CN115785219A - 具有缓解代谢综合征的谷糠活性肽及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物活性肽领域，公开了一种具有缓解代谢综合征的谷糠活性肽及其制备方法与应用。其氨基酸序列为Ser‑Ile‑Pro‑Ala‑Phe‑Cys‑Arg(SIPAFCR)或Gly‑Gln‑Pro‑Trp‑Pro‑Pro‑Ala‑Ser‑Phe‑Ala‑Cys‑Arg(GQPWPPASFACR)。本发明所提供的谷糠活性肽具有激活PPARγ的活性，可以显著降低脂肪细胞内脂质累积，胰岛素抵抗及细胞内TG、TC、LDL的含量，同时显著升高了细胞内HDL的水平。由此表明：SIPAFCR和GQPWPPASFACR具有缓解代谢综合征的效应。本发明不仅能够提高谷糠的经济附加值，还为预防和/或缓解代谢综合征相关医药产品的开发利用提供了新思路，具有广泛的应用前景。

Description

具有缓解代谢综合征的谷糠活性肽及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于生物活性肽领域，具体涉及一种具有缓解代谢综合征的谷糠活性肽及其制备方法与应用。

背景技术

代谢综合征(metebolic syndrome,MS)是一组由遗传因素与环境因素共同决定的，以多种代谢性疾病(如中心性肥胖、糖尿病、高血压、血脂异常及高尿酸血症等)合并出现为特点，以胰岛素抵抗为共同病理生理基础的临床征候群。近年来，代谢综合征发病率显著增加，已成为中、老年人最常见的疾病，同时被认为是引发心脑血管事件的高危风险因素及导致人类致死、致残的主要原因之一。因此，随着临床需求的快速增长，缓解代谢综合征药物及功能食品的研发迫在眉睫。PPARγ作为过氧化物酶体增殖物激活受体(PeroxisomeProliferator-Activated Receptors,PPAR)超家族成员中的一个重要亚型，是调控代谢稳态的关键核转录因子，在促进脂肪细胞分化，增加胰岛素敏感性，调控肥胖等代谢性疾病的发生、发展及防治过程中扮演重要角色，已成为人类代谢综合征疾病防治的重要干预靶点。因此，PPARγ激活剂对治疗代谢综合征具有积极的临床意义。近年来研究显示：植物肽类活性物质作为一类有益于人类健康的活性因子，对代谢综合征相关疾病特征具有很好的防治效应，且副作用较小，是代谢综合征药物筛选的重要宝库。

谷子，拉丁名：Setaria italica，是我国的主要粮食作物。谷子中蛋白肽含量较高，营养丰富，适宜于亚健康人群食用。研究显示：除小米中含有丰富的蛋白肽外，还有一大部分蛋白成分富集于小米谷糠中。谷糠蛋白是已知谷物中过敏性最低的蛋白质，且必需氨基酸的构成接近FAO/WHO推荐的标准模式，极具医药开发潜力。我国是谷子的起源地，谷子的种植面积及产量居世界第一位，谷糠产量巨大，但大部分被用作饲料，目前对于谷糠蛋白肽功效成分的报道相对缺乏，造成了这一宝贵资源的严重浪费。因此，充分利用谷糠蛋白资源，深入挖掘其中具医药功效的肽类成分并阐明其分子机理，对于谷糠蛋白资源药用价值的提升具有重要意义。

发明内容

针对上述问题本发明提供了一种具有缓解代谢综合征的谷糠活性肽及其制备方法与应用。具体是：从谷糠中制备了活性肽，经分离纯化及质谱鉴定，确定出两条肽的氨基酸序列。通过脂肪细胞模型，发现该序列活性肽具有显著缓解代谢综合征的作用。

为了达到上述目的，本发明采用了下列技术方案：

本发明提供了一种具有缓解代谢综合征的谷糠活性肽，所述活性肽的氨基酸序列为Ser-Ile-Pro-Ala-Phe-Cys-Arg(以下简称SIPAFCR)或Gly-Gln-Pro-Trp-Pro-Pro-Ala-Ser-Phe-Ala-Cys-Arg(以下简称GQPWPPASFACR)。

