CN115838391A - 角膜接触镜泪蛋白含量测量方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种角膜接触镜泪蛋白含量测量方法及其应用，该测量方法包括通过微量紫外分光光度计检测角膜接触镜蛋白提取溶液中的蛋白浓度，具体包括：提供蛋白提取溶液，所述蛋白提取溶液包括8M盐酸胍水溶液；将表面吸附有蛋白的角膜接触镜放置在蛋白提取溶液中，蛋白提取溶液将蛋白自所述角膜接触镜上分离，自蛋白提取溶液中取出角膜接触镜，通过微量紫外分光光度计检测蛋白提取溶液中的蛋白浓度，得到镜片吸附蛋白浓度值，通过镜片吸附蛋白浓度值和蛋白提取液体积计算得到镜片吸附蛋白含量值。通过本发明提供的方法可以定量检测出镜片吸附蛋白含量，为用户提供实验检测数据，保障用户消费使用安全。

Description

角膜接触镜泪蛋白含量测量方法及其应用

技术领域

本发明涉及生物蛋白检测领域，尤其涉及一种角膜接触镜泪蛋白含量测量方法及其应用。

背景技术

角膜接触镜如何除蛋白的问题困扰了行业半个多世纪，引发了各国的眼视光行业对接触镜佩戴安全的高度重视。我国也因角膜接触镜上的角膜感染案例频发，从而将接触镜在2012年便列入第三类医疗器械类，作为高风险管理，其原因在于：接触镜材质结构有大量肉眼不见的纤维透氧孔，人眼时刻分泌大量的泪液，泪液里含有大量泪蛋白，泪蛋白极易渗透到纤维透氧孔中，造成镜片DK值降低(透氧率)，造成角膜缺氧、水肿等症状，严重的会造成角膜受损，细菌感染，角膜炎症甚至是视力受损等问题。

为了有效清除接触镜表面的泪蛋白，保障消费者的眼部安全，市场也推出了多种用于去除角膜接触镜表面泪蛋白的方法。但由于肉眼不可见泪蛋白是否被完全有效的洗脱降解，逐渐的蛋白检测方法就被重视发展起来，以使得通过科学检测有效验证蛋白是否被完全降解。但是现阶段市场上的角膜接触镜有效除蛋白的检测方法因角膜接触镜内部纵横交错的透氧孔特殊结构具有局限性，无法找到一种可以直接有效且精确测量角膜接触镜所吸附泪蛋白的具体量值，因此其检测结果不全面，仅具有一定的参考意义，其并不能成为定量定性检测蛋白降解程度的专业检测依据。

现阶段行业内也暂未有直接测试角膜接触镜泪蛋白吸附量的方法，因此在对角膜接触镜的清洗效果的评判上还不够准确，无法通过检测结果给予用户一个评测有效的清洗方案，也无法通过检测结果对镜片清洗方法的有效性做出评价，这一问题无疑阻碍了行业内在角膜接触镜清洗方法上的研究进展。

因此，亟需提出一种新的技术方案来解决上述问题。

发明内容

现阶段市场上暂未有直接测试角膜接触镜泪蛋白吸附量的方法，因此在各种实验中也无法对用户使用过的角膜接触镜上泪蛋白的含量进行精确测量，更无法对清洗后的角膜接触镜进行安全性检测，而未清洗干净的镜片上通常会附着有泪蛋白、微生物等对眼球不利的物质，尤其是附着在镜片上的泪蛋白，其极易附着在镜片内部纵横交错的透氧孔内。因此，在没有有效清除镜片泪蛋白的情况下佩戴镜片，就必然存在眼球健康隐患。

本发明的目的是解决现有技术中存在的问题，提供一种有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，采用的技术方案如下：

一种有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，所述方法通过微量紫外分光光度计检测角膜接触镜蛋白提取溶液中的蛋白浓度，具体包括：

提供蛋白提取溶液，所述蛋白提取溶液包括8M盐酸胍水溶液；

将表面吸附有蛋白的角膜接触镜放置在所述蛋白提取溶液中，所述蛋白提取溶液将所述蛋白自所述角膜接触镜上分离，自所述蛋白提取溶液中取出所述角膜接触镜，通过所述微量紫外分光光度计检测所述蛋白提取溶液中的蛋白浓度，得到镜片吸附蛋白浓度值，通过所述镜片吸附蛋白浓度值和蛋白提取液体积计算得到镜片吸附蛋白含量值。

上述技术方案中进一步的，所述方法还包括：

制备所述表面吸附有蛋白的角膜接触镜：将待培养的角膜接触镜和蛋白培养液置于培养皿中密封培养，镜片培养过程中，所述蛋白培养液中的一部分蛋白游离在所述蛋白培养液中，一部分蛋白沉淀在所述角膜接触镜上，剩余部分蛋白沉淀在所述培养皿内壁上。

进一步的，于内壁上沉淀有蛋白的所述培养皿中加入乙腈三氟乙酸溶液，振荡、静置预定时长，使得所述培养皿内壁上的蛋白脱落并溶于所述乙腈三氟乙酸溶液中，通过所述微量紫外分光光度计检测所述乙腈三氟乙酸溶液中的蛋白浓度，将所述蛋白浓度与所述乙腈三氟乙酸溶液的体积相乘，得到沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量。

进一步的，其还包括：制备所述表面吸附有蛋白的角膜接触镜，具体包括：

配置蛋白培养液，记录蛋白培养液的原始蛋白浓度，将所述角膜接触镜置于所述蛋白培养液中培养48～72小时，获得表面吸附有蛋白的角膜接触镜。其中，配置所述蛋白培养液包括根据所述蛋白培养液中的蛋白的等电点调节所述蛋白培养液的PH值；所述角膜接触镜于所述蛋白培养液中的培养温度范围为36℃～42℃；将所述角膜接触镜的内凹面朝上置于所述蛋白培养液中。

进一步的，将待培养的角膜接触镜和所述蛋白培养液加入培养皿中，37℃恒温密封培养48小时，获得表面吸附有蛋白的角膜接触镜。

进一步的，分别检测游离在所述蛋白培养液中的蛋白含量、沉淀在所述角膜接触镜上的蛋白含量，以及沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量，计算获得所述方法对蛋白的提取率。

进一步的，检测游离在所述蛋白培养液中的蛋白含量，具体包括:

通过所述微量紫外分光光度计检测游离在所述蛋白培养液中的蛋白浓度，再将所述蛋白浓度与所述蛋白培养液的体积相乘，获得游离在所述蛋白培养液中的蛋白含量，记为培养后剩余培养液中蛋白含量。

进一步的，检测沉淀在所述角膜接触镜上的蛋白含量，具体包括：

将培养后的所述角膜接触镜置于8M盐酸胍水溶液中振荡、静置预定时长，使得所述角膜接触镜上的蛋白自镜片上脱离并溶解于所述8M盐酸胍水溶液中，通过所述微量紫外分光光度计检测所述8M盐酸胍水溶液中的蛋白浓度，将所述蛋白浓度与所述8M盐酸胍水溶液的体积相乘，得到沉淀在所述角膜接触镜上的蛋白含量，记为镜片蛋白提取液中蛋白含量。

进一步的，检测沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量，具体包括：

于内壁上沉淀有蛋白的培养皿内加入乙腈三氟乙酸溶液，振荡、静置预定时长，使得所述培养皿内壁上的蛋白脱落并溶解于所述乙腈三氟乙酸溶液中，通过所述微量紫外分光光度计检测所述乙腈三氟乙酸溶液中的蛋白浓度，将所述蛋白浓度与所述乙腈三氟乙酸溶液的体积相乘，得到沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量，记为培养皿沉淀蛋白提取液中蛋白含量。

进一步的，计算获得所述方法对蛋白的提取率，具体包括：

其中，于内壁上沉淀有蛋白的培养皿内加入的所述乙腈三氟乙酸溶液包括：500份纯水、500份乙腈和2份三氟乙酸。

进一步的，配置所述蛋白培养液，记录蛋白培养液的原始蛋白浓度还包括：设置一组平行对照组，所述平行对照组包括：

提供与所述蛋白培养液相同体积的纯水，通过所述微量紫外分光光度计检测该纯水中的蛋白浓度，继而通过溶液体积计算得到蛋白含量。

进一步的，检测游离在所述蛋白培养液中的蛋白含量还包括设置一组对照组，所述对照组包括：

提供与所述蛋白培养液相同体积的纯水，通过所述微量紫外分光光度计检测该纯水中的蛋白浓度，继而通过溶液体积计算得到蛋白含量。

进一步的，检测沉淀在所述角膜接触镜上的蛋白含量还包括设置一组对照组，该对照组包括：

提供与实验组相同体积的8M盐酸胍水溶液，通过所述微量紫外分光光度计检测该8M盐酸胍水溶液中的蛋白浓度，继而计算得到蛋白含量。

进一步的，检测沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量还包括设置一组对照组，该对照组包括：

提供与实验组相同体积的乙腈三氟乙酸溶液，通过所述微量紫外分光光度计检测该乙腈三氟乙酸溶液中的蛋白浓度，继而计算得到蛋白含量。

进一步的，配置所述蛋白培养液具体包括：

将溶菌酶和纯水混合得到稀释蛋白液，将所述稀释蛋白液与酸性溶液或碱性溶液混合以调节所述稀释蛋白液的PH值，使得所述稀释蛋白液的PH值达到所述稀释蛋白液中的蛋白的等电点，获得所述蛋白培养液。

进一步的，所述酸性溶液包括减小所述蛋白培养液的PH值的HCl溶液。

进一步的，所述碱性溶液包括增大所述蛋白培养液的PH值的NaOH溶液。

进一步的，所述蛋白培养液的蛋白浓度不超过6.0mg/ml。

进一步的，配置所述蛋白培养液具体包括：将110mg溶菌酶与45mL纯水混合得到稀释蛋白液，于所述稀释蛋白液内加入HCl溶液和/或NaOH溶液，使得所述稀释蛋白液的PH值为10.88，4℃冷藏储存。

进一步的，将表面吸附有蛋白的角膜接触镜放置在所述蛋白提取溶液中，所述蛋白提取溶液将所述蛋白自所述角膜接触镜上分离，具体包括：将所述角膜接触镜置于所述8M盐酸胍水溶液中，振荡、静置1小时，所述角膜接触镜上的蛋白被溶解并自镜片上脱离后溶于所述蛋白提取液中。

基于上述提供的一种有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，本发明还提供一种该测量角膜接触镜泪蛋白含量的应用，所述测量角膜接触镜泪蛋白含量用于对清洗后的角膜接触镜进行泪蛋白含量测量，检测清洗所述角膜接触镜的清洗方法和/或清洗装置对镜片的除蛋白效果。

与现有技术相比，本发明至少具有如下有益效果中的一个或多个：

1、本发明提供一种有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，与现有技术相比其可以解决角膜接触镜吸附泪蛋白具体含量难以测量的问题，通过8M盐酸胍水溶液将镜片上的蛋白分离至溶液中，再通过微量紫外分光光度计进行测量，方法简单有效，避免了蛋白提取过程中提取溶液与镜片发生反应导致镜片变形、变性的问题，也避免了提取溶液对后期紫外分光光度计吸光值测量时的误差等问题。

2、通过本发明提供的有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法可以对通过各种清洗方法或清洗装置清洗过后的镜片进行蛋白量提取，从而对比评测出去蛋白效果最好的清洗产品或清洗方法，为用户提供一种安全性的镜片护理方法，保障用户镜片入眼安全。

3、本发明提供的测量方法可以通过蛋白提取溶液将蛋白自所述硬性角膜接触镜上分离，所述蛋白提取溶液可以是8M盐酸胍水溶液也可以是乙腈三氟乙酸溶液，蛋白提取液的选择主要是根据镜片材质和检测时的培养皿材质进行选择，所述8M盐酸胍水溶液与硬性角膜接触镜材料不发生反应，也不影响蛋白质的测量值，因而，可以将人工泪液培养的硬性角膜接触镜作为检测样本，将其放置在所述8M盐酸胍水溶液中进行振动提取分离蛋白，再通过微量紫外分光光度计检测蛋白提取溶液中的蛋白浓度，通过对该蛋白浓度进行简单计算就可以得到镜片吸附蛋白含量值，因此，通过本发明的检测方法就可以得到硬性角膜接触镜吸附泪蛋白的具体含量；而乙腈三氟乙酸溶液也可以配合检测不与其发生反应的软性角膜接触镜的蛋白含量，进一步的，通过实验检测计算也可以计算得到所述蛋白提取溶液对蛋白的洗脱率，实验结果表明，使用这种方法硬性角膜接触镜上所吸附泪蛋白的提取率接近100％。

4、本发明提出的测量方法避免了乙腈三氟乙酸与硬性角膜接触镜反应可能对A280下吸光值的影响，采用与镜片材质无反应的8M盐酸胍对镜片上的沉淀性蛋白进行提取，同时采用运用较为成熟的乙腈三氟乙酸溶液对瓶壁上的蛋白进行提取，确保了瓶壁上蛋白的提取完全，盐酸胍提取硬性角膜接触镜上蛋白效果较为稳定，长时间浸泡(48h)干净镜片对其A280下的吸光值无影响。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它附图。

图1是本发明提出的测量角膜接触镜泪蛋白含量方法在一种实施例中的测试流程图；

图2是在一种实施例中建立的蛋白浓度检测标准曲线图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

在本发明的描述中，需要理解的是，除非另有明确的规定和限定，术语应做广义理解，对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

下面结合实施例进一步说明本发明要旨。

实施例1

现阶段市场上暂未有直接测试角膜接触镜泪蛋白吸附量的方法，而研究人员在证明角膜接触镜清洗效果的实际应用中，却需要一种可直接将角膜接触镜所吸附泪蛋白具体量化的测试方法。

现阶段公知的可以提取蛋白质的物质是pbs溶液(磷酸盐缓冲溶液，一种标准盐溶液)，但是其也存在缺陷，即其不能充分提取角膜接触镜上的蛋白。因而，暂时还没有一种公认的方法可以检验人眼佩戴的角膜接触镜上实际吸附的蛋白含量，但为了证明本发明所述测量方法的有效性，本发明通过人工泪液培养的角膜接触镜进行实验，且在没有方法可以具体量测角膜接触镜上实际吸附的蛋白含量的前提下，本实验默认自人工泪液中培养出来的角膜接触镜上吸附的实际蛋白含量即为通过计算得到的镜片吸附蛋白理论含量。

鉴于pbs溶液不能充分提取角膜接触镜上的蛋白，无法将其应用在精确测量领域，研究人员根据泪蛋白的特性找到了一种可以提取角膜接触镜泪蛋白的试剂——乙腈三氟乙酸溶液。

在一种实施例中，该乙腈三氟乙酸溶液可以包括500份纯水、500份乙腈和2份三氟乙酸。通过该乙腈三氟乙酸溶液对角膜接触镜(包括软性角膜接触镜和硬性角膜接触镜，为简化表达，本专利中硬性角膜接触镜简称为硬镜，软性角膜接触镜简称为软镜)进行提取蛋白时，需要配合微量紫外分光光度计检测角膜接触镜蛋白提取溶液(该乙腈三氟乙酸溶液即为蛋白提取溶液)中的蛋白浓度，具体测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法可以分为如下步骤：

1、配置乙腈三氟乙酸溶液作为蛋白提取溶液；

2、将表面吸附有蛋白的角膜接触镜放置在该蛋白提取溶液中，该蛋白提取溶液将镜片上的蛋白自角膜接触镜上分离，自所述蛋白提取溶液中取出所述角膜接触镜；

3、通过微量紫外分光光度计检测蛋白提取溶液中的蛋白浓度，得到镜片吸附蛋白浓度值，通过镜片吸附蛋白浓度值和蛋白提取液的体积计算得到镜片吸附蛋白含量值。

若需要精确得到该乙腈三氟乙酸溶液对镜片蛋白的洗脱率，则还可于上述步骤1和步骤2之间增加制备表面吸附有蛋白的角膜接触镜的步骤，具体如下：

配置人工泪液，通过微量紫外分光光度计检测人工泪液中的蛋白浓度，获得人工泪液的原始蛋白浓度值；

将角膜接触镜在该人工泪液中恒温培养48-72小时；

将角膜接触镜自人工泪液中取出，通过微量紫外分光光度计检测人工泪液中的剩余蛋白浓度，获得剩余蛋白浓度值；

使用人工泪液的原始蛋白浓度值减去剩余蛋白浓度值，获得镜片吸附蛋白理论浓度值。

综上，将使用乙腈三氟乙酸溶液对该镜片进行蛋白提取后获得的镜片吸附蛋白含量值，除以上述获得的镜片吸附蛋白理论浓度值，即可计算得到该蛋白提取溶液(乙腈三氟乙酸溶液)对蛋白的洗脱率。

实验中发现，该试剂(乙腈三氟乙酸溶液)确实可有效提取软性角膜接触镜上的蛋白，但其对硬性角膜接触镜的提取效果却不太理想。实验现象表明，该乙腈三氟乙酸溶液在提取硬性角膜接触镜的过程中会使得镜片变柔软，从而导致镜片形态发生变化，研究人员猜测，这可能是乙腈三氟乙酸溶液与硬性角膜接触镜中的某种物质发生了化学反应。

研究人员按照上述测量步骤使用乙腈三氟乙酸溶液对硬性角膜接触镜进行提取蛋白，再将提取蛋白后的乙腈三氟乙酸溶液在紫外分光光度计下通过A280nm紫外光吸收法测定提取液中的蛋白浓度，发现该乙腈三氟乙酸溶液与硬性角膜接触镜中的某种物质发生了化学反应后，其对A280下的蛋白提取液的吸光值有影响，表现为有异常增大趋势。

因此，这种使用乙腈三氟乙酸溶液对硬镜进行提取蛋白的方法还存在一定缺陷，不能完全适应研究人员证明角膜接触镜清洗效果的实际应用。

基于此，为了避免可能产生的新物质对提取蛋白后溶液吸光值的影响，研究人员希望采取一种不会破坏镜片结构和组分的试剂对角膜接触镜上的蛋白进行有效提取。研究过程中发现，8M盐酸胍溶液可有效提取角膜接触镜(包括软性角膜接触镜和硬性角膜接触镜)上的沉淀性蛋白(蛋白量在50μg以下)，且长时间内不会对A280下的吸光值产生影响(24h)。

8M盐酸胍溶液(Guanidine·HCl Solution)，CAS号为50-01-1，其可用于蛋白变性及蛋白折叠，可溶解蛋白质，导致细胞结构破坏，核蛋白二级结构破坏，从核酸上解离下来，可作为强烈变性剂使得蛋白质变性。

因此，在此基础上，本发明基于该8M盐酸胍溶液提出一种能够有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，具体测量方法如下：

一种有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，所述方法通过微量紫外分光光度计检测角膜接触镜蛋白提取溶液中的蛋白浓度，具体包括如下步骤：

1、提供蛋白提取溶液，所述蛋白提取溶液包括8M盐酸胍水溶液；

2、将表面吸附有蛋白的角膜接触镜放置在所述蛋白提取溶液中，所述蛋白提取溶液将所述蛋白自所述角膜接触镜上分离，自所述蛋白提取溶液中取出所述角膜接触镜；

3、通过所述微量紫外分光光度计检测所述蛋白提取溶液中的蛋白浓度，得到镜片吸附蛋白浓度值，通过所述镜片吸附蛋白浓度值和蛋白提取液体积计算得到镜片吸附蛋白含量值。

该8M盐酸胍水溶液不会同角膜接触镜发生反应，避免了在提取硬镜蛋白的过程中导致硬镜物理特性发生变化，且8M盐酸胍水溶液可以溶解蛋白质，导致细胞结构破坏，进而使得蛋白自镜片上脱离，实现自镜片上对蛋白的提取，通过对8M盐酸胍水溶液中溶解的蛋白的检测，即可得到该镜片上吸附的蛋白质含量，精确可靠，解决了现有技术中无法精确测量镜片吸附的蛋白量的困扰，相比乙腈三氟乙酸溶液，8M盐酸胍水溶液不会与硬镜发生反应导致蛋白测量实验结果出现误差。

在一种实施例中，本发明提供的测量方法还可以包括如下步骤：

制备所述表面吸附有蛋白的角膜接触镜：将待培养的角膜接触镜和蛋白培养液置于培养皿中密封培养。在实验中为了得到具体可以量化的数据，最好就是能够培养镜片，若是人眼培养后得到附有蛋白的镜片的话，镜片蛋白原始含量难以准确评测。

在上述的镜片培养过程中，蛋白培养液中的一部分蛋白会游离在所述蛋白培养液中，一部分蛋白会沉淀在所述角膜接触镜上，剩余部分蛋白会沉淀在所述培养皿内壁上。因此，镜片上沉淀的蛋白量就需要用蛋白培养液原始的蛋白量减去游离在培养液中的剩余蛋白量和沉淀在培养皿内壁上的蛋白量。

在一种实施例中，若是要提取培养皿内壁上的蛋白，则可以通过如下方案进行提取：

1、于内壁上沉淀有蛋白的培养皿中加入乙腈三氟乙酸溶液，振荡、静置预定时长，使得所述培养皿内壁上的蛋白脱落并溶于所述乙腈三氟乙酸溶液中；

2、通过所述微量紫外分光光度计检测所述乙腈三氟乙酸溶液中的蛋白浓度，将所述蛋白浓度与所述乙腈三氟乙酸溶液的体积相乘，得到沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量。

在一种实施例中，上述制备表面吸附有蛋白的角膜接触镜具体可以包括如下步骤：

1、配置蛋白培养液，记录蛋白培养液的原始蛋白浓度，将角膜接触镜置于所述蛋白培养液中培养48～72小时，获得表面吸附有蛋白的角膜接触镜。

上述步骤中，配置蛋白培养液时还需要根据蛋白培养液中的蛋白的等电点调节所述蛋白培养液的PH值。常规人工泪液(模拟人眼环境制得的一种蛋白培养液，一般人工泪液的组成成分包括：NaCl9mg/ml，CaCl2·H2O0.25mg/ml，Na2HPO4·7H2O 0.28mg/ml，胆固醇0.0018mg/ml，磷脂酰胆碱0.0005mg/ml，溶菌酶2.2mg/ml。)中的蛋白质由于其表面离子化侧链的存在，蛋白质带净电荷，因而常规人工泪液中的蛋白质分子间存在相互排斥的力，使用常规人工泪液培养角膜接触镜，镜片上所吸附的蛋白可移动，且不易产生沉淀，仅用液体(生理盐水、护理液)浸泡即可清除部分蛋白，自然地会对实际除蛋白的效果验证产生干扰，而本发明配置得到的蛋白培养液中的蛋白存在的pH正好在其等电点下，蛋白质不带电荷，即可使该蛋白质分子间的排斥力降低，在一定温度下(镜片培养37℃附近合适)该蛋白质可缓慢进行沉淀到角膜接触镜表面，这种沉淀后的蛋白可以使用肉眼、光学设备观察，不易被生理盐水、多功能护理液等冲洗去除，且可以进行回收提取。

在一种实施例中，所述角膜接触镜于所述蛋白培养液中的培养温度范围为36℃～42℃；将所述角膜接触镜的内凹面朝上置于所述蛋白培养液中。发明人经过大量实验发现，在等电点下，蛋白培养液对镜片的蛋白培养速度与培养温度有关，培养温度越高，被培养的所述角膜接触镜上的蛋白沉淀速度越快，且蛋白沉淀量越多。但培养温度不超过42℃，超出42℃后的温度，蛋白质容易变性，不可进行回收定量测定。作为优选的培养温度范围为36℃～42℃。

在一种实施例中，将待培养的角膜接触镜和所述蛋白培养液加入培养皿中，37℃恒温密封培养48小时，即可获得表面吸附有蛋白的角膜接触镜。

为了精确得到培养后镜片上的蛋白量，本发明所述的测量方法就需要分别检测游离在所述蛋白培养液中的蛋白含量、沉淀在所述角膜接触镜上的蛋白含量，以及沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量，从而计算获得所述测量方法对蛋白的提取率，可参见图1，图1即示出了本发明提出的测量角膜接触镜泪蛋白含量方法在一种实施例中的测试流程图，可根据图1了解本发明提出的测量方法的测试流程。

在一种实施例中，参见图1，配置蛋白培养液时需记录蛋白培养液的原始蛋白浓度，为了排除干扰精确获得该蛋白培养液的原始蛋白浓度，还需要去除背景对照：设置一组平行对照组，该平行对照组包括：

提供与所述蛋白培养液相同体积的纯水，通过所述微量紫外分光光度计检测该纯水中的蛋白浓度，继而通过溶液体积计算得到蛋白含量。

在一种实施例中，参见图1，检测游离在所述蛋白培养液中的蛋白含量，可以通过如下方法进行:

通过微量紫外分光光度计检测游离在所述蛋白培养液中的蛋白浓度，再将所述蛋白浓度与所述蛋白培养液的体积相乘，获得游离在所述蛋白培养液中的蛋白含量，记为培养后剩余培养液中蛋白含量。

为了形成背景对照，还可以设置一组平行对照组：提供与所述蛋白培养液相同体积的纯水，通过所述微量紫外分光光度计检测该纯水中的蛋白浓度，继而通过溶液体积计算得到蛋白含量。

在一种实施例中，参见图1，检测沉淀在所述角膜接触镜上的蛋白含量，可以通过如下方法进行：

将培养后的所述角膜接触镜置于8M盐酸胍水溶液中振荡、静置预定时长，使得所述角膜接触镜上的蛋白自镜片上脱离并溶解于所述8M盐酸胍水溶液中，通过所述微量紫外分光光度计检测所述8M盐酸胍水溶液中的蛋白浓度，将所述蛋白浓度与所述8M盐酸胍水溶液的体积相乘，得到沉淀在所述角膜接触镜上的蛋白含量，记为镜片蛋白提取液中蛋白含量。

为了形成背景对照，还可以设置一组对照组：提供与实验组相同体积的8M盐酸胍水溶液，通过所述微量紫外分光光度计检测该8M盐酸胍水溶液中的蛋白浓度，继而计算得到蛋白含量。

在一种实施例中，参见图1，检测沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量，可以通过如下方法进行：

于内壁上沉淀有蛋白的培养皿内加入乙腈三氟乙酸溶液，振荡、静置预定时长，使得所述培养皿内壁上的蛋白脱落并溶解于所述乙腈三氟乙酸溶液中，通过所述微量紫外分光光度计检测所述乙腈三氟乙酸溶液中的蛋白浓度，将所述蛋白浓度与所述乙腈三氟乙酸溶液的体积相乘，得到沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量，记为培养皿沉淀蛋白提取液中蛋白含量。

为了形成背景对照，还可以设置一组对照组：提供与实验组相同体积的乙腈三氟乙酸溶液，通过所述微量紫外分光光度计检测该乙腈三氟乙酸溶液中的蛋白浓度，继而计算得到蛋白含量。

上述检测沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量时，之所以使用乙腈三氟乙酸溶液，是因为培养皿作为普通玻璃材质，与乙腈三氟乙酸不发生反应，为使得瓶壁上蛋白提取完全，故采用应用较为广泛的乙腈三氟乙酸(包括500份纯水、500份乙腈和2份三氟乙酸)进行提取。

基于上述检测方法即可得到：蛋白培养液的原始蛋白浓度、培养后剩余培养液中蛋白含量、培养皿沉淀蛋白提取液中蛋白含量，以及镜片蛋白提取液中蛋白含量，共计4组数据。可将上述4组数据按照如下计算公式计算，即可得到本发明所述方法对蛋白的提取率：

上述测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法中涉及到对蛋白培养液的配置，这与实验中蛋白在镜片上的沉淀含量直接相关。若是使用常规人工泪液培养角膜接触镜时，镜片上所吸附的蛋白可移动，且不易产生沉淀，仅用液体(生理盐水、护理液)浸泡即可清除部分蛋白，这对实际除蛋白的效果验证产生了干扰。因此，本发明配置得到的蛋白培养液对根据培养液中蛋白的等电点调节培养液PH值，这种调节PH值的方法是通过对蛋白质表面离子化侧链的滴定(通过调节培养液的PH值实现对蛋白质表面离子化侧链的滴定，使得培养液的PH值达到其内含有的蛋白质的等电点)实现了蛋白质存在的PH环境刚好是其等电点，蛋白质表面净电荷为零，培养液内的蛋白质分子间不存在电荷作用下的排斥现象，更易沉淀，且更稳定，在液体的浸泡下沉淀的蛋白质也较难脱离镜片。因此，蛋白培养液的配置是本发明测量方法中较为重要的一环。

下面详细说明本发明所述测量方法中对蛋白培养液的配置方法：

1、将溶菌酶和纯水混合得到稀释蛋白液(研究人员发现，人体泪液泪蛋白中溶菌酶的含量较其他种类的蛋白含量更高，因此，为了尽可能的贴近人体泪液，且助力于实验检测，本发明选择使用溶菌酶溶液作为镜片蛋白培养液)。

2、将所述稀释蛋白液与酸性溶液或碱性溶液混合以调节所述稀释蛋白液的PH值，使得所述稀释蛋白液的PH值达到所述稀释蛋白液中的蛋白的等电点，获得所述蛋白培养液。

上述酸性溶液可以是减小所述蛋白培养液的PH值的HCl溶液；上述碱性溶液可以是增大所述蛋白培养液的PH值的NaOH溶液。

发明人经过大量实验发现，所述蛋白培养液的蛋白浓度不超过6.0mg/ml，若蛋白培养液的蛋白浓度过高，镜片自蛋白培养液中取出后较为易碎。当然，蛋白培养液蛋白浓度越大，蛋白附着程度更高更明显更有利于实验检测，但是在检测仪器较为精密时，也可以使用浓度较低的蛋白培养液进行镜片培养，旨在于能够被仪器检测得到，并辅助完成实验即可。

在一种实施例中，配置蛋白培养液的具体步骤如下：

将110mg溶菌酶与45mL纯水混合得到稀释蛋白液，于所述稀释蛋白液内加入HCl溶液和/或NaOH溶液，使得所述稀释蛋白液的PH值为10.88，4℃冷藏储存。

在一种实施例中，将表面吸附有蛋白的角膜接触镜放置在所述蛋白提取溶液中，所述蛋白提取溶液将所述蛋白自所述角膜接触镜上分离，具体包括：将所述角膜接触镜置于所述8M盐酸胍水溶液中，振荡、静置1小时，所述角膜接触镜上的蛋白被溶解并自镜片上脱离后溶于所述蛋白提取液中。

基于上述提供的一种有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，本发明还提供一种该测量角膜接触镜泪蛋白含量的应用，所述测量角膜接触镜泪蛋白含量用于对清洗后的角膜接触镜进行泪蛋白含量测量，检测清洗所述角膜接触镜的清洗方法和/或清洗装置对镜片的除蛋白效果。因此，本发明提供的测量镜片蛋白含量的方法可以应用到检测镜片清洗效果的具体实例中，通过对清洗效果的检测可以向广大用户提出一种有效的镜片清洗方法和清洗装置，指导用户进行科学的角膜接触镜护理，保证入眼安全。

实施例2

根据实施例1提出的有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，本实施例进行对应的实验测量，需说明的是本实施例选用硬性角膜接触镜进行实验，实验步骤简述如下：

1、溶菌酶溶液(蛋白培养液)的配制：

称量溶菌酶粉末110mg，加入45mL纯水充分溶解后调节pH至10.88，后用50mL容量瓶定容至50mL，4℃冰箱保存。

2、硬性角膜接触镜上蛋白的培养：

向3mL可密封的圆柱形玻璃瓶(即为上述的培养皿)中加入1mL上述配制的溶菌酶溶液(浓度已通过超微紫外分光光度计测定)，凹面向上放入角膜接触镜后于37℃恒温培养箱中培养48h。

根据该培养方法，选定5组规格材质均相同的硬性角膜接触镜分别进行培养，分别记为镜片1、镜片2、镜片3、镜片4和镜片5。

3、蛋白提取：

针对上述培养的5组镜片分别进行如下步骤的蛋白提取：

在蛋白培养液PH值为10.88的条件下，除去溶液中剩余的溶菌酶，溶菌酶可能沉降到镜片或瓶壁(包括瓶底)，对这两部分采用不同的提取方式提取。当然，剩余的培养液中残留的蛋白的含量可通过微量紫外分光光度计进行检测。

a)瓶壁(包括瓶底)上沉淀性蛋白的提取

通常情况下，瓶壁(包括瓶底)上的沉淀性蛋白较多，且瓶身材质为普通玻璃，与0.1％乙腈三氟乙酸不发生反应，为使得瓶壁上蛋白提取完全，故采用应用较为广泛的0.1％乙腈三氟乙酸进行提取。

b)镜片上沉淀性蛋白的提取

硬性角膜接触镜经0.1％乙腈三氟乙酸提取后发生了物理形变，推测可能是乙腈三氟乙酸与镜片中的某种材质发生了反应，为了避免对A280处吸光值的影响，采用8M盐酸胍水溶液对镜片上的蛋白进行提取。

4、蛋白沉淀量(理论沉淀性蛋白浓度)计算：

理论沉淀性蛋白浓度＝蛋白培养液原始的蛋白量-游离在培养液中的剩余蛋白量；

5、蛋白提取率计算：

实验人员对该5组镜片上的蛋白进行了提取，得到如下表1，表1即记录了该5组镜片的蛋白提取数据。

表1镜片蛋白培养后蛋白提取情况记录表

注：含量＝浓度×体积，体积均为1mL。

根据上述表1记录的实验数据可知，本发明提供的有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法确实可以有效提取并检测蛋白。

本发明实施例所述的实验过程中，利用乙腈三氟乙酸溶液或者8M盐酸胍水溶液进行提取蛋白时，溶液可将镜片上附着的蛋白自镜片上脱离，即蛋白溶于蛋白提取溶液中，再通过微量紫外分光光度计检测蛋白提取溶液的吸光值，再根据蛋白浓度检测标准曲线计算得到蛋白含量。

所述蛋白浓度检测标准曲线需人为建立，建立所述蛋白浓度检测标准曲线具体包括：

配置4mg/ml的蛋白溶液，对所述蛋白溶液进行倍比稀释，多次测试蛋白溶液的吸光值及蛋白浓度，记录测试得到的吸光值的平均值，记录测试得到的蛋白浓度的平均值，见下表2，根据所述吸光值的平均值和蛋白浓度的平均值制作标准曲线，若线性偏离度超出±10％范围，认为建标数据无效，需重做；

所述蛋白浓度检测标准曲线的函数表达式为：

y＝2.64033436x-0.001002579，

其中，y表示测得的蛋白浓度值，x表示蛋白在280nm处的吸光值；根据实际试验数据进行曲线拟合，试验数据与拟合函数之间的吻合程度，用一个与相关系数有关的一个量R2来评价，R2值越接近1，吻合程度越高，越接近0，则吻合程度越低，在一种情况下计算得到R2＝0.999999835。对于泪蛋白中溶菌酶浓度，检测线性范围为0.056mg/mL-3.485mg/mL，最低检测限为0.056mg/mL。人为建立得到的所述蛋白浓度检测标准曲线见图2。

表2蛋白溶液倍比稀释表

实施例3

本发明提出的测量方法避免了乙腈三氟乙酸溶液与硬性角膜接触镜反应可能对A280下吸光值的影响，采用与镜片材质无反应的8M盐酸胍对镜片上的沉淀性蛋白进行提取，同时采用运用较为成熟的乙腈三氟乙酸溶液对瓶壁上的蛋白进行提取，确保了瓶壁上蛋白的提取完全，盐酸胍提取硬性角膜接触镜上蛋白效果较为稳定，长时间浸泡(48h)干净镜片对其A280下的吸光值无影响。因此，软镜(为本文中软性角膜接触镜和软性亲水角膜接触镜的简称)可以使用乙腈三氟乙酸溶液进行有效提取蛋白，具体实验方案如下：

配置蛋白提取溶液，本实施例所述蛋白提取溶液包括乙腈、纯水和三氟乙酸，该蛋白提取溶液不与软镜材料反应，且可以将蛋白自软镜上分离。

将通过人工泪液培养的软镜放置在所述蛋白提取溶液中，所述蛋白提取溶液将蛋白自所述软镜上分离，自所述蛋白提取溶液中取出所述软镜，所述蛋白提取溶液中溶解有蛋白，通过所述微量紫外分光光度计检测所述蛋白提取溶液中的蛋白浓度，获得镜片吸附蛋白浓度值。

在一种实施例中，所述蛋白提取溶液可以是50份乙腈、50份纯水和0.2份100％的三氟乙酸混合形成的溶液。

在一种实施例中，根据人眼环境配置的所述人工泪液的浓度为2.2mg/ml，则所述人工泪液的原始蛋白浓度值即为2.2mg/ml。

在一种实施例中，将软镜在所述人工泪液中恒温培养具体可以包括如下步骤：

先取1ml所述人工泪液放置在离心管中，再将未被使用的软镜放置在所述人工泪液中，恒温37℃培养1天，所述未被使用的软镜可以是由美国食品和药物管理局(FDA)归类的IV类软性亲水性接触镜。

当软镜在所述人工泪液中培养完成后，将所述软镜自人工泪液中取出，通过所述微量紫外分光光度计检测人工泪液中的剩余蛋白浓度，获得剩余蛋白浓度值，检测得到所述剩余蛋白浓度值为1.328mg/ml。

进一步的，通过人工泪液的原始蛋白浓度值与所述剩余蛋白浓度值计算所述软镜上吸附的蛋白浓度，获得镜片吸附蛋白理论浓度值，具体包括：利用配置的人工泪液的原始蛋白浓度值减去获得的所述剩余蛋白浓度值得到所述镜片吸附蛋白理论浓度值，计算得到所述镜片吸附蛋白理论浓度值为0.872mg/ml，即2.2mg/ml-1.328mg/ml＝0.872mg/ml。

进一步的，将通过人工泪液培养的软镜放置在蛋白提取溶液中，蛋白提取溶液将蛋白自软镜上分离，具体包括：取1ml蛋白提取溶液放置在离心管中，将软镜放置在该离心管中，软镜在离心管中振动清洗，软镜上吸附的蛋白与软镜分离；通过微量紫外分光光度计检测蛋白提取溶液中的蛋白浓度，获得镜片吸附蛋白浓度值，检测得到镜片吸附蛋白浓度值为0.805mg/ml，根据质量等于浓度乘于体积的概念可以通过获得的镜片吸附蛋白浓度值计算镜片吸附蛋白含量值，即镜片吸附蛋白浓度值和蛋白提取溶液体积的乘积即为镜片吸附蛋白含量。

进一步的，将获得的镜片吸附蛋白浓度值与所述镜片吸附蛋白理论浓度值进行数值计算，获得蛋白提取溶液对蛋白的洗脱率，具体包括：

通过所述镜片吸附蛋白浓度值(0.805mg/ml)与所述镜片吸附蛋白理论浓度值(0.872mg/ml)的比值计算所述蛋白提取溶液对蛋白的洗脱率，计算得到所述蛋白提取溶液对蛋白的洗脱率为92.3％，

即：0.805mg/ml÷0.872mg/ml＝92.3％。

在一种实施例中，所述软镜可通过人眼佩戴、使用人工泪液浸泡等方式使镜片上吸附上一定含量的泪蛋白。

在一种实施例中，可取1ml或4ml蛋白提取溶液(50份乙腈-50份纯水-0.2份100％三氟乙酸溶液)充分溶解已经吸附泪蛋白的软镜上的蛋白，并在常温下振动24小时以进一步溶解，也可通过分光光度法测试蛋白提取溶液中提取出来的蛋白含量。

因此，本实施例使用的蛋白测量方法通过乙腈三氟乙酸溶液将蛋白自软镜上分离，乙腈三氟乙酸溶液与软镜材料不发生反应，也不影响蛋白质的测量值。且自实验结果看来，乙腈三氟乙酸溶液可以对软镜蛋白的提取率(洗脱率)大于90％。

综上所述，本发明提供了一种有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，且在该泪蛋白含量检测方法的基础上又提出了一种泪蛋白含量检测方法的应用，与现有技术相比本发明提出的泪蛋白含量检测方法可以解决角膜接触镜吸附泪蛋白具体含量难以测量的问题，向行业内研究人员提供一种检测方法，辅助研究人员对镜片蛋白的含量进行检测，进而评测出一种有效的蛋白清除方法，帮助用户对长期使用的角膜接触镜做出安全性评判。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改和变型。

Claims (10)

1.一种有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，其特征在于，

所述方法通过微量紫外分光光度计检测角膜接触镜蛋白提取溶液中的蛋白浓度，具体包括：

提供蛋白提取溶液，所述蛋白提取溶液包括8M盐酸胍水溶液；

将表面吸附有蛋白的角膜接触镜放置在所述蛋白提取溶液中，所述蛋白提取溶液将所述蛋白自所述角膜接触镜上分离，自所述蛋白提取溶液中取出所述角膜接触镜，通过所述微量紫外分光光度计检测所述蛋白提取溶液中的蛋白浓度，得到镜片吸附蛋白浓度值，通过所述镜片吸附蛋白浓度值和蛋白提取液体积计算得到镜片吸附蛋白含量值。

2.根据权利要求1所述的有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，其特征在于，所述方法还包括：

制备所述表面吸附有蛋白的角膜接触镜：将待培养的角膜接触镜和蛋白培养液置于培养皿中密封培养，镜片培养过程中，所述蛋白培养液中的一部分蛋白游离在所述蛋白培养液中，一部分蛋白沉淀在所述角膜接触镜上，剩余部分蛋白沉淀在所述培养皿内壁上；

于内壁上沉淀有蛋白的所述培养皿中加入乙腈三氟乙酸溶液，振荡、静置预定时长，使得所述培养皿内壁上的蛋白脱落并溶于所述乙腈三氟乙酸溶液中，通过所述微量紫外分光光度计检测所述乙腈三氟乙酸溶液中的蛋白浓度，将所述蛋白浓度与所述乙腈三氟乙酸溶液的体积相乘，得到沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量。

3.根据权利要求1或2所述的有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，其特征在于，其还包括：

制备所述表面吸附有蛋白的角膜接触镜，具体包括：

配置蛋白培养液，记录蛋白培养液的原始蛋白浓度，将所述角膜接触镜置于所述蛋白培养液中培养48～72小时，获得表面吸附有蛋白的角膜接触镜；

其中，配置所述蛋白培养液包括根据所述蛋白培养液中的蛋白的等电点调节所述蛋白培养液的PH值；

所述角膜接触镜于所述蛋白培养液中的培养温度范围为36℃～42℃；

将所述角膜接触镜的内凹面朝上置于所述蛋白培养液中。

4.根据权利要求3所述的有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，其特征在于，

将待培养的角膜接触镜和所述蛋白培养液加入培养皿中，37℃恒温密封培养48小时，获得表面吸附有蛋白的角膜接触镜；

分别检测游离在所述蛋白培养液中的蛋白含量、沉淀在所述角膜接触镜上的蛋白含量，以及沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量，计算获得所述方法对蛋白的提取率。

5.根据权利要求4所述的有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，其特征在于，

检测游离在所述蛋白培养液中的蛋白含量，具体包括:

通过所述微量紫外分光光度计检测游离在所述蛋白培养液中的蛋白浓度，再将所述蛋白浓度与所述蛋白培养液的体积相乘，获得游离在所述蛋白培养液中的蛋白含量，记为培养后剩余培养液中蛋白含量；

检测沉淀在所述角膜接触镜上的蛋白含量，具体包括：

将培养后的所述角膜接触镜置于8M盐酸胍水溶液中振荡、静置预定时长，使得所述角膜接触镜上的蛋白自镜片上脱离并溶解于所述8M盐酸胍水溶液中，通过所述微量紫外分光光度计检测所述8M盐酸胍水溶液中的蛋白浓度，将所述蛋白浓度与所述8M盐酸胍水溶液的体积相乘，得到沉淀在所述角膜接触镜上的蛋白含量，记为镜片蛋白提取液中蛋白含量；

检测沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量，具体包括：

于内壁上沉淀有蛋白的培养皿内加入乙腈三氟乙酸溶液，振荡、静置预定时长，使得所述培养皿内壁上的蛋白脱落并溶解于所述乙腈三氟乙酸溶液中，通过所述微量紫外分光光度计检测所述乙腈三氟乙酸溶液中的蛋白浓度，将所述蛋白浓度与所述乙腈三氟乙酸溶液的体积相乘，得到沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量，记为培养皿沉淀蛋白提取液中蛋白含量；

计算获得所述方法对蛋白的提取率，具体包括：

其中，于内壁上沉淀有蛋白的培养皿内加入的所述乙腈三氟乙酸溶液包括：500份纯水、500份乙腈和2份三氟乙酸。

6.根据权利要求5所述的有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，其特征在于，

配置所述蛋白培养液，记录蛋白培养液的原始蛋白浓度还包括：设置一组平行对照组，所述平行对照组包括：

提供与所述蛋白培养液相同体积的纯水，通过所述微量紫外分光光度计检测该纯水中的蛋白浓度，继而通过溶液体积计算得到蛋白含量；

检测游离在所述蛋白培养液中的蛋白含量还包括设置一组对照组，所述对照组包括：

提供与所述蛋白培养液相同体积的纯水，通过所述微量紫外分光光度计检测该纯水中的蛋白浓度，继而通过溶液体积计算得到蛋白含量；

检测沉淀在所述角膜接触镜上的蛋白含量还包括设置一组对照组，该对照组包括：

提供与实验组相同体积的8M盐酸胍水溶液，通过所述微量紫外分光光度计检测该8M盐酸胍水溶液中的蛋白浓度，继而计算得到蛋白含量；

检测沉淀在所述培养皿内壁上的蛋白含量还包括设置一组对照组，该对照组包括：

提供与实验组相同体积的乙腈三氟乙酸溶液，通过所述微量紫外分光光度计检测该乙腈三氟乙酸溶液中的蛋白浓度，继而计算得到蛋白含量。

7.根据权利要求3所述的有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，其特征在于，配置所述蛋白培养液具体包括：

将溶菌酶和纯水混合得到稀释蛋白液，将所述稀释蛋白液与酸性溶液或碱性溶液混合以调节所述稀释蛋白液的PH值，使得所述稀释蛋白液的PH值达到所述稀释蛋白液中的蛋白的等电点，获得所述蛋白培养液；

所述酸性溶液包括减小所述蛋白培养液的PH值的HCl溶液；

所述碱性溶液包括增大所述蛋白培养液的PH值的NaOH溶液；

所述蛋白培养液的蛋白浓度不超过6.0mg/ml。

8.根据权利要求7所述的有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，其特征在于，配置所述蛋白培养液具体包括：

将110mg溶菌酶与45mL纯水混合得到稀释蛋白液，于所述稀释蛋白液内加入HCl溶液和/或NaOH溶液，使得所述稀释蛋白液的PH值为10.88，4℃冷藏储存。

9.根据权利要求1所述的有效测量角膜接触镜泪蛋白含量的方法，其特征在于，将表面吸附有蛋白的角膜接触镜放置在所述蛋白提取溶液中，所述蛋白提取溶液将所述蛋白自所述角膜接触镜上分离，具体包括：

将所述角膜接触镜置于所述8M盐酸胍水溶液中，振荡、静置1小时，所述角膜接触镜上的蛋白被溶解并自镜片上脱离后溶于所述蛋白提取液中。

10.一种权利要求1-9任一所述的测量角膜接触镜泪蛋白含量的应用，其特征在于，所述测量角膜接触镜泪蛋白含量用于对清洗后的角膜接触镜进行泪蛋白含量测量，检测清洗所述角膜接触镜的清洗方法和/或清洗装置对镜片的除蛋白效果。

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