上的分布和/或相对于抗体分子上药物-连接子分子的数目大体上均匀的抗体-药物结合物组合物(例如当使用定点结合技术时)。在定点和非定点两种方法的情况下，也可存在小百分比的非结合抗体分子。非结合抗体分子的百分比包括于平均药物负载值中。
在本发明的优选方面，当提及包含一群抗体-药物结合物化合物的组合物时，平均药物负载是约2到约14，优选约2到约10。对于PBD抗体药物结合物，如本文中例示的那些，特别优选的平均药物负载是约2。在一些方面，抗体-药物结合物化合物的群体中个别抗体分子的实际药物负载是1到4、1到3或1到2，其中主要药物负载是2。在优选方面，平均药物负载2是通过定点结合技术(例如将经工程改造的半胱氨酸引入到抗体中，包括根据EU索引编号系统在位置239处)实现。
在本发明的其它方面，当提及包含一群PBD抗体-药物结合物化合物的组合物时，平均药物负载是约3或约4，并且抗体-药物结合物化合物的群体中个别抗体分子的实际药物负载是1到6、1到5、1到4或1到3。
在来自结合反应的制备物中每一配体单元的药物-连接子单元的平均数可通过常规方式表征，如质谱、ELISA分析、HIC以及HPLC。还可测定配体-连接子-药物结合物关于p的定量分布。在一些实例中，其中p是某一值的均匀配体-药物结合物从具有其它药物负载的配体-药物结合物的分离、纯化以及特征化可通过如反相HPLC或电泳的方式实现。
VII.应用
本文所述的作为裸抗体或作为抗体药物结合物的抗NTBA抗体可用于治疗与表达NTB-A的细胞相关的疾病或病症的方法中。
举例来说，本文所述的作为裸抗体或作为抗体药物结合物的抗NTBA抗体可用以治疗表达NTB-A的癌症。一些此类癌症展示在蛋白质(例如通过使用示范性抗体中的一种的免疫检定)或mRNA层级测量的可检测的NTB-A含量。一些此类癌症展示相对于相同类型的非癌性组织，优选来自同一患者的非癌性组织升高的NTB-A含量。癌细胞上适合于治疗的示范性NTB-A含量是每个细胞5000到150000个NTB-A分子，尽管可治疗更高或更低含量。任选地，在进行治疗之前测量癌症中的NTB-A含量。
与NTB-A表达相关并且适合于用本文公开的裸抗体或抗体药物结合物治疗的癌症的实例包括血液恶性病，包括B细胞、T细胞以及NK细胞恶性病。在一个实施例中，本文公开的裸抗体或抗体药物结合物结合NK细胞上的受体，触发溶胞活性和增殖，其刺激患者的免疫系统的抗肿瘤活性。在一些治疗方法中，患者患有癌症，其为多发性骨髓瘤、急性骨髓白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、T细胞白血病、T细胞或B细胞淋巴瘤，例如非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma；NHL)、或骨髓瘤相关恶性病，如原发性淀粉样变性、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)或高风险的意义不明的单克隆丙种球蛋白病(monoclonal gammopathy of undetermined significance；MGUS)。治疗可施用到患有这些类别的原发性或转移性肿瘤的患者。治疗还可施用到常规治疗难治愈的患者，或在对此类常规治疗反应后具有复发性的患者。
本文公开的作为裸抗体或作为抗体药物结合物的抗NTBA抗体可用以治疗自身免疫疾病和发炎性疾病。可通过本发明方法治疗的疾病和病症包括与B细胞相关的那些，例如表征为B细胞数量过多、B细胞过度活化或B细胞功能异常的那些疾病。这些疾病包括发炎性疾病和自身免疫疾病。可通过本发明方法治疗的示范性疾病包括类风湿性关节炎、全身性红斑性狼疮症、多发性硬化症、发炎性肠道疾病、哮喘、过敏、乳糜泻、移植物抗宿主病以及移植排斥。
本发明的作为裸抗体或作为抗体药物结合物针对NTB-A的抗体可用作单药疗法或与例如用于治疗此类疾病和/或病症的标准治疗组合治疗。因此，用于治疗癌症的方法包括向有需要的患者给予有效量的作为单药疗法或与其它抗癌剂或另一种缓解癌症症状的药剂组合的如本文所述的裸抗体或抗体药物结合物。用于治疗自身免疫疾病的方法包括向有需要的患者给予有效量的作为单药疗法或与用于治疗自身免疫疾病的其它治疗剂组合的如本文所述的裸抗体或抗体药物结合物。用于治疗发炎性疾病的方法包括向有需要的患者给予有效量的作为单药疗法或与用于治疗发炎性疾病的其它治疗剂组合的如本文所述的裸抗体或抗体药物结合物。
用于组合疗法的示范性药剂是卡非唑米(carfilzomib)(例如
Figure BDA0003820558790000271
)，一种用以治疗多发性骨髓瘤的蛋白酶体抑制剂(参见Siegel DS等人患有复发性和难治愈多发性骨髓瘤的患者中单一药剂卡非唑米(PX-171-003-A1)的2期研究(A phase 2 study ofsingle-agent carfilzomib(PX-171-003-A1)in patients with relapsed andrefractory multiple myeloma).血液(Blood)2012；120:2817-2825)。卡非唑米可以静脉内/IV输注给药。在一个实施例中，卡非唑米以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，卡非唑米以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，卡非唑米以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
卡非唑米还可以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物以及其它药剂的组合疗法给药。
卡非唑米已与各种其它治疗多发性骨髓瘤的药剂组合。举例来说，卡非唑米已与来那度胺(lenalidomide)和地塞米松(dexamethasone)组合(参见Stewart KA等人针对复发性多发性骨髓瘤的卡非唑米、来那度胺以及地塞米松(Carfilzomib,lenalidomide,anddexamethasone for relapsed multiple myeloma).新英格兰医学杂志(N Engl J Med.)2015；372:142-152)。在一个实施例中，卡非唑米以与来那度胺、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，卡非唑米以与来那度胺、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，卡非唑米以与来那度胺、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
卡非唑米也已与地塞米松组合(参见Dimopoulos MD等人卡非唑米和地塞米松对比硼替佐米和地塞米松用于患有复发性或难治愈多发性骨髓瘤(ENDEAVOR)的患者：随机、3期、开放标签、多中心研究(Carfilzomib and dexamethasone versus bortezomib anddexamethasone for patients with relapsed or refractory multiple myeloma(ENDEAVOR):a randomised,phase 3,open-label,multicentre study).柳叶刀肿瘤学(Lancet Oncology)2016；17:27-38)。在一个实施例中，卡非唑米以与地塞米松和本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，卡非唑米以与地塞米松和本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，卡非唑米以与地塞米松和本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
卡非唑米也已与帕比司他(panobinostat)组合(参见Berdeja JG等人帕比司他与卡非唑米的组合在患有复发性/难治愈多发性骨髓瘤的患者中的I/II期研究(Phase I/IIstudy of the combination of panobinostat and carfilzomib in patients withrelapsed/refractory multiple myeloma).Haematologica 2015；100:670-676)。在一个实施例中，卡非唑米以与帕比司他和本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，卡非唑米以与帕比司他和本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，卡非唑米以与帕比司他和本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
卡非唑米也已与泊马度胺(pomalidomide)和地塞米松组合(参见Shah J等人卡非唑米、泊马度胺以及地塞米松(CPD)用于患有复发性和/或难治愈多发性骨髓瘤的患者(Carfilzomib,pomalidomide,and dexamethasone(CPD)in patients with relapsedand/or refractory multiple myeloma).血液(Blood)2015；126:2284-2290)。在一个实施例中，卡非唑米以与泊马度胺、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，卡非唑米以与泊马度胺、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，卡非唑米以与泊马度胺、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
用于组合疗法的另一种示范性药剂是达土木单抗(daratumumab)(例如DARZALEXTM)，一种结合CD38(多发性骨髓瘤细胞上高度表达的糖蛋白)的人类单克隆抗体。达土木单抗可通过静脉内输注向患者给药以治疗多发性骨髓瘤(参见Lokhorst HM等人在多发性骨髓瘤中用达土木单抗单药疗法靶向CD38(Targeting CD38 with daratumumabmonotherapy in multiple myeloma).新英格兰医学杂志(N Engl J Med)2015；373:1207-1219)。在一个实施例中，达土木单抗以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，达土木单抗以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，达土木单抗以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
