CN115901988A - 厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用 - Google Patents
厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用，属于药物检测技术领域，所述构建方法是取厚朴麻黄汤制备供试品溶液，所得供试品溶液经HPLC‑Q‑TOF‑MS法检测，即得所述厚朴麻黄汤指纹图谱；所述HPLC‑Q‑TOF‑MS中高效液相色谱采用的流动相A为乙腈、流动相B为浓度为0.1～0.3wt％的甲酸水溶液；并获得厚朴麻黄汤的标准指纹图谱，用于厚朴麻黄汤的研究/开发/生产/临床应用全过程中质量评价或控制。本发明的构建方法能够将厚朴麻黄汤中主要化学成分在特征图谱中均有所体现，并指认18种化学成分，所建立的标准指纹图谱能够较为全面地反映厚朴麻黄汤的质量信息。
Description
技术领域
本发明涉及药物检测技术，尤其涉及一种厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用。
背景技术
厚朴麻黄汤出自张仲景所著《金匮要略》：厚朴五两，麻黄四两，石膏如鸡子大，杏仁半升，半夏半升，干姜二两，细辛二两，小麦一升，五味子半升。上九味，以水一斗二升，先煮小麦熟，去滓，内诸药，煮取三升。作为《古代经典名方目录(第一批)》的收载方剂，厚朴麻黄汤疗效确切，多项临床研究证实该方可有效缓解慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病及肺气肿患者的临床症状，降低血清炎性因子水平。现阶段尚无厚朴麻黄汤质量控制的相关研究报道，质量属性不明确，限制了其进一步的制剂开发。
特征图谱是建立一种用于分析被测物质中某类或某几类成分的色谱图谱或光谱图谱。目前，特征图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的有效成分，是当前中药界关注的热点问题，近年来，人们已经逐步认识到，只针对某一化学成分而形成的质量控制方法，已经不能恰当的反映产品的内在质量，中药特征图谱作为一种多指标的质量控制模式，能够更好的控制产品内在质量。因此，通过构建厚朴麻黄汤指纹图谱能够有效对厚朴麻黄汤进行质量控制。
发明内容
针对上述问题，本发明提供一种厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：
一种厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，所述构建方法是取厚朴麻黄汤制备供试品溶液，所得供试品溶液经HPLC-Q-TOF-MS法检测，即得所述厚朴麻黄汤指纹图谱；
所述HPLC-Q-TOF-MS中高效液相色谱采用的流动相A为乙腈、流动相B为浓度为0.1～0.3wt％的甲酸水溶液。
进一步的，所述高效液相色谱的洗脱方式为梯度洗脱；
所述梯度洗脱的洗脱条件为：
0～16min，5％流动相A，95％流动相B；
16～18min，5％→9％流动相A，95％→91％流动相B；
18～28min，9％→10％流动相A，91％→90％流动相B；
28～32min，10％流动相A，90％流动相B；
32～40min，10％→14％流动相A，90％→86％流动相B；
40～52min，14％→16％流动相A，86％→84％流动相B；
52～63min，16％→20％流动相A，84％→80％流动相B；
63～73min，20％→33％流动相A，80％→67％流动相B；
73～80min，33％→70％流动相A，67％→30％流动相B；
80～90min，70％流动相A，30％流动相B。
进一步的，所述高效液相色谱的检测波长为280nm。
进一步的，所述高效液相色谱的柱温为34～36℃、流速为0.8～1.2mL/min。
进一步的，所述HPLC-Q-TOF-MS的质谱条件为：
干燥器(N2)流速为10.00L/min；温度为320℃；雾化器压力为45psig；毛细管电压为4000V；碎裂器为170V，skimmer65 V，OCT 1RF Vpp,750V；采集频率皆为3spectra/s；离子模式为正离子模式。
进一步的，所述供试品溶液是取100重量份厚朴麻黄汤加水溶解，并定容至10体积份制得；
所述重量份与体积份的比例关系为mg：mL。
进一步的，所述厚朴麻黄汤指纹图谱共获得并指认18个特征峰。
进一步的，18个所述特征峰的相对保留时间及对应的化学成分分别为：
1号峰对应的化学成分为苯丙氨酸、保留时间为9.180；
2号峰对应的化学成分为去甲基麻黄碱、保留时间为10.170；
3号峰对应的化学成分为去甲基伪麻黄碱、保留时间为11.431；
4号峰对应的化学成分为麻黄碱、保留时间为14.296；
5号峰对应的化学成分为伪麻黄碱、保留时间为15.661；
6号峰对应的化学成分为甲基麻黄碱、保留时间为17.093；
7号峰对应的化学成分为甲基伪麻黄碱、保留时间为17.503；
8号峰对应的化学成分为木兰箭毒碱、保留时间为27.598；
9号峰对应的化学成分为苦杏仁苷、保留时间为33.020；
10号峰对应的化学成分为木兰碱、保留时间为38.272；
11号峰对应的化学成分为瑞枯灵、保留时间为42.092；
12号峰对应的化学成分为Oblongine、保留时间为43.286；
13号峰对应的化学成分为巴婆碱、保留时间为48.913；
14号峰对应的化学成分为6-姜烯酚、保留时间为82.204；
15号峰对应的化学成分为南五味子木脂素L、保留时间为82.613；
16号峰对应的化学成分为五味子醇甲、保留时间为82.647；
17号峰对应的化学成分为和厚朴酚、保留时间为84.523；
18号峰对应的化学成分为厚朴酚、保留时间为86.604。。
一种上述构建方法获得的厚朴麻黄汤的标准指纹图谱。
一种上述标准指纹图谱在厚朴麻黄汤的研究/开发/生产/临床应用全过程质量评价或控制中的应用。
本发明的厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用的有益效果为：
本发明的构建方法能够将厚朴麻黄汤中主要化学成分在特征图谱中均有所体现，并指认18种化学成分，所建立的标准指纹图谱能够较为全面地反映厚朴麻黄汤的质量信息；
本发明通过改变洗脱体系，利用厚朴麻黄汤中不同有效成分理化性质不同的特点，改变检测波长，从而达到将厚朴麻黄汤中不同有效成分很好分离且同时检出的目的；
本发明通过调整流动相和选择合适的洗脱梯度，获得了分离度好、基准线较平稳，出峰较多且更能反映厚朴麻黄汤质量的标准指纹图谱；
本发明的检测波长显著优于其它检测波长，通过本发明的检测波长能够获得出峰更好的厚朴麻黄汤的标准指纹图谱；
本发明通过选择合适的色谱柱、柱温、流速等工艺条件，有效优化了分离条件，从而提高了厚朴麻黄汤标准指纹图谱的出峰稳定性；
本发明通过选用合适的质谱条件，能够一次性对18种化学成分进行指认，降低了化学成分指认难度；
本发明的构建方法还具有良好的可行性、稳定性和重现性；
本发明所获得的厚朴麻黄汤的标准指纹图谱具有18个特征峰，能够为后续厚朴麻黄汤在研究、开发、生产、临床应用全过程中的质量监控提供有效保障；
利用本发明所获得的厚朴麻黄汤的标准指纹图谱中特征峰的有无及特征，可以全面监控厚朴麻黄汤的产品质量，通过色谱指纹特征相似程度的比较，评价厚朴麻黄汤的优劣、考察稳定性和一致性，弥补了现行质量控制方法的不足，同时还可以监控厚朴麻黄汤生产工艺的稳定性，保证其质量的稳定、均一、可控；
本发明所获得的厚朴麻黄汤的标准指纹图谱提高了厚朴麻黄汤成品、半成品的质量监控标准，有效防止了产品伪造事件的发生，保证了厚朴麻黄汤的正常生产、流通秩序；在本发明的基础上，还可以开展指纹图谱信息与药效活性信息的相关性研究，从而深入地阐明厚朴麻黄汤的内在化学成分与该制剂疗效的相关性。
附图说明
图1是本发明实施例1中厚朴麻黄汤的指纹图谱；
图2是本发明实施例1中麻黄碱的一级与二级质谱图；
图3是本发明实施例1中木兰箭毒碱的一级与二级质谱图；
图4是本发明实施例1中苦杏仁苷的一级与二级质谱图；
图5是本发明实施例1中五味子醇甲的一级与二级质谱图；
图6是本发明实施例1中厚朴酚的一级与二级质谱图；
图7是本发明实施例7中厚朴麻黄汤的标准指纹图谱；
图8是本发明对比例1中的厚朴麻黄汤的指纹图谱。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
实施例1一种厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法
本实施例采用厚朴麻黄汤基准物质进行厚朴麻黄汤指纹图谱的构建，具体厚朴麻黄汤基准物质的制备方法如下：
依照《古代经典名方目录(第一批)》记载的方法制备厚朴麻黄汤，并经浓缩、冻干制得厚朴麻黄汤基准物质。
本实施例为一种厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，包括以下具体步骤：
1)供试品溶液的配制
精密称取厚朴麻黄汤基准物质100mg，置于10mL容量瓶中，加入纯水8mL，超声处理30min，放冷，纯水定容，摇匀，0.22μm滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。
2)指纹图谱构建
取供试品溶液经HPLC-Q-TOF-MS法检测，得厚朴麻黄汤的总离子流色谱图，即为厚朴麻黄汤指纹图谱，参见图1；
其中，高效液相色谱条件为：
色谱柱岛津Shim-pack VP-ODS(5μm,4.6×250mm,P.N 228-34937-92)；
检测波长为280nm；
柱温为35℃；
流速为1.0mL/min；
进样量为20μL；
流动相A为乙腈，流动相B为浓度为0.2wt％的甲酸水溶液；
洗脱方式为梯度洗脱，具体洗脱程序为：
0～16min，5％流动相A，95％流动相B；
16～18min，5％→9％流动相A，95％→91％流动相B；
18～28min，9％→10％流动相A，91％→90％流动相B；
28～32min，10％流动相A，90％流动相B；
32～40min，10％→14％流动相A，90％→86％流动相B；
40～52min，14％→16％流动相A，86％→84％流动相B；
52～63min，16％→20％流动相A，84％→80％流动相B；
63～73min，20％→33％流动相A，80％→67％流动相B；
73～80min，33％→70％流动相A，67％→30％流动相B；
80～90min，70％流动相A，30％流动相B。
质谱条件为：
干燥器(N2)流速为10.00L/min；温度为320℃；雾化器压力为45psig；毛细管电压为4000V；碎裂器为170V，skimmer65 V，OCT 1RF Vpp,750V；采集频率皆为3spectra/s；离子模式为正离子模式。
根据质谱碎片提供的化合物的结构信息，并通过对照品及紫外光谱辅助，共鉴定出18个化学成分。总离子流色谱图和部分代表性化合物的一级、二级质谱图及结构解析过程如下：
结合图1和图2可以看出，在一级质谱图中，显示其准分子离子峰m/z166.1227[M+H]+，二级质谱图中准分子离子峰失去一分子水，得到m/z148.1118[M+H-H2O]+，在此基础上脱去甲基形成碎片m/z 133.0881[M+H-H2O-CH3]+，以及在脱去一份子水的基础上再脱去一分子氨甲基的碎片离子m/z 117.0689[M+H-H2O-NHCH3]+，上述质谱图中的离子峰信号均与《基于GC-MS和UPLC-Q-TOF-MS的麻黄汤化学成分识别》(李睿等，中国中药杂志，2014，39(4):704-709)中报道的麻黄碱一致，因此确定特征峰4对应的化学成分为麻黄碱。
结合图1和图3可以看出，一级质谱图中表明其准分子离子峰m/z314.1747[M+H]+，二级质谱图中分子离子峰失去N,N-二甲基片段，得到碎片离子m/z 269.1174[M-C2H7N]+，同时分子离子峰脱去一个苯酚基，形成碎片m/z 175.0751[M-C6H6O]+，以及分子离子峰脱去一个C12H17O2片段，形成4-苄基苯酚片段m/z 107.0484[M-C12H17O2]+，上述质谱图中的离子峰信号均与《基于UFLC-Triple TOF-MS/MS技术分析厚朴化学成分》(赵慧等，中国药学杂志，2017，52(20):1824-1831)中报道的木兰箭毒碱一致，因此确定特征峰8对应的化学成分为木兰箭毒碱。
结合图1和图4可以看出，一级质谱图中表明其准分子离子峰m/z475.1920[M+NH4]+，二级质谱图中显示准分子离子峰失去一分子水后，在脱去一分子苯甲醛结构，得到碎片离子m/z 374.0992[M+H-H2O-C6H5CHO]+，同时二级质谱图中显示准分子离子峰失去一分子水后，在脱去一分子杏仁腈，形成碎片m/z 347.0958[M+H-H2O-C8H7NO]+，上述质谱图中的碎片离子峰信号与《LC-MS/MS法同时测定人尿液中苦杏仁苷和芍药苷及其尿药排泄研究》(李晓冰等，药学学报，2015，50(10):1330-1335)中报道的苦杏仁苷的特征离子峰信号一致，因此确定特征峰9对应的化学成分为苦杏仁苷。
结合图1和图5可以看出，一级质谱图中表明其准分子离子峰m/z433.2216[M+H]+，二级质谱图中其准分子离子峰脱去一分子水，再脱去一分子甲氧基得到碎片离子m/z384.1912[M+H-H2O-OCH3]+，在此基础上，再脱去一分子甲基，形成碎片m/z 369.1668[M+H-H2O-OCH3-CH3]+，在此基础上继续裂解，再脱去一分子甲氧基，形成碎片m/z 338.1500[M+H-H2O-(OCH3)2-CH3]+，上述质谱图中的离子峰信号均与《LC-MS/MS法分析北五味子中的木脂素成分》(田宏哲等，天然产物研究与开发，2012，24(S1):32-35,40)中报道的五味子醇甲一致，因此确定特征峰16对应的化学成分为五味子醇甲。
结合图1和图6可以看出，一级质谱图中表明其准分子离子峰m/z267.1384[M+H]+，二级质谱图中显示其准分子离子峰失去一个C2H4片段，得到碎片离子m/z 239.2257[M+H-C2H4]+，同时其准分子离子峰失去一个C3H5片段，得到碎片离子m/z 226.0695[M+H-C3H5]+，以及准分子离子峰脱去一个C4H6O片段，形成片段m/z 197.0578[M+H-C4H6O]+，上述质谱图中的离子峰信号均与《UPLC/Q-TOF-MS/MS法分析厚朴化学成分》(韩亮等，中成药，2013,35(4):766-769)中报道的厚朴酚的特征信号一致，因此确定特征峰18对应的化学成分为厚朴酚。
18个特征峰对应的化学成分的结构鉴定结果，具体见下表。
表1厚朴麻黄汤的HPLC-Q-TOF-MS/MS结构鉴定
实施例2～3厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法
实施例2～3分别为一种厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，它们的步骤与实施例1基本相同，区别仅在于：
实施例2中采用0.1wt％的甲酸水溶液作为流动相B，柱温选用36℃，流速选用0.8mL/min。
实施例3中采用0.3wt％的甲酸水溶液作为流动相B，柱温选用34℃，流速选用1.2mL/min。
实施例2～3其它部分的内容，与实施例1相同，结果也基本与实施例相同。
实施例4厚朴麻黄汤的标准指纹图谱
采用实施例1中厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，测定10批厚朴麻黄汤基准物质的指纹图谱，并采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”对上述10批厚朴麻黄汤的指纹图谱进行合成，生成共有18个特征峰构成的厚朴麻黄汤的标准指纹图谱，具体特征峰与实施例1相同，参见图7。
本实施例所得厚朴麻黄汤的标准指纹图谱可以用于厚朴麻黄汤的研究/开发/生产/临床应用全过程中的质量评价或控制。
实验例1指纹图谱方法学考察
本实验例对实施例1中厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法进行考察，具体考察方法参照《中药注射剂指纹图谱研究的技术指南》，将所得的色谱图转换成AIA格式后输入相似度评价软件，通过对所得图谱相似度的比较进行方法学考察，主要考察该构建方法的精密度、重现性、稳定性。
一、精密度
按实施例1中的构建方法取厚朴麻黄汤配制精密度供试品溶液，再用同一精密度供试品溶液连续进样6次进行指纹图谱检测，以色谱峰1为参照，计算各特征峰相对保留时间的RSD，具体结果见表3：
表3相对保留时间结果一览表(精密度)
| 进样次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD |
| t1/t1 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.00％ |
| t2/t1 | 1.108 | 1.109 | 1.108 | 1.108 | 1.109 | 1.107 | 0.07％ |
| t3/t1 | 1.245 | 1.246 | 1.246 | 1.244 | 1.243 | 1.247 | 0.12％ |
| t4/t1 | 1.557 | 1.559 | 1.558 | 1.555 | 1.556 | 1.554 | 0.12％ |
| t5/t1 | 1.707 | 1.705 | 1.704 | 1.706 | 1.709 | 1.706 | 0.10％ |
| t6/t1 | 1.862 | 1.864 | 1.860 | 1.861 | 1.863 | 1.859 | 0.10％ |
| t7/t1 | 1.909 | 1.907 | 1.904 | 1.910 | 1.902 | 1.908 | 0.16％ |
| t8/t1 | 3.006 | 3.009 | 3.011 | 3.001 | 2.998 | 3.008 | 0.17％ |
| t9/t1 | 3.596 | 3.599 | 3.594 | 3.597 | 3.596 | 3.595 | 0.05％ |
| t10/t1 | 4.170 | 4.165 | 4.166 | 4.163 | 4.168 | 4.167 | 0.06％ |
| t11/t1 | 4.586 | 4.584 | 4.585 | 4.582 | 4.586 | 4.587 | 0.04％ |
| t12/t1 | 4.714 | 4.712 | 4.717 | 4.715 | 4.713 | 4.716 | 0.04％ |
| t13/t1 | 5.331 | 5.326 | 5.329 | 5.327 | 5.325 | 5.329 | 0.04％ |
| t14/t1 | 8.957 | 8.951 | 8.952 | 8.961 | 8.950 | 8.949 | 0.05％ |
| t15/t1 | 9.004 | 8.996 | 8.993 | 8.996 | 8.992 | 8.995 | 0.05％ |
| t16/t1 | 9.010 | 9.003 | 8.996 | 8.999 | 9.009 | 8.999 | 0.06％ |
| t17/t1 | 9.215 | 9.206 | 9.198 | 9.211 | 9.207 | 9.203 | 0.06％ |
| t18/t1 | 9.436 | 9.429 | 9.431 | 9.438 | 9.430 | 9.428 | 0.04％ |
由表3～4可以看出，采用实施例1的构建方法连续进样6次所得的色谱图中特征峰的相对保留时间的RSD在0.00％～0.17％之间，说明本发明的构建方法精密度良好，符合指纹图谱的要求。
二、重现性
按照实施例1中的构建方法取同一批厚朴麻黄汤平行配制6份重现性供试品溶液，分别对6份重现性供试品溶液进行指纹图谱检测，以色谱峰1为参照，计算各特征峰相对保留时间与相对峰面积的RSD，具体结果见表4：
表4相对保留时间结果一览表(重现性)
| 进样次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD |
| t1/t1 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 0.00％ |
| t2/t1 | 1.107 | 1.106 | 1.11 | 1.108 | 1.109 | 1.108 | 0.13％ |
| t3/t1 | 1.246 | 1.244 | 1.245 | 1.247 | 1.246 | 1.244 | 0.10％ |
| t4/t1 | 1.559 | 1.557 | 1.556 | 1.552 | 1.553 | 1.558 | 0.18％ |
| t5/t1 | 1.704 | 1.709 | 1.706 | 1.708 | 1.711 | 1.702 | 0.19％ |
| t6/t1 | 1.863 | 1.866 | 1.858 | 1.862 | 1.864 | 1.861 | 0.15％ |
| t7/t1 | 1.907 | 1.906 | 1.905 | 1.909 | 1.903 | 1.906 | 0.10％ |
| t8/t1 | 2.998 | 3.004 | 3.011 | 3.001 | 3.007 | 3.002 | 0.15％ |
| t9/t1 | 3.591 | 3.607 | 3.587 | 3.592 | 3.603 | 3.601 | 0.22％ |
| t10/t1 | 4.162 | 4.172 | 4.164 | 4.169 | 4.161 | 4.168 | 0.10％ |
| t11/t1 | 4.589 | 4.582 | 4.586 | 4.580 | 4.581 | 4.588 | 0.08％ |
| t12/t1 | 4.721 | 4.708 | 4.715 | 4.717 | 4.712 | 4.719 | 0.10％ |
| t13/t1 | 5.330 | 5.321 | 5.327 | 5.324 | 5.328 | 5.329 | 0.06％ |
| t14/t1 | 8.952 | 8.954 | 8.963 | 8.949 | 8.944 | 8.958 | 0.07％ |
| t15/t1 | 9.001 | 8.992 | 8.995 | 8.997 | 8.999 | 8.996 | 0.03％ |
| t16/t1 | 9.011 | 8.999 | 9.001 | 9.003 | 9.002 | 9.004 | 0.05％ |
| t17/t1 | 9.210 | 9.201 | 9.196 | 9.209 | 9.211 | 9.207 | 0.06％ |
| t18/t1 | 9.439 | 9.427 | 9.436 | 9.432 | 9.435 | 9.431 | 0.04％ |
由表4可以看出，采用实施例1中的构建方法对6份供试品溶液检测所得的色谱图中特征峰相对保留时间的RSD在0.00％～0.22％之间，说明本发明的构建方法重现性良好，符合指纹图谱的要求。
三、稳定性
按照实施例1中供试品溶液配制方法取厚朴麻黄汤制备稳定性供试品溶液，分别在放置0、6、15、18、24h时，按照实施例1中的色谱条件进样分析，具体结果见表5：
表5相对保留时间结果一览表(稳定性)
由表5可以看出，采用实施例1的色谱条件对放置不同时间的供试品溶液检测所得的色谱图中特征峰相对保留时间的RSD在0.00％～0.24％之间，说明本发明配制的供试品溶液能够24h内维持稳定，符合样品检测的要求。
实验例2构建方法中各工艺参数考察
对比例1为实施例1中构建方法的对比试验，区别仅在于：
对比例1中采用的流动相A为乙腈，流动相B为0.2wt％磷酸水溶液，所得图谱见图8，可以看出2号峰和3号峰无法分开，5号峰～7号峰无法分开，且出峰相对比较密集，无法很好进行质谱分析。
显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
Claims (10)
1.一种厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法是取厚朴麻黄汤制备供试品溶液，所得供试品溶液经HPLC-Q-TOF-MS法检测，即得所述厚朴麻黄汤指纹图谱；
所述HPLC-Q-TOF-MS中高效液相色谱采用的流动相A为乙腈、流动相B为浓度为0.1～0.3wt％的甲酸水溶液。
2.根据权利要求1所述的厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱的洗脱方式为梯度洗脱；
所述梯度洗脱的洗脱条件为：
0～16min，5％流动相A，95％流动相B；
16～18min，5％→9％流动相A，95％→91％流动相B；
18～28min，9％→10％流动相A，91％→90％流动相B；
28～32min，10％流动相A，90％流动相B；
32～40min，10％→14％流动相A，90％→86％流动相B；
40～52min，14％→16％流动相A，86％→84％流动相B；
52～63min，16％→20％流动相A，84％→80％流动相B；
63～73min，20％→33％流动相A，80％→67％流动相B；
73～80min，33％→70％流动相A，67％→30％流动相B；
80～90min，70％流动相A，30％流动相B。
3.根据权利要求1或2所述的厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测波长为280nm。
4.根据权利要求1或2所述的厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，
所述高效液相色谱的柱温为34～36℃、流速为0.8～1.2mL/min。
5.根据权利要求1或2所述的厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述HPLC-Q-TOF-MS的质谱条件为：
干燥器(N2)流速为10.00L/min；温度为320℃；雾化器压力为45psig；毛细管电压为4000V；碎裂器为170V，skimmer65 V，OCT 1RF Vpp,750V；采集频率皆为3spectra/s；离子模式为正离子模式。
6.根据权利要求1或2所述的厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液是取100重量份厚朴麻黄汤加水溶解，并定容至10体积份制得；
所述重量份与体积份的比例关系为mg：mL。
7.根据权利要求1或2所述的厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述厚朴麻黄汤指纹图谱共获得并指认18个特征峰。
8.根据权利要求7所述的厚朴麻黄汤指纹图谱的构建方法，其特征在于，18个所述特征峰的相对保留时间及对应的化学成分分别为：
1号峰对应的化学成分为苯丙氨酸、保留时间为9.180；
2号峰对应的化学成分为去甲基麻黄碱、保留时间为10.170；
3号峰对应的化学成分为去甲基伪麻黄碱、保留时间为11.431；
4号峰对应的化学成分为麻黄碱、保留时间为14.296；
5号峰对应的化学成分为伪麻黄碱、保留时间为15.661；
6号峰对应的化学成分为甲基麻黄碱、保留时间为17.093；
7号峰对应的化学成分为甲基伪麻黄碱、保留时间为17.503；
8号峰对应的化学成分为木兰箭毒碱、保留时间为27.598；
9号峰对应的化学成分为苦杏仁苷、保留时间为33.020；
10号峰对应的化学成分为木兰碱、保留时间为38.272；
11号峰对应的化学成分为瑞枯灵、保留时间为42.092；
12号峰对应的化学成分为Oblongine、保留时间为43.286；
13号峰对应的化学成分为巴婆碱、保留时间为48.913；
14号峰对应的化学成分为6-姜烯酚、保留时间为82.204；
15号峰对应的化学成分为南五味子木脂素L、保留时间为82.613；
16号峰对应的化学成分为五味子醇甲、保留时间为82.647；
17号峰对应的化学成分为和厚朴酚、保留时间为84.523；
18号峰对应的化学成分为厚朴酚、保留时间为86.604。
9.利用权利要求1-8中任一项所述的构建方法获得的厚朴麻黄汤的标准指纹图谱。
10.权利要求9所述的标准指纹图谱在厚朴麻黄汤的研究/开发/生产/临床应用全过程质量评价或控制中的应用。
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| CN103698413A (zh) * | 2012-09-27 | 2014-04-02 | 上海医药工业研究院 | 栀子厚朴汤颗粒hplc指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱 |
| CN107515266A (zh) * | 2017-09-01 | 2017-12-26 | 北京同仁堂科技发展股份有限公司 | 一种厚朴七物汤的药物制剂的检测方法 |
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