CN115777930A - 一种青梅提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品医药技术领域，具体涉及一种青梅提取物及其制备方法和应用。本发明先通过压榨过滤得到青梅汁，然后通过先高温后低温分阶段长时间低温熬煮的方法得到青梅提取物，与传统的提取方法相比，本方法绿色环保，无需加入任何化学试剂，不会引入其他杂质，简便易行，成本低廉，产品为天然食品。与常用的青梅提取物相比，本发明提取得到的青梅提取物，对幽门螺杆菌和大肠杆菌的杀菌率大幅度提高，体外抗菌活性明显增强，对于金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌、李斯特氏菌等常见食源性病菌具有强效抗菌效果，具有广泛的市场应用前景和研究价值。
Description
技术领域
本发明属于食品医药技术领域，具体涉及一种青梅提取物及其制备方法，及其在抑制幽门螺杆菌和其它食源性致病菌中的应用。
背景技术
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是革兰氏阴性、微厌氧、单极多鞭毛的螺旋状杆菌，主要通过口-口途径在人与人之间传播。幽门螺杆菌经口进入胃后穿过胃黏液层，主要分布于胃黏膜组织中，可导致胃炎、胃溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等多种消化系统疾病，更有甚者会发展为胃癌。胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，在癌症死亡率中位列第三。大量流行病学证据表明，幽门螺杆菌感染是导致胃癌的重要因素，世界卫生组织也已将幽门螺杆菌列为Ⅰ类致癌物。我国属幽门螺旋杆菌感染高发国家，据统计，平均幽门螺杆菌感染率达54.76％，有约37万人死于胃癌。目前临床对幽门螺杆菌的治疗方法包括三联、四联抗生素杀菌疗法，但随着感染率的升高，幽门螺杆菌逐渐对药物产生耐药性，伴有人体肠道菌群失调等诸多副作用，根治幽门螺杆菌仍然难以解决，尤其能用在儿童治疗上的药物非常有限，并且抗药性高，严重破坏儿童的肠胃健康。因此亟需寻找一种天然成分代替抗生素来克服幽门螺杆菌耐药性的问题。
发明内容
本发明的目的在于解决上述问题，提供一种青梅提取物中的特有物质，及其在抑制幽门螺杆菌和其它食源性致病菌中的应用，并提供所述青梅提取物的制备方法。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
本发明的目的之一是提供一种青梅提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取青梅全果，洗净，去皮去核后，将果肉打碎成果泥；
(2)将果泥进行过滤，得到青梅汁；
(3)将步骤(2)的青梅汁进行熬煮，沸腾后转中火熬制起密集小泡后转小火，整个过程需要不停搅拌防止糊底，熬煮至呈膏状，得到青梅提取物。
优选的，所述步骤(1)中将青梅果肉打至粒径1-2mm大小的果泥，更优选采用压榨机进行打碎。
优选的，所述步骤(2)中，熬煮条件为：先升温至100℃，达到100℃后沸腾，将温度调节至65-75℃，熬煮至起密集小泡，100kg青梅熬煮约5-10小时，然后控制温度30-45℃，熬煮至呈膏状，100kg青梅熬煮约80-100小时，全过程注意翻拌以防糊底，熬煮完毕时整体呈膏状，固形物含量约为70％-80％。
优选的，所述青梅提取物中，梅素含量可达1.02g/kg。
本发明的另一目的是提供一种上述任一制备方法制备得到的青梅提取物，梅素含量可达1.02g/kg。
本发明的另一目的是提供一种上述任一制备方法得到的青梅提取物在制备幽门螺杆菌或其它食源性致病菌的抑菌剂中的应用。其中，所述其他食源性致病菌优选为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌、李斯特氏菌的至少一种。