达土木单抗还可以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物以及其它药剂的组合疗法给药。达土木单抗已与各种其它治疗多发性骨髓瘤的药剂组合。举例来说，达土木单抗已与硼替佐米和来那度胺组合(参见Phipps C等人达土木单抗和其在治疗多发性骨髓瘤中的潜力：临床前和临床开发的概览(Daratumumab and its potential in thetreatment of multiple myeloma:overview of the preclinical and clinicaldevelopment).血液学治疗性进展(Ther Adv Hematol)2015；6:120-127)。在一个实施例中，达土木单抗以与硼替佐米、来那度胺以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，达土木单抗以与硼替佐米、来那度胺以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，达土木单抗以与硼替佐米、来那度胺以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
达土木单抗也已与硼替佐米和地塞米松组合(参见Phipps C等人)。在一个实施例中，达土木单抗以与硼替佐米、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，达土木单抗以与硼替佐米、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，达土木单抗以与硼替佐米、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
用于组合疗法的另一种示范性药剂是埃罗妥珠单抗(elotuzumab)(例如EMPLICITITM)，一种结合CD319或传信淋巴细胞性活化分子F7(signaling lymphocyticactivation molecule F7；SLAMF7)(恶性多发性骨髓瘤细胞的标记)的单克隆抗体。埃罗妥珠单抗可通过静脉内输注向患者给药以治疗多发性骨髓瘤(参见Zonder JA等人埃罗妥珠单抗在患有晚期多发性骨髓瘤的患者中的1期、多中心、开放标签、剂量递增研究(A phase1,multicenter,open-label,dose escalation study of elotuzumab in patients withadvanced multiple myeloma).血液(Blood)2012；120:552-559).)。在一个实施例中，埃罗妥珠单抗以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，埃罗妥珠单抗以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，埃罗妥珠单抗以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
埃罗妥珠单抗还可以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物以及其它药剂的组合疗法给药。埃罗妥珠单抗已与各种其它治疗多发性骨髓瘤的药剂组合。举例来说，埃罗妥珠单抗已与来那度胺和地塞米松组合(参见Lonial S等人用于复发性或难治愈多发性骨髓瘤的埃罗妥珠单抗疗法(Elotuzumab therapy for relapsed or refractory multiplemyeloma).新英格兰医学杂志(N Engl J Med)2015；373:621-631；)。在一个实施例中，埃罗妥珠单抗以与来那度胺、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，埃罗妥珠单抗以与来那度胺、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，埃罗妥珠单抗以与来那度胺、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
另一种用于组合疗法的示范性药剂是来那度胺(例如
Figure BDA0003820558790000301
)，一种给予患者以治疗多发性骨髓瘤的免疫调节剂(参见Richardson PG,用于患有复发性或复发性和难治愈多发性骨髓瘤的患者的来那度胺疗法的随机化2期研究(A randomized phase 2study of lenalidomide therapy for patients with relapsed or relapsed andrefractory multiple myeloma).血液(Blood)2006,108:3458-3464)。来那度胺可包装为用于经口给药的胶囊、丸剂或锭剂。在一个实施例中，来那度胺以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，来那度胺以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，来那度胺以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
来那度胺还可以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物以及其它药剂的组合疗法给药。来那度胺已与各种其它治疗多发性骨髓瘤的药剂组合。举例来说，来那度胺已与硼替佐米和地塞米松组合(参见Richardson PG等人患有新诊断的多发性骨髓瘤的患者中的来那度胺、硼替佐米以及地塞米松组合疗法(Lenalidomide,bortezomib,anddexamethasone combination therapy in patients with newly diagnosed multiplemyeloma).血液(Blood)2010；116:679-686)。在一个实施例中，来那度胺以与硼替佐米、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，来那度胺以与硼替佐米、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，来那度胺以与硼替佐米、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
来那度胺也已与卡非唑米和地塞米松组合(参见Stewart KA等人)。在一个实施例中，来那度胺以与卡非唑米、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，来那度胺以与卡非唑米、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，来那度胺以与卡非唑米、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
来那度胺也已与达土木单抗和硼替佐米组合(参见Phipps C等人)。在一个实施例中，来那度胺以与达土木单抗、硼替佐米以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，来那度胺以与达土木单抗、硼替佐米以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，来那度胺以与达土木单抗、硼替佐米以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
来那度胺也已与埃罗妥珠单抗和地塞米松组合(参见Lonial S等人用于复发性或难治愈多发性骨髓瘤的埃罗妥珠单抗疗法(Elotuzumab therapy for relapsed orrefractory multiple myeloma).新英格兰医学杂志(N Engl J Med)2015；373:621-631)。在一个实施例中，来那度胺以与埃罗妥珠单抗、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，来那度胺以与埃罗妥珠单抗、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，来那度胺以与埃罗妥珠单抗、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
用于组合疗法的另一种示范性药剂是硼替佐米(例如
Figure BDA0003820558790000311
)，一种给予患者以治疗多发性骨髓瘤和套细胞淋巴瘤的蛋白酶体抑制剂(参见Richardson PG等人硼替佐米在复发性、难治愈骨髓瘤中的2期研究(A phase 2study of bortezomib inrelapsed,refractory myeloma).新英格兰医学杂志(N Engl J Med)2003；348:2609-2617)。硼替佐米可通过静脉内注射向患者给药。在一个实施例中，硼替佐米以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，硼替佐米以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，硼替佐米以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
硼替佐米还可以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物以及其它药剂的组合疗法给药。硼替佐米已与各种其它治疗多发性骨髓瘤的药剂组合。举例来说，硼替佐米已与撒利多胺(thalidomide)和地塞米松组合(参见Kapoor P等人多发性骨髓瘤中的硼替佐米组合疗法(Bortezomib combination therapy in multiple myeloma).中华血液学(SeminHematol)2012；3:228-242)。在一个实施例中，硼替佐米以与撒利多胺、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，硼替佐米以与撒利多胺、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，硼替佐米以与撒利多胺、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
