CN116003594B

CN116003594B - 靶向cxcl4的抗体及其在抑郁障碍诊断中的用途

Info

Publication number: CN116003594B
Application number: CN202211617708.2A
Authority: CN
Inventors: 黄超兰; 黎玮; 韩旭; 韩佩
Original assignee: Yuyan Technology Beijing Co ltd; Wuxi Xingyuan Fucheng Diagnostic Technology Co ltd
Current assignee: Yuyan Technology Beijing Co ltd; Wuxi Xingyuan Fucheng Diagnostic Technology Co ltd
Priority date: 2022-12-15
Filing date: 2022-12-15
Publication date: 2023-10-13
Anticipated expiration: 2042-12-15
Also published as: CN116003594A

Abstract

本发明涉及一种靶向CXCL4的抗体，以及此抗体用于诊断抑郁障碍的用途。本发明还涉及包含此靶向CXCL4的抗体的试剂盒，以及通过此试剂盒来诊断抑郁障碍的方法和用途。本发明的CXCL4的抗体可以以高特异性、灵敏性地检测样品中的CXCL4蛋白。

Description

靶向CXCL4的抗体及其在抑郁障碍诊断中的用途

技术领域

本发明涉及精准精神疾病研究中对于抑郁障碍的诊断，尤其涉及用于抑郁障碍的诊断。具体地，本发明涉及一种靶向CXCL4的抗体，以及此抗体用于诊断抑郁障碍的用途。

背景技术

精神疾病(mental illness)，也称为精神障碍(mental disorder)，是一类具有对所有病理性精神活动的一种总称，其体现为以临床显著的个体认知、情感调节或行为紊乱为特征的一种综合征。常见的精神疾病包括精神分裂症、心境障碍、焦虑障碍、抑郁障碍等多种病症。

目前，精神疾病的分类标准有包括基于美国精神医学协会的DSM系统、基于世界卫生组织的ICD系统、基于中国的CCMD系统等。但是，这些系统均是建立在临床症状评估的基础上，缺乏客观的生物学诊断指标，即具有一组类似症状的受试者被归为同一类疾病的范畴，而这一组类似症状可能是由完全不同的生物学因素/病理因素所引起。相反，具有不同症状的受试者虽然依据临床症状评估被分类为不同疾病，但是这些症状可能是否相同的生物学因素/病理因素所引起。这对于精神疾病的准确治疗带来了困难。

对于精神疾病中的抑郁障碍，鉴于其多发性和广泛性，需要寻找和确立一个或一组明确的生物标记物，并开发出能够快速、准确、经济地适合临床应用的检测此生物标记物的方法，由此实现抑郁障碍的客观诊断，这对于临床上抑郁障碍的分子层面的诊断具有重要意义。

发明内容

本发明基于基于质谱的深度蛋白质组学分析来寻找用于诊断抑郁障碍的生物标记物。通过实验，本发明鉴定出CXCL4蛋白可区分抑郁障碍病人与健康人，具有辅助、鉴别诊断抑郁障碍的潜力。

在此基础上，本发明进一步开发出针对CXCL4蛋白的特异性抗体，并通过此抗体来检测受试者样品中的CXCL4蛋白的表达水平，用于辅助、鉴别诊断抑郁障碍，尤其是对通过现行精神障碍诊断和分类系统难以诊断的抑郁障碍受试者进行更准确的诊断。

一方面，本发明涉及一种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分包含含有HCDR1、HCDR2、HCDR3序列的重链可变区；以及含有LCDR1、LCDR2、LCDR3序列的轻链可变区，其中所述抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链可变区和轻链可变区：

1)所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：68的HCDR1，(b)SEQ ID NO：69的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：70的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：24的LCDR1，(e)SEQ IDNO：25的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：26的LCDR3；

2)所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：72的HCDR1，(b)SEQ ID NO：73的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：74的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：28的LCDR1，(e)SEQ IDNO：29的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：30的LCDR3；

3)所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：76的HCDR1，(b)SEQ ID NO：77的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：78的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：32的LCDR1，(e)SEQ IDNO：33的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：34的LCDR3；

4)所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：80的HCDR1，(b)SEQ ID NO：81的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：82的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：36的LCDR1，(e)SEQ IDNO：37的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：38的LCDR3；

5)所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：84的HCDR1，(b)SEQ ID NO：85的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：86的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：40的LCDR1，(e)SEQ IDNO：41的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：42的LCDR3；

6)所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：88的HCDR1，(b)SEQ ID NO：89的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：90的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：44的LCDR1，(e)SEQ IDNO：45的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：46的LCDR3；

7)所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：92的HCDR1，(b)SEQ ID NO：93的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：94的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：48的LCDR1，(e)SEQ IDNO：49的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：50的LCDR3；

8)所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：96的HCDR1，(b)SEQ ID NO：97的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：98的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：52的LCDR1，(e)SEQ IDNO：53的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：54的LCDR3；

9)所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：100的HCDR1，(b)SEQ ID NO：101的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：102的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：56的LCDR1，(e)SEQID NO：57的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：58的LCDR3；

10)所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：104的HCDR1，(b)SEQ ID NO：105的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：106的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：60的LCDR1，(e)SEQID NO：61的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：62的LCDR3；和

11)所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：108的HCDR1，(b)SEQ ID NO：109的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：110的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：64的LCDR1，(e)SEQID NO：65的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：66的LCDR3。

一方面，本发明涉及一种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

1)所述重链包含由SEQ ID NO：140的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：140的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：140的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：139的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：139的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：139的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

2)所述重链包含由SEQ ID NO：142的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：142的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：142的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：141的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：141的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：141的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

3)所述重链包含由SEQ ID NO：144的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：144的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：144的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：143的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：143的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：143的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

4)所述重链包含由SEQ ID NO：146的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：146的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：146的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：145的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：145的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：145的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

5)所述重链包含由SEQ ID NO：148的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：148的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：148的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：147的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：147的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：147的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

6)所述重链包含由SEQ ID NO：150的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：150的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：150的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：149的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：149的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：149的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

7)所述重链包含由SEQ ID NO：152的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：152的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：152的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：151的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：151的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：151的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

8)所述重链包含由SEQ ID NO：154的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：154的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：154的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：153的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：153的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：153的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

9)所述重链包含由SEQ ID NO：156的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：156的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：156的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：155的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：155的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：155的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

10)所述重链包含由SEQ ID NO：158的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：158的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：158的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：157的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：157的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：157的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

11)所述重链包含由SEQ ID NO：160的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：160的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：160的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：159的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：159的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：159的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成。

一方面，本发明涉及一种针对CXCL4蛋白的抗体组合物，包含至少两种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，

其中，所述的至少一种分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：72的HCDR1，(b)SEQ ID NO：73的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：74的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：28的LCDR1，(e)SEQ ID NO：29的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：30的LCDR3；或者

所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：71的氨基酸序列或与SEQ ID NO：71的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列或与SEQ ID NO：27的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；或者

所述重链，其包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列或与SEQ ID NO：123的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列或与SEQ ID NO：112的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

其中，所述的至少另一种分离的抗体或其抗原结合片段部分选自以下5种抗体中的一种：

(1)所述分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：68的HCDR1，(b)SEQ ID NO：69的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：70的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：24的LCDR1，(e)SEQ ID NO：25的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：26的LCDR3；或者

所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列或与SEQ ID NO：67的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列或与SEQ ID NO：23的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；或者

所述重链，其由SEQ ID NO：122的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：111的氨基酸序列组成；

(2)所述分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：84的HCDR1，(b)SEQ ID NO：85的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：86的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：40的LCDR1，(e)SEQ ID NO：41的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：42的LCDR3；或者

所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：83的氨基酸序列或与SEQ ID NO：83的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列或与SEQ ID NO：39的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；或者

所述重链，其由SEQ ID NO：126的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：115的氨基酸序列组成；

(3)所述分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：88的HCDR1，(b)SEQ ID NO：89的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：90的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：44的LCDR1，(e)SEQ ID NO：45的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：46的LCDR3；或者

所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：87的氨基酸序列或与SEQ ID NO：87的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列或与SEQ ID NO：43的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；或者

所述重链，其由SEQ ID NO：127的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：116的氨基酸序列组成；

(4)所述分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：92的HCDR1，(b)SEQ ID NO：93的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：94的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：48的LCDR1，(e)SEQ ID NO：49的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：50的LCDR3；或者

所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：91的氨基酸序列或与SEQ ID NO：91的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列或与SEQ ID NO：47的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；或者

所述重链，其由SEQ ID NO：128的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：117的氨基酸序列组成；和

(5)所述分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：108的HCDR1，(b)SEQ ID NO：109的HCDR2，和(c)SEQ ID NO：110的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：64的LCDR1，(e)SEQ IDNO：65的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：66的LCDR3；或者

所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列或与SEQ ID NO：107的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列或与SEQ ID NO：63的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；或者

所述重链，其由SEQ ID NO：132的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：121的氨基酸序列组成。

一方面，本发明涉及一种分离的核酸分子，其编码本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分；或者

所述核酸分子包括选自以下任意一种组合所示的核苷酸序列或由此核苷酸序列组成：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22。

一方面，本发明涉及一种表达载体，其包含本发明的核酸分子。

一方面，本发明涉及一种宿主细胞，其包含本发明的核酸分子或本发明的表达载体。

一方面，本发明涉及一种杂交瘤细胞，其表达本发明的抗体或其抗原结合片段部分。

一方面，本发明涉及一种生产靶向表达CXCL4的人肿瘤细胞的抗体或其抗原结合片段部分的方法，包括：

(i)表达根据本发明的核酸分子，和

(ii)分离并纯化由所述核酸分子表达的抗体或其抗原结合片段部分。

一方面，本发明涉及一种用于诊断抑郁障碍的试剂盒、试纸条或试纸卡，包括用于检测来自受试者的样品中CXCL4蛋白的表达水平的抗体，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，所述试剂盒、试纸条或试纸卡还包括指示CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍的使用说明或插页。

一方面，本发明涉及一种用于诊断抑郁障碍的试剂盒、试纸条或试纸卡，其中所述试剂盒、试纸条或试纸卡包括用于接收来自受试者的样品的部分；和包被有能够特异性结合CXCL4蛋白的抗体的部分，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍。

一方面，本发明涉及一种用于检测CXCL4蛋白的表达水平的试剂盒、试纸条或试纸卡，包括用于检测来自受试者的样品中CXCL4蛋白的表达水平的抗体，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，所述试剂盒、试纸条或试纸卡还包括指示CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍的使用说明或插页。

一方面，本发明涉及一种用于诊断抑郁障碍的方法，包括确定来自受试者的样品中的CXCL4蛋白的表达水平并与参考值相比较，其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过抗体来进行测定，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍。

一方面，本发明涉及一种体外检测生物标记物的表达水平的方法，包括：(a)收集来自受试者的样品，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，(b)测定所述样品中的CXCL4蛋白的表达水平并与参考值相比较，其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过抗体来进行测定，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍。

一方面，本发明涉及一种用于确定受试者患有抑郁障碍的可能性的方法，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述方法包括确定来自受试者的样品中的CXCL4蛋白的表达水平并与参考值相比较，其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过抗体来进行测定，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍的可能性高。

一方面，本发明涉及用于检测来自受试者的样品中CXCL4蛋白的表达水平的抗体在制备用于诊断抑郁障碍的试纸条、试纸卡和/或试剂盒中的用途，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍。

一方面，本发明涉及免疫测定组合物，所述组合物包含来自受试者的样品中的CXCL4蛋白和有效量的用于检测所述CXCL4蛋白的表达水平的抗体(优选结合伴侣)，和/或包含由来自受试者的样品中的CXCL4蛋白和有效量的用于检测所述CXCL4蛋白的表达水平的抗体(优选结合伴侣)所形成的结合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中检测到所述免疫测定组合物中所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍。

一方面，本发明涉及包含免疫测定组合物的容器，所述免疫测定组合物包含来自受试者的样品中的CXCL4蛋白和有效量的用于检测所述CXCL4蛋白的表达水平的抗体(优选结合伴侣)，和/或包含由来自受试者的样品中的CXCL4蛋白和有效量的用于检测所述CXCL4蛋白的表达水平的抗体(优选结合伴侣)所形成的结合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中检测到所述容器中的所述免疫测定组合物中所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍。

本发明的抗体对CXCL4蛋白具有优异的结合性，能够用于检测CXCL4蛋白的表达水平，抗体对组合的使用并配合化学发光检测方法可以实现对抑郁障碍的高特异性诊断，为抑郁障碍的诊断提供了客观依据。

附图说明

图1-偏最小二乘法判别分析质谱数据；

图2-CXCL4表达水平在抑郁MDD与健康HC组中的差异。

序列说明

以下表1中最左栏为本发明中的序列编号(SEQ ID NO：)。

表1a本发明抗体的轻链和重链的核酸编码序列(SEQ ID NO：)

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表1b本发明抗体的轻链和重链的可变区、各个CDR、信号肽、以及恒定区的氨基酸序列(SEQ ID NO:)

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注：表中氨基酸序列中用黑体和下划线标出的序列为对应的CDR序列

表1c本发明抗体的轻链和重链的氨基酸序列

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具体实施方式

(一)、CXCL4蛋白生物标记物

在本文中，术语“生物标记物”，也称为“生物标志物”，是指反映受试者的生物状态的可测量指标。此生物标志物可以是在受试者中的任何物质(例如基因或蛋白质)，只要它们与被检受试者的特定生物状态(例如，疾病)有关系。生物标记物可以是一个标记物，也可以是由两个或更多个生物标记物组成的一组标记物。本发明中的生物标记物是指蛋白质。

在本文中，用于诊断抑郁障碍的生物标记物的名称参照UniProt蛋白质数据库中的定义。在一个实施方式中，下述蛋白质均指物种为人Homo sapiens(Human)中的蛋白质。

术语“CXCL4”是指趋化因子(C-X-C motif)配体4蛋白，其也被称作血小板因子4(PF4)。CXCL4在UniProt蛋白质数据库中的编号为P02776，具体参见https://beta.uniprot.org/uniprotkb/P02776/entry。CXCL4以及其全称、别称和缩写在本文中可以互换。

在一个实施方式中，CXCL4蛋白被用作诊断抑郁障碍的生物标记物。

(二)、抑郁障碍

在本文中，所提及的疾病的诊断标准依据为美国精神科学会的精神疾病诊断和统计手册第4版(简称“DSM-IV”)，具体诊断标准可以参见《DSM-IV-TR Guidebook》，theessential companion of the diagnostic and statistical manual of mentaldisorders,fourth edition text revision,2004。根据DSM-IV的诊断标准，抑郁障碍归属于精神类疾病的中心境障碍(mood disorders)。心境障碍在临床上表现为心境发作(moodepisodes)，包括重性抑郁发作(major depressive episode)，躁狂发作(manic episode)和混合躁狂发作(mixed episode)。临床症状虽然可以作为心境障碍具体分型/亚型的诊断构件，但是其无法独立用于区分/诊断心境障碍的亚型或用于心境障碍的进一步分型。根据DSM-IV的诊断标准，抑郁障碍(major depression disorder或major depressivedisorder,MDD，或major depression,MD)属于心境障碍的临床亚型之一。在本发明中，术语“抑郁障碍”、“MDD”和“MD”也可以互换使用。

需要注意的是，目前也存在对于抑郁障碍不一致的诊断标准。例如，DSM-IV将抑郁障碍归类为心境障碍的临床亚型，但是2013年出版的DSM-5已经将抑郁障碍从心境障碍中独立出来，与精神分裂症、抑郁障碍等并列为精神疾病的大类疾病。再例如，疾病和相关健康问题的国际统计分类第10版(ICD-10)将抑郁障碍归类为心境障碍的临床亚型，随后2018年出版的ICD-11中此分类标准并未改变，依旧将抑郁障碍归类为心境障碍的临床亚型。在本发明中，所提及的抑郁障碍的分类和诊断依据均以DSM-IV为准。在一个实施方式中，本发明的对象患有抑郁障碍临床分型依据DSM-IV诊断标准进行。

在本文中，术语“差异化地表达的蛋白质”(differneitally expresssedproteins,DEPs)是指通过对血浆样品进行分析后，蛋白质的表达的倍数变化>2或<0.5，双尾t检验中p<0.05。例如，如果比较抑郁障碍受试者相对于健康对照中蛋白表达的变化，抑郁障碍受试者中蛋白表达变化倍数>2或<0.5(双尾t检验中p<0.05；对数据进行归一化处理)的蛋白被认为是差异化地表达的蛋白质。在一个实施方式中，本发明通过抗体检测CXCL4蛋白的表达来鉴别抑郁障碍。

在本文中，术语“诊断(diagnose)”、“诊断的(diagnosed)”或“诊断(diagnosing)”是指在检测和/或识别受试者的病例状态，鉴别和/或确定受试者是否患有某种特定疾病的方法。

术语“诊断抑郁障碍”是指通过检测本发明发现的生物标记物可以对抑郁障碍进行诊断，尤其用于对在临床表现上疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍的受试者进行诊断。术语“诊断抑郁障碍”也指对通过先行诊断标准已初步确诊的抑郁障碍受试者，在分子层面做出进一步的诊断。术语“诊断抑郁障碍”也指对大量随机人群进行诊断，将抑郁障碍的受试者与健康受试者进行区别。

在本文中，通过将本发明的生物标记物的表达水平与参考值相比来进行抑郁障碍的诊断，所述表达水平升高提示所述受试者患有抑郁障碍。在一个实施方式中，所述参考值是来自健康受试者的样品或来自标准样品中的所述生物标记物的表达水平。

在本文中，术语“样品”是指分离自受试者的组织或体液的样品，包括但不限于例如全血或任何血液部分，血浆，血清，尿液、脑脊液，血液衍生物，血液细胞、淋巴液。具体地，该样品可以是获得自普通人群受试者、怀疑患有或患有精神障碍或抑郁障碍的受试者的血液样品、血浆样品或血清样品的形式。

在本文中，术语“能够检测生物标记物的表达水平的试剂”是指能够用于确定生物标记物在获得自受试者的样品中的表达水平是否升高、不变或降低的物质或手段/方法。在本文中，能够检测生物标记物的表达水平的试剂可以为能够靶向生物标记物并与生物标记物结合的结合伴侣(binding partner)。例如，结合伴侣可以为能够靶向生物标记物并与生物标记物结合的抗体或其抗原结合片段。所述生物标记物的表达水平通过靶向生物标记物的结合伴侣来检测。例如，生物标记物的表达水平通过能够特异性结合此生物标记物的抗体来检测。再例如，生物标记物的表达水平通过质谱测定来测定，或者基于抗体的免疫测定方法，例如竞争性免疫测定、非竞争性免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫组织化学测定、化学发光测定、Western测定印迹和Dot印迹测定等。在一个实施方式中，使用针对CXCL4蛋白的抗体作为检测CXCL4蛋白的表达水平的试剂。

在本文中，术语“受试者”是指哺乳动物，例如人。在一个实施方式中，受试者是疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍的受试者，例如人。在一个实施方式中，受试者是通过先行诊断标准已初步确诊的抑郁障碍，需要在分子层面进行进一步确诊的受试者，例如人。在一个实施方式中，受试者是大量随机人群作为受试者，所述人群中可能包括抑郁障碍的人。

(三)、针对CXCL4的抗体

A.一般性定义

术语“抗体”指包含至少一个抗原识别位点并能特异性结合抗原的免疫球蛋白分子。例如，抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、人源化抗体、骆驼抗体、嵌合抗体等。抗体可以被进一步修饰以带有可检测的标记，例如带有可以被化学发光方法检测的标记。

抗体的“抗体片段”或“抗原结合片段”指全长抗体的任何部分，其少于全长，但是至少包含结合抗原的所述抗体的部分可变区(例如一个或多个CDR和/或一个或多个抗体结合位点)，并且因此保留结合特异性以及所述全长抗体的至少部分特异性结合能力。因此，抗原结合片段指包含与衍生抗体片段的抗体结合相同抗原的抗原结合部分的抗体片段。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab’)₂、单链Fv(scFv)、Fv、dsFv、双抗体、Fd和Fd’片段以及其他片段，包括修饰的片段(参见，例如，Methods in Molecular Biology,Vol207:Recombinant Antibodies for Cancer Therapy Methods and Protocols(2003)；Chapter 1；p 3-25,Kipriyanov)。

“高变区”、“HV”、“互补决定区”和“CDR”和“抗体CDR”可交换地用来指一起形成抗体的抗原结合位点的每个可变区内的多个部分中的一个。每个可变区结构域包含3个CDR，命名为CDR1、CDR2和CDR3。例如，轻链可变区结构域包含3个CDR，命名为VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；重链可变区结构域包含3个CDR，命名为VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。本领域技术人员知道并且可以基于Kabat或Chothia编号鉴定CDR(参见例如，Kabat,E.A.et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition,U.S.Departmentof Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242,和Chothia,C.et al.(1987)J.Mol.Biol.196:901-917)。在本发明中，缩写“VH CDR”和“HCDR”以及“VL CDR”和“LCDR”具有相同含义。

“恒定区”结构域是抗体重链或轻链中的结构域，其包含比可变区结构域的氨基酸序列相对更保守的氨基酸序列。在常规全长抗体分子中，每条轻链具有单个轻链恒定区(C_L)结构域，而每条重链包含一个或多个重链恒定区(C_H)结构域，包括C_H1、C_H2、C_H3和C_H4。

“分离的蛋白质”、“分离的多肽”或“分离的抗体”指所述蛋白质、多肽或抗体(1)不与在其天然状态下伴随其天然相关成分关联，(2)不含来自相同物种的其它蛋白质，(3)由来自不同物种的细胞表达，或(4)不在天然中发生。因此，经化学合成的多肽或在不同于多肽的天然来源细胞的细胞系统中合成的多肽将会与其天然相关成分“分离”。还可通过分离以使蛋白质实质上不含天然相关成分，即使用本领域众所周知的蛋白质纯化技术。

“分离的核酸分子”是从存在于核酸分子的天然来源中的其他核酸分子分离的核酸分子。诸如cDNA分子的“分离的”核酸分子可以在通过重组技术制备时基本上不含其他细胞物质或培养基，或者在化学合成时基本上不含化学前体或其他化学成分。本文所提供的示例性分离的核酸分子包括编码所提供的抗体或抗原结合片段的分离的核酸分子。

序列“相同性”具有本领域公认的含义，并且可以利用公开的技术计算两个核酸或多肽分子或区域之间序列相同性的百分比。可以沿着多核苷酸或多肽的全长或者沿着该分子的区域测量序列相同性。(参见，例如：Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.,ed.,Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing:Informatics and GenomeProjects,Smith,D.W.,ed.,Academic Press,New York,1993；Computer Analysis ofSequence Data,Part I,Griffin,A.M.,and Griffin,H.G.,eds.,Humana Press,NewJersey,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,AcademicPress,1987；and Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.and Devereux,J.,eds.,MStockton Press,New York,1991)。虽然存在许多测量两个多核苷酸或多肽之间的相同性的方法，但是术语“相同性”是技术人员公知的(Carrillo,H.&Lipman,D.,SIAM J AppliedMath 48:1073(1988))。

B.针对CXCL4的抗体

本发明发现CXCL4蛋白是一种在来自于健康受试者和抑郁障碍受试者的血液中存在差异化表达的蛋白，因此其可以作为抑郁障碍诊断的生物标记物。在此基础上，本发明开发出一系列对于CXCL4蛋白具有优异的结合能力的抗体。利用本发明抗体的优异结合能力，可以有效地对受试者样品中的CXCL4蛋白进行检测，此检测具有优异的灵敏度和特异性。此外，抗体检测的方式速度快、准确率高、适用于目前临床生化检测分析仪器或数字化检测平台，因此具有很好的临床应用前景。此外，本发明的这些高特异性抗体对于生物学领域中CXCL4的研究也很有帮助，可以作为生物学研究CXCL4中的检测或分析试剂。

因此，第一方面，本发明提供了一种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分包含含有HCDR1、HCDR2、HCDR3序列的重链可变区；以及含有LCDR1、LCDR2、LCDR3序列的轻链可变区，其中所述抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链可变区和轻链可变区：

在一些实施方式中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分包含具有选自以下至少一组的重链可变区和轻链可变区：

1)所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列或与SEQ ID NO：67的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：23的氨基酸序列或与SEQ ID NO：23的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

2)所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：71的氨基酸序列或与SEQ ID NO：71的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列或与SEQ ID NO：27的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

3)所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：75的氨基酸序列或与SEQ ID NO：75的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：31的氨基酸序列或与SEQ ID NO：31的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

4)所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：79的氨基酸序列或与SEQ ID NO：79的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列或与SEQ ID NO：35的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

5)所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：83的氨基酸序列或与SEQ ID NO：83的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列或与SEQ ID NO：39的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

6)所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：87的氨基酸序列或与SEQ ID NO：87的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列或与SEQ ID NO：43的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

7)所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：91的氨基酸序列或与SEQ ID NO：91的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列或与SEQ ID NO：47的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

8)所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：95的氨基酸序列或与SEQ ID NO：95的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列或与SEQ ID NO：51的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

9)所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：99的氨基酸序列或与SEQ ID NO：99的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列或与SEQ ID NO：55的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

10)所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：103的氨基酸序列或与SEQ ID NO：103的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列或与SEQ IDNO：59的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；和

11)所述重链可变区，其包含SEQ ID NO：107的氨基酸序列或与SEQ ID NO：107的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链可变区，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列或与SEQ IDNO：63的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列。

1)所述重链可变区，其由SEQ ID NO：67的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：23的氨基酸序列组成；

2)所述重链可变区，其由SEQ ID NO：71的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：27的氨基酸序列组成；

3)所述重链可变区，其由SEQ ID NO：75的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：31的氨基酸序列组成；

4)所述重链可变区，其由SEQ ID NO：79的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：35的氨基酸序列组成；

5)所述重链可变区，其由SEQ ID NO：83的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：39的氨基酸序列组成；

6)所述重链可变区，其由SEQ ID NO：87的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：43的氨基酸序列组成；

7)所述重链可变区，其由SEQ ID NO：91的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：47的氨基酸序列组成；

8)所述重链可变区，其由SEQ ID NO：95的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：51的氨基酸序列组成；

9)所述重链可变区，其由SEQ ID NO：99的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：55的氨基酸序列组成；

10)所述重链可变区，其由SEQ ID NO：103的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：59的氨基酸序列组成；和

11)所述重链可变区，其由SEQ ID NO：107的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：63的氨基酸序列组成。

在一些实施方式中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分进一步包含重链恒定区和/或轻链恒定区，

所述重链恒定区包含SEQ ID NO：134的氨基酸序列或与SEQ ID NO：134的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，且

所述轻链恒定区包含SEQ ID NO：133的氨基酸序列或与SEQ ID NO：133的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列。

所述重链恒定区由SEQ ID NO：134的氨基酸序列组成，且

所述轻链恒定区由SEQ ID NO：133的氨基酸序列组成。

在一些实施方式中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分包含具有选自以下至少一组的重链和轻链：

1)所述重链，其包含SEQ ID NO：122的氨基酸序列或与SEQ ID NO：122的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：111的氨基酸序列或与SEQ ID NO：111的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

2)所述重链，其包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列或与SEQ ID NO：123的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列或与SEQ ID NO：112的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

3)所述重链，其包含SEQ ID NO：124的氨基酸序列或与SEQ ID NO：124的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：113的氨基酸序列或与SEQ ID NO：113的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

4)所述重链，其包含SEQ ID NO：125的氨基酸序列或与SEQ ID NO：125的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：114的氨基酸序列或与SEQ ID NO：114的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

5)所述重链，其包含SEQ ID NO：126的氨基酸序列或与SEQ ID NO：126的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列或与SEQ ID NO：115的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

6)所述重链，其包含SEQ ID NO：127的氨基酸序列或与SEQ ID NO：127的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列或与SEQ ID NO：116的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

7)所述重链，其包含SEQ ID NO：128的氨基酸序列或与SEQ ID NO：128的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：117的氨基酸序列或与SEQ ID NO：117的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

8)所述重链，其包含SEQ ID NO：129的氨基酸序列或与SEQ ID NO：129的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：118的氨基酸序列或与SEQ ID NO：118的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

9)所述重链，其包含SEQ ID NO：130的氨基酸序列或与SEQ ID NO：130的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：119的氨基酸序列或与SEQ ID NO：119的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

10)所述重链，其包含SEQ ID NO：131的氨基酸序列或与SEQ ID NO：131的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：120的氨基酸序列或与SEQ ID NO：120的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列；

11)所述重链，其包含SEQ ID NO：132的氨基酸序列或与SEQ ID NO：132的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：121的氨基酸序列或与SEQ ID NO：121的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列。

在一些实施方式中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分由选自以下至少一组的重链和轻链组成：

1)所述重链，其由SEQ ID NO：122的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：111的氨基酸序列组成；

2)所述重链，其由SEQ ID NO：123的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：112的氨基酸序列组成；

3)所述重链，其由SEQ ID NO：124的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：113的氨基酸序列组成；

4)所述重链，其由SEQ ID NO：125的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：114的氨基酸序列组成；

5)所述重链，其由SEQ ID NO：126的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：115的氨基酸序列组成；

6)所述重链，其由SEQ ID NO：127的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：116的氨基酸序列组成；

7)所述重链，其由SEQ ID NO：128的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：117的氨基酸序列组成；

8)所述重链，其由SEQ ID NO：129的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：118的氨基酸序列组成；

9)所述重链，其由SEQ ID NO：130的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：119的氨基酸序列组成；

10)所述重链，其由SEQ ID NO：131的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：120的氨基酸序列组成；和

11)所述重链，其由SEQ ID NO：132的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：121的氨基酸序列组成。

在一些实施方式中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分的EC50小于30pM。

第二方面，本发明提供了一种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

在一些实施方式中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

1)所述重链包含由SEQ ID NO：2的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：2的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：2的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：1的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQID NO：1的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：1的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

2)所述重链包含由SEQ ID NO：4的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：4的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：4的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：3的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQID NO：3的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：3的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

3)所述重链包含由SEQ ID NO：6的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：6的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：6的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：5的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQID NO：5的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：5的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

4)所述重链包含由SEQ ID NO：8的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO8的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：8的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：7的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQID NO：7的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：7的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

5)所述重链包含由SEQ ID NO：10的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：10的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：10的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：9的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQID NO：9的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：9的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

6)所述重链包含由SEQ ID NO：12的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：12的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：12的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：11的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：11的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：11的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

7)所述重链包含由SEQ ID NO：14的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：14的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：14的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：13的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：13的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：13的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

8)所述重链包含由SEQ ID NO：16的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：16的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：16的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：15的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：15的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：15的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

9)所述重链包含由SEQ ID NO：18的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：18的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：18的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：17的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：17的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：17的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

10)所述重链包含由SEQ ID NO：20的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：20的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：20的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：19的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：19的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：19的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成；

11)所述重链包含由SEQ ID NO：22的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：22的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：22的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链包含由SEQ ID NO：21的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或包含与由SEQ ID NO：21的核苷酸序列所编码的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，或者由SEQ ID NO：21的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成。

第三方面，本发明提供了一种针对CXCL4蛋白的抗体组合物，包含至少两种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，

在一些实施方式中，本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物包含两种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，

第一种分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

第二种分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

所述重链，其由SEQ ID NO：122的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：111的氨基酸序列组成。

所述重链，其由SEQ ID NO：126的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：115的氨基酸序列组成。

所述重链，其由SEQ ID NO：127的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：116的氨基酸序列组成。

所述重链，其由SEQ ID NO：128的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：117的氨基酸序列组成。

在一些实施方式中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段可用作生物学研究中CXCL4蛋白的检测或分析试剂。在一些实施方式中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段可用作医学研究中CXCL4蛋白的检测或分析试剂。

(四)、核酸、载体、宿主细胞和抗体产生方法

一方面，本发明提供分离的核酸分子，其编码前述本发明的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，本发明的核酸分子编码前述本发明的抗体的重链和/或轻链可变区、重链和/或轻链可变区中的各个CDR，以及重链和/或轻链恒定区。在一些实施方式中，所述核酸分子的核苷酸序列针对用于表达的宿主细胞进行密码子优化。在一些实施方式中，本发明的核酸分子与表达调控序列可操作地连接。

本发明还提供了一种分离的核酸分子，其编码并且能发明的的抗体或其抗原结合片段部分。

在一些实施方式中，本发明的核酸分子包括选自以下任意一种组合所示的核苷酸序列或由此核苷酸序列组成：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ IDNO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21和SEQID NO:22。

在一些实施方式中，所述核酸分子与表达调控序列可操作地连接。

另一方面，本发明还提供了一种表达载体，其包含本发明的核酸分子。

另一方面，本发明还提供了一种宿主细胞，其包含本发明的核酸分子或本发明的表达载体。

另一方面，本发明还提供了一种杂交瘤细胞，其表达本发明的抗体或其抗原结合片段部分。

另一方面，本发明还提供了一种生产靶向表达CXCL4的人肿瘤细胞的抗体或其抗原结合片段部分的方法，包括：

(i)表达根据本发明的核酸分子，和

(五)、诊断方法

本发明证明CXCL4蛋白作为生物标记物可以独立地用于特异性诊断抑郁障碍，通过本发明的针对CXCL4蛋白的特异性抗体对CXCL4蛋白的表达水平进行检测，可以实现对抑郁障碍的诊断。

一方面，本发明提供了一种用于诊断抑郁障碍的方法，包括确定来自受试者的样品中的CXCL4蛋白的表达水平并与参考值相比较，其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过抗体来进行测定，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍。

一方面，本发明提供了一种体外检测生物标记物的表达水平的方法，包括：(a)收集来自受试者的样品，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，(b)测定所述样品中的CXCL4蛋白的表达水平并与参考值相比较，其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过抗体来进行测定，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍。

一方面，本发明提供了一种用于确定受试者患有抑郁障碍的可能性的方法，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述方法包括确定来自受试者的样品中的CXCL4蛋白的表达水平并与参考值相比较，其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过抗体来进行测定，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高表明所述受试者患有抑郁障碍的可能性高。

在前述多个方面中，所述受试者还可以是通过先行诊断标准已初步确诊的抑郁障碍，需要在分子层面进行进一步确诊的受试者，例如人。在前述实施方式中，所述受试者也可以是大量随机人群作为受试者，所述人群中可能包括抑郁障碍的人。

在一些实施方式中，所述样品为血液样品，优选所述样品是血浆或血清样品。

在一些实施方式中，所述参考值是来自健康受试者的样品或来自标准样品中的CXCL4蛋白的表达水平。

在一些实施方式中，所述CXCL4蛋白的表达水平通过选自以下的方法确定：免疫测定，包括竞争性免疫测定、非竞争性免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫组织化学测定、化学发光测定、Western测定印迹和Dot印迹测定；质谱测定；优选地，所述CXCL4蛋白的表达水平通过化学发光测定。

