CN115998879A - miR-92b-3p抑制物在制备治疗癫痫药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供miR‑92b‑3p抑制物在制备治疗癫痫药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明通过筛选验证miR‑92b‑3p抑制物能够对ADAM10基因的表达水平具有良好的调控作用，使ADAM10基因的表达上调，从而降低癫痫的发病率和重症率，并延长癫痫的潜伏期，对癫痫具有良好的治疗作用，将其应用于治疗癫痫药物的制备过程，能够为癫痫治疗提供新的方向，具有良好的应用前景，且miRNAs是一类小分子，容易突破血脑屏障，有利于充分发挥药效，降低副作用。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及miR-92b-3p抑制物在制备治疗癫痫药物中的应用。
背景技术
癫痫是一种由多种病因引起的慢性脑部疾病，是神经科第二常见疾病。根据世界卫生组织调查，全球癫痫患者约有5000万，而国内约有1000万。因为癫痫的反复发作性和不可预知性，患者独立生存能力通常受限，对学习、工作、家庭组建等多方面都会造成影响，也给患者家人和社会造成了极大的疾病负担。此外，值得注意的是，阿尔兹海默症（Alzheimer's disease，AD）患者并发癫痫的现象长期被临床忽视，但是根据相关研究，AD患者并发癫痫的风险是正常人的2-6倍，根据长期随访发现，其发病率可达到47.7%。考虑的全球，尤其是我国人口老龄化的趋势，这一现象在未来将伴随老年退行性疾病AD患病率的增加而愈发凸显。数十年来，以离子通道为核心的蛋白水平调控研究不乏新发现，但对于AD并发癫痫这一特殊疾病状态的治疗策略一直缺乏认识。因此，亟需对AD并发癫痫进行研究并开发一种能够治疗AD并发癫痫的药物。
发明内容
本发明解决的技术问题在于提供miR-92b-3p抑制物在制备治疗癫痫药物中的应用。
为解决上述问题，本发明提供了miR-92b-3p抑制物在制备治疗癫痫药物中的应用。
优选地，所述miR-92b-3p抑制物在制备治疗阿尔兹海默症并发癫痫药物中的应用。
优选地，所述miR-92b-3p抑制物用作ADAM10基因表达上调剂在制备治疗癫痫药物中的应用。
优选地，所述miR-92b-3p抑制物作为鼻腔给药制剂在制备治疗癫痫药物中的应用。
优选地，所述miR-92b-3p抑制物的核苷酸序列为5’-ggaggccgggacgagtgcaata-3’。
本发明通过筛选验证miR-92b-3p抑制物能够对ADAM10基因的表达水平具有良好的调控作用，使ADAM10基因的表达上调，从而降低癫痫的发病率和重症率，并延长癫痫的潜伏期，对癫痫具有良好的治疗作用，将其应用于治疗癫痫药物的制备过程，能够为癫痫治疗提供新的方向，具有良好的应用前景，且miRNAs是一类小分子，容易突破血脑屏障，有利于充分发挥药效，降低副作用。
附图说明
图1为本发明实施例中可转录后调控ADAM10的miRNAs的筛选过程示意图；
图2为本发明实施例中miRNAs与ADAM10的3′-UTR结合位点示意图以及对pmiR-Report-ADAN10 3′-UTR野生型和突变型表达影响的对比分析图；
图3为本发明实施例中miR-92b-3p和miR-363-3p模拟物和抑制物对ADAM10表达水平影响的对比分析图；
图4为本发明实施例中鼻腔给予miR-92b-3p抑制物不同时间后海马组织中miR-92b-3p和ADAM10表达水平的对比分析图以及miR-92b-3p在海马组织中的分布图；
图5为本发明实施例中AD转基因动物模型在亚惊厥剂量匹罗卡品诱导为癫痫点燃模型前后miR-92b-3p和ADAM10表达水平的对比分析图；
图6为本发明实施例中不同处理组中AD并发癫痫发病率、Racine量表4级以上发病率和潜伏期的对比分析图；
图7为本发明实施例中不同处理组中非AD并发癫痫发病率、Racine量表4级以上发病率和潜伏期的对比分析图。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。另外，术语“包括”、“包含”、“含有”、“具有”的含义是非限制性的，即可加入不影响结果的其它步骤和其它成分。如无特殊说明的，材料、设备、试剂均为市售。
