CN115813815A

CN115813815A - 果香菊汁液用于制备调理肌肤的组合物的用途

Info

Publication number: CN115813815A
Application number: CN202111086042.8A
Authority: CN
Inventors: 林咏翔; 李唯君
Original assignee: TCI Co Ltd
Current assignee: TCI Co Ltd
Priority date: 2021-09-16
Filing date: 2021-09-16
Publication date: 2023-03-21

Abstract

一种果香菊(Chamaemelum nobile)提取物用于制备调理肌肤的组合物的用途，所述果香菊汁液是以一含水的溶剂进行提取，所述组合物用于抗发炎、提高超氧化物歧化酶的活性、强化肌肤屏障、降低肌肤的红斑生成及/或提升肌肤的保湿度。

Description

果香菊汁液用于制备调理肌肤的组合物的用途

技术领域

本案是关于一种果香菊(Chamaemelum nobile)提取物的用途，特别是关于果香菊汁液用于制备调理肌肤的组合物的用途。

背景技术

肌肤会随年龄增长而正常老化，在现代生活中，人们承受着各式各样的压力，作息不正常、熬夜、睡眠不足、日夜颠倒、饮食失衡等生理和心理上的压力是造成肌肤泛红及肤色不均的主要原因，人们只能通过彩妆掩盖肌肤瑕疵，然而，彩妆的使用加剧了肌肤的受损程度，使肌肤弹力下降、保水度不足、粗燥、无光泽、毛孔粗大、皱纹、肌肤产生斑点及/或整体较为暗沈、蜡黄等老化态样。此外，这些压力造成肌肤发生代谢紊乱，使肌肤无法及时分解和排出代谢废物，大量堆积在细胞中。速肌肤老化的速度，使整体外观看起来无精打采。

此外，敏感性肤质的人，通常皮肤的表皮较薄，不仅容易脱皮脱屑，皮下微血管也较为明显，常会受到外部环境、物质的影响，阳光、食物、香味、色素、合成纤维都可能造成刺激，造成毛细血管受刺激，且引发发炎反应。

为了解决上述问题，本领域的技术人员亟需研发出一种调理肌肤的组合物，以造福有此需求的广大族群。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是为提供一种果香菊(Chamaemelum nobile)提取物用于制备调理肌肤的组合物的用途，所述果香菊汁液具有抗发炎、提高超氧化物歧化酶的活性、强化肌肤屏障、降低肌肤的红斑生成及/或提升肌肤的保湿度。本发明的果香菊汁液提高肌肤防御力，减少氧化压力形成自由基，并且减少肌肤发炎，避免毛细血管受刺激而产生发炎反应，效镇静舒缓肌肤、减少肌肤泛红区域，以提升肌肤稳定性及避免肤色不均。

此外，本发明的果香菊汁液还强化肌肤屏障，以防止水分散失，使肌肤保持水润，提供肌肤最佳保护力。

本发明提供了一种果香菊(Chamaemelum nobile)提取物用于制备调理肌肤的组合物的用途，其中所述果香菊汁液是以一含水的溶剂进行提取。

在一些实施例中，一种果香菊(Chamaemelum nobile)提取物用于制备调理肌肤的组合物的用途，其中所述果香菊汁液是以一含水的溶剂进行提取。

在一些实施例中，所述组合物用于抗发炎及/或提高超氧化物歧化酶的活性。

在一些实施例中，所述组合物是通过降低活性氧物质及/或降低白血球介素-8(IL-8)基因的表达量。

在一些实施例中，所述组合物用于强化肌肤屏障。

在一些实施例中，所述组合物用于降低肌肤的红斑生成。

在一些实施例中，所述组合物用于提升肌肤的保湿度。

在一些实施例中，所述果香菊汁液的浓度为至少1重量％。

在一些实施例中，所述组合物进一步包含一肌肤上可接受的载体。

在一些实施例中，所述组合物的形式为粉末状、颗粒状、液状、胶状或膏状的剂型。

在一些实施例中，所述组合物是进一步制备成保养品组合物、保健食品组合物、或化妆品组合物。

综上所述，任一实施例的果香菊汁液可用于制备调理肌肤的组合物，所述果香菊汁液具有抗发炎、提高超氧化物歧化酶的活性、强化肌肤屏障、降低肌肤的红斑生成及/或提升肌肤的保湿度。本发明的果香菊汁液提高肌肤防御力，减少氧化压力形成自由基，并且减少肌肤发炎，避免毛细血管受刺激而产生发炎反应，效镇静舒缓肌肤、减少肌肤泛红区域，以提升肌肤稳定性及避免肤色不均。此外，本发明的果香菊汁液还强化肌肤屏障，以防止水分散失，使肌肤保持水润，提供肌肤最佳保护力。

