CN115887740B - 一种多孔止血粉及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本申请涉及生物医药领域，具体公开了一种多孔止血粉及其制备方法。多孔止血粉的制备方法为：S1、将莲藕淀粉配制成莲藕淀粉浆，加入α‑淀粉酶和糖化酶，混合反应，洗涤，干燥，制得微孔莲藕淀粉；S2、将微孔莲藕淀粉进行辐照处理，抽提，干燥，制得辐照处理后淀粉；S3、将辐照处理后淀粉制成浓度为5‑10wt%的淀粉贮备液，将鱼类胶原蛋白制成浓度为20‑25wt%的鱼类胶原蛋白贮备液；S4、将淀粉贮备液和鱼类胶原蛋白贮备液混合，制成交联贮备液；S5、向交联贮备液中加入花青素水溶液，搅拌冷冻干燥，制得多孔止血粉。本申请制成的多孔止血粉吸水速度快，止血效果好，能封堵破损组织或血管，且抗菌作用持久的优点。

Description

一种多孔止血粉及其制备方法

技术领域

本申请涉及生物医药技术领域，更具体地说，它涉及一种多孔止血粉及其制备方法。

背景技术

创伤、急救及外科手术出血是亟待解决的问题之一，缓慢少量的出血可以依靠自身机制止血，但各种突发性事故中人体动脉出血、脏器破裂的隐蔽性渗血现象，机体不能自行止血，也不能尽靠普通的止血绷带压迫止血，术中出血过多使得手术时间延长，可能会出现严重的并发症，如失血性休克等。目前常用的有效止血方法是采用生物相容性的可吸收性材料止血，在外科手术、急救等止血中提供一种安全有效、使用方便、成本低廉的止血材料显得尤为重要。

目前，临床上使用的止血材料主要有纤维蛋白胶、鱼类胶原蛋白、明胶海绵及纤维素止血材料，这些材料在动物实验及临床应用中都取得了不错的效果，但也存在一些不足，胶原其原料来源于动物组织，是异种蛋白，容易出现排异性，具有潜在的致敏性；明胶吸收速度缓慢，一般4周以上，会增加伤口感染的风险，纤维素类，人体缺乏使其降解的酶，降解时间长，可能会带来感染等副作用。

粉状淀粉止血材料已在临床应用，并显示出吸水止血速度快，吸血量大等优点，申请号为CN201510225790.8的中国发明专利申请文件中公开了一种改性淀粉止血粉的制备方法，通过交联改性，喷雾干燥制成改性淀粉止血微球，但其稳定性差、易崩解、止血过程中容易出现包粉现象，导致吸液能力显著降低，止血效果不佳。

发明内容

为了提高淀粉类止血粉的止血速度，改善止血效果，本申请提供一种多孔止血粉及其制备方法。

第一方面，本申请提供一种多孔止血粉的制备方法，采用如下的技术方案：

一种多孔止血粉的制备方法，包括以下步骤：

S1、将莲藕淀粉用去离子水配制成浓度为40-45wt％的莲藕淀粉浆，加入α-淀粉酶和糖化酶，调节pH至4.8-5，升温至50-55℃，混合反应20-24h，洗涤，干燥，制得微孔莲藕淀粉；

S2、将所述微孔莲藕淀粉进行辐照处理，乙醇抽提3-5次，干燥，制得辐照处理后淀粉；

S3、将所述辐照处理后淀粉加入到去离子水中，制成浓度为5-10wt％的淀粉贮备液，将鱼类胶原蛋白加入到去离子水中，制成浓度为20-25wt％的鱼类胶原蛋白贮备液；

S4、将所述淀粉贮备液和所述鱼类胶原蛋白贮备液按照1:(3-4)的质量比混合，在4-10℃混合3-5h，制成交联贮备液；

S5、向所述交联贮备液中加入浓度为0.3-0.5wt％的花青素水溶液，升温至90-95℃，搅拌30-40min，冷冻干燥，制得多孔止血粉。

通过采用上述技术方案，使用莲藕淀粉和鱼类胶原蛋白作为多孔止血粉的原料，鱼类胶原蛋白组成结构与人体最接近，跟人体有较好的亲和性，是最为人体组织所辨识吸收的胶原蛋白，避免了采用动物源胶原蛋白等材料引起的过敏、感染等使伤口难以愈合的情况，将莲藕淀粉经淀粉酶和糖化酶的复合酶处理，在莲藕淀粉表面形成孔径较为均匀的微孔，增大莲藕淀粉的比表面积，使其具有优异的吸附性能和吸水性，然后再采用射线对其进行辐照，使莲藕淀粉上微孔进一步增多，吸水率得到进一步的改善，止血效果提升；最后以花青素作为交联剂，花青素属于多酚类物质，与连藕淀粉和鱼类胶原蛋白具有较好的相容性，且其分子中的羟基能与鱼类胶原蛋白中的羧基相互作用形成酯键，将莲藕淀粉和鱼类胶原蛋白形成三维网络结构，这种结构具有一定的持水性和保水性，具有较好的止血性能，而且花青素具有一定的抗菌、抗炎、促进伤口愈合、杀灭细菌的作用，能进一步改善止血粉的止血作用。

可选的，所述莲藕淀粉浆、α-淀粉酶和糖化酶的质量比为10:(0.02-0.2):(0.06-0.6)。

通过采用上述技术方案，使用α-淀粉酶和糖化酶对莲藕淀粉进行酶解，能使莲藕淀粉上形成孔径均匀的微孔，改善莲藕淀粉的吸水率，提升止血粉的止血效果。

可选的，所述莲藕淀粉由以下方法制成：

将新鲜莲藕清洗、去皮、切块、打浆、过滤，滤液静置，弃去上清液，获得淀粉，加入芦荟胶，混匀，烘干，加入榆树皮粉末，混合均匀，粉碎，制成莲藕淀粉，芦荟胶、榆树皮粉末和淀粉的质量比为(0.1-0.3):(0.2-0.6):1。

在对流动性出血组织或血管进行止血时，若止血粉吸水形成的凝胶封堵力不足的话，会被流出的血液带离组织和血管，失去止血作用，通过采用上述技术方案，将莲藕制成的淀粉，与芦荟胶先进行混合，芦荟胶能在淀粉表面黏附，增大淀粉的粘性，然后加入榆树皮粉末，榆树皮粉末遇水呈现凝胶性，能使止血粉具有更大的粘性和粘度，形成凝血混合物时有很好的粘附力，封堵破损组织及血管，用于活动性出血的止血。

可选的，所述花青素水溶液的加入量为交联贮备液重量的10-13％。

通过采用上述技术方案，花青素水溶液加入量过低不能使胶原蛋白充分反应，加入量过高，在胶原蛋白表面形成聚合物，难以渗透到胶原蛋白纤维束内部，花青素水溶液加入量为交联贮备液重量的10-13％时，能更快渗透至胶原蛋白内部，使其交联充分均匀。

可选的，所述辐照射线为⁶⁰Co-γ射线，辐照剂量率为2-4kGy/h，辐照温度为室温，辐照时间为1-8h。

可选的，所述交联贮备液和花青素水溶液升温共混后，加入纳米二氧化硅分散液，以140-160W的功率超声40-50min，纳米二氧化硅分散液的加入量为交联贮备液重量的10-15％。

通过采用上述技术方案，将纳米二氧化硅分散液使用超声作用分散在交联贮备液和花青素水溶液升温交联反应后的所得物中，纳米二氧化硅粒子的加入，能破坏莲藕淀粉与鱼类胶原蛋白的晶体结构，纳米二氧化硅粒子、莲藕淀粉和鱼类胶原蛋白具有较好的生物相容性，三者之间形成更加复杂致密的网络结构，且纳米二氧化硅粉末水合形成的硅-氧无机三维网络中，存在大量结合水与水产生的羟基，因此纳米二氧化硅粉末也具有初步吸水能力，在遇到血液时，初步溶胀形成微凝胶颗粒，使止血粉网络得到一定程度的膨胀、疏松，从而提高止血效果；另外纳米二氧化硅与莲藕淀粉、鱼类胶原蛋白之间形成新的氢键和其他化学键，分子间相互作用增强，纳米二氧化硅与鱼类胶原蛋白、莲藕淀粉形成新的交联链缠结构，使止血粉吸水膨胀后形成的结构更加致密，使微生物的生长及小分子气体在材料内传递受阻，从而提高了抗菌效果。

可选的，所述纳米二氧化硅分散液由二氧化硅、聚乙烯基吡咯烷酮和去离子水按照1:0.3-0.6:100-150的质量比超声混合制成。

通过采用上述技术方案，纳米二氧化硅具较大的比表面积，会导致颗粒间极不稳定而易发生团聚，使用超声并配合聚乙烯基吡咯烷酮作为分散剂，能使纳米二氧化硅分散液具有较好的分散稳定性。

可选的，所述步骤S5中，向加入花青素水溶液的交联贮备液中加入长效抗菌微球，长效抗菌微球与交联贮备液的质量比为(0.1-0.3):1。

通过采用上述技术方案，止血粉在粘附在受损组织或血管后，随着伤口的愈合，抗菌作用逐渐消失，易引起伤口感染，影响伤口继续愈合，在止血粉中加入长效抗菌微球，能延长止血粉的抗菌效果，使受损组织或血管在愈合过程中不易感染。

可选的，所述长效抗菌微球采用以下方法制成：

将聚乙烯醇溶于去离子水中，获得5-8wt％的聚乙烯醇溶液；

将壳聚糖加入到浓度为1-3wt％的醋酸溶液中，搅拌溶解，加入聚乙烯醇溶液、吐温-80，混匀，制成共混液，壳聚糖、吐温-80与聚乙烯醇的质量比为(0.1-0.3):(0.01-0.03):5；

将溶菌酶溶解于pH为5-8的磷酸缓冲液中，得到浓度0.1-3wt％的溶菌酶溶液，将脱胶后的丝素用溴化锂溶液溶解，制成丝素蛋白溶液；

向丝素蛋白溶液中加入浓度为10-13wt％的丙三醇溶液，搅拌均匀后加入所述溶菌酶溶液，在-(40～35)℃下冷冻6-7h后冷冻干燥30-36h，制成多孔材料，溶菌酶溶液和丝素蛋白溶液的质量比为(7-10):100；

将共混液喷涂在多孔材料上，然后进行辐照交联，制成长效抗菌微球，共混液和多孔材料的质量比为1:(0.6-1)。

通过采用上述技术方案，溶菌酶具有较好的抑菌作用，且蚕丝丝素蛋白具有抗菌性，将溶菌酶溶液和丝素蛋白溶液混合，带有正电荷的溶菌酶与带有负电荷的丝素蛋白依靠静电作用结合，通过冷冻干燥技术使丝素蛋白中形成多孔结构，从而将溶菌酶装载到具有多孔结构的丝素蛋白骨架中，多孔结构能够为溶菌酶的释放提供通道，且多孔结构使得制成的多孔材料的吸水性能良好，有利于创面渗出液的吸收，最后将由壳聚糖和聚乙烯醇混合制成的混合液喷涂在多孔材料上，在辐照作用下，形成表面分布十分均匀微孔的三维网络结构，微孔与微孔之间相互毗邻，形成类似孔状的结构，这些孔状结构一方面作为水分迅速进入的通道，增加止血粉与水接触时，吸收水分的比表面积，保证了吸水能力和吸水速度，另一方面，提高了溶胀速率，保证了更短时间内达到更好的溶胀性能，随着具有抗菌性溶菌酶的释放，壳聚糖逐渐降解成寡糖，促进创面的愈合，而且壳聚糖降解后，丝素蛋白骨架也会逐渐释放，改善止血蛋白的抗菌持久性。

第二方面，本申请提供一种多孔止血粉，采用如下的技术方案：

一种多孔止血粉，由多孔止血粉的制备方法制成。

通过采用上述技术方案，由此制成的多孔止血粉生物相容性好，吸水率高，止血速度快，促进创面愈合，抗菌性持久。

综上所述，本申请具有以下有益效果：

1、由于本申请采用莲藕淀粉和鱼类胶原蛋白作为原料，经酶解、辐照处理和花青素作为交联剂互相交联反应后制得多孔止血粉，制备方法简单，制成的多孔止血粉生物相容性好，不易引起过敏，能促进创面愈合，止血效果好。

2、本申请中优选采用莲藕、芦荟胶和榆树皮粉末混合并粉碎制备莲藕淀粉，能增强莲藕淀粉的粘性，使止血粉的封堵力增强，且芦荟胶能进一步改善莲藕淀粉的抗菌性。

3、本申请中方法优选向交联贮备液中加入纳米二氧化硅分散液，能进一步提高止血粉的吸水率，并提高止血粉遇水形成的三维网络结构的致密性，改善止血粉的抗菌性。

4、本申请中方法优选向交联贮备液中加入长效抗菌微球，且长效抗菌微球由丝素蛋白骨架负载溶菌酶制成多孔材料，并在多孔材料上包覆由壳聚糖和聚乙烯醇辐照交联形成具有微孔的三维网络保护层，溶菌酶能由丝素蛋白骨架上释放，并有壳聚糖和聚乙烯醇交联形成的三维网络结构上逐渐释放，达到长效抗菌作用，且随着溶菌酶的释放，壳聚糖逐渐降解，随着三维网络结构的崩塌，丝素蛋白骨架逐渐释放，进一步延长抗菌持久性。

具体实施方式

莲藕淀粉的制备例

制备例1：将新鲜莲藕清洗、去皮、切块、打浆、过滤，滤液静置，弃去上清液，获得淀粉，加入芦荟胶，混匀，在40℃下恒温热风干燥24h，加入榆树皮粉末，混合均匀，粉碎，制成莲藕淀粉，芦荟胶、榆树皮粉末和淀粉的质量比为0.3:0.6:1。

制备例2：将新鲜莲藕清洗、去皮、切块、打浆、过滤，滤液静置，弃去上清液，获得淀粉，加入芦荟胶，混匀，在40℃下恒温热风干燥24h，加入榆树皮粉末，混合均匀，粉碎，制成莲藕淀粉，芦荟胶、榆树皮粉末和淀粉的质量比为0.1:0.2:1。

制备例3：与制备例1的区别在于，未添加芦荟胶。

制备例4：与制备例1的区别在于，未添加榆树皮粉末。

长效抗菌微球的制备例5-9

制备例5：(1)将型号为124的聚乙烯醇加入到去离子水中，升温至80℃下搅拌3h至完全溶解，获得8wt％的聚乙烯醇溶液；

(2)将壳聚糖加入到浓度为3wt％的醋酸溶液中，搅拌溶解，加入聚乙烯醇溶液、吐温-80，混匀，制成共混液，壳聚糖、吐温-80与聚乙烯醇的质量比为0.3:0.03:5，壳聚糖与醋酸溶液质量比为1:100；

(3)将溶菌酶溶解于pH为8的磷酸缓冲液中，得到浓度3wt％的溶菌酶溶液；将丝素用浓度为0.05％碳酸钠溶液进行脱胶，制成脱胶后丝素，将脱胶后的丝素用溴化锂溶液溶解，制成丝素蛋白溶液，脱胶后丝素与溴化锂溶液的质量比为1:10；

(4)向丝素蛋白溶液中加入浓度为13wt％的丙三醇溶液，搅拌均匀后加入所述溶菌酶溶液，在-35℃下冷冻7h后冷冻干燥30h，制成多孔材料，丝素蛋白溶液和溶菌酶溶液的质量比为100:10，丙三醇溶液的加入量为使丙三醇质量为脱胶后丝素质量的30％；

(5)将共混液喷涂在多孔材料上，然后使用⁶⁰Co源的γ射线进行辐照交联，制成长效抗菌微球，共混液和多孔材料的质量比为1:1，辐照温度为室温，辐照30h，辐照量为1kGy。

制备例6：(1)将型号为124的聚乙烯醇加入到去离子水中，升温至80℃下搅拌3h至完全溶解，获得5wt％的聚乙烯醇溶液；

(2)将壳聚糖加入到浓度为1wt％的醋酸溶液中，搅拌溶解，加入聚乙烯醇溶液、吐温-80，混匀，制成共混液，壳聚糖、吐温-80与聚乙烯醇的质量比为0.1:0.01:5，壳聚糖与醋酸溶液质量比为1:100；

(3)将溶菌酶溶解于pH为5的磷酸缓冲液中，得到浓度0.1wt％的溶菌酶溶液；将丝素用浓度为0.05％碳酸钠溶液进行脱胶，制成脱胶后丝素，将脱胶后的丝素用溴化锂溶液溶解，制成丝素蛋白溶液，脱胶后丝素与溴化锂溶液的质量比为1:10；

(4)向丝素蛋白溶液中加入浓度为10wt％的丙三醇溶液，搅拌均匀后加入所述溶菌酶溶液，在-40℃下冷冻6h后冷冻干燥36h，制成多孔材料，丝素蛋白溶液和溶菌酶溶液的质量比为100:7，丙三醇溶液的加入量为使丙三醇质量为脱胶后丝素质量的30％；

(5)将共混液喷涂在多孔材料上，然后使用⁶⁰Co源的γ射线进行辐照交联，制成长效抗菌微球，共混液和多孔材料的质量比为1:0.6，辐照温度为室温，辐照30h，辐照量为1kGy。

制备例7：(1)将聚乙烯醇加入到去离子水中，升温至80℃下搅拌3h至完全溶解，获得8wt％的聚乙烯醇溶液；

(2)将壳聚糖加入到浓度为3wt％的醋酸溶液中，搅拌溶解，加入聚乙烯醇溶液、吐温-80，混匀，制成共混液，壳聚糖、吐温-80与聚乙烯醇的质量比为0.3:0.03:5，壳聚糖与醋酸溶液质量比为1:100；

(3)将溶菌酶溶解于pH为8的磷酸缓冲液中，得到浓度3wt％的溶菌酶溶液；

(4)将共混液和溶菌酶溶液混合均匀，然后使用⁶⁰Co源的γ射线进行辐照交联，辐照温度为室温，辐照30h，辐照量为1kGy，制得长效抗菌微球，共混液与多孔材料的质量比为1:1。

制备例8：与实施例5的区别在于，步骤(5)中，将共混液和多孔材料共混均匀，离心，将沉淀冷冻干燥，冷冻温度为-80℃，干燥腔压力为0.1MPa。

制备例9：与制备例5的区别在于，使用埃洛石纳米管替代丝素蛋白溶液，具体方法为：将埃洛石纳米管加入到溶菌酶溶液中，超声30min，干燥，制得多孔材料，溶菌酶和埃洛石纳米管的质量比为1:50。

实施例

实施例1：一种多孔止血粉的制备方法，包括以下步骤：

S1、将莲藕淀粉用去离子水配制成浓度为45wt％的莲藕淀粉浆，加入α-淀粉酶和糖化酶，调节pH至4.8，升温至55℃，混合反应20h，洗涤，干燥，制得微孔莲藕淀粉，莲藕淀粉浆、α-淀粉酶和糖化酶的质量比为10:0.2:0.6，莲藕淀粉由制备例1制成；

S2、将微孔莲藕淀粉进行辐照处理，乙醇抽提5次，干燥，制得辐照处理后淀粉，辐照射线为⁶⁰Co-γ射线，辐照剂量率为4kGy/h，辐照温度为室温，辐照时间为8h；

S3、将辐照处理后淀粉加入到去离子水中，制成浓度为10wt％的淀粉贮备液，将鱼类胶原蛋白加入到去离子水中，制成浓度为25wt％的鱼类胶原蛋白贮备液，胶原蛋白为罗非鱼胶原蛋白；

S4、将淀粉贮备液和所述鱼类胶原蛋白贮备液按照1:4的质量比混合，在10℃混合3h，制成交联贮备液；

S5、向交联贮备液中加入其质量13％且浓度为0.5wt％的花青素水溶液，升温至95℃，搅拌30min，在-60℃、0.1MPa下冷冻干燥4h，制得多孔止血粉。

实施例2：一种多孔止血粉的制备方法，包括以下步骤：

S1、将莲藕淀粉用去离子水配制成浓度为40wt％的莲藕淀粉浆，加入α-淀粉酶和糖化酶，调节pH至5，升温至50℃，混合反应24h，洗涤，干燥，制得微孔莲藕淀粉，莲藕淀粉浆、α-淀粉酶和糖化酶的质量比为10:0.02:0.06，莲藕淀粉由制备例2制成；

S2、将微孔莲藕淀粉进行辐照处理，乙醇抽提3次，干燥，制得辐照处理后淀粉，辐照射线为⁶⁰Co-γ射线，辐照剂量率为2kGy/h，辐照温度为室温，辐照时间为1h；

S3、将辐照处理后淀粉加入到去离子水中，制成浓度为5wt％的淀粉贮备液，将鱼类胶原蛋白加入到去离子水中，制成浓度为20wt％的鱼类胶原蛋白贮备液，胶原蛋白为罗非鱼胶原蛋白；

S4、将淀粉贮备液和所述鱼类胶原蛋白贮备液按照1:3的质量比混合，在4℃混合5h，制成交联贮备液；

S5、向交联贮备液中加入其质量10％且浓度为0.35wt％的花青素水溶液，升温至90℃，搅拌40min，在-60℃、0.1MPa下冷冻干燥4h，制得多孔止血粉。

实施例3：一种多孔止血粉的制备方法，与实施例1的区别在于，莲藕淀粉由制备例3制成。

实施例4：一种多孔止血粉的制备方法，与实施例1的区别在于，莲藕淀粉由制备例4制成。

实施例5：一种多孔止血粉的制备方法，与实施例1的区别在于，步骤S5为：向交联贮备液中加入其质量13％且浓度为0.5wt％的花青素水溶液，升温至95℃，搅拌30min，加入纳米二氧化硅分散液，以140W的功率超声50min，然后在-60℃、0.1MPa下冷冻干燥4h，制得多孔止血粉，纳米二氧化硅分散液的加入量为交联贮备液重量的10％，纳米二氧化硅分散液由二氧化硅、聚乙烯基吡咯烷酮和去离子水按照1:0.3:100的质量比超声混合制成，超声功率为120W，超声时间为50min。

实施例6：一种多孔止血粉的制备方法，与实施例1的区别在于，步骤S5为：向交联贮备液中加入其质量13％且浓度为0.5wt％的花青素水溶液，升温至95℃，搅拌30min，加入纳米二氧化硅分散液，以160W的功率超声40min，然后在-60℃、0.1MPa下冷冻干燥4h，制得多孔止血粉，纳米二氧化硅分散液的加入量为交联贮备液重量的15％，纳米二氧化硅分散液由二氧化硅、聚乙烯基吡咯烷酮和去离子水按照1:0.6:150的质量比超声混合制成，超声功率为120W，超声时间为50min。

实施例7：一种多孔止血粉的制备方法，与实施例5的区别在于，步骤S5为：向交联贮备液中加入其质量13％且浓度为0.5wt％的花青素水溶液，加入由制备例5制成的长效抗菌微球，长效抗菌微球与交联贮备液的质量比为0.3:1，升温至95℃，搅拌30min，加入纳米二氧化硅分散液，以140W的功率超声50min，然后在-60℃、0.1MPa下冷冻干燥4h，制得多孔止血粉，纳米二氧化硅分散液的加入量为交联贮备液重量的10％，纳米二氧化硅分散液由二氧化硅、聚乙烯基吡咯烷酮和去离子水按照1:0.3:100的质量比超声混合制成，超声功率为120W，超声时间为50min。

实施例8：一种多孔止血粉的制备方法，与实施例7的区别在于，步骤S5为：长效抗菌微球与交联贮备液的质量比为0.1:1，长效抗菌微球由制备例6制成。

实施例9：一种多孔止血粉的制备方法，与实施例7的区别在于，长效抗菌微球由制备例7制成。

实施例10：一种多孔止血粉的制备方法，与实施例7的区别在于，长效抗菌微球由制备例8制成。

实施例11：一种多孔止血粉的制备方法，与实施例7的区别在于，长效抗菌微球由制备例9制成。

对比例

对比例1：一种多孔止血粉，与实施例1的区别在于，未进行步骤S1。

对比例2：一种多孔止血粉，与实施例1的区别在于，未进行步骤S2。

对比例3：一种多孔止血粉，与实施例1的区别在于，使用等量戊二醛替代花青素。

对比例4：一种可降解高吸水性止血粉，由如下方法制备得到

S1.配制乙醇的水溶液100mL，乙醇和水的体积比为0.05:1；

S2.在上述醇溶液中加入稀磷酸溶液至pH值为2，然后加入1g氯化钙，搅拌充分溶解后，加入羧甲基淀粉钠，在室温下搅拌10min，得到不溶于水的止血粉，其中羧酸盐类高分子粉剂、氯化钙和乙醇溶液的质量比为6:1:100；

S3.过滤S2所制得的止血粉，并水洗至中性后冷冻干燥，即得可降解高吸水性止血粉。

性能检测试验

按照实施例和对比例中方法制备止血粉，参照以下方法对止血粉的性能进行检测，将检测结果记录于表1中。

1、止血时间：选取成年大鼠75只，平均分为15组，每组5只，每组大鼠腹腔注射3％的戊巴比妥钠麻醉剂，按照30mg/kg的剂量进行麻醉，麻醉成功后将大鼠固定在试验台上，在距离尾部末端2cm处，用剪刀一次性剪断微波，立即施以止血粉，用镊子夹住尾根部，1min后，观察止血效果(如未止血，继续用镊子夹住1min，再观察出血情况)，止血时间从剪断尾部开始计时，记录每组止血时间，每组平行3次取平均值。

