CN116063455B - 一种glp-1受体和gcg受体共激动多肽衍生物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种GLP‑1受体和GCG受体共激动多肽衍生物及其应用，本发明提供的GLP‑1受体和GCG受体共激动多肽衍生物具备GLP‑1和GCG双受体激动活性，并具备延长的作用时效，在有效降低血糖的同时，具有显著优异的减重作用。

Description

一种GLP-1受体和GCG受体共激动多肽衍生物及其应用

技术领域

本发明涉及多肽衍生物及其应用技术领域，尤其涉及一种GLP-1受体和GCG受体共激动多肽衍生物及其应用。

背景技术

2型糖尿病(diabetes mellitus type 2，T2DM)，旧称非胰岛素依赖型糖尿病(noninsulin-dependent diabetes mellitus，NIDDM)或成人发病型糖尿病(adult-onsetdiabetes)，患者特征为高血糖、相对缺乏胰岛素、胰岛素抵抗等。目前，临床上使用的治疗2型糖尿病的药物主要有双胍类、磺酰脲类、噻唑烷二酮类、DPP-4受体抑制剂、SGLT-2受体抑制剂和GLP-1衍生物。而其中，GLP-1衍生物由于具有与胰岛素类似的降糖效果，同时几乎无低血糖风险、兼具减重效果和心血管保护功能，正逐渐成为2型糖尿病的主要治疗药物和研究热点。

GLP-1(胰高血糖素样肽-1)是由末端空肠、回肠和结肠的L细胞所分泌的一种葡萄糖依赖性降血糖多肽激素，与GLP-1受体特异性结合后发挥降糖作用。GLP-1的主要优点是具有血糖依赖性的肠促胰岛素分泌作用，避免了糖尿病治疗中常存在的产生低血糖症的危险。除了调节血糖，GLP-1也可以阻止胰腺β细胞退化，刺激β细胞的增殖和分化，能从源头上改善糖尿病进程。此外，GLP-1还具有抑制胃酸分泌、延迟胃排空、抑制食欲等作用，具有部分减重效果。但是如果需要实现较好的体重减轻作用，一般需要加大给药剂量，而大剂量给予GLP-1衍生物容易产生胃肠道副作用，并且往往因耐受性差而导致治疗窗较窄。

GCG(胰高血糖素)是在胰脏的α细胞中生成的激素，在机体寒冷、饥饿等应激状态下作用于肝脏，将肝脏中的糖原进行分解而提高血糖。实际上GCG在体内还具有促进脂肪降解、脂肪氧化、发热等作用(Diabetologia,2017,60,1851-1861)，长期给药可以通过增加能量代谢量而呈现出体重减轻的药效，但GCG这些对能量代谢的有益作用因其固有的升血糖作用而未能得以应用。因此，具备GLP-1受体和GCG受体激活活性的双靶点共激动剂，能够利用GCG在体内促进脂肪降解、脂肪氧化等功能，实现相比于GLP-1单靶点激动剂在减肥功效方面的显著增强。

目前，已研究发现胃泌酸调节素(OXM)具有良好的降糖减重效果，甚至明显优于现有的GLP-1类药物，如利拉鲁肽。胃泌酸调节素是肠上皮L-细胞分泌的一种短肽激素，其是由37个氨基酸组成的肽类激素，是胰高血糖素基因转录后加工的产物，在其前体第33-69位氨基酸区包括了胰高血糖素的全部序列，并在C末端延伸出一个8肽，因此又被成为“胰高血糖素-37”，其作为一种激活胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和胰高血糖素(GCG)的双受体激动剂，虽然具有较好的降糖减重效果，但存在稳定性差、受体活性低等问题，导致其给药剂量大，很难达到控糖减重的最佳效果。

目前，关于多肽类GLP-1/GCG受体双重激动剂，已公开的专利文件有：CN201911103118.6、CN201780013643.1、CN201680021972.6、CN201580030150.X、CN201380048137.8、WO2008/071972、WO2008/101017、WO2009/155258、WO2010/096052、WO2010/096142、WO2011/075393、WO2008/152403等，但目前，尚无相关的双重激动剂上市。

因此，具有良好的降糖减重作用的GLP-1和GCG受体的共激动多肽及其衍生物目前仍存在巨大的临床需求，尤其是在具备更加优异的减重效果方面。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种GLP-1受体和GCG受体共激动多肽衍生物及其应用。

本发明中，术语“索马鲁肽”是指一种GLP-1衍生物，其具有CAS登记号910463-68-2中的肽骨架和整体化合物结构。

本发明中，术语“GLP-1受体激动剂”可被定义为能够与GLP-1受体结合并能够将其活化的化合物。

本发明中，术语“GCG受体激动剂”可被定义为能够与GCG受体结合并能够将其活化的化合物。

本发明中，“GLP-1受体和GCG受体共激动多肽″能表现出相对于天然胰高血糖素针对胰高血糖素受体活性的至少约10％-约500％或更大，并亦表现出相对于天然GLP-1针对GLP-1受体活性的约至少10％-约200％或更大。

本发明中，术语“肽”包含3个或更多个氨基酸且通常小于50个氨基酸的序列，其中氨基酸为天然存在的或非天然存在的氨基酸。非天然存在的氨基酸指不在体内天然存在的氨基酸，但其可被引入到本文所述的肽结构中。

本发明中，有关肽(例如GLP-1或GCG)的术语“衍生物”表示经化学修饰(如共价修饰等)的肽或其类似物。典型的修饰包括酰胺、糖类、烷基、酰基、酯等。

本发明中，术语氨基酸“修饰”指氨基酸的取代、添加或缺失，包括用人蛋白质中常见的20种氨基酸以及非典型或非天然存在的氨基酸中的任何一种来取代或添加。

本发明中，术语“药学上可接受的盐”是指保留母体的生物活性的多肽或蛋白的盐。

本发明中，术语“药学上可接受的辅料”宽泛地指除活性治疗成分外的任何组分。辅料可以是惰性物质、无活性物质和/或非药学活性物质。

本发明中，术语“脂肪族二酸”包括直链或支链脂肪族二羧酸，其具有至少两个碳原子并为饱和或不饱和的。脂肪族二酸的非限定实例为琥珀酸、己二酸、辛二酸、癸二酸、十二烷二酸、十四烷二酸、十六烷二酸、十七烷二酸、十八烷二酸和二十烷二酸。

第一方面，本发明提供了一种GLP-1受体和GCG受体共激动多肽衍生物或其药学上可接受的盐，其多肽具备GLP-1和GCG双受体的结合活性，本发明的多肽衍生物或其药学上可接受的盐的氨基酸序列如下式所示：

X₁X₂X₃GTFTSDYSX₁₂YLX₁₅X₁₆X₁₇X₁₈AX₂₀X₂₁FX₂₃X₂₄WLX₂₇X₂₈X₂₉X₃₀

其中：

X₁选自H或Y；

X₂选自V或Aib；

X₃选自Q或H；

X₁₂选自K、R或S；

X₁₅选自E或D；

X₁₆选自E、S或A；

X₁₇选自K、R或Q；

X₁₈选自K、R或A；

X₂₀选自K、Q、R或H；

X₂₁选自E或D；

X₂₃选自V或I；

X₂₄选自E或K；

X₂₇选自L或E；

X₂₈选自E、K或R；

X₂₉选自G、A-NH₂或A；

X₃₀没有或选自GPSSG、PSG或GPSSG-NH₂；

其中：

当X₁为Y时，X₃₀不为GPSSG-NH₂；

当X₂为V，X₁₂为R时，X₃₀不为GPSSG-NH₂。

作为本发明的一种优选技术方案，所述共激动多肽的氨基酸序列选自：

YVQGTFTSDYSKYLEEKKAKEFVEWLLEGGPSSG(SEQ ID NO.1)；

YVQGTFTSDYSRYLEERRAQEFVKWLLEGGPSSG(SEQ ID NO.2)；

HVQGTFTSDYSRYLDERRAQEFVKWLLEGPSG(SEQ ID NO.3)；

HVQGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLEGGPSSG-NH₂(SEQ ID NO.4)；

HVQGTFTSDYSKYLEEKKAKEFVEWLLEGGPSSG-NH₂(SEQ ID NO.5)；

H-Aib-QGTFTSDYSRYLEERRAQEFVKWLLEGGPSSG(SEQ ID NO.6)；

H-Aib-QGTFTSDYSRYLEERRAQEFVKWLLEGGPSSG-NH₂(SEQ ID NO.7)；

H-Aib-QGTFTSDYSRYLEERRAQEFVKWLLEGGPSSG-NH₂(SEQ ID NO.8)；

HVQGTFTSDYSRYLEERRAQEFVKWLLEGGPSSG(SEQ ID NO.9)；

HIQGTFTSDYSRYLEERRAQEFVKWLLEGGPSSG(SEQ ID NO.10)；

HVQGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLEGGPSSG-NH₂(SEQ ID NO.11)；

HVQGTFTSDYSKYLDEKAAKDFIEWLEKA-NH₂(SEQ ID NO.12)；

HVQGTFTSDYSRYLEERAAREFVKWLERA(SEQ ID NO.13)；

H-Aib-HGTFTSDYSSYLDSQAAHEFVKWLLEGGPSSG(SEQ ID NO.14)；

H-Aib-HGTFTSDYSRYLDEQAARDFVKWLLEGGPSSG(SEQ ID NO.15)；或

H-Aib-HGTFTSDYSSYLDARAAHEFVKWLLEGGPSSG(SEQ ID NO.16)。

作为本发明的一种优选技术方案，所述衍生物通过所述多肽的第17位、第20位或第24位中的氨基酸K残基上的ε氨基与脂肪酸侧链连接，即所述多肽的K17、K20或K24的ε氨基与脂肪酸侧链连接。其中，“K数字”表示的是共激动多肽序列“数字”所表示位置的赖氨酸(K)，其ε-氨基与侧链进行连接；如“K20”表示为相应共激动多肽序列第20位的赖氨酸，并表示通过该赖氨酸的ε-氨基与相应脂肪酸侧链连接。

在本发明中，所述共激动多肽序列中尾端的“-NH₂”表示在所述尾端，将尾端氨基酸羧基中的羟基替换为“-NH₂”，即将尾端氨基酸的COOH修饰为CONH₂。具体结构如下所示：

作为本发明的一种优选技术方案，所述脂肪酸侧链选自HOOC(CH₂)_nCO-γ-Glu-(AEEA)₂-，n为14-22的任意整数。

作为本发明的一种优选技术方案，所述脂肪酸侧链选自HOOC(CH₂)₁₆CO-γ-Glu-(AEEA)₂-或HOOC(CH₂)₁₈CO-γ-Glu-(AEEA)₂-。

按照IUPAC命名法，HOOC(CH₂)₁₆CO-γ-Glu-(AEEA)₂-可以被称为“[2-(2-[2-(2-[2-(2-)4-(17-羧基十七烷酰胺基)-4(S)-羧基丁酰基氨基]乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙酰基]”。

按照IUPAC命名法，HOOC(CH₂)₁₈CO-γ-Glu-(AEEA)₂-可以被称为“[2-(2-[2-(2-[2-(2-)4-(19-羧基十九烷酰胺基)-4(S)-羧基丁酰基氨基]乙氧基)乙氧基]乙酰氨基)乙氧基]乙氧基)乙酰基]”。

作为本发明的一种具体实施方式，本发明所述衍生物包含与所述多肽的第17位、第20位或第24位的赖氨酸的ε氨基连接的脂肪酸侧链，优选所述脂肪酸侧链为HOOC(CH₂)₁₆CO-γ-Glu-(AEEA)₂-或HOOC(CH₂)₁₈CO-γ-Glu-(AEEA)₂-。

作为本发明的一种优选技术方案，本发明所述共激动多肽衍生物选自如下表1所示共激动多肽衍生物中的任意一种：

表1

进一步地，本发明所述共激动多肽衍生物选自如下表2所示共激动多肽衍生物中的任意一种：

表2

上述表中所述共激动多肽衍生物均由GLP-1受体和GCG受体共激动多肽(表中共激动多肽序列)连接脂肪酸侧链而成，其中，所述侧链连接至多肽序列指定位置的氨基酸K的ε-氨基。

本发明所述的多肽衍生物或其药学上可接受的盐可以通过化学合成的方法制备，也可以通过制备重组工程菌发酵表达并纯化修饰的方式制备。

第二方面，本发明提供了一种药物组合物，包括第一方面所述的多肽衍生物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料。所述药物组合物为注射液制剂、片剂、胶囊、糖浆、颗粒剂、块剂、乳剂或者复方制剂。

作为本发明的一种优选技术方案，本发明的药物组合物可以通过肠胃外给药，如皮下注射、皮内注射、静脉注射、肌肉注射、腹腔注射等。优选地，通过肠胃外给药的药物组合物为注射液制剂，以第一方面所述的多肽衍生物或其药学上可接受的盐为有效原料，再加上药学上可接受的辅料组成。

优选地，药学上可接受的辅料选自缓冲剂、渗透压调节剂、防腐剂、稳定剂、助溶剂、抗氧剂、pH值调节剂和抑菌剂中的一种或多种。

优选地，所述组合物的辅料为0.1-10mg/mL的缓冲剂、5-40mg/mL的渗透压调节剂和1-10mg/mL的防腐剂。

进一步地，所述缓冲剂的量为0.1-10mg/mL、0.5-5mg/mL或0.8-2mg/mL，如1mg/mL或1.5mg/mL；所述缓冲剂优选为磷酸氢二钠。

进一步地，所述渗透压调节剂的量为5-40mg/mL、8-30mg/mL或10-20mg/mL，如14mg/mL或17mg/mL；所述渗透压调节剂优选为丙二醇或甘油，更优选为丙二醇。

进一步地，所述防腐剂的量为1-10mg/mL、1-8mg/mL或1-6mg/mL，如2mg/mL或5mg/mL；所述防腐剂优选为苯酚或间甲酚，更优选为苯酚。

作为本发明的一种优选技术方案，本发明的药物组合物可以通过口服给药，如直接口服、掺入到饮水或食物中或灌胃等。

通过口服递送的药物组合物为固体组合物，以第一方面所述的多肽衍生物或其药学上可接受的盐为有效原料，再加上促渗剂等成分组成，这是由于口服药物在人体的吸收依赖于促渗剂的吸收促进作用。所述药物组合物包含表1中所述的任意一种共激动多肽衍生物或其药学上可接受的盐和N-(8-(2-羟基苯甲酰)氨基)辛酸盐，其中所述共激动多肽衍生物或其药学上可接受的盐的量为5-20mg，所述N-(8-(2-羟基苯甲酰)氨基)辛酸盐优选为N-(8-(2-羟基苯甲酰)氨基)辛酸钠(SNAC)，并且所述SNAC的量为200-400mg，所述口服制剂优选为口服片剂。

优选地，所述共激动多肽衍生物或其药学上可接受的盐的量为5mg、10mg、15mg或20mg；所述SNAC的量为250-350mg，更优选为250mg、280mg、300mg、320mg或350mg。

优选地，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的赋形剂，所述赋形剂选自粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂和助流剂中的一种或多种。优选地，所述组合物的赋形剂为0.1-10％w/w的粘合剂、5-40％w/w的填充剂和0.1-10％w/w的润滑剂。进一步地，所述粘合剂的量为0.1-10％w/w，0.2-4％w/w，0.5-3％w/w，如1％w/w或2％w/w；所述粘合剂优选为聚维酮。所述填充剂的量为5-40％w/w，10-30％w/w或5-25％w/w，如10.9％w/w、18％w/w、19.5％w/w、或20.5％w/w；所述填充剂优选为微晶纤维素。所述润滑剂的量为0.1-10％w/w，0.5-5％w/w或1-3.5％w/w，如1％w/w；所述润滑剂优选为硬脂酸镁。

第三方面，本发明提供了第一方面所述的多肽衍生物或其药学上可接受的盐，或第二方面所述的药物组合物在制备治疗糖尿病的药物中的应用。

第四方面，本发明提供了第一方面所述的多肽衍生物或其药学上可接受的盐，或第二方面所述的药物组合物在制备减重的药物中的应用。

本发明实施例提供的技术方案与现有技术相比具有如下优点：

本发明提供的GLP-1受体和GCG受体共激动多肽衍生物具备GLP-1和GCG双受体激动活性，并具备延长的作用时效，在有效降低血糖的同时，具有显著优异的减重作用。

具体实施方式

为了能够更清楚地理解本发明的上述目的、特征和优点，下面将对本发明的方案进行进一步描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但本发明还可以采用其他不同于在此描述的方式来实施；显然，说明书中的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。

实施例1：GLP-1受体和GCG受体共激动多肽的制备

本实施例提供了多种GLP-1受体和GCG受体共激动多肽衍生物及其制备方法，本实施例为化学合成方法，制备方法如下(以C-004为例)：

1.C-004粗肽的合成

1.1树脂的溶胀去保护

称取担载量为0.3左右的Fmoc-Linker-MBHA树脂放入反应柱中，用DCM溶胀树脂30min，抽去溶液，用DMF清洗树脂2次，抽去溶液。加入适量的20％的哌啶/DMF溶液，在氮气鼓吹下反应5min，抽去溶液，再加入适量的20％的哌啶/DMF溶液，在氮气鼓吹下反应10min，接着用适量的DMF清洗树脂6次，得到脱除Fmoc保护基的树脂。

1.2接肽反应

称取一定量的Fmoc-Gly-OH保护氨基酸和缩合剂TBTU，加入反应柱，加入适量DMF溶剂，加入一定量的碱DIEA，在氮气鼓吹下，室温反应1-2h，用Kaiser试剂(茚三酮显色法)监测反应过程。反应结束后，用DMF清洗树脂3次。接着重复去保护步骤：加入适量的20％的哌啶/DMF溶液，在氮气鼓吹下反应5min，抽去溶液，再加入适量的20％的哌啶/DMF溶液，在氮气鼓吹下反应10min，接着用适量的DMF清洗树脂6次，按照序列从C端到N端的顺序，依次偶联。其中连接侧链使用的保护氨基酸为Fmoc-Lys(dde)-OH，最后一个保护氨基酸为Boc-His(Trt)-OH。

1.3侧链的修饰

偶联完所有主链保护氨基酸后，加入2％的水合肼/DMF溶液脱除Lys的侧链dde保护基，然后用DMF清洗树脂6-8次。按照主链偶联的方式，依次偶联Fmoc-AEEA-OH，Fmoc-AEEA-OH，Fmoc-Glu-OTBU，C20diacid-Otbu。

1.4多肽的裂解和干燥

将一定量比例为TFA:EDT:苯甲硫醚:苯酚:H₂O＝88:4:3:3:2的裂解液加入试管中，冰浴冷却60min。将合成好的粗肽树脂慢慢加入预冷的裂解液中，在26℃左右条件下震荡或搅拌反应2h。可按1g肽树脂需要8mL裂解液，也可作适当调整。

将以上所得的裂解液抽滤得到清液，缓慢加入预冷无水乙醚中，搅拌、静置20min，用离心机离心得到白色固体，再用常温乙醚离心洗涤4次，干燥，得到白色粉末粗肽。

2.C-004的纯化

2.1分离

将粗肽洗脱，色谱条件为柱(30mm*250mm)，流动相1：0.05M醋酸铵(氨水调pH值约8.0)，流动相2：乙腈。洗脱梯度为乙腈在25分钟内从31％变化到38％，得到纯度大于95％的样品。

2.2旋蒸冻干

将得到的C-004溶液，用旋转蒸发仪旋去除乙腈，再用冷冻干燥机进行冻干，得到白色固体粉末。

其他尾端为-NH₂的衍生物制备方法同C-004；而尾端为正常氨基酸、非尾端为-NH₂的衍生物，在步骤1.1中选择王氏树脂(wang resin)代替Fmoc-Linker-MBHA树脂，其余步骤与本实施例相同。

实施例2：体外GLP-1受体结合活性测定

选取培养状态良好的HEK293/Luc/GLP1R细胞，弃去瓶中培养液，用PBS缓冲液洗1次，加入0.05％ Trypsin消化液消化3min，然后加入DMEM基础培养基终止消化，离心收集细胞。用DMEM空白培养基调整细胞密度为8.0×10⁵个/mL，50μL/孔接种于96孔细胞培养板中，于37℃、5％ CO₂条件下培养过夜。

用Fire-Lumi荧光素酶检测试剂盒检测共激动多肽衍生物的体外GLP-1受体结合活性：配制测定培养液，用测定培养液分步稀释样品至320nM，单次稀释倍数不超过10倍；之后在96孔板中按照进行5倍系列稀释，共8个梯度，每个稀释度做2个复孔。

从培养箱中取出培养好的细胞培养板，将稀释好的测定培养液加入细胞板中，每孔50μL，置于37℃、5％ CO₂条件下孵育6h。从培养箱中取出样品板，放置至室温。加入100μLFire-Lumi检测液，反应5min，震荡10s，检测荧光强度。

试验数据采用四参数回归计算法进行处理，得到待测样品的EC50值。

实施例3：体外GCG受体结合活性测定

选取培养状态良好的HEK293/GCGR/Ga15细胞，弃去瓶中培养液，用PBS缓冲液洗1次，加入0.05％ TRYPSIN消化液消化，然后加入DMEM基础培养液终止消化，离心收集细胞。用DMEM空白培养基调整细胞密度为8×10⁵个/mL，5μL/孔接种于96孔细胞培养板中。

配制测定培养液(DMEM培养液添加0.5nM IBMX)，用测定培养液分步稀释样品至100nM，单次稀释倍数不超过10倍，之后在96孔板中按照进行4倍系列稀释，共8个梯度，每个稀释度做2个复孔。

从培养箱中取出培养好的细胞培养板，将稀释好的测定培养液加入细胞板中，37℃孵育30min；加入cAMP-d2工作液，每孔5μL，加入cAMP Eu-Cryptate抗体工作液，每孔5μL，96孔板覆盖封板膜，室温孵育60min；培养结束后，去除封板膜，在FRET模式下(665nm，620nm)，用HTRF读取器进行检测。

试验数据采用四参数回归计算法进行处理，可以计算出待测样品的EC50值。

体外GLP-1受体结合活性和体外GCG受体结合活性的测定结果EC50值如表3所示。其中，Ref1为信达生物制药与礼来制药合作研发的可以同时治疗肥胖和糖尿病的药物IBI362，该药物是一种GLP-1和GCG双重激动剂。

表3

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由表中结果可知，除C-022以外，本发明各组多肽衍生物均具备与GLP-1和GCG双受体的结合能力，具备GLP-1和GCG双受体的结合活性，但也能看出，虽然序列相似，但各分子间活性差异较大(受体结合活性高低和GLP-1和GCG双受体的结合活性比等)。从上述数据尤其可以看出，其中C-014、C-015、B-020和B-024都具备非常优异的GLP-1受体和GCG受体激动活性。

实施例4：C57BL/6J小鼠OGTT降糖效果研究

(1)实验材料：

选取健康的雄性小鼠，适应性饲养7天，对小鼠依据体重随机分组，每组10只，其中：

空白对照组：包含10只小鼠，纯水灌胃，腹部皮下注射空白溶剂；

模型对照组：包含10只小鼠，口服葡萄糖(2g/Kg)，腹部皮下注射空白溶剂；

实验组：每组包含10只小鼠，口服葡萄糖(2g/Kg)，腹部皮下注射药物。

(2)实验方法

a.给药方式：

对上述确定的各实验组小鼠，按照表4所示的具体给药计量进行给药：

表4

b.血糖值检测：

血糖检测前禁食不禁水，同一天下午，将实验动物禁食不禁水，在第二天早晨，禁食16h后获得禁食体重(以计算给药量及葡萄糖剂量)。在给药前测定给药前0h血糖，然后，皮下注射空白溶剂或药物溶液。在给药3h后对动物口服填喂葡萄糖(2g/Kg)，在口服葡萄糖后15min、30min、60min和120min检测血糖，通过血糖仪获得两个葡萄糖读数。在各时间点报告两个葡萄糖读数的平均值，绘制血糖变化曲线，计算AUC面积，结果见表5-8。

表5

注：“*”指的是，相对于模型对照组，p＜0.05；“**”指的是，相对于模型对照组，p＜0.01。

表6

注：“*”指的是，相对于模型对照组，p＜0.05；“**”指的是，相对于模型对照组，p＜0.01。

表7

注：“*”指的是，相对于模型对照组，p＜0.05；“**”指的是，相对于模型对照组，p＜0.01。

表8

注：“*”指的是，相对于模型对照组，p＜0.05；“**”指的是，相对于模型对照组，p＜0.01。

由实验结果可知，本发明各组多肽衍生物除了C-022外，其余多肽均具备显著的降糖作用，其中C-014、B-020、B-024效果最为显著，具备显著优于其他组的降糖作用。在对比研究中也证实，其降糖效果与索马鲁肽基本一致，甚至显著优于索马鲁肽。

实施例5：DIO小鼠减重效果及摄食量研究

(1)实验材料：C57BL/6J(DIO)小鼠

选取健康SPF级饲喂高脂饲料(60％脂肪)的雄性16-17周龄的C57小鼠，体重35-40g，适应性饲养14-17天；对小鼠依据体重随机分组，每组6只，分为空白对照组、索马鲁肽组、REF1组以及各实验组；

(2)实验方法：

a.给药方式：

每天给药一次，给药途径为腹部皮下注射，给药时固定每天给药的时间段，正式给药第一天记为Day1，具体给药剂量等内容见表9：

表9

b.检测指标：

体重：每次给药时对体重进行检测；摄食量：每次给药后对摄食量进行检测；(3)实验结果

本实施例测试结果如表10和表11所示：

表10

表11

由实验结果可知，在减重实验中，除C-017外其它各组多肽衍生物均具有不同程度的减重作用，且具备显著优于索马鲁肽的减重效果；筛选出的多肽衍生物多数具备超过索马鲁肽50％以上的减重效果，C-014、B-020和B-024等甚至有接近其两倍的减重效果，同时不会导致血糖的过分降低，效果显著。可以预期，本发明的多肽衍生物在降糖、尤其是减重方面，必然会具备广阔的应用前景。

需要说明的是，在本文中，诸如“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。

以上所述仅是本发明的具体实施方式，使本领域技术人员能够理解或实现本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所述的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (7)

1.一种GLP-1受体和GCG受体共激动多肽衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述衍生物为酰化连接脂肪酸侧链的GLP-1和GCG受体共激动多肽，所述共激动多肽衍生物选自如下所示共激动多肽衍生物中的任意一种：

H-Aib-QGTFTSDYSRYLEERRAQEFVKWLLEGGPSSG，侧链连接位点为K24；

H-Aib-QGTFTSDYSRYLEERRAQEFVKWLLEGGPSSG-NH₂，侧链连接位点为K24；

HVQGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLEGGPSSG-NH₂，侧链连接位点为K17；

H-Aib-HGTFTSDYSSYLDSQAAHEFVKWLLEGGPSSG，侧链连接位点为K24；

H-Aib-HGTFTSDYSRYLDEQAARDFVKWLLEGGPSSG，侧链连接位点为K24；

H-Aib-HGTFTSDYSSYLDARAAHEFVKWLLEGGPSSG，侧链连接位点为K24；

所述脂肪酸侧链选自HOOC(CH₂)_nCO-γ-Glu-(AEEA)₂-，n为14-22的任意整数。

2.根据权利要求1所述的共激动多肽衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述脂肪酸侧链选自HOOC(CH₂)₁₆CO-γ-Glu-(AEEA)₂-或HOOC(CH₂)₁₈CO-γ-Glu-(AEEA)₂-。

3.根据权利要求1所述的共激动多肽衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述共激动多肽衍生物选自如下所示共激动多肽衍生物中的任意一种：

H-Aib-QGTFTSDYSRYLEERRAQEFVKWLLEGGPSSG，侧链连接位点为K24，所述脂肪酸侧链为HOOC(CH₂)₁₆CO-γ-Glu-(AEEA)₂-；

H-Aib-QGTFTSDYSRYLEERRAQEFVKWLLEGGPSSG-NH₂，侧链连接位点为K24，所述脂肪酸侧链为HOOC(CH₂)₁₆CO-γ-Glu-(AEEA)₂-；

H-Aib-QGTFTSDYSRYLEERRAQEFVKWLLEGGPSSG-NH₂，侧链连接位点为K24，所述脂肪酸侧链为HOOC(CH₂)₁₈CO-γ-Glu-(AEEA)₂-；

HVQGTFTSDYSKYLDEKKAKEFVEWLLEGGPSSG-NH₂，侧链连接位点为K17，所述脂肪酸侧链为HOOC(CH₂)₁₈CO-γ-Glu-(AEEA)₂-；

H-Aib-HGTFTSDYSSYLDSQAAHEFVKWLLEGGPSSG，侧链连接位点为K24，所述脂肪酸侧链为HOOC(CH₂)₁₆CO-γ-Glu-(AEEA)₂-；

H-Aib-HGTFTSDYSRYLDEQAARDFVKWLLEGGPSSG，侧链连接位点为K24，所述脂肪酸侧链为HOOC(CH₂)₁₆CO-γ-Glu-(AEEA)₂-；

H-Aib-HGTFTSDYSSYLDARAAHEFVKWLLEGGPSSG，侧链连接位点为K24，所述脂肪酸侧链为HOOC(CH₂)₁₆CO-γ-Glu-(AEEA)₂-。

4.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1-3中任一项所述的共激动多肽衍生物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为注射液制剂、片剂、胶囊、糖浆、颗粒剂、块剂、乳剂或者复方制剂。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为注射液制剂，所述辅料包括缓冲剂、渗透压调节剂和防腐剂。

7.权利要求1-3中任一项所述的共激动多肽衍生物或其药学上可接受的盐，或权利要求4-6中任一项所述的药物组合物在制备治疗糖尿病的药物中的应用。