CN115925803B - 一种点亮型GPx4荧光分子探针及其应用 - Google Patents
一种点亮型GPx4荧光分子探针及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115925803B CN115925803B CN202210774449.8A CN202210774449A CN115925803B CN 115925803 B CN115925803 B CN 115925803B CN 202210774449 A CN202210774449 A CN 202210774449A CN 115925803 B CN115925803 B CN 115925803B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gpx4
- ligand
- molecule
- molecular probe
- illuminated
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 title claims abstract description 26
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 63
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 47
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 37
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 37
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 37
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims abstract description 33
- 238000010791 quenching Methods 0.000 claims abstract description 20
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 18
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 108010033024 Phospholipid Hydroperoxide Glutathione Peroxidase Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102100023410 Phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- -1 BHQ-1 Chemical compound 0.000 claims description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 7
- WCKQPPQRFNHPRJ-UHFFFAOYSA-N 4-[[4-(dimethylamino)phenyl]diazenyl]benzoic acid Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1N=NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 WCKQPPQRFNHPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 5
- UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 4-[4-[[2,5-dimethoxy-4-[(4-nitrophenyl)diazenyl]phenyl]diazenyl]-n-methylanilino]butanoic acid Chemical compound COC=1C=C(N=NC=2C=CC(=CC=2)N(C)CCCC(O)=O)C(OC)=CC=1N=NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 UDGUGZTYGWUUSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 4
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 4
- 239000001022 rhodamine dye Substances 0.000 claims description 4
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 3
- BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 2h-oxazine Chemical compound N1OC=CC=C1 BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YXKOGLINWAPXPE-UHFFFAOYSA-N 4-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-7-amine Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C2=NON=C12 YXKOGLINWAPXPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XJHABGPPCLHLLV-UHFFFAOYSA-N benzo[de]isoquinoline-1,3-dione Chemical compound C1=CC(C(=O)NC2=O)=C3C2=CC=CC3=C1 XJHABGPPCLHLLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 2