硼替佐米也已与地塞米松、撒利多胺、顺铂(cisplatin)、小红莓(doxorubicin)、环磷酰胺以及依托泊苷(etoposide)(参见Kapoor P等人)组合。在一个实施例中，硼替佐米以与地塞米松、撒利多胺、顺铂、小红莓、环磷酰胺、依托泊苷以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，硼替佐米以与地塞米松、撒利多胺、顺铂、小红莓、环磷酰胺、依托泊苷以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，硼替佐米以与地塞米松、撒利多胺、顺铂、小红莓、环磷酰胺、依托泊苷以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
硼替佐米也已与达土木单抗和来那度胺组合(参见Phipps C等人)。在一个实施例中，硼替佐米以与达土木单抗、来那度胺以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，硼替佐米以与达土木单抗、来那度胺以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，硼替佐米以与达土木单抗、来那度胺以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
硼替佐米也已与来那度胺和地塞米松组合(参见Richardson PG等人2010)。在一个实施例中，硼替佐米以与来那度胺、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，硼替佐米以与来那度胺、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，硼替佐米以与来那度胺、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
硼替佐米也已与帕比司他和地塞米松组合(参见Richardson P等人全景2：在患有复发性和硼替佐米难治愈骨髓瘤的患者中帕比司他与硼替佐米和地塞米松组合(PANORAMA2:panobinostat in combination with bortezomib and dexamethasone in patientswith relapsed and bortezomib-refractory myeloma).血液(Blood)2013；122:2331-2337)。在一个实施例中，硼替佐米以与帕比司他、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，硼替佐米以与帕比司他、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，硼替佐米以与帕比司他、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
用于组合疗法的另一种示范性药剂是地塞米松(例如
Figure BDA0003820558790000321
)，一种用以治疗癌症(包括多发性骨髓瘤、白血病以及淋巴瘤)、炎症、过敏以及恶心的糖皮类固醇。地塞米松可作为用于经口给药的锭剂、丸剂或胶囊给药，或通过静脉内输注给药。在一个实施例中，地塞米松以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，地塞米松以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，地塞米松以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。地塞米松还可以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物以及其它药剂的组合疗法给药。
用于组合疗法的另一种示范性药剂是环磷酰胺(例如
Figure BDA0003820558790000331
)，一种用以治疗癌症(包括多发性骨髓瘤、急性骨髓细胞性白血病、霍奇金和非霍奇金淋巴瘤、乳癌以及肺癌等等)的烷化剂。环磷酰胺可通过注射、输注，或作为用于经口给药的锭剂、丸剂或胶囊，或通过注射至肌肉中、注射至腹部内层中或注射至肺内层中来给药。在一个实施例中，环磷酰胺以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，环磷酰胺以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，环磷酰胺以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。环磷酰胺还可以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物以及其它药剂的组合疗法给药。
用于组合疗法的另一种示范性药剂是美法仑(melphalan)，一种用以治疗癌症(包括多发性骨髓瘤和卵巢癌)的烷化剂。美法仑可经口、以注射或输注给药。在一个实施例中，美法仑以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，美法仑以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，美法仑以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。美法仑还可以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物以及其它药剂的组合疗法给药。
用于组合疗法的另一种示范性药剂是泊马度胺(例如
Figure BDA0003820558790000332
)，一种用以治疗多发性骨髓瘤的免疫调节剂。泊马度胺可作为用于经口给药的胶囊、丸剂或锭剂给药。在一个实施例中，泊马度胺以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，泊马度胺以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，泊马度胺以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
泊马度胺还可以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物以及其它药剂的组合疗法给药。泊马度胺已与各种其它治疗多发性骨髓瘤的药剂组合。泊马度胺已与地塞米松组合(参见Richardson P等人复发性和难治愈多发性骨髓瘤中的仅泊马度胺或与低剂量地塞米松组合：随机化2期研究(Pomalidomide alone or in combination with low-dosedexamethasone in relapsed and refractory multiple myeloma:a randomized phase2 study).血液(Blood)2014；123:1826-1832)。在一个实施例中，泊马度胺以与地塞米松和本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，泊马度胺以与地塞米松和本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，泊马度胺以与地塞米松和本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
泊马度胺也已与卡非唑米和地塞米松组合(参见Shah J等人卡非唑米、泊马度胺以及地塞米松(CPD)用于患有复发性和/或难治愈多发性骨髓瘤的患者(Carfilzomib,pomalidomide,and dexamethasone(CPD)in patients with relapsed and/orrefractory multiple myeloma).血液(Blood)2015；126:2284-2290)。在一个实施例中，泊马度胺以与卡非唑米、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，泊马度胺以与卡非唑米、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，泊马度胺以与卡非唑米、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
用于组合疗法的另一种示范性药剂是帕比司他(例如
Figure BDA0003820558790000341
)，一种用以治疗癌症(包括多发性骨髓瘤)的组蛋白脱乙酰基酶(histone deacetylase；HDAC)抑制剂(参见Wolf JL等人经口帕比司他(LBH589)在患有晚期难治愈多发性骨髓瘤的成年患者中的II期研究(A phase II study of oral panobinostat(LBH589)in adult patients withadvanced refractory multiple myeloma).ASH年度会议摘要(ASH Annual MeetingAbstracts),2008)。帕比司他可作为用于经口给药的丸剂、胶囊或锭剂给药。在一个实施例中，帕比司他以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，帕比司他以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，帕比司他以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
帕比司他还可以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物以及其它药剂的组合疗法给药。帕比司他已与各种其它治疗多发性骨髓瘤的药剂组合。举例来说，帕比司他已与卡非唑米组合(参见Berdeja JG等人)。在一个实施例中，帕比司他以与卡非唑米和本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，帕比司他以与卡非唑米和本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，帕比司他以与卡非唑米和本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
帕比司他也已与硼替佐米和地塞米松组合(参见Richardson P等人2013)。在一个实施例中，帕比司他以与硼替佐米、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，帕比司他以与硼替佐米、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，帕比司他以与硼替佐米、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
用于组合疗法的另一种示范性药剂是埃沙佐米(ixazomib)
Figure BDA0003820558790000351
一种用以治疗癌症(包括多发性骨髓瘤)的蛋白酶体抑制剂。埃沙佐米可经口给药。在一个实施例中，埃沙佐米以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，埃沙佐米以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，埃沙佐米以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
埃沙佐米还可以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物以及其它药剂的组合疗法给药。埃沙佐米已与各种其它治疗多发性骨髓瘤的药剂组合。举例来说，埃沙佐米已与来那度胺和地塞米松组合(参见Moreau P等人埃沙佐米，一种研究用经口蛋白酶体抑制剂，与来那度胺和地塞米松组合显著延长患有复发性和/或难治愈多发性骨髓瘤的患者的无进展存活期：3期电气石-MM1研究(Ixazomib,an investigational oral proteasomeinhibitor,in combination with lenalidomide and dexamethasone,significantlyextends progression-free survival for patients with relapsed and/orrefractory multiple myeloma:the phase 3 tourmaline-MM1 study).ASH年度会议摘要(ASH Annual Meeting Abstracts),2015)。在一个实施例中，埃沙佐米以与来那度胺、地塞米松以及本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，埃沙佐米以与来那度胺、地塞米松以及本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，埃沙佐米以与来那度胺、地塞米松以及本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
用于组合疗法(尤其在治疗非霍奇金淋巴瘤中)的其它示范性药剂包括抗CD20抗体(包括利妥昔单抗(rituximab)、替坦异贝莫单抗(Ibritumomab tiuxetan)、托西莫单抗(tositumomab)、奥法木单抗(ofatumumab)、维托珠单抗(veltuzumab)以及奥必珠单抗(obinutuzumab))，抗CD52抗体(包括阿仑单抗(alemtuzumab))，抗PD1抗体(包括尼沃单抗(nivolumab)、匹立珠单抗(pidilizumab)以及派立珠单抗(pembrolizumab))，抗PDL1抗体(包括durvalumab和atezolizumab)，贝伦妥单抗(brentuximab)维多汀(vedotin)，苯达莫司汀(bendamustine)以及硼替佐米。在一个实施例中，抗CD20抗体、抗CD52抗体、抗PD1抗体、抗PDL1抗体、贝伦妥单抗维多汀、苯达莫司汀以及硼替佐米中的一种以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，抗CD20抗体、抗CD52抗体、抗PD1抗体、抗PDL1抗体、贝伦妥单抗维多汀、苯达莫司汀以及硼替佐米中的一种以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，抗CD20抗体、抗CD52抗体、抗PD1抗体、抗PDL1抗体、贝伦妥单抗维多汀、苯达莫司汀以及硼替佐米中的一种以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
另外，用于组合疗法的其它药剂包括如以下的化学治疗方案：CHOP(环磷酰胺、小红莓、长春新碱以及泼尼松(prednisone))；CVP(环磷酰胺、长春新碱以及泼尼松)；RCVP(利妥昔单抗+CVP)；RCHOP(利妥昔单抗+CHOP)；RCHP(利妥昔单抗、环磷酰胺、小红莓以及泼尼松)；RICE(利妥昔单抗+异环磷酰胺、卡铂(carboplatin)、依托泊苷)；RDHAP，(利妥昔单抗+地塞米松、阿糖胞苷(cytarabine)、顺铂)；RESHAP(利妥昔单抗+依托泊苷、甲基泼尼龙(methylprednisolone)、阿糖胞苷、顺铂)；R-BENDA(利妥昔单抗和苯达莫司汀)，RGDP(利妥昔单抗、吉西他滨(gemcitabine)、地塞米松、顺铂)。在一个实施例中，CHOP、CVP、RCVP、RCHOP、RCHP、RICE、RDHAP、RESHAP、R-BENDA以及RGDP中的一种以与本发明的针对NTB-A的抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，CHOP、CVP、RCVP、RCHOP、RCHP、RICE、RDHAP、RESHAP、R-BENDA以及RGDP中的一种以与本发明的人源化20F3抗体-药物结合物的组合疗法给药。在另一实施例中，CHOP、CVP、RCVP、RCHOP、RCHP、RICE、RDHAP、RESHAP、R-BENDA以及RGDP中的一种以与本发明的h20F3ec-1910(2)的组合疗法给药。
作为裸抗体或作为抗体药物结合物的抗NTB-A抗体以有效疗程给药意指延缓发病、降低严重程度、抑制进一步恶化和/或改善癌症的至少一种病征或症状的剂量、给药途径以及给药频率。在一些实例中，可相对于历史对照或同一患者中的过去经历观测个别患者中的治疗效果。在其它实例中，治疗效果可在一群经治疗患者中的临床前或临床试验中相对于未治疗患者的对照群体展现。
抗NTB-A裸抗体的示范性剂量是0.1mg/kg到50mg/kg的患者体重，更通常1mg/kg到30mg/kg、1mg/kg到20mg/kg、1mg/kg到15mg/kg、1mg/kg到12mg/kg、或1mg/kg到10mg/kg、1或2mg/kg到30mg/kg、2mg/kg到20mg/kg、2mg/kg到15mg/kg、2mg/kg到12mg/kg、或2mg/kg到10mg/kg、或3mg/kg到30mg/kg、3mg/kg到20mg/kg、3mg/kg到15mg/kg、3mg/kg到12mg/kg、或3mg/kg到10mg/kg。
抗NTBA抗体药物结合物的示范性剂量是1.0μg/kg到约10mg/kg、1.0μg/kg到约5mg/kg、1.0μg/kg到约5mg/kg、约1.0μg/kg到约1.0mg/kg、约10μg/kg到约3mg/kg、约10μg/kg到约2mg/kg、约1.0μg/kg到1.0mg/kg、或约1.0μg/kg到500.0μg/kg或约.0μg/kg到80.0、100.0或200.0μg/kg。
针对NTB-A的PBD结合物的示范性剂量一般是约1.0μg/kg到1.0mg/kg、或约1.0μg/kg到500.0μg/kg或约.0μg/kg到80.0、100.0或200.0μg/kg，但设想替代剂量。
给药通常是不经肠的。给药也可直接定位于肿瘤中。优选通过静脉内或皮下给药来给药进入全身循环。静脉内给药可例如通过在如30到90分钟的时间段内输注或通过单次快速注射。
给药的频率取决于抗体或结合物在循环中的半衰期、患者的条件和给药途径以及其它因素。频率可为每天、每周、每月、每季，或回应于患者条件的改变或所治疗的癌症的进展呈不规则时间间隔。静脉内给药的示范性频率是跨越连续疗程在一周两次与每季一次之间，但较频繁或较不频繁的给药也是可能的。静脉内给药的其它示范性频率是跨越连续疗程在每周一次或每四周中三次之间，但较频繁或较不频繁的给药也是可能的。对于皮下给药，示范性给药频率是每天到每月，但较频繁或较不频繁的给药也是可能的。
给药剂量次数在某种程度上取决于病症的性质(例如是否表现急性或慢性症状)和病症对治疗的反应。对于急性病症或慢性病症的急性恶化，1与10次剂量之间通常是足够的。有时单次剂量，任选地呈分开形式，对于急性病症或慢性病症的急性恶化是足够的。针对急性病症或急性恶化的复发可重复治疗。对于慢性病症，抗体可每隔一定时间间隔给药，例如每周、每两星期一次、每月、每季、每六个月，持续至少1、5或10年，或患者的寿命。
用于不经肠给药的医药组合物优选是无菌的和大体上等渗的，并且在GMP条件下制造。医药组合物可以单位剂型(即用于单次给药的剂量)提供。医药组合物可使用一种或多种生理学上可接受的载剂、稀释剂、赋形剂或助剂调配。调配物取决于所选择的给药途径。对于注射，抗体可调配成水溶液，优选在生理上相容的缓冲液中，如汉克氏(Hank's)溶液、林格氏(Ringer's)溶液、或生理盐水或乙酸盐缓冲液(以减少注射部位的不适)。溶液可含有调配剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者抗体药物结合物可呈在使用前用适合的媒剂(例如无菌无热原质水)复原的冻干形式。液体调配物中抗体的浓度可为例如1到100mg/ml，如10mg/ml。
用本文所公开的裸抗体或抗体药物结合物的治疗可与化疗、放射、干细胞治疗、手术其它有效对抗所治疗病症的治疗组合。可与抗NTB-A抗体或抗体药物结合物一起给药的其它药剂的适用类别包括例如癌细胞上表达的其它受体的抗体、抗微管蛋白剂(例如奥瑞他汀)、DNA小沟结合剂、DNA复制抑制剂、烷化剂(例如铂络合物，如顺铂、单(铂)、双(铂)和三核铂络合物以及卡铂)、蒽环霉素(anthracycline)、抗生素、抗叶酸剂、抗代谢物、化疗敏化剂、倍癌霉素、依托泊苷、氟化嘧啶、离子载体、莱克希托普森(lexitropsin)、亚硝基脲、顺氯氨铂(platinol)、预形成化合物、嘌呤抗代谢物、嘌呤霉素、放射敏化剂、类固醇、紫杉烷、拓扑异构酶抑制剂、长春花生物碱(vinca alkaloid)等等。
用裸抗体或抗NTB-A抗体药物结合物，任选地与上文所述的其它药剂或方案中的任一种单独组合或作为抗体药物结合物的治疗可使患有表达NTB-A的癌症(例如多发性骨髓瘤、AML、NHL)的患者的中值无进展存活期或总存活时间相比于相同治疗(例如化疗)但无单独或作为结合物的抗NTB-A抗体增加至少30％或40％但优选50％、60％到70％或甚至100％或更长，尤其在复发性或难治愈时。另外或或者，包括抗NTB-A结合物的治疗(例如标准化疗)可使患有表达NTB-A的癌症的患者的完整反应率、部分反应率或客观反应率(完整+部分)相比于相同治疗(例如化疗)但无抗NTB-A抗体增加至少30％或40％但优选50％、60％到70％或甚至100％。