本发明的另一目的是提供一种上述任一制备方法得到的青梅提取物在制备治疗或预防幽门螺杆菌或其它食源性致病菌引起的疾病的药物中的应用。其中，所述其他食源性致病菌优选为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌、李斯特氏菌的至少一种。
本发明的另一目的是提供一种有效抑制幽门螺杆菌或其它食源性致病菌感染的药物组合物，所述药物组合物包含上述制备方法制备得到的青梅提取物。其中，所述其他食源性致病菌优选为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌、李斯特氏菌的至少一种。
优选的，所述药物组合物的剂型为口服剂；更优选为咀嚼片、颗粒剂、肠溶胶囊、口服液等常见剂型。
优选的，所述青梅提取物为药物组合物的主要活性成分或唯一活性成分。
本发明的另一目的是提供一种上述制备方法得到的青梅提取物在制备治疗或预防幽门螺杆菌或其它食源性致病菌引起的疾病的食品中的应用。其中，所述其他食源性致病菌优选为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌、李斯特氏菌的至少一种。
优选的，所述食品的类型为发酵酒、饮料、罐头、糖果蜜饯、冷食等常见食品类型。
本发明的制备方法所制备得到的青梅提取物，对于幽门螺杆菌及常见的食源性致病菌如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌、李斯特氏菌等具有优秀的抗菌活性。通过实验发现，青梅提取物浓度为1.0％，作用时间为20min时对大肠杆菌(E.coli)的杀菌率为92.55％。研究青梅提取物对幽门螺杆菌(Hp)的杀菌效果，将条件设置为对幽门螺杆菌作用的青梅提取物浓度为1.0％，作用时间为5min，杀菌率达99.97％以上。实验验证本发明制备得到的青梅提取物对这些细菌存在优秀的抗菌活性，尤其是幽门螺杆菌和大肠杆菌对本发明的青梅提取物表现非常敏感，可知本发明的青梅提取物对于幽门螺杆菌和大肠杆菌体现出极为明显的灭杀活性，同时对于金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌、李斯特氏菌等常见食源性病菌也具有强效抗菌活性。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供了一种青梅提取物的制备方法，通过所述制备方法制备得到的青梅提取物对于常见的食源性致病菌具有优秀的抗菌能力，尤其是对于幽门螺杆菌具有快速强效的杀菌能力。因此本发明制备方法得到的青梅提取物能够作为活性成分适用于抗幽门螺杆菌及常见食源性致病菌的药物制备，还可进一步添加到食品或保健食品中，开发新型抗菌产品，为幽门螺杆菌患者提供一种天然安全的治疗方式。
本发明提出了一种抗幽门螺杆菌青梅提取物的制备方法，即先通过压榨过滤得到青梅汁，然后通过长时间低温熬煮的方法得到青梅提取物的富集产物。与传统常用的提取方法相比，本方法绿色环保，无需加入任何化学试剂，不会引入其他杂质，简便易行，成本低廉，且得到的是一种天然食品。采用本发明方法能够富集青梅中抗幽门螺杆菌的主要活性物质，从而提高青梅提取物的抗菌活性，与常用的青梅提取物相比，本发明提取得到的青梅提取物，对幽门螺杆菌和大肠杆菌的杀菌率大幅度提高，具有优秀的灭杀效果，同时抗菌活性明显增强，对于常见食源性病菌具有强效抗菌效果，具有广泛的市场应用前景和研究价值。
附图说明
图1为本发明实施例1制备得到的青梅提取物的示意图。
图2为本发明1％浓度青梅提取物对大肠杆菌的杀菌作用对比图，其中，左为对照例作用图，右为1％浓度青梅提取物作用10min图。
图3为本发明5％浓度青梅提取物对大肠杆菌的杀菌作用对比图，其中，左为对照例作用图，右为5％浓度青梅提取物作用10min图。
具体实施方式
下面通过具体实施例，并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明仅用于帮助理解本发明，并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均可通过常规的商业途径购买得到。
