CN115850470B - Vegf抗体及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医学技术领域，具体而言，涉及VEGF抗体及其应用。该抗体对VEGF‑A具有非常高的亲和力及特异性，且具有中和活性，因而具有良好的应用前景。

Description

VEGF抗体及其应用

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体而言，涉及VEGF抗体及其应用。

背景技术

血管内皮生长因子(VascularEndothelial Growth Factor,VEGF)是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，在胚胎发育、骨骼生长和生殖等生理过程中的对血管生成起关键调节作用，同时与肿瘤相关的病理性血管生成有关。

VEGF信号系统较为复杂，包含5种配体(VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和PIGF)及三种酪氨酸激酶受体(VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3)，各配体对不同受体的亲和力和选择性存在差异。在所有受体之中VEGFR-2扮演着最主要的作用，几乎介导所有VEGF已知的细胞应答。VEGFA与VEGFR2受体结合诱导的信号传导是血管生成的主要控制者，会激活细胞内信号通路从而刺激肿瘤血管内皮细胞的生长、增殖和成熟及新生血管生成。

临床上有很多新生血管性眼病都是因为眼内VEGF过表达使得新生血管生长，继而发生大量出血、纤维增殖、牵拉性视网膜脱离、新生血管性青光眼等严重并发症。争性抑制VEGF-R2，能够有效抑制血管生成并促进已有新生血管消退，减轻血管渗漏引起的渗出、水肿和炎性反应，从而减缓眼底新生血管的进展。在眼科，使用抑制VEGF药物有助于阻断病变新生血管的生长，从而治疗眼科疾病。

为进一步满足VEGF相关研究需求，加速相应癌症及眼科疾病等治疗药物开发，寻求高特异性、高亲和力的VEGF抗体就显得尤为重要。

发明内容

本发明涉及能够特异性识别VEGF的抗体或其抗原结合片段，其重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3依次为SEQ ID NO:1～3所示，其轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3依次为SEQ ID NO:4～6所示。

本发明还涉及如上所述抗体或其抗原结合片段相关的药用组合物及应用。

该抗体对VEGF-A具有非常高的亲和力及特异性，且具有中和活性，因而具有良好的应用前景。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为h24V5与重组人VEGF蛋白的ELISA结果图；其中Commerciallized antibody为Bevacizumab抗体，其同样为一种人源化VEGF抗体；

图2为h24V5对C6胶质瘤细胞的抑制活性；*p<0.05，vs 0μg/ml。

具体实施方式

现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。

本发明中所使用的术语“含有”、“包含”和“包括”是同义词，其是包容性或开放式的，不排除额外的、未被引述的成员、元素或方法步骤。

本发明中用端点表示的数值范围包括该范围内所包含的所有数值及分数，以及所引述的端点。

本发明中涉及浓度数值，其含义包括在一定范围内的波动。比如，可以在相应的精度范围内波动。比如2％，可以允许±0.1％范围内波动。对于数值较大或无需过于精细控制的数值，还允许其含义包括更大波动。比如100mM，可以允许±1％、±2％、±5％等范围内的波动。涉及分子量，允许其含义包括±10％的波动。

本发明中，涉及“多个”、“多种”等描述，如无特别限定，指在数量上指大于等于2。

本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。

本发明中，“优选”、“更好”、“更佳”、“为宜”仅为描述效果更好的实施方式或实施例，应当理解，并不构成对本发明保护范围的限制。本发明中，“可选地”、“可选的”、“可选”，指可有可无，也即指选自“有”或“无”两种并列方案中的任一种。如果一个技术方案中出现多处“可选”，如无特别说明，且无矛盾之处或相互制约关系，则每项“可选”各自独立。

本发明中，术语“特异性结合”和“特异性地结合”是指抗体或其抗原结合片段对预先确定的抗原上的表位的结合。通常，抗体以大约小于10^-7M，例如大约小于10^-8M、10^-9M、10^-10M、10^-11M、10^-12M或更强的亲和力(K_D)结合。

如本文所用，术语“互补性决定区”或“CDR”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区，在本发明中采用Kabat等人所定义(Kabat等人，Sequences ofproteinsofimmunological interest,5th Ed"US Department of Health and Human Services,NIH,1991,和后来的版本)。有三个重链CDR(HCDR)和三个轻链CDR(LCDR)。此处，取决于情况，术语“CDR”和“CDRs”用于指包含一种或多种或者甚至全部的对抗体与其识别的抗原或表位的结合亲和力起作用的主要氨基酸残基的区域。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。除非和本申请的发明目的和/或技术方案相冲突，否则，本发明涉及的引用文献以全部内容、全部目的被引用。本发明中涉及引用文献时，相关技术特征、术语、名词、短语等在引用文献中的定义也一并被引用。本发明中涉及引用文献时，被引用的相关技术特征的举例、优选方式也可作为参考纳入本申请中，但以能够实施本发明为限。应当理解，当引用内容与本申请中的描述相冲突时，以本申请为准或者适应性地根据本申请的描述进行修正。

本发明涉及能够特异性识别VEGF的抗体或其抗原结合片段，其重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3依次为SEQ ID NO:1～3所示，其轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3依次为SEQ ID NO:4～6所示。

抗体或其抗原结合片段的变体也在本发明范围内，本发明的抗体或其抗原结合片段包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的序列与SEQ ID NO:4～6所示互补决定区组合中的任一组相比，分别包含至多3个氨基酸的突变(例如1个、2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合)；优选地，所述突变为保守突变。在一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的序列与SEQ ID NO:1～3所示互补决定区组合中的任一组相比，分别包含至多3个氨基酸的置换(例如1个、2个或3个氨基酸置换)。

在一些实施方式中，其具有SEQ ID NO:7所示的重链可变区HCVR和SEQ ID NO:8所示的轻链可变区LCVR。

在一些实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段为鼠抗体、人鼠嵌合抗体或人源化抗体。

在一些实施方式中，人源化抗体具有SEQ ID NO:9所示的重链可变区HCVR和SEQID NO:10所示的轻链可变区LCVR。

在一些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区HCVR和轻链可变区LCVR，其中所述HCVR和LCVR的氨基酸序列与

SEQ ID NO:7～10所示序列相比分别具有至少80％的同一性。在一些实施方式中，所述HCVR的氨基酸序列与SEQ ID NO:7或9所示的HCVR序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性；所述LCVR的氨基酸序列与SEQ ID NO:8或10所示的LCVR序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。

在一些情况下，抗体或其抗原结合片段的变体至少包括上述6个CDR；在一些情况下，抗体的变体至少包括一个重链和一个轻链，而在其他情况下，变体形式含有两个相同的轻链和两个相同的重链(或其子部分)。在一些情况下，变体是在本发明所提供的抗体序列上发生保守突变(例如保守置换或修饰)所得到的。“保守突变”是指可正常维持蛋白质的功能的突变，优选为保守置换。

“保守置换”是指具有类似特征(例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构象和刚性等)的其它氨基酸置换蛋白中的氨基酸，使得可频繁进行改变而不改变蛋白的生物学活性。

通常视为保守置换的置换是在脂肪族氨基酸Ala、Val、Leu和Ile中的彼此置换、羟基残基Ser和Thr的互换、酸性残基Asp和Glu的交换、酰胺残基Asn和Gln之间的置换、碱性残基Lys和Arg的交换以及芳香残基Phe、Tyr间的置换。本领域技术人员知晓，一般而言，多肽的非必需区域中的单个氨基酸置换基本上不改变生物学活性(参见例如Watson等(1987)Molecular Biology of the Gene,The Benjamin/Cummings Pub.Co.,第224页，(第4版))。另外，结构或功能类似的氨基酸的置换不大可能破环生物学活性。

“抗原结合片段”此用语包括这些抗体的抗原化合物结合片段，包括Fab、F(ab')₂、Fd、Fv、scFv、抗体最小识别单位，以及这些抗体和片段的单链衍生物，例如scFv-Fc等。

根据本发明的再一方面，还涉及分离的核酸，其能够表达得到如上所述抗体或其抗原结合片段。

术语“分离的核酸”在本文中是指以单链或双链形式存在的脱氧核糖核酸或核糖核酸聚合物。所述分离的核酸包括RNA基因组序列，DNA(gDNA和cDNA)或从DNA转录的RNA序列，而且，除非特别指明，所述多肽还包括天然多核苷酸、糖、或碱基改变的类似物。根据本发明一个方面，所述多核苷酸是轻链多核苷酸。

所述分离的核酸包括编码蛋白复合物氨基酸序列的核苷酸序列，也包括与其互补的核苷酸序列。所述互补序列包括完全互补的序列和基本上互补的序列，这是指能在本领域已知的严谨条件下与编码蛋白复合物氨基酸序列的核苷酸序列杂交的序列。

而且，编码蛋白复合物氨基酸序列的核苷酸序列可以被改变或突变。所述改变包括添加、缺失、或非保守取代或保守取代。编码蛋白复合物氨基酸序列的多核苷酸可以被解释为，包括相对于该分离的核酸有实质性同一性的核苷酸序列。所述实质性同一性将该核苷酸序列与另外的随机序列以使得它们最大对应的方式进行比对，当用本领域常见的算法分析所比对的序列时，所述序列可显示大于80％的同源性，大于90％的同源性，或大于95％的同源性。

本发明还涉及载体，其包含如上所述的核酸。

术语“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。在一些实施方式中，本发明所述载体中包含基因工程中常用的调控元件，例如增强子、启动子、内部核糖体进入位点(IRES)和其他表达控制元件(例如转录终止信号，或者多腺苷酸化信号和多聚U序列等)。

在本发明中，载体可以为组合物，例如为多种质粒的混合物，不同质粒负载双功能融合蛋白片段的一部分。

本发明还提供宿主细胞，其包含如上所述的核酸，或被如上所述的载体。

适用于表达本发明的双功能融合蛋白的宿主细胞或细胞系包括：哺乳动物细胞诸如NS0、Sp2/0、CHO、COS、HEK、成纤维细胞和骨髓瘤细胞。可以使用人细胞，因而允许分子用人糖基化模式来修饰。或者，可以采用其他真核细胞系。合适的哺乳动物宿主细胞的选择，以及用于转化、培养、扩增、筛选和产物产生和纯化的方法，是本领域已知的。

可以证明，细菌细胞可用作宿主细胞，其适合表达本发明的人源化抗体或其他实施方案。但是，由于在细菌细胞中表达的蛋白倾向于未折叠的形式或不正确地折叠的形式或非糖基化形式，必须筛选在细菌细胞中产生的任何人源化抗体，以保留抗原结合能力。如果细菌细胞表达的分子以适当地折叠的形式产生，该细菌细胞将是期望的宿主，或者，在可替代的实施方案中，可以在细菌宿主中表达分子，随后进行重新折叠。例如，用于表达的各种大肠杆菌菌株，是生物技术领域中众所周知的宿主细胞。枯草芽孢杆菌、链霉菌属、其他芽孢杆菌属等的各种菌株，也可以用于该方法中。

如果需要，本领域技术人员已知的酵母细胞菌株以及昆虫细胞，例如果蝇和鳞翅目昆虫和病毒表达系统，也可用作宿主细胞。

根据本发明的再一方面，还涉及药用组合物，其包含如上所述的免疫细胞。

所述药物组合物还可以包括药学上可接受的载剂。如本文所用，“药学上可接受的载剂”包括当与活性组分组合时允许所述组分保持生物学活性并且与受试者的免疫系统不发生反应的任何材料。实例包括但不限于标准药物载剂(诸如磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液(诸如油/水乳液))和各种类型的润湿剂中的任一者。用于气雾剂或肠胃外施用的示例性稀释剂是磷酸盐缓冲盐水(PBS)或生理(0.9％)盐水。包含此类载剂的组合物通过熟知的常规方法来配制(参见例如，Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版，A.Gennaro编,Mack PublishingCo.,Easton,PA,1990；和Remington,The Science and PracticeofPharmacy,第21版,Mack Publishing,2005)。

本发明还涉及如上所述抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗VEGF所引起的眼科疾病中的应用。

在一些实施方式中，所述眼科疾病为血管生成性眼病。

在一些实施方式中，所述眼科疾病选自新生血管性青光眼、年龄相关的黄斑变性(AMD)、糖尿病性黄斑水肿、角膜新血管生成、角膜移植新血管生成、角膜移植排斥、视网膜/脉络膜新血管生成、房角的新血管生成(虹膜发红)、眼部新生血管性疾病、血管再狭窄和动静脉畸形(AVM)。

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，优先参考本发明中给出的指引，还可以按照本领域的实验手册或常规条件，还可以参考本领域已知的其它实验方法，或者按照制造厂商所建议的条件。

下述的具体实施例中，涉及原料组分的量度参数，如无特别说明，可能存在称量精度范围内的细微偏差。涉及温度和时间参数，允许仪器测试精度或操作精度导致的可接受的偏差。

实施例1

本实施例用于说明VEGF抗体的制备。

1.抗原免疫及单克隆制备

免疫抗原采用human VEGF165蛋白(Sigma-Aldrich公司)，将人VEGF重组蛋白腹腔注射BALB/c小鼠，每周一次，每次150μg/200μl/只，免疫4周后每周取小鼠尾血并检测血清中VEGF抗体的表达；选择血清中VEGF抗体表达量高(dotblot检测)的小鼠取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合形成融合子。

用分子量为1450的50％PEG作融合剂进行细胞融合，细胞融合按常规方法进行。

2.培养杂交瘤细胞

复苏杂交瘤细胞株后培养，待细胞数扩增至约1×10⁹时，1000rpm×5min，离心收集细胞。

3.提取细胞RNA

超净工作台环境下，将1ml Trizol试剂加入离心细胞，静置5min，加入氯仿2mL，剧烈摇晃15sec，室温静置3min，12000rpm×15min，移取上层水样层至新的EP管，加入0.5mL异丙醇，室温静置10min。12000rpm×10min。弃上清，加入1mL 75％乙醇，7500rpmx5 min，干燥沉淀，加入50μL双蒸水。琼脂糖电泳鉴定纯度并定量，保存于-70℃备用。

4.反转录制备cDNA

用HiFi Script cDNA合成试剂盒(Cwbiotech，CatNo:CW2569)将杂交瘤细胞的RNA反转录为cDNA。细胞总RNA1μL，RNase Free ddH₂O 6μL，oligo dT Primer 0.5μL，PRIMEScript RT Enzyme Mix I 0.5μL，5×Prime Script Buffer 2μL，混匀，37℃15min，85℃5s。

5.扩增cDNA

以cDNA为模板，用简并引物通过PCR方法(Kettleborough et al.(1993)Eur JImmunology 23:206-211；Strebe et al.(2010)Antibody Engineering 1:3-14)扩增抗体的重链和轻链的可变区基因。将PCR扩增产物连接到T/A载体后，转化DH5a感受态细胞，涂板并置37℃过夜培养。从培养板上挑取单克隆，扩大培养后抽提质粒，测定抗体的基因序列。

所得抗体命名为24V5，测序得到VEGF抗体重链可变区(HCVR)氨基酸序列如SEQ IDNO:7所示，VEGF抗体轻链可变区(LCVR)氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。抗体类型为IgG。

实施例2 VEGF抗体的人源化

采用互补决定簇嫁接法进行24V5杂交瘤抗体的人源化改造。首先，在IMGT数据库中分别搜寻与鼠源抗体的轻、重链可变区序列同源性最高的人胚系抗体(germlineantibody)序列。重链可变区人源化选取IGHV1-3*01，抗体轻链可变区人源化选取的胚系为IGKV4-1*01和IGKV1-39*01。保留鼠源抗体的CDR区，将鼠源抗体的骨架区(FR区)序列用人胚系抗体的框架区序列置换。建立鼠源抗体的结构模型，逐个对比人源抗体与相应鼠源抗体框架区中每个位点的氨基酸，如果框架区的某个位点采用人的氨基酸序列没有导致CDR区域空间结构的破坏或改变，则该位点使用人的氨基酸序列，否则在该位点使用对应的鼠源序列(即回复突变为鼠源序列)。

根据结构模拟进行人源化，人源化处理抗体重链的可变区氨基酸序列号为SEQ IDNO：9，人源化程度为83.2％；人源化处理抗体轻链的可变区氨基酸序列号为SEQ ID NO：10，人源化程度为80.5％。改造后抗体称之为h24V5。

QVQLQQKGYVEVRPGSDVCFSCKIWMKWTFWNRMNWVKNRPQF MLECYSITCDGMTRSSKWGIKGKASLAPHKVSATVYMQLSSPVSCQNA WRFCLITGTIWALHMDFFQVTCPA(SEQ ID NO：9)

DIVEWQSHNFMSDPVHDRHTIDCSPDDIPWFIGGWYQDFPGSSRKY LIYSICAMYNGVPDRFTHWGSHTDYTATVTSGQWSDPTVVMCTGECFC VFTPCWNTKFEIK(SEQ ID NO：10)

实施例3抗体活性测定

1)抗体活性的测定

1.将表面偶联Protein A蛋白的探针在250μL的bufferK(PBS+

0.002％吐温20+0.02％BSA)中浸润10分钟；

2.将抗体用bufferK配置为5μg/mL的工作液；

3.将重组human VEGF165蛋白(Sigma-Aldrich公司)、human VEGF121蛋白(abcam公司)、重组人VEGFB蛋白(abcam公司)、重组人VEGFC蛋白(abcam公司)、重组人VEGFD蛋白(MCE)、重组人EG-VEGF蛋白(abcam公司)、重组人PIGF蛋白(abcam公司)分别用缓冲液配置为四个浓度的工作液，浓度分别为10μg/mL，5μg/mL，2.5μg/mL，0μg/mL；

4.根据Gator非标记分析仪(星童医疗技术，CAT#:Gator)指示添加试剂。

Affinity analyses ofanti-VEGFA antibody

注：“-”代表K_D值大于9.99E-2。

从上表可知，h24V5对于VEGF-A型蛋白的表达最多的VEGF-A亚型VEGF-A165和VEGF-A121均能高亲和力表达，K_D值最高能够达到1.15×10^-12(M)，且与其他几种VEGF亚型基本不发生交叉反应，具有优秀的特异性。

2)Elisa方法比较与商品化VEGF抗体的活性

通过倍比稀的方法对h24V5及对照的商品化抗体进行稀释并与human VEGF165蛋白(Sigma-Aldrich公司)进行结合。具体做法为：用ELISA包被液稀释重组人VEGF蛋白至1ug/ml，4℃过夜包被96孔板。次日吸去液体，每个孔用300ul PBS清洗3次。每孔用2％FBS的PBS溶液室温封闭30分钟。加入h24V5及商品化人源化VEGF抗体(Bevacizumab,冻干粉购自安进制药)。通过倍比稀释的方法进行2倍稀释。浓度梯度，5、2.5、1.25、0.625、0.03、0.015、0.08、0.04、0.02、0.01ug/ml。每孔100ul，室温孵育1小时。弃上清，每个孔用300ul PBS清洗3次。每孔加入100ul1:1000稀释的HRP标记的小鼠抗人IgG抗体(abcam)，室温孵育1h。弃上清，每个孔用300ul PBS清洗3次。每孔加入100ul ELISA显影剂(solarbio)，室温避光15分钟，加入100ul ELISA终止液(solarbio)，450nm波长下检测吸光度。实验结果如图1所示。可见h24V5在绝大部分浓度下的亲和力均优于商品化VEGF抗体。

3)h24V5对C6胶质瘤细胞的抑制活性

大鼠C6胶质瘤细胞(购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)在含有10％胎牛血清的DMEM培养基中培养。细胞生长至70％～80％时，弃去原培养基，加入无血清培养基培养8h后再加入含VEGF单抗的培养基，h24V5抗体以不同终浓度加入，每组4个重复，48h后MTT法检测细胞增殖情况。

结果如图2所示，0.1μg/ml～10μg/ml的h24V5抗体均能显著性抑制C6胶质瘤细胞的增值。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (9)

1.能够特异性识别VEGF的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段的重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3依次为SEQ ID NO:1～3所示，所述抗体或其抗原结合片段的轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3依次为SEQ ID NO:4～6所示。

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段的具有SEQ ID NO:7所示的重链可变区HCVR和SEQ ID NO:8所示的轻链可变区LCVR。

3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段为人源化抗体。

4.根据权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有SEQID NO:9所示的重链可变区HCVR和SEQ ID NO:10所示的轻链可变区LCVR。

5.编码权利要求1～4任一项所述抗体或其抗原结合片段的核酸。

6.含有权利要求5所述核酸的载体。

7.宿主细胞，其含有权利要求5所述的核酸或权利要求6所述的载体。

8.药用组合物，其包含权利要求1～4任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

9.根据权利要求8所述的药用组合物，其还包含药学上可接受的载剂。

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