CN111575362A - 一种预测系统性红斑狼疮疾病活动度的药物 - Google Patents

一种预测系统性红斑狼疮疾病活动度的药物 Download PDF

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Abstract

本发明公开了对GPX4或其片段为反应性的抗体或者GPX4基因在制备用于预测红斑狼疮疾病活动度的药物中的用途。狼疮患者中性粒细胞的GPX4蛋白含量低于健康人，这种含量降低与疾病活动度有关，疾病活动度越高，下降程度越严重。在有效的临床治疗后，GPX4的含量也随之上升。GPX4中性粒细胞条件敲低的动物模型里也验证了这一点，即：中性粒细胞GPX4含量降低会诱发小鼠出现狼疮表型。这些结果提示GPX4是一个可以预测狼疮疾病活动度的分子。

Description

一种预测系统性红斑狼疮疾病活动度的药物
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种预测系统性红斑狼疮疾病活动度的药物。
背景技术
系统性红斑狼疮(SLE)是一种严重的疾病，涉及免疫系统失调，致病性自身抗体过量产生(及其在血清中的上调)以及多种免疫系统介导的损伤。自1982年以来，抗双链(ds)DNA抗体已成为SLE的一些经典诊断和病原学标准。抗dsDNA抗体具有不同的亚类，包括IgA，IgE，IgG和IgM。尽管如此，并非所有这些都同样对SLE的组织损伤做出了贡献。与人类疾病活动相关的是IgG和IgA，而不是IgM。通常，核抗原，例如dsDNA，是免疫系统无法接近的，因为它们局限于细胞核和线粒体，并被细胞质和内体中的DNase迅速降解。但是，暴露于紫外线，感染和药物后，核材料可以从凋亡细胞中释放出来。细胞通过不同的过程经历死亡。NETosis期间，细胞会挤出DNA和嗜中性粒细胞胞外陷阱(NETs)，其中的DNA被抗菌物质覆盖。在细胞凋亡中，DNA裂解导致凋亡小体的形成，其中包含与DNA结合的微粒。在坏死中，细胞裂解后释放出高分子量的DNA。释放的DNA可被抗DNA抗体识别并组成免疫复合物。未成熟的树突状细胞(iDC)可以通过FcγRs捕获含有免疫复合物的细胞外核酸。这些细胞随后被激活，并从周围组织迁移到iDC经历成熟的淋巴器官。激活的DC会诱导共刺激分子(例如CD80，CD86和PD-L1)的过量表达。此外，这些DC触发MHC II分子的重新分布和促炎细胞因子的产生，例如相互关联的干扰素α(IFN-α)，肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素6(IL-6)。激活B细胞和T细胞。作为调节先天性免疫应答的关键因素，IFN-1可以上调B细胞活化因子，促进B细胞分化并抑制调节性T细胞(Treg)功能。
补体系统(Complement system)是由补体及其调节因子和相关膜蛋白组成的机体免疫反应系统。在补体各成分中，C3的血清含量最高；在功能上，C3亦居于中心地位，它既是几条激活途径的交汇，又是C3b依赖性阳性反馈环路的基础。经典激活途径、凝集素激活途径及旁路激活途径三条途径可被补体激活，从而产生溶细胞、清除免疫复合物、介导炎症等效应，同时是体内具有重要生物学作用的效应系统和效应放大系统。
狼疮患者常常补体C3、C4水平降低，C3和C4同时降低对SLE敏感度为45％，特异度范围为88％至96％。
血清中抗双链DNA抗体的水平倾向于反映疾病的活动，但并不是在所有患者中都如此。在既有抗双链DNA自身抗体水平升高又表现为临床病情不活动的患者中，有80％的患者在检测到这些抗体水平升高后的5年内复发。尽管抗双链DNA抗体是狼疮中研究最广泛的自身抗体，但其他抗体在临床表现中也起作用，特别是在自身免疫性溶血性贫血，血小板减少症，皮肤病和新生儿狼疮中。
已证实C3的缺陷并不能够诱发狼疮，因此，C3仅有诊断价值，而缺少作为治疗靶点的价值。
尽管“红斑狼疮”一词由19世纪的医生来描述皮肤病变，但花了将近100年的时间才意识到这种疾病是全身性的，是由自身免疫反应异常引起的。该疾病的临床异质性迫使必须建立11条标准，而正式诊断系统性红斑狼疮(SLE)则需要满足其中4条标准。SLE的多种临床表现给临床医生带来了挑战。
SLEDAI评分是目前最为广泛应用的评价狼疮疾病活动度的方法，但主要以临床症状和实验室检查为评价指标，缺乏分子水平的证据。
铁死亡是一种依赖于脂质过氧化反应驱动的非凋亡性细胞死亡方式；其发生过程需要细胞内富含可利用的铁。2012年Dixon首次发现并报道了这种新型的细胞死亡方式。铁死亡是一种全新的细胞死亡模式，它在形态学、生物化学及遗传学方面与凋亡、焦亡、自噬等有明显的不同。在形态学方面，发生铁死亡的细胞主要表现为线粒体体积缩小、双层膜密度增加、线粒体脊减少或消失。生化方面，谷胱甘肽耗竭，谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)活性下降，脂质氧化物不能经GPX4催化的谷胱甘肽还原反应代谢，继而二价铁离子以类似Fenton反应的方式氧化脂质产生大量活性氧簇(ROS)，促使细胞发生铁死亡。根据已有报道，抑制铁死亡发生的最关键分子是GPX4。对于铁死亡的发生及调控机制尚处于起始阶段，自身免疫病领域暂时尚未有研究报道铁死亡参与自身免疫病，特别是系统性红斑狼疮的发生。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种预测系统性红斑狼疮疾病活动度的药物。
首先，本发明提供对GPX4或其片段为反应性的抗体或者GPX4基因在制备用于预测红斑狼疮疾病活动度的药物中的用途。
在本发明一个实施方案中，所述诊断包括：测定获自呈现红斑狼疮的患者的生物样品中GPX4或其片段的水平，GPX4或其片段的水平与红斑狼疮疾病活动度呈负相关。
其中，GPX4或其片段的水平通过以下步骤来测量，包括：
a.使来自患者的生物样品与所述抗体接触；
b.在生物样品中存在的GPX4或其片段与所述抗体之间形成抗体-蛋白质复合物；
c.洗涤除去任何未结合的抗体；
d.添加被标记的并且对来自生物样品的抗体为反应性的检测抗体；
e.洗涤来除去任何未结合的被标记的所述检测抗体；
f.将所述检测抗体的标记物转化为可检测信号。
其中，所述检测抗体通过共价连接到酶、具有荧光化合物或金属的标记物、或具有化学发光化合物的标记物来标记。
其中，所述的对GPX4或其片段为反应性的抗体沉积或固定在固相支持物上。
其中，所述的支持物是乳胶珠子、多孔平板或膜条的形式。
在本发明另一个实施方案中，所述诊断包括：测定获自呈现自身免疫性疾病的患者的生物样品中GPX4基因的表达水平，GPX4基因的表达水平与红斑狼疮疾病活动度呈负相关。
其中，用SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物测定GPX4基因的表达水平。
其中，所述生物样品为外周血或者外周血的中性粒细胞。
本发明还提供一种用于预测红斑狼疮疾病活动度的试剂盒，含有对GPX4或其片段为反应性的抗体或者用SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物。
狼疮患者中性粒细胞的GPX4蛋白含量低于健康人，这种含量降低与疾病活动度有关，疾病活动度越高，下降程度越严重。在有效的临床治疗后，GPX4的含量也随之上升。GPX4中性粒细胞条件敲低的动物模型里也验证了这一点，即：中性粒细胞GPX4含量降低会诱发小鼠出现狼疮表型。这些结果提示GPX4是一个可以预测狼疮疾病活动度的分子。
附图说明
图1所示为SLE治疗前后，中性粒细胞的GPX4蛋白含量对比，以及对应的SLEDAI评分。
图2所示为SLE和HC的中性粒细胞的GPX4 mRNA含量对比。
图3所示为SLE和HC的中性粒细胞的GPX4蛋白含量对比，以及对应的SLEDAI评分。
图4所示为中性粒GPX4敲低小鼠的蛋白敲低效果验证。
图5所示为中性粒GPX4敲低小鼠的皮损。
图6所示为中性粒GPX4敲低小鼠的肾损伤和蛋白尿。
图7所示为中性粒GPX4敲低小鼠的血浆抗双链DNA抗体和补体C3。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
本研究得到北京协和医院(PUMCH)医学伦理委员会的批准，并符合伦理准则，所有参与者都签署了知情同意书。
实施例没有明确说明的试验方法，均是本领域常规的试验方法。
本研究得到北京协和医院(PUMCH)医学伦理委员会的批准，并符合伦理准则。所有参与者都签署了知情同意书。根据美国风湿病学会建立的标准，从98位未接受过治疗的SLE患者中获取外周血样本。收集了来自这98名SLE患者的治疗后血样。在采血当天对中性粒细胞计数进行了测量和分析。如果患者在入组前三个月内接受了抗生素治疗，则被排除在外。患有慢性或急性感染或严重基础疾病(例如急性冠状动脉综合征，慢性肾衰竭和癌症)的患者也被排除在外。健康对照是没有自身免疫，炎症或感染性疾病的年龄和性别匹配的个体。
实施例1 GPX4表达水平在狼疮患者中性粒细胞里下降
使用K2E(EDTA)管(BD Vacutainer)收集健康对照和SLE患者的外周血。为了分离中性粒细胞，按照制造商的说明将血液分层放置在Ficoll-Hypaque密度梯度上，进行离心分离，并收集该梯度下的沉淀。用裂解缓冲液(BD)裂解红细胞。如使用CD16(Biosciences)和CD11b(Biolegend)抗体通过流式细胞术所证实，该方法可获得细胞比例大于98％的中性粒细胞。
使用RIPA缓冲液(Huaxingbio)补充了蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂混合物(Thermo Fisher Scientific)，在冰上裂解了新鲜分离的中性粒细胞。使用BCA蛋白质测定试剂盒(23225，赛默飞世尔科技)，根据制造商的说明确定裂解物的蛋白质浓度。将细胞裂解液与SDS在95℃煮沸10分钟，然后进行12％SDS-PAGE，然后转移至PVDF膜(Biorad)。封闭膜，然后与抗GPX4(1：1000)，抗CREM(1：1000)，抗CaMKIV(1：1000)，抗组蛋白3(1：1000)或抗GAPDH(1：1000)抗体在4℃过夜。洗涤膜，并与抗兔IgG-HRP(1：5000)一起温育1小时。用蛋白质印迹检测系统Tanon-5200(Bio-Tanon，中国)将蛋白条带可视化。灰度值分析通过ImageJ(1.50g，NIH)软件进行。证明了GPX4蛋白水平在狼疮患者中性粒细胞中低于健康人(图1A)。收集这些患者的临床症状和实验室检查结果，根据SLEDAI评分进行打分。SLEDAI评分：如患者出现以下症状，每一条记8分：癫痫发作，精神症状，器质性脑病，视觉受损，颅神经异常，狼疮性头痛，脑血管意外，脉管炎；如患者出现以下症状，每一条记4分：关节炎，肌炎，管型尿，血尿，蛋白尿，脓尿；如患者出现以下症状，每一条记2分：脱发，新出现皮疹，粘膜溃疡，胸膜炎；如患者出现以下症状，每一条记1分：发热，血小板降低，白细胞减少。将得分累积，0-4分代表病情基本无活动，5-9分代表轻度活动，10-14分代表中度活动，≥15分代表重度活动。可以看到，狼疮患者疾病活动度下降以后，GPX4的表达量上升(图1B)。
用TRIzol(10296010，Invitrogen)提取总RNA，并使用PrimeScriptTM RT MasterMix(RR036A，Takara Bio)转化为cDNA。使用SYBR Premix Ex TaqTMⅡ(RR820A，TakaraBio)用Applied Biosystems 7500进行实时定量PCR，以GAPDH为内参基因，序列如下所示。
GAPDH
Forward:5’-TCAACGACCACTTTGTCAAGCTCA-3’
Reverse:5’-GCTGGTGGTCCAGGGGTCTTACT-3’,
GPX4
Forward:5’-AAGTGGATGAAGATCCAACCCAAG-3’
Reverse:5’-GGGGCAGGTCCTTCTCTATCA-3’,
结果如图2所示，证明了GPX4的mRNA水平在狼疮患者中性粒细胞中低于健康人。
实施例2 GPX4蛋白水平与疾病活动度相关
为了检测SLE患者中性粒细胞内GPX4的表达，在用BD Cytofix/Cytoperm溶液固定并透化中性粒细胞后，抗人GPX4抗体(ab125066，Abcam)对细胞进行孵育。温育2小时后，洗涤细胞，然后用驴抗兔IgG Alexa Fluor 647(ab150075，Abcam)染色半小时，洗涤细胞三遍，流式细胞仪检测不同个体GPX4(即Alexa Fluor 647)的荧光强度。流式细胞术同样证明了GPX4蛋白水平在狼疮患者中性粒细胞中低于健康人(图3A)。收集这些患者的临床症状和实验室检查结果，根据SLEDAI评分进行打分。SLEDAI评分：如患者出现以下症状，每一条记8分：癫痫发作，精神症状，器质性脑病，视觉受损，颅神经异常，狼疮性头痛，脑血管意外，脉管炎；如患者出现以下症状，每一条记4分：关节炎，肌炎，管型尿，血尿，蛋白尿，脓尿；如患者出现以下症状，每一条记2分：脱发，新出现皮疹，粘膜溃疡，胸膜炎；如患者出现以下症状，每一条记1分：发热，血小板降低，白细胞减少。将得分累积，0-4分代表病情基本无活动，5-9分代表轻度活动，10-14分代表中度活动，≥15分代表重度活动。最后，将患者中性粒细胞的GPX4蛋白荧光值(即Alexa Fluor 647)与疾病活动度SLEDAI评分做相关关系评分，发现二者负相关(图3B)。因此，中性粒细胞的GPX4含量可以作为狼疮疾病活动度的预测分子。
实施例3在中性粒细胞敲除GPX4会诱发小鼠出现狼疮表型
C57/B6-GPX4fl/fl(027964,Jackson)和C57/B6-LysMcre(004781,Jackson)小鼠购自Jackson lab。GPX4等位基因的loxP位点位于GPX4基因的第外显子2-4之间。LysMcre敲入的等位基因具有一个插入到溶菌酶2基因(Lyz2)的第一个编码ATG中的核定位Cre重组酶，这既消除了内源性Lyz2基因的功能，又将NLS-Cre表达置于内源性Lyz2启动子/增强子元件的控制之下。将GPX4fl/fl小鼠与LysMcre小鼠杂交后，后代鼠再与LysMcre小鼠回交，通过基因型鉴定，获得GPX4fl/wtLysMcre+小鼠(GPX4为杂合，LysMcre等位基因为纯合)。GPX4fl/fl和GPX4fl/wtLysMcre+小鼠用于实验。根据目前的研究，GPX4是清除胞内Lipid-ROS，并阻断铁死亡发生的最关键分子，GPX4的含量降低或缺失将会导致细胞过氧化物的致死性累积，即铁死亡的发生。我们繁育出的GPX4fl/wtLysMcre+小鼠，该小鼠在髓系来源的中性粒细胞中敲低了GPX4的表达(图4A)，促使中性粒细胞发生铁死亡。但并没有在其他类型细胞里敲低GPX4(图4B)
在GPX4fl/wtLysMcre+小鼠3月大小和6月大小观察皮肤改变，可以观察到GPX4fl/ wtLysMcre+小鼠出现明显的脱毛，类似狼疮患者所出现的脱发症状。所示为GPX4fl/wtLysMCre+小鼠的代表性皮肤病变(图5)。
在第4个月，获取GPX4fl/fl和GPX4fl/wtLysMCre+小鼠肾脏，并切片做HE染色，图中显示代表性肾小球区域(图6A)。通过BCA评估的GPX4fl/fl和GPX4fl/wtLysMCre+小鼠的蛋白尿(GPX4fl/fl：雌性＝15，雄性＝4，GPX4fl/wtLysMCre+：雌性＝20，雄性＝11)。发现这种小鼠在4月大小显著出现蛋白尿(图6B)。以上结果提示中性粒细胞GPX4降低会出现明显的肾炎，类似狼疮患者的狼疮性肾炎。
用测定缓冲液将小鼠血清以1：100稀释用于检测抗dsDNA抗体，并用1：25000稀释以检测补体成分C3。按照制造商的规程，使用小鼠抗dsDNA IgG ELISA试剂盒(5120，AlphaDiagnostic Intl.Inc。)和补体3ELISA试剂盒(6270，Alpha Diagnostic Intl.Inc。)进行测定。(GPX4fl/fl：雌性＝6，雄性＝6，GPX4fl/wtLysMCre+：雌性(3m/6m)＝16/29岁，雄性(3m/6m)＝7/7)，可以看到，GPX4fl/wtLysMCre+小鼠抗dsDNA抗体持续升高，而C3持续下降。类似狼疮患者的实验室检查结果，证明GPX4fl/wtLysMCre+小鼠出现狼疮病情(图7)。也证明中性粒细胞GPX4降低会导致狼疮病情的出现以及病情的加重。
动物实验进一步提示GPX4在狼疮发病中的作用，也为GPX4作为疾病活动度标记物提供了理论支持。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国医学科学院北京协和医院
<120> 一种预测系统性红斑狼疮疾病活动度的药物
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 24
<212> DNA
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 1
tcaacgacca ctttgtcaag ctca 24
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 2
gctggtggtc caggggtctt act 23
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 3
aagtggatga agatccaacc caag 24
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 4
ggggcaggtc cttctctatc a 21

Claims (10)

1.对GPX4或其片段为反应性的抗体或者GPX4基因在制备用于预测红斑狼疮疾病活动度的药物中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述诊断包括：测定获自呈现红斑狼疮的患者的生物样品中GPX4或其片段的水平，GPX4或其片段的水平与红斑狼疮疾病活动度呈负相关。
3.如权利要求1或2所述的用途，其中，GPX4或其片段的水平通过以下步骤来测量，包括：
a.使来自患者的生物样品与所述抗体接触；
b.在生物样品中存在的GPX4或其片段与所述抗体之间形成抗体-蛋白质复合物；
c.洗涤除去任何未结合的抗体；
d.添加被标记的并且对来自生物样品的抗体为反应性的检测抗体；
e.洗涤来除去任何未结合的被标记的所述检测抗体；
f.将所述检测抗体的标记物转化为可检测信号。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述检测抗体通过共价连接到酶、具有荧光化合物或金属的标记物、或具有化学发光化合物的标记物来标记。
5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的对GPX4或其片段为反应性的抗体沉积或固定在固相支持物上。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的支持物是乳胶珠子、多孔平板或膜条的形式。
7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述诊断包括：测定获自呈现自身免疫性疾病的患者的生物样品中GPX4基因的表达水平，GPX4基因的表达水平与红斑狼疮疾病活动度呈负相关。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，用SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物测定GPX4基因的表达水平。
9.如权利要求1-8任一项所述的用途，所述生物样品为外周血或者外周血中的中性粒细胞。
10.含有对GPX4或其片段为反应性的抗体或者权利要求8所述引物的用于预测红斑狼疮疾病活动度的试剂盒。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115925803A (zh) * 2022-07-01 2023-04-07 华中科技大学 一种点亮型GPx4荧光分子探针及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105611930A (zh) * 2013-07-15 2016-05-25 亥姆霍兹慕尼黑中心-德国环境与健康研究中心（股份有限公司） 作为非凋亡调控性细胞死亡抑制剂的螺环喹喔啉衍生物
WO2019097187A1 (fr) * 2017-11-17 2019-05-23 Balmes Transplantation Nouveaux medicaments cytoprotecteurs
CN110746376A (zh) * 2018-07-22 2020-02-04 上海星叶医药科技有限公司 苯并异硒唑酮胺类化合物及其制备方法和用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105611930A (zh) * 2013-07-15 2016-05-25 亥姆霍兹慕尼黑中心-德国环境与健康研究中心（股份有限公司） 作为非凋亡调控性细胞死亡抑制剂的螺环喹喔啉衍生物
WO2019097187A1 (fr) * 2017-11-17 2019-05-23 Balmes Transplantation Nouveaux medicaments cytoprotecteurs
CN110746376A (zh) * 2018-07-22 2020-02-04 上海星叶医药科技有限公司 苯并异硒唑酮胺类化合物及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
H-T LEE等: "Increased 8-hydroxy-2"-deoxyguanosine in plasma and decreased mRNA expression of human 8-oxoguanine DNA glycosylase 1, anti-oxidant enzymes, mitochondrial biogenesis-related proteins and glycolytic enzymes in leucocytes in patients with systemic lupus eryt", 《CLINICAL AND EXPERIMENTAL IMMUNOLOGY》 *
徐文慧等: "铁死亡通路与中药干预机制研究进展", 《中国中药杂志》 *
韩明等: "《贝叶斯统计 基于R和BUGS的应用》", 31 October 2017, 同济大学出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115925803A (zh) * 2022-07-01 2023-04-07 华中科技大学 一种点亮型GPx4荧光分子探针及其应用
CN115925803B (zh) * 2022-07-01 2024-05-14 华中科技大学 一种点亮型GPx4荧光分子探针及其应用

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