实施例1青梅提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取青梅全果约100kg，洗净并去皮去核后，用压榨机将果肉切至1-2mm大小；
(2)过滤获得青梅汁，先升温至100℃，达到100℃后沸腾，将温度调节至70±2℃，熬煮至起密集小泡，约6小时，然后控制温度45±2℃，熬煮至呈膏状，约80小时，全过程注意翻拌以防糊底，熬煮完毕时整体呈膏状，固形物含量约为75％，可获得约1.5kg的青梅提取物。
青梅是民间常见的一种水果，现代研究表明青梅提取物有抗菌抗病毒、促进血液循环、抗疲劳、护肝、改善肠胃消化功能、抗癌等功效，服用青梅汁可以促进胃肠活动，抑制幽门螺杆菌生长，降低黏膜炎症水平以缓解和改善胃炎症状。本发明通过研究发现，本发明得到的青梅提取物对某些食源性致病菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌等常见食源性致病菌有优秀的抗菌作用，更对幽门螺杆菌具有较好的杀灭效果。本发明所制备得到的青梅提取物中具有的梅素，含量可达1.02g/kg，且制备方法绿色环保、操作简便、不引入其他物质。梅素(Mumefural)是青梅中的5-羟甲基糠醛和部分有机酸反应生成的另一种产物，梅素的分子式为C12H12O9，分子量为300.22，化学式为1-[5-(2-甲酰基呋喃基)甲基]二氢2-羟基丙烷-1,2,3-三羧酸酯(1-[5-(2-formylfuryl)methyl]dihydrogen2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate)。
本发明得到了一种青梅提取物，且采用所述青梅提取物及其中的梅素对杀灭幽门螺杆菌以及其它食源性致病菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、志贺氏菌、沙门氏菌等常见食源性致病菌具有优秀的效果。在制备抗幽门螺杆菌药物及其它食源性致病菌药物中具有极高的应用价值，特别是能够作为治疗幽门螺杆菌感染、预防胃癌的辅助措施，降低幽门螺杆菌感染的癌变风险。
以下对本发明实施例1制备得到的青梅提取物的杀菌试验及效果进行表述：
试验例1试剂配制
(1)菌悬液的制备
取待测试菌的菌株第3～14代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物(18～24h)，用5mL 0.03mol/L PBS洗下菌苔，使菌悬浮均匀稀释，要求的浓度为:用100μl滴于5ml样液内，回收菌数为1×104cfu/ml～9×104cfu/ml)。
(2)培养基的制备
营养琼脂培养基：
除琼脂外其他成份溶解于蒸馏水中，调pH至7.2～7.4，加入琼脂，加热溶解，分装，于121℃压力蒸汽灭菌20min备用。
幽门螺杆菌培养基：
除琼脂外其他成分溶解于蒸馏水中，调pH至7.2～7.6，加入琼脂加热溶解，121℃压力蒸汽灭菌20min备用。冷却至50-55℃时加入7mL脱纤维羊血和1支HP抑菌剂，混匀，倾入无菌平皿备用。
(3)磷酸盐缓冲溶液的制备
无水磷酸氢二钠 2.83g
磷酸二氢钾 1.36g
蒸馏水加至 1000ml
将各成分加入到1000ml蒸馏水中，待完全溶解后，调pH至7.2～7.4，于121℃压力蒸气灭菌20min备用。
(4)中和剂的配制
3％吐温-80、0.5％硫代硫酸钠、0.5％L-组氨酸、0.5％蛋白胨、0.85％氯化钠、1.43％卵磷脂和0.1％半胱氨酸的PBS，25℃下混匀，静置待用。
试验例2杀菌实验
将试验菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液(要求的浓度为:用100μl滴于5ml样液内，回收菌数为1×104cfu/ml～9×104cfu/ml)。
取青梅提取物稀释样液和对照样液(与样液同等体积但不含抗菌成分，且经灭菌处理)各4管，分成4组。