2、吸水率：称取一定质量的止血粉，记为M1，加入到20℃蒸馏水中，轻微搅拌，约30min充分吸水后，用真空抽滤机抽滤，将水分排净，称重，记为M2，按照以下公式计算吸水率：吸水率＝(M2-M1)/M1×100％。

3、粘性功：将25g止血粉加入100ml水中，充分形成凝胶后，使用质构仪，型号为TA-XT plus，实验用探头：A/BE(反挤压探头)和P36R(圆柱型探头)，测试条件为：常温下，试验前速度为0.5mm/sec，测试速度为1mm/sec，测试后速度为10mm/sec，应力100g，回复距离为5mm，接触时间为10sec，出发类型为自动-5g，粘性功制得是探头在做返回运动时，会受到一个样品对它的粘结力，而探头要完全脱离实验样品，它就必须做功，这期间所做的功就是粘性功，可以反映凝胶和探头表面的结合强度，采用质构仪测定的粘性性能也有使用粘性功指数来表征，换算公式为：粘性功(g·mm)＝粘性功指数(g·sec)×测试速度(mm/sec)。

4、持续抗菌率：按照《消毒技术规范》(卫生部2002年版)中规定的平板计数法进行检测。

表1多孔止血粉的效果检测

实施例1和实施例2中分别采用制备例1和制备例2制成的莲藕淀粉，且使用莲藕淀粉经酶解致孔和辐照处理后与鱼类胶原蛋白，在花青素的交联作用下，制成多孔止血粉，表1内数据显示，实施例1和实施例2制备的多孔止血粉的止血速度快，且在止血过程中，具有较好的封堵作用。

实施例3和实施例4中分别使用制备例3和制备例4制成的莲藕淀粉，制备例3与实施例1区别在于，莲藕淀粉中未添加芦荟胶，对比例4与实施例1相比，莲藕淀粉中未添加榆树皮粉末，实施例3和实施例4制备的多孔止血淀粉的止血速度快，与实施例1相近，但粘性功下降，且实施例3中的抗菌性减弱。

实施例5和实施例6与实施例1相比，还向加入花青素水溶液的交联贮备液中加入纳米二氧化硅分散液，表1内显示，实施例5和实施例6制备的多孔止血粉的吸水率增大，止血速度加快，并且初始抗菌作用增大。

实施例7和实施例8与实施例1相比，在交联贮备液经过热处理后，加入长效抗菌微球，且长效抗菌微球分别由制备例5和制备例6制成，表1内显示，实施例7和实施例8制成的多孔止血粉的止血速度有所加快，且粘性功增大，封堵作用得到改善，初始抗菌性增强，持续抗菌作用增大，24h后抗菌率达到87％以上。

实施例9与实施例7的区别在于，使用制备例7制成的长效抗菌微球，制备例7中未使用丝素蛋白溶液，直接将共混液与溶菌酶溶液混合后进行辐射交联，实施例9制备的多孔止血粉的初始抗菌率不及实施例7,24h抗菌率也有所下降，说明使用丝素蛋白作为骨架，能提高初始抗菌率，随着溶菌酶的不算释放，抗菌率逐渐增大，但缺少丝素蛋白，导致长效抗菌率有所下降。

实施例10中使用制备例8制成的长效抗菌微球，制备例8中使用冷冻干燥替代辐照交联，实施例10制备的止血粉的止血效果比实施例7差，吸水率下降。

实施例11中使用制备例9制备的长效抗菌微球，制备例9中使用埃洛石纳米管替代丝素蛋白溶液，表1内显示，实施例11制备的多孔止血粉的粘性功、止血效果和吸水率与实施例7相差不大，但初始抑菌率不及实施例7，随着溶菌酶的不段释放，24h后抑菌率与实施例7相似。

对比例1与实施例1相比，未使用糖化酶和淀粉酶对莲藕淀粉进行酶解，对比例2未使用辐照处理，对比例1和对比例2制备的多孔止血粉的吸水率减小，止血速度减慢。

对比例3中使用戊二醛作为交联剂，与实施例1相比，多孔止血粉的初始抗菌率下降，且止血速度减慢。

对比例4为现有技术给出的多孔止血粉制备方法，其止血时间长达2min，且吸水率仅为1800％，粘性功小，封堵作用不强，抑菌作用不及实施例1。

本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (8)

1.一种多孔止血粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将莲藕淀粉用去离子水配制成浓度为40-45wt%的莲藕淀粉浆，加入α-淀粉酶和糖化酶，调节pH至4.8-5，升温至50-55℃，混合反应20-24h，洗涤，干燥，制得微孔莲藕淀粉；

S2、将所述微孔莲藕淀粉进行辐照处理，乙醇抽提3-5次，干燥，制得辐照处理后淀粉；

S3、将所述辐照处理后淀粉加入到去离子水中，制成浓度为5-10wt%的淀粉贮备液，将鱼类胶原蛋白加入到去离子水中，制成浓度为20-25wt%的鱼类胶原蛋白贮备液；

S4、将所述淀粉贮备液和所述鱼类胶原蛋白贮备液按照1:（3-4）的质量比混合，在4-10℃混合3-5h，制成交联贮备液；

S5、向所述交联贮备液中加入浓度为0.3-0.5wt%的花青素水溶液，升温至90-95℃，搅拌30-40min，冷冻干燥，制得多孔止血粉；

所述步骤S5中，向加入花青素水溶液的交联贮备液中加入长效抗菌微球，长效抗菌微球与交联贮备液的质量比为（0.1-0.3）:1；

所述长效抗菌微球采用以下方法制成：

将聚乙烯醇溶于去离子水中，获得5-8wt%的聚乙烯醇溶液；

将壳聚糖加入到浓度为1-3wt%的醋酸溶液中，搅拌溶解，加入聚乙烯醇溶液、吐温-80，混匀，制成共混液，壳聚糖、吐温-80与聚乙烯醇的质量比为（0.1-0.3）:（0.01-0.03）:5；

将溶菌酶溶解于pH为5-8的磷酸缓冲液中，得到浓度0.1-3wt%的溶菌酶溶液，将脱胶后的丝素用溴化锂溶液溶解，制成丝素蛋白溶液；

向丝素蛋白溶液中加入浓度为10-13wt%的丙三醇溶液，搅拌均匀后加入所述溶菌酶溶液，在-（40～35）℃下冷冻6-7h后冷冻干燥30-36h，制成多孔材料，溶菌酶溶液和丝素蛋白溶液的质量比为（7-10）:100；

将共混液喷涂在多孔材料上，然后进行辐照交联，制成长效抗菌微球，共混液和多孔材料的质量比为1:（0.6-1）。

2.根据权利要求1所述的多孔止血粉的制备方法，其特征在于：所述莲藕淀粉浆、α-淀粉酶和糖化酶的质量比为10:（0.02-0.2）:（0.06-0.6）。

3.根据权利要求1所述的多孔止血粉的制备方法，其特征在于，所述莲藕淀粉由以下方法制成：

将新鲜莲藕清洗、去皮、切块、打浆、过滤，滤液静置，弃去上清液，获得淀粉，加入芦荟胶，混匀，烘干，加入榆树皮粉末，混合均匀，粉碎，制成莲藕淀粉，芦荟胶、榆树皮粉末和淀粉的质量比为（0.1-0.3）:（0.2-0.6）:1。

4.根据权利要求1所述的多孔止血粉的制备方法，其特征在于，所述花青素水溶液的加入量为交联贮备液重量的10-13%。

5.根据权利要求1所述的多孔止血粉的制备方法，其特征在于，所述辐照射线为⁶⁰Co-γ射线，辐照剂量率为2-4kGy/h，辐照温度为室温，辐照时间为1-8h。

6.根据权利要求1所述的多孔止血粉的制备方法，其特征在于，所述交联贮备液和花青素水溶液升温共混后，加入纳米二氧化硅分散液，以140-160W的功率超声40-50min，纳米二氧化硅分散液的加入量为交联贮备液重量的10-15%。

7.根据权利要求6所述的多孔止血粉的制备方法，其特征在于，所述纳米二氧化硅分散液由二氧化硅、聚乙烯基吡咯烷酮和去离子水按照1:0.3-0.6:100-150的质量比超声混合制成。

8.一种多孔止血粉，其特征在于，由权利要求1-7任一项所述的多孔止血粉的制备方法制成。