通常，在临床试验(例如II期、II期/III期或III期试验)中，前述的经标准疗法加上抗NTB-A抗体治疗的患者的中值无进展存活期和/或反应率相对于仅接受标准疗法(或加安慰剂)的患者的对照组的增加是统计学上显著的，例如处于p＝0.05或0.01或甚至0.001水平。完整和部分反应率通过癌症临床试验中常用的客观指标测定，例如，如由国家癌症研究所(National Cancer Institute)和/或食品和药物管理局(Food and DrugAdministration)所列举或公认。
在其它应用中，本文所公开的抗NTB-A抗体可用于在临床诊断或治疗的情形下或在研究中检测NTB-A。癌症上NTB-A的表达提供所述癌症适合于用本发明的抗体治疗的指示。抗体还可作为研究试剂出售，用于检测带有NTB-A的细胞和其对各种刺激的反应中的实验室研究。在此类用途中，抗NTB-A抗体可用荧光分子、旋转标记分子(spin-labeledmolecule)、酶或放射同种型标记，并且可呈具有进行NTB-A检定所必需的所有试剂的试剂盒形式提供。抗体还可用以纯化NTB-A，例如通过亲和性色谱法。
上文或下文所引用的所有专利申请、其它公开、寄存编号等等出于所有目的都以全文引用的方式并入本文中，其引用程度如同每一个别的项目专门并且单独地指示为以引用的方式如此并入一样。如果序列的不同版本与不同时间的寄存编号相关，那么意图与本申请的有效申请日的寄存编号相关的版本。有效申请日意指实际申请日稍早或如果涉及所述寄存编号的优先申请适用，那么所述优先申请的申请日稍早。同样地如果公开的不同版本在不同时间公开，那么除非另外指示，否则意图在申请的有效申请日最近公开的版本。除非以其它方式专门指定，否则本发明的任何特征、步骤、要素、实施例或方面可与任何其它特征、步骤、要素、实施例或方面组合使用。尽管出于清楚和理解的目的已经借助于说明和实例相当详细地描述了本发明，但显而易见可在所附权利要求书的范围内实践某些变化和修改。
实例
在以下实例中描述的细胞系根据通过美国菌种保藏中心(American TypeCulture Collection；ATCC)或德国不伦瑞克的德国微生物菌种保藏中心(DeutscheSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,Braunschweig,Germany)(DMSZ)指定或以其它方式已知的条件维持于培养物中。
实例1：抗体选择
将从产生NTB-A抗体的小鼠的脾和淋巴结捕获的淋巴细胞融合到骨髓瘤细胞。融合细胞在杂交瘤生长培养基中复原隔夜。在复原后，使细胞旋转沉降并且随后涂覆于半固体培养基中。培育杂交瘤并且挑选产生IgG的杂交瘤无性系。20F3抗体是展现作为ADC并且结合于食蟹猕猴NTB-A的强力细胞毒性的极少抗体中的一种。
实例2：人源化抗体的设计
人源化抗体衍生自鼠20F3抗体。使五种人源化重链(HA到HE)和四种人源化轻链(LA到LD)在不同位置处并入回复突变。在一些实例中，回复突变将符合鼠生殖系，但在其它情形下将不符合(如在体细胞突变的情形下)。人源化重链和轻链是成对的。参见用于序列比对的图1和2以及表1到4。
表1 20F3重链变异体中的人源化突变
<![CDATA[V<sub>H</sub>变异体]]> <![CDATA[V<sub>H</sub>外显子受体序列]]> 供体框架残基
<![CDATA[hV<sub>H</sub>A]]> VH7-4-1 无
<![CDATA[hV<sub>H</sub>B]]> VH7-4-1 H2和H73
<![CDATA[hV<sub>H</sub>C]]> VH7-4-1 H2、H44、H73以及H76
<![CDATA[hV<sub>H</sub>D]]> VH7-4-1 H2、H44、H46、H73、H76
<![CDATA[hV<sub>H</sub>E]]> VH7-4-1 H2、H38、H44、H46、H68、H73、H76以及H91
表2 20F3轻链变异体中的人源化突变
<![CDATA[V<sub>L</sub>变异体]]> <![CDATA[V<sub>L</sub>外显子受体序列]]> 供体框架残基
<![CDATA[hV<sub>L</sub>A]]> VK3-11 无
<![CDATA[hV<sub>L</sub>B]]> VK3-11 L46、L47、L71
<![CDATA[hV<sub>L</sub>C]]> VK3-11 L1、L5、L46、L47、L71
<![CDATA[hV<sub>L</sub>D]]> VK3-11 L1、L5、L21、L46、L47、L58、L71
表3 20F3重链变异体中的特异性突变
Figure BDA0003820558790000391
*小鼠残基
表4 20F3轻链变异体中的特异性突变
Figure BDA0003820558790000401
*小鼠残基
实例3：EC50和Kd测量
为测定EC50，使未标记人源化抗人类NTB-A抗体的3点剂量滴定物与结合到Alexa荧光剂647的恒定浓度(5nM最终)的小鼠20F3抗体混合。抗原阳性Ramos细胞以1×105个细胞/孔涂覆于96孔V型底盘中(赛默科技(Thermo Scientific)，纽约州罗契斯特(Rochester,NY))。在FACs缓冲液(PBS+2％胎牛血清)中制备抗体的50倍连续稀释物，并且一式两份添加到细胞。在冰上使抗体溶液与细胞一起培育1小时，经保护远离光。用FACs缓冲液洗涤细胞两次并且在LSRII流式细胞仪(BD生物科学(BD BioSciences)，加利福尼亚州圣何塞(San Jose,CA))上分析。用GraphPad Prism软件(加利福尼亚州拉荷亚(La Jolla,CA))测定EC50值。结果展示于表5中。
表5-人源化20F3的人源化重链和轻链的不同排列的EC50结合测定值与鼠20F3比较
Figure BDA0003820558790000402
鼠20F3 EC50是2nM。
结合到Alexa荧光剂647的抗人类NTB-A抗体(h20F3_HDLD-AF647)的剂量滴定物用以生成饱和结合曲线。抗原阳性Ramos细胞以1×105个细胞/孔涂覆于96孔V型底盘中(赛默科技(Thermo Scientific)，纽约州罗契斯特(Rochester,NY))。在FACs缓冲液(PBS+2％胎牛血清)中制备2份抗体的三倍连续稀释物，并且一式两份添加到细胞。在冰上使抗体溶液与细胞一起培育1小时，经保护远离光。用FACs缓冲液洗涤细胞两次并且在LSRII流式细胞仪(BD生物科学(BD BioSciences)，加利福尼亚州圣何塞(San Jose,CA))上分析。用GraphPad Prism软件(加利福尼亚州拉荷亚(La Jolla,CA))测定KD值。对抗人类NTB-A抗体h20F3_HDLD和嵌合20F3测试结合到过度表达食蟹猕猴NTB-A的293-F17细胞。293-F17/食蟹猕猴NTB-A细胞以5×105个细胞/孔涂覆于FACS缓冲液(PBS+2％胎牛血清+0.02％叠氮化合物)中，并且在冰上与20μg/mL抗体一起培育30分钟。洗涤细胞两次并且在冰上并经保护远离光用30μg/mL山羊抗人类IgG-PE(杰克逊免疫研究(Jackson ImmunoResearch)，宾夕法尼亚州西格罗夫(West Grove,PA))染色30分钟。再次用FACs缓冲液洗涤细胞两次。在FACsCalibur流式细胞仪(BD生物科学，加利福尼亚州圣何塞)上分析经染色细胞。结果展示于表6中。
表6-人源化20F3变异体HDLD抗体的饱和结合与嵌合20F3比较。
Figure BDA0003820558790000411
实例4：效应功能
补体依赖性细胞毒性(CDC)：用5μM Sytox绿(生命技术(Life Technologies)，纽约州格兰德岛(Grand Island,NY))标记正常人类T细胞(澳赛尔斯(All Cells)，加利福尼亚州阿拉米达(Alameda,CA))或癌细胞系(ATCC，弗吉尼亚州马纳萨斯(Manassas,VA))，随后在RPMI1640培养基+1020％人类血清(补体技术(Complement Technology)，德克萨斯州泰勒(Tyler,TX)或所罗门帕克研究实验室(Solomon Park Research Laboratories)，华盛顿州柯克兰(Kirkland,WA))中与系列抗人类NTB-A h20F3抗体或PBD二聚体ADCies(0.02到50μg/mL)的连续剂量滴定物结合。细胞在37℃、5％CO2下培育2小时，并且用Envision盘读取器(珀金埃尔默(Perkin Elmer)，马萨诸塞州沃尔瑟姆(Waltham,MA))测量来自裂解细胞的荧光。数据以所测定的最大细胞裂解与经1％TritonX-100处理的细胞(西格玛(Sigma)，密苏里州圣路易斯(ST.Louis,MO))的阳性对照的百分比表示。
三种细胞类型用于分析：正常人类T细胞、WIL2-S细胞以及Raji细胞。相关受体在每一细胞类型上的表达见于表7中，并且指定为每个细胞的受体数。
表7-受体的表达
Figure BDA0003820558790000412
Figure BDA0003820558790000421
如由下文表8可见，人源化20F3-HDLDwt IgG1抗体和ec变异体(在239位置处具有半胱氨酸的抗体带有指定ec)对正常休眠T淋巴细胞、WIL2-S以及Raji细胞系不具有CDC活性。由h20F3ec-1910(2)ADC观测到类似结果。
表8-人源化20F3抗体和ADC相比于坎帕斯(Campath)和利妥昔单抗的CDC活性
Figure BDA0003820558790000422
抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性检定：通过铬-51释放测量ADCC细胞毒性活性，其中效应自然杀伤(NK)细胞通过结合到靶细胞上的抗体或ADC杀死(裂解)靶细胞。用铬-51标记WIL2-S细胞，与抗体(0.1ng/mL到10μg/mL)结合，并且随后以10:1的效应子比标靶的比率在37℃、5％CO2下与NK细胞一起培育4小时。将上清液移出到过滤器板，并且用TopCount(珀金埃尔默，马萨诸塞州沃尔瑟姆)测量铬-51计数。数据以所测定的最大特异性细胞裂解与经1％TritonX-100处理的细胞(西格玛，密苏里州圣路易斯)的阳性对照的百分比表示。
使用基于流式细胞测量术的检定测量正常人类T细胞上的ADCC活性。经PKH2标记的正常人类T细胞标靶与抗体(0.1ng/mL到10μg/mL)的滴定物结合，并且随后以10:1的效应子比标靶的比率在37℃、5％CO2下与效应NK细胞一起培育4小时。通过如在FACsCalibur流式细胞仪(BD生物科学，加利福尼亚州圣何塞)上测量的7-AAD并入来测定存活率。
如下文表9可见，人源化20F3-HDLDwt抗体和ec变异体具有低到中等ADCC活性。h20F3ec-1910(2)PBD二聚体ADC展现相对于非结合h20F3ec抗体降低的ADCC活性。受体数公开于表7中。
