CN115824751A - 一种测定阳春砂挥发油含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种测定阳春砂挥发油含量的方法，所述方法包括：1)通过正交设计试验探讨阳春砂挥发油提取五个因素对挥发油含量的影响，找到对阳春砂挥发油含量测定具有显著性影响的因素；2)通过探讨种子团粉碎程度对挥发油含量的影响，得到阳春砂挥发油含量测定的最佳提取方法；3)建立阳春砂挥发油含量测定的方法；4)将不同产地阳春砂按步骤3)测定的方法测定不同产地阳春砂挥发油，并计算比较其含量的差异；5)测定不同产地阳春砂的含水量，再与步骤3)测定的方法测定结果结合，计算阳春砂实际挥发油含量(除去水分)，并比较其含量的差异；6)将不同产地阳春砂挥发油含量与实际挥发油含量(除水分外)的差异进行比较。

Description

一种测定阳春砂挥发油含量的方法

技术领域

本发明涉及阳春砂的质量检测和控制技术领域，具体涉及一种测定阳春砂挥发油含量的方法。

背景技术

阳春砂为姜科植物阳春砂Amomum villosum Lour.的干燥成熟果实，具有化湿开胃、温脾止泻、理气安胎等功效，原产于广东阳春及周边地区，后引种至广西、云南等地，以阳春所产为佳。

市场调研发现不同产地阳春砂价格差异较大，质量良莠不齐，广东阳春道地产区砂仁1600～4000元/kg，而广西、云南等地砂仁150～300元/kg，此外不同产地砂仁外观性状相似，不易区别，性状相似及价格差异导致不同产地砂仁之间互相冒充、以次充好等，混乱现象严重制约了砂仁的品质评价、中成药生产及临床应用。

阳春砂挥发油含量，是评判阳春砂质量的指标之一。阳春砂挥发油含量的测定，依据2020年版《中国药典》四部中的挥发油测定法(通则2204，甲法，下文简称“甲法”)进行，结果不得低于3.0％(mL/g)。

但植物挥发油组成成分复杂且不同植物挥发油含量差异大，而该法针对的是一大类药材，相关参数规定较为宽泛，诸多实验参数不够明确，致使在实际生产测定中，测定结果偏差大、可重复性差，给实际生产和科研工作带来了很多的困难和不便。目前还没有阳春砂挥发油测定专用方法；而且，虽然药典规定了阳春砂的水分含量不得超过15.0％，但未见研究者考虑阳春砂药材水分含量差异对挥发油含量测定的影响。

鉴于此，本发明确定了阳春砂挥发油含量测定的最佳条件，提高了阳春砂挥发油含量测定方法的稳定性，可为完善《中国药典》中阳春砂挥发油含量的测定方法提供参考，为生产、研究工作中相关测定提供可靠的方法。

发明内容

本发明的目的是一种测定阳春砂挥发油含量的方法，解决目前阳春砂挥发油含量测定误差大、可重复性差的难题，来一种测定阳春砂挥发油含量的方法。

本发明的技术方案是：

本发明提供的一种测定阳春砂挥发油含量的方法，所述方法包括以下步骤：

1)通过正交设计试验探讨阳春砂挥发油提取五个因素对挥发油含量的影响，找到对阳春砂挥发油含量测定具有显著性影响的因素；

2)通过探讨种子团粉碎程度对挥发油含量的影响，得到阳春砂挥发油含量测定的最佳提取方法；

3)本着接近药典及方便开展实验的原则，建立阳春砂挥发油含量测定的方法；

4)将不同产地阳春砂按步骤3)测定的方法测定不同产地阳春砂挥发油，并计算比较其含量的差异；

5)测定不同产地阳春砂的含水量，再与步骤3)测定的方法测定结果结合，计算阳春砂实际挥发油含量(除去水分)，并比较其含量的差异；

6)将不同产地阳春砂挥发油含量与实际挥发油含量(除水分外)的差异进行比较。

在本发明的技术方案中，粉碎程度(P＜0.05)是显著性影响阳春砂挥发油含量的因素。

在本发明的技术方案中，粉碎一定时间(5～40s)，混合提取5h的阳春砂挥发油提取效果最好。

在本发明的技术方案中，阳春砂挥发油含量测定的方法为：加水量为500mL；粉碎方式为粉碎一定时间(5～40s)，不过筛，混合；冷凝水温度为28℃(或室温)；微沸时间为5h；供试品重量为15g。

在本发明的技术方案中，不同产地阳春砂挥发油含量：西双版纳＞春湾、怀集、文山二＞广宁赤坑、文山一＞广宁禾仓、那软、蟠龙、合水、韶关。

在本发明的技术方案中，不同产地阳春砂实际挥发油含量(除去水分)：西双版纳＞春湾、怀集、文山二＞广宁赤坑、文山一＞广宁禾仓、合水、蟠龙、那软。

在本发明的技术方案中，比较不同产地阳春砂挥发油含量与实际挥发油含量(除水分外)的差异，除文山一(P＞0.05)、广宁赤坑(P＞0.05)的挥发油含量无显著性上升外，其余产地的阳春砂挥发油含量均显著性地提高。但在以上产地中，最终的产地挥发油含量排序结果均一致。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明寻找出显著性影响阳春砂挥发油含量的变量，大大解决实际生产测定和科研工作中阳春砂挥发油含量测定结果不稳定、重复性差的难题，提高了实际生产和科研过程中测定的稳定性和可重复性。同时，为《中国药典》完善阳春砂挥发油含量的测定方法提供了依据，为其他药材挥发油含量测定方法标准走向科学化、专一化提供参考。

附图说明

图1为阳春砂果实照片；

图2为不同粉碎时间对各筛分组分挥发油含量的影响，从左到右依次为“不过二号筛”、“过二号筛不过三号筛”、“过三号筛”；

图3为粉碎过筛后粉末图；(从左到右依次为“不过二号筛”、“过二号筛不过三号筛”、“过三号筛”)。

具体实施方式

以下通过具体较佳实施例结合效果试验例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不仅限于以下的实施例。

本发明公开了一种测定阳春砂挥发油含量的方法，通过正交设计试验探讨阳春砂挥发油提取各因素对挥发油含量的影响，并对具有显著性影响的因素再进一步研究，以建立阳春砂挥发油含量测定的最佳条件。再以此法，测定并比较不同产地阳春砂的挥发油含量和以及药材水分含量对挥发油含量的影响。本发明确定了阳春砂挥发油含量测定的最佳条件，提高了阳春砂挥发油含量测定方法的稳定性，可为完善《中国药典》中阳春砂挥发油含量的测定方法提供参考，为生产、研究工作中相关测定提供可靠的方法。

一种测定阳春砂挥发油含量的方法，包括：

实施例1

收集到11个不同产地的材料，分别来自云南文山、西双版纳，广东阳春、韶关、怀集、肇庆等地，具体来源详见表1，图片见图2。以文山一的阳春砂为材料，进行正交试验和对显著性影响的变量开展的进一步考察实验。所有实验材料均密封保存于储物箱中，置于阴凉干燥处。同时，在储物箱内部放置吸水硅胶以避免药材吸水发霉。

表1阳春砂果实收集信息表

实施例2

挥发油测定法：

依据甲法的规定，对本次挥发油含量正交试验开展过程中的相关操作规定如下：

1)果实保存：取云南文山(文山一)的阳春砂果实，保存于密闭干燥的储物箱中(内置少量吸水硅胶)，储物箱存放于阴凉干燥处，避免阳光直射；

2)剥壳称重：因文山一果实重量差异大，因此，在实验前，对阳春砂果实进行剥壳，对种子团进行称重，取单粒重量为0.8～1.3g的种子团；

3)粉碎：将种子团放入打粉器中，按照“10+5s”(先粉碎10s，过筛后，再粉碎5s，再过筛)的粉碎方式进行粉碎，以尽可能减少仪器发烫的程度；

4)过筛：按正交试验要求，进行过筛；

5)提取：将过筛后的粉末进行称重，称取一定量的粉末，倒入1000mL圆底烧瓶中，加入10粒玻璃珠，加入一定量的蒸馏水，放入电热套中；装上挥发油提取器及冷凝管，打开冷凝水循环后，在一定温度的冷凝水下，微沸提取一定时间；

6)静置：提取结束，停止加热，保持冷凝水处于循环状态；

7)收集：放置1h后，读数并收集挥发油；

8)计算：计算挥发油含量(％，mL/g)。

实施例3

正交试验设计法：

正交试验可通过挑选具有代表性的试验点进行试验和结果分析，来了解全面试验的情况，可极大地减少试验次数，实现高效试验、经济试验，实现对工艺的优化。

为此，本研究从影响阳春砂挥发油含量的众多因素中，筛选出了影响较大的5个因素，每个因素设置3个水平，具体见表2。

之后，利用SPSS软件(version 21)进行正交试验设计，设计结果见表3。删去重复的组别后，本次正交试验共有15组。

表2阳春砂挥发油提取试验变量因子及水平

表3挥发油提取各因素正交试验的正交设计表L16(35)

实施例4

阳春砂水分测定方法：

在2020年《中国药典》四部水分测定法(通则0832，第四法)的基础上，根据预实验的结果，对水分测定采取如下操作：

1)取剥壳后的阳春砂种子团，置于粉碎机中粉碎后过二号筛；

2)称取25.00g粉末，置于500mL的干燥蒸馏烧瓶中；

3)向蒸馏烧瓶中加入几粒干燥的玻璃珠，加入200mL的甲苯溶液，将蒸馏烧瓶置于放在通风橱的电热套上；

4)连接水分测定器、冷凝管、冷凝水管，打开冷凝水循环；

5)用小型漏斗或长胶头滴管，沿着冷凝管顶端注入甲苯，使水分测定器充满甲苯；

6)打开电热套电源，至水分测定器中出现浑浊，开始计时，并继续保持微沸状态；

7)提取5h，至测定器中不再有新的水珠出现，用甲苯溶液将冷凝管附着的水珠冲下；

8)至水分测定器中的溶液冷却至室温时，读取水分示数。

结果与分析

1挥发油提取各因素正交试验

按表3开展正交试验后，将试验数据(表4)进行统计学分析，得到正交试验显著性分析结果(表5)和粉碎程度成对比较结果(表6)。

表4挥发油提取各因素正交试验结果

正交试验显著性分析结果(表5)表明：加水量A(P＞0.05)、冷凝水温度C(P＞0.05)、微沸时间D(P＞0.05)和供试品重量E(P＞0.05)不是显著性影响阳春砂挥发油含量的因素。粉碎程度B(P＜0.05)是显著性影响阳春砂挥发油含量的因素。

表5正交试验显著性分析结果

注：加水量A的显著性分析结果是A1(组3、4、6、8、9、10、15、16)与A2(组1、5、12、13)、A3(2、7、11、14)之间的对比结果；粉碎程度B的显著性分析结果是B1(组3、4、6、8、11、12、13、14)与B2(组1、7、9、16)、B3(组2、5、10、15)之间的对比结果；冷凝水温度C的显著性分析结果是C1(3、5、7、8、11、12、15、16)与C2(组1、4、10、14)、C3(组2、6、9、13)之间的对比结果；微沸时间D的显著性分析结果是D1(组3、5、7、8、9、10、13、14)与D2(组1、6、11、15)、D3(组2、4、12、16)之间的对比结果；供试品重量E的显著性分析结果是E1(组1～8)与E2(组9～12)、E3(组13～16)之间的对比结果。

粉碎程度成对比较结果(表6)表明，挥发油含量：过三号筛＞过二号筛＞过二号筛不过三号筛。即粉末越细，挥发油含量越高。

表6粉碎程度成对比较结果

注：相同字母表示在0.05水平上差异不显著，不具或具不同字母表示在0.05水平上差异显著，下文同。粉碎程度B的显著性分析结果是B1(组3、4、6、8、11、12、13、14)与B2(组1、7、9、16)、B3(组2、5、10、15)之间的对比结果。

综上，过二号筛、过三号筛、过二号筛但不过三号筛这三种不同的粉碎程度，它们的挥发油含量之间存在显著性差异(测定结果差异大)。因此，《中国药典》第四部通则2204写的“粉碎至能过二至三号筛，并混合均匀”这一句对于阳春砂挥发油含量的测定存在不妥当。本着接近药典、方便开展实验的原则，可以将阳春砂挥发油提取方法的加水量定为500mL、冷凝水温度定为28℃(或室温)、微沸时间定为5h、供试品重量定为15g。正交试验结果表明，粉碎程度对阳春砂挥发油含量具有极显著性的影响，但在设计正交实验表格时，仅选择了“过二号筛”、“过二号筛不过三号筛”、“过三号筛”三个水平，最佳的阳春砂挥发油提取方法是否在其中尚不明确，为此，有必要开展对阳春砂种子团粉碎程度的进一步探索研究。

2种子团粉碎程度对挥发油含量的影响

2.1不同粉碎程度对阳春砂挥发油不同筛分组分挥发油含量的影响

已经明确，粉末越细，挥发油含量越高。而影响粉末颗粒细度的因素主要包括粉碎仪器的功率和粉碎时间。在固定粉碎仪器的前提下，通过设置不同的粉碎时间，考察该结论是否依然有效。在此思考之下，设置了粉碎5s(粉碎后能过二号筛的比率K1平均为51.4％)、粉碎10s(K2平均为72.5％)、粉碎20s(K3平均为85.2％)、粉碎40s(K4平均为97.2％)四组。

由图2可知：粉碎时间不影响挥发油含量：“过三号筛＞过二号筛＞过二号筛不过三号筛”的规律。即粉末越细，挥发油含量越高的结论依然成立。

由表7可知，过二号筛不过三号筛、过二号筛、过三号筛的挥发油含量均随着粉碎时间的延长呈现下降趋势。随着粉碎时间的延长，能够进入三号筛的粉末占比增加，但过三号筛的挥发油含量反而下降。推测原因可能为：较难以粉碎但挥发油含量较低的种皮(图3中米黄色部分)，随着粉碎时间的延长，被粉碎进入三号筛所致。但因种子和种胚分离难度大，难以完全分离，而未成功分开测定。

表8不同粉碎时间对阳春砂挥发油的影响(`X±S)

注：本表格中标明的字母为纵向比较(5、10、20、40s)的结果。

2.2完整种子团不粉碎提取对挥发油含量的影响

根据2.1的结果，不同筛分的挥发油含量差异显著，且多个组分的挥发油含量随着粉碎时间的延长，呈现下降趋势。在实际生产和科研过程中，粉碎仪器本身便存在功率上的差异，而粉碎时间又会对挥发油含量产生显著性影响。因此，选取某一组分进行挥发油含量测定是不合理的。那么能否不进行粉碎，即使用完整种子团进行挥发油含量的测定？若使用完整种子团，是否需要延长蒸馏时间？在此思考之下，设置了“完整种子团，提取5h”与“完整种子团，提取10h”两组，并将其与2.1各组的总挥发油含量进行比较，详见表8。

结果表明：

1)完整种子团，提取5h(①组)与粉碎5、10、20、40s过筛后，分开提取5h的挥发油总和(③、④、⑤、⑥组)含量无显著性差异；

2)完整种子团，提取10h(②组)的挥发油含量显著高于完整种子团，提取5h(1组)的挥发油含量。可知，对于完整种子团，延长蒸馏时间可显著性提高其挥发油含量。

3)完整种子团，提取10h(②组)的挥发油含量显著高于粉碎5s、10s、20s、40s过筛后，分开提取5h的挥发油总和(③、④、⑤、⑥组)。

表8不同粉碎程序对挥发油含量的影响(`X±S)

综上，相较于采取粉碎后过筛分开提取挥发油的方式，直接采用完整种子团直接提取的方式，效果更好。

2.3粉碎一定时间混合提取对挥发油含量的影响

根据2.2的结果，延长提取时间，可提高完整种子团的挥发油含量，但对于实际生产和科研工作中，提取10h未免过长。若采取适当粉碎，或者手工破碎(锤开或捣碎)等方式，提高种子团的粉碎程度，再进行混合提取，是否可以达到甚至是超越“完整种子团，提取10h”的挥发油含量。并且，采取混合提取，也可减少过筛等因素的影响，减少实验的主观性。

在此思考之下，设置了⑦粉碎5s，混合提取5h；⑧粉碎10s，混合提取5h；⑨粉碎20s，混合提取5h；⑩粉碎40s，混合提取5h；

手工锤开(包上锡纸、保鲜膜的铁锤，锤开种子)，混合提取5h，采用Shapiro-Wilk对各组数据进行正态性检验，各组数据均符合正态分布，详见表9。

结果表明：

1)粉碎5、10、20、40s，混合提取5h(⑦-⑩组)的挥发油含量均高于完整种子团，提取5h(①组)、粉碎5、10、20、40s，分开提取5h的挥发油总和(③-⑥组)和手工锤开，混合提取5h(

组)，但与完整种子团，提取10h(②组)含量相近。即粉碎5、10、20、40s，混合提取5h的挥发油含量；完整种子团，提取10h的挥发油含量＞手工锤开；混合提取5h；完整种子团，提取5h；粉碎5、10、20、40s，分开提取5h的挥发油总和。

2)对于粉碎5、10、20、40s，混合提取5h(⑦-⑩组)，两两之间的挥发油含量不存在显著性差异。表明，粉碎时间不影响采用混合提取5h时，挥发油含量的测定结果。

3)手工锤开，混合提取5h(

组)与粉碎5、10、20、40s，混合提取5h(⑦-⑩组)的比对结果表明，手工锤开会有较大程度的损耗。并且在实际生产中，手工锤开会有较大的主观性，如用力的强弱、粉碎程度的把握等，因此不适用。

表9不同粉碎程序对挥发油含量的影响(`X±S)

综上，采取粉碎一定时间(5～40s)，混合提取5h的粉碎程序效果最佳。

2.4粉碎一定时间混合提取对实际粉末挥发油含量的影响

粉碎或者手工锤开、捣碎，在一定程度上加快了挥发油提取的速度，提高了测定效率。但无论是何种粉碎方式，均会造成粉末的损失。将这部分损失的粉末排除在外，以粉碎后的实际粉末重量进行挥发油含量的计算，定为实际粉末挥发油含量。

计算方式：实际粉末挥发油含量％(mL/g)＝挥发油体积(mL)/粉碎后粉末实际重量(g)×100％。

采用Shapiro-Wilk对计算后的各组数据进行正态性检验，各组数据均符合正态分布，统计学分析结果详见表10。

结果表明：

1)为了考虑粉碎造成的粉末损失，使用实际粉末重量(种子团粉碎后再次称重的粉末重量)代入公式3中，计算实际粉末挥发油含量。除组①和组②外，其余组均需进行粉碎的这个操作。因此，除组①与组②外，其余各组的挥发油含量均有所上升。

2)阳春砂实际粉末挥发油含量：粉碎5、10、20、40s，提取5h的挥发油含量(⑦-⑩组)；完整种子团，提取10h(②组)＞手工锤开，混合提取提取5h的挥发油含量；粉碎5、10、20、40s(③-⑥、

组)的挥发油含量＞完整种子团，提取5h的挥发油含量(①组)。

表10不同粉碎程序对实际粉末挥发油含量的影响(`X±S)

综上所述，可以得出不同粉碎程序下，挥发油含量的比较结果和实际粉末挥发油含量的比较结果：

1)挥发油含量比较结果：粉碎5、10、20、40s，混合提取5h的挥发油含量；完整种子团，提取10h的挥发油含量＞手工锤开；混合提取5h的挥发油含量；完整种子团，提取5h的挥发油含量；粉碎5、10、20、40s，分开提取5h的挥发油总和。

2)实际粉末挥发油含量比较结果：粉碎5、10、20、40s，提取5h的挥发油含量；完整种子团，提取10h＞手工锤开，混合提取5h的挥发油含量；粉碎5、10、20、40s的挥发油含量＞完整种子团，提取5h的挥发油含量。无论是采用种子团的重量，还是粉碎后的实际粉末重量，计算得到的挥发油含量，均可得出：粉碎一定时间(5～40s)，混合提取5h的粉碎程序效果最佳。

3、阳春砂挥发油测定方法的确立

正交试验结果表明：

加水量A(P＞0.05)、冷凝水温度C(P＞0.05)、微沸时间D(P＞0.05)和供试品重量E(P＞0.05)不是显著性影响阳春砂挥发油含量的因素。而粉碎程度B(P＜0.05)是显著性影响阳春砂挥发油含量的因素。对粉碎程度B的进一步考察表明，粉碎一定时间(5～40s)，混合提取5h的效果最好。

本着接近药典及方便开展实验的原则，确定加水量为500mL；粉碎方式为粉碎一定时间(5～40s)，不过筛，混合；冷凝水温度为28℃(或室温)；微沸时间为5h；供试品重量为15g。

因此，建议阳春砂挥发油含量的详细测定方法建立如下：

1)果实保存：取阳春砂果实，保存于密闭干燥的储物箱中(内置少量吸水硅胶)，储物箱存放于阴凉干燥处，避免阳光直射；

2)剥壳称重：实验前，对阳春砂果实进行剥壳，称取约15g的种子团(精确到0.01g)，并记录天平示数；

3)粉碎：放入打粉器中粉碎一定时间(可根据粉碎仪器情况，选择5～40s，尽量避免粉碎仪器发烫)；

4)再次称重：将粉碎后的粉末尽可能地倾倒出，并将粉末进行称量，记录天平示数，用于计算粉末回收率，要求回收率尽可能高；

5)提取：将粉末倒入1000mL圆底烧瓶中，加入几粒玻璃珠，加入500mL的蒸馏水，放入电热套中；装上挥发油提取器及冷凝管，打开冷凝水循环后，微沸提取5h；

6)静置：提取结束，停止加热，保持冷凝水处于循环状态；

7)收集：放置1h后，读数并收集挥发油。

8)计算：计算挥发油含量(％，mL/g)。

4、不同产地阳春砂挥发油含量的差异比较

采用阳春砂挥发油含量测定的新方法，测定云南文山(WS1、WS2)、西双版纳(XSBN)，广东阳春(PL、HS、CW、NR)、怀集(HJ)、韶关(SG)、广宁(GNHC、GNCK)等地的阳春砂挥发油含量，采用Shapiro-Wilk对各产地的测量数据进行正态性检验，各组数据均符合正态分布。详细结果见表11。

结果表明：

1)在本次测定中，挥发油含量：西双版纳＞春湾、怀集、文山二＞广宁赤坑、文山一＞广宁禾仓、那软、蟠龙、合水、韶关。其中，西双版纳地区的阳春砂挥发油含量最高，达到5％以上；春湾、怀集、文山地区(文山一、文山二)、广宁赤坑的挥发油含量差异不大；广宁赤坑、广宁禾仓、那软、蟠龙、合水、韶关的挥发油含量差异不大。

2)对于云南地区的阳春砂，其挥发油含量：西双版纳＞文山一、文山二。

3)对于广东地区的阳春砂，其挥发油含量：春湾、怀集＞广宁赤坑、广宁禾仓、那软、蟠龙、合水、韶关。

表11不同产地阳春砂的挥发油含量测定结果(`X±S)

5、不同产地阳春砂实际挥发油含量(除水分外)的差异比较

测定云南文山(WS1、WS2)、西双版纳(XSBN)，广东阳春(PL、HS、CW、NR)、怀集(HJ)、广宁(GNHC、GNCK)等地阳春砂的含水量，再与3.4的测定结果结合，计算阳春砂实际挥发油含量(除去水分)，采用Shapiro-Wilk对各组数据进行正态性检验，各组数据均符合正态分布。详细结果见表12。

结果表明：从含水量测定结果上看：广宁赤坑、文山一、合水＞广宁禾仓、蟠龙＞春湾、文山二、西双版纳、怀集＞那软。水分含量最高的为广宁赤坑，其水分含量为11.60±0.40(％，mL/g)；水分含量最低的为那软，其水分含量为8.00±0.00(％，mL/g)。

从实际挥发油含量(除去水分)看：

1)西双版纳＞春湾、怀集、文山二＞广宁赤坑、文山一＞广宁禾仓、合水、蟠龙、那软。在本次测定中，西双版纳地区的阳春砂，其挥发油含量最高，达到6％以上。

2)对于云南地区的阳春砂，其实际挥发油含量(除去水分)：西双版纳＞文山一、文山二。对于广东地区的阳春砂，其挥发油含量：春湾、怀集＞广宁赤坑、广宁禾仓、合水、蟠龙、那软。

表12不同产地阳春砂挥发油含量(`X±S)

6不同产地阳春砂挥发油含量与实际挥发油含量(除水分外)的差异比较

对各地区的阳春砂挥发油含量与实际挥发油含量(除去水分)的测定结果使用SPSS中的独立样本T检验以检查二者之间是否存在显著性差异，结果见表13。

结果表明：

1)除文山一(P＞0.05)、广宁赤坑(P＞0.05)的挥发油含量无显著性上升外，其余产地的阳春砂挥发油含量均显著性地提高。

2)以平均值计，挥发油含量上升最多的为西双版纳地区的，挥发油含量上升了0.60％mL/g；上升最少的为那软地区的阳春砂，仅上升了0.29％mL/g。

表13不同产地阳春砂挥发油含量(`X±S)

本发明寻找出显著性影响阳春砂挥发油含量的变量，大大解决实际生产测定和科研工作中阳春砂挥发油含量测定结果不稳定、重复性差的难题，提高了实际生产和科研过程中测定的稳定性和可重复性。同时，为《中国药典》完善阳春砂挥发油含量的测定方法提供了依据，为其他药材挥发油含量测定方法标准走向科学化、专一化提供参考。

本发明并不局限于上述实施方式，如果对本发明的各种改动或变型不脱离本发明的精神和范围，倘若这些改动和变型属于本发明的权利要求和等同技术范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变动。

Claims (7)

1.一种测定阳春砂挥发油含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)通过正交设计试验探讨阳春砂挥发油提取五个因素(加水量、粉碎程度、冷凝水温度、微沸时间、供试品)对挥发油含量的影响，找到对阳春砂挥发油含量测定具有显著性影响的因素；

2)通过探讨种子团粉碎程度对挥发油含量的影响，得到阳春砂挥发油含量测定的最佳提取方法；

3)本着接近药典及方便开展实验的原则，建立阳春砂挥发油含量测定的方法；

4)将不同产地阳春砂按步骤3)测定的方法测定不同产地阳春砂挥发油，并计算比较其含量的差异；

5)测定不同产地阳春砂的含水量，再与步骤3)测定的方法测定结果结合，计算阳春砂实际挥发油含量(除去水分)，并比较其含量的差异；

6)将不同产地阳春砂挥发油含量与实际挥发油含量(除水分外)的差异进行比较。

2.如权利要求1所述的测定阳春砂挥发油含量的方法，其特征在于：粉碎程度(P＜0.05)是显著性影响阳春砂挥发油含量的因素。

3.如权利要求1所述的测定阳春砂挥发油含量的方法，其特征在于：粉碎一定时间(5～40s)，混合提取5h的阳春砂挥发油提取效果最好。

4.如权利要求1所述的测定阳春砂挥发油含量的方法，其特征在于：阳春砂挥发油含量测定的方法为：加水量为500mL；粉碎方式为粉碎一定时间(5～40s)，不过筛，混合；冷凝水温度为28℃(或室温)；微沸时间为5h；供试品重量为15g。

5.如权利要求1所述的测定阳春砂挥发油含量的方法，其特征在于：不同产地阳春砂挥发油含量：西双版纳＞春湾、怀集、文山二＞广宁赤坑、文山一＞广宁禾仓、那软、蟠龙、合水、韶关。

6.如权利要求1所述的测定阳春砂挥发油含量的方法，其特征在于：不同产地阳春砂实际挥发油含量(除去水分)：西双版纳＞春湾、怀集、文山二＞广宁赤坑、文山一＞广宁禾仓、合水、蟠龙、那软。

7.如权利要求1所述的测定阳春砂挥发油含量的方法，其特征在于：比较不同产地阳春砂挥发油含量与实际挥发油含量(除水分外)的差异，除文山一(P＞0.05)、广宁赤坑(P＞0.05)的挥发油含量无显著性上升外，其余产地的阳春砂挥发油含量均显著性地提高。但在以上产地中，最终的产地挥发油含量排序结果均一致。

Images