以下结合附图和具体实施例对本发明进行详细描述，但不作为对本发明的限定。

附图说明

图1是控制组、对照组及实验组抑制活性氧物质生成的结果比较图。###p值<0.001，相较于控制组，***p值<0.001，相较于对照组。

图2是控制组、对照组及实验组抵抗紫外线所诱发的白血球介素-8(IL-8)基因的表达量的结果比较图。###p值<0.001，相较于控制组，***p值<0.001，相较于对照组。

图3是受试者使用含有所述实验组的精华液的面膜前与后的肌肤皱纹区域的结果比较图以及以检测仪所拍摄的图像，以使用前受试者的皱纹区域为100％。

图4A及4B分别是受试者使用含有安慰剂及1％果香菊汁液的精华液的面膜的肌肤保湿度的瞬效(15分钟)及长效(4周)的结果比较图，以使用前受试者的肌肤保湿度为100％。

图5A及5B分别是受试者使用含有安慰剂及1％果香菊汁液的精华液的面膜的红斑生成指数的瞬效(15分钟)及长效(4周)的结果比较图，以使用前受试者的红斑生成指数为100％。

图6是受试者使用含有安慰剂及1％果香菊汁液的精华液的面膜的经皮水分散失量的长效(4周)的结果比较图，以使用前受试者的红斑生成指数为100％。

具体实施方式

以下将描述本案的部分具体实施态样。在不背离本案精神下，本案尚可以多种不同形式的态样来实践，不应将保护范围限于说明书所具体陈述的条件。

本案使用Excel软体进行统计分析。数据以平均值±标准差(SD)表示，各组之间的差异以学生t检验(student's t-test)进行分析。

本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在正负10％的范围内，最佳为在正负5％的范围内。

如本文中所使用，术语“提取物”是指藉由提取作用所制备的产物。所述提取物可以溶于溶剂中的溶液形式呈现，或提取物可为不含或大体上不含溶剂的浓缩物或精华呈现。

果香菊的学名是Chamaemelum nobile，也称为罗马洋甘菊，生长在欧洲、美洲及亚洲等地区。果香菊是为菊科果香菊属的一种多年生草本植物，有强烈的香味，高可达30公分，茎直立，叶片互生，无柄，二至三回羽状全裂，末回裂片很狭，头状花序单生于茎和长枝顶端，异型花；总苞片具宽膜质边缘，覆瓦状排列。花托圆锥形，舌状花雌性，白色，管状花两性，黄色。瘦果无冠状冠毛。果香菊促进消化、止吐、抗痉挛、轻度镇静的作用。果香菊还可用于治疗皮肤皲裂、牙龈痛、皮疹、炎症和促进伤口愈合。

如本文所用「果香菊」通常是指植物花朵，其中花朵可包含原始、经干燥或以其他物理方式加工以利于处理的花朵，其可进一步包含完整、剁碎、切丁、碾磨、研磨或以其他方式经加工以影响原物料的大小及实体完整性的花朵。

在一些实施例中，首先，以人工或机器的方式采摘果香菊的花朵并以清水冲洗备用，将果香菊干料与水、醇、或醇水混合物的提取溶剂，提取溶剂较佳为水，果香菊干料与提取溶剂以1-5：15-75的重量比混合，均质后在溶剂中以50-100℃进行提取0.5-3小时。提取后冷却至室温，将所述粗提取物经由400mesh的滤网过滤以获得滤液。最后，将所述滤液于45-70℃进行减压浓缩，最后，将所述滤液以喷雾干燥机进行喷雾干燥后，得到的所述粉剂即为本发明的果香菊汁液。

在一些实施例中，由果香菊所榨取的汁液(有时亦称的为「果香菊汁液」)可减少黑色素生成、提升肌肤保湿度、减少肌肤皱纹、镇静舒缓肌肤及减少肌肤泛红区域。因此，果香菊汁液可用于制备抗发炎、提高超氧化物歧化酶的活性、强化肌肤屏障、降低肌肤的红斑生成及/或提升肌肤的保湿度的肌肤调理的组合物。

在一些实施例中，含有果香菊汁液的组合物可为医药组合物、保养品组合物、食品组合物、保健食品组合物。

医药组合物可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于经肠道地(enterally)、非经肠道地(parenterally)或局部地(topically)投药的剂型。例如可为：注射品(injection)[例如，无菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、无菌的粉末(sterile powder)、外部制剂(external preparation)或其他类似物。

医药组合物可进一步包含有一被广泛地使用于药物制造技术的医药上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，医药上可接受的载剂可包含下列一种或多种载剂：乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizing agent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorption delaying agent)、脂质体(liposome)以及类似的物。有关这些载剂的选用与数量是熟习此项技术人员可视情况进行选择的。

在一些实施例中，医药上可接受的载剂可包含下列一种溶剂：水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline，PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)以及其他任何合适的溶剂。

在一些实施例中，所述医药组合物可由下列所述的任一种非经肠道途径(parenteral routes)来投药：皮下注射(subcutaneous injection)、表皮内注射(intraepidermal injection)、皮内注射(intradermal injection)以及病灶内注射(intralesional injection)。

在一些实施例中，医药组合物可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于局部地施用于皮肤上的外部制剂(external preparation)。举例而言，其可为下列所述的任一种，但不限于此：乳剂(emulsion)、凝胶(gel)、软膏(ointment)、乳霜(cream)、贴片(patch)、擦剂(liniment)、粉末(powder)、气溶胶(aerosol)、喷雾(spray)、乳液(lotion)、乳浆(serum)、糊剂(paste)、泡沫(foam)、滴剂(drop)、悬浮液(suspension)、油膏(salve)以及绷带(bandage)。

在一些实施例中，外部制剂是藉由将医药组合物与一为熟习此项技艺者所详知的基底(base)相混合而制成。

在一些实施例中，所述基底可包含下列一种或多种的添加剂(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氢化合物(hydrocarbons)[诸如石油胶(petroleum,jelly)以及白凡士林(white petrolatum,)]、蜡(wax)[诸如石蜡(paraffin)以及黄蜡(yellowwax)]、保存剂(preserving agents)、抗氧化剂(antioxidants)、界面活性剂(surfactants)、吸收增强剂(absorption enhancers)、安定剂(stabilizing agents)、胶凝剂(gelling agents)[诸如卡波普

974P

微结晶纤维素(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纤维素(carboxymethylcellulose)]、活性剂(active agents)、保湿剂(humectants)、气味吸收剂(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH调整剂(pH adjusting agents)、螯合剂(chelating agents)、乳化剂(emulsifiers)、闭塞剂(occlusive agents)、软化剂(emollients)、增稠剂(thickeners)、助溶剂(solubilizing agents)、渗透增强剂(penetration enhancers)、抗刺激剂(anti-irritants)、着色剂(colorants)以及推进剂(propellants)等。有关这些添加剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

在一些实施例中，保养品中可包含有一被广泛地使用于保养品制造技术的可接受的佐剂(acceptable adjuvant)。例如，所述可接受的佐剂可包含下列一种或多种佐剂：溶剂、胶凝剂、活性剂、防腐剂、抗氧化剂、遮蔽剂(screening agent)、螯合剂、界面活性剂、染色试剂(coloring agent)、增稠剂(thickening agent)、填料(filler)、香料以及气味吸收剂。可根据实际需求对这些试剂的选用与数量进行合适的调整。

在一些实施例中，保养品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于护肤(skincare)或化妆(makeup)的形式，其可为下列中的任一种，但不限于此：水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oilysolution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或复合型的乳剂、凝胶、软膏、乳霜、面膜(mask)、贴片、贴布(pack)、擦剂、粉末、气溶胶、喷雾、乳液、乳浆、糊剂、泡沫、分散液、滴剂、慕斯(mousse)、防晒油(sunblock)、防晒精华液、防晒乳霜、防晒喷剂、防晒精华、防晒乳霜、防晒喷雾、化妆水(tonic water)、粉底(foundation)、卸妆产品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身体清洁产品(body cleansingproducts)等。

