CN115894339A - 2-氟联苯-4-乙酸衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种2‑氟联苯‑4‑乙酸衍生物及其制备方法与应用。所述2‑氟联苯‑4‑乙酸衍生物的结构式如式I所示。该化合物可以通过人工合成的方法制备，具有广谱抗肿瘤作用，可延长肿瘤患者的生存期，提高肿瘤患者的生存质量。该化合物药效稳定，毒性低，易于人体接受，可以应用于大多数癌症的治疗，相对目前上市的抗肿瘤药物具有一定优势。

Description

2-氟联苯-4-乙酸衍生物及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种2-氟联苯-4-乙酸衍生物及其制备方法与应用。

背景技术

研究发现缓激肽(BK)是许多癌症的一个重要的生长因子，它不仅可以通过刺激分泌血管内皮生长因子来促进新生血管形成，也可以通过激活基质金属蛋白酶(MMP)活性酶来刺

B1R和B2R均为G蛋白偶联受体。BK无论是与B1受体还是B2受体结合，最终结果均主要是通过G蛋白偶联受体家族中的Gq亚基刺激磷脂酶C-β(PLC-β)，促使三磷酸肌醇(IP3)水解和细胞内Ca²⁺的动员产生NO，并通过G蛋白亚基Gα-i抑制腺苷酸环化酶(AC)激活丝裂原活化蛋白激酶通路(MAPK)，使MMP-2/9表达量升高，来促进肿瘤发生发展和转移。因此BK受体可作为一种新型的抗肿瘤靶点，BK受体拮抗剂被认为是一种有希望的肿瘤治疗手段。

基于以上策略已经有一系列化合物被报道出来，如PL-AC-15，PL-AC-202等。其中PL-AC-15是江苏普莱医药生物技术公司提供的一种氨基酸衍生物(见中国专利CN107382827B)，具有较好的抗肿瘤作用。PL-AC-202是江苏普莱医药生物技术有限公司在PL-AC-15的基础上进一步结构优化改造而得的化合物(见中国专利申请号202010386293.7)，通过进一步的结构改造以期获得抗肿瘤效果更佳的化合物。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种2-氟联苯-4-乙酸衍生物及其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物或异构体(包括立体异构体、对映异构体、互变异构体或其混合物)。

本发明所提供的2-氟联苯-4-乙酸衍生物的结构式如下式I：

式I中，所述R₁、R₂独立的选自下述任一基团：氢、-OR⁴，-SR⁴、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-12环烷基、C_6-12芳基、5-12元杂芳基；或者R₁和R₂可合并形成C_3-12环烷基、3-12元杂环基；其中，R⁴选自下述任一基团：氢、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-12环烷基、C_6-12芳基、3-12元杂脂环族、5-12元杂芳基，以及氢被任意的一个或者多个卤素取代的上述基团；

所述R₃选自下述任一基团：氢、C_1-8烷基、C_3-12环烷基、3-12元杂环基，或所述R₃与Linker形成的5-12元杂环脂肪基，包括但不局限于如下基团：

以及R₃上的各氢任意的被R⁵取代；

其中，R⁵可独立的选自：氢，卤素，C_1-10烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-12环烷基、3-12元杂环基、C_6-14芳基、氧基C_6-14芳基或氧基C_5-14芳杂基、氮基C_6-14芳基或氮基C_5-14芳杂基、5-14元杂芳基，部分或完全卤化的C_1-5烷基。

所述Linker选自下述任一基团：C_1-8亚烷基(如-CH₂CH₂-)、C_2-8亚烯基(如-CH₂＝CH-CH₂-),、C_2-8亚炔基(如-C≡C-CH₂-)、C_3-12亚环烷基、3-12元亚杂环基、C_6-12亚芳基、5-12元亚杂芳基。

所述C_3-12亚环烷基，包括但不局限于如下基团：

所述3-12元亚杂环基，包括但不局限于如下基团：

所述C_6-12亚芳基，包括但不局限于如下基团：

所述5-12元亚杂芳基、包括但不局限于如下基团：

以及Linker上的各氢任意的被R⁶取代；

其中，R⁶选自如下基团：卤素、C_1-10烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-12环烷基、3-12元杂环基、C_6-14芳基、氧基C_6-14芳基或氧基C_5-14芳杂基、氮基C_6-14芳基或氮基C_5-14芳杂基、5-14元杂芳基。-CN、-NO₂、-CF₂H、-CF₂OH、-CF₃、-OCF₃、-CR⁷R⁸R⁹、-OR⁷、-O(C＝O)R⁷、-O(C＝O)OR⁷、-O(C＝O)NR⁸R⁹、-(C＝O)R⁷、-(C＝O)OR⁷、-(C＝O)NR⁸R⁹、-SR⁷、-(S＝O)_mR⁷、-NR⁸R⁹、-NR⁷(C＝O)R⁸、-NR⁷C(＝O)NR⁸R⁹、-NR⁷C(＝O)OR⁸、-NR⁷S(＝O)_mNR⁸R⁹、-NR⁷S(＝O)_mOR⁸或者-NR⁷S(＝O)_mR⁸，或R₆上相邻原子的基团可合并形成C_3-12环烷基、C_6-12芳基、3-12元杂环族以及5-12元杂芳环基；

其中，R⁷、R⁸、R⁹可以独立的选自氢，卤素或者任意的选自下述任一基团：C_1-10烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-12环烷基、3-12元杂环基、C_6-14芳基、氧基C_6-14芳基或氧基C_5-14芳杂基、氮基C_6-14芳基或氮基C_5-14芳杂基、5-14元杂芳基，或结合至相同氮原子上的R⁷、R⁸、R⁹中任意两个可与其所结合的氮一起合并，以形成3-12元杂环基或5-12元杂芳基，其任选含有1至3个选自N、O及S的另外杂原子，或结合至相同碳原子上的R⁷、R⁸、R⁹中的任意两个可合并而形成C_3-12环烷基、C_6-12芳基、3-12元杂环基或5-12元杂芳基；以及R⁷、R⁸、R⁹中的各氢任选被R¹⁰取代，或者R⁷、R⁸、R⁹中相同碳原子上的两个氢原子任选为氧代取代基。所述R¹⁰可独立的选自：氢，卤素，C_1-10烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-12环烷基、3-12元杂环基、C_6-14芳基、氧基C_6-14芳基或氧基C_5-14芳杂基、氮基C_6-14芳基或氮基C_5-14芳杂基、5-14元杂芳基；-CN、-NO₂、-OH、-NH₂、部分或完全卤化的C_1-5烷基、-C(＝O)(CH₂)_nCH₃、-C(＝O)O(CH₂)_nCH₃、-C(＝O)OH、-C(＝O)N[(CH₂)_nCH₃]₂、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NH(CH₂)_nCH₃、-NH(CH₂)_nCH₃、-N[(CH₂)_nCH₃]₂、-N(CH₂)_nCH₃C(＝O)(CH₂)_nCH₃、-N(CH₂)_nCH₃C(＝O)NH(CH₂)_nCH₃、-N(CH₂)_nCH₃C(＝O)N[(CH₂)_nCH₃]₂、-N(CH₂)_nCH₃C(＝O)NH₂、-N(CH₂)_nCH₃C(＝O)O(CH₂)_nCH₃、-N(CH₂)_nCH₃C(＝O)OH、-NHC(＝O)(CH₂)_nCH₃、-NHC(＝O)NH(CH₂)_nCH₃、-NHC(＝O)N[(CH₂)_nCH₃]₂、-NHC(＝O)NH₂、-NHC(＝O)O(CH₂)_nCH₃,-NHC(＝O)OH,-N(CH₂)_nCH₃S(＝O)_m(CH₂)_nCH₃、-NHS(＝O)_m(CH₂)_nCH₃、-O(CH₂)_nCH₃、＝O、-OC(＝O)(CH₂)_nCH₃、OC(＝O)O(CH₂)_nCH₃、-OC(＝O)N[(CH₂)_nCH₃]₂、-OC(＝O)NH(CH₂)_nCH₃、-OC(＝O)NH₂、-S(＝O)m(CH₂)_nCH₃、-OS(＝O)m(CH₂)_nCH₃、-S(＝O)_mNH(CH₂)_nCH₃、-S(＝O)_mN[(CH₂)_nCH₃]₂；

所述m选自1或2；

所述n选自1，2，3，4或5。

优选的，R₁、R₂独立的选自下述任一基团：氢、C_1-4烷基(如甲基、乙基)、C_3-6环烷基、R₁与R₂形成C_3-6环烷基；

优选的，R₃选自下述任一基团：氢、C_1-4烷基，或所述R₃与Linker形成的5-12元杂环脂肪基；

优选的，Linker选自下述任一基团：-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-、-CHR¹¹CH₂-、-CH₂CHR¹¹-、-CH₂CH₂CHR¹¹-、-CHR¹¹O-、-CHR¹¹NH-、-CHNR¹¹-；

优选的，R¹¹选自下述任意基团：C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_3-8炔基，C_3-12环烷基、3-12元杂脂环基、C_6-12芳基(如苯基、联苯基)、5-12元杂芳基、苯氨基、苄氨基、苄氧苯基，其中R¹¹上的氢任意的被R¹²取代。

R¹²的定义与上述R¹⁰相同。

进一步的，式I中Linker包括但是不限于以下基团：

R₃与Linker形成的5-12元杂环脂肪基包括但是不限于以下基团：

在其中一些实施方案中，本发明所述的2-氟联苯-4-乙酸衍生物，可以列举为如下所示结构，但不局限于以下结构(全部化合物结构见表1)：

本发明中使用的术语“烷基”是指仅由碳原子和氢原子组成、且不具有不饱和度(例如双键、三键或环)的基团，其涵盖了各种可能的几何异构基团与立体异构基团。该基团通过单键与分子的其余部分相连。作为烷基的非限制性实例，可以列举以下直链或支链的基团：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基及其另外七种异构体、正己基及其另外十六种异构体、正庚基及其各种异构体、正辛基及其各种异构体、正壬基及其各种异构体、正癸基及其各种异构体。

本发明中使用的术语“环烷基”是指由至少3个碳原子组成的饱和非芳香环系，该环系可以是单环、双环、多环，也可以是稠环、桥环、螺环。作为环烷基的非限制性实例，可以列举以下基团：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基；以及由两个或多个上述单环通过公共边和公共碳原子形成的稠环、桥环或螺环基团。

本发明中使用的术语“芳基”可以单独使用或作为“芳基烷基”的一部分，是指共含有6-14元环的单环，双环和三环的碳环体系，其中，至少一个环体系是芳香族的，其中每一个环体系包含3-7元环，且只有一个附着点与分子的其余部分相连。术语“芳基”可以和术语“芳香环”交换使用，如芳香环可以包括苯基，萘基、蒽基。

本发明中使用的术语“杂芳基”是指具有一个或多个独立地选自N、O或S的杂原子的5-14元芳香族杂环环系，该环系可以是单环、双环、多环，其中双环和多环可以由单环通过单键连接方式或稠合方式形成。作为杂芳基的非限制性实例，可以列举以下基团：噁唑基、异噁唑基、咪唑基、呋喃基、吲哚基、异吲哚基、吡咯基、三唑基、三嗪基、四唑基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并吡喃基、咔唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、噌啉基、萘啶基、蝶啶基、嘌呤基、喹噁啉基、噻二唑基、吲哚嗪基、吖啶基、吩嗪基、酞嗪基、香豆素基、吡唑并吡啶基、吡啶并哒嗪基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、吡唑并哒嗪基；以及由上述杂芳基通过单键连接方式或稠合方式形成的基团。

本发明化合物也可以以其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物或异构体(包括立体异构体、对映异构体、互变异构体或其混合物)的形式使用。式I所示化合物的生理学上可接受的盐包括由药学上可接受的无机酸或有机酸或无机碱或有机碱形成的常规的盐以及季铵的酸加成盐。合适的酸盐的更具体的例子包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、高氯酸、富马酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、甲酸、乳酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、扑酸、丙二酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟基萘甲酸、氢碘酸、苹果酸、硬脂酸、鞣酸等的盐。合适的碱盐的更具体的例子包括钠、锂、钾、镁、铝、钙、锌、N，N，-二苄基乙二胺、氯代普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因盐。

本发明的另一个目的是提供式I所示的2-氟联苯-4-乙酸衍生物的制备方法。

本发明所提供的式I所示的2-氟联苯-4-乙酸衍生物合成路线如下所示：

具体的制备方法，包括下述步骤：将式II所示的羧酸经过草酰氯(COCl)₂活化，再与中间体1或中间体2或中间体3在室温下反应获得相应的最终产物式I。

其中，式II中R₁、R₂的定义同式I；中间体1中Linker和R₃的定义同式I(排除式I中R₃为氢，并且linker为-CH₂CHR¹¹-和

的情况)；中间体2中R¹³的定义同上述式I中的R¹¹。

中间体1的合成路线如下所示：

中间体1的具体制备方法如下：羧酸4与4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶在K₂CO₃和HBTU的条件下缩合得到化合物5；化合物5在TFA/DCM的条件下脱保护得到中间体1。

其中，手性中间体2的合成路线如下所示：

手性中间体2的具体制备方法如下：羧酸6经过草酰氯(COCl)₂活化得到酰氯7，在n-BuLi的条件下酰胺化得到手性化合物8；化合物8在六甲基二硅基氨基锂(LiHMDS)存在且-70℃条件下与N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺反应得到手性化合物9；化合物9在H₂O₂与LiOH的条件下脱保护得到羧酸10；化合物10再和4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶在HBTU和K₂CO₃的条件下缩合得到化合物11；化合物11在N₂H₄和EtOH的条件下脱保护得到手性中间体2。

中间体3的合成路线如下所示：

中间体3的具体制备方法如下：化合物12与4-硝基苯基氯甲酸酯反应得到中间体13；在DIPEA的条件下，化合物13与哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯进行缩合反应得到化合物14；化合物14在TFA条件下脱保护得到中间体3。

本发明的再一个目的是提供上述式I所示的2-氟联苯-4-乙酸衍生物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物或异构体(包括立体异构体、对映异构体、互变异构体或其混合物)的应用。

本发明所提供的应用包括下述方面：1)式I所示的2-氟联苯-4-乙酸衍生物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物或异构体(包括立体异构体、对映异构体、互变异构体或其混合物)在制备预防和/或治疗癌症的药物中的应用；2)式I所示的2-氟联苯-4-乙酸衍生物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物或异构体(包括立体异构体、对映异构体、互变异构体或其混合物)在制备抑制癌细胞增殖药物中的应用。

所述的癌症包括但不限于本领域中已知的各种癌症(实体癌或非实体癌)，如：肝癌、肺癌、前列腺癌、结直肠癌。

所述癌细胞包括但不限于肝癌细胞(如Bel-7402细胞、HepG-2细胞、SK-hep1细胞)、肺癌细胞(如A549细胞、H460细胞、H1299细胞、H292细胞)、前列腺癌细胞(如PC-3细胞、)。

以式I所示的肽类衍生物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物或异构体(包括立体异构体、对映异构体、互变异构体或其混合物)为活性成分制备的预防和/或治疗癌症的药物也属于本发明的保护范围。

本发明的新型化合物可以通过人工合成的方法制备，该新型化合物具有广谱抗肿瘤作用，可延长肿瘤患者的生存期，提高肿瘤患者的生存质量。该化合物药效稳定，毒性低，易于人体接受，可以应用于大多数癌症的治疗，相对目前上市的抗肿瘤药物具有一定优势。

本发明提供的式I所示的2-氟联苯-4-乙酸衍生物是从头设计得到的全新的化合物。本发明中的化合物为一类缓激肽受体拮抗剂，通过抑制缓激肽与其受体结合来抑制肿瘤细胞的增长和侵袭，进一步抑制肿瘤的发生。相似结构的化合物可能存在相同的作用机制，了解不同化合物的作用机制，有助于对本发明中化合物及其类似物的临床应用前景及可能产生的问题有充分的认识，使研究开发更具有针对性。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中涉及的PL-AC-15化合物的结构式如下所示：

其制备的详细内容参见中国专利CN107382827B。

下述实施例中涉及的PL-AC-202化合物的结构式如下所示：

其制备的详细内容参见中国专利CN113620862A。

一、化合物的制备及表征

实施例1:2-([1,1'-联苯]-4-基)-3-(2-(2-氟-[1,1'-联苯]-4-基)丙酰胺)-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)丙酰胺(Cpd001)

消旋化合物Cpd001的制备方法1如下：

1)依次将化合物15(1.0g,2.93mmol),HBTU(1.11g,2.93mmol)，4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶(0.46g,2.93mmol)和K₂CO₃(0.45g,3.22mmol)加至干燥乙腈(50ml)中，反应液在室温下搅拌过夜，析出大量白色固体。用旋转蒸发仪减压浓缩反应混合物，残余固体加入50mL水和50mL乙酸乙酯。分出有机层，水层再用乙酸乙酯萃取两次(50mL×2)，合并有机层后依次用饱和NaHCO₃溶液(30mL×3)，食盐水(30mL×3)洗涤，无水硫酸镁干燥后，硅胶柱层析分离纯化，二氯甲烷/甲醇(20∶1，v/v)洗脱，得白色固体化合物16(1.33g)，产率95％。

2)将化合物16(0.75g，1.56mmol)加入到25％TFA/DCM(50ml)中，在0-5℃条件下搅拌反应30min。反应完毕后，减压浓缩，残余糖浆状物用适量甲醇溶解，在冰浴冷却搅拌下滴入饱和HCl/EtOAc溶液约10ml，搅拌10min后，减压浓缩，并用油泵抽至恒重，得到近白色固体化合物17(0.658g)，产率93％。

3)将化合物18(0.5g，2.05mmol)溶于10mL二氯甲烷中，滴入3滴DMF，冷却至0-5℃，滴加草酰氯(0.52，4.10mmol)，滴毕后保温搅拌20分钟，再回至室温反应5小时后，将体系旋干备用得到中间体19。

4)将中间体19(0.54g，2.05mmol)溶于10mL二氯甲烷中，加入三乙胺，冷却至0-5℃，缓慢滴加上步产物(化合物17)(0.93g，2.05mmol)的二氯甲烷溶液10mL，滴毕后保温30分钟，回至室温反应10小时。通过TLC(甲醇/二氯甲烷＝1/10，v/v)显示反应完全。水洗反应液，有机相干燥旋干，通过柱层析纯化(甲醇/二氯甲烷洗脱)，得实施例1：2-([1,1'-联苯]-4-基)-3-(2-(2-氟-[1,1'-联苯]-4-基)丙酰胺)-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)丙酰胺(Cpd001)(1.08g,收率87％)。¹H-NMR(DMSO-d₆):1.05-1.15(m,2H,CH₂),1.23-1.31(s,15H,CH₃),1.56-1.57(m,1H,CH₂),1.67-1.68(m,1H,CH₂),2.83-2.89(m,2H,CH₂),3.83(q，1H,CH)，3.29(s,1H,3.8)(s,3H,OCH₃),3.92-3.94(m,1H,CH),4.49-4.51(m,1H,CH),7.25-7.76(m,15H,NH,ArH),7.96(d,1H,ArH),8.24(d,1H,ArH),8.44(m,1H,NH).MS m/z:592.25(M+H)

手性中间体2S及手性化合物Cpd001(RS，SS)的制备方法2如下：

1)将化合物20(5.30g，0.025mol)溶于二氯甲烷(50mL)中，加入三滴DMF,冷却至0-5℃，滴加草酰氯(3.80g,0.03mol)，0.5小时滴毕，搅拌反应3小时后抽滤得化合物21清液备用。

2)将化合物(R)-4-苯基-2-噁咗烷酮(3.59g，0.022mol)溶于四氢呋喃(50ml)中，冷却至-78℃，滴加2.5M正丁基锂(9.5mL)，1h滴毕，滴加过程保持在-78℃。化合物21清液滴加1h滴毕。反应5小时，TLC监测反应完全，恢复室温后将体系倒入30ml饱和碳酸氢钠中，搅拌半小时后抽滤得黄色固体化合物22R(5.6g)，收率71％。

3)将化合物22R(8.60g，0.024mol)溶于四氢呋喃(200mL)中，冷却至-70℃左右，滴加双(三甲基硅基)胺基锂28mL，2h滴毕后,在-70℃保温搅拌1h，将N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(6.72g，0.028mol)溶于四氢呋喃中滴加，1h滴毕。在-70℃反应5h，TLC监测反应完全，反应恢复到室温。用氯化铵淬灭，抽滤，得粉红色固体。用DCM柱层析，得固体化合物23S(5.33g)，收率43％。

4)将化合物23S(0.50g，0.97mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，冷却至0-5℃左右，滴加双氧水(0.67g，0.02mol)，滴毕后，将氢氧化锂(0.5g，21mol)溶于4mL水中滴加入反应液，半小时滴毕，保温搅拌2小时。用亚硫酸钠淬灭，用乙酸乙酯萃取，干燥，浓缩得黄色油状化合物24S(0.28g)，收率77.7％。

5)将化合物24S(0.28g，0.75mmol)溶于乙腈(10mL)中，加入碳酸钾(0.22g，1.59mmol)，HBTU(0.32g，0.84mmol)，搅拌10min后，滴加4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶(0.15g，0.96mmol)，室温反应15小时。将体系旋干，用乙酸乙酯萃取3次，干燥，浓缩，得固体化合物25S(0.27g)，收率70％。

6)将化合物25S(0.27g，0.53mmol)溶于乙醇(8mL)中，加入水合肼(0.5mL)，加热至75℃并搅拌反应4小时。反应完成后，将反应体系旋干，加入乙醇有白色固体析出，抽滤，母液旋干得黄色油状物手性中间体2S(0.11g)，收率55％。

7)以R构型原料18R和中间体2S为反应原料，利用上述实施例1中步骤3和4的方法可以合成化合物2-([1,1'-联苯]-4-基)-3-(2-(2-氟-[1,1'-联苯]-4-基)丙酰胺)-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)丙酰胺(Cpd001-RS)，该化合物为白色固体(201mg),收率39％。

8)以S构型原料18S和中间体2S为反应原料，利用上述实施例1中步骤3和4的方法可以合成化合物2-([1,1'-联苯]-4-基)-3-(2-(2-氟-[1,1'-联苯]-4-基)丙酰胺)-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)丙酰胺(Cpd001-SS)(38mg)，收率17％。

手性中间体2R及手性化合物Cpd001(RR，SR)的制备方法3如下：

中间体2R的制备方法：利用相应的原料，按照中间体2S的制备方法，获得中间体2R。

手性Cpd001的制备方法：利用相应的原料，参照手性Cpd001(RS，SS)制备方法的步骤7和8，可以获得手性Cpd001(RR)和(SR)：

1)利用R构型原料18R和手性中间体2R为反应物，参照手性化合物Cpd001(RS，SS)制备方法的步骤7和8，可以获得手性化合物2-([1,1'-联苯]-4-基)-3-(2-(2-氟-[1,1'-联苯]-4-基)丙酰胺)-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)丙酰胺(Cpd001-RR)(80mg)，收率22％。

2)利用S构型原料18S和手性中间体2R为反应物，参照手性化合物Cpd001(RS，SS)制备方法的步骤7和8，可以获得手性化合物2-([1,1'-联苯]-4-基)-3-(2-(2-氟-[1,1'-联苯]-4-基)丙酰胺)-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)丙酰胺(Cpd001-SR)(23mg),收率21％。

其他式I化合物(实施例2-5，7-9)利用相应的中间体和羧酸，按照以上实施例1(Cpd001)消旋化合物制备方法或者手性化合物的制备方法合成。

实施例2：3-(2-(2-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)丙酰胺)-2-苯基-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)丙酰胺(Cpd002)

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.29–8.09(m,2H),7.57–7.44(m,4H),7.48–7.36(m,2H),7.33–7.13(m,7H),4.06(ddt,J＝12.0,8.0,4.0Hz,1H),3.75–3.59(m,2H),3.50–3.38(m,1H),1.67(q,J＝14.3,13.0Hz,1H),1.44–1.08(m,18H).MS m/z:530.4(M+H)。

实施例3：2-(4-((2,6-二氯苄基)氧基)苯基)-3-(2-(2-氟-[1,1'-联苯]-4-基)丙酰胺)-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)丙酰胺(Cpd003)

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.93(s,1H),7.73(s,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.57(d,J＝7.7Hz,3H),7.49(s,2H),7.37(s,0H),7.11(s,2H),7.03(s,1H),6.39(d,J＝16.2Hz,1H),5.28(s,2H),5.22(d,J＝7.7Hz,1H),1.99(s,1H),1.24(s,6H),1.06(s,1H),0.85(s,1H).MS m/z:705.7(M+H).

实施例4：1-(2-(2-氟-[1,1'-联苯]-4-基)丙酰基)-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)哌啶-3-甲酰胺(Cpd004)

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.81(d,J＝7.4Hz,1H),7.66–7.41(m,7H),7.35–7.20(m,2H),4.49–4.41(m,1H),4.39(s,1H),4.38–4.15(m,1H),4.05(dtd,J＝19.5,11.5,9.4,5.7Hz,2H),2.84(t,J＝12.4Hz,1H),2.77–2.62(m,1H),2.05(q,J＝5.9,4.6Hz,1H),1.72(s,1H),1.70–1.56(m,2H),1.59–1.47(m,1H),1.39(q,J＝4.1Hz,2H),1.37(s,1H),1.36–1.27(m,1H),1.27–1.15(m,6H),1.14–0.87(m,8H).MS m/z:493.1(M+H).

实施例5：3-(2-(2-氟-[1,1'-联苯]-4-基)丙酰胺)-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)环己烷-1-甲酰胺(Cpd005)

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.05(dd,J＝7.8,2.1Hz,1H),7.80–7.73(m,1H),7.63–7.41(m,7H),7.28(d,J＝9.9Hz,2H),4.06(ddt,J＝16.1,8.0,4.3Hz,1H),3.68(q,J＝7.0Hz,1H),3.59(d,J＝11.1Hz,2H),2.75(s,1H),2.25–2.13(m,1H),1.86(t,J＝12.3Hz,1H),1.75(s,5H),1.41(d,J＝7.1Hz,3H),1.38–1.26(m,9H),1.26–1.18(m,8H),1.18–1.14(m,1H),1.12(s,1H).MS m/z:507.3(M+H).

实施例6：3-(2-(2-氟-[1,1'-联苯]-4-基)丙酰胺)-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)哌啶-1-甲酰胺(Cpd006)

1)向100mL两口瓶中依次投入化合物12(0.5g，3.2mmol)，乙酸乙酯(20mL)，并将反应体系搅拌下低温冷至-10℃。然后向反应体系中滴加4-硝基苯基氯甲酸酯(0.71g，3.52mmol)，20分钟滴毕，再在室温下搅拌反应3小时。待反应完毕后，抽滤，滤饼烘干得到白色固体化合物13(0.8g，收率78％)。

2)依次向100mL两口瓶中投入化合物13(0.20g，0.62mmol)，DMF(6mL)，哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(0.124g,0.62mmol)，DIPEA(0.22g,1.7mmol)。搅拌下，将反应体系用油浴加热至73℃，保持反应10小时。反应完全后向体系中加水30mL，乙酸乙酯萃取后有机层用水洗5次，干燥有机层并浓缩得油状物化合物14(157mg)，收率66％。

3)将上述化合物14投入50mL单口瓶投中，再加入二氯甲烷(5mL)与TFA(0.3mL)，室温搅拌反应3小时后，浓缩干反应溶剂得中间体3并直接进行下一步。

4)以上述中间体3和实施例1中酰氯19为原料，参照实施例1中消旋化合物Cpd001制备方法中的步骤4可以得到实施例6化合物(35mg，倒数两步收率17％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.44(s,1H),7.99(dd,J＝7.8,1.7Hz,1H),7.64(s,1H),7.57–7.45(m,3H),7.48–7.43(m,1H),7.39(t,J＝7.3Hz,1H),7.28–7.19(m,2H),6.38(dd,J＝11.6,7.3Hz,1H),3.82(ddd,J＝32.8,12.6,4.0Hz,1H),3.73(s,1H),3.71–3.62(m,1H),3.53(s,1H),3.30(s,1H),2.78–2.67(m,1H),1.83(t,J＝8.7Hz,2H),1.62(d,J＝16.8Hz,1H),1.43–1.21(m,16H).MSm/z:508.3(M+H).

实施例7：4-(2-(2-氟-[1,1'-联苯]-4-基)丙酰胺)-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)丁酰胺(Cpd007)

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.49(s,1H),8.04(t,J＝5.5Hz,1H),7.89(d,J＝7.4Hz,1H),7.56–7.35(m,7H),7.27–7.19(m,2H),4.07(dtt,J＝11.8,7.3,3.7Hz,1H),3.64(q,J＝7.0Hz,1H),3.30(s,1H),3.03(dhept,J＝20.0,6.9Hz,2H),2.09–1.99(m,2H),1.85(dd,J＝13.6,3.7Hz,2H),1.61(p,J＝7.3Hz,2H),1.40–1.28(m,16H),1.24(d,J＝3.6Hz,1H).MS m/z:467.2(M+H).

实施例8：2-(苄基氨基)-4-(2-(2-氟-[1,1'-联苯]-4-基)丙胺基)-N-(2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)丁酰胺(Cpd008)

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.03(q,J＝5.2Hz,1H),7.91(s,1H),7.54–7.35(m,7H),7.29(dd,J＝5.4,2.0Hz,4H),7.26–7.18(m,3H),4.11(s,1H),3.63(dp,J＝10.7,3.9,3.4Hz,2H),3.46(dd,J＝13.4,4.9Hz,1H),3.18–3.01(m,2H),2.94(t,J＝6.8Hz,1H),1.83(s,2H),1.59(ddd,J＝29.1,13.3,6.7Hz,1H),1.35(dd,J＝7.1,3.5Hz,9H),1.30(s,9H),1.24(d,J＝3.4Hz,1H).MS m/z:572.3(M+H).

实施例9：N-([1,1'-联苯基]-4-基甲基)-2-(2-氟-[1,1'-联苯基]-4-基)-N-(2-氧-2-((2,2,6,6-四甲基哌啶-4-基)氨基)乙基)丙酰胺(Cpd009)

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.74–7.20(m,11H),4.73(dd,J＝9.5,5.6Hz,1H),4.16–3.98(m,1H),3.87(dd,J＝16.7,4.7Hz,1H),1.85(t,J＝16.4Hz,1H),1.47(d,J＝6.7Hz,1H),1.45–1.27(m,11H),1.23(s,1H).MS m/z:605.3(M+H).

二、本发明化合物生物活性测试

实施例10：代表性式I所示2-氟联苯-4-乙酸衍生物体外抗肿瘤活性实验

选择人类肿瘤细胞株5株，培养于含10％灭活胎牛血清，100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的RPMI-1640(Gibco公司)或DMEM(Gibco公司)或GMEM/F12培养基(Gibco公司)中，于37℃，5％ CO₂培养箱培养。采用MTT法，将对数生长期细胞接种于96孔板(100μl/孔，2×10⁴个细胞)，同时设置空白照孔。培养过夜后加入药物溶液100μl(终浓度为25μM倍比稀释至0.39μM)，空白对照孔加等体积的培养液，每个药物浓度设3个复孔。继续培养48h后弃去上清，PBS洗两遍后每孔加入100μlMTT(5mg/ml)，继续培养2h。采用酶标仪测吸光度(A_492nm值)，计算药物对肿瘤细胞的抑制率。

应用GraphPad软件计算化合物对肿瘤细胞的IC₅₀值，结果见表2-1和表2-2。结果表明新分子Cpd001，Cpd002，Cpd003对前列腺癌，肺癌，肝癌的体外抗肿瘤活性与化合物PL-AC-202相当，优于顺铂。表2-1、表2-2中的使用的化合物Cpd001-Cpd009均为消旋体。

表2-1.实施例化合物体外抗肿瘤活性IC₅₀值(uM)

表2-2.实施例化合物体外抗肿瘤活性IC₅₀值(uM)

实施例11：代表性化合物Cpd001(S,S)体内抗肿瘤药效实验

采用BALB/c裸鼠构建体内抗肿瘤药效评价模型，于每只小鼠右前肢腋窝皮下接种0.15mL肿瘤细胞悬液(A549，2×10⁷个/ml)。待接种细胞成瘤长至300mm³时开始给药。接种后第22天腹腔注射给药(20mg/kg)，1次/2天，共给药10次，末次给药后第2天，将荷瘤小鼠全部处死，称瘤重并计算肿瘤抑制率。结果表明Cpd001(S,S)为代表的新化合物对肺癌的体内抗肿瘤药效优于PL-AC-202。

表3.Cpd001(S,S)腹腔给药对BALB/c荷瘤小鼠瘤重影响及肿瘤抑制率

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.结构式如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物或异构体：

式I中，所述R₁、R₂独立的选自下述任一基团：氢、-OR⁴，-SR⁴、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-12环烷基、C_6-12芳基、5-12元杂芳基；或者R₁和R₂可合并形成C_3-12环烷基、3-12元杂环基；其中，R⁴选自下述任一基团：氢、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-12环烷基、C_6-12芳基、3-12元杂脂环族、5-12元杂芳基，以及氢被任意的一个或者多个卤素取代的上述基团；

所述R₃选自下述任一基团：氢、C_1-8烷基、C_3-12环烷基、3-12元杂环基，或所述R₃与Linker形成的5-12元杂环脂肪基，以及R₃上的各氢任意的被R⁵取代；

其中，R⁵可独立的选自：氢，卤素，C_1-10烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-12环烷基、3-12元杂环基、C_6-14芳基、氧基C_6-14芳基或氧基C_5-14芳杂基、氮基C_6-14芳基或氮基C_5-14芳杂基、5-14元杂芳基，部分或完全卤化的C_1-5烷基；

所述Linker选自下述任一基团：C_1-8亚烷基、C_2-8亚烯基、C_2-8亚炔基、C_3-12亚环烷基、3-12元亚杂环基、C_6-12亚芳基、5-12元亚杂芳基，以及Linker上的各氢任意的被R⁶取代；

其中，R⁶选自如下基团：卤素、C_1-10烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-12环烷基、3-12元杂环基、C_6-14芳基、氧基C_6-14芳基或氧基C_5-14芳杂基、氮基C_6-14芳基或氮基C_5-14芳杂基、5-14元杂芳基。-CN、-NO₂、-CF₂H、-CF₂OH、-CF₃、-OCF₃、-CR⁷R⁸R⁹、-OR⁷、-O(C＝O)R⁷、-O(C＝O)OR⁷、-O(C＝O)NR⁸R⁹、-(C＝O)R⁷、-(C＝O)OR⁷、-(C＝O)NR⁸R⁹、-SR⁷、-(S＝O)_mR⁷、-NR⁸R⁹、-NR⁷(C＝O)R⁸、-NR⁷C(＝O)NR⁸R⁹、-NR⁷C(＝O)OR⁸、-NR⁷S(＝O)_mNR⁸R⁹、-NR⁷S(＝O)_mOR⁸或者-NR⁷S(＝O)_mR⁸，或R₆上相邻原子的基团可合并形成C_3-12环烷基、C_6-12芳基、3-12元杂环族以及5-12元杂芳环基；

其中，R⁷、R⁸、R⁹独立的选自氢，卤素或者任意的选自下述任一基团：C_1-10烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-12环烷基、3-12元杂环基、C_6-14芳基、氧基C_6-14芳基或氧基C_5-14芳杂基、氮基C_6-14芳基或氮基C_5-14芳杂基、5-14元杂芳基，或结合至相同氮原子上的R⁷、R⁸、R⁹中任意两个可与其所结合的氮一起合并，以形成3-12元杂环基或5-12元杂芳基，其任选含有1至3个选自N、O及S的另外杂原子，或结合至相同碳原子上的R⁷、R⁸、R⁹中的任意两个可合并而形成C_3-12环烷基、C_6-12芳基、3-12元杂环基或5-12元杂芳基；以及R⁷、R⁸、R⁹中的各氢任选被R¹⁰取代，或者R⁷、R⁸、R⁹中相同碳原子上的两个氢原子任选为氧代取代基；