取上述菌悬液，分别在每个青梅提取物样液和对照样液上滴加100μl均匀混合，开始计时，作用5、10、20min，将样液(0.5ml)分别滴入含5ml相应中和剂的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2-3个稀释度，分别吸取0.5ml，置于两个平皿，用凉至40-45℃的营养琼脂培养基15ml作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃±2℃培养48h，作活菌菌落计数。
试验重复3次。按下式计算杀菌率：
式中：X为杀菌率，％；NC为对照样品平均菌落数，cfu/ml；NS为青梅提取物样品平均菌落数，cfu/ml。
评价标准：杀菌率≥90％，产品有杀菌作用。
青梅提取物用水稀释至所需浓度进行杀菌实验，浓度从1％、2％、5％，作用时间5min、10min、15min、20min，以最低浓度最少时间达到90％以上的杀菌率为实验终点。
(1)青梅提取物对幽门螺杆菌的杀菌试验
设置对幽门螺杆菌作用的青梅提取物浓度为1.0％(将实施例1的膏状青梅提取物用水稀释成浓度为1％的溶液，即青梅提取物：水体积比为1：99，其他浓度同理)，作用时间为5min。平行实验3次，以无菌水为对照。结果参见表1。
表1 1.0％青梅提取物对幽门螺杆菌的杀菌效果
由结果可知，浓度为1.0％的青梅提取物，即可在5min内达到对幽门螺杆菌99.97％的杀菌率。说明了通过本发明制备方法所得到的青梅提取物对于幽门螺杆菌具有强效迅速的杀灭能力。
(2)青梅提取物对大肠杆菌杀菌试验
对大肠杆菌作用的青梅提取物浓度为1.0％，作用时间分别为10min、20min；另取青梅提取物浓度为5.0％，作用时间为10min。平行实验3次，以无菌水为对照。表2为不同浓度青梅提取物作用不同时间对大肠杆菌的杀菌性能。
表2不同浓度青梅提取物作用不同时间对大肠杆菌的杀菌性能
结果表明，1％青梅提取物作用于大肠杆菌20分钟，杀菌率达92.55％，说明产品有杀菌作用。5％青梅提取物作用大肠杆菌10分钟，杀菌率达99.84％，大肠杆菌基本全部被杀灭。
试验例3抑菌试验
将试验菌24h斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液(要求的浓度为：用100μl滴于5ml样液内，回收菌数为1×104cfu/ml～9×104cfu/ml)。
取青梅提取物稀释样液(5ml)和对照样液(与样液同等体积但不含抗菌成分，且经灭菌处理)各4管。
取上述菌悬液，分别在每个青梅提取物样液和对照样液内滴加100μl，均匀混合，开始计时，作用10min、20min，将样液(0.5ml)分别投入含5ml PBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2个～3个稀释度，分别吸取0.5ml，置于2个平皿，用凉至40℃～45℃的营养琼脂培养基15ml作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃±2℃培养48h，作活菌菌落计数。
试验重复3次，按下式计算抑菌率
式中：X为抑菌率，％；NC为对照样品平均菌落数，cfu/ml；NS为青梅提取物样品平均菌落数，cfu/ml。
评价标准：抑菌率≥50％～90％，产品有抑菌作用；抑菌率≥90％，产品有较强抑菌作用。
通过考察不同浓度青梅提取物对各种食品中容易污染的菌种进行实验，结果表明，青梅提取物对副溶血性弧菌、痢疾志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌都表现出了较强的抑菌作用，结果见表3。其中，副溶血性弧菌对1％浓度青梅提取物较敏感，20min时有较强抑菌作用，抑菌率高达99.97％以上；痢疾志贺氏菌与鼠伤寒沙门氏菌对5％浓度青梅提取物较敏感，20min时有较强抑菌作用，可达到99.70％及以上的抑菌率；金黄色葡萄球菌及单核细胞增生李斯特氏菌对10％浓度青梅提取物较敏感，20min时有较强抑菌作用，分别可达到97.04％及99.92％的抑菌率。