为了更好地理解本发明而不是限制本发明的范围，在本发明中所用的表示用量、质量分数的所有数字、以及其他数值，在所有情况下都应理解为以词语“大约”所修饰。因此，除非特别说明，否则在说明书和权利要求书中所列出的数字参数都是近似值，其可能会根据试图获得的理想性质的不同而加以改变。各个数字参数至少应被看作是根据所报告的有效数字和通过常规的四舍五入方法而获得的。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面对本发明的具体实施例做详细说明。
在Schroeder等的研究中表明，在APP[V717I]过表达的AD转基因动物模型基础上，ADAM10过表达可以显著改善认知功能损害，而ADAM10[E384A]功能抑制（dominant negativeAdam10，Adam10dn）转基因动物的认知功能水平与APP[V717I]过表达的AD转基因动物模型相似。考虑到ADAM10可以通过竞争性酶切APP，抑制毒性产物Aβ聚集和海马功能损害，其在抑制AD认知功能损害中应该扮演关键角色。另一方面，相比中度过表达ADAM10（moderatelyoverexpressing Adam10，Adam10mo）/APP和正常表达ADAM10的APP转基因动物，ADAM10[E384A]功能抑制Adam10dn/APP转基因动物遭受较强的痫性发作症状，伴随较长的恢复时间，以及海马区域明显的神经退化。在ADAM10基因条件敲除（ADAM10 conditionalknockout，ADAM10 cKO）的动物中，与正常对照相比，可以见到反复痫性发作后的死亡率增加，提示癫痫损害更重。
在之前的研究中，通过人体遗传学研究，发现ADAM10基因启动子区rs514049G（DNA反义链对应的碱基，由于ADAM10位于DNA反义链，下文类似表达均指DNA反义链对应的碱基）是颞叶癫痫的遗传保护因素，进一步对启动子活性鉴定发现相较于rs514049T，rs514049G所在启动子片段转录活性较高。此外，Bekris等在携带基因型GG的尸检对照海马组织中，观察到ADAM10蛋白表达水平较基因型GT+TT表达有增高趋势。从上述研究中可以发现，ADAM10表达的相对增加有助于降低癫痫发生风险。
基于现有研究，可以推测ADAM10功能的相对下调除了参与AD核心症状-认知功能损害，在AD患者并发癫痫的病理过程中应当发挥重要作用。反之，若能适当上调ADAM10的表达水平，则可能降低AD患者癫痫并发症风险。
非蛋白变码的微小RNAs（microRNAs），以下简称miRNAs，是基因转录后水平的一类关键调节物，一般由22个碱基组成，通过自身的种子序列与其靶基因信使RNA（mRNA）3'端非编码区完全互补或不完全互补结合，分别降解mRNAs或抑制mRNAs的翻译，进而负性调节这些靶基因的蛋白表达水平。因此，miRNAs是一类具有精确调控下游信号的小分子，但目前尚未有miRNAs拮抗剂或激动剂在制备治疗癫痫的药物中应用的相关报导。
本发明实施例提供了miR-92b-3p抑制物在制备治疗癫痫药物中的应用。
在本发明实施例中，优选提供miR-92b-3p抑制物在制备治疗阿尔兹海默症并发癫痫药物中的应用。
在一个实施例中，将所述miR-92b-3p抑制物用作ADAM10基因表达上调剂在制备治疗癫痫药物中的应用。即，使用miR-92b-3p抑制物后，使ADAM10基因的表达上调，从而缓解和治疗癫痫的发病情况。
在一个实施例中，所述miR-92b-3p抑制物作为鼻腔给药制剂在制备治疗癫痫药物中的应用。
鼻腔给药制剂是指能够通过鼻腔给药方式产生作用的药物。
血脑屏障是的药物阻滞作用，即P-糖蛋白通过跨膜外排泵作用阻止抗癫痫药物由血脑屏障发挥期望效应。ADAM10蛋白（即ADAM10基因的表达产物）是由748个氨基酸组成的具有三维结构的生物大分子，质量为84142Da，对癫痫患者直接给予人工合成ADAM10蛋白制剂，跨越血脑屏障，并进一步锚定于神经细胞发挥生物学功能难以实现。miRNAs是小分子物质，制备成鼻腔给药制剂后，能够绕开血脑屏障，通过嗅球和三叉神经鞘间隙进入颅内，相对于普通药物超大剂量口服或静脉给药提高血药浓度以对抗血脑屏障的药物阻滞效应的方式，鼻腔给药制剂经鼻腔给药具有颅内靶向给药的优势，肝肾毒性更低，且药物在脑内局部聚集，有利于充分发挥药效。