表9-人源化20F3相比于坎帕斯和利妥昔单抗的ADCC活性
Figure BDA0003820558790000423
Figure BDA0003820558790000431
为分析NTB-A介导的ADCP活性，用红色荧光细胞膜染料PKH26标记正常T淋巴细胞或肿瘤细胞，随后在始于2μg/mL的5点、10倍稀释系列中用抗体或ADC标记。随后在冰上培育细胞30分钟并且用PBS洗涤两次。在37℃下使细胞与单核细胞衍生的巨噬细胞混合一小时。细胞混合物随后用结合Alexa荧光剂488的鼠抗CD11b染色，以标记巨噬细胞，并且通过流式细胞测量术分析以检测经PKH26+CD11b+双重标记的荧光细胞。吞噬细胞活性计算为(PKH26+CD11b+百分比)/(CD11b+细胞百分比)乘以一百。
如由下文表10可见，人源化20F3-HDLDwt抗体和ec变异体在癌细胞系上具有适度低于利妥昔单抗和坎帕斯抗体对照的ADCP活性。由h20F3ec-1910(2)ADC观测到类似结果。
表10-人源化20F3相比于坎帕斯和利妥昔单抗的ADCP活性
Figure BDA0003820558790000432
实例5：ADC内化
多发性骨髓瘤细胞系(MM.1R或U-266)与饱和浓度的ADC(10μg/mL)结合，用培养基洗涤，并且在37℃或4℃下培育。收集样品经PE标记的并且固定于1％PFA/PBS中的山羊-抗人类抗体(杰克逊免疫研究，宾夕法尼亚州西格罗夫)染色的时间点。在收集所有时间点后，在FACs Calibur流式细胞仪(BD生物科学，加利福尼亚州圣何塞)上测量平均荧光强度。抗NTB-A h20F3ec-1910(2)PBD二聚体ADC迅速内化进MM.1R细胞中，其中在37℃下培育下80％的ADC在4小时内内化。当细胞保持于4℃对照条件下时，4小时时仅20％的h20F3ec-1910(2)ADC内化。
还用对h20F3ec抗体具有特异性的小鼠抗个体基因型抗体检测ADC在MM.1R细胞中的细胞表面和细胞内定位。使ADC在4℃下与MM.1R细胞结合30分钟，并且发现ADC迅速内化到溶酶体。
实例6:ADC在MM癌细胞系上的细胞毒性
以PBD和奥瑞他汀抗体药物结合物测试人源化抗体(HDLD)。抗有丝分裂剂单甲基奥瑞他汀E(MMAE)通过组织蛋白酶可切割缬氨酸-瓜氨酸(vc)连接子结合到抗NTB-A mAb。第二奥瑞他汀，奥瑞他汀-2通过肽连接子结合到抗NTB-A mAb。对于PBD结合物，药物-连接子SGD-1910通过在抗体的IgG1链的239位置处(根据EU索引编号)引入的半胱氨酸残基的硫醇基结合到抗NTBA抗体，并且平均药物负载是每个抗体约2个药物。在239位置处具有半胱氨酸的抗体带有指定ec。制备如WO2011/130613中所描述使用本文所述的抗NTBA抗体。ADC在培养基中连续稀释3倍以产生10点剂量曲线(1,000ng/mL-0.05081ng/mL)并且涂覆于96孔检定盘中培养的多发性骨髓瘤细胞。用抗NTB-A ADC处理一式四份细胞系，并且在37℃、5％CO2下培育96小时。使用Cell Titer Glo发光细胞毒性检定(普洛麦格(Promega))检定细胞的存活率，并且使用EnVision盘读取器(珀金埃尔默)收集数据。使用GraphPad Prism软件计算剂量效应曲线和IC50值。结果展示于表11和12中。
还分析对MM.1R细胞的作用机制。用ADC处理MM.1R细胞，并且通过用磷酸基-表位特异性抗体的蛋白质印迹法定量ATR和ATM激酶的活化。ADC活化的ATM/ATR含量几乎相当于自由PBD二聚体药物，因此ADC活化MM细胞中的DNA损伤反应。
表11-与人源化20F3的各种抗体药物结合物在多发性骨髓瘤细胞系中的IC50值(IC50值以ng/mL为单位；hIgG是非结合阴性对照抗体)
Figure BDA0003820558790000441
表12-与人源化20F3的各种抗体药物结合物在NHL和AML细胞系中的IC50值(IC50值以ng/mL为单位；hIgG是非结合阴性对照抗体)
Figure BDA0003820558790000442
Figure BDA0003820558790000451
实例7：ADC在人类淋巴细胞上的细胞毒性
为分析抗NTB-A ADC在休眠人类T和B淋巴细胞上的细胞毒性效应，将经纯化的细胞接种于黑色96孔检定盘中。随后用始于10μg/mL滴定下调5倍持续总共8个稀释点的抗NTB-A ADC处理细胞。对于自由药物处理，用始于l,000nM的MMAE或始于100nM的自由PBD二聚体滴定下调5倍持续总共8个稀释点给予细胞。盘在37℃、5％CO2下培育96小时，随后使其平衡到室温。将相等体积的Cell-Titer Glo试剂添加到各孔，并且使盘在室温下培育另外30分钟。随后在珀金埃尔默Envision盘读取器上读取盘。使用GraphPad Prism软件计算剂量效应曲线和IC50值。结果展示于表13中。
表13-嵌合20F3抗体和自由药物在休眠人类T和B淋巴细胞上的IC50值。
Figure BDA0003820558790000452
在96小时细胞毒性检定中休眠人类T淋巴细胞不受PBD二聚体或奥瑞他汀嵌合20F3 ADC影响。自由PBD二聚体对休眠T淋巴细胞具有细胞毒性，表明T淋巴细胞对此DNA损伤药物敏感。因此，NTB-A的细胞表面含量对于c20F3-1910(2)ADC内化足够的PBD药物以杀死休眠T淋巴细胞来说过低。相反，MMAE自由药物和c20F3-vcMMAE(4)ADC在休眠T淋巴细胞上均不强力。休眠人类B淋巴细胞对自由药物MMAE和PBD二聚体均敏感。然而，c20F3-1910(2)ADC仅在高ADC浓度(>1,000ng/mL)在休眠B淋巴细胞上具有细胞毒性效应，而c20F3-vcMMAE(4)ADC不具有细胞毒性效应。因此，B淋巴细胞上NTB-A的细胞表面含量过低，以致不能介导用PBD二聚体或奥瑞他汀c20F3 ADC的强力细胞毒性效应。
实例8：活体内MM异种移植研究
NSG(NOD scidγ；NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ)小鼠每个动物经静脉内移植1百万个MM.1R细胞，以产生多发性骨髓瘤的散播性模型。肿瘤细胞移植五天后，给予每个治疗组n＝10个小鼠单次腹膜内注射h20F3ec-1910(2)PBD ADC或非结合对照hIgGec-1910(2)PBD ADC。所检测PBD ADC剂量水准为333μg/kg、111μg/kg以及37μg/kg。具有晚期肿瘤负荷的小鼠在展示后肢瘫痪、头部膨胀和/或垂死的症状时被处死。如图3中所示，HDLDh20F3ec-1910(2)PBD二聚体ADC在10/10个小鼠中在所有剂量水准(单次剂量)下产生持久的完整反应，而给药非结合对照PBD ADC的小鼠在研究第80天时归因于疾病均被处死。在h20F3ec-1910(2)ADC(37μg/kg)对比对照hIgGec-1910(2)ADC(333μg/kg)组之间达成统计学上显著的差异(P<0.0001Mantel-Cox测试)。
NSG(NOD scidγ；NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtmlwjl/SzJ)小鼠每个动物经静脉内移植5百万个U-266细胞，以产生多发性骨髓瘤的散播性模型。肿瘤细胞移植五天后，给予每个治疗组n＝10个小鼠单次腹膜内注射h20F3ec-1910(2)PBD ADC或非结合对照hIgGec-1910(2)PBD ADC。所检测PBD ADC剂量水准为111μg/kg、56μg/kg以及28μg/kg。具有晚期肿瘤负荷的小鼠在展示后肢瘫痪、头部膨胀和/或垂死的症状时被处死。如图4中所示，HDLD h20F3ec-1910(2)PBD二聚体ADC在9/10个小鼠中在111μg/kg(单次剂量)下产生持久的完整反应。在较低剂量水准(28和56μg/kg)下h20F3ec-1910(2)对比hIgGec-1910(2)(111μg/kg)对照PBDADC产生显著的(P<0.0001Mantel-Cox测试)疾病发作延迟。
NSG(NOD scidγ；NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtmlWjl/SzJ)小鼠每个动物经静脉内移植1千万个EJM细胞，以产生多发性骨髓瘤的散播性模型。肿瘤细胞移植五天后，给予每个治疗组n＝10个小鼠单次腹膜内注射h20F3ec-1910(2)PBD ADC或非结合对照hIgGec-1910(2)PBD ADC。所检测PBD ADC剂量水准为333μg/kg、111μg/kg以及37μg/kg。具有晚期肿瘤负荷的小鼠在展示后肢瘫痪、头部膨胀和/或垂死的症状时被处死。如图5中所示，HDLDh20F3ec-1910(2)PBD二聚体ADC在8/10个小鼠中在333μg/kg(单次剂量)下产生持久的完整反应。在较低剂量水准(37和111μg/kg)下h20F3ec-1910(2)对比hIgGec-1910(2)(333μg/kg)对照PBD ADC产生显著的(P<0.0001Mantel-Cox测试)疾病发作延迟。
SCID(C.B-17/Sz-Prkdcscid)小鼠每个动物经皮下移植5百万个HNT-34急性骨髓白血病细胞。当平均肿瘤体积达到100mm3时，给予每个治疗组n＝10个小鼠单次腹膜内注射h20F3ec-1910(2)PBD ADC或非结合对照hIgGec-1910(2)PBD ADC。所检测PBD ADC剂量水准为333μg/kg、111μg/kg以及37μg/kg。个别小鼠在皮下HNT-34肿瘤体积达到1,000mm3时被处死。如图6中所示，HDLD h20F3ec-1910(2)PBD二聚体ADC在所有小鼠中在333μg/kg和111μg/kg剂量水准下产生持久的完整反应。在37μg/kg的较低剂量水准下，h20F3ec-1910(2)产生强的肿瘤延迟和2/10持久的完整反应。hIgGec-1910(2)对照PBD ADC在333μg/kg下产生0/10完整反应。
NSG(NOD scidγ；NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtmlwjl/SzJ)小鼠每个动物经静脉内移植1百万个MM.1R细胞，以产生多发性骨髓瘤的散播性模型。肿瘤细胞移植五天后，给予每个治疗组n＝10个小鼠单次腹膜内注射h20F3-奥瑞他汀2(8)ADC或非结合对照hIgG-奥瑞他汀2(8)ADC。所检测奥瑞他汀2ADC剂量水准为3.0mg/kg和1.0mg/kg。具有晚期肿瘤负荷的小鼠在展示后肢瘫痪、头部膨胀和/或垂死的症状时被处死。如图7中所示，在散播性MM.1R模型中，HDLD h20F3-奥瑞他汀2(8)ADC在3.0mg/kg和1.0mg/kg剂量水准下对比对照hIgG-奥瑞他汀2(8)ADC(3.0mg/kg)产生显著的肿瘤延迟(P<0.0001Mantel-Cox测试)。
NSG(NOD scidγ；NOD.Cg-PrkdcscidII2rgtmlWjl/SzJ)小鼠每个动物经静脉内移植5百万个U-266细胞，以产生多发性骨髓瘤的散播性模型。肿瘤细胞移植五天后，给予每个治疗组n＝10个小鼠单次腹膜内注射抗NTB-A ADC h20F3-vcMMAE(4)、h20F3-奥瑞他汀2(8)或非结合对照ADC hIgG-vcMMAE(4)和hIgG-奥瑞他汀2(8)。所检测ADC剂量水准为3.0mg/kg，和1.0mg/kg。具有晚期肿瘤负荷的小鼠在展示后肢瘫痪、头部膨胀和/或垂死的症状时被处死。如图8中所示，h20F3-vcMMAE(4)ADC在3.0mg/kg剂量水准下在8/10个小鼠中产生持久的完整反应。h20F3-奥瑞他汀2(8)ADC在1.0mg/kg和3.0mg/kg两个剂量水准下产生10/10持久的完整反应。抗NTB-A奥瑞他汀2ADC比vcMMAE(4)ADC具有更大的抗肿瘤活性，尤其在1.0mg/kg剂量水准下。
NSG(NOD scidγ；NOD.Cg-PrkdcscidII2rgtmlWjl/SzJ)小鼠每个动物经静脉内移植1千万个EJM细胞，以产生多发性骨髓瘤的散播性模型。肿瘤细胞移植五天后，给予每个治疗组n＝10个小鼠单次腹膜内注射抗NTB-A ADC h20F3-vcMMAE(4)、h20F3-奥瑞他汀2(8)或非结合对照ADC hIgG-vcMMAE(4)和hIgG-奥瑞他汀2(8)。所检测ADC剂量水准为3.0mg/kg，和1.0mg/kg。具有晚期肿瘤负荷的小鼠在展示后肢瘫痪、头部膨胀和/或垂死的症状时被处死。如图9中所示，HDLD h20F3-vcMMAE(4)ADC对比hIgG-vcMMAE(4)对照ADC在3.0mg/kg剂量水准下产生显著的(P＝0.0002Mantel-Cox测试)肿瘤延迟。h20F3-奥瑞他汀2(8)ADC分别在1.0mg/kg和3.0mg/kg剂量水准下产生2/10或9/10持久的完整反应。抗NTB-A奥瑞他汀2ADC比vcMMAE(4)ADC在1.0mg/kg(P＝0.0002Mantel-Cox测试)和3.0mg/kg(P<0.0001Mantel-Cox测试)剂量水准下具有显著更大的抗肿瘤活性。
SCID(C.B-17/Sz-Prkdcscid)小鼠每个动物经皮下移植5百万个HNT-34急性骨髓白血病细胞。当平均肿瘤体积达到100mm3时，给予每个治疗组n＝10个小鼠单次腹膜内注射抗NTB-A ADC h20F3-vcMMAE(4)、h20F3-奥瑞他汀2(8)或非结合对照ADC hIgG-vcMMAE(4)和hIgG-奥瑞他汀2(8)。所检测ADC剂量水准为3.0mg/kg，和1.0mg/kg。个别小鼠在皮下HNT-34肿瘤体积达到1,000mm3时被处死。如图10中所示，vcMMAE(4)和奥瑞他汀2(8)HDLD h20F3ADC在HNT-34皮下AML模型中极具活性。h20F3-vcMMAE(4)ADC分别在1.0mg/kg或3.0mg/kg剂量水准下在4/10或9/10个小鼠中产生持久的完整反应。h20F3-奥瑞他汀2(8)ADC分别在1.0mg/kg或3.0mg/kg剂量水准下产生3/10或9/10持久的完整反应。
实例9：活体内非霍奇金淋巴瘤异种移植研究
SCID(C.B-17/Sz-Prkdcscid)小鼠每个动物经皮下移植5百万个Raji非霍奇金淋巴瘤细胞。当平均肿瘤体积达到100mm3时，给予每个治疗组n＝6个小鼠单次腹膜内注射h20F3ec-1910(2)PBD ADC或对照hIgGec-1910(2)PBD ADC。所检测PBD ADC剂量水准为100μg/kg、50μg/kg以及25μg/kg。个别小鼠在皮下Raji肿瘤体积达到1,000mm3时被处死。如图11中所示，HDLD h20F3ec-1910(2)PBD二聚体ADC在所有小鼠中在100μg/kg剂量水准下产生持久的完整反应。另外，h20F3ec-1910(2)PBD ADC在50μg/kg剂量水准下在4/6个小鼠中产生持久的完整反应，而在25μg/kg剂量水准下观测到肿瘤生长延迟。hIgGec-1910(2)对照PBDADC在100μg/kg下不具有抗肿瘤活性并且产生0/6完整反应。
SCID(C.B-17/Sz-Prkdcscid)小鼠每个动物经皮下移植5百万个WSU-DLCL2非霍奇金淋巴瘤细胞。当平均肿瘤体积达到100mm3时，给予每个治疗组n＝8个小鼠单次腹膜内注射h20F3ec-1910(2)PBD ADC或对照hIgGec-1910(2)PBD ADC。所检测PBD ADC剂量水准为100μg/kg、50μg/kg以及25μg/kg。个别小鼠在皮下WSU-DLCL2肿瘤体积达到1,000mm3时被处死。如图12中所示，HDLD h20F3ec-1910(2)PBD二聚体ADC在100μg/kg剂量水准下在2/8个小鼠中产生持久的完整反应。在25μg/kg和50μg/kg的较低剂量水准下，h20F3ec-1910(2)PBDADC相对于未处理小鼠产生可测量的肿瘤生长延迟。hIgGec-1910(2)对照PBD ADC在100μg/kg下不具有抗肿瘤活性并且产生0/8完整反应。
序列表
SEQ ID NO:1是人类NTB-A的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000491
SEQ ID NO:2是食蟹猕猴NTB-A的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000492
SEQ ID NO:3是鼠20F3的成熟重链可变区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000493
SEQ ID NO:4是不具有回复突变并且具有鼠CDR的人源化20F3的成熟重链可变区的氨基酸序列，如由卡巴特所定义。
Figure BDA0003820558790000494
SEQ ID NO:5是人源化20F3 HA的成熟重链可变区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000495
SEQ ID NO:6是人源化20F3 HB的成熟重链可变区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000496
SEQ ID NO:7是人源化20F3 HC的成熟重链可变区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000497
SEQ ID NO:8是人源化20F3 HD的成熟重链可变区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000498
SEQ ID NO:9是人源化20F3 HE的成熟重链可变区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000499
SEQ ID NO:10是鼠和人源化20F3的CDR-H1的氨基酸序列，如由卡巴特所定义。
NYGMN
SEQ ID NO:11是鼠和人源化20F3的CDR-H2的氨基酸序列，如由卡巴特所定义。
WINTYSGEPRYADDFKG
SEQ ID NO：12是鼠和人源化20F3的CDR-H3的氨基酸序列，如由卡巴特所定义。
DYGRWYFDV
SEQ ID NO：13是鼠20F3的成熟轻链可变区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000501
SEQ ID NO：14是不具有回复突变并且具有鼠CDR的人源化20F3的成熟轻链可变区的氨基酸序列，如由卡巴特所定义。
Figure BDA0003820558790000502
SEQ ID NO：15是人源化20F3 LA的成熟轻链可变区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000503
SEQ ID NO：16是人源化20F3 LB的成熟轻链可变区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000504
SEQ ID NO：17是人源化20F3 LC的成熟轻链可变区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000505
SEQ ID NO：18是人源化20F3 LD的成熟轻链可变区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000506
SEQ ID NO：19是鼠和人源化20F3的CDR-L1的氨基酸序列，如由卡巴特所定义。
RASSSVSHMH
SEQ ID NO：20是鼠和人源化20F3的CDR-L2的氨基酸序列，如由卡巴特所定义。
ATSNLAS
SEQ ID NO：21是鼠和人源化20F3的CDR-L3的氨基酸序列，如由卡巴特所定义。
QQWSSTPRT
SEQ ID NO：22是鼠20F3的CDR-H1的氨基酸序列，如由IMGT所定义。
GYTFTNYG
SEQ ID NO：23是鼠20F3的CDR-H2的氨基酸序列，如由IMGT所定义。
INTYSGEP
SEQ ID NO：24是鼠20F3的CDR-H3的氨基酸序列，如由IMGT所定义。
ARDYGRWYFDV
SEQ ID NO：25是鼠20F3的CDR-L1的氨基酸序列，如由IMGT所定义。
SSVSH
如由IMGT所定义的鼠20F3的CDR-L2的氨基酸序列是：
ATS
SEQ ID NO：26是鼠20F3的CDR-L3的氨基酸序列，如由IMGT所定义。
QQWSSTPRT
SEQ ID NO：27是人类轻链恒定区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000511
SEQ ID NO：28是天然存在的人类重链恒定区的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000512
SEQ ID NO：29是变异体人类重链恒定区(S239C)的氨基酸序列。
Figure BDA0003820558790000513

Claims (52)

1.一种特异性结合于人类NTB-A蛋白质的抗体，其中所述抗体包含SEQ ID NO:3的三个重链互补决定区和SEQ ID NO:13的3个轻链CDR，其中所述CDR如由卡巴特或IMGT所定义。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述CDR如由IMGT所定义。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述CDR是卡巴特CDR。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体，其为人源化、嵌合或镶饰抗体。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体，包含与SEQ ID NO:8具有至少80％序列一致性的成熟重链区和与SEQ ID NO:18具有至少80％序列一致性的成熟轻链可变区。
6.根据权利要求5所述的抗体，其为包含与SEQ ID NO:8具有至少90％序列一致性的成熟重链可变区和与SEQ ID NO:18具有至少90％序列一致性的成熟轻链可变区的人源化抗体。
7.根据权利要求6所述的抗体，其中所述成熟重链可变区与SEQ ID NO:8具有至少95％序列一致性，并且所述成熟轻链可变区与SEQ ID NO:18具有至少95％序列一致性。
8.根据权利要求5至7中任一项所述的抗体，其中H2由I占据，H38由R或K占据，H44由D或G占据，H46由K或E占据，H68由V或A占据，H73由K占据，H76由N或S占据，H91由Y或F占据，L1由Q或E占据，L5由S或T占据，L21由M或L占据，L46由P占据，L47由W占据，L58由V或I占据，并且L71由Y占据；编号是通过卡巴特编号系统。
9.根据权利要求5至7中任一项所述的抗体，其中以下可变区框架位置如所指定经占据：H2由I占据，H38由R占据，H44由D占据，H46由K占据，H68由V占据，H73由K占据，H76由N占据，H91由Y占据，L1由Q占据，L5由S占据，L21由M占据，L46由P占据，L47由W占据，L58由V占据，L71由Y占据；编号是通过所述卡巴特编号系统。
10.根据权利要求5至7中任一项所述的抗体，其中以下可变区框架位置如所指定经占据：H2由I占据，H44由D占据，H46由K占据，H73由K占据，H76由N占据，L1由Q占据，L5由S占据，L21由M占据，L46由P占据，L47由W占据，L58由V 占据，L71由Y占据；编号是通过所述卡巴特编号系统。
11.根据权利要求1所述的抗体，其为HALA、HALB、HALC、HALD、HBLA、HBLB、HBLC、HBLD、HCLA、HCLB、HCLC、HCLD、HDLA、HDLB、HDLC、HELA、HELB、HELC以及HELD。
12.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述成熟重链可变区融合到重链恒定区并且所述成熟轻链可变区融合到轻链恒定区。
13.根据权利要求12所述的抗体，其中所述重链恒定区是天然人类恒定区的突变形式，其相对于所述天然人类恒定区与Fcγ受体结合减少。
14.根据权利要求12所述的抗体，其中所述重链恒定区具有IgG1同种型。
15.根据权利要求12所述的抗体，其中所述重链恒定区具有包含SEQ ID NO:29或SEQID NO:30的氨基酸序列，并且所述轻链恒定区具有包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的抗体，具有20F3的解离常数5倍以内的人类或食蟹猕猴NTB-A的解离常数。
17.一种编码如由根据权利要求1至16中任一项所定义的成熟重链可变区和/或成熟轻链可变区的核酸。
18.根据权利要求1至16中任一项所述的抗体，其中所述抗体与细胞毒性剂或细胞生长抑制剂结合。
19.根据权利要求18所述的抗体，其中所述细胞毒性剂是类美登素(maytansinoid)、奥瑞他汀(auristatin)、吡咯并[1,4]苯二氮
Figure FDA0003820558780000023
吲哚啉并苯二氮
Figure FDA0003820558780000024
或恶唑啶并苯二氮
Figure FDA0003820558780000025
20.根据权利要求19所述的抗体，其中所述细胞毒性剂是
Figure FDA0003820558780000021
其中下标n是1或3；或其医药学上可接受的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物。
21.一种抗NTBA抗体-药物结合物化合物，具有下式
Figure FDA0003820558780000022
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物；其中
下标n是1或3；
LU是可切割连接子单元；
Ab是如阐述于权利要求1至16中任一项中的抗体；
下标p是1到4的整数。
22.一种根据权利要求21所述的抗NTBA抗体-药物结合物化合物，具有下式
Figure FDA0003820558780000031
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物；其中
下标n是1或3；
下标m是2到5
Ab是如阐述于权利要求1至16中任一项中的抗体；
下标p是1到4的整数。
23.根据权利要求22所述的抗体-药物结合物化合物，具有下式：
Figure FDA0003820558780000032
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物。
24.根据权利要求22所述的抗体-药物结合物化合物，具有下式：
Figure FDA0003820558780000033
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物。
25.根据权利要求22至24中任一项所述的抗体-药物结合物化合物，其中n是1。
26.根据权利要求22至24中任一项所述的抗体-药物结合物化合物，其中n是3。
27.根据权利要求22至26中任一项所述的抗体-药物结合物化合物，其中m是5。
28.根据权利要求22至27中任一项所述的抗体-药物结合物化合物，其中附接于Ab是通过Ab的经工程改造半胱氨酸残基的硫原子。
29.根据权利要求22至28中任一项所述的抗体-药物结合物化合物，其中附接于Ab是通过硫原子或根据EU索引编号系统的所述重链恒定区的位置239处的经工程改造半胱氨酸残基。
30.根据权利要求21至29中任一项所述的抗体-药物结合物化合物，其中p是2。
31.一种抗体-药物结合物组合物，包含一群具有下式的抗NTB-A抗体-药物结合物分子：
Figure FDA0003820558780000041
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物；其中
下标n是1到3；
LU是可切割连接子单元；
Ab是如阐述于权利要求1至16中任一项中的抗体；并且
下标p是1到4的整数；并且所述组合物的平均药物负载是约2。
32.一种根据权利要求31所述的抗体-药物结合物组合物，包含一群具有下式的抗NTB-A抗体-药物结合物分子：
Figure FDA0003820558780000042
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物；其中
下标n是1到3；
下标m是2到5
Ab是如阐述于权利要求1至16中任一项中的抗体；并且
下标p是1到4的整数；并且所述组合物的平均药物负载是约2。
33.根据权利要求32所述的组合物，其中所述抗体-药物结合物分子具有下式：
Figure FDA0003820558780000051
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物。
34.根据权利要求32所述的组合物，其中所述抗体-药物结合物分子具有下式：
Figure FDA0003820558780000052
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物。
35.根据权利要求32至34中任一项所述的组合物，其中n是1。
36.根据权利要求32至34中任一项所述的组合物，其中n是3。
37.根据权利要求32至36中任一项所述的组合物，其中m是5。
38.根据权利要求32至37中任一项所述的组合物，其中附接于Ab是通过Ab的经工程改造半胱氨酸残基的硫原子。
39.根据权利要求32至37中任一项所述的组合物，其中附接于Ab是通过硫原子或根据EU索引编号系统的所述重链恒定区的位置239处的经工程改造半胱氨酸残基。
40.一种医药组合物，包含一群具有下式的抗NTB-A抗体-药物结合物分子：
Figure FDA0003820558780000053
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物；其中
下标n是1到3；
下标m是2到5
Ab是如阐述于权利要求1至16中任一项中的抗体；并且
下标p是1到4的整数；并且所述组合物的平均药物负载是约2；和医药学上可接受的载剂。
41.根据权利要求40所述的医药组合物，其中所述抗体-药物结合物分子具有下式：
Figure FDA0003820558780000061
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物。
42.根据权利要求40所述的医药组合物，其中所述抗体-药物结合物分子具有下式：
Figure FDA0003820558780000062
或医药学上的盐、溶剂合物或所述盐的溶剂合物。
43.根据权利要求40至42中任一项所述的医药组合物，其中n是1。
44.根据权利要求40至42中任一项所述的医药组合物，其中n是3。
45.根据权利要求40至44中任一项所述的医药组合物，其中m是5。
46.根据权利要求40至45中任一项所述的医药组合物，其中附接于Ab是通过Ab的经工程改造半胱氨酸残基的硫原子。
47.根据权利要求40至46中任一项所述的医药组合物，其中附接于Ab是通过硫原子或根据EU索引编号系统的所述重链恒定区的位置239处的经工程改造半胱氨酸残基。
48.一种治疗患有表达NTB-A的癌症的患者的方法，所述方法包含向所述患者给予有效疗程的根据权利要求31至47中任一项所述的组合物。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)、急性骨髓白血病、慢性淋巴细胞性白血病、原发性淀粉样变性、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia)或意义不明的单克隆丙种球蛋白病(monoclonal gammopathy of undetermined significance；MGUS)。
50.根据权利要求48所述的方法，其中所述癌症是T细胞淋巴瘤。
51.一种治疗患有自身免疫疾病的患者的方法，所述方法包含向患者给予有效疗程的根据权利要求31至47中任一项所述的组合物。
52.一种医药组合物，包含根据权利要求1至16中任一权利要求所述的抗体；和医药学上可接受的载剂。
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