所述R¹⁰独立的选自：氢，卤素，C_1-10烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-12环烷基、3-12元杂环基、C_6-14芳基、氧基C_6-14芳基或氧基C_5-14芳杂基、氮基C_6-14芳基或氮基C_5-14芳杂基、5-14元杂芳基；-CN、-NO₂、-OH、-NH₂、部分或完全卤化的C_1-5烷基、-C(＝O)(CH₂)_nCH₃、-C(＝O)O(CH₂)_nCH₃、-C(＝O)OH、-C(＝O)N[(CH₂)_nCH₃]₂、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)NH(CH₂)_nCH₃、-NH(CH₂)_nCH₃、-N[(CH₂)_nCH₃]₂、-N(CH₂)_nCH₃C(＝O)(CH₂)_nCH₃、-N(CH₂)_nCH₃C(＝O)NH(CH₂)_nCH₃、-N(CH₂)_nCH₃C(＝O)N[(CH₂)_nCH₃]₂、-N(CH₂)_nCH₃C(＝O)NH₂、-N(CH₂)_nCH₃C(＝O)O(CH₂)_nCH₃、-N(CH₂)_nCH₃C(＝O)OH、-NHC(＝O)(CH₂)_nCH₃、-NHC(＝O)NH(CH₂)_nCH₃、-NHC(＝O)N[(CH₂)_nCH₃]₂、-NHC(＝O)NH₂、-NHC(＝O)O(CH₂)_nCH₃,-NHC(＝O)OH,-N(CH₂)_nCH₃S(＝O)_m(CH₂)_nCH₃、-NHS(＝O)_m(CH₂)_nCH₃、-O(CH₂)_nCH₃、＝O、-OC(＝O)(CH₂)_nCH₃、OC(＝O)O(CH₂)_nCH₃、-OC(＝O)N[(CH₂)_nCH₃]₂、-OC(＝O)NH(CH₂)_nCH₃、-OC(＝O)NH₂、-S(＝O)m(CH₂)_nCH₃、-OS(＝O)m(CH₂)_nCH₃、-S(＝O)_mNH(CH₂)_nCH₃、-S(＝O)_mN[(CH₂)_nCH₃]₂；

所述m选自1或2；

所述n选自1，2，3，4或5。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物或异构体，其特征在在于：

所述R₃与Linker形成的5-12元杂环脂肪基，包括但不局限于如下基团：

所述C_3-12亚环烷基，包括但不局限于如下基团：

所述3-12元亚杂环基，包括但不局限于如下基团：

所述C_6-12亚芳基，包括但不局限于如下基团：

所述5-12元亚杂芳基、包括但不局限于如下基团：

3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物或异构体，其特征在在于：

所述R₁、R₂独立的选自下述任一基团：氢、C_1-4烷基、C_3-6环烷基、R₁与R₂形成C_3-6环烷基；

所述R₃选自下述任一基团：氢、C_1-4烷基，或所述R₃与Linker形成的5-12元杂环脂肪基；

所述Linker选自下述任一基团：-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-、-CHR¹¹CH₂-、-CH₂CHR¹¹-、-CH₂CH₂CHR¹¹-、-CHR¹¹O-、-CHR¹¹NH-、-CHNR¹¹-；

优选的，R¹¹选自下述任意基团：C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_3-8炔基，C_3-12环烷基、3-12元杂脂环基、C_6-12芳基、5-12元杂芳基、苯氨基、苄氨基、苄氧苯基，其中R¹¹上的氢任意的被R¹²取代；所述R¹²的定义与所述R¹⁰相同；

优选的，所述Linker包括但是不限于以下基团：

R₃与Linker形成的5-12元杂环脂肪基包括但是不限于以下基团：

4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物或异构体，其特征在在于：

5.权利要求1-3中任一项所述式I所示化合物的制备方法，包括下述步骤：

将式II所示的羧酸经过草酰氯(COCl)₂活化，再与中间体1或中间体2或中间体3在室温下反应获得相应的最终产物式I所示化合物；

其中，式II中R₁、R₂的定义同式I；中间体1中Linker和R₃的定义同式I，但不包括式I中R₃为氢，并且linker为-CH₂CHR¹¹-和

的情况；中间体2中R¹³的定义同上述式I中的R¹¹。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述中间体1的合成路线如下所示：

中间体1的具体制备方法如下：羧酸4与4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶在K₂CO₃和HBTU的条件下缩合得到化合物5；化合物5在TFA/DCM的条件下脱保护得到中间体1；

所述手性中间体2的合成路线如下所示：

手性中间体2的具体制备方法如下：羧酸6经过草酰氯(COCl)₂活化得到酰氯7，在n-BuLi的条件下酰胺化得到手性化合物8；化合物8在六甲基二硅基氨基锂(LiHMDS)存在且-70℃条件下与N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺反应得到手性化合物9；化合物9在H₂O₂与LiOH的条件下脱保护得到羧酸10；化合物10再和4-氨基-2，2，6，6-四甲基哌啶在HBTU和K₂CO₃的条件下缩合得到化合物11；化合物11在N₂H₄和EtOH的条件下脱保护得到手性中间体2；

所述中间体3的合成路线如下所示：

中间体3的具体制备方法如下：化合物12与4-硝基苯基氯甲酸酯反应得到中间体13；在DIPEA的条件下，化合物13与哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯进行缩合反应得到化合物14；化合物14在TFA条件下脱保护得到中间体3。

7.权利要求1-4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物或异构体在制备预防和/或治疗癌症的药物中的应用或在制备抑制癌细胞增殖药物中的应用；

优选的所述的癌症为实体癌或非实体癌，包括肝癌、肺癌、前列腺癌、结直肠癌；

所述癌细胞包括肝癌细胞、肺癌细胞、前列腺癌细胞、结直肠癌细胞。

8.一种预防和/或治疗癌症的药物或药物组合物，其特征在于：所述药物或药物组合物包括有效剂量的权利要求1-4中任一所述的式I所述的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物或异构体。

9.根据权利要求8所述的药物或药物组合物，其特征在于：所述的癌症为实体癌或非实体癌，包括肝癌、肺癌、前列腺癌、结直肠癌。

10.根据权利要求8或9所述的药物或药物组合物，其特征在于：所述药物或药物组合物的剂型包括胶囊剂、粉剂、口服液、颗粒剂、片剂。