在一个实施例中，所述miR-92b-3p抑制物的核苷酸序列为5’-uauugcacucgucccggccucc-3’，如序列表中序列4所示。
需要说明的是，miR-92b-3p抑制物的序列为公开信息，根据修饰基团不同，其核苷酸序列会存在一定差异，均能够实现本发明实施例的目的，上述核苷酸序列不作为本发明保护范围的限制。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照制造厂商所建议的条件。
需要说明的是，在下述实施例中，如无特殊说明，采用*表示显著性水平，其中，*表示p＜0.05，**表示p＜0.01，***表示p＜0.001。
实施例1 筛选可转录后调控ADAM10的miRNAs
通过生物信息学方法初步筛选出AD患者海马体组织中可转录后调控ADAM10的miRNAs，具体步骤如下所示：
1.1、通过GEO数据库（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gds）下载基于AD患者41例和尸检对照23例的人海马组织的二代测序数据（序列号为GSE48552），分析得到共有34个miRNAs差异表达，结果如图1中（A）所示；
1.2、通过Targetscan，PICTAR5，DIANAmT和miRanda，4个软件同时预测能够与ADAM10的3′-UTR结合的miRNA，共获得72个miRNAs，结果如图1中（B）所示；
1.3、取步骤1.1和步骤1.2中得到的miRNAs的交集，得到6个AD患者差异表达，且以ADAM10为靶基因的潜在转录后调控因子，结果如图1中（C）所示；
1.4、分析步骤1.3中得到的6个潜在转录后调控因子在AD患者海马组织中的表达趋势，其中4个miRNAs的表达丰度较高，且在AD患者和尸检对照中表达差异明显，结果如图1中（D）所示；
1.5、根据AD患者并发癫痫的潜在病理机制，ADAM10功能的相对下调与AD患者并发癫痫风险密切相关，而根据miRNAs对靶基因负调控的原则，选择在AD患者海马组织中表达丰度高，且表达上调的miRNAs作为候选研究对象进一步研究，包括miR-363-3p，miR-195-5p和miR-92b-3p。
实施例2 分析候选研究对象对ADAM10的3′-UTR的转录后调控效应
2.1、将ADAM10野生型的3′-UTR（3'端非编码区）插入pmiR-ReportTM载体内萤火虫荧光素酶基因（luciferase）下游，制造出pmiR-Report-ADAM10 3′-UTR野生型质粒，然后转染至HEK293T细胞；同时通过Rfect试剂转染化学合成的miR-92b-3p模拟物（核苷酸序列信息为5’-uauugcacucgucccggccucc-3’，如序列表中序列1所示）、miR-363-3p模拟物（核苷酸序列信息为5’-aauugcacgguauccaucugua-3’，如序列表中序列2所示）和miR-195-5p模拟物（核苷酸序列信息为5’-uagcagcacagaaauauuggc-3’，如序列表中序列3所示），可分别使胞内miR-92b-3p，miR-363-3p和miR-195-5p的水平上调，36h后检测荧光素酶活性，实验重复3次，结果如图2中（A）所示；
2.2、为了进一步评估上述3个miRNAs与ADAM10的3′-UTR的结合的特异性，将ADAM10突变型3′-UTR插入pmiR-ReportTM载体内萤火虫荧光素酶基因（luciferase）下游，制造出pmiR-Report-ADAM10 3′-UTR 突变型质粒，然后转染至HEK293T细胞；同时通过Rfect试剂转染化学合成的miR-363-3p模拟物、miR-195-5p模拟物和miR-92b-3p模拟物，36h后检测荧光素酶活性，实验重复3次，结果如图2中（A）所示；
2.3、以pRL-TK（海肾萤光素酶）载体作为内对照，阴性对照为与人类miRNA无序列同源的cel-mir-67模拟物，比较模拟物各组与阴性对照之间的荧光素酶活性，结果如图2中（B）所示，从图2中（B）可以看出，miR-363-3p模拟物和miR-92b-3p模拟物能够使pmiR-Report-ADAM10 3′-UTR野生型的表达受到显著抑制，其中，miR-92b-3p模拟物对pmiR-Report载体内萤火虫荧光素酶活性的抑制作用更强，而3个miRNAs均对pmiR-Report-ADAM10 3′-UTR突变型的表达没有影响。
本实施例结果表明miR-92b-3p和miR-363-3p可转录后调控ADAM10，且有明确的结合位点，也就是说，ADAM10为miR-92b-3p和miR-363-3p的靶基因。
实施例3 分析miR-92b-3p和miR-363-3p对ADAM10转录后调控的效应
3.1、通过化学合成方法分别合成miR-92b-3p模拟物（核苷酸序列信息为5’-uauugcacucgucccggccucc-3’，如序列表中序列1所示）、miR-363-3p模拟物（核苷酸序列信息为5’-aauugcacgguauccaucugua-3’，如序列表中序列2所示）、miR-92b-3p抑制物（核苷酸序列信息为5’-ggaggccgggacgagtgcaata-3’，如序列表中序列4所示）和miR-363-3p抑制物（核苷酸序列信息为5’-tacagatggataccgtgcaatt-3’，如序列表中序列5所示），并将其分别转染至人神经元细胞系，SK-N-SH细胞中，48小时后收集细胞提取总蛋白；
3.2、通过Western Blot检测ADAM10蛋白的表达情况，以观察上述模拟物和抑制物在人神经元细胞细胞系内对靶基因ADAM10的调控作用，实验重复3次；
结果如图3所示，其中，图3中（A）为miR-92b-3p模拟物和miR-363-3p模拟物对ADAM10调控作用的对比分析图，根据条带及其灰度分析，可以得到柱形图，图3中（B）为miR-92b-3p抑制物和miR-363-3p抑制物对ADAM10调控作用的对比分析图，根据条带及其灰度分析，可以得到柱形图。从图3中（A）可以看出，miR-92b-3p模拟物对ADAM10的抑制作用强于miR-363-3p模拟物，从图3中（B）可以看出，miR-92b-3p抑制物对ADAM10的增强作用强于miR-363-3p抑制物。
因此，miR-92b-3p在神经元细胞中对ADAM10的调控作用更强。
实施例4 miR-92b-3p抑制物对AD转基因动物模型海马组织中miR-92b-3p表达的影响
本实施例中AD转基因动物模型为9月龄的B6C3-Tg(APPswe,PSEN1dE9)小鼠。
4.1、将带绿色荧光标记miR-92b-3p的抑制物 (核苷酸序列信息为5’-ggaggccgggacgagtgcaata-3’，如序列表中序列4所示) 200 nmol溶于2 ml无酶水中，形成miR-92b-3p抑制物的水溶液（浓度为100 nmol/ml）；
4.2、利用小动物固定器固定AD转基因动物模型，取仰卧位，miR-92b-3p的抑制物溶液通过移液枪给药，每滴2μl，每分钟12滴，每2滴换另一侧鼻孔继续给药，一共有18只B6C3-Tg小鼠被随机选择，并随机分为3组，作为实验组，接受miR-92b-3p的抑制物溶液(滴入量为10nmol/kg体重)，3组小鼠分别在经鼻腔给药30 min，60 min和120 min后处死，并迅速获得海马组织样本，剩下的6只B6C3-Tg小鼠作为溶剂对照，在给予无酶水(0.1ml/kg体重)后立即处死（0 min）；
4.3、通过实时定量聚合酶链反应（qPCR）测量上述溶剂对照组和3组实验组海马组织中miR-92b-3p和ADAM10的相对表达水平，根据结果分析miR-92b-3p及其靶基因ADAM10在经鼻腔给予miR-92b-3p抑制物后的动态变化趋势，结果如图4中（A）和（B）所示；
其中，图4中（A）为不同处理中miR-92b-3p表达水平的对比分析图，图4中（B）为不同处理中ADAM10表达水平的对比分析图，从图4中（A）可以看出，相对于溶剂对照组（即0min），经鼻腔给予miR-92b-3p抑制物后，miR-92b-3p在海马组织中的相对表达水平，在30min时降至0.55倍，60min时降至0.44倍，120min时仍维持在0.47倍的水平，如图4中（B）所示，ADAM10与miR-92b-3p的表达趋势相反，相对于溶剂对照组（即0min），经鼻腔给予miR-92b-3p抑制物后，ADAM10在海马组织中的相对表达水平，在30min时升至1.38倍，60min时升至2.10倍，120min时仍维持在2.02倍的水平，说明miR-92b-3p抑制物能够抑制miR-92b-3p的表达，增强ADAM10的表达，且鼻腔给予60min后调控作用更强；
4.4、取60min处理组中小鼠的海马组织进行固定，切成厚度为4μm的组织切片，通过DAPI染色实现细胞核显影miR-92b-3p抑制物自带绿色荧光。双荧光免疫成像通过laserscanning confocal microscopy (Leica Microsystems)和Olympus IX 70 invertedmicroscope (Olympus America)检测荧光强度，结果如图4中（C）所示；
从图4中（C）可以看出，在蓝色荧光标记的海马组织背景上（图片经过灰度化处理，蓝色荧光标记显示为灰色点状），可见绿色荧光标记（图片经过灰度化处理，绿色荧光标记显示为白色点状）的miR-92b-3p抑制物广泛分布于海马组织的CA1、CA2、CA3和DG区，说明经鼻腔给予miR-92b-3p抑制物能够顺利进入颅内海马组织。
实施例5 确认miR-92b-3p在癫痫点燃模型中表达上调
5.1、采用AD转基因动物模型构建亚惊厥剂量匹罗卡品诱导癫痫点燃模型，然后分别通过定量聚合酶链反应（qPCR）和Western Blot分析miR-92b-3p及其靶基因ADAM10在癫痫点燃成功后的变化趋势，结果如图5所示；
其中，构建亚惊厥剂量匹罗卡品诱导癫痫点燃模型的方法为：给予东莨菪碱(1mg/kg 体重, 腹腔内注射)，以降低胆碱能反应和非预期性死亡风险，30 min后予以匹罗卡品(100 mg/kg 体重，腹腔内注射)，通过Racine量表，连续3日达到4级以上，视为癫痫点燃模型构建成功，对于4级以上持续发作60 min予以地西泮终止发作(10 mg/kg 体重, 腹腔内注射)，否则每日重复给予匹罗卡品(100 mg/kg 体重，腹腔内注射)，直到总剂量达到1000 mg/kg 体重，视为癫痫点燃模型构建失败；根据Racine量表，癫痫发作分为5级：1级，面肌阵挛；2级，节律性点头；3级，单侧肢体抬举或阵挛；4级，双侧前肢阵挛，后肢站立；5级，站立时跌倒或扭曲；
图5中（A）为AD转基因动物模型（AD组）和亚惊厥剂量匹罗卡品诱导癫痫点燃模型构建成功后（AD+癫痫点燃组）中miR-92b-3p表达水平的对比分析图，从图5中（A）可以看出，AD转基因动物模型在癫痫点燃后，miR-92b-3p显著上调；图5中（B）为AD转基因动物模型（AD组）和亚惊厥剂量匹罗卡品诱导癫痫点燃模型构建成功后（AD+癫痫点燃组）中ADAM10表达水平的对比分析图，从图5中（B）可以看出，AD转基因动物模型在癫痫点燃后，ADAM10显著下调。说明miR-92b-3p在AD并发癫痫的特殊疾病状态下处于异常上调状态，导致ADAM10异常下调，通过miR-92b-3p抑制物抑制miR-92b-3p的活性，有助于降低AD并发癫痫风险。
实施例6 确认miR-92b-3p抑制物对AD并发癫痫的治疗作用
6.1、采用9月龄的B6C3-Tg小鼠作为AD转基因动物模型，予以亚惊厥剂量匹罗卡品构建癫痫点燃模型，然后随机分为3组：癫痫点燃组（包括15只小鼠），被用于匹罗卡品诱导癫痫急性发作；与癫痫点燃组相比，治疗组（包括15只小鼠）在给予匹罗卡品30分钟前，经鼻腔给药给予miR-92b-3p抑制物（浓度为100 nmol/ml，给药量为10 nmol/kg体重）；未构建癫痫点燃模型的B6C3-Tg小鼠设置AD组 （包括5只小鼠），此外，取B6C3-Tg小鼠背景来源的同月龄C57BL/6小鼠为正常组（包括5只小鼠）；
6.2、在各组给予亚惊厥剂量匹罗卡品（给药量为100 mg/kg 体重，腹腔内注射）后，连续观察60min，记录发作水平、Racine量表4级以上发作潜伏期和发生率，结果如图6所示；
图6中（A）为不同组癫痫发生率的对比分析图，从图6中（A）可以看出，亚惊厥剂量匹罗卡品不足以诱发正常组和AD组的癫痫发作，在癫痫点燃组和治疗组中，癫痫发生率分别为100%和66.7%，经鼻腔给予miR-92b-3p抑制物的治疗组的癫痫发病率显著降低，降幅达到33.3%；图6中（B）为不同组Racine量表4级以上发病率的对比分析图，从图6中（B）可以看出，癫痫点燃组和治疗组中，Racine量表4级以上发病率分别为100%和20%，治疗组的降幅达到80%；图6中（C）为不同组癫痫发作潜伏期的对比分析图，从图6中（C）可以看出，癫痫点燃组的潜伏期为3.7min，而治疗组的潜伏期为8min，治疗组的潜伏期相较于癫痫点燃组增加了2.1倍。说明miR-92b-3p抑制物不仅可以显著降低AD并发癫痫风险，而且能够显著延长全身发作的潜伏期，并降低全身发作的发生率。
实施例7 确认miR-92b-3p抑制物对非AD并发癫痫的治疗作用
7.1、选择8周龄C57BL/6小鼠（正常小鼠），予以亚惊厥剂量匹罗卡品构建癫痫点燃模型，然后随机分为3组：癫痫点燃组（包括20只小鼠），被用于匹罗卡品诱导癫痫急性发作；与癫痫点燃组相比，治疗组（包括20只小鼠）在给予匹罗卡品30分钟前，经鼻腔给药给予miR-92b-3p抑制物（浓度为100 nmol/ml，给药量为10 nmol/kg体重）；未构建癫痫点燃模型的C57BL/6小鼠为正常组（包括5只小鼠）；
7.2、在各组给予亚惊厥剂量匹罗卡品（给药量为100 mg/kg 体重，腹腔内注射）后，连续观察60min，记录发作水平、Racine量表4级以上发作潜伏期和发生率，结果如图7所示；
图7中（A）为不同组癫痫发生率的对比分析图，从图7中（A）可以看出，亚惊厥剂量匹罗卡品不足以诱发正常组和AD组的癫痫发作，在癫痫点燃组和治疗组中，癫痫发生率分别为100%和70%，经鼻腔给予miR-92b-3p抑制物的治疗组的癫痫发病率显著降低，降幅达到30%；图7中（B）为不同组Racine量表4级以上发病率的对比分析图，从图7中（B）可以看出，癫痫点燃组和治疗组中，Racine量表4级以上发病率分别为100%和40%，治疗组的降幅达到60%；图7中（C）为不同组癫痫发作潜伏期的对比分析图，从图7中（C）可以看出，癫痫点燃组的潜伏期为4.8min，而治疗组的潜伏期为6.1min，治疗组的潜伏期相较于癫痫点燃组增加了2.1倍。说明miR-92b-3p抑制物对非AD并发的癫痫发作也具有良好的治疗作用。
综上所述，miR-92b-3p对AD并发癫痫以及非AD并发癫痫都具有良好的治疗作用，将其应用于制备治疗癫痫药物中，能够获得良好的效果，由于miRNAs为小分子物质，能够通过鼻腔给药方式突破血脑屏障，达到更好的治疗效果。
虽然本公开披露如上，但本公开的保护范围并非仅限于此。本领域技术人员在不脱离本公开的精神和范围的前提下，可进行各种变更与修改，这些变更与修改均将落入本发明的保护范围。
Claims (5)
1.miR-92b-3p抑制物在制备治疗癫痫药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-92b-3p抑制物在制备治疗阿尔兹海默症并发癫痫药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-92b-3p抑制物用作ADAM10基因表达上调剂在制备治疗癫痫药物中的应用。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-92b-3p抑制物作为鼻腔给药制剂在制备治疗癫痫药物中的应用。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miR-92b-3p抑制物的核苷酸序列为5’-ggaggccgggacgagtgcaata-3’。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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