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 claims description 2
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 125000005575 polycyclic aromatic hydrocarbon group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000001016 thiazine dye Substances 0.000 claims description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 abstract description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 5
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 abstract description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 20
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 19
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 19
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 5
- DMLAVOWQYNRWNQ-UHFFFAOYSA-N azobenzene Chemical class C1=CC=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 DMLAVOWQYNRWNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 108010088535 Pep-1 peptide Proteins 0.000 description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000012650 click reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002173 cutting fluid Substances 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-tritylsulfanylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)SC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KLBPUVPNPAJWHZ-UMSFTDKQSA-N 0.000 description 2
- 101100189913 Caenorhabditis elegans pept-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 108010010779 glutamine-pyruvate aminotransferase Proteins 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N 0.000 description 1
- UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)CC(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N 0.000 description 1
- RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 1,4a-dimethyl-7-propan-2-yl-2,3,4,4b,5,6,10,10a-octahydrophenanthrene-1-carboxylic acid Chemical compound C12CCC(C(C)C)=CC2=CCC2C1(C)CCCC2(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 108010033547 Carbonic Anhydrase I Proteins 0.000 description 1
- 102100025518 Carbonic anhydrase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000003846 Carbonic anhydrases Human genes 0.000 description 1
- 108090000209 Carbonic anhydrases Proteins 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000006833 Multifunctional Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010047290 Multifunctional Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 1
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010226 confocal imaging Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N formic acid Substances OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 150000002669 lysines Chemical class 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 238000007344 nucleophilic reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000004621 scanning probe microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明属于化学生物学领域，公开了一种点亮型GPx4荧光分子探针及其应用，该探针中含有配体、荧光染料分子和猝灭分子，其中，配体能够特异性地结合谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)；猝灭分子能够猝灭荧光染料分子的荧光；当配体与GPx4结合时，猝灭分子能够从探针上脱离，从而点亮荧光染料分子，恢复荧光。本发明通过使用特异性配体(如特定氨基酸序列的多肽配体)，基于配体导向，使得该探针对GPx4具有良好的特异性与灵敏度，可用于GPx4的实时成像与动态监测，为抗癌诊断和图像引导的生物医学等方面提供有力的工具。
Description
技术领域
本发明属于化学生物学领域，更具体地，涉及一种点亮型GPx4荧光分子探针及其应用，该探针是一种基于配体导向化学的点亮型荧光分子探针，对谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)具有特异性，尤其可用于对GPx4的实时追踪成像与监测。
背景技术
谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)是哺乳动物中唯一能够还原细胞膜内磷脂过氧化物的过氧化物酶，因此，它对维持细胞内的氧化还原稳态和防止毒性脂质活性氧的积累至关重要。研究表明，GPx4与众多疾病息息相关，如神经元丢失、中风、克罗恩病、阿尔茨海默病和帕金森病。值得一提的是，GPx4是铁死亡的关键调控因子，铁死亡是一种新型的由铁依赖性的脂质活性氧积累所导致的程序性细胞死亡形式。已有研究表明癌细胞独特的代谢特征使它们容易发生铁死亡，因而铁死亡成为治疗癌症的有前景的新方案，进而GPx4被视为癌症或其他一些疾病的新的药理学治疗靶标。
尽管GPx4在铁死亡以及众多疾病中起着关键作用，但是目前并没有提供探针可用于实时监测活细胞中的GPx4。因此，获得一种能够响应生理环境，实时追踪监测GPx4动态表达和功能变化的探针显得尤为重要。为了满足这一需求，我们开发了一种荧光分子探针，可用于活细胞中GPx4的选择性标记和实时成像。
发明内容
针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明的目的在于提供一种点亮型GPx4荧光分子探针及其应用，其中通过使用特异性配体(如SEQ ID No.1～SEQ ID No.3中任意一者所示氨基酸序列的多肽配体)，基于配体导向，使得该探针对GPx4具有良好的特异性与灵敏度，配合荧光染料分子和猝灭分子，可用于GPx4的实时成像与动态监测，为抗癌诊断和图像引导的生物医学等方面提供有力的工具。
为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种点亮型GPx4荧光分子探针，其特征在于，该探针中含有配体、荧光染料分子和猝灭分子，其中，所述配体能够特异性地结合谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)；
所述猝灭分子能够猝灭所述荧光染料分子的荧光；当所述配体与谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)结合时，所述猝灭分子能够从探针上脱离，从而点亮荧光染料分子、恢复荧光。
作为本发明的进一步优选，所述配体选自多肽配体，其氨基酸序列如SEQ ID No.1～SEQ ID No.3中任意一者所示。
作为本发明的进一步优选，所述荧光染料分子选自荧光素染料、花青染料、罗丹明染料、香豆素类染料、多环芳烃类染料、NBD-胺类染料、萘酰亚胺类染料、噻嗪类染料和噁嗪类染料。
作为本发明的进一步优选，所述猝灭分子选自偶氮类分子；所述偶氮类分子优选为DABCYL、TAMRA、BHQ-1、BHQ-2或BHQ-3。
作为本发明的进一步优选，所述猝灭分子是通过固相合成与所述多肽配体的氨基酸缩合相连的。
按照本发明的另一方面，本发明提供了上述点亮型GPx4荧光分子探针在制备用于对活细胞中GPx4实时成像的荧光染料中的应用。
按照本发明的又一方面，本发明提供了上述点亮型GPx4荧光分子探针点亮型GPx4荧光分子探针在制备GPx4检测试剂中的应用。
按照本发明的又一方面，本发明提供了上述点亮型GPx4荧光分子探针点亮型GPx4荧光分子探针在制备GPx4标记物中的应用。