表3青梅提取物对各菌的抑菌率(％)
实施例2：颗粒剂的制备
取实施例1的青梅提取物稠膏80g，向稠膏中加入2倍量75％乙醇溶液，搅匀，静置过夜，上清液过滤，滤液减压回收乙醇，并再次浓缩成稠膏状，加入5倍量的糖粉，混合均匀，加入70％乙醇少许，制成软材，过14目尼龙筛制粒，湿颗粒于60℃干燥，干燥粒过14目筛整粒，再过65目筛筛去细粉，在缓慢地搅拌下，将乙醇混合液(约200mL)喷入干颗粒，并封闭存放30分钟，然后分装为若干袋，密封，每袋约10g。本品为黑色颗粒，味微酸。其它项目应符合中华人民共和国药典2020年版颗粒剂项下的有关规定。
实施例3：肠溶胶囊的制备
取实施例1的青梅提取物240g，加入淀粉等辅料，置于制粒机中混合、制成颗粒或小丸后干燥、整粒、分级，用肠溶材料包衣，使用全自动胶囊充填机将颗粒装入1号硬明胶空心胶囊中，分装为若干粒，每粒约0.3g。本品为胶囊剂，内容物为黑色的颗粒或小丸，味微酸，口服使用。其它项目应符合中华人民共和国药典2020年版胶囊剂项下的有关规定。
实施例4：咀嚼片的制备
取实施例1的青梅提取物90g，加入淀粉、糊精等辅料，以甘露醇、蔗糖作为黏合剂和填充剂，加入适量70％乙醇溶液制成软材，置于制粒机中混合、制粒，干燥、整粒与分级、包衣后，加入适量硬脂酸镁，用单冲压机压成片，调整片重，片剂硬度控制在(7±0.5)kg/mm2，每片约0.3g。本品为棕色片剂，味微酸，口服使用。其它项目应符合中华人民共和国药典2020年片剂项下的有关规定。
实施例5：口服液的制备
取实施例1的青梅提取物60g，加水适量溶解、过滤，加入单糖浆及苯甲酸钠适量，加水至2500mL，搅匀、静置、滤过、灌封后灭菌，每支约10mL。本品为棕色澄清液体，味酸，口服使用。其它项目应符合中华人民共和国药典2020年口服液项下的有关规定。
以上所述的实施例只是本发明的较佳方案，并非对本发明作任何形式上的限制，本发明不局限于上述实施例所述的具体技术方案，凡采用等同替换形成的技术方案均为本发明要求的保护范围。
Claims (10)
1.一种青梅提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干净的青梅全果，去皮去核后，将果肉打碎成果泥；
(2)将果泥进行过滤，得到青梅汁；
(3)将步骤(2)的青梅汁进行熬煮，沸腾后转中火熬制起密集小泡后转小火，熬煮至呈膏状，得到青梅提取物。
2.根据权利要求1所述一种青梅提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中将青梅果肉打至粒径1-2mm大小的果泥。
3.根据权利要求1所述一种青梅提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，熬煮条件为：先升温至100℃后，将温度调节至65-75℃，熬制起密集小泡，然后温度调节至30-40℃，熬煮至呈膏状。
4.根据权利要求1所述一种青梅提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，熬煮条件为：先升温至100℃后，将温度调节至65-75℃，熬煮5-10小时，然后温度调节至30-40℃，熬煮80-100小时。
5.根据权利要求1所述一种青梅提取物的制备方法，其特征在于，膏状固形物含量为70％-80％。
6.一种权利要求1-5任一项所述制备方法制备得到的青梅提取物。
7.根据权利要求6所述一种青梅提取物，其特征在于，梅素含量达1.02g/kg。
8.一种权利要求6所述青梅提取物在制备幽门螺杆菌或其它食源性致病菌的抑菌剂中的应用。
9.一种权利要求6所述青梅提取物在制备治疗或预防幽门螺杆菌或其它食源性致病菌引起的疾病的药物或药物组合物中的应用。
10.一种权利要求6所述青梅提取物在制备治疗或预防幽门螺杆菌或其它食源性致病菌引起的疾病的食品中的应用。
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