在本发明的一实施例中，提供化妆品组合物和个人护理产品，其包含能够显示变色的着色组合物，例如包含在载体和苯乙烯-马来酸酐共聚物中的颜料颗粒的颜料研磨物。化妆品组合物可以是给人体皮肤提供色彩的任意化妆品或个人护理产品形式。例如，化妆品组合物可以是、但不限于唇膏、唇彩、保湿唇膏、指甲油、粉底、扑面粉、底粉、遮瑕膏、腮红、眼影、眼线器、睫毛膏或古铜色化妆品。个人护理产品可以是给人体皮肤赋予色彩的任意适合的形式。例如，个人护理产品可以包括日霜或洗剂、晚霜或洗剂、防晒露、霜或油和其它SPF产品、增湿剂、油膏、软膏、凝胶、体乳、人造褐变组合物、脱毛等。

本发明的化妆品组合物和个人护理产品施用于人皮肤系统，包括皮肤、唇、指甲、毛发和其它角质表面。本文所用的术语“角质表面”是指包含角蛋白的人皮肤系统的部分，包括但不限于哺乳动物、优选人类的皮肤、唇、毛发(包括头皮、睫毛、眉毛、面毛和体毛)和指甲(脚趾甲、指甲、甲上皮等)。

能够显示变色的化妆品或个人护理产品施用于皮肤的任意区域且优选面部、颈部、手、足或身体的另外的区域上，例如壁、腿和背部。

在一些实施例中，保养品亦可与下列中已知活性的外用剂(external useagents)的一种或多种一起合并使用：美白剂(whitening agents)[诸如维生素A酸(tretinoin)、儿茶素(catechin)、曲酸、熊果苷以及维生素C]、保湿剂、杀菌剂(bactericides)、紫外线吸收剂(ultraviolet absorbers)、植物提取物(plant extracts)[诸如芦荟提取物(aloe extract)]、皮肤营养剂(skin nutrients)、麻醉剂(anesthetics)、抗痘剂(anti-acne agents)、止痒剂(antipruritics)、止痛剂(analgesics)、抗皮肤炎剂(antidermatitis agents)、抗过角化剂(antihyperkeratolytic agents)、抗干皮肤剂(anti-dry skin agents)、抗汗剂(antipsoriatic agents)、抗老化剂(antiaging agents)、抗皱剂(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出剂(antiseborrheic agents)、伤口治疗剂(wound-healing agents)、皮质类固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有关这些外用剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。

在一些实施例中，医药组合物可被当作食品添加物(food additive)，藉由习知方法于原料制备时添加，或是于食品的制作过程中添加，而与任一种可食性材料配制成供人类与非人类动物摄食的食品产品。

在一些实施例中，食品的种类可为但不限于：饮料(beverages)、发酵食品(fermented foods)、烘培产品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食补充品(dietary supplements)。所述食品包括但不限于饮品、果冻、乳制品、代餐包等。

下列多个实施例中的实验步骤若无特别叙明，即在室温(25±5℃)、常压(1atm)下进行。

[实施例1]：果香菊汁液的制备方法

在此实施例中，首先，以人工或机器的方式采摘果香菊的花朵并以清水冲洗备用，将果香菊干料与水、醇、或醇水混合物的提取溶剂，提取溶剂较佳为水，果香菊干料与提取溶剂以1：15的重量比混合，均质后在溶剂中以85℃进行提取1小时。提取后冷却至室温，将所述粗提取物经由400mesh的滤网过滤以获得滤液。最后，将所述滤液于60℃±5℃进行减压浓缩，最后，将所述滤液以喷雾干燥机进行喷雾干燥后，得到的所述粉剂即为本发明的果香菊汁液。

[实施例2]：果香菊汁液的总黄酮含量检测

总黄酮含量检测的分析方法主要是参考Zhishen Jia et al.,(1999),FoodChemistry,64：555-559所述方法并加以修饰，取200μL的适当稀释后的样品加入1000μL的H₂O，混合均匀后，加入200μL的5％柠檬酸钠(Sodium nitrite)，静置6分钟后加入200μL的10％硝酸铝(Aluminum nitrate)，再静置6分钟。最后加入2mL的4％氢氧化钠(Sodiumhydroxide)与1.4mL的H₂O，混合均匀，于500nm下进行分析，以芸香素(Rutin)为标准品绘制标准曲线。在本实施例中，实施例1的果香菊汁液的总黄酮的含量为至少3.0mg/mL。