进一步，所述谷糠活性肽可通过人工合成的方式获得；也可通过对谷糠蛋白进行酶解消化，质谱鉴定获得。

进一步，所述活性肽具有显著激活PPARγ的活性；能显著降低脂肪细胞内的脂滴的大小和数量；显著增加脂肪细胞的葡萄糖摄取率，显著降低胰岛素抵抗效应；显著降低脂肪细胞内甘油三酯(TG)、总固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)的含量，并显著升高细胞内高密度脂蛋白(HDL)的含量。

本发明第二方法提供了一种前文所述谷糠活性肽的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，谷糠蛋白提取物的制备：

步骤2，谷糠蛋白肽组分的获得；

步骤3，谷糠蛋白肽组分的LC MS/MS鉴定；

步骤4，结合步骤3的鉴定结果，进行肽段生物活性预测，将生物活性大于0.8的肽段使用Auto Dock软件分析与PPARγ的结合模式，获得所述具有缓解代谢综合征的谷糠活性肽。

进一步，所述步骤1的具体过程为：称取小米米糠适量，粉碎后，过60目筛，取谷糠粉；按照1：7-9的比例加入蛋白提取液；在4-6℃冷循环中搅拌24-64h，过滤，收集滤液，将澄清滤液加热升温至80℃，孵育20-30min；过滤后，向澄清滤液加入米糠4倍重量的硫酸铵粉末进行沉淀，静置6-10h；过滤，收集沉淀用20mmol/L Tris-HCl，pH 8.0蛋白缓冲液溶解后，过滤并用分子量为3kDa超滤装置脱盐，得到所述谷糠蛋白提取物；其中所述蛋白提取液为20mmol/LTris-HCl溶液，含0.85％NaCl，pH 8.0。

进一步，所述步骤2的具体过程为：将谷糠蛋白提取物在体外先进行模拟胃液消化，模拟胃液是200-300U/mL胃蛋白酶的缓冲液，用6mol/L的盐酸调节pH值等于1.5-2.0，37℃避光消化25-35min；再进行模拟小肠液消化，模拟小肠液是200-250U/mL胰蛋白酶的缓冲液，用5％的碳酸氢钠调节pH值等于6.5-7.5，37℃避光消化1.5-2.0h，得到的水解液用100Da透析袋进行透析脱盐，得到谷糠蛋白肽组分。

进一步，所述步骤3的具体过程为：

色谱条件：使用Easy nLC 1200色谱系统进行色谱分离；流动相：A相为0.1％甲酸水溶液，B相为0.1％甲酸、乙腈和水混合溶液，其中乙腈为80％；梯度洗脱：0-2min，B液线性梯度从3％到5％；2-42min，B液线性梯度从5％到25％；42-52min，B液线性梯度从25％到45％；52-55min，B液线性梯度从45％到90％；55-70min，B液维持在90％；流速为300nL/min；

质谱条件：纳米ESI源；肽段分离后用Q-Exactive Plus质谱仪进行DDA(数据依赖采集)质谱分析。

进一步，所述步骤4的具体过程为：依据步骤3的质谱信息，并结合PeptideRanker预测肽段生物活性，将生物活性大于0.8的肽段使用Auto Dock软件分析与PPARγ的结合模式，确定出具有生物活性且与PPARγ结合能力较强的氨基酸序列：Ser-Ile-Pro-Ala-Phe-Cys-Arg和Gly-Gln-Pro-Trp-Pro-Pro-Ala-Ser-Phe-Ala-Cys-Arg。

第三方面，本发明提供了一种前文所述谷糠活性肽在制备预防和/或缓解代谢综合征产品中的应用。

进一步，所述产品为保健品或药品。

第四方面，本发明提供了一种预防和/或缓解代谢综合征的保健品或药品，含有前文所述的谷糠活性肽。

与现有技术相比本发明具有以下优点：

(1)本发明提供的新型活性肽，其缓解代谢综合征效果显著，且采用谷糠为原料，生产成本低。

(2)本发明提供的新型活性肽均能够显著激活PPARγ的活性，同时可以显著降低脂肪细胞内脂质累积，缓解胰岛素抵抗和降低细胞中TG、TC和LDL水平，显著升高HDL水平，说明SIPAFCR和GQPWPPASFACR具有缓解代谢综合征的功效；

(3)本发明提供的新型生物活性肽，分子量在1KDa左右，能够被肠道直接吸收利用，生物利用度高，具有很好的应用前景。

附图说明

图1谷糠多肽总离子流图；

图2各实验组的PPARγ激活情况(A：GQPWPPASFACR对PPARγ激活的影响，B：SIPAFC对PPARγ激活的影响，C，D：定量分析结果)；

图3各实验组的生理指标(A：TG水平，B：TC水平，A：LDL水平，B：HDL水平)；

图4各实验组的脂质累积情况(A：油红O染色结果，B：定量分析结果)；

图5各实验组的细胞葡萄糖摄取情况；

图6各实验组的胰岛素抵抗情况。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清晰明白，以下结合具体实施例，对本专利进行进一步详细说明。此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

以下实施例中的所有实验结果均以平均值±标准差表示(Mean±SD)，采用单因素方差分析(ANOVA)比较各组间的差异性，选择“Duncan”检验进行显著性分析，*表示空白组与各组间差异显著(p<0.05)，**表示空白组与各组间差异极显著(p<0.01)。

实施例1：谷糠活性肽的制备、分离纯化及鉴定

(1)称取小米米糠5kg，粉碎后，过60目筛，取谷糠粉。按照1：8的比例加入蛋白提取液(20mmol/L Tris-HCl溶液，含0.85％NaCl，pH 8.0)。在6℃冷循环中搅拌48h，板框过滤，收集滤液，将澄清滤液加热升温至80℃，孵育25min。过滤后，向澄清滤液加入20kg的硫酸铵粉末进行沉淀，静置8h。过滤，收集沉淀用16L的20mmol/L Tris-HCl，pH 8.0蛋白缓冲液溶解后，过滤并用分子量为3kDa超滤装置脱盐，得到谷糠蛋白提取物54g；

(2)将上述谷糠蛋白提取物在体外先进行模拟胃液消化，模拟胃液是250U/mL胃蛋白酶的缓冲液，用6mol/L的盐酸调节pH值等于1.6，37℃避光消化25min；其次进行模拟小肠液消化，模拟小肠液是200U/mL胰蛋白酶的缓冲液，用5％的碳酸氢钠调节pH值等于6.8，37℃避光消化1.5h，得到的水解液用100Da透析袋进行透析脱盐，得到谷糠蛋白肽组分；

(3)将上述肽组分进行LC-MS/MS鉴定，色谱条件：使用Easy nLC 1200色谱系统(Thermo Scientific)进行色谱分离；流动相：A相为0.1％甲酸水溶液，B相为0.1％甲酸、乙腈和水混合溶液(其中乙腈为80％)；梯度洗脱：0-2min，B液线性梯度从3％到5％；2-42min，B液线性梯度从5％到25％；42-52min，B液线性梯度从25％到45％；52-55min，B液线性梯度从45％到90％；55-70min，B液维持在90％；流速为300nL/min。质谱条件：纳米ESI源；肽段分离后用Q-Exactive Plus质谱仪(Thermo Scientific)进行DDA(数据依赖采集)质谱分析；

(4)依据图1中质谱信息，并结合PeptideRanker(http://distilldeep.ucd.ie/PeptideRanker/)预测肽段生物活性，并将生物活性大于0.8的肽段使用Auto Dock软件分析与PPARγ的结合模式。

如表1所示，确定出具有生物活性且与PPARγ结合能力较强的氨基酸序列：Ser-Ile-Pro-Ala-Phe-Cys-Arg(SIPAFCR)，和Gly-Gln-Pro-Trp-Pro-Pro-Ala-Ser-Phe-Ala-Cys-Arg(GQPWPPASFACR)。

表1 Peptide Ranker评分>0.8的多肽序列与PPARγ的结合能力预测

实施例2：谷糠活性肽的制备、分离纯化及鉴定

(1)称取小米米糠5kg，粉碎后，过60目筛，取谷糠粉。按照1：7的比例加入蛋白提取液(20mmol/L Tris-HCl溶液，含0.85％NaCl，pH 8.0)。在4℃冷循环中搅拌24h，板框过滤，收集滤液，将澄清滤液加热升温至80℃，孵育20min。过滤后，向澄清滤液加入20kg的硫酸铵粉末进行沉淀，静置6h。过滤，收集沉淀用16L的20mmol/L Tris-HCl，pH 8.0蛋白缓冲液溶解后，过滤并用分子量为3kDa超滤装置脱盐，得到谷糠蛋白提取物50g；

(2)将上述谷糠蛋白提取物在体外先进行模拟胃液消化，模拟胃液是200U/mL胃蛋白酶的缓冲液，用6mol/L的盐酸调节pH值等于1.5，37℃避光消化30min；其次进行模拟小肠液消化，模拟小肠液是230U/mL胰蛋白酶的缓冲液，用5％的碳酸氢钠调节pH值等于6.5，37℃避光消化1.8h，得到的水解液用100Da透析袋进行透析脱盐，得到谷糠蛋白肽组分；

(3)、(4)同实施例1。

实施例3：谷糠活性肽的制备、分离纯化及鉴定

(1)称取小米米糠5kg，粉碎后，过60目筛，取谷糠粉。按照1：9的比例加入蛋白提取液(20mmol/L Tris-HCl溶液，含0.85％NaCl，pH 8.0)。在5℃冷循环中搅拌64h，板框过滤，收集滤液，将澄清滤液加热升温至80℃，孵育30min。过滤后，向澄清滤液加入20kg的硫酸铵粉末进行沉淀，静置10h。过滤，收集沉淀用16L的20mmol/L Tris-HCl，pH 8.0蛋白缓冲液溶解后，过滤并用分子量为3kDa超滤装置脱盐，得到谷糠蛋白提取物52g；

(2)将上述谷糠蛋白提取物在体外先进行模拟胃液消化，模拟胃液是300U/mL胃蛋白酶的缓冲液，用6mol/L的盐酸调节pH值等于2.0，37℃避光消化35min；其次进行模拟小肠液消化，模拟小肠液是250U/mL胰蛋白酶的缓冲液，用5％的碳酸氢钠调节pH值等于7.5，37℃避光消化2.0h，得到的水解液用100Da透析袋进行透析脱盐，得到谷糠蛋白肽组分；

(3)、(4)同实施例1。

实施例4：评价SIPAFCR和GQPWPPASFACR对PPARγ的激活效应

按5×10⁶个/mL的密度将生长状态良好的HepG2细胞接种于6孔板中，将细胞分为对照组、模型组、SIPAFCR组(浓度为8μmol/L)和GQPWPPASFACR组(浓度为8μmol/L)，每组设6个复孔。待细胞生长至80％时，模型组、SIPAFCR组(浓度为8μmol/L)和GQPWPPASFACR组(浓度为8μmol/L)中加入终浓度为1mmol/L的游离脂肪酸(油酸：棕榈酸＝2：1)诱导24h，诱导结束后，弃去诱导剂。SIPAFCR组(浓度为8μmol/L)和GQPWPPASFACR组(浓度为8μmol/L)加药处理48h后，吸去上清液，将细胞收集至1.5mL的EP管。3500rpm，4℃，离心10min，弃上清。加入细胞蛋白裂解液，冰上裂解30min，11000rpm，4℃，离心15min后，将上清液移至新的EP管中，按照BCA蛋白定量试剂盒的检测方法对样品中的蛋白进行定量。加入蛋白上样缓冲液，100℃金属浴加热5min使蛋白充分变性，置于-80℃冰箱保存备用。采用SDS-PAGE凝胶电泳法分离蛋白质样品后，转移到PVDF膜上，5％脱脂牛奶或5％BSA封闭2h，4℃过夜孵育一抗，用辣根过氧化物酶标记法检测目的蛋白表达。化学发光法通过凝胶成像仪显像并拍照，使用Imag J软件分析目的蛋白灰度值，以PCNA或GAPDH作为内参。

众所周知，PPARγ激活后能够进入细胞核，作为转录因子调节下游靶基因的表达。如图2所示，在HepG2细胞中，SIPAFCR和GQPWPPASFACR可以显著增加细胞核中PPARγ的表达，表明SIPAFCR和GQPWPPASFACR可以显著激活PPARγ活性。

实施例5：评价活性肽SIPAFCR和GQPWPPASFACR缓解代谢综合征的功效

实验过程中所用的活性肽SIPAFCR和GQPWPPASFACR，是通过固相合成得到的，纯度≥95％。

(1)实验分组及造模方法：将3T3-L1前脂肪细胞接种于24孔培养板，使每孔细胞密度为5×10⁴个/mL，用含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基在37℃，5％CO₂培养；待细胞融合2天后，每孔加胰岛素(10μg/mL)，地塞米松(1μmol/L)和IBMX(0.5mmol/L)连续诱导48h，随后换以胰岛素(10μg/mL)配置的高糖DMEM培养基再诱导48h，最后以10％胎牛血清的高糖DMEM培养基继续培养，每2天换培养液一次，到第14天时，分化结束。将分化结束的成熟脂肪细胞分为3组，每组6孔，依次为模型组、SIPAFCR组和GQPWPPASFACR组，两种活性肽的处理浓度均为8μmol/L，处理时间：48h。

(2)样本采集及脂代谢相关指标检测：收集(1)中各组分别处理后的3T3-L1成熟脂肪细胞，加入0.2mL PBS进行匀浆，冰水浴条件下超声破碎(功率:300W，5秒/次，间隔30秒，重复5次)，制备好的匀浆液直接使用TG、TC、LDL及HDL测定试剂盒，分别检测细胞中TG、TC、LDL和HDL水平。

成熟脂肪细胞中存在脂质代谢紊乱，因此细胞内TG、TC、LDL含量的升高和HDL含量的降低也是判断脂质代谢紊乱的重要指标。细胞内TG、TC、LDL和HDL的结果，如图3所示，模型组成熟脂肪细胞中的TG、TC、LDL含量提高，HDL含量降低，均可说明模型组的脂质代谢紊乱严重，活性肽处理显著降低了TG、TC和LDL含量，升高了HDL水平，且与模型组相比，具有显著差异，说明SIPAFCR和GQPWPPASFACR能够显著缓解成熟脂肪细胞中的脂质代谢紊乱，具有缓解代谢综合征的潜力。

(3)油红O染色：油红O是目前被认为最优良的脂肪染色染料，为脂溶性，在脂肪内能高度溶解，从而染色，并能保存组织细胞中的脂肪滴。将(1)中各组处理后的3T3-L1成熟脂肪细胞，用PBS洗3次，4％多聚甲醛在37℃固定细胞30min，60％异丙醇处理3min，加入油红O染液室温染色30min，再用ddH₂O洗3次，加入Mayer苏木素染色液染核3min，用ddH₂O洗3次后加入200μL ddH₂O覆盖细胞，显微镜下观察并拍照，并使用Image J软件进行定量分析。

油红O结果如图4所示，模型组细胞内有大量脂滴聚集，有些甚至呈现出大量融合形成大脂滴的情况，并且细胞变大、变圆，细胞中出现明显的脂滴，并随着分化程度的加深，脂滴积聚增多。模型组细胞在经过SIPAFCR和GQPWPPASFACR处理48h后，可以看到SIPAFCR和GQPWPPASFACR显著减少了模型组细胞内的脂滴大小和数量。

(4)细胞葡萄糖吸收测定：采用上述(1)中分化成熟的3T3-L1脂肪细胞，换上含1％BSA的DMEM培养基，于37℃，5％CO₂培养箱中培养24h。小心弃去培养液，换上含有10^-9mol/L胰岛素的含1％BSA的DMEM培养基，将细胞分为模型组、SIPAFCR组(浓度为8μmol/L)和GQPWPPASFACR组(浓度为8μmol/L)，每组设6个复孔，于37℃，5％CO₂培养箱中孵育48h后，用葡萄糖试剂盒检测培养基上清液中的葡萄糖含量，观察SIPAFCR和GQPWPPASFACR对成熟脂肪细胞葡萄糖消耗的影响。

进一步评价SIPAFCR和GQPWPPASFACR在胰岛素刺激的情况下对成熟脂肪细胞糖吸收的影响。如图5所示，在胰岛素刺激的情况下，SIPAFCR和GQPWPPASFACR均能够增加脂肪细胞内葡萄糖摄取率(p＜0.05)，且提高效果顺序为SIPAFCR＞GQPWPPASFACR。

(5)胰岛素抵抗测定：将24孔培养板中分化成熟的3T3-L1脂肪细胞以含1％BSA的低糖DMEM培养基(含葡萄糖5.5mmol/L)培养12h后，分为模型组、SIPAFCR组(浓度为8μmol/L)和GQPWPPASFACR组(浓度为8μmol/L)。模型对照组以含1％BSA、25mmol/L葡萄糖、10^-6mol/L胰岛素的DMEM培养基培养；SIPAFCR组以含1％BSA、25mmol/L葡萄糖、10^-6mol/L胰岛素、8μmol/L SIPAFCR的DMEM培养基培养；GQPWPPASFACR组以含1％BSA、25mmol/L葡萄糖、10^-6mol/L胰岛素、8μmol/L GQPWPPASFACR的DMEM培养基培养。于37℃，5％CO₂培养箱中孵育48h后，小心弃去培养液，先用PBS洗涤2次，吸出，换上含10^-9mol/L胰岛素的无血清DMEM培养基，于37℃，5％CO₂培养箱中孵育30min后，用葡萄糖试剂盒检测培养基上清液中的葡萄糖含量。以未接种细胞空白复孔的糖含量均值相减，得出各孔细胞的葡萄糖消耗量，观察SIPAFCR和GQPWPPASFACR对成熟脂肪细胞胰岛素抵抗模型中葡萄糖消耗的影响。

葡萄糖摄取利用障碍是胰岛素抵抗的主要症状，采用高糖高胰岛素诱导成熟脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型，以培养基中葡萄糖消耗量反应胰岛素抵抗的程度。如图6所示，SIPAFCR和GQPWPPASFACR能显著增加胰岛素抵抗状态下脂肪细胞的葡萄糖吸收，较模型组分别提高157.96％和72.55％(p＜0.05)，说明其能有效增加脂肪细胞的胰岛素敏感性。

既往大量研究显示，代谢综合征是以中心性肥胖、糖代谢或糖调节受损、高血压、血脂异常为主要特点，并以胰岛素抵抗为共同的病理生理基础。而本发明所提供的谷糠活性肽SIPAFCR和GQPWPPASFACR能够显著激活PPARγ，具有改善脂质代谢紊乱的作用，并能有效增加脂肪细胞的胰岛素敏感性。综上所述，SIPAFCR和GQPWPPASFACR具有缓解代谢综合征的效应。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，上述各实施方式还可以做出若干变形、组合和改进，这些都属于本专利的保护范围。因此，本专利的保护范围应以权利要求为准。

Claims (10)

1.一种具有缓解代谢综合征的谷糠活性肽，其特征在于：所述活性肽的氨基酸序列为Ser-Ile-Pro-Ala-Phe-Cys-Arg或Gly-Gln-Pro-Trp-Pro-Pro-Ala-Ser-Phe-Ala-Cys-Arg。

2.根据权利要求1所述的一种具有缓解代谢综合征的谷糠活性肽，其特征在于：所述谷糠活性肽可通过人工合成的方式获得；也可通过对谷糠蛋白进行酶解消化，质谱鉴定获得。

3.根据权利要求1所述的一种具有缓解代谢综合征的谷糠活性肽，其特征在于：所述活性肽具有显著激活PPARγ的活性；能显著降低脂肪细胞内的脂滴的大小和数量；显著增加脂肪细胞的葡萄糖摄取率，显著降低胰岛素抵抗效应；显著降低脂肪细胞内甘油三酯、总固醇、低密度脂蛋白的含量，并显著升高细胞内高密度脂蛋白的含量。

4.一种权利要求1-3任一项所述谷糠活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，谷糠蛋白提取物的制备：

步骤2，谷糠蛋白肽组分的获得；

步骤3，谷糠蛋白肽组分的LC-MS/MS鉴定；

步骤4，结合步骤3的鉴定结果，进行肽段生物活性预测，将生物活性大于0.8的肽段使用Auto Dock软件分析与PPARγ的结合模式，获得所述具有缓解代谢综合征的谷糠活性肽。

5.根据权利要求4所述的谷糠活性肽的制备方法，其特征在于，所述步骤1的具体过程为：

称取小米米糠适量，粉碎后，过60目筛，取谷糠粉；按照1：7-9的比例加入蛋白提取液；在4-6℃冷循环中搅拌24-64h，过滤，收集滤液，将澄清滤液加热升温至80℃，孵育20-30min；过滤后，向澄清滤液加入米糠4倍重量的硫酸铵粉末进行沉淀，静置6-10h；过滤，收集沉淀用20mmol/L Tris-HCl，pH 8.0蛋白缓冲液溶解后，过滤并用分子量为3kDa超滤装置脱盐，得到所述谷糠蛋白提取物；其中所述蛋白提取液为20mmol/L Tris-HCl溶液，含0.85％NaCl，pH 8.0。

6.根据权利要求4所述的谷糠活性肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2的具体过程为：

将谷糠蛋白提取物在体外先进行模拟胃液消化，模拟胃液是200-300U/mL胃蛋白酶的缓冲液，用6mol/L的盐酸调节pH值等于1.5-2.0，37℃避光消化25-35min；再进行模拟小肠液消化，模拟小肠液是200-250U/mL胰蛋白酶的缓冲液，用5％的碳酸氢钠调节pH值等于6.5-7.5，37℃避光消化1.5-2.0h，得到的水解液用100Da透析袋进行透析脱盐，得到谷糠蛋白肽组分。

7.根据权利要求4所述的谷糠活性肽的制备方法，其特征在于，所述步骤3的具体过程为：

色谱条件：使用Easy nLC 1200色谱系统进行色谱分离；流动相：A相为0.1％甲酸水溶液，B相为0.1％甲酸、乙腈和水混合溶液，其中乙腈为80％；梯度洗脱：0-2min，B液线性梯度从3％到5％；2-42min，B液线性梯度从5％到25％；42-52min，B液线性梯度从25％到45％；52-55min，B液线性梯度从45％到90％；55-70min，B液维持在90％；流速为300nL/min；

质谱条件：纳米ESI源；肽段分离后用Q-Exactive Plus质谱仪进行DDA质谱分析。

8.根据权利要求4所述的谷糠活性肽的制备方法，其特征在于，所述步骤4的具体过程为：

依据步骤3的质谱信息，并结合PeptideRanker预测肽段生物活性，将生物活性大于0.8的肽段使用Auto Dock软件分析与PPARγ的结合模式，确定出具有生物活性且与PPARγ结合能力较强的氨基酸序列：Ser-Ile-Pro-Ala-Phe-Cys-Arg和Gly-Gln-Pro-Trp-Pro-Pro-Ala-Ser-Phe-Ala-Cys-Arg。

9.权利要求1-3任一项所述谷糠活性肽在制备预防和/或缓解代谢综合征产品中的应用。

10.一种预防和/或缓解代谢综合征的保健品或药品，其特征在于：含有权利要求1-3任一项所述的谷糠活性肽。

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