在一些实施方式中，所述针对CXCL4蛋白的抗体可进一步被修饰以带有可检测的标记；优选地，所述针对CXCL4蛋白的抗体可进一步被修饰以带有可检测的标记，例如可以被化学发光方法检测的标记。

在一些实施方式中，所述受试者为通过现行精神障碍诊断和分类系统难以对抑郁障碍进行诊断的受试者；可选地，所述现行精神障碍诊断和分类系统为：基于美国精神医学协会的DSM的系统(例如DSM IV或DSM V)、基于世界卫生组织的ICD的系统(例如ICD-10或ICD-11)、和/或基于中国的CCMD(例如CCMD-3)的系统。在一些实施方式中，所述受试者为人。

在一些实施方式中，本发明的方法通过全自动化学发光检测仪器或自动化/数字化检测平台来进行。

(六)、包含本发明抗体/抗体组合的试剂盒、试纸条和试纸卡

一方面，本发明提供了一种用于诊断抑郁障碍的试剂盒、试纸条或试纸卡，包括用于检测来自受试者的样品中CXCL4蛋白的表达水平的抗体，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，所述试剂盒、试纸条或试纸卡还包括指示CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍的使用说明或插页。

一方面，本发明提供了一种用于诊断抑郁障碍的试剂盒、试纸条或试纸卡，其中所述试剂盒、试纸条或试纸卡包括用于接收来自受试者的样品的部分；和包被有能够特异性结合CXCL4蛋白的抗体的部分，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍。

一方面，本发明提供了一种用于检测CXCL4蛋白的表达水平的试剂盒、试纸条或试纸卡，包括用于检测来自受试者的样品中CXCL4蛋白的表达水平的抗体，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，所述试剂盒、试纸条或试纸卡还包括指示CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍的使用说明或插页。

一方面，本发明提供了用于检测来自受试者的样品中CXCL4蛋白的表达水平的抗体在制备用于诊断抑郁障碍的试纸条、试纸卡和/或试剂盒中的用途，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍。

一方面，本发明提供了一种用于测定生物学样品中CXCL4蛋白含量的试剂盒、试纸条或试纸卡，包括用于测定生物学样品中CXCL4蛋白的表达水平的抗体，所述抗体选自本发明中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为本发明的针对CXCL4蛋白的抗体组合物。在一些实施方式中，所述生物学样品可为需要进行生物学研究的样品，例如组织和细胞。在一些实施方式中，试剂盒、试纸条或试纸卡可以用于对CXCL4蛋白功能的生物学研究，或者用于生物学或医学研究中CXCL4蛋白的检测或分析。

在一些实施方案中，所述试剂盒、试纸条或试纸卡可以进一步包括至少一种另外的检测试剂，其用于检测至少一种前述本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的存在。在一些实施方式中，所述针对CXCL4蛋白的抗体可进一步被修饰以带有可检测的标记；优选地，所述针对CXCL4蛋白的抗体可进一步被修饰以带有可检测的标记，例如可以被化学发光方法检测的标记，例如被生物素、异硫氰酸荧光素、碱性磷酸酶、或者吖啶酯所标记。在一些实施方式中，所述标记分子选自以下一种：放射性标记(例如同位素)、荧光标记(例如荧光染料)、化学物质、和可检测修饰的酶和标签。

在一些实施方式中，所述试剂盒、试纸条或试纸卡进一步包括用作对照的试剂。

用于检测抗体-抗原结合的方法是本领域已知的，例如ELISA和化学发光等。在一些实施方式中，所述CXCL4蛋白的表达水平通过选自以下的方法确定：免疫测定，包括竞争性免疫测定、非竞争性免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫组织化学测定、化学发光测定、Western测定印迹和Dot印迹测定；质谱测定。

在一些实施方式中，所述CXCL4蛋白的表达水平通过化学发光确定。在一些实施方式中，使用化学发光检测，使用异硫氰酸荧光素(FITC)和碱性磷酸酶作为化学发光的配对标记与抗体进行缀合，磁微粒为羊抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁微粒。在一些实施方式中，使用化学发光检测，使用异硫氰酸荧光素(FITC)和生物素作为化学发光的配对标记与抗体进行缀合，使用碱性磷酸酶与链霉亲和素的偶联物作为第三检测试剂，磁微粒为羊抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁微粒。

化学发光检测的原理是现有技术已知的，具体可以参见例如Tadesse HaileFereja等人，Hindawi Publishing Corporation,ISRN Spectroscopy,Volume 2013,Article ID 230858,12pages；Yu Wang等人，International Journal of Nanomedicine,2019:14 4293–4307；Luigi Cinquanta等人，Autoimmun Highlights(2017)8:9。

并非受任何理论的束缚，本发明检测CXCL4蛋白的化学发光法的检测原理如下：异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔单克隆抗CXCL4抗体与样本、校准品或质控品中的CXCL4结合形成免疫复合物。随后加入连有羊抗FITC抗体的磁微粒，通过抗FITC抗体与FITC的特异性结合使抗原抗体免疫复合物结合在磁微粒上。在外加磁场的作用下，将免疫反应形成的复合物与未结合的其他物质分离，清洗复合物后，加入碱性磷酸酶(AP)标记的兔单克隆抗CXCL4配对抗体，与上述复合物形成“三明治”复合物。在外加磁场的作用下，将免疫反应形成的“三明治”复合物与未结合的其他物质分离，清洗后，加入酶促化学发光底物。底物在酶作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时发出光子，形成发光反应，即可使用化学发光仪检测反应的发光强度。在检测波长(230-700nm)范围内，发光强度与样本中的CXCL4的含量成比例关系，通过方程拟合可定量测算出样本中CXCL4浓度。

在一些实施方式中，所述试剂盒为用于通过化学发光法来检测CXCL4蛋白的表达水平的试剂盒，包括磁微粒试剂、抗试剂A、抗试剂B、可任选存在的抗试剂C，其中所述磁微粒试剂为可检测的标记X缀合的磁微粒，所述抗试剂A为可检测的标记Y缀合的CXCL4特异性抗体，所述抗试剂B为可检测的标记Z缀合的CXCL4配对抗体，所述抗试剂C为可检测的标记W和V的缀合物。

在一些实施方式中，所述可检测的标记X缀合的磁微粒、所述可检测的标记Y缀合的CXCL4特异性抗体和可检测的标记Z缀合的CXCL4配对抗体选自以下组合：

-抗异硫氰酸荧光素的抗体缀合的磁微粒、异硫氰酸荧光素缀合的CXCL4特异性抗体和碱性磷酸酶缀合的CXCL4配对抗体；

-亲和素缀合的磁微粒、生物素缀合的CXCL4特异性抗体和碱性磷酸酶缀合的CXCL4配对抗体；

-抗异硫氰酸荧光素的抗体缀合的磁微粒、异硫氰酸荧光素缀合的CXCL4特异性抗体和吖啶酯缀合的CXCL4配对抗体；

-亲和素缀合的磁微粒、生物素缀合的CXCL4特异性抗体和吖啶酯缀合的CXCL4配对抗体。

在一些实施方式中，所述可检测的标记X缀合的磁微粒为羊抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁微粒，所述可检测的标记Y缀合的CXCL4特异性抗体为异硫氰酸荧光素标记的CXCL4特异性抗体，可检测的标记Z缀合的CXCL4配对抗体为碱性磷酸酶标记的CXCL4配对抗体。

在一些实施方式中，所述可检测的标记X缀合的磁微粒、所述可检测的标记Y缀合的CXCL4特异性抗体、所述抗试剂C为可检测的标记W和V的缀合物和可检测的标记Z缀合的CXCL4配对抗体是抗异硫氰酸荧光素的抗体缀合的磁微粒、异硫氰酸荧光素缀合的CXCL4特异性抗体、生物素缀合的CXCL4配对抗体和碱性磷酸酶与链霉亲和素的偶联物。

在一些实施方式中，所述试剂盒进一步包括校准品和质控品，所述校准品和所述质控品为分别添加了不同量的CXCL4抗原的缓冲液。

在一些实施方式中，所述试剂盒为用于通过化学发光法来检测CXCL4蛋白的表达水平的试剂盒，包括磁微粒试剂、抗试剂A、和抗试剂B，所述磁微粒试剂为含有羊抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁微粒，所述抗试剂A为含有异硫氰酸荧光素标记的CXCL4特异性抗体，所述抗试剂B为含有碱性磷酸酶标记的CXCL4配对抗体。在一些实施方式中，所述试剂盒为用于通过化学发光法来检测CXCL4蛋白的表达水平的试剂盒，包括磁微粒试剂、抗试剂A、抗试剂B、校准品、和质控品，所述磁微粒试剂为含有羊抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁微粒，所述抗试剂A为含有异硫氰酸荧光素标记的CXCL4特异性抗体，所述抗试剂B为含有碱性磷酸酶标记的CXCL4配对抗体，和所述校准品和所述质控品为分别添加了不同量的CXCL4抗原的缓冲液。在一些实施方式中，所述磁微粒、CXCL4特异性抗体和CXCL4配对抗体分别存在于Tris缓冲液中。在一些实施方式中，CXCL4特异性抗体为本发明前述实施方式中的抗体。在一些实施方式中，CXCL4配对抗体为本发明前述实施方式中的抗体。在一些实施方式中，CXCL4特异性抗体和CXCL4配对抗体为本发明前述实施方式中的第一种抗体和多种可选的第二种抗体的组合。

在一些实施方式中，所述试剂盒为用于通过化学发光法来检测CXCL4蛋白的表达水平的试剂盒，包括磁微粒试剂、抗试剂A、抗试剂B、和抗试剂C，所述磁微粒试剂为含有羊抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁微粒，所述抗试剂A为含有异硫氰酸荧光素标记的CXCL4特异性抗体，所述抗试剂B为含有生物素标记的CXCL4配对抗体，所述抗试剂C为碱性磷酸酶与链霉亲和素的偶联物。在一些实施方式中，所述试剂盒为用于通过化学发光法来检测CXCL4蛋白的表达水平的试剂盒，包括磁微粒试剂、抗试剂A、抗试剂B、抗试剂C、校准品、和质控品，所述磁微粒试剂为含有羊抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁微粒，所述抗试剂A为含有异硫氰酸荧光素标记的CXCL4特异性抗体，所述抗试剂B为含有生物素标记的CXCL4配对抗体，所述抗试剂C为碱性磷酸酶与链霉亲和素的偶联物，所述校准品和所述质控品为分别添加了不同量的CXCL4抗原的缓冲液。在一些实施方式中，所述磁微粒、CXCL4特异性抗体、CXCL4配对抗体和碱性磷酸酶与链霉亲和素的偶联物分别存在于Tris缓冲液中。在一些实施方式中，CXCL4特异性抗体为本发明前述实施方式中的抗体。在一些实施方式中，CXCL4配对抗体为本发明前述实施方式中的抗体。在一些实施方式中，CXCL4特异性抗体和CXCL4配对抗体为本发明前述实施方式中的第一种抗体和多种可选的第二种抗体的组合。

在一些实施方式中，所述试剂盒可以进一步包括底物。在一些实施方式中，所述底物可以分离的形式独立包装，例如可以置于另外的试剂盒中。在一些实施方式中，所述底物为发光底物(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐，APS-5。

在一些实施方式中，用于配制校准品和质控品缓冲液包括以下组分：Tris、氯化钠、牛血清白蛋白、四环素、硫酸新霉素、和4M盐酸。在一些实施方式中，用于配制校准品和质控品缓冲液包括：0.1M的Tris、0.9％的氯化钠、2％的牛血清白蛋白、0.01％的四环素、0.01％的硫酸新霉素、和适量的4M盐酸(pH到7.5±0.1)。

在一些实施方式中，抗试剂(Tris)缓冲液包括以下组分：Tris、氯化钠、牛血清白蛋白、四环素、硫酸新霉素、和4M盐酸。在一些实施方式中，抗试剂(Tris)缓冲液包括：0.1M的Tris、0.9％的氯化钠、1％的牛血清白蛋白、0.01％的四环素、0.01％的硫酸新霉素、和适量的4M盐酸(pH到8±0.1)。

在一些实施方式中，磁微粒(Tris)缓冲液包括以下组分：Tris、氯化钠、牛血清白蛋白、甲基纤维素、和4M盐酸。在一些实施方式中，磁微粒(Tris)缓冲液包括：0.1M的Tris、0.9％的氯化钠、1％的牛血清白蛋白、5％的甲基纤维素、和适量的4M盐酸(pH到8±0.1)。

在一些实施方式中，发光底物(Tris)缓冲液包括以下组分：Tris、氯化钠、光泽精和SDS。在一些实施方式中，发光底物(Tris)缓冲液包括：0.1M的Tris、0.9％的氯化钠、0.3％的光泽精和1％的SDS。

在一些实施方式中，(浓缩)清洗液包括以下组分：Tris、氯化钠、Tween-20和曲拉通-100。在一些实施方式中，发光底物(Tris)缓冲液包括：0.1M的Tris、0.9％的氯化钠、1％的Tween-20和1％的曲拉通-100。

在一些实施方式中，所述校准品和质控品通过以下方法制备：用校准品缓冲液稀释CXCL4抗原，配制不同浓度的校准品和质控品。

在一些实施方式中，所述底物通过以下方法制备：用发光缓冲液稀释发光底物(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐，APS-5。

在一些实施方式中，所述受试者为通过现行精神障碍诊断和分类系统难以对抑郁障碍进行诊断的受试者；可选地，所述现行精神障碍诊断和分类系统为：基于美国精神医学协会的DSM的系统(例如DSM IV或DSM V)、基于世界卫生组织的ICD的系统(例如ICD-10或ICD-11)、和/或基于中国的CCMD(例如CCMD-3)的系统。

在一些实施方式中，所述试剂盒、试纸条或试纸卡可用于化学发光方法检测。

在一些实施方式中，所述试剂盒、试纸条或试纸卡可匹配全自动化学发光检测仪器或自动化/数字化检测平台使用。试剂盒、试纸条或试纸卡一般包括表明其内容物的预期用途和/或使用方法的标签。术语标签包括在试剂盒上或与试剂盒一起提供的或以其他方式随试剂盒提供的任何书面的或记录的材料。在一些实施方式中，所述试剂盒、试纸条或试纸卡还包括如何使用本发明的CXCL4抗体对CXCL4蛋白表达进行检测的说明或插页，以及包括指示CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍的使用说明或插页。

化学发光试剂盒中未详细提及的试剂组分(例如浓缩清洗液使用时按说明书适当稀释、一些必要的其他缓冲液等)、试剂盒的外包装以及各试剂组分的独立包装容器等均可以按照所属领域的常规操作进行，符合相关行业规定即可。本发明的方法中未详细提及的操作步骤也可参照所属领域的常规操作进行，例如，在检测前，可将各试剂放至室温(18～25℃)，加样前充分混匀；所用检测仪器设备例如化学发光类测定仪的使用按照说明书操作进行；本发明中，未特别注明单位的比例与含量，固体组分为质量比例与含量，液体组分为体积比例与含量。

(七)、CXCL4蛋白的化学发光检测方法、通过检测CXCL4蛋白来诊断抑郁障碍的方法

一方面，本发明提供了一种CXCL4蛋白的含量的化学发光检测方法，包括以下步骤：

(1)加入CXCL4校准品、质控品和待测样本，并混匀；

(2)加入抗试剂A并充分反应，加入磁微粒试剂并充分反应，随后将反应混合物置于磁场中进行静置，排出上清液；

(3)加入抗试剂B(以及可选地加入抗试剂C)并充分反应，随后将反应混合物置于磁场中进行静置，排出上清液；

(4)加入化学发光底物并混匀；

(5)检测发光强度，并计算得到待测样本中CXCL4蛋白的含量。

可选地，所述待测样本来自疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍的受试者的样品。

一方面，本发明提供了一种体外检测CXCL4蛋白的表达水平的方法，包括以下步骤：

(1)收集来自受试者的样品，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍；

(2)加入CXCL4校准品、质控品和待测样本，并混匀；

(3)加入抗试剂A并充分反应，加入磁微粒试剂并充分反应，随后将反应混合物置于磁场中进行静置，排出上清液；

(4)加入抗试剂B(以及可选地加入抗试剂C)并充分反应，随后将反应混合物置于磁场中进行静置，排出上清液；

(5)加入化学发光底物并混匀；

(6)检测发光强度，并计算得到待测样本中CXCL4蛋白的含量。

一方面，本发明提供了一种用于诊断抑郁障碍的方法，包括确定来自受试者的样品中的CXCL4蛋白的表达水平并与参考值相比较，所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍，

其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过化学发光方法来测定，所述方法包括以下步骤：

(1)加入CXCL4校准品、质控品和待测样本，并混匀；

(4)加入化学发光底物并混匀；

(5)检测发光强度，并计算得到待测样本中CXCL4蛋白的含量。

一方面，本发明提供了一种用于确定受试者患有抑郁障碍的可能性(likelihood)的方法，包括确定来自受试者的样品中的CXCL4蛋白的表达水平并与参考值相比较，所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍，

(1)加入CXCL4校准品、质控品和待测样本，并混匀；

(4)加入化学发光底物并混匀；

(5)检测发光强度，并计算得到待测样本中CXCL4蛋白的含量。

在一些实施方式中，所述磁微粒试剂为含有羊抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁微粒的Tris缓冲液。在一些实施方式中，所述抗试剂A为含有异硫氰酸荧光素标记的CXCL4特异性抗体的Tris缓冲液。在一些实施方式中，所述抗试剂B为含有碱性磷酸酶或生物素标记的CXCL4配对抗体的Tris缓冲液。在一些实施方式中，所述抗试剂C为含有碱性磷酸酶与链霉亲和素的缀合物的Tris缓冲液。在一些实施方式中，所述抗试剂A为含有异硫氰酸荧光素标记的CXCL4特异性抗体的Tris缓冲液，且所述抗试剂B为含有碱性磷酸酶标记的CXCL4配对抗体的Tris缓冲液。在一些实施方式中，所述抗试剂A为含有异硫氰酸荧光素标记的CXCL4特异性抗体的Tris缓冲液，所述抗试剂B为含有生物素标记的CXCL4配对抗体的Tris缓冲液，且所述抗试剂C为含有碱性磷酸酶与链霉亲和素的缀合物的Tris缓冲液。在一些实施方式中，所述校准品和所述质控品为分别添加了不同量的CXCL4抗原的缓冲液。在一些实施方式中，CXCL4特异性抗体为本发明前述实施方式中的抗体。在一些实施方式中，CXCL4配对抗体为本发明前述实施方式中的抗体。在一些实施方式中，CXCL4特异性抗体和CXCL4配对抗体为本发明前述实施方式中的第一种抗体和多种可选的第二种抗体的组合。

实施例

通过参考在此给出的一些具体实施例可获得对本发明的进一步的理解，这些实施例仅用于说明本发明，其无意于对本发明的范围做出任何限制。显然，可以对本发明作出多种改动和变化而不脱离本发明的实质，因此，这些改动和变化同样在本申请要求保护的范围内。

实施例1-CXCL4蛋白标记物的鉴定

1.实验概述

本研究共招募了288名受试者，包括依据DSM-IV标准被鉴定为患有MDD的受试者以及健康对照(Health control；HC)，对样品进行用于数据非依赖性采集(DIA)质谱分析，对前述获得的质谱数据进行偏最小二乘法判别分析(Partial Least Squares DiscriminantAnalysis,PLSDA)(图1)，显示MDD与HC受试者之间存在显著分群的现象。另外，CXCL4的质谱信号强度在MDD与HC之间显示出显著的差异表达(图2)，因此将CXCL4作为MDD诊断的生物标志物。

2.实验材料和方法

本部分描述了实施例中实验所采用的实验方法和材料。

2.1入组标准和样品采集

本研究经中国某省会城市精神病医院的医院伦理委员会批准，从所有参与者那里都获得了书面知情同意书。本研究中所招募的MDD受试者的诊断是严格根据精神疾病诊断和统计手册第4版(DSM-IV)由经过培训的精神科医生在临床环境中进行。本研究共招募了135名MDD受试者和153个自目前或过去没有任何精神障碍的诊断健康捐赠者HC。

对于HC和MDD受试者，使用标准静脉穿刺方案在抗凝真空管中收集血液样品。利用3000rpm离心10分钟对血浆进行提取。使用前将血浆样品储存在-80℃的条件下。

2.2血浆样品中高丰度蛋白质的去除

在配备安捷伦多重亲合去除柱-人类-14(Agilent Multi Affinity RemovalColumn-Human-14)的Agilent 1290Infinity II液相色谱系统上对高丰度蛋白质进行去除。使用BCA蛋白质测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit,Thermo Scientific)测量蛋白质的浓度。蛋白浓度测定依据试剂盒的指导手册进行。

2.3DIA质谱数据分析

为了后续对来自发现队列的血浆样品进行质谱分析，从这些样品的每个样品中取少量肽段，混合来自每个样品的肽段以得到肽段混合物。对肽段混合物进行高pH反相分级分离，每60秒收集一次液体，将肽段混合物分为若干个级分。将这些级分进行两两合并，形成新样品。通过质谱分析这新样品，得到一个谱文库，用于构建数据库。然后再通过质谱依次分析初始的血浆样品，用得到的数据(肽段信息)去搜寻谱文库，得到蛋白的定量信息以用于数据分析。

DIA质谱数据分析的过程和方法可以参见Y.Chen et al.,Immune ResponsePattern Across the Asympthmatic,Symptomatic and Convalescent Periods ofCOVID-19,BBA–Proteins and Proteomics 1870(2022)；和Y.Chen et al.,ProteomicAnalysis Identifies Prolonged Disturbances in Pathways Related to CholesterolMetabolism and Myocardium Function in the COVID-19Recovery Stage,Journal ofProteome Research,2021.

a)用于数据非依赖性采集(DIA)质谱分析的肽样品的制备

血浆蛋白质用三氯乙酸(TCA)溶液进行沉淀，用20mM(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)进行还原并用40mM碘乙酰胺进行烷基化。将混合物用胰蛋白酶以胰蛋白酶:蛋白质为1/100(w/w)的比例在37℃消化过夜。使用MonospinC18柱(GLScience，东京，日本)对裂解物进行脱盐，然后真空离心至干燥。干燥的肽在DIA分析之前进行复溶。

b)用于谱文库生成的肽样品的制备

混合来自每个样品的肽段以获得100μg的肽段混合物，然后真空离心至干燥。干燥的肽在含有2％乙腈(ACN)的Milli-Q水中复溶以用于分级分离(fractionation)。

c)高pH反相分级分离

在pH 10下，在与Waters XevoTM ACQUITY UPLC(Waters，美国)偶联的色谱柱(BEHC18，1.7μm，1mm×150mm)上对肽样品进行分级分离。通过每60秒收集一次液体，大约将100μg纯化的肽分为若干个级分。将所述级分成对混合以得到新样品，然后真空离心至干燥。将干燥的肽溶解在含有0.1％甲酸(FA)的10μL Milli-Q水中，然后加入iRT肽用于色谱校正。反相分离的方法可以参见Proteomic Analysis Identifies ProlongedDisturbances in Pathways Related to Cholesterol Metabolism and MyocardiumFunction in the COVID-19Recovery Stage,J Proteome Res.2021Jul 2；20(7):3463-3474.doi:10.1021/acs.jproteome.1c00054.Epub 2021Jun 3。

d)液相色谱

在nanoElute液相色谱系统(Bruker Daltonics)上进行纳升级反相色谱分析(Nanoflow reversed-phase chromatography)。肽段的分离通过非线性梯度分离实现，即从0.1％甲酸中含2％乙腈开始，然后增加到0.1％甲酸中含22％乙腈，然后在8分钟内增加到含37％乙腈，然后在5分钟内进一步增加到含100％乙腈，及最后重新平衡前在100％保持乙腈7分钟。使用自制色谱柱(25cm×75μm，1.5μm C18-AQ颗粒)。

流动相A和B分别为水和含0.1％甲酸的乙腈。以300nL/min的流速进行分离。

e)质谱

液相色谱(LC)通过CaptiveSpray纳米电喷雾离子源在线偶联到timsTOF Pro(Bruker)。在数据相关模式对级分样品进行分析，在正电喷雾模式将质谱设置在m/z 100-1700范围以生成谱文库。另一项分析采用数据独立模式，其由以下组成：从m/z 400到m/z1200的MS1扫描，和覆盖质量范围从m/z 400到m/z 1200的diaPASEF采集方案中的64个MS2窗口。

从0.6Vs/cm至1.6Vs/cm2对离子迁移率进行扫描。碰撞能量作为迁移率的函数从1/K0＝1.6Vs/cm2时的59eV线性上升到1/K0＝0.6Vs/cm2时的20eV。

f)谱文库和DIA数据分析的生成

使用Spectronaut版本14.2(Biognosys)针对UNIPROT人类数据文库(仅考虑具有reviewed标识的蛋白)来生成谱文库。所有参数都是默认的。除了XIC IM提取窗口的校正因子设置为0.8外，以默认模式对DIA文件进行处理。

2.4偏最小二乘法判别分析(PLSDA)

Omicsbean软件用于质谱数据插补、归一化，之后进行偏最小二乘法判别分析(PLSDA)对于受试者的数据进行分析和可视化，每个成分代表一个影响分组的变量，受试者之间的相似性越高越倾向于分布距离较近，反之则越远。

3.实验结果

3.1CXCL4蛋白在MDD和HC受试者血浆中的表达水平存在明显差异

对大规模MDD(N＝135)及HC(N＝153)深度DIA血浆蛋白组分析所得蛋白进行PLSDA分析(图1)，数据显示了MDD与HC存在清晰的分离，提示蛋白标志物可用于区分MDD和健康人。在众多差异变化蛋白中，CXCL4在所有样品中具有稳定的表达(100％鉴定率)，且MDD与HC组相比，CXCL4的表达水平发生了显著升高(图2)。此结果提示CXCL4可以用作MDD诊断的生物标志物。

因CXC类趋化因子家族有17个成员，存在较高的同源性，如何获得针对CXCL4具有高特异性高亲和力的抗体将是能否通过免疫学方法精确检测其表达水平的关键。

实施例2–抗CXCL4抗体的制备

1.载体构建

本发明的CXCL4抗体序列的设计、载体构建、表达、纯化和鉴定等均委托南京金斯瑞有限公司完成。构建过程主要包括将CXCL4抗体的序列构建在pcDNA3.4载体上，经PCR、酶切、连接、转化、鉴定、测序、比对、抽提后得到质粒。

包含本发明CXCL4抗体的轻链和重链序列的载体如下表5所示。

表5：

抗体名称	包含重链的载体的名称	包含轻链的载体的名称
			FS003-4C7	pcDNA3.4-FS003-4C7-HC(IgG)	pcDNA3.4-FS003-4C7-LC(Kappa)
FS003-11A1	pcDNA3.4-FS003-11A1-HC(IgG)	pcDNA3.4-FS003-11A1-LC(Kappa)
			FS003-16E1	pcDNA3.4-FS003-16E1-HC(IgG)	pcDNA3.4-FS003-16E1-LC(Kappa)
FS003-21F12	pcDNA3.4-FS003-21F12-HC(IgG)	pcDNA3.4-FS003-21F12-LC(Kappa)
			FS003-28H12	pcDNA3.4-FS003-28H12-HC(IgG)	pcDNA3.4-FS003-28H12-LC(Kappa)
FS003-30B10	pcDNA3.4-FS003-30B10-HC(IgG)	pcDNA3.4-FS003-30B10-LC(Kappa)
			FS003-47E3	pcDNA3.4-FS003-47E3-HC(IgG)	pcDNA3.4-FS003-47E3-LC(Kappa)
FS003-47F2	pcDNA3.4-FS003-47F2-HC(IgG)	pcDNA3.4-FS003-47F2-LC(Kappa)
			FS003-56D1	pcDNA3.4-FS003-56D1-HC(IgG)	pcDNA3.4-FS003-56D1-LC(Kappa)
FS003-57D6	pcDNA3.4-FS003-57D6-HC(IgG)	pcDNA3.4-FS003-57D6-LC(Kappa)
			FS003-72A12	pcDNA3.4-FS003-72A12-HC(IgG)	pcDNA3.4-FS003-72A12-LC(Kappa)

轻链11个质粒为Kappa类；重链11个质粒为IgG型。

此处需要说明，上述11个抗体并非实验过程中设计、合成并测试的全部抗体。在后续实验中效果不佳、因此不意图包含在本发明范围内的一些抗体在此实施例中不再描述其制备过程。

上表中各个质粒载体中轻链和重链的编码序列如下(下划线部分对应恒定区序列)

兔单克隆抗体FS003-4C7轻链编码序列(SEQ ID NO:1)，其用于表达兔轻链可变区+兔轻链恒定区

CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAACTGCCAGGCCAGTCAGAGTCTTTATGATGAGAAAAATTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTACGATGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCATTCTCACCATCAGCGGTGTGCAGTGTGACGATGCTGCCAGTTACTACTGTCAAGGTGAATTTGACTGTAGTAGTGGTGATTGTAGTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCGAAGGTGATCCAGTTGCACCTACTGTCCTCATCTTCCCACCAGC TGCTGATCAGGTGGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGCGAATAAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCT GGGAGGTGGATGGCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGAACAGTAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTAC AACCTCAGCAGCACTCTGACACTGACCAGCACACAGTACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGG CACGACCTCAGTCGTCCAGAGCTTCAATAGGGGTGACTGTTAG

兔单克隆抗体FS003-4C7重链编码序列(SEQ ID NO:2)，其用于表达兔重链可变区+兔重链恒定区

CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTAACGCCTGGAGGACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTAGCTATGGAGTGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGGGGCTGGAATGGATCGGAACCATTACTGTTTCAAGAAATACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGACCACGGTGGATCTGAGGATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGGAGTCTTAGTAGTTATTATTACGCCTTTAACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGGCAACCTAAGGCTCCATCAGTCTTCCC ACTGGCCCCCTGCTGCGGGGACACACCCAGCTCCACGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTCAAAGGCTACCTCCCGGAGC CAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGCACCCTCACCAATGGGGTACGCACCTTCCCGTCCATCCGGCAGTCCTCAGGC CTCTACTCGCTGAGCAGCGTGGTGAGCGTGACCTCAAGCAGCCAGCCCGTCACCTGCAACGTGGCCCACCCAGCCAC CAACACCAAAGTGGACAAGACCGTTGCGCCCTCGACATGCAGCAAGCCCATGTGCCCACCCCCTGAACTCCTGGGGG GACCGTCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCACGCACCCCCGAGGTCACATGCGTG GTGGTGGACGTGAGCCAGGATGACCCCGAGGTGCAGTTCACATGGTACATAAACAACGAGCAGGTGCGCACCGCCCG GCCGCCGCTACGGGAGCAGCAGTTCAACAGCACGATCCGCGTGGTCAGCACCCTCCCCATCGCGCACCAGGACTGGC TGAGGGGCAAGGAGTTCAAGTGCAAAGTCCACAACAAGGCACTCCCGGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCC AGAGGGCAGCCCCTGGAGCCGAAGGTCTACACCATGGGCCCTCCCCGGGAGGAGCTGAGCAGCAGGTCGGTCAGCCT GACCTGCATGATCAACGGCTTCTACCCTTCCGACATCTCGGTGGAGTGGGAGAAGAACGGGAAGGCAGAGGACAACT ACAAGACCACGCCGACCGTGCTGGACAGCGACGGCTCCTACTTCCTCTACAGCAAGCTCTCAGTGCCCACGAGTGAG TGGCAGCGGGGCGACGTCTTCACCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCTTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCCATCTC CCGCTCTCCGGGTAAATAG

兔单克隆抗体FS003-11A1轻链编码序列(SEQ ID NO:3)，其用于表达兔轻链可变区+兔轻链恒定区

GCCGTGCTGACCCAGACTCCATCTCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGGTGACAACCGCTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATCTGGCATCCAAACTGGCAACTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGCAGTGTGCCGATGCTGCCACTTATTATTGTGTAGGCGCTTATTTTGGTGAGGCCACTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAGGTGATCCAGTTGCACCTACTGTCCTCATCTTCCCACCAGCTGCTGATCAGGT GGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGCGAATAAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCTGGGAGGTGGATG GCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGAACAGTAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTACAACCTCAGCAGC ACTCTGACACTGACCAGCACACAGTACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGGCACGACCTCAGT CGTCCAGAGCTTCAATAGGGGTGACTGTTAG

兔单克隆抗体FS003-11A1重链编码序列(SEQ ID NO:4)，其用于表达兔重链可变区+兔重链恒定区

CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTAACGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAGCTTTGCAATAAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGGATGGATCGGGTGGATTGGCACTGATGGTGACACATACTACGCGAGCTGGACAAAAGGCCGATTCACCATGTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTAGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATTCCCACAGTGGGGGGGGTGCCTATGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTTGTCACCGTCTCGTCAGGGCAACCTAAGGCTCCATCAGTCTT CCCACTGGCCCCCTGCTGCGGGGACACACCCAGCTCCACGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTCAAAGGCTACCTCCCGG AGCCAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGCACCCTCACCAATGGGGTACGCACCTTCCCGTCCATCCGGCAGTCCTCA GGCCTCTACTCGCTGAGCAGCGTGGTGAGCGTGACCTCAAGCAGCCAGCCCGTCACCTGCAACGTGGCCCACCCAGC CACCAACACCAAAGTGGACAAGACCGTTGCGCCCTCGACATGCAGCAAGCCCATGTGCCCACCCCCTGAACTCCTGG GGGGACCGTCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCACGCACCCCCGAGGTCACATGC GTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGATGACCCCGAGGTGCAGTTCACATGGTACATAAACAACGAGCAGGTGCGCACCGC CCGGCCGCCGCTACGGGAGCAGCAGTTCAACAGCACGATCCGCGTGGTCAGCACCCTCCCCATCGCGCACCAGGACT GGCTGAGGGGCAAGGAGTTCAAGTGCAAAGTCCACAACAAGGCACTCCCGGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAA GCCAGAGGGCAGCCCCTGGAGCCGAAGGTCTACACCATGGGCCCTCCCCGGGAGGAGCTGAGCAGCAGGTCGGTCAG CCTGACCTGCATGATCAACGGCTTCTACCCTTCCGACATCTCGGTGGAGTGGGAGAAGAACGGGAAGGCAGAGGACA ACTACAAGACCACGCCGACCGTGCTGGACAGCGACGGCTCCTACTTCCTCTACAGCAAGCTCTCAGTGCCCACGAGT GAGTGGCAGCGGGGCGACGTCTTCACCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCTTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCCAT CTCCCGCTCTCCGGGTAAATAG

兔单克隆抗体FS003-16E1轻链编码序列(SEQ ID NO:5)，其用于表达兔轻链可变区+兔轻链恒定区

ATTGATATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAATAACAACCTCTTAGCCTGGTATCAGCAGAAAGCAGGGCAGCCTCCCAACCTCCTGATCTATTATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTCCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCGGTTATGATGATGATAGTGATACTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAGGTGATCCAGTTGCACCTACTGTCCTCATCTTCCCACCAGCTGCTGA TCAGGTGGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGCGAATAAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCTGGGAGG TGGATGGCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGAACAGTAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTACAACCTC AGCAGCACTCTGACACTGACCAGCACACAGTACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGGCACGAC CTCAGTCGTCCAGAGCTTCAATAGGGGTGACTGTTAG

兔单克隆抗体FS003-16E1重链编码序列(SEQ ID NO:6)，其用于表达兔重链可变区+兔重链恒定区

CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGTCTATGCAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGGGGCTGGAATACATCGGAATCATTGATCCTAGTGGTAGCGCATACTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAACCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGTGGGGTTTGCTGATGGTAGTGACATTTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGGCAACCTAAGGCTCCATCAGTCTTCCC ACTGGCCCCCTGCTGCGGGGACACACCCAGCTCCACGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTCAAAGGCTACCTCCCGGAGC CAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGCACCCTCACCAATGGGGTACGCACCTTCCCGTCCATCCGGCAGTCCTCAGGC CTCTACTCGCTGAGCAGCGTGGTGAGCGTGACCTCAAGCAGCCAGCCCGTCACCTGCAACGTGGCCCACCCAGCCAC CAACACCAAAGTGGACAAGACCGTTGCGCCCTCGACATGCAGCAAGCCCATGTGCCCACCCCCTGAACTCCTGGGGG GACCGTCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCACGCACCCCCGAGGTCACATGCGTG GTGGTGGACGTGAGCCAGGATGACCCCGAGGTGCAGTTCACATGGTACATAAACAACGAGCAGGTGCGCACCGCCCG GCCGCCGCTACGGGAGCAGCAGTTCAACAGCACGATCCGCGTGGTCAGCACCCTCCCCATCGCGCACCAGGACTGGC TGAGGGGCAAGGAGTTCAAGTGCAAAGTCCACAACAAGGCACTCCCGGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCC AGAGGGCAGCCCCTGGAGCCGAAGGTCTACACCATGGGCCCTCCCCGGGAGGAGCTGAGCAGCAGGTCGGTCAGCCT GACCTGCATGATCAACGGCTTCTACCCTTCCGACATCTCGGTGGAGTGGGAGAAGAACGGGAAGGCAGAGGACAACT ACAAGACCACGCCGACCGTGCTGGACAGCGACGGCTCCTACTTCCTCTACAGCAAGCTCTCAGTGCCCACGAGTGAG TGGCAGCGGGGCGACGTCTTCACCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCTTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCCATCTC CCGCTCTCCGGGTAAATAG

兔单克隆抗体FS003-21F12轻链编码序列(SEQ ID NO:7)，其用于表达兔轻链可变区+兔轻链恒定区

GCCATTGAGATGACCCAGTCTCCACCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGAAAGTGTCAGGATTAGGTGCCTGGCCAGTGAGAACGTTTACAGTGATATATACTGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAGCCTCCTACACTCCTGCTCTATGGTGCATCCAATTTAGAATCTGGGGTCCCACCACGGTTCAGTGGCAGTGGATCCGGGACAGATTACACCCTCACCATTGGCGGCGTGCAGGCTGAAGATGCTGCCACCTACTACTGTCTAGGCGGTTATAGTTACACTACTATAGGTTTGACTTTTGGAGCTGGCACCAAGGTGGAAATCAAAGGTGATCCAGTTGCACCTACTGTCCTCATCTTCCCACCAGCTGCTGA TCAGGTGGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGCGAATAAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCTGGGAGG TGGATGGCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGAACAGTAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTACAACCTC AGCAGCACTCTGACACTGACCAGCACACAGTACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGGCACGAC CTCAGTCGTCCAGAGCTTCAATAGGGGTGACTGTTAG

兔单克隆抗体FS003-21F12重链编码序列(SEQ ID NO:8)，其用于表达兔重链可变区+兔重链恒定区

CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGAGACCTGGTCACGCCTGCAGGAACCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATCCGACCTCAGTAACTACGCAATAAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGATACATTAGTTATGGTGGGAGCGCACACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCTGGAGATTTGGGCCATGATGAATATGGCGATTATATAATATTGACCATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGGCAACCTAAGGC TCCATCAGTCTTCCCACTGGCCCCCTGCTGCGGGGACACACCCAGCTCCACGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTCAAAG GCTACCTCCCGGAGCCAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGCACCCTCACCAATGGGGTACGCACCTTCCCGTCCATC CGGCAGTCCTCAGGCCTCTACTCGCTGAGCAGCGTGGTGAGCGTGACCTCAAGCAGCCAGCCCGTCACCTGCAACGT GGCCCACCCAGCCACCAACACCAAAGTGGACAAGACCGTTGCGCCCTCGACATGCAGCAAGCCCATGTGCCCACCCC CTGAACTCCTGGGGGGACCGTCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCACGCACCCCC GAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGATGACCCCGAGGTGCAGTTCACATGGTACATAAACAACGAGCA GGTGCGCACCGCCCGGCCGCCGCTACGGGAGCAGCAGTTCAACAGCACGATCCGCGTGGTCAGCACCCTCCCCATCG CGCACCAGGACTGGCTGAGGGGCAAGGAGTTCAAGTGCAAAGTCCACAACAAGGCACTCCCGGCCCCCATCGAGAAA ACCATCTCCAAAGCCAGAGGGCAGCCCCTGGAGCCGAAGGTCTACACCATGGGCCCTCCCCGGGAGGAGCTGAGCAG CAGGTCGGTCAGCCTGACCTGCATGATCAACGGCTTCTACCCTTCCGACATCTCGGTGGAGTGGGAGAAGAACGGGA AGGCAGAGGACAACTACAAGACCACGCCGACCGTGCTGGACAGCGACGGCTCCTACTTCCTCTACAGCAAGCTCTCA GTGCCCACGAGTGAGTGGCAGCGGGGCGACGTCTTCACCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCTTGCACAACCACTACAC GCAGAAGTCCATCTCCCGCTCTCCGGGTAAATAG

兔单克隆抗体FS003-28H12轻链编码序列(SEQ ID NO:9)，其用于表达兔轻链可变区+兔轻链恒定区

GCCATTGAGATGACCCAGTCTCCACCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCAGGATTAGGTGCCTGGCCAGTGAGGACATTTACAGTGGTATATCCTGGTATCAACAGAAGCCAGGGAAACCTCCTACACTCCTGATCTATGGTGGATCCCATTTAGAATCTGGGGTCCCACCACGGTTCAGTGGCAGTGGATCCGGGACAGATTACACCCTCACCATCGGCGGCGTGCAGGCTGAAGATGTTGCCACCTACTACTGTCTAGGCGGTTGGGCTTACAGTAGTAGCGGATATGCTTTCGGTGCGGGGACCAAGGTGGAGATCAAAGGTGATCCAGTTGCACCTACTGTCCTCATCTTCCCACCAGCTGCTGA TCAGGTGGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGCGAATAAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCTGGGAGG TGGATGGCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGAACAGTAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTACAACCTC AGCAGCACTCTGACACTGACCAGCACACAGTACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGGCACGAC CTCAGTCGTCCAGAGCTTCAATAGGGGTGACTGTTAG

兔单克隆抗体FS003-28H12重链编码序列(SEQ ID NO:10)，其用于表达兔重链可变区+兔重链恒定区

CAGTCGTTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAATTATATAGTGATGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGTTCCGTTAGTAGTCCTGGTACCACATACTACACGAGCTGGGCGAAAGGCCGGTTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAATAGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGATGCCTACGATGAGTATGCTGATTACGAGATTATTAATTTCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGGCAACCTAAGGC TCCATCAGTCTTCCCACTGGCCCCCTGCTGCGGGGACACACCCAGCTCCACGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTCAAAG GCTACCTCCCGGAGCCAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGCACCCTCACCAATGGGGTACGCACCTTCCCGTCCATC CGGCAGTCCTCAGGCCTCTACTCGCTGAGCAGCGTGGTGAGCGTGACCTCAAGCAGCCAGCCCGTCACCTGCAACGT GGCCCACCCAGCCACCAACACCAAAGTGGACAAGACCGTTGCGCCCTCGACATGCAGCAAGCCCATGTGCCCACCCC CTGAACTCCTGGGGGGACCGTCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCACGCACCCCC GAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGATGACCCCGAGGTGCAGTTCACATGGTACATAAACAACGAGCA GGTGCGCACCGCCCGGCCGCCGCTACGGGAGCAGCAGTTCAACAGCACGATCCGCGTGGTCAGCACCCTCCCCATCG CGCACCAGGACTGGCTGAGGGGCAAGGAGTTCAAGTGCAAAGTCCACAACAAGGCACTCCCGGCCCCCATCGAGAAA ACCATCTCCAAAGCCAGAGGGCAGCCCCTGGAGCCGAAGGTCTACACCATGGGCCCTCCCCGGGAGGAGCTGAGCAG CAGGTCGGTCAGCCTGACCTGCATGATCAACGGCTTCTACCCTTCCGACATCTCGGTGGAGTGGGAGAAGAACGGGA AGGCAGAGGACAACTACAAGACCACGCCGACCGTGCTGGACAGCGACGGCTCCTACTTCCTCTACAGCAAGCTCTCA GTGCCCACGAGTGAGTGGCAGCGGGGCGACGTCTTCACCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCTTGCACAACCACTACAC GCAGAAGTCCATCTCCCGCTCTCCGGGTAAATAG

兔单克隆抗体FS003-30B10轻链编码序列(SEQ ID NO:11)，其用于表达兔轻链可变区+兔轻链恒定区

CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGAACCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGTTCCTTTACAAATCTCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAGCTATGTTTATCGCAGTATTGTTTACACTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTCGTCAAAGGTGATCCAGTTGCACCTACTGTCCTCATCTTCCCACCAGCTGCTGATCAGGT GGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGCGAATAAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCTGGGAGGTGGATG GCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGAACAGTAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTACAACCTCAGCAGC ACTCTGACACTGACCAGCACACAGTACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGGCACGACCTCAGT CGTCCAGAGCTTCAATAGGGGTGACTGTTAG

兔单克隆抗体FS003-30B10重链编码序列(SEQ ID NO:12)，其用于表达兔重链可变区+兔重链恒定区

CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGACTATGGAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAATTATTAGTAGTGGTAATAGCGCATCCTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGACCACGGTGGAGCTGAAAGTCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACGTATTTCTGTGCCAGAGAGGTCTATGATGACTATGGTGATTCCCTGGGGGCTTTTGATCCCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGGCAACCTAAGGCTCC ATCAGTCTTCCCACTGGCCCCCTGCTGCGGGGACACACCCAGCTCCACGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTCAAAGGCT ACCTCCCGGAGCCAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGCACCCTCACCAATGGGGTACGCACCTTCCCGTCCATCCGG CAGTCCTCAGGCCTCTACTCGCTGAGCAGCGTGGTGAGCGTGACCTCAAGCAGCCAGCCCGTCACCTGCAACGTGGC CCACCCAGCCACCAACACCAAAGTGGACAAGACCGTTGCGCCCTCGACATGCAGCAAGCCCATGTGCCCACCCCCTG AACTCCTGGGGGGACCGTCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCACGCACCCCCGAG GTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGATGACCCCGAGGTGCAGTTCACATGGTACATAAACAACGAGCAGGT GCGCACCGCCCGGCCGCCGCTACGGGAGCAGCAGTTCAACAGCACGATCCGCGTGGTCAGCACCCTCCCCATCGCGC ACCAGGACTGGCTGAGGGGCAAGGAGTTCAAGTGCAAAGTCCACAACAAGGCACTCCCGGCCCCCATCGAGAAAACC ATCTCCAAAGCCAGAGGGCAGCCCCTGGAGCCGAAGGTCTACACCATGGGCCCTCCCCGGGAGGAGCTGAGCAGCAG GTCGGTCAGCCTGACCTGCATGATCAACGGCTTCTACCCTTCCGACATCTCGGTGGAGTGGGAGAAGAACGGGAAGG CAGAGGACAACTACAAGACCACGCCGACCGTGCTGGACAGCGACGGCTCCTACTTCCTCTACAGCAAGCTCTCAGTG CCCACGAGTGAGTGGCAGCGGGGCGACGTCTTCACCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCTTGCACAACCACTACACGCA GAAGTCCATCTCCCGCTCTCCGGGTAAATAG

兔单克隆抗体FS003-47E3轻链编码序列(SEQ ID NO:13)，其用于表达兔轻链可变区+兔轻链恒定区

GCATTCGAATTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGAACCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTGAGTTCCTTTACAAATCTCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAGCTATGTTTATCGCAGTATTGTTTACACTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTCGTCAAAGGTGATCCAGTTGCACCTACTGTCCTCATCTTCCCACCAGCTGCTGATCA GGTGGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGCGAATAAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCTGGGAGGTGG ATGGCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGAACAGTAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTACAACCTCAGC AGCACTCTGACACTGACCAGCACACAGTACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGGCACGACCTC AGTCGTCCAGAGCTTCAATAGGGGTGACTGTTAG

兔单克隆抗体FS003-47E3重链编码序列(SEQ ID NO:14)，其用于表达兔重链可变区+兔重链恒定区

兔单克隆抗体FS003-47F2轻链编码序列(SEQ ID NO:15)，其用于表达兔轻链可变区+兔轻链恒定区

GACATCGTGTTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTAGGAACCTCTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCCAAGCTCCTGATTTATGGTGCATCCAATCTGGAATCTGGGGTCCCATCGCGTTTCCGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTACACTCTCACCATTAGTGGCATGAAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGTCACGGTGGTGCCTATGATACTGGTGTAACTTTTGGAGCTGGCACCAAGGTGGAAATCAAAGGTGATCCAGTTGCACCTACTGTCCTCATCTTCCCACCAGCTGCTGATCAGGT GGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGCGAATAAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCTGGGAGGTGGATG GCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGAACAGTAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTACAACCTCAGCAGC ACTCTGACACTGACCAGCACACAGTACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGGCACGACCTCAGT CGTCCAGAGCTTCAATAGGGGTGACTGTTAG

兔单克隆抗体FS003-47F2重链编码序列(SEQ ID NO:16)，其用于表达兔重链可变区+兔重链恒定区

CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGTACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGCAGCTATTCAGTGGCCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGAATCATCAGTGTTAGTACTAGGACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCCGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCTGGAGAGGGGGACGATGACTATGGTGATTACTTTTTTTCCGCTTTTGATTCCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGGCAACCTAA GGCTCCATCAGTCTTCCCACTGGCCCCCTGCTGCGGGGACACACCCAGCTCCACGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTCA AAGGCTACCTCCCGGAGCCAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGCACCCTCACCAATGGGGTACGCACCTTCCCGTCC ATCCGGCAGTCCTCAGGCCTCTACTCGCTGAGCAGCGTGGTGAGCGTGACCTCAAGCAGCCAGCCCGTCACCTGCAA CGTGGCCCACCCAGCCACCAACACCAAAGTGGACAAGACCGTTGCGCCCTCGACATGCAGCAAGCCCATGTGCCCAC CCCCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCACGCACC CCCGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGATGACCCCGAGGTGCAGTTCACATGGTACATAAACAACGA GCAGGTGCGCACCGCCCGGCCGCCGCTACGGGAGCAGCAGTTCAACAGCACGATCCGCGTGGTCAGCACCCTCCCCA TCGCGCACCAGGACTGGCTGAGGGGCAAGGAGTTCAAGTGCAAAGTCCACAACAAGGCACTCCCGGCCCCCATCGAG AAAACCATCTCCAAAGCCAGAGGGCAGCCCCTGGAGCCGAAGGTCTACACCATGGGCCCTCCCCGGGAGGAGCTGAG CAGCAGGTCGGTCAGCCTGACCTGCATGATCAACGGCTTCTACCCTTCCGACATCTCGGTGGAGTGGGAGAAGAACG GGAAGGCAGAGGACAACTACAAGACCACGCCGACCGTGCTGGACAGCGACGGCTCCTACTTCCTCTACAGCAAGCTC TCAGTGCCCACGAGTGAGTGGCAGCGGGGCGACGTCTTCACCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCTTGCACAACCACTA CACGCAGAAGTCCATCTCCCGCTCTCCGGGTAAATAG

兔单克隆抗体FS003-56D1轻链编码序列(SEQ ID NO:17)，其用于表达兔轻链可变区+兔轻链恒定区

CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGAACCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGTTCCTTTACAAATCTCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGATGCATCCGATCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAGCTATCTTTATCGCAGTTATGTTTACACTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTCGTCAAAGGTGATCCAGTTGCACCTACTGTCCTCATCTTCCCACCAGCTGCTGATCAGGT GGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGCGAATAAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCTGGGAGGTGGATG GCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGAACAGTAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTACAACCTCAGCAGC ACTCTGACACTGACCAGCACACAGTACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGGCACGACCTCAGT CGTCCAGAGCTTCAATAGGGGTGACTGTTAG

兔单克隆抗体FS003-56D1重链编码序列(SEQ ID NO:18)，其用于表达兔重链可变区+兔重链恒定区

CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTGTCTGGAATCGACCTCAGTGACTATGGAATGGGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGGAGGGGCTGGAATGGATCGGAACCATTAGTACTGGTGGTAGCATATACTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACGTATTTCTGTGCCAGAGAGGTCTACGATGACTATGGTGATTCCCTGGGGGCTTTTGATCCCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGGCAACCTAAGGCTCC ATCAGTCTTCCCACTGGCCCCCTGCTGCGGGGACACACCCAGCTCCACGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTCAAAGGCT ACCTCCCGGAGCCAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGCACCCTCACCAATGGGGTACGCACCTTCCCGTCCATCCGG CAGTCCTCAGGCCTCTACTCGCTGAGCAGCGTGGTGAGCGTGACCTCAAGCAGCCAGCCCGTCACCTGCAACGTGGC CCACCCAGCCACCAACACCAAAGTGGACAAGACCGTTGCGCCCTCGACATGCAGCAAGCCCATGTGCCCACCCCCTG AACTCCTGGGGGGACCGTCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCACGCACCCCCGAG GTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGATGACCCCGAGGTGCAGTTCACATGGTACATAAACAACGAGCAGGT GCGCACCGCCCGGCCGCCGCTACGGGAGCAGCAGTTCAACAGCACGATCCGCGTGGTCAGCACCCTCCCCATCGCGC ACCAGGACTGGCTGAGGGGCAAGGAGTTCAAGTGCAAAGTCCACAACAAGGCACTCCCGGCCCCCATCGAGAAAACC ATCTCCAAAGCCAGAGGGCAGCCCCTGGAGCCGAAGGTCTACACCATGGGCCCTCCCCGGGAGGAGCTGAGCAGCAG GTCGGTCAGCCTGACCTGCATGATCAACGGCTTCTACCCTTCCGACATCTCGGTGGAG

TGGGAGAAGAACGGGAAGGCAGAGGACAACTACAAGACCACGCCGACCGTGCTGGACAGCGACGGCTCC

TACTTCCTCTACAGCAAGCTCTCAGTGCCCACGAGTGAGTGGCAGCGGGGCGACGTCTTCACCTGCTCCGT

GATGCACGAGGCCTTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCCATCTCCCGCTCTCCGGGTAAATAG

兔单克隆抗体FS003-57D6轻链编码序列(SEQ ID NO:19)，其用于表达兔轻链可变区+兔轻链恒定区

GCCGATGTCGTGATGACCCAGACTCCAGCCTCCGTGGAGGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATAAAGT

GCCAGGCCAGTGAGAGCATTGGCAAGCCATTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAATCTC

TTGATCTACAGGACATCCAATCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTAGATCTGGGACAGA

GTACACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAAAGCTATTCTTTAATT

AATATTAATACTGATACATTTAATACTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTCGTCAAAGGTGATCCAGTTGCA

CCTACTGTCCTCATCTTCCCACCAGCTGCTGATCAGGTGGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGC

GAATAAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCTGGGAGGTGGATGGCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGA

ACAGTAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTACAACCTCAGCAGCACTCTGACACTGACCAGCACA

CAGTACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGGCACGACCTCAGTCGTCCAGAGCTTCA

ATAGGGGTGACTGTTAG

兔单克隆抗体FS003-57D6重链编码序列(SEQ ID NO:20)，其用于表达兔重链可变区+兔重链恒定区

CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGCCT

CTGGATTCTCCCTCAGTAGCTACCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATC

GGAGTCATATCTAATACTGATAACACATATTATGCGAGCTGGACGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACC

TCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTACTTCTGTGCCAGAG

TTTATGATGGTTTTAGTTGTGGAGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGGCAACCTA

AGGCTCCATCAGTCTTCCCACTGGCCCCCTGCTGCGGGGACACACCCAGCTCCACGGTGACCCTGGGCTGC

CTGGTCAAAGGCTACCTCCCGGAGCCAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGCACCCTCACCAATGGGGTAC

GCACCTTCCCGTCCATCCGGCAGTCCTCAGGCCTCTACTCGCTGAGCAGCGTGGTGAGCGTGACCTCAAGC

AGCCAGCCCGTCACCTGCAACGTGGCCCACCCAGCCACCAACACCAAAGTGGACAAGACCGTTGCGCCCT

CGACATGCAGCAAGCCCATGTGCCCACCCCCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCTGTCTTCATCTTCCCCCCA

AAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCACGCACCCCCGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGG

ATGACCCCGAGGTGCAGTTCACATGGTACATAAACAACGAGCAGGTGCGCACCGCCCGGCCGCCGCTACG

GGAGCAGCAGTTCAACAGCACGATCCGCGTGGTCAGCACCCTCCCCATCGCGCACCAGGACTGGCTGAGG

GGCAAGGAGTTCAAGTGCAAAGTCCACAACAAGGCACTCCCGGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAG

CCAGAGGGCAGCCCCTGGAGCCGAAGGTCTACACCATGGGCCCTCCCCGGGAGGAGCTGAGCAGCAGGTC

GGTCAGCCTGACCTGCATGATCAACGGCTTCTACCCTTCCGACATCTCGGTGGAGTGGGAGAAGAACGGGA

AGGCAGAGGACAACTACAAGACCACGCCGACCGTGCTGGACAGCGACGGCTCCTACTTCCTCTACAGCAA

GCTCTCAGTGCCCACGAGTGAGTGGCAGCGGGGCGACGTCTTCACCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCTTG

CACAACCACTACACGCAGAAGTCCATCTCCCGCTCTCCGGGTAAATAG

兔单克隆抗体FS003-72A12轻链编码序列(SEQ ID NO:21)，其用于表达兔轻链可变区+兔轻链恒定区

CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCGTCAACTGCCAGG

CCAGTCAGAGTCTTTATAATAAGAAGAATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTC

CTGATCTACAGGGCATCCACTCTGGAATCAGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACA

GTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTATTGTCAAGGCGAATTTGATTG

TAGTAGTGGTGATTGTAATGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAGGTGATCCAGTTGCACCTA

CTGTCCTCATCTTCCCACCAGCTGCTGATCAGGTGGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGCGAAT

AAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCTGGGAGGTGGATGGCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGAACAG

TAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTACAACCTCAGCAGCACTCTGACACTGACCAGCACACAGT

ACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGGCACGACCTCAGTCGTCCAGAGCTTCAATAG

GGGTGACTGTTAG

兔单克隆抗体FS003-72A12重链编码序列(SEQ ID NO:22)，其用于表达兔重链可变区+兔重链恒定区

CAGTCGGTGGAGGAATCCGGGGGTCGCCTAGTCACGCCTGGGACACCCCTCACACTCACCTGCATACTCTC

TGGAATCGACCTCAGTAGCGATGCAATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATC

GGAATCATTTATGCTGGTAATGATGGCACATGGTACGCGAGCTGGGTGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAA

ACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATCACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAG

AGCACATTACGATGATTATGATTATTCTTATGGTGCATTTAACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCATC

TCTTCAGGGCAACCTAAGGCTCCATCAGTCTTCCCACTGGCCCCCTGCTGCGGGGACACACCCAGCTCCAC

GGTGACCCTGGGCTGCCTGGTCAAAGGCTACCTCCCGGAGCCAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGCACC

CTCACCAATGGGGTACGCACCTTCCCGTCCATCCGGCAGTCCTCAGGCCTCTACTCGCTGAGCAGCGTGGT

GAGCGTGACCTCAAGCAGCCAGCCCGTCACCTGCAACGTGGCCCACCCAGCCACCAACACCAAAGTGGAC

AAGACCGTTGCGCCCTCGACATGCAGCAAGCCCATGTGCCCACCCCCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCTGT

CTTCATCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCACGCACCCCCGAGGTCACATGCGTGGTGG

TGGACGTGAGCCAGGATGACCCCGAGGTGCAGTTCACATGGTACATAAACAACGAGCAGGTGCGCACCGC

CCGGCCGCCGCTACGGGAGCAGCAGTTCAACAGCACGATCCGCGTGGTCAGCACCCTCCCCATCGCGCAC

CAGGACTGGCTGAGGGGCAAGGAGTTCAAGTGCAAAGTCCACAACAAGGCACTCCCGGCCCCCATCGAG

AAAACCATCTCCAAAGCCAGAGGGCAGCCCCTGGAGCCGAAGGTCTACACCATGGGCCCTCCCCGGGAGG

AGCTGAGCAGCAGGTCGGTCAGCCTGACCTGCATGATCAACGGCTTCTACCCTTCCGACATCTCGGTGGAG

TGGGAGAAGAACGGGAAGGCAGAGGACAACTACAAGACCACGCCGACCGTGCTGGACAGCGACGGCTCC

TACTTCCTCTACAGCAAGCTCTCAGTGCCCACGAGTGAGTGGCAGCGGGGCGACGTCTTCACCTGCTCCGT

GATGCACGAGGCCTTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCCATCTCCCGCTCTCCGGGTAAATAG

上述载体表达出的抗体中的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列如下：

轻链可变区(氨基酸序列)：

FS003-4C7轻链可变区(SEQ ID NO:23)

下划线斜体部分分别依次标示

/>

FS003-11A1轻链可变区(SEQ ID NO:27)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-16E1轻链可变区(SEQ ID NO:31)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-21F12轻链可变区(SEQ ID NO:35)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-28H12轻链可变区(SEQ ID NO:39)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-30B10轻链可变区(SEQ ID NO:43)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-47E3轻链可变区(SEQ ID NO:47)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-47F2轻链可变区(SEQ ID NO:51)

/>

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-56D1轻链可变区(SEQ ID NO:55)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-57D6轻链可变区(SEQ ID NO:59)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-72A12轻链可变区(SEQ ID NO:63)

下划线斜体部分分别依次标示

重链可变区(氨基酸序列)：

FS003-4C7重链可变区(SEQ ID NO:67)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-11A1重链可变区(SEQ ID NO:71)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-16E1重链可变区(SEQ ID NO:75)

下划线斜体部分分别依次标示

/>

FS003-21F12重链可变区(SEQ ID NO:79)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-28H12重链可变区(SEQ ID NO:83)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-30B10重链可变区(SEQ ID NO:87)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-47E3重链可变区(SEQ ID NO:91)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-47F2重链可变区(SEQ ID NO:95)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-56D1重链可变区(SEQ ID NO:99)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-57D6重链可变区(SEQ ID NO:103)

下划线斜体部分分别依次标示

FS003-72A12重链可变区(SEQ ID NO:107)

下划线斜体部分分别依次标示

抗体的轻链的全长氨基酸序列如下(下划线部分对应恒定区序列)：

FS003-4C7轻链(SEQ ID NO:111)

QVLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASQSLYDEKNLAWYQQKPGQPPKLLIYDASDLASGVPSRFKGSGSGT

QFILTISGVQCDDAASYYCQGEFDCSSGDCSVFGGGTEVVVEGDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVA

NKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSF

NRGDC

FS003-11A1轻链(SEQ ID NO:112)

AVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVYGDNRLSWYQQKPGQPPKLLIYLASKLATGVPSRFSGSGSGTQ

FTLTISGVQCADAATYYCVGAYFGEATFGGGTEVVVKGDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFP

DVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRG DCFS003-16E1轻链(SEQ ID NO:113)

IDMTQTPSSVSAAVGGTVTIKCQSSQSVYNNNLLAWYQQKAGQPPNLLIYYASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCLGGYDDDSDTVFGGGTEVVVKGDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDV TVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC

FS003-21F12轻链(SEQ ID NO:114)

AIEMTQSPPSLSASVGESVRIRCLASENVYSDIYWYQQKPGKPPTLLLYGASNLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGYSYTTIGLTFGAGTKVEIKGDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDV TVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC

FS003-28H12轻链(SEQ ID NO:115)

AIEMTQSPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPGKPPTLLIYGGSHLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDVATYYCLGGWAYSSSGYAFGAGTKVEIKGDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDV TVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC

FS003-30B10轻链(SEQ ID NO:116)

QVLTQTPSSVSEPVGGTVTINCQASEFLYKSLAWYQQKPGQPPKLLIYDASDLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVQCDDAATYYCQSYVYRSIVYTFGGGTEVVVKGDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVTV TWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC

FS003-47E3轻链(SEQ ID NO:117)

AFELTQTPSSVSEPVGGTVTIKCQASEFLYKSLAWYQQKPGQPPKLLIYDASDLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVQCDDAATYYCQSYVYRSIVYTFGGGTEVVVKGDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVT VTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC

FS003-47F2轻链(SEQ ID NO:118)

DIVLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASQSVRNLLSWYQQKPGQPPKLLIYGASNLESGVPSRFRGSGSGTEYTLTISGMKAEDAATYYCHGGAYDTGVTFGAGTKVEIKGDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVTV TWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC

FS003-56D1轻链(SEQ ID NO:119)

QVLTQTPSSVSEPVGGTVTINCQASEFLYKSLAWYQQKPGQPPKLLIYDASDLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVQCDDAATYYCQSYLYRSYVYTFGGGTEVVVKGDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVTV TWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC

FS003-57D6轻链(SEQ ID NO:120)

ADVVMTQTPASVEAAVGGTVTIKCQASESIGKPLAWYQQKPGQPPNLLIYRTSNLASGVSSRFKGSRSGTEYTLTISDLECADAATYYCQSYSLININTDTFNTFGGGTEVVVKGDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKY FPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC

FS003-72A12轻链(SEQ ID NO:121)

QVLTQTPSSVSAAVGGTVTVNCQASQSLYNKKNLAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLESGVPSRFSGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCQGEFDCSSGDCNVFGGGTEVVVKGDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFP DVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC

抗体的重链的全长氨基酸序列如下(下划线部分对应恒定区序列)：

FS003-4C7重链(SEQ ID NO:122)

QSLEESGGRLVTPGGPLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGEGLEWIGTITVSRNTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLRITSPTTEDTATYFCARSLSSYYYAFNIWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVK GYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSIRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPMCPP PELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPI AHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNG KAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK

FS003-11A1重链(SEQ ID NO:123)

QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDLSSFAINWVRQAPGKGLGWIGWIGTDGDTYYASWTKGRFTMSKTSSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARDSHSGGGAYDIWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLV KGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSIRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPMCP PPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLP IAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKN GKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK

FS003-16E1重链(SEQ ID NO:124)

QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSVYAMGWVRQAPGEGLEYIGIIDPSGSAYYANWAKGRFTISKPSSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARGVGFADGSDIWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVK GYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSIRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPMCPP PELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPI AHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNG KAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK

FS003-21F12重链(SEQ ID NO:125)

QSLEESGGDLVTPAGTLTLTCTASGSDLSNYAISWVRQAPGKGLEYIGYISYGGSAHYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCAGDLGHDEYGDYIILTIWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTL GCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSIRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSK PMCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVV STLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVE WEKNGKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK

FS003-28H12重链(SEQ ID NO:126)

QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSNYIVMWVRQAPGKGLEWIGSVSSPGTTYYTSWAKGRFTISKTSSTTVDLKITSPTIEDTATYFCARDDAYDEYADYEIINFWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTL GCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSIRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSK PMCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVV STLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVE WEKNGKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK

FS003-30B10重链(SEQ ID NO:127)

QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSDYGMGWVRQAPGKGLEWIGIISSGNSASYASWAKGRFTISKTSTTVELKVTSPTTEDTATYFCAREVYDDYGDSLGAFDPWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLG CLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSIRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKP MCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVS TLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEW EKNGKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK

FS003-47E3重链(SEQ ID NO:128)

FS003-47F2重链(SEQ ID NO:129)

QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDLSSYSVAWVRQAPGKGLEYIGIISVSTRTYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCAGEGDDDYGDYFFSAFDSWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVT LGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSIRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCS KPMCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRV VSTLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISV EWEKNGKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK

FS003-56D1重链(SEQ ID NO:130)

QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSDYGMGWVRQAPGEGLEWIGTISTGGSIYYANWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCAREVYDDYGDSLGAFDPWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLG CLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSIRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKP MCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVS TLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEW EKNGKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK

FS003-57D6重链(SEQ ID NO:131)

QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYHMSWVRQAPGKGLEWIGVISNTDNTYYASWTKGRFTISKTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARVYDGFSCGDIWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKG YLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSIRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPMCPPP ELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIA HQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGK AEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK

FS003-72A12重链(SEQ ID NO:132)

QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCILSGIDLSSDAMTWVRQAPGKGLEWIGIIYAGNDGTWYASWVKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARAHYDDYDYSYGAFNIWGPGTLVTISSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTL GCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSIRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSK PMCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVV STLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVE WEKNGKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK

前述抗体的轻链和重链的恒定区的氨基酸序列如下：

轻链恒定区(SEQ ID NO:133)

GDPVAPTVLIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC

重链恒定区(SEQ ID NO:134)

GQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSIRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPMCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK

在抗体制备中使用的信号肽的序列如下：

轻链信号肽编码序列(SEQ ID NO:135)

ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCC

重链信号肽编码序列(SEQ ID NO:136)

ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGT

轻链信号肽氨基酸序列(SEQ ID NO:137)

MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFA

重链信号肽氨基酸序列(SEQ ID NO:138)

METGLRWLLLVAVLKGVQC

抗体中的信号肽序列在表达此抗体的质粒转染到细胞中表达并随后被分泌到上清液的过程中被切除。

表6：前述抗体的重链、轻链、恒定区、可变区，各个CDR的序列编号总结如下(SEQID NO:)

2.抗体的表达和纯化、以及SDS-PAGE鉴定

运用ExpiCHO-s表达系统，将上述质粒按照要求进行在CHO细胞中为期7天的表达，并在表达第6天，使用Protein A亲和层析纯化得到抗体。

随后，通过SDS-PAGE检测所得抗体的纯度。在SDS-PAGE中，用ImageJ按照峰面积归一法计算还原条带纯度，或者还原重链加轻链和的纯度；参照品IPI非还原条带分子量150kDa左右，纯度大于90％；还原重链分子量55kDa左右，轻链分子量25kDa左右，重链加轻链纯度大于90％。

实施例3-通过ELISA方法评估抗CXCL4抗体在蛋白水平上对CXCL4的结合特异性以及对CXCL4蛋白的亲和力

采用以下方法测定CXCL4抗体在蛋白水平上与CXCL4蛋白的特异性和亲和力，包括用1ug/mL CXCL4-hFc、人总IgG(Total Human IgG)、人IgG1(Human IgG1)、人IgG4(HumanIgG4)、CXCL4-His，或His标记的无关蛋白包被ELISA板。用PBST清洗板3次，并在室温下用5％ PBS-Milk封闭板2小时。用PBST清洗板3次，然后在ELISA板中加入稀释的抗体(1ug/ml)，每孔30μL，在室温下放置60分钟。用PBST清洗板3次，然后在ELISA板中加入抗兔IgG-Fc-HRP(Boster；BA1061)，在室温下放置60分钟。加入TMB并用2M终止液终止反应并读取OD450。最终通过OD450读数来确定抗体对CXCL4的结合特异性来比较各个抗体对CXCL4的结合能力。测定的结果数据显示在下表7中。

表7：抗CXCL4抗体在同一浓度下对不同蛋白的结合能力(ELISA OD450读数)

如上表所示的结果，11个待检测抗体中与CXCL4-hFc蛋白和CXCL4-His均有较高的结合能力，但是都不与他们的标签对照Human IgG Fc或者His结合。结果显示待检测抗体和CXCL4的结合均具有特异性。

下表为亲和力测定的结果。

表8：抗CXCL4抗体对CXCL4的亲和力测定

如上表所示的结果，11个待检测抗体中与CXCL4-hFc蛋白均有较好的亲和力(EC50＜30pM)。

实施例4–双抗体夹心法ELISA测试不同的本发明的抗CXCL4抗体配对检测CXCL4抗原

采用以下方法测定CXCL4抗体对在蛋白水平上与CXCL4蛋白的结合线性关系，包括用未标记的抗CXCL4抗体包被ELISA板。用PBST清洗板3次，并在室温下用5％ PBS-Milk封闭板2小时。用PBST清洗板3次，然后在ELISA板中加入稀释的不同浓度的CXCL4-hFc抗原，在室温下放置60分钟。用PBST清洗板3次，然后在ELISA板中加入带有生物素标记的抗CXCL4检测抗体，在室温下放置60分钟。用PBST清洗板3次，最后在ELISA板中加入NeutrAvidin-HRP(Thermo,31001)，在室温下放置60分钟。加入TMB并用2M终止液终止反应并读取OD450数值。最终通过读数来确定不同抗CXCL4抗体配对和CXCL4抗原浓度之间的线性关联。测定的结果数据显示在下表9中。

表9：利用4个抗原浓度梯度初步筛选适用于ELISA检测的抗CXCL4抗体对

/>

根据以上结果，进一步从中挑选5对线性范围较好的抗体对用于进一步的ELISA验证。具体抗体配对以及ELISA数据参见下表10，测定OD450数值。在本发明实施例中，抗体配对中的术语“包被抗体”也可以被称作“捕获抗体”。

表10：利用12个抗原浓度梯度进一步验证适用于ELISA检测的5对抗CXCL4抗体配对

表11：最终确认的ELISA检测中的5个抗CXCL4抗体配对的信息及其灵敏度

实施例5–化学发光试剂盒的制备和CXCL4抗原的的检测

进一步采用以上实施例得到的5个抗CXCL4抗体配对制备化学发光检测试剂盒。用于通过化学发光法来检测CXCL4蛋白的表达水平的试剂盒包括磁微粒试剂、抗试剂A、抗试剂B、校准品、和质控品。

抗试剂A通过以下方法制备：

(1)异硫氰酸荧光素与CXCL4特异性抗体的偶联：异硫氰酸荧光素用Tris缓冲液配制浓度为1.0～5.0mg/mL，再按体积比1：100～1：10000对异硫氰酸荧光素进行稀释，得稀释液，将CXCL4特异性抗体，按摩尔比1:2～1:10的比例加入稀释液，20℃±5℃下混匀1～2h；

(2)异硫氰酸荧光素与CXCL4特异性抗体偶联物的纯化：pH＝8～9的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，将得到的异硫氰酸荧光素标记的CXCL4特异性抗体偶联物加入到抗试剂缓冲液中制得抗试剂A。

抗试剂B通过以下方法制备：

(1)碱性磷酸酶与CXCL4配对抗体的偶联：碱性磷酸酶用pH7～8的磷酸盐缓冲液配制浓度为1.0～5.0mg/mL，得碱性磷酸酶溶液，将CXCL4配对抗体，按摩尔比1：2～1：10的加入碱性磷酸酶溶液，20℃±5℃条件下混匀4～5h；得碱性磷酸酶与CXCL4配对抗体偶联物；

(2)碱性磷酸酶与CXCL4配对抗体偶联物的纯化，pH＝8～9的碳酸氢盐缓冲液进行洗脱，分部收集洗脱液，将得到的碱性磷酸酶标记的CXCL4配对抗体偶联物加入抗试剂缓冲液中制得抗试剂B。

磁微粒试剂通过以下方法制备：

(1)将羧基磁珠浓缩液充分混匀；取出羧基磁珠置于磁场强度为3800mT的磁场中，15min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清；加入羧基磁珠体积5倍的磷酸缓冲液，混匀20～30min；再置于磁场强度为3800mT的磁场中待磁珠全部沉降15min后吸去上清；重复清洗步骤3遍充分清洗羧基磁珠；

(2)将羧基磁珠溶液定容到10-50mg/mL；按照羧基磁珠：羊抗异硫氰酸荧光素抗体质量比为100：1加入羊抗异硫氰酸荧光素抗体，保持混匀状态下2～8℃反应18h；

(3)封闭：加入0.5～2M Tris溶液、5％～12％牛血清白蛋白、7％～15％酪蛋白溶液以及1～10g鱼皮凝胶的混合封闭液，20℃±5℃条件下混匀3～4h，使用磷酸缓冲液清洗3遍；用磁微粒缓冲液定容至10～20mg/mL的浓缩磁微粒试剂；2～8℃保存待用；

(4)使用时用磁微粒缓冲液配制成浓度为1～2mg/mL的磁微粒试剂。

校准品和质控品为分别添加了不同量的CXCL4抗原的缓冲液。

在上述方法中，分别采用不同的5种抗体配对，其中抗试剂A对应捕获抗体，抗试剂B对应检测抗体。具体采用的抗体配对如下表12：

抗体配对方式	包被抗体	检测抗体
			第一种抗体配对	FS003-11A1-FITC	FS003-47E3-碱性磷酸酶
第二种抗体配对	FS003-11A1-FITC	FS003-30B10-碱性磷酸酶
			第三种抗体配对	FS003-11A1-FITC	FS003-72A12-碱性磷酸酶
第四种抗体配对	FS003-11A1-FITC	FS003-28H12-碱性磷酸酶
			第五种抗体配对	FS003-4C7-FITC	FS003-11A1-碱性磷酸酶

上述方法中所用的缓冲液如下：

表13-校准品、质控品缓冲液：

试剂名称	生产商	浓度	1L缓冲液用量
				Tris	Sigma	0.1M	12.12g
氯化钠	Sigma	0.9％	9g
				牛血清白蛋白	Proliant	2％	20g
四环素	Sigma	0.01％	10mg
				硫酸新霉素	Sigma	0.01％	10mg
4M盐酸	Sigma	适量	调节pH到7.5±0.1

表14-抗试剂(Tris)缓冲液：

试剂名称	生产商	浓度	1L缓冲液用量
				Tris	Sigma	0.1M	12.12g
氯化钠	Sigma	0.9％	9g
				牛血清白蛋白	Proliant	1％	10g
四环素	Sigma	0.01％	10mg
				硫酸新霉素	Sigma	0.01％	10mg
4M盐酸	Sigma	适量	调节pH到8±0.1

表15-磁微粒(Tris)缓冲液：

试剂名称	生产商	浓度	1L缓冲液用量
				Tris	Sigma	0.1M	12.12g
氯化钠	Sigma	0.9％	9g
				牛血清白蛋白	Proliant	1％	10g
甲基纤维素	Sigma	5％	50g
				4M盐酸	Sigma	适量	调节pH到8±0.1

表16-发光底物(Tris)缓冲液

试剂名称	生产商	浓度	1L缓冲液用量
				Tris	Sigma	0.1M	12.12g
氯化钠	Sigma	0.9％	9g
				光泽精	Sigma	0.3％	30mg
SDS	Sigma	1％	10g

表17-(浓缩)清洗液的配制，按以下配方配制：

进一步，使用前述制备的试剂盒，对采集自中国某省会城市的精神病防治医院的健康人和抑郁障碍患者血浆样本(共98例)进行测定。结果显示，健康人群样品CXCL4平均浓度约1300ng/ml，而抑郁障碍人群样品CXCL4平均浓度为约2400ng/ml，二者浓度存在明显差异(p<0.0001)。进一步计算显示，当使用1800ng/ml的CXCL4血浆蛋白浓度作为诊断健康和抑郁障碍分界线的时，此试剂盒的特异性高达92.5％，灵敏性高达93.3％，准确度高达92.8％。技术方案集合：

技术方案组A–本发明的抗体及抗体组合

A1.一种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分包含含有HCDR1、HCDR2、HCDR3序列的重链可变区；以及含有LCDR1、LCDR2、LCDR3序列的轻链可变区，其中所述抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链可变区和轻链可变区：

A2.根据技术方案A1所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分包含具有选自以下至少一组的重链可变区和轻链可变区：

A3.根据技术方案A1或A2所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分进一步包含重链恒定区和/或轻链恒定区，

A4.根据技术方案A1-A3中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分包含具有选自以下至少一组的重链和轻链：

A5.根据技术方案A1-A4中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分由选自以下至少一组的重链和轻链组成：

A6.一种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

A7.根据技术方案A6所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

A8.一种针对CXCL4蛋白的抗体组合物，包含至少两种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，

A9.技术方案A1-A7中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分，

其中所述抗体能够以小于30pM的EC50在体外结合CXCL4蛋白；

和/或其中所述抗体是单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、或人源化抗体。

A10.一种分离的核酸分子，其编码技术方案A1-A7中任一项的抗体或其抗原结合片段部分；或者

A11.技术方案A10的分离的核酸分子，所述核酸分子与表达调控序列可操作地连接。

A12.一种表达载体，其包含技术方案A10或A11的核酸分子。

A13.一种宿主细胞，其包含技术方案A10或A11的核酸分子或技术方案A12的表达载体。

A14.一种杂交瘤细胞，其表达技术方案A1-A7中任一项的抗体或其抗原结合片段部分。

A15.一种生产靶向表达CXCL4的人肿瘤细胞的抗体或其抗原结合片段部分的方法，包括：

(i)表达根据技术方案A10或A11的核酸分子，和

技术方案组B–包含本发明的抗体及抗体组合的诊断试剂盒、试纸条和试纸卡

B1.一种用于诊断抑郁障碍的试剂盒、试纸条或试纸卡，包括用于检测来自受试者的样品中CXCL4蛋白的表达水平的抗体，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，所述抗体选自技术方案组A中技术方案A1-A7中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为技术方案A8的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，所述试剂盒、试纸条或试纸卡还包括指示CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍的使用说明或插页。

B2.一种用于诊断抑郁障碍的试剂盒、试纸条或试纸卡，其中所述试剂盒、试纸条或试纸卡包括用于接收来自受试者的样品的部分；和包被有能够特异性结合CXCL4蛋白的抗体的部分，所述抗体选自技术方案组A中技术方案A1-A7中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为技术方案A8的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍。

B3.一种用于检测CXCL4蛋白的表达水平的试剂盒、试纸条或试纸卡，包括用于检测来自受试者的样品中CXCL4蛋白的表达水平的抗体，所述抗体选自技术方案组A中技术方案A1-A7中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为技术方案A8的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，所述试剂盒、试纸条或试纸卡还包括指示CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍的使用说明或插页。

B3.如技术方案B1-B2中任一项所述的试剂盒、试纸条或试纸卡，其中所述受试者是通过先行诊断标准已初步确诊的抑郁障碍，需要在分子层面进行进一步确诊的受试者，例如人；或者

其中所述受试者是大量随机人群，所述人群中可能包括抑郁障碍的人。

B4.如技术方案B1-B3中任一项所述的试剂盒、试纸条或试纸卡，其中所述样品为血液样品，优选所述样品是血浆或血清样品。

B5.如技术方案B1-B4中任一项所述的试剂盒、试纸条或试纸卡，其中所述参考值是来自健康受试者的样品或来自标准样品中的CXCL4蛋白的表达水平。

B6.如技术方案B1-B5中任一项所述的试剂盒、试纸条或试纸卡，其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过选自以下的方法确定：免疫测定，包括竞争性免疫测定、非竞争性免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫组织化学测定、化学发光测定、Western测定印迹和Dot印迹测定；质谱测定。

B7.如技术方案B1-B6中任一项所述的试剂盒、试纸条或试纸卡，其中所述针对CXCL4蛋白的抗体可进一步被修饰以带有可检测的标记；优选地，所述针对CXCL4蛋白的抗体可进一步被修饰以带有可检测的标记，例如可以被化学发光方法检测的标记。

B8.如技术方案B1-B7中任一项所述的试剂盒、试纸条或试纸卡，其中所述受试者为通过现行精神障碍诊断和分类系统难以对抑郁障碍进行诊断的受试者；可选地，所述现行精神障碍诊断和分类系统为：基于美国精神医学协会的DSM的系统(例如DSM IV或DSMV)、基于世界卫生组织的ICD的系统(例如ICD-10或ICD-11)、和/或基于中国的CCMD(例如CCMD-3)的系统。

B9.如技术方案B1-B8中任一项所述的试剂盒、试纸条或试纸卡，其中所述试剂盒、试纸条或试纸卡可用于化学发光方法检测。

B10.如技术方案B1-B9中任一项所述的试剂盒、试纸条或试纸卡，其中所述试剂盒、试纸条或试纸卡可匹配全自动化学发光检测仪器或自动化/数字化检测平台使用。

技术方案组C–本发明的抗体及抗体组合的诊断方法

C1.一种用于诊断抑郁障碍的方法，包括确定来自受试者的样品中的CXCL4蛋白的表达水平并与参考值相比较，其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过抗体来进行测定，所述抗体选自技术方案组A中技术方案A1-A7中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为技术方案A8的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍。

C2.一种体外检测生物标记物的表达水平的方法，包括：(a)收集来自受试者的样品，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，(b)测定所述样品中的CXCL4蛋白的表达水平并与参考值相比较，其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过抗体来进行测定，所述抗体选自技术方案组A中技术方案A1-A7中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为技术方案A8的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍。

C3.一种用于确定受试者患有抑郁障碍的可能性的方法，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述方法包括确定来自受试者的样品中的CXCL4蛋白的表达水平并与参考值相比较，其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过抗体来进行测定，所述抗体选自技术方案组A中技术方案A1-A7中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为技术方案A8的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍的可能性高。

C4.如技术方案C1-C3中任一项所述的方法，其中所述受试者是通过先行诊断标准已初步确诊的抑郁障碍，需要在分子层面进行进一步确诊的受试者，例如人；或者

C5.如技术方案C1-C4中任一项所述的方法，其中所述样品为血液样品，优选所述样品是血浆或血清样品。

C6.如技术方案C1-C5中任一项所述的方法，其中所述参考值是来自健康受试者的样品或来自标准样品中的CXCL4蛋白的表达水平。

C7.如技术方案C1-C6中任一项所述的方法，其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过选自以下的方法确定：免疫测定，包括竞争性免疫测定、非竞争性免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫组织化学测定、化学发光测定、Western测定印迹和Dot印迹测定；质谱测定；优选地，所述CXCL4蛋白的表达水平通过化学发光测定。

C8.如技术方案C1-C7中任一项所述的方法，其中所述针对CXCL4蛋白的抗体可进一步被修饰以带有可检测的标记；优选地，所述针对CXCL4蛋白的抗体可进一步被修饰以带有可检测的标记，例如可以被化学发光方法检测的标记。

C9.如技术方案C1-C8中任一项所述的方法，其中所述受试者为通过现行精神障碍诊断和分类系统难以对抑郁障碍进行诊断的受试者；可选地，所述现行精神障碍诊断和分类系统为：基于美国精神医学协会的DSM的系统(例如DSM IV或DSM V)、基于世界卫生组织的ICD的系统(例如ICD-10或ICD-11)、和/或基于中国的CCMD(例如CCMD-3)的系统。

C10.如技术方案C1-C9中任一项所述的方法，其中方法通过全自动化学发光检测仪器或自动化/数字化检测平台来进行。

技术方案组D–本发明的抗体及抗体组合的诊断用途

D1.用于检测来自受试者的样品中CXCL4蛋白的表达水平的抗体在制备用于诊断抑郁障碍的试纸条、试纸卡和/或试剂盒中的用途，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述抗体选自技术方案组A中技术方案A1-A7中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为技术方案A8的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍。

D2.如技术方案D1所述的用途，其中所述受试者是通过先行诊断标准已初步确诊的抑郁障碍，需要在分子层面进行进一步确诊的受试者，例如人；或者

D3.如技术方案D1-D2中任一项所述的用途，其中所述样品为血液样品，优选所述样品是血浆或血清样品。

D4.如技术方案D1-D3中任一项所述的用途，其中所述参考值是来自健康受试者的样品或来自标准样品中的CXCL4蛋白的表达水平。

D5.如技术方案D1-D4中任一项所述的用途，其中所述CXCL4蛋白的表达水平通过选自以下的方法确定：免疫测定，包括竞争性免疫测定、非竞争性免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫组织化学测定、化学发光测定、Western测定印迹和Dot印迹测定；质谱测定。

D6.如技术方案D1-D5中任一项所述的用途，其中所述针对CXCL4蛋白的抗体可进一步被修饰以带有可检测的标记；优选地，所述针对CXCL4蛋白的抗体可进一步被修饰以带有可检测的标记，例如可以被化学发光方法检测的标记。

D7.如技术方案D1-D6中任一项所述的用途，其中所述受试者为通过现行精神障碍诊断和分类系统难以对抑郁障碍进行诊断的受试者；可选地，所述现行精神障碍诊断和分类系统为：基于美国精神医学协会的DSM的系统(例如DSM IV或DSM V)、基于世界卫生组织的ICD的系统(例如ICD-10或ICD-11)、和/或基于中国的CCMD(例如CCMD-3)的系统。

D8.如技术方案D1-D7中任一项所述的用途，其中所述试剂盒、试纸条或试纸卡可用于化学发光方法检测。

D9.如技术方案D1-D8中任一项所述的用途，其中所述试剂盒、试纸条或试纸卡可匹配全自动化学发光检测仪器或自动化/数字化检测平台使用。

技术方案组E–免疫测定组合物

E1.免疫测定组合物，所述组合物包含来自受试者的样品中的CXCL4蛋白和有效量的用于检测所述CXCL4蛋白的表达水平的抗体(优选结合伴侣)，和/或包含由来自受试者的样品中的CXCL4蛋白和有效量的用于检测所述CXCL4蛋白的表达水平的抗体(优选结合伴侣)所形成的结合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述抗体选自技术方案组A中技术方案A1-A7中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为技术方案A8的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中检测到所述免疫测定组合物中所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍。

E2.包含免疫测定组合物的容器，所述免疫测定组合物包含来自受试者的样品中的CXCL4蛋白和有效量的用于检测所述CXCL4蛋白的表达水平的抗体(优选结合伴侣)，和/或包含由来自受试者的样品中的CXCL4蛋白和有效量的用于检测所述CXCL4蛋白的表达水平的抗体(优选结合伴侣)所形成的结合物，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述抗体选自技术方案组A中技术方案A1-A7中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为技术方案A8的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，其中检测到所述容器中的所述免疫测定组合物中所述生物标记物的表达水平与参考值相比升高提示所述受试者患有抑郁障碍。

E3.如技术方案E1所述的组合物或如技术方案E2所述的容器，其中所述受试者是通过先行诊断标准已初步确诊的抑郁障碍，需要在分子层面进行进一步确诊的受试者，例如人；或者

E4.如技术方案E1所述的组合物或如技术方案E2所述的容器或如技术方案E3所述的组合物或容器，其中所述样品为血液样品，优选所述样品是血浆或血清样品。

E5.如技术方案E1或E3-E4所述的组合物或如技术方案E2或E3-E4所述的容器，其中所述参考值是来自健康受试者的样品或来自标准样品中的CXCL4蛋白的表达水平。

E6.如技术方案E1、E3-E5任一项所述的组合物或如技术方案E2-E5任一项所述的容器，其中所述生物标记物的表达水平通过选自以下的方法确定：免疫测定，包括竞争性免疫测定、非竞争性免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫组织化学测定、化学发光测定、Western测定印迹和Dot印迹测定；质谱测定。

E7.如技术方案E1、E3-E6任一项所述的组合物或如技术方案E2-E6任一项所述的容器，其中所述抗体或结合伴侣选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、人源化抗体、骆驼抗体、嵌合抗体。

E8.如技术方案E1、E3-E7任一项所述的组合物或如技术方案E2-E7任一项所述的容器，其中所述抗体或结合伴侣可进一步被修饰以带有可检测的标记；可选地，所述抗体或结合伴侣可进一步被修饰以带有可检测的标记，例如可以被化学发光方法检测的标记。

E9.如技术方案E1、E3-E8任一项所述的组合物或如技术方案E2-E8任一项所述的容器，其中所述受试者为通过现行精神障碍诊断和分类系统难以对抑郁障碍进行诊断的受试者；可选地，所述现行精神障碍诊断和分类系统为：基于美国精神医学协会的DSM的系统(例如DSM IV或DSM V)、基于世界卫生组织的ICD的系统(例如ICD-10或ICD-11)、和/或基于中国的CCMD(例如CCMD-3)的系统。

E10.如技术方案E1、E3-E9任一项所述的组合物或如技术方案E2-E9任一项所述的容器，其中所述容器可以为试管、孔、小瓶等的形式。

技术方案组F–CXCL4蛋白化学发光检测试剂盒

F1.一种用于检测CXCL4蛋白含量的化学发光检测试剂盒，或者一种用于诊断抑郁障碍的化学发光检测试剂盒，或者一种用于体外检测CXCL4蛋白的表达水平的化学发光检测试剂盒，或者一种用于确定受试者患有抑郁障碍的可能性的化学发光检测试剂盒，所述试剂盒包括磁微粒试剂、抗试剂A、抗试剂B和可任选存在的试剂C，

其中所述磁微粒试剂为可检测的标记X缀合的磁微粒，所述抗试剂A为可检测的标记Y缀合的CXCL4特异性抗体，所述抗试剂B为可检测的标记Z缀合的CXCL4配对抗体，所述抗试剂C为可检测的标记W和V的缀合物，

其中所述CXCL4特异性抗体具有选自以下至少一组的重链和轻链：

其中所述CXCL4配对抗体具有选自以下4种抗体中的一种：

(1)所述CXCL4配对抗体具有选自以下至少一组的重链和轻链：

(2)所述CXCL4配对抗体具有选自以下至少一组的重链和轻链：

(3)所述CXCL4配对抗体具有选自以下至少一组的重链和轻链：

(4)所述CXCL4配对抗体具有选自以下至少一组的重链和轻链：

所述重链，其由SEQ ID NO：132的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ IDNO：121的氨基酸序列组成；

或者

其中所述CXCL4配对抗体具有选自以下至少一组的重链和轻链：

所述重链，其包含SEQ ID NO：123的氨基酸序列或与SEQ ID NO：123的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列，以及所述轻链，其包含SEQ ID NO：112的氨基酸序列或与SEQ ID NO：112的氨基酸序列至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同性的氨基酸序列。

F2.如技术方案F1所述的试剂盒，其中所述可检测的标记X缀合的磁微粒、所述可检测的标记Y缀合的CXCL4特异性抗体和可检测的标记Z缀合的CXCL4配对抗体选自以下组合：

-抗异硫氰酸荧光素的抗体缀合的磁微粒、异硫氰酸荧光素缀合的CXCL4特异性抗体和吖啶酯缀合的CXCL4配对抗体；和

F3.如技术方案F1或F2所述的试剂盒，其中所述可检测的标记X缀合的磁微粒为羊抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁微粒，所述可检测的标记Y缀合的CXCL4特异性抗体为异硫氰酸荧光素标记的CXCL4特异性抗体，所述可检测的标记Z缀合的CXCL4配对抗体为碱性磷酸酶标记的CXCL4配对抗体。

F4.如技术方案F1所述的试剂盒，其中所述可检测的标记X缀合的磁微粒为羊抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁微粒，所述可检测的标记Y缀合的CXCL4特异性抗体为异硫氰酸荧光素标记的CXCL4特异性抗体，所述可检测的标记Z缀合的CXCL4配对抗体为生物素标记的CXCL4配对抗体，且所述可检测的标记W和V的缀合物为碱性磷酸酶与链霉亲和素的偶联物。

F5.如技术方案F1-F4中任一项所述的试剂盒，其中所述磁微粒试剂、所述抗试剂A、所述抗试剂B和所述抗试剂C分别存在于Tris缓冲液中。

F6.如技术方案F5所述的试剂盒，其中

所述磁微粒试剂的Tris缓冲液包括：0.1M的Tris、0.9％的氯化钠、1％的牛血清白蛋白、5％的甲基纤维素、和适量的4M盐酸(pH到8±0.1)；且

所述抗试剂A、抗试剂B和抗试剂C的Tris缓冲液包括：0.1M的Tris、0.9％的氯化钠、1％的牛血清白蛋白、0.01％的四环素、0.01％的硫酸新霉素、和适量的4M盐酸(pH到8±0.1)。

F7.如技术方案F1-F6中任一项所述的试剂盒，所述试剂盒进一步包括校准品和/或质控品；或者所述校准品和/或质控品可以分离的形式独立置于另外的试剂盒中，其中所述校准品和所述质控品为分别添加了不同量的CXCL4抗原的缓冲液。

F8.如技术方案F1-F7中任一项所述的试剂盒，所述试剂盒进一步包括底物；或者所述底物可以分离的形式独立置于另外的试剂盒中，其中所述底物为发光底物(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐，APS-5。

F9.如技术方案F8所述的试剂盒，其中所述校准品和所述质控品分别存在于Tris缓冲液中，校准品和所述质控品的缓冲液包括：0.1M的Tris、0.9％的氯化钠、2％的牛血清白蛋白、0.01％的四环素、0.01％的硫酸新霉素、和适量的4M盐酸(pH到7.5±0.1)。

F10.如技术方案F1-F9中任一项所述的试剂盒，所述试剂盒可匹配全自动化学发光检测仪器或自动化/数字化检测平台使用。

F11.如技术方案F1-F10中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒所针对的受试者为通过现行精神障碍诊断和分类系统难以对抑郁障碍进行诊断的受试者；可选地，所述现行精神障碍诊断和分类系统为：基于美国精神医学协会的DSM的系统(例如DSM IV或DSMV)、基于世界卫生组织的ICD的系统(例如ICD-10或ICD-11)、和/或基于中国的CCMD(例如CCMD-3)的系统。

Claims

1.一种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述抗原结合片段部分选自以下一种：Fab、Fab'、F(ab’)₂、scFv和dsFv，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分包含含有HCDR1、HCDR2、HCDR3序列的重链可变区；以及含有LCDR1、LCDR2、LCDR3序列的轻链可变区，其中所述抗体或其抗原结合片段部分具有选自的重链可变区和轻链可变区：

所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：72的HCDR1，(b)SEQ ID NO：73的HCDR2，和(c)SEQID NO：74的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：28的LCDR1，(e)SEQ ID NO：29的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：30的LCDR3。

2.根据权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分包含具有以下的重链可变区和轻链可变区：

所述重链可变区，其由SEQ ID NO：71的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：27的氨基酸序列组成。

3.根据权利要求2所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分进一步包含重链恒定区和/或轻链恒定区，

所述重链恒定区由SEQ ID NO：134的氨基酸序列组成，且

所述轻链恒定区由SEQ ID NO：133的氨基酸序列组成。

4.根据权利要求3所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分由以下的重链和轻链组成：

所述重链，其由SEQ ID NO：123的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ ID NO：112的氨基酸序列组成。

5.一种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述抗原结合片段部分选自以下一种：Fab、Fab'、F(ab’)₂、scFv和dsFv，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分具有以下的重链和轻链可变区：

所述重链可变区由SEQ ID NO：142的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链可变区由SEQ ID NO：141的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成。

6.根据权利要求5所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分，其中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段部分具有以下的重链和轻链：

所述重链由SEQ ID NO：4的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成，且

所述轻链由SEQ ID NO：3的核苷酸序列所编码的氨基酸序列组成。

7.一种针对CXCL4蛋白的抗体组合物，包含两种特异性结合CXCL4蛋白的分离的抗体或其抗原结合片段部分，

其中，所述抗原结合片段部分选自以下一种：Fab、Fab'、F(ab’)₂、scFv和dsFv，

其中，所述的一种分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：72的HCDR1，(b)SEQ ID NO：73的HCDR2，和(c)SEQID NO：74的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：28的LCDR1，(e)SEQ ID NO：29的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：30的LCDR3；或者

所述重链可变区，其由SEQ ID NO：71的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：27的氨基酸序列组成；或者

所述重链，其由SEQ ID NO：123的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ ID NO：112的氨基酸序列组成；

其中，所述的另一种分离的抗体或其抗原结合片段部分具有选自以下至少一组的重链和轻链：

所述重链可变区包含(a)SEQ ID NO：68的HCDR1，(b)SEQ ID NO：69的HCDR2，和(c)SEQID NO：70的HCDR3，且所述轻链可变区包含(d)SEQ ID NO：24的LCDR1，(e)SEQ ID NO：25的LCDR2，和(f)SEQ ID NO：26的LCDR3；或者

所述重链可变区，其由SEQ ID NO：67的氨基酸序列组成，以及所述轻链可变区，其由SEQ ID NO：23的氨基酸序列组成；或者

所述重链，其由SEQ ID NO：122的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ ID NO：111的氨基酸序列组成。

8.一种分离的核酸分子，其编码权利要求1-6中任一项的抗体或其抗原结合片段部分；或者

所述核酸分子由以下核苷酸序列组成： SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4。

9.权利要求8的分离的核酸分子，所述核酸分子与表达调控序列可操作地连接。

10.一种表达载体，其包含权利要求8或9的核酸分子。

11.一种宿主细胞，其包含权利要求8或9的核酸分子或权利要求10的表达载体。

12.用于检测来自受试者的样品中CXCL4蛋白的表达水平的抗体在制备用于诊断抑郁障碍的试纸条、试纸卡和/或试剂盒中的用途，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，其中所述抗体选自权利要求1-6中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为权利要求7的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，所述CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍。

13.一种用于诊断抑郁障碍的试剂盒、试纸条或试纸卡，包括用于检测来自受试者的样品中CXCL4蛋白的表达水平的抗体，其中所述受试者疑似患有精神障碍但难以确定该精神障碍为抑郁障碍，所述抗体选自权利要求1-6中任一项的抗体或其抗原结合片段部分，或者所述抗体为权利要求7的针对CXCL4蛋白的抗体组合物，所述试剂盒、试纸条或试纸卡还包括指示CXCL4蛋白的表达水平与参考值相比上调提示所述受试者患有抑郁障碍的使用说明或插页。

14.一种用于检测CXCL4蛋白含量的化学发光检测试剂盒，或者一种用于诊断抑郁障碍的化学发光检测试剂盒，或者一种用于体外检测CXCL4蛋白的表达水平的化学发光检测试剂盒，或者一种用于确定受试者患有抑郁障碍的可能性的化学发光检测试剂盒，所述试剂盒包括磁微粒试剂、抗试剂A、抗试剂B和抗试剂C，

其中所述磁微粒试剂为羊抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁微粒，所述抗试剂A为异硫氰酸荧光素标记的CXCL4特异性抗体，所述抗试剂B为生物素标记的CXCL4配对抗体，所述抗试剂C为碱性磷酸酶与链霉亲和素的偶联物，其中所述CXCL4特异性抗体具有选自以下至少一组的重链和轻链：

所述重链，其由SEQ ID NO：122的氨基酸序列组成，以及所述轻链，其由SEQ ID NO：111的氨基酸序列组成；

15.如权利要求14所述的试剂盒，其中所述磁微粒试剂、所述抗试剂A、所述抗试剂B和所述抗试剂C分别存在于Tris缓冲液中。

16.如权利要求15所述的试剂盒，其中

所述磁微粒试剂的Tris缓冲液包括：0.1 M的Tris、0.9%的氯化钠、1%的牛血清白蛋白、5%的甲基纤维素、和适量的4 M盐酸，pH到8±0.1；且

所述抗试剂A、抗试剂B和抗试剂C的Tris缓冲液包括：0.1 M的Tris、0.9%的氯化钠、1%的牛血清白蛋白、0.01%的四环素、0.01%的硫酸新霉素、和适量的4 M盐酸，pH到8±0.1。

17.如权利要求14所述的试剂盒，所述试剂盒进一步包括校准品和/或质控品；或者所述校准品和/或质控品可以分离的形式独立置于另外的试剂盒中，其中所述校准品和所述质控品为分别添加了不同量的CXCL4抗原的缓冲液。

18.如权利要求14所述的试剂盒，所述试剂盒进一步包括底物；或者所述底物可以分离的形式独立置于另外的试剂盒中，其中所述底物为发光底物(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐。

19.如权利要求17所述的试剂盒，其中所述校准品和所述质控品分别存在于Tris缓冲液中，校准品和所述质控品的缓冲液包括：0.1 M的Tris、0.9%的氯化钠、2%的牛血清白蛋白、0.01%的四环素、0.01%的硫酸新霉素、和适量的4 M盐酸，pH到7.5±0.1。

20.如权利要求14所述的试剂盒，所述试剂盒可匹配全自动化学发光检测仪器或自动化/数字化检测平台使用。