[实施例3]：细胞实验-果香菊汁液降低活性氧物质

于此，以萤光显微镜避光观察人类皮肤纤维母细胞CCD-966sk细胞内绿萤光表达的程度，以测定经果香菊汁液处理后，其活性氧物质含量的变化。

材料与仪器

细胞株：人类皮肤纤维母细胞(Human skin fibroblast)CCD-966sk(生物资源保存及研究中心(BCRC)，No.60153)。

2.培养基：含有10vol％FBS(fetal bovine serum，购自Gibco)的基础培养基。其中，基础培养基是由Eagle’s最低限度基本培养基(Eagle’s minimum essential medium(MEM)，购自Gibco，产品编号15188-319)额外添加成分使其含有1mM丙酮酸钠(sodiumpyruvate，购自Gibco)、1.5g/L碳酸氢钠(sodium bicarbonate，购自Sigma)所配制而成。

3.磷酸缓冲盐溶液(PBS溶液)：购自Gibco，产品编号10437-028。

4.DCFH-DA溶液：将二氯二氢萤光素二乙酸酯(2,7-dichloro-dihydro-fluorescein diacetate，DCFH-DA；产品编号SI-D6883，购自Sigma)溶于二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO，购自Sigma，产品编号SI-D6883-50MG)以配制成5mg/ml的DCFH-DA溶液。

5.双氧水(H₂O₂)：购自Sigma-Aldrich，产品型号95299-1L。

6.胰蛋白酶(Trypsin-EDTA)：10X Trypsin-EDTA(购自Gibco)以1X PBS溶液稀释10倍。

7.倒立式显微镜搭载照相系统(ZEISS，Cat.Vert.A1)。

8.果香菊汁液：此实验所使用的果香菊汁液是以实施例1的方式制备而成。

实验步骤

实验将会分为实验组、控制组(未添加果香菊汁液、亦无经过双氧水处理的组别)、以及对照组(未添加果香菊汁液，但经双氧水处理的组别)三组进行，各组分别进行三重复试验：

1.将CCD-966sk细胞以每孔1×10⁵个的方式，接种于每孔含2ml培养基的6孔培养盘中。

2.将培养盘置于5％CO₂、37℃下，培养24小时。

3.移除培养基。

4.加入2mL实验培养基至培养盘的各孔中，并于37℃下培养1小时。

实验组的实验培养基为添加有5μL的实施例1得到的果香菊汁液的2mL细胞培养基(即果香菊汁液占细胞培养基的体积百分比为0.125％)。

控制组的实验培养基为单纯的2mL细胞培养基(即不含果香菊汁液)。

对照组的实验培养基为单纯的2mL细胞培养基(即不含果香菊汁液)。

5.添加DCFH-DA溶液使其于培养基的浓度为10μg/ml，于37℃下反应40分钟。

6.于DCFH-DA处理后，于实验组的实验培养基以及对照组的实验培养基分别加入H₂O₂，并于37℃下反应1小时。具体来说，35％wt的双氧水先稀释成100mM(将10μL的双氧水加入990μL的二次蒸馏水)，再取20μL的100mM的双氧水加入2mL的细胞培养盘中。

7.反应后，每孔以1ml PBS溶液清洗细胞2次。

8.以Hoechst 33342(1:20000稀释)进行染色，避光作用5分钟。

9.以萤光显微镜避光观察各组细胞，并拍摄照片以纪录细胞内绿萤光表达的程度。相关图式如图1。

实验结果

如图1所示，控制组的ROS含量为1.0，由空白控制组、对照组的结果可知，在经过双氧水处理后后，具有高ROS表达(高萤光表达)的细胞比例大幅增加至13.9倍，显示双氧水确实会导致细胞内产生活性氧物质，进而对纤维母细胞产生后续伤害。另一方面，根据对照组以及实验组的结果可知，当细胞经过果香菊汁液处理后，具有高ROS表达的细胞比例相较于对照组明显减少至1.4倍。显示果香菊汁液可有效减少活性氧物质在细胞内的产生或累积，可作为一种活性氧物质清除剂。亦即，果香菊汁液可透过降低细胞内活性氧物质含量，减少细胞受到双氧水等强氧化物质等所导致的氧化伤害。

[实施例4]：细胞实验-果香菊汁液提升超氧化物歧化酶的活性

人类皮肤纤维母细胞购自中国台湾生物资源保存及研究中心(BioresourceCollection and Research Center,BCRC)，编号BCRC 60153。将所述细胞培养于添加10％胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(GIBCO公司，编号10438-026，美国)、0.1mM非必需胺基酸、1.5g/L碳酸氢钠(Sigma公司，编号S5761，美国)、1mM丙酮酸钠(GIBCO公司，编号11360-070，美国)的最低必需培养液(Minimum essential medium,MEM)(Eagle)(配于厄尔平衡盐溶液(Earle's Balanced Salt Solution,Earle's BSS))(GIBCO公司，编号41500-034，美国)。

在含有2mL上述培养基的6孔培养盘中每个孔洞接种2×105个人类皮肤纤维母细胞，然后于37℃培养隔夜。在移除培养基之后，将细胞分成2组，其中包括1个对照组及1个实验组。将0.5mg/mL果香菊汁液及1mM H2O2添加至实验组的细胞中并于37℃作用6小时，至于对照组的细胞则不做任何处理。接着，将各组细胞于37℃下培养24小时。之后，移除培养基并以1X PBS(Gibco)清洗1次，然后加入胰蛋白酶(trypsin)来处理细胞3分钟，继而用培养基停止胰蛋白酶活性并转移至1.5mL离心管中。接着，以300xg离心5分钟，然后以PBS清洗，接而以300xg离心5分钟。之后，加入30μL的1X细胞提取缓冲液，然后将细胞悬浮液在冰上反应30分钟，每10分钟涡旋(vortex)混合。接着，将破碎的细胞悬浮液在4℃以10,000xg离心10分钟以除去不溶物质，然后将25μL的1X SOD缓冲液加入活性对照孔的底部。之后，添加25μL制备的SOD标准品(S1～S7，参见表1)。

表1:

之后，将25μL的样品加入适当孔的底部，然后对每孔添加150μL的Master Mix。接着，使用多道移液器(multichannel pipet)向所有孔中加入25μL之1X黄嘌呤溶液(Xanthine solution)以起始反应，然后立即将培养盘转移至微量滴定盘读取仪(microtiter plate reader)，并在室温下每分钟以450nm读取吸光值，持续10分钟。

各组之间的统计学显著差异是藉由史徒登氏t-检定来决定。本实施例的结果显示于图2。

图2是本发明果香菊汁液在提升皮肤纤维母细胞的SOD活性上的功效的数据图。由图2可见，与对照组相较下，实验组的SOD活性有显著的提升(与对照组比较，实验组的SOD活性提升约117.5％)。本实施例的结果显示，本发明果香菊汁液具有提升皮肤纤维母细胞的SOD活性的功效。

[实施例5]：抗皮肤发炎的效用评估

于此，以人类CXCL8/IL8的ELISA分析套组、紫外线照射室配合酵素免疫分析仪(ELISA reader)，测定人类初代皮肤角质细胞HPEK-50经果香菊汁液处理后，其细胞中抗发炎因子的变化。

材料与仪器

1.细胞株：人类初代皮肤角质细胞(Human primary epidermal keratinocytes)HPEKp(CELLnTEC公司(瑞士)，HPEK-50)。

2.培养基：无血清的角质细胞培养液(keratinocyte-SFM)(Gibco公司，美国，编号为#10724-011)。

3.紫外线照射室(Vilber公司)。

4.人类IL8的ELISA分析套组：购自R&D systems，型号D8000CD8000C，此套组中包含以下试剂：

(1)捕获抗体(capture antibody)

(2)侦测抗体(detection antibody)

(3)链霉亲和素-HRP(Streptavidin-HRP)

(4)清洗溶液(Washing buffeer)：为磷酸缓冲盐溶液(PBS溶液)

(5)受质溶液(四甲基联苯胺tetramethyl-benzidine,TMB)

(6)终止溶液(stop solution)

5.酵素免疫分析仪(ELISA reader)，购自BioTek公司。

6.substrate solution(R&D systems)。

7.H₂SO₄，购自Sigma-Aldrich公司。

8.细胞培养箱，购自Astec公司。

9.振荡器(shaker)，购自GenePure公司。

10.果香菊汁液：此实验中所使用的果香菊汁液是透过如上实施例1所获得。

检测目的

已知介白素8(interleukin-8，IL-8)为一种细胞激素，具有促进发炎反应产生的功能，当发炎反应产生时，因为发炎组织会释放出特定的细胞激素以吸引特定功能的细胞至特定的组织，IL-8在中性白血球的趋化作用上扮演重要的角色。

紫外光中的UVB具高能量，能穿透至皮肤表皮导致皮肤晒伤，并造成皮肤发炎及红肿。

实验步骤

实验将会分为1个控制组、1个对照组(UVB照射)、1个实验组(UVB照射及添加果香菊汁液)共三组进行，各组分别进行三重复试验：

1.将人类初代皮肤角质细胞以每孔5×10⁴个的方式，接种于每孔培养于每孔含0.5ml培养基的24孔培养盘中。

2.将培养盘置于细胞培养箱，于37℃下培养24小时后，移除培养基。

3.使用紫外线照射室，以300mJ/cm²的强度对对照组、实验组，诱发发炎反应，并同时将0.125mg/mL果香菊汁液分别添加至实验组的细胞中，至于控制组的细胞则不做任何处理(不照UVB，亦不添加果香菊汁液)。

4.各组细胞在37℃下培养24小时后，吸取120μL的细胞培养上清液做为样品，使用人类IL8的ELISA分析套组对此些样品中IL8进行分析。

5.首先，以PBS稀释捕获抗体(capture antibody)，将经稀释的捕获抗体以每孔100μL的量涂布至96孔微盘底部，并于4℃作用过夜。

6.接着，以200μL的清洗缓冲液(含0.05％吐温20(Tween 20)，制备于PBS)清洗96孔微盘3次。

7.以300μL的阻断缓冲液(Block buffer)(1％BSA制备于PBS)进行阻断，接着于37℃下作用3小时。

8.之后，以200μL的清洗缓冲液清洗96孔微盘3次。

9.添加100μL的样品及标准品(配置于稀释液(0.1％BSA配于PBS))，接而于37℃下与捕捉抗体进行结合2小时。

10.接着，以200μL的清洗缓冲液清洗96孔微盘3次。

11.然后添加100μL的侦测抗体(detection antibody)，接而于37℃下侦测捕捉抗体2小时。

12.之后，以200μL的清洗缓冲液清洗96孔微盘3次。

13.添加100μL的链霉亲和素-HRP(Streptavidin-HRP)，接而于室温下作用20分钟。

14.之后，以200μL的清洗缓冲液清洗96孔微盘3次。

15.然后添加100μL的受质溶液(substrate solution)(R&D systems)，于室温下作用20分钟。

接着，添加50μL的终止溶液(stop solution)来中止反应，最后以酵素免疫分析仪测量其450nm的吸光值。再以Excel软体进行统计分析。

各组之间的统计学显著差异是藉由史徒登氏t-试验(Student’s t-test)来决定。本实施例的结果显示于图3。

图3是本发明果香菊汁液在抗皮肤发炎上的功效的数据图。由图3可见，与对照组相较之下，UVB组的IL-8产生量有显著的提升至约115.2％，这表示UVB会对人类初代皮肤角质细胞产生发炎反应。而与UVB组相较之下，实验组的IL-8产生量降低105.9％。本实施例的结果显示，本发明果香菊汁液具有抗皮肤发炎的功效，可使皮肤保护力升高。

而为证实果香菊汁液对于人体的功效，亦进行相关人体实验如下。

[实施例6]：人体实验-肌肤的保湿度检测

使用样品：含果香菊汁液的精华液的面膜(以面膜布浸泡于如下所述的含有果香菊汁液的精华液中，使其充分吸收后制得)以及安慰剂面膜(以相同型号的面膜布浸泡于与前述精华液中，但其中的果香菊汁液替换成等重的水)，再使其充分吸收后制得。于此实施例中，各面膜是含25mL的对应精华液。

含有果香菊汁液的精华液成分：三仙胶0.2wt％、馨鲜酮0.6wt％、1,3-丁二醇5wt％、三乙醇胺0.1wt％、己二醇0.6wt％、果香菊汁液0.5wt％，其余为水。其中，此果香菊汁液是由实施例1的制备方式而得。

受试者人数：7位20-55岁的男性及女性受试者。

实验方式：受试者将全脸清洁后，依据不同检测项目，使用对应的仪器及测量方式，纪录左右半脸于使用面膜前的数值、或拍摄使用前的照片。而后，针对瞬效试验，分别将果香菊汁液面膜以及安慰剂面膜贴敷于受试者的右半脸及左半脸上，经15分钟后取下，再以指腹稍加按摩左半脸与右半脸。待面膜移除约5分钟后，再以对应的仪器及测量方式，进行测量或拍摄照片，再与自身原左半脸、或右半脸的数值进行对照(使用前与使用后欲进行检测时，受试者所在的测试区域的温度与湿度为一致，以减少外界的温湿度等因素会对肌肤所造成的影响)。针对长效试验，对受试者以前述方法连续使用4周之前及之后进行检测。

使用购自德国Courage+Khazaka electronic公司的肌肤含水量检测探头

CM825(C+K Multi Probe Adapter System,Germany)对同一受试者在使用面膜前与后的面部肌肤进行检测。所述检测探头是基于电容的原理进行测量。当水分含量发生变化时，肌肤的电容值亦发生变化，故可通过测定肌肤电容值，分析肌肤表面的含水量。

请参阅图4A。所述图是受试者在使用含本案果香菊汁液的面膜前与后的瞬效(15分钟)的肌肤含水量，以受试者使用前的含水量为100％。其中，受试者使用后的肌肤含水量增加至约119.5％，果香菊汁液能够立即提供良好的保湿功效，提升肌肤的保湿度，使肌肤不再因干燥而变成粗糙。

请参阅图4B。所述图是受试者在使用含本案果香菊汁液的面膜前与后的长效(4周)的肌肤含水量，以受试者使用前的含水量为100％。其中，受试者使用后的肌肤含水量增加至约110.7％，果香菊汁液能够长期提供良好的保湿功效，提升肌肤的保湿度，使肌肤不再因干燥而变成粗糙。

[实施例7]：人体实验-肌肤泛红检测

使用美国Canfield所贩售的VISIA全脸肤质检测仪拍摄，运用多重光谱影像技术对[实施例6]中的同一受试者在使用面膜前与后的面部分析肌肤泛红面积的数值。肌肤红色区(深色)是侦测脸部发炎、敏感的状态，数值越低表示发炎敏感程度越低。

请参阅图5A，所述图是受试者在使用含本案果香菊汁液的面膜前与后的瞬效(15分钟)的肌肤泛红面积，以受试者使用前的肌肤泛红面积为100％。其中，受试者使用后的泛红面积减少至89.4％，使用含本案果香菊汁液的面膜后，肌肤上的泛红面积立刻明显减少，具有良好的肌肤镇静功效，避免肌肤发炎敏感。

请参阅图5B，所述图是受试者在使用含本案果香菊汁液的面膜前与后的长效(4周)的肌肤泛红面积，以受试者使用前的肌肤泛红面积为100％。其中，受试者使用后的泛红面积减少至91.0％。长期使用含本案果香菊汁液的面膜后，肌肤上的泛红面积明显减少，具有良好的肌肤镇静功效，避免肌肤发炎敏感。

[实施例8]：人体实验-经皮水分散失量的检测

使用购自德国Courage+Khazaka electronic公司的肌肤水分散失检测探头TM300(C+K Multi Probe Adapter System,Germany)对[实施例6]中的同一受试者在使用果香菊汁液精华液的面膜或安慰剂前与后的面部肌肤进行检测。所述检测探头是使用两端开放的圆柱形腔体在皮肤表面形成相对稳定的测试环境，通过测定不同两点的水蒸气压梯度，计算出经表皮蒸发的水分量，以此来衡量皮肤表面水分流失情况。

由图6可知，相较于使用果香菊汁液精华液的面膜之前，在持续使用果香菊汁液精华液的面膜4周后，经表皮水分散失率显著改善约94.2％。基此可知，果香菊汁液以外用方式涂敷于肌肤上，确实可使经表皮水分散失率减少，因此提升肌肤的保湿能力，并具改善TEWL值异常的相关皮肤疾病的潜力。

当然，本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。

Claims

1.一种果香菊(Chamaemelum nobile)提取物用于制备调理肌肤的组合物的用途，其特征在于：所述果香菊汁液是以一含水的溶剂进行提取。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述组合物用于抗发炎及/或提高超氧化物歧化酶的活性。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于：所述组合物是通过降低活性氧物质及/或降低白血球介素-8(IL-8)基因的表达量。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述组合物用于强化肌肤屏障。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述组合物用于降低肌肤的红斑生成。

6.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述组合物用于提升肌肤的保湿度。

7.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述果香菊汁液的浓度为至少1重量％。

8.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述组合物进一步包含一肌肤上可接受的载体。

9.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述组合物的形式为粉末状、颗粒状、液状、胶状或膏状的剂型。

10.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述组合物是进一步制备成保养品组合物、保健食品组合物、或化妆品组合物。