CN116059361A - 三价铬离子和/或金属铬在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用 - Google Patents

三价铬离子和/或金属铬在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供三价铬离子和/或金属铬在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用。本发明创造性地发现铬金属离子相较于其他金属离子而言具有突出的金属免疫效果，能够显著提高免疫细胞的瘤内迁移与浸润，能够解决免疫治疗的核心瓶颈问题‑免疫细胞难迁移浸润瘤内组织，能改善瘤内免疫微环境，增多免疫细胞的数量，如树突状细胞DC、M1型巨噬细胞、CAR‑T细胞、iPS‑NK细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞等，具有激活机体免疫的潜力，可有效联合并增强PD‑1/L1等ICB治疗、抗体治疗、细胞治疗、肿瘤疫苗等免疫治疗的疗效，对于肿瘤免疫治疗领域具有重要意义。

Description

三价铬离子和/或金属铬在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用
技术领域
本发明属于生物医疗领域，涉及三价铬离子和/或金属铬在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用。
背景技术
免疫治疗是癌症治疗重要手段，以免疫检查点阻断(immune checkpointblockage,ICB)为主(如PD-1和PD-L1抗体)。实体瘤免疫治疗效果有限，主要受两大因素限制：1)PD-1/L1信号通路为主的免疫抑制。2)瘤内浸润性淋巴细胞(tumor-infiltratinglymphocytes，TIL)或抗肿瘤免疫细胞数量少。PD-1/L1抗体实现了对瘤内抗肿瘤免疫的再平衡，但由于TIL或免疫细胞数量过少，治疗效果仍大打折扣。因此，如何改善瘤内免疫环境，增多抗肿瘤免疫细胞数量，是提高癌症免疫治疗疗效的主要科学问题。
金属免疫是肿瘤免疫治疗新方向，旨在通过金属离子改善机体免疫应答与瘤内免疫微环境。金属离子成分单一，质控性强，转化潜力大，在免疫治疗中的作用被挖掘，如Mn2+激活免疫细胞STING通路，Mg2+提高CD8+T细胞的杀伤活力等。因此硒、磷、硼、硒、锰等其他单元素可能还具有激活机体免疫潜力。
基于这些研究背景，寻找出能改善瘤内免疫环境，增多免疫细胞或TIL或工程化免疫细胞的数量，具有激活机体免疫潜力的金属离子将具有重要的临床意义。以潜在上述作用的金属离子发展的免疫治疗产品和治疗手段具有重要的临床意义。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供三价铬离子和/或金属铬在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供三价铬离子和/或金属铬在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用。
铬(Chromium，Cr)是一种微量营养元素，可改善胰岛素抵抗、II型糖尿病及适应性免疫疾病。Cr3+促进胰岛素与巨噬细胞胰岛素受体(insulin receptor，IR)的结合，增强IR酪氨酸激酶六倍的活性及葡萄糖代谢。铬纳米对机体无毒，体内主要降解为Cr3+，而有毒的Cr6+不稳定，被迅速转化为Cr3+。
本发明创造性地发现铬金属离子相较于其他金属离子而言具有突出的金属免疫效果，能够显著提高免疫细胞(淋巴细胞等)瘤内迁移与浸润，能够解决免疫治疗的核心瓶颈问题-免疫细胞难迁移浸润瘤内组织，能改善瘤内免疫抑制微环境，增多TIL等免疫细胞的数量，具有激活机体免疫的潜力，对于肿瘤免疫治疗领域具有重要开创性、创新性意义。此外，由金属铬制备得到的例如纳米铬等材料在体内可降解成三价铬离子，因此也可用于免疫治疗药物的制备。
第二方面，本发明提供一种用于肿瘤免疫治疗的联合用药组合物，所述联合用药组合物包括三价铬离子和/或由金属铬制得的药物组分，还包括ICB药物、细胞治疗药物或肿瘤疫苗中的任一种或至少两种的组合。
优选地，所述由金属铬制得的药物组分包括纳米铬，所述纳米铬由包括如下步骤的制备方法制得：
将金属铬与分散剂混合，得到分散体，离心，收集沉淀，即得。
优选地，所述分散剂包括异丙醇。
优选地，所述混合在超声下进行。
优选地，所述超声的功率为300-1000W，例如300W、320W、340W、360W、380W、400W、420W、450W、500W、550W、600W、650W、700W、750W、800W、850W、900W、950W、1000W等，时间为8-12h，例如8h、8.5h、9h、9.5h、10h、10.5h、11h、11.5h、12h等。
优选地，所述离心的速度为1000-10000g，例如1000g、2000g、3000g、4000g、5000g、6000g、7000g、8000g、9000g、10000g等，时间为30-100min，例如30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min、100min等。
优选地，所述ICB药物包括PD-1/PD-L1抑制剂和/或PD-1/PD-L1抗体。
优选地，所述细胞治疗药物包括CAR-T、CAR-NK、病毒或微生物中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述CAR-NK包括生物体来源的CAR-NK和/或人工合成的iPS来源的CAR-NK。
优选地，所述联合用药组合物包括纳米铬-抑制剂复合物，所述纳米铬-抑制剂复合物由包括如下步骤的制备方法制得：
将纳米铬、PD-1/PD-L1抑制剂、溶剂、多巴胺和氢氧化钠混合，进行反应，得到混合物，离心，收集沉淀，即得。
优选地，所述溶剂包括乙醇。
优选地，所述反应在黑暗条件下进行。
优选地，所述反应的温度为15-40℃，例如15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃等，时间为3-6h，例如3h、3.5h、4h、4.5h、5h、5.5h、6h等。
优选地，所述离心的转速为8000-16000rpm，例如8000rpm、9000rpm、10000rpm、11000rpm、12000rpm、13000rpm、14000rpm、15000rpm、16000rpm等，时间为1-10min，例如1min、2min、3min、4min、5min、6min、7min、8min、9min、10min等。
优选地，所述肿瘤包括黑色素瘤(包括黑色素瘤肺部转移瘤)、肝癌等。
优选地，所述联合用药物组合物为单一的复方制剂或至少两种单独的制剂的组合。
优选地，当所述联合用药物组合物为至少两种单独的制剂的组合时，其用药方式可以为同时施用、交叉施用或依次施用。
优选地，所述制剂为药剂学上可接受的任意一种剂型，例如片剂、散剂、混悬剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、灌肠剂、乳剂、凝胶剂等。
优选地，所述联合用药物组合物还包括药学上可接受的辅料。
优选地，所述药学上可接受的辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述载体包括水凝胶、脂质体或纳米载体中的任意一种或至少两种的组合。
第三方面，本发明提供一种与光热疗法联用的肿瘤免疫治疗药物，所述与光热疗法联用的肿瘤免疫治疗药物包括三价铬离子、由金属铬制得的药物组分或如第二方面所述的联合用药组合物中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述由金属铬制得的药物组分包括纳米铬，其制备方法同第二方面所述，不再赘述。
优选地，所述光热疗法使用的光源包括近红外光。
优选地，所述近红外光的波长为780-1100nm。
第四方面，本发明提供三价铬离子和/或金属铬在制备促进免疫细胞瘤内迁移和/或浸润的药物中的应用。
优选地，所述药物包括促进巨噬细胞瘤内迁移和/或浸润的药物、促进淋巴细胞瘤内迁移和/或浸润的药物、促进树突状细胞瘤内迁移和/或浸润，或促进免疫合成学方法工程化获得的免疫细胞瘤内迁移和/或浸润的药物中的任意一种或至少两种的组合。
第五方面，本发明提供一种促进免疫细胞瘤内迁移和/或浸润的方法，所述方法包括将免疫细胞与三价铬离子和/或由金属铬制得的药物组分共孵育，来促进其迁移和/或浸润。
优选地，所述免疫细胞包括但不限制于：巨噬细胞、淋巴细胞或树突状细胞、NK细胞、免疫合成学工程制备类免疫细胞、iPS来源的免疫细胞中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述免疫细胞包括但不限制于：人或小鼠骨髓来源的树突状细胞、人或小鼠单核巨噬细胞白血病细胞、人或小鼠脾脏淋巴细胞、人或小鼠CAR-T细胞、人或小鼠CAR-NK、人或小鼠iPS来源免疫细胞中的任意一种或至少两种的组合。
本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明创造性地发现铬金属离子相较于其他金属离子而言具有突出的金属免疫效果，能够显著提高免疫细胞(淋巴细胞等)瘤内迁移与浸润，能够解决免疫治疗的核心瓶颈问题-免疫细胞难迁移浸润瘤内组织，能改善瘤内免疫抑制微环境，增多TIL等免疫细胞的数量，具有激活机体免疫的潜力，对于肿瘤免疫治疗领域具有重要开创性、创新性意义。
(2)由金属铬制备得到的例如纳米铬等材料在体内可降解成三价铬离子，因此也可用于免疫治疗药物的制备。
(3)本发明还创造性地发现，铬金属离子或纳米铬等材料与ICB药物PD-1/PD-L1抑制剂起到协同治疗肿瘤的作用。同时联合PD-1抗体等免疫疗法治疗肿瘤，能够改善瘤内免疫环境，大大增强T淋巴细胞、M1型肿瘤细胞在肿瘤组织内的浸润，显著促进抗肿瘤免疫应答的有效激活，最终实现对肿瘤生长与转移的有效抑制，达到治疗癌症的目的。
(4)本发明还创造性的发现，铬金属离子或纳米铬等材料与光热治疗联用，能够显著提高对于肿瘤(黑色素瘤、黑色素瘤肺转移瘤等)的治疗效果。
(5)另外，在铬金属离子或纳米铬等材料与ICB药物PD-1/PD-L1抑制剂联用的基础上，再联用光热治疗，能够进一步提高对于肿瘤(黑色素瘤、黑色素瘤肺转移瘤等)的治疗效果。
附图说明
图1为Transwell研究，评估不同浓度金属离子对巨噬细胞(RAW264.7)的迁移能力结果图；
图2为通过CCK8评估不同金属离子对肿瘤细胞的毒副作用结果图；A为Cr3+、Fe3+、Fe2+、K+、Ca2+、Mg2+的结果图；B为Al3+、Mn2+、Co2+、Cu2+、Zn2+的结果图；
图3为Cr3+联合PD-1/PD-L1抑制剂BMS-202抑制皮下黑色素瘤的生长结果图；
图4为不同治疗组小鼠肿瘤的图像；
图5为不同浓度Cr3+对RAW264.7细胞MIP-1α分泌的检测结果图；
图6为用抗PI3K、AKT、磷酸化AKT和mTOR抗体进行免疫印迹结果图；
图7为铬纳米体外主要降解为三价铬离子的XPS光谱检测图；
图8为铬纳米在有无酸作用下，主要降解为三价铬离子的拉曼光谱情况；
图9为用Transwell法测定Cr纳米颗粒促进免疫细胞迁移的示意图；
图10为Cr纳米颗粒促BM-DCs与巨噬细胞的迁移能力评估结果图；
图11为Cr纳米颗粒促进巨噬细胞迁移的直方图；
图12为Cr纳米颗粒促进BM-DCs细胞迁移的直方图；
图13为Cr纳米颗粒促进iPS-NK细胞迁移的直方图；
图14为不同处理组小鼠肺部转移情况结果图；
图15为肺部病理切片结果图；
图16为肺部转移瘤灶的统计结果图；
图17为不同治疗组的转移模型中小鼠的存活情况统计图；
图18为肺组织中iNOS(M1型巨噬细胞)和CD8(CD8+T细胞)的免疫组织化学染色结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
以下实施例中，若无特殊说明，所有的试剂及耗材均购自本领域常规试剂厂商；若无特殊说明，所用的实验方法和技术手段均为本领域常规的方法和手段。
实施例1
本实施例提供一种促免疫细胞迁移的金属离子筛选平台的建立及其验证，具体方法如下：
1.金属离子的制备：将氯化锌、氯化钾、氯化镁、氯化锰、无水氯化钙、硫酸铝(十八水合物)、无水氯化铜(II)、无水三氯化铁、氯化亚铁(II)、三氯化铬(III)六水合物以及无水氯化钴(II)等金属化合物使用生理盐水分别配成0μM～2000μM的溶液。
2.BM-DCs(骨髓来源的树突状细胞)、RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)和小鼠脾脏淋巴细胞的准备。
①小鼠骨髓来源的BM-DCs获取：C57BL/6小鼠后肢骨髓取出，红细胞裂解液去除红细胞。将骨髓细胞(4×106个)培养在10cm培养皿，DMEM培养基中添加10％ FBS、巯基乙醇(2-ME，0.8ng/mL，Sigma)和小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF，20ng/mL，PeproTech)，培养7天。抗体及流式细胞仪检测细胞CD11c、CD80及CD86的表达水平。
②小鼠巨噬细胞RAW264.7：来源于中国科学院细胞库并进行培养。
③小鼠脾脏淋巴细胞：获取C57BL/6小鼠脾脏，滤网过滤成单细胞，红细胞裂解液去除红细胞，淋巴细胞分离液离心获得细胞并体外培养。
3.Transwell检测金属离子促免疫细胞的迁移：
肝癌细胞置于Transwell板下室(12孔)，分别加入上述不同浓度的金属离子溶液(0、500、1000、2000μM)。24h后，将BM-DCs、RAW264.7和脾淋巴细胞分别置于Transwell板的上室(2×104细胞/孔)。共培养一定时间，取出小室尼龙膜并染色，观察细胞迁移情况。
图1为Transwell研究结果图，展示了不同浓度金属离子对巨噬细胞(RAW264.7)的体外迁移能力。由图可知Cr3+、Cu2+及Fe2+具备促巨噬细胞迁移的能力。Cr3+在0μM-2000μM之间的促迁移效果显著。
实施例2
本实施例评估不同金属离子对肿瘤细胞的毒副作用：
不同浓度金属离子对RAW264.7细胞的毒性通过CCK-8试验来定量。具体为：在96孔板中接种RAW264.7细胞(2×104细胞/孔，n＝4)，过夜后用含不同浓度(0、25、50、100和200μg/mL)金属离子的培养基培养24h后，CCK-8测定细胞活力。
不同金属离子对RAW264.7细胞的毒副作用结果如图2所示，由图可知Cr3+具有良好的生物相容性(生物毒性低)和免疫刺激作用，而Cu2+具有较高的细胞毒性，Fe2+的体外体内稳定性差，容易被氧化为Fe3+。
实施例3
本实施例评估Cr3+联合PD-1/PD-L1抑制剂BMS-202对皮下黑色素瘤的生长的抑制作用：
从公司购买获得一批SPF级C57BL/6小鼠(6周龄)。选取B16F10细胞作为皮下肿瘤模型细胞。每只小鼠臀背右侧接种5×105B16F10细胞，培养13天，当肿瘤体积达到100-200mm3时，建模成功；获得的荷瘤小鼠可用于后续的体内实验。所有动物实验均遵循动物保护伦理与福利要求。
构建成功的B16荷瘤小鼠分为四组：分别为CrCl3实验组(i.e.，其中铬离子的量为100μg/mL，100μL)、BMS实验组(0.1mg/只小鼠)、CrCl3+BMS实验组(100μg/mL，100μL CrCl3+0.1mg BMS/只小鼠)，同时设置对照组(生理盐水，100μL)(每组n＝3)。第一天给不同组的小鼠静脉分别注射CrCl3、BMS、CrCl3+BMS，治疗间隔4天，总共治疗两次。每两天使用数字卡尺监测肿瘤生长，肿瘤体积计算公式为1/2×L×W2。在治疗第12天时，对小鼠实施安乐死。
结果如图3-4所示，为在治疗期间各组小鼠肿瘤大小的统计图(图3)和各组小鼠肿瘤解剖图(图4)。从图中可以看出，单独使用低剂量(0.1mg/只小鼠)BMS-202(BMS)或Cr3+(100μg/mL，100μL)对肿瘤生长无显著限制作用，BMS和Cr3+联合使用可显著抑制黑色素瘤的肿瘤生长。
实施例4
本实施例评估Cr3+促进免疫细胞的迁移和肿瘤浸润作用及其机制：
将不同浓度的Cr3+(即0、50、100和200μg/mL)与RAW264.7细胞(1×106细胞/孔)细胞共孵育48h，收集细胞上清液以及蛋白样本，ELISA检测各类细胞/趋化因子，包括MIP-1α，蛋白免疫印迹检测PI3K/Akt/mTOR通路各蛋白的表达。
结果如图5所示，不同浓度的Cr3+(即0、50、100和200μg/mL)培养的RAW264.7细胞显示出巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)的浓度依赖性分泌：随着Cr3+浓度的增加。MIP-1α的分泌明显增加MIP-1α是一种典型的细胞因子，可促进巨噬细胞、自然杀伤细胞(NK)、毒性杀伤T细胞和其他免疫细胞的迁移和肿瘤浸润。
机制方面蛋白免疫印迹检测结果如图6所示，MIP-1α分泌受PI3K/AKT/mTOR通路调控，Cr3+可参与激活PI3K/AKT/mTOR通路上游调控因子胰岛素受体(IR)。研究结果表明，Cr3+诱导AKT及其磷酸化(pAKT)的高表达，从而激活下游mTOR。从图中可以看出，Cr3+可激活PI3K/AKT/mTOR通路，从而促进RAW264.7细胞MIP-1α的分泌。
实施例5
本实施例评估铬纳米产生的Cr3+促进巨噬细胞、DCs细胞、iPS-CAR-NK细胞迁移的能力：
Cr纳米颗粒(Cr NPs)，制备方法为：在异丙醇中对块状铬粉(Smart-Elements,Austria)进行了两步处理：探头超声和水浴超声。将20mg铬粉与30毫升异丙醇混合。探头超声被设置为2/2秒的开/关周期(功率800W，时间9h)，以避免超声期间的热氧化。纳米铬悬浮液保存在冰水中。随后，将纳米铬悬浮液在360W的水浴中超声约10小时，保持在10℃的温度下。在这两个超声过程之后，将制备的分散体在1000g下离心约30分钟，以去除大的纳米铬。将含铬纳米颗粒的上清液轻轻倒入离心管中，8000g离心30min，在真空干燥仪(室温，25℃左右)中干燥，锡纸包装，4℃保存。
降解实验：实验方法为将铬粉或Cr纳米颗粒分别置于酸性条件下(pH＝5.5)或无酸条件下氧化两周后，使用XPS光谱检测氧化产物；
结果如图7-8所示，结果表明Cr纳米颗粒主要降解为无毒三价铬离子(XPS光谱检测图见图7，拉曼光谱情况见图8)。
将B16F10细胞置于Transwell板下室(12孔)，分别加入上述不同浓度的铬纳米溶液。24h后，将RAW264.7细胞、小鼠骨髓来源的DCs(BM-DCs)细胞、iPS-NK细胞分别置于Transwell板的上室(2×104细胞/孔)。共培养12-48h(例如可以是12h、24h、30h或36h)，取出小室尼龙膜并染色，迁移细胞用结晶紫标记观察细胞迁移情况。用Transwell法测定不同浓度的Cr纳米颗粒促进免疫细胞迁移效果(示意图如图9所示)。
巨噬细胞和DCs细胞、iPS-NK细胞迁移情况结果如图10-13所示，结果表明，与其他组相比，200μg/mL Cr纳米颗粒处理组细胞迁移能力增强，具有显著统计学意义，提示Cr3+促进巨噬细胞、DCs细胞、iPS-NK细胞迁移能力增强。
实施例6
本实施例评估Cr纳米片联合PD-1/PD-L1抑制剂BMS-202对黑色素瘤肺部转移模型的抗肿瘤作用：
Cr@PDA-BMS制备方法为：将1mg Cr NPs悬浮于1mL乙醇中，超声分散均匀，然后加入1.2mg BMS-202(BMS、大连美伦、中国)，摇动充分溶解。随后加入20μL多巴胺水溶液(100mg/mL)，再加入20μL氢氧化钠(10mg/mL)。将混合物在黑暗中、室温下搅拌4小时，并在12,000转/分下离心4分钟。沉淀物用水洗两次，储存在4℃。
Cr@PDA(被聚多巴胺包被的Cr NPs)的制备方法参照Cr@PDA-BMS，区别仅在于不加入BMS-202。
动物模型的建立：从公司购买获得一批SPF条件下健康雌性C57BL/6小鼠(5～6周龄，16～20g)建立黑色素瘤肺转移瘤模型。将5×105个B16F10肿瘤细胞接种于小鼠右侧皮下。当肿瘤体积接近200mm3时，随机分为5组，分别进行基于纳米系统的治疗(n＝6)：
(1)对照组(尾静脉注射生理盐水，100μL)；
(2)尾静脉注射Cr@PDA(其中铬元素的量为1mg/kg，体积100μL，生理盐水分散)；
(3)尾静脉注射Cr@PDA-BMS(其中铬元素的量为1mg/kg，100μL；BMS为1.2mg/kg)；
(4)尾静脉注射Cr@PDA(其中铬元素的量为1mg/kg，100μL)，24h后进行体内光热治疗(NIR，808nm，1W/cm2，8min)；
(5)尾静脉注射Cr@PDA-BMS(其中铬元素的量为1mg/kg，100μL)，24h后进行体内光热治疗(NIR，808nm，1W/cm2，8min)；
在第7天再次进行基于纳米系统的治疗。两周后，取小鼠肺，检查肿瘤肺转移的研究。
结果如图14-18所示，不同处理组小鼠肺部转移情况(图14)、肺部病理切片，观察转移瘤形成情况(图15)、肺部转移瘤灶的统计结果图(图16)、为不同治疗组的转移模型中小鼠的存活情况统计图(图17)、B16F10肺转移模型中，小鼠肺组织中iNOS(M1型巨噬细胞)和CD8(CD8+T细胞)的免疫组织化学染色结果图(图18)。
从图中可以看出，与对照组相比，Cr@PDA和Cr@PDA-BMS联合光热治疗对黑色素瘤肺部转移的具有显著的抑制作用，能够提高转移模型中治疗小鼠的生存情况。且与对照组相比，Cr@PDA和Cr@PDA-BMS组M1型TAM(iNOS，红色)、CD8+T细胞的瘤内浸润率明显提高。结果表明铬纳米元素单一，能够光控杀伤肿瘤细胞与激活免疫，其降解产物为Cr3+，能显著促进M1巨噬细胞与CD8+T淋巴细胞的瘤内浸润。同时，发明人提出了铬纳米的激光金属免疫的概念，即铬纳米同时具备激光光热性，也具备促免疫细胞瘤内浸润的金属免疫作用。通过上述动物实验，发明人验证了铬激光金属免疫作用明显，在肿瘤免疫治疗的联合应用中作用明显。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的三价铬离子和/或金属铬在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (10)

1.三价铬离子和/或金属铬在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用。
2.一种用于肿瘤免疫治疗的联合用药组合物，其特征在于，所述联合用药组合物包括三价铬离子和/或由金属铬制得的药物组分，还包括ICB药物、细胞治疗药物或肿瘤疫苗中的任意一种或至少两种的组合。
3.如权利要求2所述的联合用药组合物，其特征在于，所述由金属铬制得的药物组分包括纳米铬，所述纳米铬由包括如下步骤的制备方法制得：
将金属铬与分散剂混合，得到分散体，离心，收集沉淀，即得；
优选地，所述分散剂包括异丙醇；
优选地，所述混合在超声下进行；
优选地，所述超声的功率为300-1000W，时间为8-24h；
优选地，所述离心的速度为1000-10000g，时间为30-100min。
4.如权利要求2或3所述的联合用药组合物，其特征在于，所述ICB药物包括PD-1/PD-L1抑制剂和/或PD-1/PD-L1抗体；
优选地，所述细胞治疗药物包括CAR-T、CAR-NK、病毒或微生物中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述CAR-NK包括生物体来源的CAR-NK和/或人工合成的iPS来源的CAR-NK。
5.如权利要求3或4所述的联合用药组合物，其特征在于，所述联合用药组合物包括纳米铬-抑制剂复合物，所述纳米铬-抑制剂复合物由包括如下步骤的制备方法制得：
将纳米铬、PD-1/PD-L1抑制剂、溶剂、多巴胺和氢氧化钠混合，进行反应，得到混合物，离心，收集沉淀，即得；
优选地，所述溶剂包括乙醇；
优选地，所述反应在黑暗条件下进行；
优选地，所述反应的温度为15-40℃，时间为3-6h；
优选地，所述离心的转速为8000-16000g，时间为1-10min。
6.如权利要求2-5中任一项所述的联合用药组合物，其特征在于，所述肿瘤包括黑色素瘤或肝癌；
优选地，所述联合用药物组合物为单一的复方制剂或至少两种单独的制剂的组合；
优选地，所述联合用药物组合物还包括药学上可接受的辅料；
优选地，所述药学上可接受的辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述载体包括水凝胶、脂质体或纳米载体中的任意一种或至少两种的组合。
7.一种与光热疗法联用的肿瘤免疫治疗药物，其特征在于，所述与光热疗法联用的肿瘤免疫治疗药物包括三价铬离子、由金属铬制得的药物组分或如权利要求2-6中任一项所述的联合用药组合物中的任意一种或至少两种的组合。
8.如权利要求7所述的与光热疗法联用的肿瘤免疫治疗药物，其特征在于，所述光热疗法使用的光源包括近红外光；
优选地，所述近红外光的波长为780-1100nm。
9.三价铬离子和/或金属铬在制备促进免疫细胞瘤内迁移和/或浸润的药物中的应用。
10.一种促进免疫细胞瘤内迁移和/或浸润的方法，其特征在于，所述方法包括将免疫细胞与三价铬离子和/或由金属铬制得的药物组分共孵育，来促进其迁移和/或浸润。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3285801A1 (en) * 2015-04-24 2018-02-28 Immatics Biotechnologies GmbH Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against lung cancer, including nsclc and other cancers
CN112336740A (zh) * 2020-12-02 2021-02-09 常州市第二人民医院 β-葡聚糖联合抗肿瘤药物在抗肿瘤治疗中的应用
CN112691120A (zh) * 2019-10-23 2021-04-23 北京大学 二价锰在制备免疫增强药物或抗肿瘤药物中的应用
WO2021142336A1 (en) * 2020-01-08 2021-07-15 Puretech Lyt, Inc. Vesicle compositions for oral delivery
CN113350505A (zh) * 2021-06-17 2021-09-07 深圳市人民医院 一种光敏材料和制备方法及其在肿瘤光热联合免疫治疗中的应用
WO2021226061A1 (en) * 2020-05-04 2021-11-11 Iovance Biotherapeutics, Inc. Processes for production of tumor infiltrating lymphocytes and uses of the same in immunotherapy
CN113795508A (zh) * 2018-12-24 2021-12-14 赛诺菲 具有突变型Fab结构域的多特异性结合蛋白

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3285801A1 (en) * 2015-04-24 2018-02-28 Immatics Biotechnologies GmbH Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against lung cancer, including nsclc and other cancers
CN113795508A (zh) * 2018-12-24 2021-12-14 赛诺菲 具有突变型Fab结构域的多特异性结合蛋白
CN112691120A (zh) * 2019-10-23 2021-04-23 北京大学 二价锰在制备免疫增强药物或抗肿瘤药物中的应用
WO2021142336A1 (en) * 2020-01-08 2021-07-15 Puretech Lyt, Inc. Vesicle compositions for oral delivery
WO2021226061A1 (en) * 2020-05-04 2021-11-11 Iovance Biotherapeutics, Inc. Processes for production of tumor infiltrating lymphocytes and uses of the same in immunotherapy
CN112336740A (zh) * 2020-12-02 2021-02-09 常州市第二人民医院 β-葡聚糖联合抗肿瘤药物在抗肿瘤治疗中的应用
CN113350505A (zh) * 2021-06-17 2021-09-07 深圳市人民医院 一种光敏材料和制备方法及其在肿瘤光热联合免疫治疗中的应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
QUAN LIU等: "Chromium Nanoparticles Improve Macrophage and T Cell Infiltration for Cancer Immunotherapy", ACS MATERIALS LETTERS, vol. 5, no. 6 *
STEPHEN J. BASKEY等: "Effects of cobalt and chromium ions on lymphocyte migration", JOURNAL OF ORTHOPAEDIC RESEARCH, vol. 35, no. 4 *
展翼翼;周波;: "抗PD-1/PD-L1单抗治疗进展期非小细胞肺癌疗效及对肿瘤浸润T细胞密度和分布的影响", 中华保健医学杂志, no. 06 *
李六文;赵刚;: "药用真菌多糖抗肿瘤免疫生物活性研究进展", 中华肿瘤防治杂志, no. 14 *

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