按照本发明的再一方面，本发明提供了上述点亮型GPx4荧光分子探针点亮型GPx4荧光分子探针在制备活细胞中GPx4活性抑制剂中的应用，其特征在于，点亮型GPx4荧光分子探针中的配体具体为氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的多肽配体。
通过本发明所构思的以上技术方案，与现有技术相比，本发明中带有猝灭分子的点亮型荧光分子探针，含有可用于在复杂活细胞环境中引导选择性标记蛋白的配体，对蛋白可视化的荧光染料分子、以及能够对荧光染料分子的荧光进行猝灭的猝灭分子。具体的：
以使用多肽配体为例，本发明通过使用特定氨基酸组成的3种配体中的任意一种，均能够实现良好的GPx4选择性。本发明是使用如SEQ ID No.1～SEQ ID No.3中任意一者所示氨基酸序列的多肽配体参与构建探针，这些多肽配体对GPx4具有良好的特异性与灵敏度(以后文实施例为例，检测时间可短至5min，能够有效实现检测、标记)。
本发明通过在探针分子上加入猝灭分子，可以为探针进一步地功能化，并为探针的光物理性质提供了手柄；由于猝灭剂的存在，荧光探针本身只具有微弱的荧光，在探针与GPx4蛋白表面的氨基酸发生共价结合之后，猝灭分子的离去使标记在蛋白表面的荧光染料分子荧光会有效地开启、恢复荧光，从而进行可视化研究。本发明中的探针，尤其可用于活细胞中GPx4的实时成像与动态监测。
并且，当探针采用的多肽配体包括如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列时，由于该多肽配体可以结合在GPx4的活性位点附近从而抑制其活性，因此，相应的探针(即，后文实施例中的GPx4-QP3TF)在标记GPx4也会对GPx4产生抑制作用，从而为后续不同的研究需求提供不同的探针。
本发明能够为后续对GPx4的深入研究提供重要帮助，例如，本发明中的探针有助于我们揭示氧化还原刺激下GPx4的实时响应，对于研究GPx4在各种疾病模型中的功能以及解释活细胞中更多的抗氧化机制具有十分重大的意义；又例如，本发明中的探针可以助力对GPx4降解动力学的研究等。
综上，本发明首次得到了点亮型GPx4荧光分子探针，该探针具有良好的特异性、灵敏度和生物相容性，不仅对深入理解GPx4的重要生物功能提供了机会，而且在作为快速原位传感器方面具有潜在的应用价值，可以帮助预测肿瘤细胞对基于铁死亡的抗癌药物治疗的敏感性，对抗癌诊断和图像引导生物医学方面的应用非常有价值。
附图说明
图1为本发明探针的响应原理示意图。
图2为本发明探针在点亮前后的光谱测试图；其中，图例GPx4-QP1TF、GPx4-QP2TF、GPx4-QP3TF分别对应实施例采用多肽配体1(氨基酸序列如序列SEQ ID No.1所示)、多肽配体2(氨基酸序列如序列SEQ ID No.2所示)、多肽配体3(氨基酸序列如序列SEQ ID No.3所示)的原始探针(即，保持猝灭状态)；图例GPx4-TF1、GPx4-TF2、GPx4-TF3则分别对应GPx4-QP1TF、GPx4-QP2TF、GPx4-QP3TF点亮后(此时，原探针中的猝灭分子Quencher已离去)。
图3为本发明探针的选择特异性验证测试结果图。
图4为本发明采用不同多肽配体的探针对细胞存活率的测试结果图。
图5为本发明采用不同多肽配体的探针在活细胞中对GPx4的实时标记效果图；其中，图5中的(a)对应GPx4-QP1TF在活细胞中的成像，图5中的(b)对应GPx4-QP2TF在活细胞中的成像，图5中的(c)对应GPx4-QP3TF在活细胞中的成像。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
总的来说，本发明点亮型GPx4荧光分子探针，含有荧光染料分子、猝灭分子及配体，其中，配体能够特异性地结合谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)；并且，除了荧光染料分子、猝灭分子及配体这三种必要组成成分外，探针中还可以含有其他可选的功能性分子。
以使用特异性多肽配体为例，多肽配体可以是以下3种多肽配体中的任意一种，它们均能够实现良好的GPx4选择性。这3种多肽配体的氨基酸序列如下表所示：
| 配体名称 | 氨基酸序列 |
| 配体1(即Pep1) | CRVDKQGWRRCRR |
| 配体2(即Pep2) | CRAWYQNYCKLRR |
| 配体3(即Pep3) | VPCPYLPKWNCAGK |
注：与常规操作相似，为了将多肽配体与荧光染料分子进行偶联，可在多肽配体中设计含有代叠氮残基的赖氨酸，如此通过点击反应即可实现偶联。例如，配体1中第5位的K可对应K(N3)，同理，配体2中第10位的K可对应K(N3)，配体3中第8位的K可对应K(N3)。
荧光染料分子例如可以为荧光素染料、花青染料和罗丹明染料等；猝灭分子例如可以为偶氮类分子等(如，DABCYL、TAMRA、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3等)。
以下为具体实施例：
实施例1：多肽配体的合成以及与猝灭剂的缩合产物Quencher-Pepn的合成(n分别为1、2、3)
以多肽配体为Pep1、猝灭分子Quencher为偶氮苯系列中的4-二甲氨基偶氮苯-4’-甲酸为例，Quencher-Pep1的制备可包括如下步骤：
基于固相合成的方法，可以将偶氮苯与多肽的末端氨基酸进行缩合反应，具体可以采用以下合成步骤：
向多肽合成反应柱中加入3/4柱体积的二氯甲烷浸泡过夜。
树脂的溶胀：称取AM-Resin 0.25mmol加入多肽合成反应柱，并加入适量DMF,浸泡2h,溶胀活化树脂。
树脂上保护基团Fmoc的脱除：树脂充分溶胀活化结束后，抽滤除去溶剂DMF，然后脱除树脂上的Fmoc保护基团：脱除反应分两次进行，反应柱中加入适量的20％哌啶/DMF(v/v)溶液，在N2的吹拌下充分反应5min，抽滤除去溶液，再一次在反应柱中加入适量的20％哌啶/DMF(v/v)溶液,在N2吹拌下反应15min,抽滤除去溶液，用适量的DMF洗涤树脂5次。
树脂上氨基酸的连接：Fmoc保护基团脱除后，加入0.1mmol氨基酸溶于的2.22mL0.45M的HOBt/TBTU溶液并加入O.4mL DIEA,活化氨基酸5min之后将该反应液加入反应柱，在N2吹拌下反应2h后用Kaiser试剂检测氨基酸是否完全连接，110℃油浴加热两分钟，若树脂呈紫色，则未反应完全，需继续反应，若树脂呈浅黄色或亮黄色，则反应完全，抽滤除去溶剂，用适量的DMF洗涤树脂5次。
乙酰化封闭：氨基酸与树脂连接反应结束后，将乙酸酐和DIEA溶于DMF中，混合均匀后加入到反应柱中，在N2的吹拌下反应0.5h，待封结束后抽滤除去溶剂，用适量的DMF洗涤树脂5次。
氨基酸Fmoc保护基团的脱除：脱除反应分两次进行，反应柱中加入适量的20％哌啶/DMF(v/v)溶液，在N2的吹拌下充分反应5min，抽滤除去溶液，再一次在反应柱中加入适量的20％哌啶/DMF(v/v)溶液,在N2吹拌下反应15min,抽滤除去溶液，用适量的DMF洗涤树脂5次。
按照上述步骤依次加入多肽配体剩余的氨基酸以及猝灭剂。
上述步骤所加的氨基酸以及4-二甲氨基偶氮苯-4’-甲酸的顺序及用量可以分别为：
(1)：Fmoc-Arg(pbf)-OH(0.6488g,1mmol)，
(2)：Fmoc-Arg(pbf)-OH(0.6488g,1mmol)，
(3)：Fmoc-Cys(Trt)-OH(0.5857g,1mmol)，
(4)：Fmoc-Arg(pbf)-OH(0.6488g,1mmol)，
(5)：Fmoc-Arg(pbf)-OH(0.6488g,1mmol)，
(6)：Fmoc-Trp(Boc)-OH(0.5266g,1mmol)，
(7)：Fmoc-Gly-OH(0.2973g,1mmol)，
(8)：Fmoc-Gln(Trt)-OH(0.6107g,1mmol)，
(9)：Fmoc-Lys-N3(0.4945g,1mmol)，
(10)：Fmoc-Asp(otBu)-OH(0.4115g,1mmol)，
(11)：Fmoc-Val-OH(0.3394g,1mmol)，
(12)：Fmoc-Arg(pbf)-OH(0.6488g,1mmol)，
(13)：Fmoc-Cys(Trt)-OH(0.5857g,1mmol)，
(14)：4-二甲氨基偶氮苯-4’-甲酸(0.2693g,1mmol)。
最后一个猝灭剂反应结束后，结束后抽滤除去溶剂，用适量的DMF洗涤树脂5次，适量的二氯甲烷洗涤树脂5次，再用适量的甲醇洗涤树脂5次，用N2将树脂吹干。
切割试剂将多肽从树脂上切割下来，同时将所有氨基酸侧链上的保护基团一并脱除。具体的：100mg树脂需1mL切割液，按体积比三氟乙酸：水：三异丙基硅烷＝95:2.5:2.5的比例配置切割液。配好此切割液后将树脂置于梨形烧瓶中，加入切割液，冰浴下反应0.5h,恢复至室温后继续反应2h。待反应结束后将混合溶液滤至冰乙醚中，转速8 000rpm离心0.5h,弃去上清溶液乙醚，再加入冰乙醚离心2次，弃去上清溶液乙醚得到白色沉淀物。按照上述步骤进行第二次切割。
相似的，Quencher-pep2以及Quencher-pep3同样可参照上述步骤合成(相应调整氨基酸的加入顺序即可)。
实施例2：Quencher-Pepn的纯化
C18柱的反相-高效液相仪(RP-HPLC)室温下进行纯化，纯化方法为(其中的百分数均代表体积百分数)：流动相为水和乙腈(流动相中含0.05％TFA)，0-5min，0-25％CH3CN；5-10min，25-35％CH3CN；10-40min，36-65％CH3CN；40-45min，65-95％CH3CN；45-50min，95-95％CH3CN；50-55min，95-5％CH3CN。流速：2ml/min.紫外检测器：215nm。收集产物经冷冻干燥后得红色絮状产物。
上述产物经MALDI-TOF-MS验证。
Quencher-Pep1：calcd.for C84H132N37O17S2 +1995.0038[M+H+],found 1995.0078.
Quencher-pep2:calcd.for C93H131N32O18S2 +2035.9755[M+H+],found 2035.9736.
Quencher-pep3:calcd.for C88H122N23O18S2 +1852.8774[M+H+],found 1852.8748.
实施例3：Quencher-Pepn与荧光染料分子的偶联
以荧光染料分子为荧光素为例，借助于点击反应将Quencher-Pepn与荧光染料分子进行偶联，可以设计多肽配体使其中含有代叠氮残基的赖氨酸，而荧光染料经过修饰上炔基后，两者在点击反应后得到含有一系列功能分子如多肽配体、猝灭剂和荧光染料分子等的探针。
记含有多肽配体pep1、pep2、pep3的这3种探针分别为GPx4-QP1TF、GPx4-QP2TF、GPx4-QP3TF，它们均为红色固体。
上述探针经过RP-HPLC纯化以及MALDI-TOF-MS的验证。
GPx4-QP1TF:Calcd.for C121H39N29O29S3 +2725.1780；[M+H+],found 2725.2900.
GPx4-QP2TF:Calcd.for C129H165N34O30S3 +2766.1587；[M+H+],found 2766.2900.
GPx4-QP3TF:Calcd.for C125H156N25O30S3 +2583.0607；[M+H+],found 2583.0721；C125H155N25NaO30S3 +2605.0426；[M+Na+],found 2605.2809.
实施例4：探针的荧光恢复光谱测试
荧光探针GPx4-QPnTF(n分别为1、2、3)由于连接了淬灭剂偶氮苯，因此探针GPx4-QPnTF本身是荧光闭合的状态，只能监测到极其微弱的荧光，探针与GPx4表面的氨基酸发生邻近诱导的SN2亲核反应之后，会共价结合到GPx4表面的氨基酸上，与此同时，多肽配体和淬灭剂随之离去(相应的，探针GPx4-QPnTF将对应变为GPx4-TFn，n分别为1、2、3)，而留在GPx4表面的荧光染料分子与猝灭剂偶氮苯分开之后会有效得恢复其荧光。
取384孔全黑微孔板中三个干净的孔分别加入20μL 10μM的GPx4-QP1TF,GPx4-QP2TF和GPx4-QP3TF,多功能酶标仪中测其荧光值。然后分别取20μL 10μM的GPx4-QP1TF,GPx4-QP2TF和GPx4-QP3TF,于三个200μL的离心管中，每个离心管中加入1μg GPx4，混匀仪中于37℃以800g的震荡速度震荡5min，震荡结束之后于多功能酶标仪中分别测其荧光值。如图2的荧光光谱所示，探针本身GPx4-QP1TF,GPx4-QP2TF和GPx4-QP3TF仅有极其微弱的荧光，在与GPx4共孵育后GPx4-TF1,GPx4-TF2和GPx4-TF3有强荧光，荧光可以有效地恢复。
实施例5：探针的选择特异性验证
分别取2μg GPx4、，人血清白蛋白(Human serum albumin,HAS)、谷氨酰胺转氨酶(Glutamine transaminase,GT)、碳酸酐酶(Carbonic anhydrase I,CAI)和溶菌酶(Lysozyme,Lys)，其分子量大小分别为19Kda、66Kda、40Kda、32Kda和9Kda。这五个蛋白的混合物与探针GPx4-QP1TF、GPx4-QP2TF和GPx4-QP3TF共孵育1h之后，进行SDS-PAGE实验，结果如图3所示，从中可以看到五个蛋白中仅有GPx4被标记上了荧光探针，在凝胶成像仪上观察到在GPx4蛋白约19Kda的位置上显示有荧光。
实施例6：荧光探针对细胞存活率的不同影响，GPx4-QP3TF在标记GPx4之后对GPx4产生抑制作用，在这里选取了无抑制作用的GPx4-QP1TF和GPx4-QP2TF中的GPx4-QP1TF与其对照。
前一天按照10 000个细胞/孔的密度将细胞铺在细胞培养96孔板中，体积为100μL，将培养板放在细胞培养箱中，细胞贴壁之后加入浓度梯度的探针GPx4-QP1TF和GPx4-QP3TF(探针浓度分别为：分别是1.25、2.5、5.0、10.0、15.0μM)，放在细胞培养箱中继续孵育，孵育结束之后，MTT测细胞存活率，结果如图4所示。从中可以看出，多肽配体3有抑制GPx4活性的作用，因此含有多肽配体3的探针GPx4-QP3TF对细胞存活率有较大的影响(例如，15μM的GPx4-QP3TF与细胞共孵育后，细胞存活率仅为50％)。鉴于此，后续可以依据不同的需求选择不同的荧光探针。
实施例7：荧光探针用于活细胞中GPx4的成像
提前一天按照104细胞/孔的密度将细胞铺在共聚焦成像的8孔板中，体积为100μL，将培养板放在细胞培养箱中，细胞贴壁之后分别加入10μMGPx4-QP1TF、GPx4-QP2TF和GPx4-QP3TF，与细胞共孵育1.5h，孵育结束之后用共聚焦荧光显微镜拍照。加入探针后的HEK293细胞在共聚焦激光扫描显微镜下可以清晰成像。图5所示为细胞与探针共孵育后的共聚焦荧光扫描显微镜的照片，从中可见，GPx4-QP1TF、GPx4-QP2TF和GPx4-QP3TF均可用于活细胞中GPx4的实时成像，从而为GPx4重要生物功能的深入研究与理解提供有力的工具。
上述实施例仅为示例，例如，染料分子还可以采用现有技术已知的染料分子，如荧光素染料、花青染料、罗丹明染料等；猝灭分子同样也可以采用现有技术已知的猝灭分子，如偶氮苯、DABCYL、TAMRA、BHQ-1、BHQ-2以及BHQ-3。另外，关于固相合成方法，其他未详细说明之处，可直接参照固相合成方法的相关现有技术进行；该方法所采用的反应物浓度、用量、反应时间等也均可以根据实际情况灵活调整。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种点亮型GPx4荧光分子探针，其特征在于，该探针中含有配体、荧光染料分子和猝灭分子，其中，所述配体能够特异性地结合谷胱甘肽过氧化物酶4（GPx4）；
所述猝灭分子能够猝灭所述荧光染料分子的荧光；当所述配体与谷胱甘肽过氧化物酶4（GPx4）结合时，所述猝灭分子能够从探针上脱离，从而点亮荧光染料分子、恢复荧光；
其中，所述配体选自多肽配体，其氨基酸序列如SEQ ID No. 1～SEQ ID No. 3中任意一者所示。
2.如权利要求1所述点亮型GPx4荧光分子探针，其特征在于，所述荧光染料分子选自荧光素染料、花青染料、罗丹明染料、香豆素类染料、多环芳烃类染料、NBD-胺类染料、萘酰亚胺类染料、噻嗪类染料和噁嗪类染料。
3.如权利要求1所述点亮型GPx4荧光分子探针，其特征在于，所述猝灭分子选自偶氮类分子。
4.如权利要求3所述点亮型GPx4荧光分子探针，其特征在于，所述偶氮类分子为DABCYL、TAMRA、BHQ-1、BHQ-2或BHQ-3。
5.如权利要求1所述点亮型GPx4荧光分子探针，其特征在于，所述猝灭分子是通过固相合成与所述多肽配体的氨基酸缩合相连的。
6.如权利要求1－5任意一项所述点亮型GPx4荧光分子探针在制备用于对活细胞中GPx4实时成像的荧光染料中的应用。
7.如权利要求1－5任意一项所述点亮型GPx4荧光分子探针点亮型GPx4荧光分子探针在制备GPx4检测试剂中的应用。
8.如权利要求1－5任意一项所述点亮型GPx4荧光分子探针点亮型GPx4荧光分子探针在制备GPx4标记物中的应用。
9. 如权利要求1－5任意一项所述点亮型GPx4荧光分子探针点亮型GPx4荧光分子探针在制备活细胞中GPx4活性抑制剂中的应用，其特征在于，点亮型GPx4荧光分子探针中的配体具体为氨基酸序列如SEQ ID No. 3所示的多肽配体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210774449.8A CN115925803B (zh) | 2022-07-01 | 2022-07-01 | 一种点亮型GPx4荧光分子探针及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210774449.8A CN115925803B (zh) | 2022-07-01 | 2022-07-01 | 一种点亮型GPx4荧光分子探针及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115925803A CN115925803A (zh) | 2023-04-07 |
| CN115925803B true CN115925803B (zh) | 2024-05-14 |
Family
ID=86556355
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210774449.8A Active CN115925803B (zh) | 2022-07-01 | 2022-07-01 | 一种点亮型GPx4荧光分子探针及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115925803B (zh) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104672300A (zh) * | 2015-03-17 | 2015-06-03 | 武汉大学 | 一种双酶敏感型荧光探针及其制备方法和应用 |
| CN111575362A (zh) * | 2020-04-20 | 2020-08-25 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种预测系统性红斑狼疮疾病活动度的药物 |
| CN111689954A (zh) * | 2020-07-23 | 2020-09-22 | 济南大学 | 一种检测次氯酸并引发光动力学治疗和铁死亡的荧光探针 |
| CN113186248A (zh) * | 2021-04-29 | 2021-07-30 | 华中科技大学 | 一种基于背景信号抑制探针的8-氧代鸟嘌呤dna糖基化酶测定方法、试剂盒及其应用 |
| WO2021163033A1 (en) * | 2020-02-10 | 2021-08-19 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Compositions and methods for detecting cells undergoing ferroptosis using an antibody |
| CN114456116A (zh) * | 2022-02-23 | 2022-05-10 | 南京师范大学 | 一种以萘酰亚胺为骨架的小分子抗癌剂及其制备方法和应用 |
| CN114560913A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-05-31 | 中国地质大学（武汉） | 一种用于癌症治疗的多肽探针及其制备方法和应用 |
-
2022
- 2022-07-01 CN CN202210774449.8A patent/CN115925803B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104672300A (zh) * | 2015-03-17 | 2015-06-03 | 武汉大学 | 一种双酶敏感型荧光探针及其制备方法和应用 |
| WO2021163033A1 (en) * | 2020-02-10 | 2021-08-19 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Compositions and methods for detecting cells undergoing ferroptosis using an antibody |
| CN111575362A (zh) * | 2020-04-20 | 2020-08-25 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种预测系统性红斑狼疮疾病活动度的药物 |
| CN111689954A (zh) * | 2020-07-23 | 2020-09-22 | 济南大学 | 一种检测次氯酸并引发光动力学治疗和铁死亡的荧光探针 |
| CN113186248A (zh) * | 2021-04-29 | 2021-07-30 | 华中科技大学 | 一种基于背景信号抑制探针的8-氧代鸟嘌呤dna糖基化酶测定方法、试剂盒及其应用 |
| CN114560913A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-05-31 | 中国地质大学（武汉） | 一种用于癌症治疗的多肽探针及其制备方法和应用 |
| CN114456116A (zh) * | 2022-02-23 | 2022-05-10 | 南京师范大学 | 一种以萘酰亚胺为骨架的小分子抗癌剂及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Fluorescent Turn-On Probes for Visualizing GPx4 Levels in Live Cells and Predicting Drug Sensitivity;Shuangshuang Wang等;analytical chemistry;20230531(第95期);8939−8947 * |
| 含单个色氨酸的多肽分子的荧光特性研究:pH及金属离子的响应;秦翠芳;李磊;俞宪同;常孟方;曹潇丹;潘海峰;张三军;陈缙泉;徐建华;;光谱学与光谱分析;20170215(第02期);全文 * |
| 谷胱甘肽过氧化物酶4对结直肠癌细胞系SW480瑞格菲尼抵抗的影响及机制研究;张波;霍明东;马俊;夏国豪;;中国临床药理学杂志;20200328(第06期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115925803A (zh) | 2023-04-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107266562B (zh) | 一种特异性识别胶原蛋白的胶原多肽探针及其制备和成像方法 | |
| CN111175283B (zh) | 一种靶向识别胶原蛋白的多肽拉曼探针及其制备方法 | |
| CN107530453A (zh) | 用于基质金属蛋白酶的光学探针 | |
| CN112724193B (zh) | 一种基于多肽-锰-羰基复合物的co释放分子的固相合成方法及其应用 | |
| Vázquez et al. | 6-N, N-Dimethylamino-2, 3-naphthalimide: a new environment-sensitive fluorescent probe in δ-and μ-selective opioid peptides | |
| Piloto et al. | A naphtho [2, 1-b] furan as a new fluorescent label: synthesis and spectral characterisation | |
| EP1176987A2 (de) | Kurzkettige peptid-farbstoffkonjugate als kontrastmittel für die optische diagnostik | |
| CN112500386B (zh) | 基于吡罗红肟的近红外HClO荧光探针、制备及其应用 | |
| CN106929006B (zh) | 一种以萘酰亚胺为母核的识别半胱氨酸和同型半胱氨酸荧光探针及其制备与应用 | |
| JPWO2002090985A1 (ja) | ペプチド固定化基板及びそれを用いた標的タンパク質の測定方法 | |
| CN115925803B (zh) | 一种点亮型GPx4荧光分子探针及其应用 | |
| CN110041311A (zh) | 一种荧光探针分子ml-fp及其制备方法和应用 | |
| CN110186891B (zh) | 一种特异性结合铜离子和半胱氨酸的多肽荧光探针 | |
| CN107703109A (zh) | 二维硫化钼多肽复合材料及其在靶向cd47癌症标记中的应用 | |
| CN114410300B (zh) | 一种荧光探针及其制备方法和生物应用 | |
| CN113616807A (zh) | 一种靶向线粒体的多肽及其制备方法与应用 | |
| CN114478707A (zh) | 一种构象锁定蜂毒肽衍生物、偶联物及其制备和用途 | |
| US7371728B2 (en) | Prostate-specific antigen probes for optical imaging | |
| Xu | Solid Phase Synthesis of Modular Peptide-Based Targeted Molecular Imaging Agents | |
| CN102174319A (zh) | 一类针对半胱氨酸蛋白酶c1家族蛋白酶的透膜荧光小分子探针及其合成、纯化的方法和应用 | |
| WO2024117541A1 (ko) | 광화학적 전환 가능한 펩티드-소분자 복합체 | |
| Ouyang et al. | Bioimaging nitric oxide in activated macrophages in vitro and hepatic inflammation in vivo based on a copper–naphthoimidazol coordination compound | |
| CN111777668B (zh) | 一种基于海洋环肽Samoamide A的改造多肽、合成方法及应用 | |
| CN116041225B (zh) | 一种前列腺特异性膜抗原靶向的aie荧光化合物及制备方法 | |
| CN111777669B (zh) | 一种抗肿瘤活性肽、合成方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |