CN115814148A - 一种快速自凝胶化止血粉及其制备方法和用途 - Google Patents
一种快速自凝胶化止血粉及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115814148A CN115814148A CN202211676034.3A CN202211676034A CN115814148A CN 115814148 A CN115814148 A CN 115814148A CN 202211676034 A CN202211676034 A CN 202211676034A CN 115814148 A CN115814148 A CN 115814148A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- powder
- hemostatic
- carboxymethyl chitosan
- oxidized
- sodium alginate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000843 powder Substances 0.000 title claims abstract description 207
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 title claims abstract description 116
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 46
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims abstract description 55
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 claims abstract description 38
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 claims abstract description 30
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 30
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 claims abstract description 30
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 18
- 125000003396 thiol group Chemical class [H]S* 0.000 claims abstract description 17
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical group CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 claims description 58
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 claims description 58
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 claims description 58
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 29
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 28
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 23
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 18
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 14
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 11
- OGMADIBCHLQMIP-UHFFFAOYSA-N 2-aminoethanethiol;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCCS OGMADIBCHLQMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229940097265 cysteamine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 10
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 claims description 7
- GXBDUKNALWQPMX-UHFFFAOYSA-N hydron;pyrrole-2,5-dione;chloride Chemical compound Cl.O=C1NC(=O)C=C1 GXBDUKNALWQPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 5
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 4
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 claims description 3
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 claims description 2
- 239000003973 paint Substances 0.000 claims 3
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 claims 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 45
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 abstract description 44
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 abstract description 33
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 29
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 28
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 abstract description 21
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 abstract description 15
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 abstract description 15
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 abstract description 15
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 11
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 10
- 239000007921 spray Substances 0.000 abstract description 10
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 abstract description 9
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 abstract description 8
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 abstract description 7
- 238000007789 sealing Methods 0.000 abstract description 7
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 abstract description 6
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 abstract description 6
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract description 6
- 230000001788 irregular Effects 0.000 abstract description 5
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002792 vascular Effects 0.000 abstract description 3
- 239000012567 medical material Substances 0.000 abstract description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 35
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 description 26
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 19
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 17
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 16
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 description 13
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000000498 ball milling Methods 0.000 description 12
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 108010080379 Fibrin Tissue Adhesive Proteins 0.000 description 9
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 9
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 9
- 239000011812 mixed powder Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 8
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 6
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 6
- 241000872931 Myoporum sandwicense Species 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 6
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 6
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 6
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 6
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 5
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 5
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 5
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 4
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 4
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 4
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 4
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000002947 procoagulating effect Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 3
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 3
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- -1 mercaptocarboxymethyl Chemical group 0.000 description 3
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 150000003385 sodium Chemical class 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 238000001157 Fourier transform infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000006845 Michael addition reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000005161 hepatic lobe Anatomy 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 2
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- APBNXTZNKGUYJV-UHFFFAOYSA-N pyrrole-2,5-dione;sodium Chemical compound [Na].O=C1NC(=O)C=C1 APBNXTZNKGUYJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 231100000416 LDH assay Toxicity 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical group 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical group 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-DYCDLGHISA-N deuterium hydrogen oxide Chemical class [2H]O XLYOFNOQVPJJNP-DYCDLGHISA-N 0.000 description 1
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000002843 lactate dehydrogenase assay Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000000352 supercritical drying Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000002417 xiphoid bone Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
本发明提供了一种快速自凝胶化止血粉及其制备方法和用途，属于医用材料领域。本发明止血粉由如下重量配比的组分混合而成：不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐粉末1～10份，硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖粉末1～10份。本发明止血粉与血液接触后可以快速自凝胶化，对创面起到封闭作用，防止创面出血，同时该止血粉具有促进血细胞激活聚集和纤维蛋白原吸附活化的协同促凝能力，因此该止血粉止血效果优异。此外，本发明止血粉采用粉末形式，适用于不同创面的止血，如不规则创面、深度创面以及较大血管破坏性创面。本发明止血粉可以制备成喷雾形式，携带和使用更加方便。本发明止血粉具有便携，使用范围广，止血速度快等特点，具有广阔的临床应用前景。
Description
技术领域
本发明属于医用材料领域，具体涉及一种快速自凝胶化止血粉及其制备方法和用途。
背景技术
急性创伤后的不可控出血是导致伤亡的主要原因。目前，临床上常用的止血手段难以在战场、事故和院前急救等情景使用。因此，各种形式的止血材料被研发，包括粉末、海棉、纱布和水凝胶。其中，粉末类止血材料使用便捷、易储存、在不规则伤口中具有良好的适应性，此外，粉末基止血材料比表面积大和吸水率高能充分浓缩血液中凝血成分，在临床和战场中有广泛的应用。然而，传统的止血粉抗血压能力弱，在伤口大出血时使用易被血液冲刷分散，导致止血失败。
因此，如何提升粉末基止血材料的抗血压能力，扩展其在大出血伤口中的应用是当期亟需解决的问题。其中，设计一种可喷雾的粉基止血材料，在喷洒到创面后可通过与血液后接触后快速自凝胶化，并起到快速封堵创面和浓缩血液中的凝血因子目的的自凝胶化止血材料将具有重要的使用价值和临床应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速自凝胶化止血粉及其制备方法和用途。
本发明提供了一种止血粉，它由如下重量配比的组分混合而成：
不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐粉末1～10份，硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖粉末1～10份。
进一步地，前述的止血粉由如下重量配比的组分混合而成：
不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐粉末3～7份，硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖粉末3～7份。
进一步地，前述的止血粉由如下重量配比的组分混合而成：
不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐粉末7份，硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖粉末3份。
进一步地，所述不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐中海藻酸盐氧化度为14％～50％；和/或，所述不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐中不饱和碳碳双键接枝率为24％～37％；
和/或，所述硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖中硫醇接枝率为24％～52％。
进一步地，所述氧化海藻酸盐为马来酰亚胺接枝改性的氧化海藻酸盐；和/或，所述羧甲基壳聚糖为半胱胺盐酸盐接枝改性的羧甲基壳聚糖；
优选地，所述海藻酸盐为海藻酸钠；和/或，所述羧甲基壳聚糖为取代度小于1的O-羧甲基壳聚糖。
进一步地，所述不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐为马来酰亚胺接枝改性的氧化海藻酸钠，所述马来酰亚胺接枝改性的氧化海藻酸钠的制备方法包括如下步骤：
(1)将氧化海藻酸钠溶于溶剂中，溶解得到氧化海藻酸钠溶液；
(2)在氧化海藻酸钠溶液中加入EDC和NHS，再加入马来酰亚胺盐酸盐，反应；
(3)反应后，透析，干燥，即得马来酰亚胺接枝改性的氧化海藻酸钠。
进一步地，
步骤(1)中，所述溶剂为MES溶液、PBS溶液或去离子水；和/或，步骤(1)中，所述氧化海藻酸钠溶液的质量百分含量为1％～3％；
和/或，步骤(2)中，所述氧化海藻酸钠物质的量与EDC和NHS总物质的量之比为1：1.5～3；和/或，步骤(2)中，所述EDC和NHS的摩尔比或质量比是1：1～1.5；和/或，步骤(2)中，所述氧化海藻酸钠物质的量与马来酰亚胺盐酸盐物质的量之比为1:1～2；和/或，步骤(2)中，所述反应为室温反应12～24h；
和/或，步骤(3)中，所述透析时先置于0.01～0.05M HCl去离子水溶液中透析3～5天，再置于去离子水中透析12～24h；
优选地，
步骤(2)中，所述反应时，每6h调一次反应液的pH，保持pH值在5.0～5.5；
和/或，步骤(3)中，所述透析袋截留分子量为3.5～8kDa；和/或，步骤(3)中，所述透析时每6～12h换一次水。
进一步地，所述硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖合成方法包括如下步骤：
1)将羧甲基壳聚糖溶于溶剂中，溶解得到羧甲基壳聚糖溶液；
2)在羧甲基壳聚糖溶液中加入EDC，再加入半胱胺盐酸盐，反应；
3)反应后，透析，冷冻干燥，醇析，即得巯基羧甲基壳聚糖；
优选地，
步骤1)中，所述溶剂为去离子水或PBS溶液；和/或，步骤1)中，所述羧甲基壳聚糖溶液的质量百分含量为2～5％；
和/或，步骤2)中，所述羧甲基壳聚糖物质的量与EDC物质的量之比为1:1.5～3；和/或，步骤2)中，所述羧甲基壳聚糖物质的量与半胱胺盐酸盐物质的量之比为1:1～2；和/或，步骤2)中，所述反应为室温反应12～24h；
和/或，步骤3)中，所述透析时置于0.005～0.05M的硼砂溶液中透析3～5天；和/或，步骤3)中，所述冷冻干燥前加入DTT搅拌反应；和/或，步骤3)中，所述醇析使用无水乙醇；
更优选地，
步骤3)中，所述透析袋截留分子量为3.5～8kDa；和/或，步骤(3)中，所述透析时每12h换一次水。
本发明还提供了前述的止血粉的制备方法，它包括如下步骤：
将不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐粉末和硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖粉末按照重量配比混合，即得。
本发明还提供了前述的止血粉在制备止血材料中的用途。
本发明的术语解释：
本发明所述“接枝改性”是指：聚合物主链上通过化学键结合连接特定的支链结构或功能性侧基的反应。本发明“接枝率”是指：接枝率(％)＝(结合连接到聚合物主链上的支链结构或功能性侧基的物质的量/聚合物主链的物质的量)*100％。
本发明所述“氧化海藻酸盐”是指：对海藻盐进行氧化改性，使得海藻盐结构中的部分糖醛酸单元C2和C3位置的羟基转变为醛基，示意结构式为：
其中羧酸根与带1个正电荷的阳离子(例如Na+、K+)结合。
本发明所述海藻酸盐优选为海藻酸钠，氧化海藻酸盐优选为氧化海藻酸钠，示意结构式为：
本发明所述“含有不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐”是指：海藻酸盐分子糖醛酸单元经过NaIO4氧化生成醛基，并接枝了含有不饱和碳碳双键基团的结构，进而形成的聚合物。
本发明所述“不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐”是指氧化海藻盐分子链上接枝修饰上“含有不饱和碳碳双键”的马来酰亚胺基形成的改性氧化海藻盐(改性氧化海藻酸盐钠)的聚合物；马来酰亚胺基团的结构式为：
本发明所述“含硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖”是指：羧甲基壳聚糖的分子链上接枝了含有巯基的半胱胺盐酸盐，进而形成的聚合物。巯基基团结构式为：
本发明所述“室温”是指：25±5℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明止血粉接触液体(如血液)后能基于迈克尔加成及席夫碱等反应，快速自凝胶化(≤5s)，封闭血管和创面，防止进一步出血。
(2)本发明止血粉具有促进血细胞激活聚集和纤维蛋白原吸附活化的协同促凝能力，止血效果优异。
(3)本发明止血粉采用粉末使用形式，使其能更好的适用于不规则创面以及深度创面止血。
(4)本发明止血粉可以制备成喷雾使用形式，方便携带与使用。
综上，本发明提供了一种快速自凝胶化的止血粉，该止血粉与血液接触后可以快速自凝胶化，对创面起到封闭作用，防止创面出血，同时该止血粉具有促进血细胞激活聚集和纤维蛋白原吸附活化的协同促凝能力，因此该止血粉止血效果优异。此外，本发明止血粉采用粉末形式，适用于不同创面的止血，如不规则创面、深度创面以及较大血管破坏性创面。本发明止血粉可以制备成喷雾形式，携带和使用更加方便。本发明止血粉具有便携，使用范围广，止血速度快等特点，具有广阔的临床应用前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为ADA-Mal和CMCS-SH两种物质的合成示意图。
图2为马来酰亚胺基氧化海藻酸钠(ADA-Mal)和巯基羧甲基壳聚糖(CMCS-SH)改性前后FTIR图。
图3为马来酰亚胺基氧化海藻酸钠(ADA-Mal)和巯基羧甲基壳聚糖(CMCS-SH)改性前后的1H NMR图(400MHz)。
图4为止血粉相关表征结果：a为止血粉的制备流程图；b为ADA-Mal(AM)粉末的粒径分布；c为CMCS-SH(CS)粉末的粒径分布；d为ADA-Mal粉末、CMCS-SH粉末及AM7-CS3止血粉的大体图；e为AM7-CS3止血粉促进血液凝固的能力。
图5为不同比例止血粉(AM7-CS3，AM5-CS5，AM3-CS7)的流变学性能评价。
图6为本发明止血粉(AM7-CS3)在PBS和抗凝全血中的凝胶化评价，以云南白药止血粉(CP)和未改性海藻酸钠-羧甲基壳聚糖混合粉末(SA-CMCS)做为对照。
图7为本发明止血粉体外促凝活性的评价结果：a为红细胞在纤维蛋白胶(FibrinGlue)、纱布(Gauze)和本发明止血粉(AM7-CS3)上粘附的扫描电镜图；b为血小板在纤维蛋白胶(Fibrin Glue)、纱布(Gauze)和本发明止血粉(AM7-CS3)自凝胶化后的胶上粘附的扫描电镜图；c为LDH检测结果；d为FIB检测结果(*p<0.05，****p<0.0001，ns：无显著性差异)。
图8为本发明止血粉在大鼠肝脏截断出血模型中的应用：a为不同处理方式的止血过程记录图；b为不同处理方式后的出血量；c为不同处理方式后的止血时间(**p<0.01，ns：无显著性差异)。
图9为本发明止血粉在比格犬肝脏穿孔出血模型中的应用效果：a为止血过程示意图；b为不同处理方式后的出血量；c为不同处理方式的止血过程记录图；d为止血后2周创面的HE染色结果(*p<0.05，**p<0.01，ns：无显著性差异)。
具体实施方式
除另有说明外，本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。本发明所用氧化海藻酸钠(ADA)为购买市售产品或按照本发明方法合成。
实施例1、本发明止血粉的制备
一、氧化海藻酸钠(ADA)的制备
1、称取10g海藻酸钠(SA)分散于50mL无水乙醇中，磁力搅拌器至分散均匀，制备得到质量百分含量为20％的海藻酸钠的乙醇分散体系；
2、称取2.5g高碘酸钠(NaIO4，SA和NaIO4的质量比为4:1)，避光条件环境下溶于50mL去离子水中，搅拌至完全溶解，制备得到质量百分含量为5％的NaIO4溶液；
3、避光环境下，将NaIO4溶液逐滴、缓慢滴加到磁力搅拌下的海藻酸钠乙醇分散溶液中；室温避光环境下，持续搅拌反应6h；
4、避光反应6h后，避光环境下往反应体系中逐滴加入10mL乙二醇，并继续搅拌反应30min，终止反应；
5、终止反应后，停止搅拌，室温静置、沉积10min，待沉淀析出；
6、小心倒出上层溶液，收集沉淀并装入截留分子量3.5kDa透析袋中，置于5L0.01M HCl去离子水溶液中透析3天，每12h换一次透析液；
7、将透析后的氧化海藻酸钠溶液收集后冷冻干燥，即得氧化海藻酸钠(ADA)。
二、马来酰亚胺基氧化海藻酸钠(ADA-Mal)的制备
1、称取2g ADA溶于200mL 2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)溶液中，搅拌至完全溶解，制备质量百分含量为1％的ADA溶液；
2、在ADA溶液中加入EDC/NHS，使得ADA与EDC/NHS物质的量之比为1:1.5(EDC和NHS的摩尔比为1:1)；往反应体系中加入马来酰亚胺盐酸盐(Mal-HCl)，使得ADA与Mal-HCl的物质的量之比为1:1，室温搅拌反应24h，保持pH值在5.0～5.5；
3、反应24h后，将反应液转移至截留分子量3.5kDa的透析袋中，置于5L 0.01M HCl去离子水溶液中透析5天，每12h换一次透析液；待透析第5天时，将透析袋转入5L去离子水中，继续透析12h。
4、取出透析后的马来酰亚胺基氧化海藻酸钠溶液，并进行冷冻干燥，即得马来酰亚胺基氧化海藻酸钠(ADA-Mal，简称AM)。本发明ADA-Mal为含醛基和不饱和碳碳双键结构的改性的海藻酸钠。
三、巯基羧甲基壳聚糖(CMCS-SH)的制备
1、称取4g CMCS(羧甲基壳聚糖)溶于200mL去离子水中，搅拌至完全溶解，得到质量百分含量为2％的CMCS溶液；
2、CMCS溶液中加入EDC，使得CMCS与EDC物质的量之比为1:1.5；往反应体系中加入半胱胺盐酸盐(CSA-HCl)，使得CMCS与CSA-HCl的物质量之比为1:1.5，室温搅拌反应24h；
3、反应24h后，将反应液转移至截留分子量为3.5kDa的透析袋中，并置于5L 0.01M的硼砂去离子水溶液中透析5天，每12h换透析液一次；
4、透析后的CMCS-SH溶液倒入烧杯中，并加入2g DTT室温继续搅拌反应1h后，取出并进行冷冻干燥；
5、将冷冻干燥后的CMCS-SH加入500mL无水乙醇中，密封置于低温摇床中(4℃)60rpm振荡1h后，用抽滤瓶滤去乙醇，重复此操作5次；
6、醇洗后的CMCS-SH用旋转蒸发仪除去残留乙醇，即得到巯基羧甲基壳聚糖(CMCS-SH，简称CS)。本发明CMCS-SH为含有硫醇基的改性羧甲基壳聚糖。
ADA-Mal和CMCS-SH两种物质的合成示意图如图1所示。
制备完成后通过傅立叶变换红外吸收光谱仪(FTIR)，核磁氢谱仪(1HNMR)对海藻酸钠和羧甲基壳聚糖改性前后产物进行表征，证实对海藻酸钠接枝改性后成功制备得到马来酰亚胺基氧化海藻酸钠(ADA-Mal)；对羧甲基壳聚糖接枝改性后成功制备得到巯基羧甲基壳聚糖(CMCS-SH)。
四、止血粉的制备与基本表征
采用物理研磨法制备止血粉。将冻干的ADA-Mal与CMCS-SH分别放入球磨罐，液氮中冷淬15min。在50Hz下球磨3min，重复5次，每次间隔5min，制得ADA-Mal与CMCS-SH粉末。将ADA-Mal与CMCS-SH粉末按照质量比7:3混合均匀，即得止血粉(AM7-CS3粉末)，装入瓶中备用。本发明止血粉还可以装入喷雾瓶中，形成可喷雾止血粉。
实施例2、本发明止血粉的制备
一、氧化海藻酸钠(ADA)的制备
同实施例1。
二、马来酰亚胺基氧化海藻酸钠(ADA-Mal)的制备
同实施例1。
三、巯基羧甲基壳聚糖(CMCS-SH)的制备
同实施例1。
四、止血粉的制备与基本表征
采用物理研磨法制备止血粉。将冻干的ADA-Mal与CMCS-SH分别放入球磨罐，液氮中冷淬15min。在50Hz下球磨3min，重复5次，每次间隔5min，制得ADA-Mal与CMCS-SH粉末。将ADA-Mal与CMCS-SH粉末按照质量比7:7混合均匀，即得止血粉(AM7-CS7粉末)，装入瓶中备用。本发明止血粉还可以装入喷雾瓶中，形成可喷雾止血粉。
实施例3、本发明止血粉的制备
一、氧化海藻酸钠(ADA)的制备
同实施例1。
二、马来酰亚胺基氧化海藻酸钠(ADA-Mal)的制备
同实施例1。
三、巯基羧甲基壳聚糖(CMCS-SH)的制备
同实施例1。
四、止血粉的制备与基本表征
采用物理研磨法制备止血粉。将冻干的ADA-Mal与CMCS-SH分别放入球磨罐，液氮中冷淬15min。在50Hz下球磨3min，重复5次，每次间隔5min，制得ADA-Mal与CMCS-SH粉末。将ADA-Mal与CMCS-SH粉末按照质量比3:7混合均匀，即得止血粉(AM3-CS7粉末)，装入瓶中备用。本发明止血粉还可以装入喷雾瓶中，形成可喷雾止血粉。
实施例4、本发明止血粉的制备
一、氧化海藻酸钠(ADA)的制备
同实施例1。
二、马来酰亚胺基氧化海藻酸钠(ADA-Mal)的制备
同实施例1。
三、巯基羧甲基壳聚糖(CMCS-SH)的制备
同实施例1。
四、止血粉的制备与基本表征
采用物理研磨法制备止血粉。将冻干的ADA-Mal与CMCS-SH分别放入球磨罐，液氮中冷淬15min。在50Hz下球磨3min，重复5次，每次间隔5min，制得ADA-Mal与CMCS-SH粉末。将ADA-Mal与CMCS-SH粉末按照质量比4:6混合均匀，即得止血粉(AM4-CS6粉末)，装入瓶中备用。本发明止血粉还可以装入喷雾瓶中，形成可喷雾止血粉。
实施例5、本发明止血粉的制备
一、氧化海藻酸钠(ADA)的制备
同实施例1。
二、马来酰亚胺基氧化海藻酸钠(ADA-Mal)的制备
同实施例1。
三、巯基羧甲基壳聚糖(CMCS-SH)的制备
同实施例1。
四、止血粉的制备与基本表征
采用物理研磨法制备止血粉。将冻干的ADA-Mal与CMCS-SH分别放入球磨罐，液氮中冷淬15min。在50Hz下球磨3min，重复5次，每次间隔5min，制得ADA-Mal与CMCS-SH粉末。将ADA-Mal与CMCS-SH粉末按照质量比5:5混合均匀，即得止血粉(AM5-CS5粉末)，装入瓶中备用。本发明止血粉还可以装入喷雾瓶中，形成可喷雾止血粉。
实施例6、本发明止血粉的制备
一、氧化海藻酸钠(ADA)的制备
同实施例1。
二、马来酰亚胺基氧化海藻酸钠(ADA-Mal)的制备
同实施例1。
三、巯基羧甲基壳聚糖(CMCS-SH)的制备
同实施例1。
四、止血粉的制备与基本表征
采用物理研磨法制备止血粉。将冻干的ADA-Mal与CMCS-SH分别放入球磨罐，液氮中冷淬15min。在50Hz下球磨3min，重复5次，每次间隔5min，制得ADA-Mal与CMCS-SH粉末。将ADA-Mal与CMCS-SH粉末按照质量比6:4混合均匀，即得止血粉(AM6-CS4粉末)，装入瓶中备用。本发明止血粉还可以装入喷雾瓶中，形成可喷雾止血粉。
以下通过具体实验例证明本发明的有益效果。
试验例1、ADA-Mal和CMCS-SH结构表征
SA在NaIO4的氧化作用下氧化成含有醛基(-CHO)的氧化海藻酸钠(ADA)。再利用酰胺化反应将马来酰亚胺基团(-Mal)接枝在ADA上，制得ADA-Mal(AM)。通过酰胺化反应巯基化CMCS，得到CMCS-SH(CS)。实施例1制备的ADA-Mal和CMCS-SH通过傅立叶变换红外吸收光谱仪(FTIR)和核磁氢谱仪(1H NMR)进行表征。
1、实验方法
ADA-Mal/CMCS-SH的FTIR检测：利用溴化钾压片法检测材料红外吸收光谱，具体操作如下：分别称取5～10mg SA、ADA、ADA-Mal、CMCS及CMCS-SH 5种冻干样品，将材料剪成细小碎片状，并加入50～60mg的KBr粉末混合研磨均匀，然后将研磨好的混合粉末经压片机，在10kPa的压力下压成薄片，取出，进行红外光谱测试。测试的具体条件设定为：ATR检测模式下，检测波谱范围是400-4000cm-1，光谱分辨率4cm-1/次，扫描频率是0.0625Hz。
ADA-Mal/CMCS-SH的1H NMR检测：1H NMR样品制备及检测如下：分别称取5mg SA、ADA、ADA-Mal、CMCS及CMCS-SH 5种冻干样品，装入核磁管中，每管加入0.55mL氘代水(D2O)，振荡使材料充分溶解。用核磁共振仪(400MHz,Bruker AV II-400,Switzerland)测定样品化学位移在0-12ppm区间的吸收波谱，设多糖主链中1H峰积分面积为参比峰，根据测得的得到-Mal及-SH波谱图中1H峰面积与参比峰面积之比计算其马来酰亚胺及硫醇基团的接枝度(DS)。
2、实验结果
氧化后的海藻酸钠中FTIR图中在1734cm-1伸缩振动吸收峰，表明有醛基生成，生成氧化海藻酸钠(ADA)；经马来酰亚胺盐酸盐改性后的ADA的FTIR图谱中在1657cm-1和1542cm-1振动峰为酰胺键I和酰胺II(图2)。1HNMR谱δ＝2.88ppm，δ＝2.95ppm两个峰分别为马来酰亚胺基(-CH2CH2-)引入的亚甲基质子峰；δ＝6.88ppm处为引入-Mal官能团中-C＝C-的质子峰(图3)。ADA-Mal中马来酰亚胺基取代度(DS)通过马来酰亚胺基中的碳碳双键(-C＝C-)(δ＝6.88ppm)中氢原子对应的峰面积和ADA中主链(δ＝3.2～4.0ppm)上的氢原子对应的峰面积的比值计算取代度(DS)，DS约为27.29％。FTIR和1H NMR结果表明本发明成功制得ADA-Mal。
在CMCS及CMCS-SH的FTIR光谱中可以看出，CMCS-SH中在1657和1542cm-1处出现吸收峰，为酰胺I(-C＝O)伸缩振动峰和酰胺II(-C-N)弯曲振动峰，表明半胱胺巯基中的氨基(-NH2)与CMCS上的羧基(-COO-)发生了反应，形成了酰胺键(图2)。从CMCS氢谱图中可见，δ＝2.02ppm为CMCS中的乙酰基中的甲基质子峰(-CO-CH3)。与CMCS相比，CMCS-SH氢谱中出现的δ＝2.86ppm和δ＝2.91ppm归属于半胱胺巯基的亚甲基质子峰(-CH2CH2SH)，其中δ＝2.91ppm处的峰归属于与酰胺键邻近的亚甲基氢(图3)。根据双键δ＝2.91ppm和(δ＝2.86-2.91ppm位置处氢原子对应的峰面积和亚甲基峰(δ＝2.56ppm)处氢原子对应的峰面积，计算巯基的取代度(DS)，DS约为48.2％。FTIR和1H NMR结果表明本发明成功制得CMCS-SH。
试验例2、本发明止血粉的表征
1、实验方法
本发明止血粉的制备流程如图4a所示。采用动态光散射法测量实施例1制备的ADA-Mal与CMCS-SH粉末的粒径大小与分布，介质选用乙醇。止血粉的快速凝胶化用倒置试管法表征。在5mL离心管中加入1mL的PBS或者兔抗凝全血，加入30mg的止血粉后，立即倒置离心管，观察并记录PBS/血液的流动情况。以商用的云南白药止血粉(CP)以及未改性海藻酸钠-羧甲基壳聚糖混合粉末(SA-CMCS)做为对照。
未改性海藻酸钠-羧甲基壳聚糖混合粉末(SA-CMCS)的制备方法为：称取SA与CMCS粉末，按照质量比7:3混合均匀，即得SA-CMCS混合粉末，装入瓶中备用。
2、实验结果
由图4a示意图可知经过简单的改性、冻干、研磨、混合即可得到止血粉。
通过动态光散射法测量了实施例1制备的ADA-Mal(AM)粉末和CMCS-SH(CS)粉末的粒径，结果表明二者的粒径均一性良好，主要处于微米级别，AM粉末和CS粉末的d(0.5)分别为14.052μm和7.389μm(如图4b和4c所示)。从粉末的大体图(图4d)中可以看出，研磨后的粉末质地均一，无明显团聚现象，利于长期的保存。图4e左边照片的两个PE试管中均为抗凝兔全血，其倒置后血液流动到底部；在两个PE试管中的其中一个加入实施例1制备的止血粉(AM7-CS3粉末)，另一个不加入任何样品，再将PE试管倒置，结果如图4e右边照片所示，加入AM7-CS3粉末后，混合粉末接触血液立即自凝胶化，表现出快速凝血的性能，而不加入任何样品的抗凝兔全血在静置相同时间后仍然呈流动状。说明AM7-CS3粉末能够促进血液快速凝固。
分别检测实施例1、3、5制备得到的三组止血粉AM7-CS3、AM3-CS7、AM5-CS5的流变学性能，将30mg三组止血粉分别加入100μL PBS中，待止血粉自凝胶化稳定后，取各组凝胶块进行流变学测试。结果如图5所示：三组止血粉均表现出储能模量(G’)大于损耗模量(G”)的特点，水凝胶表现为弹性固体。此外，AM7-CS3的G’大于另外两组。说明其具有更致密，力学强度更大的交联网络，能更好的抵抗创面和/或血管出血时的血压，在创面封闭、止血中最具应用价值。故优选AM7-CS3止血粉进行后续实验。
对实施例1制备的AM7-CS3止血粉进行快速凝胶化测试，以CP和SA-CMCS作为对照，结果如图6所示：为进一步评估止血粉的快速自凝胶化，首先将粉末加入到PBS中。可以清晰地观察到，AM7-CS3止血粉在接触到液体后5s内，即可吸水快速自凝胶化，在液面形成一层凝胶层，封闭液面。止血粉自凝胶化后将试管倒置，凝胶层可抵抗液体重力，阻止液体的下流。而未改性的海藻酸钠和羧甲基壳聚糖混合粉末(SA-CMCS)在PBS中无法自凝胶化而形成稳定凝胶。进一步实验证明，即使在成分复杂的血液中，AM7-CS3止血粉依然可以在与血液接触后快速自凝胶化，阻止血液流动。而商用的云南白药止血粉(CP)缺乏自凝胶化的特性，无法形成凝胶层封闭创面，不能阻止血液流动。SA-CMCS的混合粉末同样无法实现自凝胶化而发挥止血作用。总之，相较于传统的止血粉，AM7-CS3止血粉具有独特的自凝胶机制，即基于“点击”化学原理的迈克尔加成反应和席夫碱反应，因此可在极短的时间内(≤5s)自凝胶化和一定的抗压能力，使得AM7-CS3止血粉具备快速封闭创面和止血的优势。
试验例3、本发明止血粉体外促凝活性的评价
1、实验方法
实施例1制备的止血粉(AM7-CS3)的体外促凝血活性通过血细胞的粘附、血浆纤维蛋白原(FIB)浓度和乳酸脱氢酶(LDH)浓度来评价。将新鲜兔血与3.8％柠檬酸钠(1:9,v/v)混合制备兔抗凝全血。兔抗凝全血离心(1000rpm，10min)收集红细胞沉淀，用PBS洗涤3次(1000rpm，10min)。将抗凝全血以1000rpm/min离心10min制备富血小板血浆(PRP)，3000rpm/min离心15min制备贫血小板血浆(PPP)
将制备好的红细胞悬液(50％v/v，200μL)和PRP(200μL)分别在30～50mg AM7-CS3止血粉自凝胶化形成的凝胶块表面孵育10min和60min，观察粘附的红细胞和血小板。PBS轻轻冲洗后，用4％多聚甲醛固定过夜，梯度脱水。用扫描电镜观察样品表面经临界点干燥和喷金处理后的红细胞和血小板形态。
用上述方法制备PPP，将200μL PPP与30～50mg AM7-CS3止血粉自凝胶化形成的凝胶在37℃孵育30min后，取上清用全自动凝血分析仪检测血浆中的FIB。用LDH检测试剂盒检测样本表面粘附血小板的数量。首先，将PRP梯度稀释后，按照制造商的说明，用LDH测定试剂盒测定450nm处的吸光度，建立标准曲线。材料置于24孔板中，加入200μL PRP。孵育30min后，吸去上清，用PBS洗去材料表面游离的血小板。用1％ Triton X-100(1mL)溶解材料表面的血小板，按照制造商的说明用LDH检测试剂盒进行检测。最终，通过标曲确定AM7-CS3止血粉自凝胶化后的凝胶块表面的粘附血小板数量(n＝3)。
2、实验结果
红细胞在凝血中具有重要地位，在血小板激活和增加纤维蛋白凝块稳定性等方面具有重要意义。因此，红细胞在材料上的粘附性首先被评估。选择临床常用的纱布和纤维蛋白胶作为对照。从图7a中可以看出，相较于纤维蛋白胶和纱布，大量红细胞粘附在AM7-CS3止血粉自凝胶化的凝胶块表面，且红细胞发生了聚集。此外，在红细胞表面明显地形成了纤维蛋白网络。
进一步地，血小板是一期止血的核心，也是是二期止血中重要的参与者，在整个凝血过程中具有举足轻重的地位，所以材料对于血小板的影响显著影响着止血效果。从图7b中可以看出，纱布上的仅附着有少量的血小板，且散在分布，无明显聚集。而纤维蛋白胶具有促凝活性，表现出促血小板粘附与激活能力，血小板相互连接成网。在AM7-CS3止血粉上，可以观察到明显的纤维网络，这说明材料可以显著地激活凝血过程，促进纤维蛋白的形成。血小板并未明显被观察到是因为其作为纤维蛋白网络重要的组成物参与到了蛋白网络中。
此外，通过LDH检测定量地检测了血小板在材料上粘附的数量(图7c)。AM7-CS3止血粉和纤维蛋白胶粘附的血小板数量分别为7.42×107个和6.08×107个，分别是纱布的3.1和2.5倍，但二者无统计学差异。进一步检测了经过不同材料处理血浆中FIB的含量，图7d显示，AM7-CS3止血粉处理过的血浆中FIB浓度仅为2.29g/L，显著低于其他两组，表明止血粉能显著地吸附并激活血浆中的纤维蛋白原。这种现象在纤维蛋白胶中并未观察到。
分析认为，AM7-CS3止血粉对于红细胞和血小板的捕获能力归因于CMCS带正电的氨基可以显著促进带负电的红细胞粘附和聚集。此外，SA可以激活内源性凝血途径。止血粉对于纤维蛋白原吸附及活化的原因可能是多方面的，包括SA对于内源凝血途径的激活，巯基促进组织因子和血小板的激活，醛基通过席夫碱反应促进纤维蛋白原等蛋白的粘附。血小板的激活会加速二期止血过程，纤维蛋白原的粘附又促进了血小板的聚集。总之，AM7-CS3止血粉具有促进血细胞激活聚集和纤维蛋白原吸附活化的促凝能力，且二者相辅相成，相互促进。
试验例4、止血粉在大鼠肝脏截断出血模型中的应用
1、实验方法
采用大鼠肝脏截断出血模型评价实施例1止血粉(AM7-CS3)的止血性能，云南白药止血粉(CP)作为对照，同时设置造模后不进行止血处理的空白对照组(Blank)。SD大鼠麻醉后呈仰卧位，备皮，在剑突下1cm处开约3cm的切口，将肝脏拉出放在事先称重的滤纸上，用纱布小心吸去肝脏表面的渗液，在距离末端1cm处截断肝叶，待血液从创面处流出，立即将备好的止血粉敷在创面，并轻轻按压，直到创面完全止血。取出滤纸并再次称量滤纸的重量，前后两次滤纸重量差记作出血量(Blood Loss)。滤纸上血液所占的面积不在扩大的时间被认为是止血时间(Bleeding Time)。用电子设备记录全部止血的全过程(n＝3)。
2、实验结果
如图8a所示：肝脏截断后，血液迅速流出。用云南白药止血粉(CP)和AM7-CS3止血粉处理的创面可以明显地阻止血液的流失。从图8b的出血量统计可以看出空白对照组的平均出血量为1.06g，而CP和AM7-CS3止血粉出血量为0.51g和0.31g，仅为对照组的48％和29％。止血时间也由未经处理的120s显著性缩短到75s(CP组)和72s(AM7-CS3止血粉组)(图8c)。以上结果说明了AM7-CS3止血粉止血效果好，在大鼠肝脏截断出血模型的止血效果与云南白药止血粉相比无显著差异。大鼠肝脏出血量低，出血速度慢，进一步比较CP和AM7-CS3止血粉在较大出血模型中止血效果。
试验例5、本发明止血粉在比格犬肝脏穿孔出血模型中的应用
1、实验方法
采用比格犬肝脏穿孔出血模型评价止血粉在大型动物肝脏出血模型中的应用效果。比格犬麻醉后呈仰卧位，备皮，将肝脏拉出放在滤纸上，用纱布小心吸去肝脏表面的渗液，在肝叶上用活检器制造一个直径15mm，深10mm的不可压缩性深出血创面，分别将云南白药止血粉(CP)和实施例1制备的止血粉(AM7-CS3)覆盖在创面上进行紧急止血处理，止血过程示意图如图9a所示。数据采集方式同试验例4(n＝3)。设置造模后不进行止血处理的空白对照组(Blank)。同时，止血2周后对创面进行HE染色。
2、实验结果
从出血量统计(图9b)可以看出：空白对照组的平均出血量为3.70g，CP组出血量2.95g，无显著统计学差异，这表明在比格犬肝脏穿孔出血模型中，CP并无明显的止血效果。而AM7-CS3止血粉的出血量为1.89g，相较于空白对照组出血量减少了49％，具有显著地止血效果。
从图9c可以看出，空白组的肝脏出血严重，血流速度快，出血量大。用CP进行止血时，由于缺乏自凝胶化性能，CP被血流明显地冲散，无法汇聚在出血部位，导致止血效果差。而AM7-CS3止血粉很好地粘附在创面上，封闭创面，快速止血，因此相比于CP表现出更好的止血效果。
从止血2周后肝脏的组织切片(HE染色)可以明显地看出AM7-CS3止血粉喷洒在创面后在创面表面形成一层凝胶成，凝胶层与组织之间只有少量的血细胞；而空白对照组和CP组创面中充满血细胞，尤其空白对照中，血细胞含量最多；组织染色结果进一步证实了AM7-CS3止血粉快速快速凝胶化能力以及创面封闭能力，特别是对于较大出血的止血效果优异。
综上，本发明提供了一种快速自凝胶化的止血粉，该止血粉与血液接触后可以快速自凝胶化，对创面起到封闭作用，防止创面出血，同时该止血粉具有促进血细胞激活聚集和纤维蛋白原吸附活化的协同促凝能力，因此该止血粉止血效果优异。此外，本发明止血粉采用粉末形式，适用于不同创面的止血，如不规则创面、深度创面以及较大血管破坏性创面。本发明止血粉可以制备成喷雾形式，携带和使用更加方便。本发明止血粉具有便携，使用范围广，止血速度快等特点，具有广阔的临床应用前景。
Claims (10)
1.一种止血粉，其特征在于：它由如下重量配比的组分混合而成：
不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐粉末1～10份，硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖粉末1～10份。
2.根据权利要求1所述的止血粉，其特征在于：它由如下重量配比的组分混合而成：
不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐粉末3～7份，硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖粉末3～7份。
3.根据权利要求2所述的止血粉，其特征在于：它由如下重量配比的组分混合而成：
不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐粉末7份，硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖粉末3份。
4.根据权利要求1～3任一项所述的止血粉，其特征在于：所述不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐中海藻酸盐氧化度为14％～50％；和/或，所述不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐中不饱和碳碳双键接枝率为24％～37％；
和/或，所述硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖中硫醇接枝率为24％～52％。
5.根据权利要求4所述的止血粉，其特征在于：所述氧化海藻酸盐为马来酰亚胺接枝改性的氧化海藻酸盐；和/或，所述羧甲基壳聚糖为半胱胺盐酸盐接枝改性的羧甲基壳聚糖；
优选地，所述海藻酸盐为海藻酸钠；和/或，所述羧甲基壳聚糖为取代度小于1的O-羧甲基壳聚糖。
6.根据权利要求1～3任一项所述的止血粉，其特征在于：所述不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐为马来酰亚胺接枝改性的氧化海藻酸钠，所述马来酰亚胺接枝改性的氧化海藻酸钠的制备方法包括如下步骤：
(1)将氧化海藻酸钠溶于溶剂中，溶解得到氧化海藻酸钠溶液；
(2)在氧化海藻酸钠溶液中加入EDC和NHS，再加入马来酰亚胺盐酸盐，反应；
(3)反应后，透析，干燥，即得马来酰亚胺接枝改性的氧化海藻酸钠。
7.根据权利要求6所述的止血粉，其特征在于：
步骤(1)中，所述溶剂为MES溶液、PBS溶液或去离子水；和/或，步骤(1)中，所述氧化海藻酸钠溶液的质量百分含量为1％～3％；
和/或，步骤(2)中，所述氧化海藻酸钠物质的量与EDC和NHS总物质的量之比为1：1.5～3；和/或，步骤(2)中，所述EDC和NHS的摩尔比或质量比是1：1～1.5；和/或，步骤(2)中，所述氧化海藻酸钠物质的量与马来酰亚胺盐酸盐物质的量之比为1:1～2；和/或，步骤(2)中，所述反应为室温反应12～24h；
和/或，步骤(3)中，所述透析时先置于0.01～0.05M HCl去离子水溶液中透析3～5天，再置于去离子水中透析12～24h；
优选地，
步骤(2)中，所述反应时，每6h调一次反应液的pH，保持pH值在5.0～5.5；
和/或，步骤(3)中，所述透析袋截留分子量为3.5～8kDa；和/或，步骤(3)中，所述透析时每6～12h换一次水。
8.根据权利要求1～3任一项所述的止血粉，其特征在于：所述硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖合成方法包括如下步骤：
1)将羧甲基壳聚糖溶于溶剂中，溶解得到羧甲基壳聚糖溶液；
2)在羧甲基壳聚糖溶液中加入EDC，再加入半胱胺盐酸盐，反应；
3)反应后，透析，冷冻干燥，醇析，即得巯基羧甲基壳聚糖；
优选地，
步骤1)中，所述溶剂为去离子水或PBS溶液；和/或，步骤1)中，所述羧甲基壳聚糖溶液的质量百分含量为2～5％；
和/或，步骤2)中，所述羧甲基壳聚糖物质的量与EDC物质的量之比为1:1.5～3；和/或，步骤2)中，所述羧甲基壳聚糖物质的量与半胱胺盐酸盐物质的量之比为1:1～2；和/或，步骤2)中，所述反应为室温反应12～24h；
和/或，步骤3)中，所述透析时置于0.005～0.05M的硼砂溶液中透析3～5天；和/或，步骤3)中，所述冷冻干燥前加入DTT搅拌反应；和/或，步骤3)中，所述醇析使用无水乙醇；
更优选地，
步骤3)中，所述透析袋截留分子量为3.5～8kDa；和/或，步骤(3)中，所述透析时每12h换一次水。
9.权利要求1～8任一项所述的止血粉的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：
将不饱和碳碳双键接枝改性的氧化海藻酸盐粉末和硫醇基接枝改性的羧甲基壳聚糖粉末按照重量配比混合，即得。
10.权利要求1～8任一项所述的止血粉在制备止血材料中的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211676034.3A CN115814148A (zh) | 2022-12-26 | 2022-12-26 | 一种快速自凝胶化止血粉及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211676034.3A CN115814148A (zh) | 2022-12-26 | 2022-12-26 | 一种快速自凝胶化止血粉及其制备方法和用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115814148A true CN115814148A (zh) | 2023-03-21 |
Family
ID=85518317
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211676034.3A Pending CN115814148A (zh) | 2022-12-26 | 2022-12-26 | 一种快速自凝胶化止血粉及其制备方法和用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115814148A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117599233A (zh) * | 2023-11-17 | 2024-02-27 | 中国人民解放军海军军医大学第一附属医院 | 一种多功能自凝胶多糖基止血粉及其制备方法和应用 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105920652A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-09-07 | 华南理工大学 | 一种共价接枝抗菌多肽的抗菌凝胶及其制备方法 |
| CA2996853A1 (en) * | 2015-09-01 | 2017-03-09 | Baxter International Inc. | Hemostatic material |
| WO2019095600A1 (zh) * | 2017-11-15 | 2019-05-23 | 华东理工大学 | 光偶合协同交联水凝胶材料的制备、原料、产品及应用 |
| WO2019137414A1 (en) * | 2018-01-12 | 2019-07-18 | Beijing Universal Likang Technology Co., Ltd. | Method for treating active bleeding using biocompatible hemostatic and sealant compositions |
| CN110128682A (zh) * | 2018-02-02 | 2019-08-16 | 华东理工大学 | 巯基-醛基交联水凝胶材料及其制备方法与应用 |
| CN111053944A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-04-24 | 中国科学院大学温州研究院(温州生物材料与工程研究所) | 一种载凝血酶微球-膨胀海绵复合止血材料及其制备方法及应用 |
| CN111588913A (zh) * | 2020-05-15 | 2020-08-28 | 四川大学 | 一种自交联透明质酸及其复合胶原蛋白类的水凝胶注射剂及其应用 |
| CN113289052A (zh) * | 2021-05-14 | 2021-08-24 | 南方科技大学 | 一种可控交联、降解的材料及其应用 |
| CN115093579A (zh) * | 2022-06-09 | 2022-09-23 | 山东大学 | 一种凝胶快速制备方法 |
-
2022
- 2022-12-26 CN CN202211676034.3A patent/CN115814148A/zh active Pending
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2996853A1 (en) * | 2015-09-01 | 2017-03-09 | Baxter International Inc. | Hemostatic material |
| CN105920652A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-09-07 | 华南理工大学 | 一种共价接枝抗菌多肽的抗菌凝胶及其制备方法 |
| WO2019095600A1 (zh) * | 2017-11-15 | 2019-05-23 | 华东理工大学 | 光偶合协同交联水凝胶材料的制备、原料、产品及应用 |
| CN112142870A (zh) * | 2017-11-15 | 2020-12-29 | 中山光禾医疗科技有限公司 | 光偶合协同交联水凝胶材料的制备、原料、产品及应用 |
| WO2019137414A1 (en) * | 2018-01-12 | 2019-07-18 | Beijing Universal Likang Technology Co., Ltd. | Method for treating active bleeding using biocompatible hemostatic and sealant compositions |
| CN110128682A (zh) * | 2018-02-02 | 2019-08-16 | 华东理工大学 | 巯基-醛基交联水凝胶材料及其制备方法与应用 |
| CN111053944A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-04-24 | 中国科学院大学温州研究院(温州生物材料与工程研究所) | 一种载凝血酶微球-膨胀海绵复合止血材料及其制备方法及应用 |
| CN111588913A (zh) * | 2020-05-15 | 2020-08-28 | 四川大学 | 一种自交联透明质酸及其复合胶原蛋白类的水凝胶注射剂及其应用 |
| CN113289052A (zh) * | 2021-05-14 | 2021-08-24 | 南方科技大学 | 一种可控交联、降解的材料及其应用 |
| CN115093579A (zh) * | 2022-06-09 | 2022-09-23 | 山东大学 | 一种凝胶快速制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| XIONG-XIN LEI ET AL: "A Self-Assembly Pro-Coagulant Powder Capable of Rapid Gelling Transformation and Wet Adhesion for the Efficient Control of Non-Compressible Hemorrhage", ADVANCED SCIENCE, pages 1 - 17 * |
| XIONG-XIN LEI ET AL: "Click-crosslinked in-situ hydrogel improves the therapeutic effect in wound infections through antibacterial, antioxidant and anti-inflammatory activities", CHEMICAL ENGINEERING JOURNAL, pages 142092 * |
| XIONG-XIN LEI ET AL: "Multifunctional two-component in-situ hydrogel for esophageal submucosal dissection for mucosa uplift, postoperative wound closure and rapid healing", BIOACTIVE MATERIALS, pages 461 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117599233A (zh) * | 2023-11-17 | 2024-02-27 | 中国人民解放军海军军医大学第一附属医院 | 一种多功能自凝胶多糖基止血粉及其制备方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Huang et al. | Noncompressible hemostasis and bone regeneration induced by an absorbable bioadhesive self‐healing hydrogel | |
| CN100402096C (zh) | 干燥止血组合物及其制备方法 | |
| CN102008742B (zh) | 一种止血剂及含有该止血剂的外伤敷料 | |
| CN114712550B (zh) | 一种可注射快速止血的水凝胶粘合剂及制备方法、应用 | |
| AU2016313773B2 (en) | Hemostatic material | |
| CN115814148A (zh) | 一种快速自凝胶化止血粉及其制备方法和用途 | |
| AU2012267855A1 (en) | Method for producing hydrogels | |
| CN102772821A (zh) | 一种具有组织诱导性且可吸收、止血的多功能颗粒及其制备和应用 | |
| CN113289052B (zh) | 一种可控交联、降解的材料及其应用 | |
| CN112933286B (zh) | 一种用于止血并承载抗癌药物的晶胶及其制备方法 | |
| CN103467772A (zh) | 壳聚糖/γ-聚谷氨酸聚电解质海绵及制备方法及用途 | |
| CN108187129B (zh) | 一种可吸收的明胶止血粉及其制备方法 | |
| CN114025706A (zh) | 包含亲核物质和多官能改性的基于聚乙二醇的交联剂的反应性干粉状止血材料 | |
| Li et al. | Microgel Assembly Powder Improves Acute Hemostasis, Antibacterial, and Wound Healing via In Situ Co‐Assembly of Erythrocyte and Microgel | |
| CN112915254B (zh) | 一种接枝长烷基壳聚糖/三聚磷酸钠凝胶及其制备方法和应用 | |
| CN111870731B (zh) | 一种复合海绵及其制备方法和应用 | |
| CN113952499A (zh) | 一种天然多糖海绵及其制备方法与应用 | |
| Huang et al. | A self-gelling starch-based sponge for hemostasis | |
| WO2022217733A1 (zh) | 一种医用水凝胶及其制备方法和用途 | |
| CN115869458A (zh) | 一种用于止血的组合物及其制备方法和用途 | |
| Feng et al. | Characterization of Chitosan‐Gallic Acid Graft Copolymer for Periodontal Dressing Hydrogel Application | |
| CN113512132A (zh) | 一种快速止血水凝胶及其制备方法 | |
| CN113388049A (zh) | 一种大分子衍生物及其制备方法和在生物组织粘合剂中的应用 | |
| CN114126672B (zh) | 止血粉末 | |
| US20230241283A1 (en) | Starch-Based Fluffy Particle, Preparation Method and Use Thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |