CN115944782A - 一种骨膜脱细胞基质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种骨膜脱细胞的方法，其中制备方法包括以下步骤：步骤1，获得骨膜组织；步骤2，将取得的组织放入10mol Tris‑盐酸中浸泡12h；步骤3，随后放入1％Triton X‑100中浸泡12h；步骤4，随后放入25u/ml DNA酶和1u/mlRNA酶中浸泡12h；步骤5，随后用PBS清洗8h，获得骨膜细胞外基质；步骤6，随后冻干，研磨成粉，灭菌备用；本发明的处理方法是将骨膜进行脱细胞、脱抗原处理，可以更好的保留原有组织活性胶原成分，并不破坏原有结构。
Description
技术领域
本发明涉及骨工程技术领域，具体地是将骨膜进行脱细胞、脱抗原处理的一种骨膜脱细胞的方法。
背景技术
骨的膜内成骨是骨再生的一个重要方式，该方式骨膜是骨组织再生的基础。因此，骨膜脱细胞后作为基础材料可能作为骨组织再生的重要材料来源。而其脱细胞是其中最为关键的环节。脱细胞最大程度去除细胞、DNA等具有免疫原性的成分，同时保留细胞基质成分蛋白质和多糖组成的有序的网络结构，其三维微结构接近体内细胞生长的微环境，富含的各种活性分子还为细胞活动提供基础，因此是一种理想的组织工程材料。脱细胞骨膜具有天然骨再生的生物活性，有效促进骨再生，鉴于此，提出本发明。
发明内容
(一)解决的技术问题
本发明所要解决的技术问题是将骨膜进行脱细胞、脱抗原处理，可以更好的保留原有组织活性胶原成分，并不破坏原有结构。
(二)技术方案
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种骨膜脱细胞的方法，其中制备方法包括以下步骤：
步骤1，获得骨膜组织；
步骤2，将取得的组织放入10mol Tris-盐酸中浸泡12h；
步骤3，随后放入1％Triton X-100中浸泡12h；
步骤4，随后放入25u/ml DNA酶和1u/mlRNA酶中浸泡12h；
步骤5，随后用PBS清洗8h，获得骨膜细胞外基质；
步骤6，随后冻干，研磨成粉，灭菌备用。
作为优选，所有操作步骤均在37℃/120转的摇床内完成。
(三)有益效果
本发明通过低渗Tris-盐酸和1％Triton X-100双重破膜，使得大量骨膜细胞与细胞外基质脱离，完成主要的脱细胞过程。紧接着用两种核酸酶进一步处理残留DNA和RNA，最后洗涤多余核酸酶，冻干研磨成粉备用。
附图说明
图1是本发明步骤一获取骨膜组织时的俯视图；
图2是本发明步骤一获取骨膜组织的主视图；
图3是本发明脱细胞前后HE和DAPI可以表明脱细胞后细胞核完全去除，没有细胞核的着色示意图；
图4是本发明DNA定量进一步表明脱细胞的成功，脱细胞后的组织细胞外基质DNA含量降低到50ng/mg以下，表明该方法的可行性图；
图5是本发明Alpha-gal脱细胞后含量明显降低，说明主要引起免疫炎症反应的成分被大部分去除示意图；
图6是本发明总胶原差异无统计学意义，表明该脱细胞的方法不会损伤骨膜的主要成分示意图；
图7是本发明杨氏模量没有统计学差异，表明脱细胞方法不会明显破坏骨膜的结构示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅附图，实施例1
步骤1，获得骨膜组织；
步骤2，将取得的组织放入10mol Tris-盐酸中浸泡12h；
步骤3，随后放入1％Triton X-100中浸泡12h；
步骤4，随后放入25u/ml DNA酶和1u/mlRNA酶中浸泡12h；
步骤5，随后用PBS清洗8h，获得骨膜细胞外基质；
步骤6，随后冻干，研磨成粉，灭菌备用。
如图2所示骨膜组织的上层为软骨层，下层为骨层。
如图所示：本发明DNA定量进一步表明脱细胞的成功，脱细胞后的组织细胞外基质DNA含量降低到50ng/mg以下，表明该方法的可行性。
如图所示：本发明Alpha-gal脱细胞后含量明显降低，说明主要引起免疫炎症反应的成分被大部分去除；
如图所示：本发明总胶原差异无统计学意义，表明该脱细胞的方法不会损伤骨膜的主要成分；
如图所示：本发明杨氏模量没有统计学差异，表明脱细胞方法不会明显破坏骨膜的结构。
需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (2)
1.一种骨膜脱细胞的方法，其特征在于，制备方法包括以下步骤：
步骤1，获得骨膜组织；
步骤2，将取得的组织放入10mol Tris-盐酸中浸泡12h；
步骤3，随后放入1％Triton X-100中浸泡12h；
步骤4，随后放入25u/ml DNA酶和1u/mlRNA酶中浸泡12h；
步骤5，随后用PBS清洗8h，获得骨膜细胞外基质；
步骤6，随后冻干，研磨成粉，灭菌备用。
2.根据权利要求1所述的一种骨膜脱细胞的方法，其特征在于，操作步骤均在37℃/120转的摇床内完成。
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| 许海委等: "不同脱细胞方法对猪尾纤维环生物力学特性及组织结构的影响", 医用生物力学, vol. 28, no. 4, 31 August 2013 (2013-08-31) * |
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