CN115851514A - 一种阿氏普里斯特氏菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种阿氏普里斯特氏菌及其应用。本申请的阿氏普里斯特氏菌为保藏编号CCTCC NO:M 2022793的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005。本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005，能够利用多种廉价碳源作为单一碳源进行聚羟基脂肪酸酯的高效生产，降低了聚羟基脂肪酸酯生产的原料成本；本申请的一种实现方式中，聚羟基脂肪酸酯占细胞干重的比例高达64％，为生产替代石油基塑料的天然高分子生物材料提供了一株新的菌株资源，为高效、低原料成本的生产聚羟基脂肪酸酯提供了一种新的方案和途径。

Description

一种阿氏普里斯特氏菌及其应用

技术领域

本申请涉及聚羟基脂肪酸酯生产技术领域，特别是涉及一种阿氏普里斯特氏菌及其应用。

背景技术

传统的石油基塑料价格低廉、生产工艺简单且性能优异，在日常生产生活中应用极为广泛。然而，由于石油基塑料在自然环境中极难降解，且残留塑料碎片还会吸附其它有毒有害的污染物，从而给生态环境和人类健康带来严重危害，开发可替代石油基塑料的新型生物可降解材料是解决石油基塑料污染的最有效途径之一。

聚羟基脂肪酸酯(Polyhydroxyalkanoates，PHA)是一种由微生物在营养不平衡条件下合成的天然高分子生物基聚合物，并作为碳源和能源贮存在细胞体内。PHA除了具有传统的石油基塑料的热塑性和机械性能外，还具有良好的生物相容性、可降解性和功能可拓展性，在日用包装、化工产品和医用植入材料等领域应用前景广阔。

尽管PHA材料能有效避免传统石油基塑料对生态环境造成的危害，但与传统石油基塑料相比，PHA的生产成本昂贵，这极大制约了其商品化的应用。因此，当前亟需开发能够利用廉价底物高效生产PHA的方法。

发明内容

本申请的目的是提供一种新的阿氏普里斯特氏菌及其应用。

本申请采用了以下技术方案：

本申请的第一方面公开了一种保藏编号为CCTCC NO:M 2022793的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005。

需要说明的是，本申请从深圳市福田区红树林保护区滩涂表层的土壤中分离获得了多个具有较高PHA累积产量的菌株，并分别进行了菌种保藏和专利保护。其中一个菌株即本申请的阿氏普里斯特氏菌(Priestia aryabhattai) MIBE00005。本申请的一种实现方式中，阿氏普里斯特氏菌(Priestia aryabhattai) MIBE00005发酵液的生物量达到10.6g/L，PHA比例达到64.0％。并且，本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005具有利用多种廉价碳源高效合成PHA的能力，例如可以利用廉价的蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油或乙酸钠作为单一碳源。采用本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005，真正实现了PHA的廉价、高效生产，为生产替代石油基塑料的天然高分子生物材料提供了重要的菌株资源和技术手段。

还需要说明的是，本申请阿氏普里斯特氏菌MIBE00005的优点之一是，可以利用多种廉价的底物，例如蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油等高效合成PHA；而现有技术普遍只能使用价格昂贵的葡萄糖，也有部分能够使用某种单一的廉价底物，但是无法利用多种廉价底物。因此，本申请的阿氏普里斯特氏菌 MIBE00005具有更强和更广的实用性，在原料成本降低方面具有极大的优势。

本申请的第二方面公开了一种菌剂，其中含有本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005或其发酵液。

需要说明的是，本申请的菌剂是指含有活的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005 的活菌制剂。由于本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005能够高效、低成本的生产PHA；因此，可以将阿氏普里斯特氏菌MIBE00005或其发酵液制成菌剂进行售卖或使用。

本申请的一种实现方式中，菌剂中含有聚羟基脂肪酸酯，且聚羟基脂肪酸酯占阿氏普里斯特氏菌MIBE00005干重的比例大于或等于64％。

需要说明的是，本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005，其特点就是能利用多种廉价的单一碳源进行高效的生产PHA，例如以糖蜜为单一碳源的液体培养基中发酵培养2天后，其中累积的PHA比例达到64.0％，以蔗糖为单一碳源的液体培养基中发酵培养2天后，其中累积的PHA比例达到79.4％，以粗甘油为单一碳源的液体培养基中发酵培养2天后，其中累积的PHA比例达到65.4％；因此，优选的，本申请的菌剂中含有细胞干重比例大于或等于64％的聚羟基脂肪酸酯。

本申请的第三方面公开了本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005，或者本申请的菌剂在聚羟基脂肪酸酯生产中的应用。

本申请的聚羟基脂肪酸酯尤其包括聚3-羟基丁酸脂。

本申请的第四方面公开了一种生产聚羟基脂肪酸酯的方法，包括将本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005，或本申请的菌剂，接种到液体培养基中，培养获得发酵液，从培养的发酵液中分离聚羟基脂肪酸酯。

需要说明的是，本申请方法由于采用本申请的阿氏普里斯特氏菌 MIBE00005，或含该菌株的菌剂，能够利用多种廉价碳源高效的生产PHA，例如，本申请的一种实现方式中，发酵液的细胞干重10.6g/L，累积的PHA占细胞干重的比例可以达到64.0％。

本申请的一种实现方式中，培养获得发酵液的培养条件为25-35℃， 150-220r/min培养1-3天。

本申请的一种实现方式中，液体培养基为采用葡萄糖、蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油和乙酸钠中的任一种作为单一碳源的无机盐培养基。

需要说明的是，本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005，其特点之一就是能够利用多种廉价的单一碳源高效生产PHA，例如可以利用廉价的蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油或乙酸钠等，当然也可以利用葡萄糖作为单一碳源。

还需要说明的是，从碳源的成本价格考虑的话，优选采用蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油和乙酸钠中的任一种作为液体培养基的单一碳源。综合考虑碳源成本价格和PHA合成效率，优选采用糖蜜、蔗糖、木薯淀粉和粗甘油中的任一种作为液体培养基的单一碳源；更优选采用糖蜜作为单一碳源。

本申请的一种实现方式中，液体培养基中还包括氮源。

本申请的一种实现方式中，氮源为酵母提取物和/或NH₄Cl。

本申请的一种实现方式中，无机盐培养基还包括Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl、 MgSO₄、CaCl₂、枸椽酸铁铵、微量元素液；其中，微量元素液中包括ZnSO₄、 MnCl₂、H₃BO₃、CoCl₂、CuCl₂、NiCl₂和NaMoO₄。

本申请的一种实现方式中，液体培养基由以下成分组成，

(1)碳源：葡萄糖、蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油和乙酸钠中的任一种；

(2)氮源：酵母提取物和NH₄Cl；

(3)其它营养成分：Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl、MgSO₄、CaCl₂、枸椽酸铁铵和微量元素液，微量元素液由ZnSO₄、MnCl₂、H₃BO₃、CoCl₂、CuCl₂、NiCl₂和NaMoO₄组成。

本申请的一种实现方式中，液体培养基中碳源的浓度为30g/L，氮源中酵母提取物的浓度为1g/L，NH₄Cl的浓度为1g/L，其它营养成分由9g/L的Na₂HPO₄、 1.5g/L的KH₂PO₄、30g/L的NaCl、0.2g/L的MgSO₄、0.02g/L的CaCl₂、0.0012g/L 的枸椽酸铁铵和100μL的微量元素液组成，微量元素液由1g/L ZnSO₄、0.3g/L MnCl₂、3g/L H₃BO₃、2g/L CoCl₂、0.1g/L CuCl₂、0.2g/L NiCl₂和0.3g/L NaMoO₄组成。

需要说明的是，以上具体的液体培养基配方只是本申请的一种实现方式中证实能够利用廉价单一碳源进行高效生产PHA的液体培养基配方，例如采用以上配方，以糖蜜为单一碳源发酵培养2天后，细胞干重为10.6g/L，其中累积的 PHA比例达到64.0％。糖蜜成本低，且获得了较高的PHA产量。可以理解，本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005，其关键在于可以利用多种廉价的单一碳源进行高效的PHA生产，至于液体培养基中的其他组分，可以根据需求或实际情况进行试验允许的调整，并不仅限于以上具体配方；特别是在确保碳源和氮源的情况下，其它营养成分可以根据实际情况进行删减或替换，其它营养成分中各组分的用量也可以根据实际情况进行调整。

本申请的第五方面公开了本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005，或者本申请的菌剂，或者本申请生产聚羟基脂肪酸酯的方法，在制备基于聚羟基脂肪酸酯的生产包装材料、粘合材料、喷涂材料或医用材料中的应用。

本申请的有益效果在于：

本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005，能够利用多种廉价的单一碳源进行聚羟基脂肪酸酯的高效生产，本申请的一种实现方式中，发酵液中细胞干重达到10.6g/L，聚羟基脂肪酸酯占细胞干重的比例高达64.0％，为生产替代石油基塑料的天然高分子生物材料提供了一株新的菌株资源，为高效、低成本的生产聚羟基脂肪酸酯提供了一种新的方案和途径。

附图说明

图1是本申请实施例1阿氏普里斯特氏菌MIBE00005通过聚合酶链式反应 (PCR)扩增phaC合成酶基因，其PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分离后的胶图；

图2是本申请实施例2阿氏普里斯特氏菌MIBE00005的在30℃培养1天的菌落图；

图3是本申请实施例2阿氏普里斯特氏菌MIBE00005的革兰氏染色图；

图4是本申请实施例2阿氏普里斯特氏菌MIBE00005的16S序列构建的系统发育树图；

图5是本申请实施例3阿氏普里斯特氏菌MIBE00005的产PHA测定结果图。

菌种保藏信息：本申请的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005已于2022年6月2日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国武汉武汉大学，邮政编码：430072)，分类命名为Priestia aryabhattai，保藏编号为CCTCC NO: M 2022793。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例中所用的培养基包括：

(1)含油含盐富集培养基：陈海水中添加1-10％(v/v)的混合植物油(金龙鱼:花生油:菜籽油＝1:1:1)和35-125‰的NaCl，用于菌株的分离。

花生油按照GB/T 1534-2017规定大于5％的成分为：棕榈酸(C16:0， 8.0-14.0)、油酸(C18:1，35.0-69.0)和亚油酸(C18:2，13.0-43.0)。菜籽油按 GB/T 1536-2004规定大于5％的成分为：棕榈酸(C16:0，1.5-6.0)、油酸(C18:1， 8.0-60.0)、亚油酸(C18:2，11.0-23.0)、亚麻酸(C18:2，5.0-13.0)、芥酸(C22:1， 3.0-60.0)和花生一烯酸(C20:1，3.0-15.0)。

(2)普通海水培养基(2216E)：5.0g/L的蛋白胨，1.0g/L的酵母粉，0.1g/L 的柠檬酸铁，19.45g/L的NaCl，5.98g/L的MgCl₂，3.24g/L的Na₂SO₄，1.8g/L 的CaCl₂，0.55g/L的KCl，0.16g/L的Na₂CO₃，0.08g/L的KBr，0.034g/L的 SrCl₂，0.022g/L的H₃BO₃，0.004g/L的Na₂O·nSiO₂，0.0016g/L的NaNO₃， 0.0024g/L的NaF和0.008g/L的Na₂HPO₄，用于菌株的纯化培养和种子液的制备。

(3)产PHA液体培养基包括以葡萄糖为单一碳源的无机盐培养基或以蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油和乙酸钠等多种廉价碳源为单一碳源的无机盐培养基，组分如下：

碳源：葡萄糖、蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油和乙酸钠的任一一种，浓度为30g/L。

氮源：1g/L的酵母提取物，1g/L的NH₄Cl。

其它营养成分：9g/L的Na₂HPO₄，1.5g/L的KH₂PO₄，30g/L的NaCl，0.2 g/L的MgSO₄，0.02g/L的CaCl₂，0.0012g/L的枸椽酸铁铵，100μL的微量元素液(1g/L ZnSO₄，0.3g/LMnCl₂，3g/L H₃BO₃，2g/L CoCl₂，0.1g/L CuCl₂， 0.2g/L NiCl₂，0.3g/L NaMoO₄)。

上述培养基的初始pH为7.0，121℃下灭菌25min。

实施例1阿氏普里斯特氏菌MIBE00005的分离与筛选

本实施例提供阿氏普里斯特氏菌MIBE00005分离与筛选的方法，具体步骤如下：

1.可培养菌株的分离

采集深圳市福田区红树林保护区滩涂表层10cm的土壤；将采集的土壤样品加入装有100mL已灭菌的含油含盐富集培养基的锥形瓶中，30℃、160r/min 下恒温震荡培养77天，每7天以1％的接种量转接至含新鲜的培养基富集培养基中，同时提高含油量1％、盐度10‰，培养第7、42和77天取1mL土壤悬浮液；将所述土壤悬浮液梯度稀释，制成10^-3至10^-5浓度梯度的稀释悬浮液；将稀释悬浮液加入至2216E培养基平板进行涂布处理，在30℃恒温培养箱培养48 h后得到菌落；挑取形态各异的单菌落进行划线纯化培养，编号并进行低温保藏。

2.产PHA菌株的筛选

采用菌落PCR方法对所分离菌株进行phaC基因的鉴定。挑取单菌落加入含50μL无菌水的灭菌PCR管中，95℃、10min得到菌落PCR模板。phaC基因正向引物为PHACGNF(SEQ IDNO.2：5’-CCYRGATCAACAAGTTCTAC-3’)，反向引物为PHACGNR(SEQ ID NO.3： 5’-TTCCAGAACAGMAGGTCGAAGG-3’)。

PCR反应体系：2×PCR Master Mix 25μL；正向引物和反向引物各1μL；模板1μL；ddH₂O补足50μL。

PCR反应条件：94℃预变性6min；94℃变性45s，54℃退火30s；72℃延伸90s，循环31次；72℃延伸10min，4℃保存。将得到的PCR产物进行 120V、30min、1％的琼脂糖凝胶电泳，蓝光透色仪观察胶体，有条带的样品即为含有phaC基因阳性菌株，将其命名为MIBE00005，其电泳图如图1所示。

实施例2阿氏普里斯特氏菌MIBE00005的鉴定

本实施例对实施例1得到的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005进行鉴定，包括形态学观察、生理生化鉴定和16S rDNA序列分析，具体步骤如下：

1.形态学鉴定

将实施例1分离的菌株MIBE00005划线接种至2216E培养基平板上，然后将平板倒转，在30℃恒温培养箱中下培养24h，观察并记录平板上菌落的生长情况。菌株MIBE00005的菌落形态如图2所示。从图2中能够看出菌株的菌落呈浅黄色、圆形、边缘不整齐，表面呈黏液状，湿润光滑。

使用试剂盒对菌株MIBE00005进行革兰氏染色，并在100倍油镜下观察菌株的染色情况。菌株MIBE00005的革兰氏染色图如图3所示。从图3能够看出菌株呈紫色，为革兰氏阳性菌。

2.生理生化鉴定

依据《常见细菌系统鉴定手册》和《伯杰细菌鉴定手册》(第九版)中的生理生化鉴定指标，对实施例1分离的菌株MIBE00005进行生理生化鉴定。

本实施例提供的生理生化鉴定指标包括过氧化氢酶能力、氧化酶能力、甲基红MR实验、VP实验、淀粉水解能力、明胶液化能力、硝酸盐还原能力、产硫化氢能力、柠檬酸盐利用能力、溶菌酶能力、甘露醇产酸能力。菌株MIBE00005 的生理生化鉴定结果如表1所示。

表1菌株的生理生化鉴定结果

表性特征	反应特征	表性特征	反应特征
				过氧化氢酶	+	硝酸盐还原	-
氧化酶	-	硫化氢	+
				MR实验	+	檬酸盐利用	+
VP实验	-	溶菌酶	+
				淀粉水解	+	甘露醇产酸	-
明胶液化	+

表中：+，表示本菌株有反应或可以利用；-，表示本菌株没有反应或不可以利用。

3.16SrDNA序列分析

本实施例采用Ezup细菌基因组DNA抽提试剂盒提取菌株MIBE00005中的 DNA。PCR扩增的正向引物为27F(SEQ ID NO.4： 5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)，反向引物为1492R(SEQ ID NO.5： 5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)。

PCR反应体系：2×PCR Master Mix 25μL；正向引物和反向引物各1μL；模板1μL；ddH₂O补足50μL。

PCR反应条件：94℃预变性4min，1个循环；94℃变性45s，55℃退火45s；72℃延伸90s，30个循环；4℃保存。

PCR产物由上海生工生物工程股份有限公司进行测序，测序结果如SEQ ID NO.1所示。将所得序列在GenBank中进行Blast相似性比对，得到相似性较高的序列。运用MEGA7.0软件构建菌株MIBE00005的系统发育树，本菌株的16S rDNA序列与阿氏普里斯特氏菌(Priestia aryabhattai)的同源性达到99.9％。菌株MIBE00005的系统发育树如图4所示。

综合上述形态学观察、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析结果，确定菌株MIBE00005为阿氏普里斯特氏菌(Priestia aryabhattai)，其被命名为阿氏普里斯特氏菌MIBE00005。该菌株已于2022年6月2日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国武汉武汉大学，邮政编码：430072)，分类命名为Priestia aryabhattai，保藏编号为CCTCC NO: M 2022793。

实施例3阿氏普里斯特氏菌MIBE00005利用廉价碳源产PHA能力的测定

本实施例对阿氏普里斯特氏菌MIBE00005进行利用多种廉价碳源产PHA 能力的测定，该测定包括以下内容：

1.PHA的生产

将实施例1提供的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005重新划线接种2216E固体培养基平板上，在30℃恒温培养箱中培养1天，获得重新活化的菌株；挑取新活化菌株的单克隆体接种至装有50mL已灭菌的2216E液体培养基的250mL 锥形瓶中，在30℃、180r/min条件下恒温震荡培养1天，获得种子培养液；按照2％的接种量，将种子液接种至装有50mL已灭菌的产PHA液体培养基的250 mL锥形瓶中，在30℃、180r/min条件下恒温震荡培养2天，获得发酵液。

本例分别制备了碳源为葡萄糖、蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油或乙酸钠的六种产PHA液体培养基，分别用于试验，测试不同碳源产PHA的效率。六种产PHA液体培养基中，碳源的浓度都是30g/L；其余成分都相同，即氮源由 1g/L的酵母提取物和1g/L的NH₄Cl组成；其它营养成分：其它营养成分：9g/L 的Na₂HPO₄，1.5g/L的KH₂PO₄，30g/L的NaCl，0.2g/L的MgSO₄，0.02g/L 的CaCl₂，0.0012g/L的枸椽酸铁铵，100μL的微量元素液(1g/L ZnSO₄，0.3g/L MnCl₂，3g/L H₃BO₃，2g/L CoCl₂，0.1g/L CuCl₂，0.2g/L NiCl₂，0.3g/L NaMoO₄)。

上述六种产PHA液体培养基的初始pH为7.0，在121℃下灭菌25min后使用。

2.PHA的提取

将上述培养2天后获得的发酵液转移至50mL离心管中，在6000rpm下离心10min，去掉上清液，然后加入去离子水30mL，充分震荡混匀后，再次在 6000rpm下离心10min，去掉上清液，获得菌株的细胞沉淀；将细胞沉淀在-80℃下预冻12h，然后进行冷冻干燥处理，获得菌株的冻干样品；称取20mg菌株的冻干样品，放入10mL的脂化管中，在通风橱条件下，向脂化管中缓慢加入2 mL的氯仿(含0.5mg/mL苯甲酸甲酯)和2mL含15％(v/v)浓硫酸的甲醇溶液，充分混匀，旋紧瓶盖；将已完成加样的脂化管置于100℃的水浴锅中密封处理4h，进行甲酯化反应；反应结束后，冰浴冷却10min，然后向脂化管中加入1mL去离子水，充分混匀30s，进行静置分层处理，获得下层的甲酯化产物样品。

3.PHA的测定

采用上述甲酯化产物样品，以测定PHA的含量，选用DB-WAX型号色谱柱作为固定相，使用惰性气体氦气作为流动相，进样量设置为1μL，进样温度设置为250℃，流速为0.7mL/min。使用分析纯级别的聚3-羟基丁酸酯(PHB) 作为标准物，定性分析菌株合成的PHA，以苯甲酸甲酯作为内标物，用内标法作定量分析。称取一定梯度质量的PHA产物进行甲酯化预处理，气相分析后，读取PHA单体峰面积/内标峰面积的比值与单体质量/内标物的质量的数据做标准曲线，该标准曲线用于定量分析干细胞中的PHA含量。

上述标准曲线按下式计算：

PHA含量(％)＝PHA浓度(g/L)/CDW(g/L)×100％

其中CDW为菌株的细胞干重。

4.PHA的含量

本实施例对阿氏普里斯特氏菌MIBE00005产PHA能力的测定结果如图5 所示，从图5可以看出利用以葡萄糖为单一碳源的无机盐培养基或以蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油和乙酸钠等廉价碳源中的任一种作为单一碳源的无机盐培养基发酵培养时，菌株MIBE00005均能合成PHA。

以葡萄糖为单一碳源的无机盐培养基培养2天后，菌株的细胞干重3.1g/L， PHA的累计量占细胞干重比值65.3％。

以蔗糖为单一碳源的无机盐培养基培养2天后，菌株的细胞干重4.3g/L， PHA的累计量占细胞干重比值79.4％，相比于葡萄糖，蔗糖除了价格低廉这一优势外，还具有更高的PHA合成效率。

以糖蜜为单一碳源的无机盐培养基培养2天后，菌株的细胞干重10.6g/L， PHA的累计量占细胞干重比值64.0％，相比于葡萄糖，糖蜜除了价格低廉外，还具有更高的PHA合成效率。

以木薯淀粉为单一碳源的无机盐培养基培养2天后，菌株的细胞干重5.4 g/L，PHA的累计量占细胞干重比值57.4％，相比于葡萄糖，木薯淀粉除了价格低廉外，还具有更高的PHA合成效率。

以粗甘油为单一碳源的无机盐培养基培养2天后，菌株的细胞干重6.8g/L， PHA的累计量占细胞干重比值65.4％，相比于葡萄糖，粗甘油除了价格低廉外，还具有更高的PHA合成效率。

以乙酸钠为单一碳源的无机盐培养基培养2天后，菌株的细胞干重1.8g/L， PHA的累计量占细胞干重比值30.9％。

上述结果说明，阿氏普里斯特氏菌MIBE00005除了能利用葡萄糖这一传统的发酵底物外，还可以通过代谢蔗糖、糖蜜、木薯淀粉和粗甘油等多种廉价碳源来高效合成PHA，从而极大降低PHA生产的原料成本，具有良好的工业化应用前景。

以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明，不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换。

Claims (10)

1.一种保藏编号为CCTCC NO: M 2022793的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005。

2.一种菌剂，其特征在于：含权利要求1所述的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005或其发酵液。

3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于：所述菌剂中，聚羟基脂肪酸酯占所述阿氏普里斯特氏菌MIBE00005干重的比例大于或等于64％。

4.权利要求1所述的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005，或者权利要求2或3所述的菌剂在聚羟基脂肪酸酯生产中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述聚羟基脂肪酸酯包括聚3-羟基丁酸脂。

6.一种生产聚羟基脂肪酸酯的方法，其特征在于：包括将权利要求1所述的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005，或权利要求2或3所述的菌剂，接种到液体培养基中，培养获得发酵液，从培养的发酵液中分离聚羟基脂肪酸酯。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述培养获得发酵液的培养条件为25-35℃，150-220r/min培养1-3天。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述液体培养基为采用葡萄糖、蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油和乙酸钠中的任一种作为单一碳源的无机盐培养基。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述液体培养基中还包括氮源；

优选的，所述氮源为酵母提取物和/或NH₄Cl；

优选的，所述无机盐培养基还包括Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl、MgSO₄、CaCl₂、枸椽酸铁铵、微量元素液；所述微量元素液中包括ZnSO₄、MnCl₂、H₃BO₃、CoCl₂、CuCl₂、NiCl₂和NaMoO₄；

优选的，所述液体培养基由以下成分组成，

(1)碳源：葡萄糖、蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油和乙酸钠中的任一种；

(2)氮源：酵母提取物和NH₄Cl；

(3)其它营养成分：Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl、MgSO₄、CaCl₂、枸椽酸铁铵和微量元素液，所述微量元素液由ZnSO₄、MnCl₂、H₃BO₃、CoCl₂、CuCl₂、NiCl₂和NaMoO₄组成；

优选的，所述液体培养基中碳源的浓度为30g/L，氮源中酵母提取物的浓度为1g/L，NH₄Cl的浓度为1g/L，其它营养成分由9g/L的Na₂HPO₄、1.5g/L的KH₂PO₄、30g/L的NaCl、0.2g/L的MgSO₄、0.02g/L的CaCl₂、0.0012g/L的枸椽酸铁铵和100μL的微量元素液组成，所述微量元素液由1g/L ZnSO₄、0.3g/L MnCl₂、3g/L H₃BO₃、2g/L CoCl₂、0.1g/L CuCl₂、0.2g/L NiCl₂和0.3g/L NaMoO₄组成。

10.权利要求1所述的阿氏普里斯特氏菌MIBE00005，或者权利要求2或3所述的菌剂，或者权利要求6-9任一项所述的方法，在制备基于聚羟基脂肪酸酯的生产包装材料、粘合材料、喷涂材料或医用材料中的应用。

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