CN115887787A - 银纳米颗粒改良的血浆基质及血浆基质膜制备方法、应用 - Google Patents
银纳米颗粒改良的血浆基质及血浆基质膜制备方法、应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种银纳米颗粒改良的血浆基质的制备方法,该方法为:在血浆基质采血管内加入银纳米颗粒,然后再加入全血样品,得到混合溶液,将混合溶液离心后,得到上层淡黄色液态血浆基质、中层固态血浆基质凝块和下层红细胞层,所述上层淡黄色液态血浆基质即为银纳米颗粒改良的液态血浆基质;还提供银纳米颗粒改良的血浆基质膜的制备方法,该方法为:将上述得到的中层固态血浆基质凝块用专用器械盒压制成膜状后,制得银纳米改良的血浆基质膜。获得的银纳米颗粒改良的血浆基质膜单独或与骨替代材料联合用于引导骨再生。本发明制备的银纳米颗粒改良的血浆基质的凝胶结构更稳定、具有更好的流变性能、降解更慢的特点。
Description
技术领域
本发明属于血液制品技术领域,具体涉及一种银纳米颗粒改良的血浆基质及血浆基质膜的制备方法、应用。
背景技术
血液制品在组织工程中的应用,在过去数十年间发展迅速。液态血浆基质作为一种可注射的生物材料,具有广泛的应用潜力。在口腔组织再生领域中,它主要可用于混合颗粒状骨再生材料,并且可以用作活性蛋白的载体,促进骨再生。作为一种取自患者自体血液的代用品,液态血浆基质在制备完成后可以保持液态一段时间,随后凝结成凝胶状,并且其中含有自体活细胞、蛋白因子等,可以进一步提高组织再生效果。另外,液态血浆基质的这一特性,还可以用于牙龈龈乳头缺失的注射充填,面部轮廓凹陷的注射充填等。
在口腔临床实践中,由于牙齿缺失、炎症、疾病、肿瘤等,常导致牙槽骨缺损、软组织缺损等,常需要使用引导骨组织再生术进行治疗。引导骨组织再生术中,需要使用屏障膜,隔离外界软组织长入骨缺损内部。目前临床上常用的有胶原膜、钛网和固态血浆基质膜等。其中,固态血浆基质膜取自患者自体血液,具有自体活细胞、蛋白因子等,因此具有较好的再生效果,受到广泛关注。然而,固态血浆基质膜存在降解较快、强度较低的问题。另一方面,口腔是一种开放多菌的环境,引导骨组织再生术后可能会出现伤口裂开、感染等问题,如果植入的膜具有抗菌效果,能够进一步提高手术成功率和骨再生效果。
不论是骨再生还是注射充填,都属于有创操作,尽管手术过程中尽量做到无菌,但依然存在感染风险,感染后造成的后果较为严重。另外,液态血浆基质强度较低,在骨缺损、软组织缺损中应用时难以维持缺损区形态,使组织再生效果降低。银纳米颗粒是一种生物安全性高的材料,并且大量文献证实银纳米颗粒具有广谱抗菌效果。
为解决上述问题,本发明开发一种具有良好抗菌效果、强度高的血浆基质及血浆基质膜的制备方法很有意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足,提供一种银纳米颗粒改良的血浆基质及血浆基质膜的制备方法、应用,该方法制备的银纳米颗粒改良的液态血浆基质具有良好的抗菌效果,同时液态血浆基质凝胶强度增加;制备得到的银纳米颗粒改良的固态血浆基质膜具有抗菌能力,且增加了机械强度。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:一种银纳米颗粒改良的血浆基质的制备方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
在血浆基质采血管内加入银纳米颗粒,然后再加入全血样品,得到混合溶液,将所述混合溶液离心2min~8min,得到上层淡黄色液态血浆基质、中层固态血浆基质凝块和下层红细胞层,所述上层淡黄色液态血浆基质即为银纳米颗粒改良的液态血浆基质。
优选地,所述全血样品的用量为10mL。
优选地,所述银纳米颗粒的粒径为<150nm。
优选地,所述混合溶液中银纳米颗粒的重量与所述混合溶液的体积之比为0.1%~0.5%。
优选地,所述离心的离心力为500×g~700×g。
优选地,所述血浆基质采血管为疏水的塑料血浆基质采血管或亲水的玻璃血浆基质采血管。
还提供一种银纳米颗粒改良的血浆基质膜的制备方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
将所述中层固态血浆基质凝块用专用压膜器械盒压制成膜状,制得银纳米颗粒改良的血浆基质膜。
还提供上述银纳米颗粒改良的血浆基质膜的制备方法的应用,其特征在于,所述银纳米颗粒改良的血浆基质膜与骨替代材料联合用于引导骨再生或,所述银纳米颗粒改良的血浆基质膜单独用于引导骨再生。
优选地,所述骨替代材料为骨水泥、生物活性陶瓷或无机牛骨基质;所述银纳米颗粒改良的血浆基质膜与所述骨替代材料的质量比为(1~2):1。
本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明通过掺入银纳米颗粒,从而使液体血浆基质获得抗菌效果,同时可使血浆基质凝胶强度增加,提高其在口腔组织再生中的应用效果。
2、本发明方法通过掺入银纳米颗粒,从而使固体血浆基质膜具有抗菌能力,且增加了机械强度,可单独应用或与各种生物材料联合使用,能够提高引导骨再生效果,拓宽适应症。
下面通过附图和实施例对本发明的技术方案作进一步的详细说明。
附图说明
图1是实施例1中银纳米颗粒改良的液态血浆基质、对比例1中普通液态血浆基质分别与唾液共同培养后,在细菌培养液中培养24小时后在600nm处的吸光光度值。
图2是实施例1中银纳米颗粒改良的液态血浆基质和对比例1中普通液态血浆基质的刚度值。
图3是实施例1中银纳米颗粒改良的液态血浆基质和对比例1中普通液态血浆基质的降解曲线。
图4是实施例2中银纳米颗粒改良的血浆基质膜和对比例2中普通血浆基质膜的断裂强度图。
图5是实施例2中银纳米颗粒改良的血浆基质膜、对比例2中普通血浆基质膜分别与唾液共同培养后,在细菌培养液中培养12小时后的在600nm处的吸光光度值。
图6是实施例2中银纳米颗粒改良的血浆基质膜单独应用和与骨替代材料联合使用的图片。
图7是实施例2中银纳米颗粒改良的血浆基质膜与骨替代材料联合使用的引导骨再生治疗效果图。
具体实施方式
实施例1
本实施例银纳米颗粒改良的血浆基质的制备方法,包括以下步骤:
在疏水的塑料血浆基质采血管内加入银纳米颗粒,然后再加入10mL全血样品,得到混合溶液;将所述混合溶液迅速放入水平离心机中在离心力为500×g的条件下离心8min,得到上层淡黄色液态血浆基质、中层固态血浆基质凝块和下层红细胞层,上层淡黄色液态血浆基质即为银纳米颗粒改良的液态血浆基质;
所述全血样品取自志愿者肘窝处,所述全血样品中血小板的含量为100×109/升~300×109/升;所述混合溶液中银纳米颗粒的重量与混合溶液的体积之比为0.1%,所述银纳米颗粒的粒径为100nm。
对比例1
本对比例制备普通液态血浆基质的方法与实施例1相同,其不同之处在于,本对比例在疏水的塑料血浆基质采血管中不添加银纳米颗粒。
分别将实施例1制得的银纳米颗粒改良的液态血浆基质和对比例1制得的普通液态血浆基质用注射器吸取,放置在6孔板中待其成为凝胶,不再流动,分别得到银纳米颗粒改良的液态血浆基质凝胶和普通液态血浆基质凝胶。
(1)从同一个健康志愿者处收集唾液,分别在银纳米颗粒改良的液态血浆基质凝胶和普通液态血浆基质凝胶中各加入1mL唾液,并作空白对照组,在温度为37℃的条件下浸泡24h,然后用磷酸盐缓冲液冲洗两组血浆基质凝胶各1min,共冲洗3次;然后将冲洗后的银纳米颗粒改良的液态血浆基质凝胶和普通液态血浆基质凝胶浸泡在脑心浸提液培养基中培养12h,用紫外分光光度计读取600nm处空白脑心浸提液培养基、普通液态血浆基质凝胶浸泡后的培养基、银纳米颗粒改良的液态血浆基质凝胶浸泡后培养基的吸光度值。
结果如图1所示,可看到银纳米颗粒改良的液态血浆基质凝胶与唾液一起培养后,再在培养基中培养12小时,其浑浊程度与空白培养基相似,说明该液态血浆基质凝胶上并未生长唾液中的细菌。而普通液态血浆基质凝胶组明显浑浊,说明普通液态血浆基质凝胶上有唾液中细菌定植。这说明银纳米颗粒改良的液态血浆基质凝胶能够有效抗菌,减少在口腔组织再生应用中出现感染的几率,提高组织再生效果。
(2)使用机械力学测量装置测定普通液态血浆基质凝胶和银纳米颗粒改良的液态血浆基质凝胶的力学性能(刚度值)。
结果如图2所示,可看到银纳米颗粒改良的液态血浆基质凝胶的刚度值明显高于普通固态血浆基质凝胶的刚度值。可见,银纳米颗粒改良的液态血浆基质凝胶具有更强的力学性能。
(3)将实施例1制备的银纳米颗粒改性的液态血浆基质凝胶和对比例1制备的普通液态血浆基质凝胶的降解性能进行测试。将样品浸没于DMEM培养基中,放置于37℃恒温培养箱,每2天使用分析天平对样品的质量进行称量并记录,并更换新鲜培养基,结果如图3所示。
可见银纳米颗粒改良的液态血浆基质凝胶的单位时间降解量显著低于普通液态血浆基质凝胶。这说明,当使用银纳米颗粒改良的液态血浆基质凝胶用于软组织注射等适合,该材料能够在植入区域维持更久,使其支撑效果更持久。
本发明选取2000~3000个志愿者的全血样品进行本实施例S1-S2处理,得到的银纳米颗粒改良的血浆基质均具有抗菌效果,同时可使血浆基质凝胶强度增加。
实施例2
本实施例银纳米颗粒改良的血浆基质膜的制备方法,包括以下步骤:
S1、在亲水的玻璃血浆基质采血管内加入银纳米颗粒,然后再加入10mL全血样品,得到混合溶液,将所述混合溶液迅速放入水平离心机中在离心力为700×g的条件下离心8min,得到上层淡黄色液态血浆基质、中层固态血浆基质凝块和下层红细胞层;
所述全血样品取自志愿者肘窝处,所述全血样品中血小板的含量为100×109/升~300×109/升;所述混合溶液中银纳米颗粒的重量与混合溶液的体积之比为0.1%,所述银纳米颗粒的粒径<150nm;
S2、将S1中得到的中层固态血浆基质凝块用剪刀钝性分离下方红细胞层,然后用专用器械盒压制成膜状,制得银纳米颗粒改良的固态血浆基质膜(即银纳米颗粒改良的血浆基质膜);所述专用机械盒为武汉维印科技有限公司提供的血浆基质制备套装中的压膜专用器械盒。
对比例2
本对比例制备普通固态血浆基质膜的方法与实施例2相同,其不同之处在于,本对比例在亲水的玻璃血浆基质采血管中不添加银纳米颗粒。
(1)使用力学设备,分别测定实施例2制得的银纳米颗粒改良的固态血浆基质膜和对比例2制得的普通固态血浆基质膜的断裂强度(拉伸强度)。
结果如图4所示,可看到银纳米颗粒改良的固态血浆基质膜的断裂强度显著高于普通固态血浆基质膜,差异具有统计学意义。这说明,在引导骨再生手术时,使用自体来源的银纳米颗粒改良的固态血浆基质膜充当骨替代材料的屏障膜,通过覆盖在骨替代材料的表面,并可通过膜钉辅助固定在骨面,这种膜将能具有更强的抗断裂的能力,更长的降解时间,方便临床操作和缝线,增强了血浆基质膜的屏障作用。
血浆基质膜由于制备方便,能够较容易从患者自身获得,因此通常不需要从其他个体取得,避免了发生免疫排异反应的风险;因此,本发明制备的血浆基质膜从患者自身获得,也用于患者本身。
(2)从同一个健康志愿者处收集唾液,分别在银纳米颗粒改良的固态血浆基质膜和普通固态血浆基质膜中各加入1mL唾液,在温度为37℃的条件下浸泡24h,然后用磷酸盐缓冲液冲洗两组固态血浆基质膜各1min,共冲洗3次;然后将冲洗后的银纳米颗粒改良的固态血浆基质膜和普通固态血浆基质膜浸泡在脑心浸提液培养基中培养12h,用紫外分光光度计读取600nm处空白脑心浸提液培养基、普通固态血浆基质膜浸泡后的培养基、银纳米颗粒改良的固态血浆基质膜浸泡后培养基的吸光度值。
结果如图5所示,可看到银纳米颗粒改良的固态血浆基质膜与唾液一起培养后,再在培养基中培养12小时,其浑浊程度与空白培养基相似,说明该固态血浆基质膜上并未生长唾液中的细菌。而普通固态血浆基质膜组明显浑浊,说明普通固态血浆基质膜上有唾液中细菌定植。这说明银纳米颗粒改良的固态血浆基质膜能够有效抗菌,减少术后感染几率。
本实施例制备的银纳米颗粒改良的血浆基质膜能够单独用于引导骨再生治疗;本实施例制备的银纳米颗粒改良的血浆基质膜能够与骨替代材料联合用于引导骨再生治疗,如图6所示。
将本实施例制备的银纳米颗粒改良的血浆基质膜裁剪成直径为1mm的小块后和骨替代材料(骨水泥)按质量比为(1~2):1的比例充分混合,根据患者的骨缺损形态初步塑形后,填塞入骨缺损处进行骨引导再生治疗手术,术后4周进行CT检查,结果显示新骨稳定形成,如图7所示。
本实施例中骨替代材料还可以是生物活性陶瓷或无机牛骨基质。
本发明选取1000~2000个志愿者的全血样品进行本实施例S1-S2处理,得到的银纳米颗粒改良的血浆基质膜均抗菌能力,且增加了机械强度,可单独应用或与各种生物材料联合使用,能够提高引导骨再生效果,拓宽适应症的特点。
实施例3
本实施例银纳米颗粒改良的血浆基质膜的制备方法,包括以下步骤:
S1、在亲水的玻璃血浆基质采血管内加入银纳米颗粒,然后再加入10mL全血样品,得到混合溶液,将所述混合溶液迅速放入水平离心机中在离心力为500×g的条件下离心6min,得到上层淡黄色液态血浆基质、中层固态血浆基质凝块和下层红细胞层;
所述全血样品取自志愿者肘窝处,所述全血样品中血小板的含量为100×109/升~300×109/升;所述混合溶液中银纳米颗粒的重量与混合溶液的体积之比为0.5%,所述银纳米颗粒的粒径为110nm;
S2、将S1中得到的中层固态血浆基质凝块用剪刀钝性分离下方红细胞层,然后用专用器械盒压制成膜状,制得银纳米颗粒改良的固态血浆基质膜(即银纳米颗粒改良的血浆基质膜);所述专用机械盒为武汉维印科技有限公司提供的血浆基质制备套装中的压膜专用器械盒。
实施例4
本实施例银纳米颗粒改良的血浆基质膜的制备方法,包括以下步骤:
S1、在亲水的玻璃血浆基质采血管内加入银纳米颗粒,然后再加入10mL全血样品,得到混合溶液,将所述混合溶液迅速放入水平离心机中在离心力为600×g的条件下离心2min,得到上层淡黄色液态血浆基质、中层固态血浆基质凝块和下层红细胞层;
所述全血样品取自志愿者肘窝处,所述全血样品中血小板的含量为100×109/升~300×109/升;所述混合溶液中银纳米颗粒的重量与混合溶液的体积之比为0.3%,所述银纳米颗粒的粒径<140nm;
S2、将S1中得到的中层固态血浆基质凝块用剪刀钝性分离下方红细胞层,然后用专用器械盒压制成膜状,制得银纳米颗粒改良的固态血浆基质膜(即银纳米颗粒改良的血浆基质膜);所述专用机械盒为武汉维印科技有限公司提供的血浆基质制备套装中的压膜专用器械盒。
实施例5
本实施例银纳米颗粒改良的血浆基质的制备方法,包括以下步骤:
在疏水的塑料血浆基质采血管内加入银纳米颗粒,然后再加入10mL全血样品,得到混合溶液;将所述混合溶液迅速放入水平离心机中在离心力为700×g的条件下离心2min,得到上层淡黄色液态血浆基质、中层固态血浆基质凝块和下层红细胞层,上层淡黄色液态血浆基质即为银纳米颗粒改良的液态血浆基质;
所述全血样品取自志愿者肘窝处,所述全血样品中血小板的含量为100×109/升~300×109/升;所述混合溶液中银纳米颗粒的重量与混合溶液的体积之比为0.5%,所述银纳米颗粒的粒径为120nm。
实施例6
本实施例银纳米颗粒改良的血浆基质的制备方法,包括以下步骤:
在疏水的塑料血浆基质采血管内加入银纳米颗粒,然后再加入10mL全血样品,得到混合溶液;将所述混合溶液迅速放入水平离心机中在离心力为600×g的条件下离心5min,得到上层淡黄色液态血浆基质、中层固态血浆基质凝块和下层红细胞层,上层淡黄色液态血浆基质即为银纳米颗粒改良的液态血浆基质;
所述全血样品取自志愿者肘窝处,所述全血样品中血小板的含量为100×109/升~300×109/升;所述混合溶液中银纳米颗粒的重量与混合溶液的体积之比为0.3%,所述银纳米颗粒的粒径为140nm。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例,并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化,均仍属于本发明技术方案的保护范围内。
Claims (9)
1.一种银纳米颗粒改良的血浆基质的制备方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
在血浆基质采血管内加入银纳米颗粒,然后再加入全血样品,得到混合溶液,将所述混合溶液离心2min~8min,得到上层淡黄色液态血浆基质、中层固态血浆基质凝块和下层红细胞层,所述上层淡黄色液态血浆基质即为银纳米颗粒改良的液态血浆基质。
2.根据权利要求1所述的一种银纳米颗粒改良的血浆基质的制备方法,其特征在于,所述全血样品的用量为10mL;所述全血样品中血小板的含量为100×109/升~300×109/升。
3.根据权利要求1所述的一种银纳米颗粒改良的血浆基质的制备方法,其特征在于,所述银纳米颗粒的粒径<150nm。
4.根据权利要求1所述的一种银纳米颗粒改良的血浆基质的制备方法,其特征在于,所述混合溶液中银纳米颗粒的重量与所述混合溶液的体积之比为0.1%~0.5%。
5.根据权利要求1所述的一种银纳米颗粒改良的血浆基质的制备方法,其特征在于,所述离心的离心力为500×g~700×g。
6.根据权利要求1所述的一种银纳米颗粒改良的血浆基质的制备方法,其特征在于,血浆基质采血管为疏水的塑料血浆基质采血管或亲水的玻璃血浆基质采血管。
7.根据权利要求1-6任一项所述的一种银纳米颗粒改良的血浆基质膜的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:将所述中层固态血浆基质凝块用专用压膜器械盒压制成膜状,制得银纳米颗粒改良的血浆基质膜。
8.一种如权利要求7所述的银纳米颗粒改良的血浆基质膜的制备方法的应用,其特征在于,所述银纳米颗粒改良的血浆基质膜与骨替代材料联合用于引导骨再生或,所述银纳米颗粒改良的血浆基质膜单独用于引导骨再生。
9.根据权利要求8所述的一种银纳米颗粒改良的血浆基质膜的制备方法的应用,其特征在于,所述骨替代材料为骨水泥、生物活性陶瓷或无机牛骨基质。
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CN112295017A (zh) * | 2020-10-28 | 2021-02-02 | 武汉齿欣生物医药科技有限责任公司 | 一种固态富血小板纤维蛋白膜的优化制备方法 |
WO2022047367A1 (en) * | 2020-08-31 | 2022-03-03 | Vitruvian Medical Devices, Inc. | Storage stable films comprising fibrin and/or fibrinogen |
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