CN115770292A - 新型冠状病毒SARS-CoV-2的协同免疫及其用途 - Google Patents

Abstract

本公开提供一种新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的协同免疫及其用途。所述疫苗是一种疫苗组合产品，其包含：(i)亲本株疫苗和(ii)突变株疫苗。本公开提供了一种联合用药，可使受试者获得更高滴度的中和抗体与更广谱的保护力，可显著提升对新冠病毒及多种突变株病毒的防御能力，达到协同免疫的效果。

Description

新型冠状病毒SARS-CoV-2的协同免疫及其用途

技术领域

本公开属于生物技术领域，具体涉及新型冠状病毒SARS-CoV-2的协同免疫及其用途。

背景技术

新型冠状病毒(2019-nCoV，SARS-CoV-2)是一种β属的冠状病毒，于2019年首次被发现，是目前已知的第七种能感染人的冠状病毒，感染该病毒后可导致患者出现发热、干咳、乏力等症状；部分患者会产生严重的肺炎，进而发展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、出凝血功能障碍及多器官功能衰竭等，甚至死亡。冠状病毒是一类具有囊膜、基因组为线性单股正链的RNA病毒，是自然界广泛存在的一大类病毒。最新序列研究分析表明，从临床病人分离的SARS-CoV-2和蝙蝠来源的冠状病毒RaTG13有96％的一致性，和SARS冠状病毒也有79.3％的同一性。冠状基因组结构较为保守，包含11个功能性开放阅读框，依次为ORF1a、ORF1b、S、ORF3、ORF4a、ORF4b、ORF5、E、M、ORF8b和N。其中ORF1a和ORF1b分别编码在所有冠状病毒中均保守的两种复制酶PL2pro和3CLpro。ORF3、4a、4b、5和8b分别编码了病毒的5种附属蛋白。ORFs S、E、M和N编码了的4种主要结构蛋白—刺突蛋白(Spike Protein，S)、包膜蛋白(Envelope Protein，E)、膜蛋白(Membrane Protein，M)和核衣壳蛋白(Nucleocapsid Protein，N)。其中，E蛋白为在病毒表面形成离子通道的一种跨膜蛋白，与病毒毒力相关。N蛋白是病毒基因组RNA复制复合物的主要组成部分，并与M蛋白的C端结构域结合。M蛋白是构成冠状病毒粒子形状的蛋白，参与病毒组分在病毒粒子中的整合。S蛋白突出于病毒粒子表面，为I型跨膜糖蛋白，与病毒颗粒吸附和膜融合相关，根据2006年非典型肺炎的相关研究报道，S蛋白是诱导机体产生中和抗体的主要免疫原，S蛋白在之后成为中东呼吸综合症病毒MERS疫苗和基因工程药物开发的重要靶点。鉴于以往工作经验，S蛋白成为针对SARS-COV-2的首选抗原。

冠状病毒的核酸为非节段单链(+)RNA，长27-31kb，是RNA病毒中最长的RNA核酸链，突变可以说是新冠病毒这类RNA病毒的最大特性。病毒入侵宿主细胞后，会大量复制自己来实现感染传播。在复制过程中，RNA病毒并没有校正机制，出现复制错误无法自行纠正，在大量的复制中就容易出现新的变异，而新的变异的结果是导致疫苗有效性降低或者失效的主要原因。

据世界卫生组织官网显示，目前全世界已经发现数百种新冠病毒的变种，其中“南非”突变株出现于2020年12月，在南非首次发现，因此被命名为“南非”株，现已经在非洲、欧洲、亚洲和澳大利亚发现。相比于野生型病毒株，南非突变株共发生21个突变，8个在刺突Spike蛋白上的突变，例如：L18F、D80A、D215G、R246I、K417N、E484K、N501Y和A701V；还有刺突蛋白以外的ORF1b缺失。目前的研究初步认为传染性增强，致病力是否增强正在研究，体外研究表明，其具有自然感染后免疫逃逸的可能性，并且影响了疫苗的效应。

这些位点是新冠病毒抗体或疫苗产生作用很重要的靶位点。如果这些位点发生变异，会增加抗体对病毒的识别难度，从而使病毒逃避“追杀”；Spike区域发生突变，容易导致“抗体中和逃逸”现象出现，简单来说，南非株的这些突变特性有可能让它变得感染性更强、更容易传播有可能会让它更容易逃脱抗体的追杀，可能导致疫苗失效。

研究证实，大多数中和抗体都针对新型冠状病毒的突刺蛋白(S)的受体结合域(Receptor Binding Domain，RBD)，RBD是病毒进入宿主细胞的关键部位，RBD蛋白可以和细胞的ACE2受体相互作用，打开细胞表面通道，使病毒颗粒得以进入细胞内，完成病毒入侵过程，因此研发针对新冠病毒突变株的重组RBD疫苗是有效防治病毒突变株的重点。

新型冠状病毒在不停地突变之中，许多流行的SARS-CoV-2突变体与病例数迅速增加有关，例如英国突变株B.1.1.7/501Y.V1、南非突变株B.1.351/501Y.V2，以及巴西突变株P.1/501Y.V3。上述新冠病毒突变体可以降低疫苗诱导的血浆中和抗体的中和能力。

目前市售/在研新冠疫苗，大多采用野生型S蛋白或RBD设计，对野生型或早期新冠突变株病御能力较好，但对目前流行的变异株(主要为B.1.351/501Y.V2南非突变株)已出现不同程度的保护力下降现象。因此，亟需针对突变型新型冠状病毒的流行，开发出提高新型冠状病毒SARS-CoV-2及其突变株协同免疫效果的联合用药方法。

发明内容

为了避免现有疫苗的局限，本公开提供了一种提高新型冠状病毒SARS-CoV-2及其突变株协同免疫效果的疫苗联合。与已知的灭活、腺病毒以及mRNA新冠病毒疫苗都不同，本公开的突变株疫苗使用的抗原是针对突变新冠毒株的抗原部分(特别是RBD部分)，通过变异型RBD增加对突变株的防御能力。用本公开所提供的方法使用这种突变株疫苗可在动物体内、人体内诱导更强的免疫应答。所以，本公开的突变株疫苗，对比传统单一抗原新冠疫苗，具有更高的免疫原性、更强的防御能力。综合以上所有创新设计和优化，本公开的突变株疫苗可作为新一代突变株疫苗药物，用于抵御新冠疫情蔓延。利用本公开所提供的方法使用亲本株疫苗和突变株疫苗可通过调整剂次数量和各剂次所施用的疫苗来提升中和抗体的滴度，保证高效产生中和抗体，可显著提升对突变株的防御能力。

在一方面，本公开提供了一种治疗或预防与SARS-CoV-2相关的疾病或病状的疫苗组合产品，所述疫苗组合产品包含：

(i)亲本株疫苗，所述亲本株疫苗包含野生型SARS-CoV-2多肽的融合蛋白，所述野生型SARS-CoV-2融合蛋白包含：(1)干扰素或其功能片段；(2)野生型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD或其功能片段；和(3)免疫球蛋白Fc区；和

(ii)突变株疫苗，所述突变株疫苗包含突变型SARS-CoV-2多肽的融合蛋白，所述突变型SARS-CoV-2融合蛋白包含：(1)干扰素或其功能片段；(2)突变型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD或其功能片段；和(3)免疫球蛋白Fc区；

其中，所述亲本株疫苗或所述突变株疫苗中的一种作为引发疫苗施用，所述亲本株疫苗或所述突变株疫苗中的一种作为加强疫苗施用，并且所述亲本株疫苗和所述突变株疫苗两者均被施用。

在另一方面，本公开提供了一种制备所述疫苗组合产品的方法。

在另一方面，本公开提供了一种亲本株疫苗和突变株疫苗在制备治疗或预防与SARS-CoV-2相关的疾病或病状的疫苗组合产品中的用途。

在另一方面，本公开提供了一种在有相应需要的受试者中诱导针对SARS-CoV-2的免疫应答的方法，所述方法包括：

(i)向受试者施用亲本株疫苗；和

(ii)向受试者施用突变株疫苗。

在另一方面，本公开提供了一种编码所述的疫苗组合产品的核酸。

在另一方面，本公开提供了一种包含所述的核酸的表达载体。

在另一方面，本公开提供了一种表达所述的疫苗组合产品、包含所述的核酸和/或包含所述的表达载体的宿主细胞。

在另一方面，本公开提供了一种试剂盒，其包含所述的疫苗组合产品、所述的核酸、所述的表达载体和/或所述的宿主细胞。

在另一方面，本公开提供了一种所述的试剂盒在制备用于在有相应需要的受试者中诱导针对新型冠状病毒SARS-CoV-2的免疫应答的药物组合物中的用途。

附图说明

图1示出了亲本株疫苗与南非株疫苗的不同免疫程序对野生型假病毒的中和效价。

图2示出了亲本株疫苗与南非株疫苗的不同免疫程序对南非株假病毒的中和效价。

图3示出了亲本株疫苗与南非株疫苗的不同免疫程序对野生株假病毒、美国株CAL.20C假病毒、印度株B.1.617.1假病毒和印度株B.1.617.2假病毒的中和效价水平。

图4示出了亲本株疫苗与南非株疫苗的联合注射给药的免疫程序和二价苗注射给药的免疫程序对野生株假病毒的中和效价。

图5示出了亲本株疫苗与南非株疫苗的联合注射给药的免疫程序和二价苗注射给药的免疫程序对南非株假病毒的中和效价。

具体实施方式

I.定义

在本公开中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的术语和常规步骤。同时，为了更好地理解本公开，下面提供相关术语的定义和解释。

如本文使用的和除非另作说明，术语“约”或“大约”是指在给定值或范围的加或减10％之内。在需要整数的情况下，该术语是指在给定值或范围的加或减10％之内、向上或向下舍入到最接近的整数。

如本文使用的和除非另作说明，术语“包含”，“包括”，“具有”，“含有”，包括其语法上的等同形式，通常应当理解为开放式且非限制性的，例如，不排除其他未列举的要素或步骤。

如本文所使用的，术语“冠状病毒(Coronavirus)”属于冠状病毒科，冠状病毒属，可以感染哺乳动物和禽类，引起呼吸系统、消化和中枢神经的各种疾病。根据基因组和血清学差异可以将冠状病毒分成四个不同的属：α、β、γ和δ，目前只有α和β属冠状病毒感染人类。截至目前已鉴定出来自两个属(α和β)的6种人冠状病毒(HCoV)，α属冠状病毒包括NL63和229E，β属冠状病毒包括OC43、HKU1、急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS-CoV)、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)和新型冠状肺炎病毒(SARS-CoV-2)。

如本文所使用的，术语“COVID-19”是一种病毒性疾病，通常以高烧、咳嗽、呼吸困难、寒意、持续震颤、肌肉疼痛、头痛、咽喉痛、新的味觉和/或嗅觉丧失和病毒性肺炎的其他症状为特征。在严重的情况下，会出现大量与COVID-19严重程度相关的凝血病相关症状(例如，血液凝固、血栓形成、急性呼吸窘迫综合征、癫痫发作、心脏病发作、中风、多发性脑梗塞、肾衰竭尿崩症和/或弥散性血管内凝血)。在年轻患者中，罕见的炎症综合征有时与COVID-19相关(例如，非典型川崎综合征、中毒性休克综合征、小儿多系统炎性疾病、和细胞因子风暴综合征)。β属的冠状病毒SARS-CoV-2是致病因子(causative agent)。

如本文所使用的，术语“融合蛋白”是指由一种或多种分子组成的天然或合成分子，其中具有不同特异性的两种或多种基于肽或蛋白质(包括糖蛋白)的分子任选的通过化学的或基于氨基酸的接头分子融合在一起。该连接可通过C-N融合或N-C融合(以5′→3′方向)，优选C-N融合而实现。

如本文所使用的，术语“干扰素”(Interferon，IFN)指机体受到病毒感染或在其他干扰素诱生剂作用下，由细胞基因组控制产生的具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性等多种生物学活性的一类细胞因子。干扰素可以根据它们的生物和物理性质分成三大类：I型、II型和III型干扰素。

I型干扰素构建了在结构上相关的家族(IFN-α(α)、IFN-β(β)、IFN-κ(κ)、IFN-δ(δ)、IFN-ε(ε)、IFN-τ(τ)、IFN-ω(ω)和IFN-ζ(ζ))，其中IFN-δ和IFN-τ不会在人类中出现。人I型干扰素(IFN)基因簇集在人染色体9p21上，而小鼠基因位于小鼠4号染色体上的保守的共线性区中。迄今为止，已在小鼠中鉴定出14种IFN-α基因和3种伪基因。在人类中，已经鉴定出13种IFN-α(或IFNA)基因(IFNA1、IFNA2、IFNA4、IFNA5、IFNA6、IFNA7、IFNA8、IFNA10、IFNA13、IFNA14、IFNA16、IFNA17和IFNA21)以及1个伪基因，其中两种人IFN-α基因(IFNA1/IFN-α1和IFNA13/IFN-α13)针对相同的蛋白编码。所有的人I型干扰素结合至由两种跨膜蛋白(IFNAR-1和IFNAR-2)组成的细胞表面受体(IFNα受体，IFNAR)，该细胞表面受体引起JAK-STAT活化、ISGF3的形成和随后开始的基因表达。干扰素γ(IFN-γ)是唯一已知II型干扰素，其主要涉及通过巨噬细胞刺激诱导抗菌和抗肿瘤机制。IFN-γ受体(IFNGR)是由与两种信号转导IFNGR2链相关联的两种配体结合IFNGR1链组成的异质二聚体受体。III型干扰素由三种亚型组成，并且还被称为IFNλ(IFNλ1或IL-29、IFNλ2或IL-28A和IFNλ3或IL-28B)，且具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性。IFN-λ受体也是由唯一的配体结合链IFN-λR1(也被指定为IL-28Rα)以及与用于IL-10相关细胞因子的受体共享的副链IL-10R2组成的异质二聚体复合物。

如本文所使用的，术语“抗体”或“免疫球蛋白”有最广义的含义，特别包括完整的单克隆抗体、多克隆抗体、由至少2个完整抗体构成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)以及抗体片段，只要其显示出具有所需的生物学活性即可。此术语一般包括由2个或多个具有不同结合特异性的抗体或抗体片段连接在一起构成的杂合抗体。

如本文所使用的，术语“Fc区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的C端区，包括天然序列Fc区和变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可以变化，但人IgG重链Fc区通常定义为自位置Cys226，或自Pro230处的氨基酸残基延伸至重链的羧基端。可以除去Fc区的C端赖氨酸(依照EU编号系统的残基447)，例如在抗体的产生或纯化期间，或通过重组工程化改造编码抗体重链的核酸。因此，完整抗体的组合物可以包含已除去所有K447残基的抗体群体，未除去任何K447残基的抗体群体，和具有有和无K447残基的抗体混合物的抗体群体。

如本文所使用的，序列“相同性”或“同一性”具有本领域公认的含义，并且可以利用公开的技术计算两个核酸或多肽分子或区域之间序列相同性的百分比。可以沿着多核苷酸或多肽的全长或者沿着该分子的区域测量序列相同性。虽然存在许多测量两个多核苷酸或多肽之间的相同性的方法，但是术语“相同性”是技术人员公知的(Carrillo,H.&Lipman,D.,SIAM J Applied Math 48:1073(1988))。

如本文所使用的，术语“Th细胞辅助表位”是指使辅助T细胞活化的所有表位，包括PADRE。PADRE为13个氨基酸的短肽序列，能人和多种动物不同DR分子结合，提呈于细胞表面，进而激活CD4+T辅助细胞，发挥免疫调节作用。PADRE诱导T细胞应答的能力是天然表位的1000倍以上，因此PADRE具备作为免疫佐剂的一些特征。PADRE肽段在体内可以免疫性激活辅助型T细胞(Th1)以协助CTL的激活，并且可以激活辅助型T细胞(Th2)以协助B细胞分泌特异性抗体，进而进一步增强重组蛋白所引起的抗原免疫反应。

如本文所使用的，术语“疾病”或“病状”是指能够用本文提供的融合蛋白、药物组合物或方法治疗的患者或个体的生存状态或健康状态。

术语“疫苗”是纯化的抗原疫苗或免疫原性组合物，亚基疫苗或免疫原性组合物，灭活的整体病毒疫苗或免疫原性组合物，或减毒病毒疫苗或免疫原性组合物。在一些实施方案中，疫苗或免疫原性组合物是纯化的融合蛋白。

如本文所使用的，术语“治疗(treating或treatment)”是指成功治疗或改善损伤、疾病、病理或病状(condition)的任何指标，包含任何客观或主观参数，如，消除；缓解；减轻症状或使得损伤、病理或病状对患者而言更易忍受；减缓退化或衰退的速度；或使退化的最终点较少衰退；改善患者的身体或精神健康。症状的治疗或改善可以基于客观或主观参数；包含身体检查、神经精神病学检查和/或精神病学评估的结果。术语“治疗”及其缀合可以包含预防损伤、病理、病状或疾病。在实施例中，治疗是预防。在实施例中，治疗不包含预防。

如本文所使用的(并且在本领域中被充分理解的)，“治疗(treating或treatment)”还广泛地包含用于在受试者的病状中获得有益的或期望的结果(包含临床结果)的任何方法。有益的或期望的临床结果可以包含但不限于：减轻或改善一种或多种症状或病状、减轻疾病程度、稳定(即，不恶化)疾病状态、预防疾病传播或扩散、延迟或减缓疾病进展、改善或缓解疾病状态、减少疾病复发以及缓解(无论是部分的还是全部的，以及无论是可检测的还是不可检测的)。换句话说，如本文所使用的，“治疗”包含对疾病的任何治愈、改善或预防。治疗可以预防疾病发生；抑制疾病扩散；缓解疾病的症状、完全或部分去除疾病的根本原因、缩短疾病的持续时间或这些事物的组合。

如本文所使用的，“治疗(Treating和treatment)”包含预防性治疗。治疗方法包含向受试者施用治疗有效量的活性剂。施用步骤可以由单次施用组成，或者可以包含一系列施用。治疗期的长度取决于多种因素，如病状的严重程度、患者的年龄、活性剂的浓度、在治疗中所使用的组合物的活性或其组合。还应当理解，用于治疗或预防的药剂的有效剂量可以在特定治疗或预防方案的过程中增加或减少。通过本领域中已知的标准诊断测定，剂量的变化可以产生并且变得显而易见。在一些情况下，可能需要慢性施用。例如，以足以治疗患者的量向受试者施用组合物，且持续足够的持续时间。

如本文所使用的，术语“预防”是指减少患者的疾病症状的发生。如上所述，预防可以是完全的(没有可检测的症状)或部分的，使得观察到比不存在治疗时可能发生的症状更少的症状。

如本文所使用的，“患者”或“有需要的受试者”是指遭受或易于遭受可以通过施用如本文所提供的药物组合物进行治疗的疾病或病状的活生物体。非限制性实例包含人、其它哺乳动物、牛科动物、大鼠、小鼠、狗、猴、山羊、绵羊、牛、鹿和其它非哺乳动物。在一些实施例中，患者是人。

术语“联合给药”是指将本公开的融合蛋白或疫苗与已知药物(或其它化合物，或其它疫苗)进行“联合用药”，从而二者都具有治疗或诊断效果。这种联合用药可以包括相对于施用本公开的融合蛋白或疫苗而言对该药物(或其它化合物，或其它疫苗)进行并行(即同时)、在前或相继给药。本领域一般技术人员将能够很容易判断特定药物(或其它化合物，或其它疫苗)以及本公开的联合物的合适的给药时间、顺序和剂量。

如本文所使用的，术语“有效量”是足以实现所陈述目的的量(例如实现它被施用来达成的作用，治疗疾病，降低酶活性，增加酶活性，降低蛋白质功能，减轻疾病或病状的一种或多种症状)。“有效量”的实例是足以促成治疗、预防或减少疾病的一种或多种症状的量，所述量也可以被称为“治疗有效量”。一种或多种症状的“减少”意指降低一种或多种症状的严重程度或频率，或消除一种或多种症状。药物的“预防有效量”是当施用于受试者时，将具有预期的预防效果的药物的量，例如预防或延迟损伤、疾病、病理或病状的发作(或复发)或降低损伤、疾病、病理或病状或其症状发作(或复发)的可能性。完全预防效果不一定通过施用一次剂量发生，并且可以在仅施用一系列剂量之后发生。因此，预防有效量可以以一次或多次施用的形式施用。

如本文所使用的，术语“治疗有效量”是指如上文所描述的足以改善病症的治疗剂的量。例如，对于给定参数，治疗有效量将显示增加或降低至少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或至少100％。治疗功效也可以表示为“倍数”增加或减少。例如，治疗有效量可以相对于对照具有至少1.2倍、1.5倍、2倍、5倍或更多的效果。

剂量可以根据患者的需要和所采用的融合蛋白或疫苗而变化。在本公开的上下文中，向患者施用的剂量应足以随时间推移而在患者体内产生有益治疗反应。剂量的大小也将通过任何不良副作用的存在、性质和程度确定。针对特定情况来确定适当的剂量是在执业者的技能之内的。通常，治疗开始于比融合蛋白或疫苗的最优剂量小的较小剂量。其后，剂量以小增量增加直到达到在这些情况下的最优效果。可以单独调整给药的量和间隔，以提供所施用融合蛋白或疫苗的对所治疗的特定临床适应症有效的水平。这将提供与个体疾病状态的严重程度相称的治疗方案。

如本文所使用的，术语“施用”意指向受试者口服施用、以栓剂形式施用、局部接触、静脉内、肠胃外、腹膜内、肌肉内、病灶内、鞘内、鼻内或皮下施用，或植入缓慢释放装置(例如，微型渗透泵)。通过任何途径进行施用，包含肠胃外和经粘膜(例如，颊、舌下、腭、牙龈、鼻、阴道、直肠或经皮)。肠胃外施用包含例如静脉内、肌肉内、动脉内、皮内、皮下、腹膜内、心室内和颅内施用。其它递送模式包含但不限于使用脂质体调配物、静脉内输注、经皮贴剂等。在实施例中，施用不包含施用除了所叙述的活性剂之外的任何活性剂。

II.疫苗

在一方面，本公开提供了一种治疗或预防与SARS-CoV-2相关的疾病或病状的疫苗组合产品，所述疫苗组合产品包含：

(i)亲本株疫苗，所述亲本株疫苗包含野生型SARS-CoV-2多肽的融合蛋白，所述野生型SARS-CoV-2融合蛋白包含：(1)干扰素或其功能片段；(2)野生型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD或其功能片段；和(3)免疫球蛋白Fc区；和

(ii)突变株疫苗，所述突变株疫苗包含突变型SARS-CoV-2多肽的融合蛋白，所述突变型SARS-CoV-2融合蛋白包含：(1)干扰素或其功能片段；(2)突变型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD或其功能片段；和(3)免疫球蛋白Fc区；

其中，所述亲本株疫苗或所述突变株疫苗中的一种作为引发疫苗施用，所述亲本株疫苗或所述突变株疫苗中的一种作为加强疫苗施用，并且所述亲本株疫苗和所述突变株疫苗两者均被施用。

在一些实施方案中，所述干扰素选自I型干扰素、II型干扰素和/或III型干扰素。

在一些实施方案中，所述干扰素可来自人源或鼠源。

在一些实施方案中，所述I型干扰素选自IFN-α、IFN-β、IFN-κ、IFN-δ、IFN-ε、IFN-τ、IFN-ω和IFN-ζ。

在一些实施方案中，所述II型干扰素为干扰素γ。

在一些实施方案中，所述III型干扰素选自IFN-λ1(IL-29)、IFN-λ2(IL-28a)和IFN-λ(IL-28b)。

在一些实施方案中，所述干扰素选自人IFN-α1、IFN-α2、IFN-α4、IFN-α5、IFN-α6、IFN-α7、IFN-α8、IFN-α10、IFN-α13、IFN-α14、IFN-α16、IFN-α17和IFN-α21；

更优选地，所述干扰素为IFN-α2a；优选地，所述IFN-α2a的氨基酸序列包含与SEQID NO 1所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述IFN-α-2a的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

在一些实施方案中，所述野生型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD包含与SEQ ID NO 2所示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述野生型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

在一些实施方案中，所述突变型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD包含与SEQ ID NO 3所示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述突变型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

在一些实施方案中，所述免疫球蛋白Fc区选自IgG1、IgG2、IgG3和/或IgG4的恒定区氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述免疫球蛋白Fc区为IgG1的Fc区；优选地，所述IgG1 Fc区包含与SEQ ID NO 4所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述IgG1 Fc区的氨基酸序列如SEQ ID NO 4所示。

在一些实施方案中，所述融合蛋白还包含一个或多个Th细胞辅助表位和/或连接片段。

在一些实施方案中，所述Th细胞辅助表位为PADRE或其衍生物；所述PADRE或其衍生物的氨基酸序列选自SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO9和SEQ ID NO10。

在一些实施方案中，所述连接片段为柔多肽序列；优选地，所述柔性肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO 11和SEQ ID NO 12。

在一些实施方案中，所述亲本株疫苗和/或所述突变株疫苗独立地还包含一种或更多种药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或佐剂。

在一些实施方案中，所述佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝、皂苷例如Quil A、QS-21(Cambridge Biotech Inc.，CambridgeMA)、GPI-0100(Galenica Pharmaceuticals，Inc.，Birmingham，AL)、油包水型乳状液、水包油型乳状液、水包油包水型乳状液。

在一些实施方案中，其中所述亲本株疫苗和/或所述突变株疫苗呈液体、乳液、固体、气雾剂、薄雾或气体的形式。

在一些实施方案中，所述野生型SARS-CoV-2的融合蛋白包含与选自SEQ ID NO 13所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；优选地，所述野生型SARS-CoV-2的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 13所示。

在一些实施方案中，所述突变型SARS-CoV-2的融合蛋白包含与选自SEQ ID NO 14所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；优选地，所述突变型SARS-CoV-2的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 14所示。

在一些实施方案中，所述突变株疫苗是引发疫苗，并且所述亲本株疫苗是加强疫苗。

在一些实施方案中，所述亲本株疫苗是引发疫苗，并且所述突变株疫苗是加强疫苗。

在一些实施方案中，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后间隔一段时间给予以进行免疫。

在一些实施方案中，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后间隔一段时间首次给予以进行第一次加强免疫，并且，所述加强疫苗在引发疫苗初始给予后间隔另一段时间再次给予以进行第二次加强免疫；优选地，所述亲本株疫苗是引发疫苗，并且所述突变株疫苗是加强疫苗，所述突变株疫苗在所述亲本株疫苗初始给予后间隔一段时间首次给予，并且，所述突变株疫苗在亲本株疫苗初始给予后间隔另一段时间再次给予。

在一些实施方案中，所述引发疫苗在所述引发疫苗初始给予后间隔一段时间再次给予以进行第一次加强免疫，并且，所述加强疫苗在引发疫苗初始给予后间隔另一段时间首次给予以进行第二次加强免疫；优选地，所述亲本株疫苗是引发疫苗，并且所述突变株疫苗是加强疫苗，所述亲本株疫苗在所述亲本株疫苗初始给予后间隔一段时间再次给予，并且，所述突变株疫苗在亲本株疫苗初始给予后间隔另一段时间首次给予。

在一些实施方案中，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约1-10周给予，优选2-8、3-8、1-3、2-5、2-3、3-5、5-8周给予，更优选2-8、2-5，3-5周给予。

在一些实施方案中，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约1-10周首次给予，优选2-8、3-8、1-3、2-5、2-3、3-5、5-8周首次给予，更优选2-8、2-5，3-5周首次给予；所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约4-72周再次给予，优选6-52、6-45、6-30、6-25、8-52、8-30、8-25、4-12周，更优选4-12、6-25、8-25周再次给予。

在一些实施方案中，所述引发疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约1-10周再次给予，优选2-8、3-8、1-3、2-5、2-3、3-5、5-8周再次给予，更优选2-8、2-5，3-5周再次给予；所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约4-72周首次给予，优选6-52、6-45、6-30、6-25、8-52、8-30、8-25、4-12周，更优选4-12、6-25、8-25周首次给予。

在一些实施方案中，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约2-5周首次给予，并在所述引发疫苗初始给予后大约6-25周再次给予。

在一些实施方案中，所述引发疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约2-5周再次给予，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约6-25周首次给予。

在另一方面，本公开提供了编码所述的疫苗组合产品的核酸。

在一些实施方案中，所述包含野生型SARS-CoV-2多肽融合蛋白的编码核酸包含与SEQ ID NO:15所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序列；所述野生型SARS-CoV-2的融合蛋白的编码核酸为SEQ ID NO 15所示的核酸。

在一些实施方案中，所述包含突变型SARS-CoV-2多肽融合蛋白的编码核酸包含与SEQ ID NO:16所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序列；所述突变型SARS-CoV-2融合蛋白的编码核酸为SEQ ID NO 16所示的核酸。

在一些实施方案中，所述核酸是mRNA。

在另一方面，本公开提供了一种包含所述核酸的表达载体。

在一些实施方案中，所述表达载体是哺乳动物细胞表达载体。

在一些实施方案中，所述表达载体选自质粒、粘粒、病毒载体、RNA载体或线性或圆形DNA或RNA分子。

在一些实施方案中，所述质粒选自pCI、puc57、pcDNA3、pSG5、pJ603和pCMV。

在一些实施方案中，所述病毒载体选自腺病毒、逆转录病毒、细小病毒(例如，腺伴随病毒)、冠状病毒、负链RNA病毒诸如正粘病毒(例如，流感病毒)、弹状病毒(例如，狂犬病和水疱性口炎病毒)、副粘病毒(例如，麻疼和仙台)、正链RNA病毒诸如小RNA病毒和甲病毒，和双链DNA病毒。

在一些实施方案中，所述腺病毒载体选自人、黑猩猩或恒河猴腺病毒；优选地，所述腺病毒选自血清型Ad2、Ad4、Ad5、Ad6、Ad11、Ad12、Ad24、Ad26、Ad34、Ad35、Ad40、Ad48、Ad49、Ad50、Ad52和Pan9腺病毒

优选地，所述逆转录病毒选自禽造白细胞组织增生-肉瘤、哺乳动物C-型、B-型病毒、D-型病毒、HTLV-BLV集合、慢病毒和泡沫病毒；

优选地，所述慢病毒载体选自HIV-1、HIV_2、SIV、FIV、BIV、EIAV、CAEV和绵羊脱髓鞘性脑白质炎慢病毒；

优选地，所述双链DNA病毒包括腺病毒、疱疹病毒(例如，单纯疱疹病毒1和2型、愛泼斯坦-巴尔病毒、巨细胞病毒)和痘病毒(例如，牛痘病毒、鸡痘病毒和金丝雀痘病毒)、诺沃克病毒、披膜病毒、黄病毒、呼肠孤病毒、乳多泡病毒、嗜肝DNA病毒、杆状病毒和肝炎病毒。

核酸分子也可以插入表达载体，诸如腺病毒载体中，并掺入本公开的组合物中。术语“腺病毒载体(adenovirus vector)”和“腺病毒载体(adenoviral vector)”和“腺病毒颗粒”可互换使用，是指经基因工程改造的腺病毒，其设计为将目标多核苷酸(例如，编码ZIKVM和Env抗原的多核苷酸)插入真核细胞中，使得该多核苷酸随后表达。可用作本公开的病毒载体的腺病毒的实例包括具有或衍生自血清型Ad2、Ad 4、Ad5、Ad6、Ad11、Ad12、Ad24、Ad26、Ad34、Ad35、Ad40、Ad48、Ad49、Ad50、Ad52(例如，RhAd52)和Pan9(也称为AdC68)的那些腺病毒；这些载体可以源自例如人、黑猩猩(例如，ChAd1、ChAd3、ChAd7、ChAd8、ChAd21、ChAd22、ChAd23、ChAd24、ChAd25、ChAd26、ChAd27.1、ChAd28.1、ChAd29、ChAd30、ChAd31.1、ChAd32、ChAd33、ChAd34、ChAd35.1、ChAd36、ChAd37.2、ChAd39、ChAd40.1、ChAd41.1、ChAd42.1、ChAd43、ChAd44、ChAd45、ChAd46、ChAd48、ChAd49、ChAd49、ChAd50、ChAd67或SA7P)或恒河猴腺病毒(例如rhAd51、rhAd52或rhAd53)。

在一些实施方案中，所述逆转录病毒选自禽造白细胞组织增生-肉瘤、哺乳动物C-型、B-型病毒、D-型病毒、HTLV-BLV集合、慢病毒和泡沫病毒。

在一些实施方案中，所述慢病毒载体选自HIV-1、HIV_2、SIV、FIV、BIV、EIAV、CAEV和绵羊脱髓鞘性脑白质炎慢病毒。

在一些实施方案中，所述双链DNA病毒包括腺病毒、疱疹病毒(例如，单纯疱疹病毒1和2型、愛泼斯坦-巴尔病毒、巨细胞病毒)和痘病毒(例如，牛痘病毒、鸡痘病毒和金丝雀痘病毒)、诺沃克病毒、披膜病毒、黄病毒、呼肠孤病毒、乳多泡病毒、嗜肝DNA病毒、杆状病毒和肝炎病毒。

在另一方面，本公开提供了一种表达所述疫苗组合产品、包含所述核酸和/或包含所述表达载体的宿主细胞。

在一些实施方案中，所述宿主细胞是原核细胞或真核细胞。

在一些实施方案中，所述原核细胞是细菌细胞；优选地，所述原核细胞是大肠杆菌细胞。

在一些实施方案中，所述真核细胞选自酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞；优选地，所述哺乳动物细胞选自CHO、HEK293、SP2/0、BHK、C127等；更优选地，所述真核细胞为CHO细胞。

在一些实施方案中，所述与SARS-CoV-2相关的疾病或病状为SARS-CoV-2感染或COVID-19。

亲本株疫苗和突变株疫苗可以组合药盒呈现。本文所用的术语“组合药盒”或“成套药盒”指一种或多种药物组合物根据本公开用于施用亲本株疫苗和突变株疫苗。所述组合药盒包含分开的药物组合物中的亲本株疫苗和突变株疫苗，其中亲本株疫苗和突变株疫苗在在分开包装的单独药物组合物中。

在本公开的一个实施方式中，所述成套药盒包括以下组分：

亲本株疫苗，与药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂联合；

突变株疫苗，与药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂联合；

其中所述组分以适合顺序、分开施用的形式提供。

在一个实施方式中，所述成套药盒，其包括：

含亲本株疫苗与药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂的第一容器；和含突变株疫苗与药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂的第二容器。

所述试剂盒或组合药盒还能根据有说明，如剂量和施用说明。这种剂量和施用说明可以是提供给医生的类型例如药品标签，或可以是由医生提供的类型，如给患者的说明。

所用药物组合物或疫苗的这些要素可以单独药物组合呈现或以共同配制于一种药物组合物中。因此，本公开还提供多个药物组合物或疫苗的组合，药物组合物或疫苗其中之一含有亲本株疫苗和一种或多种药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物以及一种药物组合物含有突变株疫苗和一种或多种药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。

药物组合物或疫苗可以每单位剂量含预定量活性成分的单位剂型呈现。如本领域技术人员已知，每剂量的活性成分的量取决于所治疗病症、施用途径以及患者的年龄、体重和状况。优选的单位剂量组合物含有活性成分的日剂量或亚剂量或其合适部分。此外，这种药物组合物可通过制药领域熟知的任何方法制备。

药物组合物或疫苗可通过任何合适途径施用。合适的途径包括口服、直肠、鼻、局部(包括颊和舌下)、阴道和胃肠外(包括皮下、肌肉、静脉、皮内、鞘内和硬脑膜外)。应理解施用的各试剂可经相同或不同途径施用且亲本株疫苗和突变株疫苗处于分开的药物组合物中。

本公开的药物组合物或疫苗一般适合于肠胃外施用。如本文所使用的，药物组合物或疫苗的“肠胃外施用”包括特征在于受试者组织的物理伤口的任何施用途径和药物组合物或疫苗通过组织中的伤口的施用，从而一般导致直接施用到到肌肉内、或到内脏器官内。肠胃外施用因此包括但不限于，通过注射组合物施用药物组合物，通过外科切口应用组合物，通过组织穿透非外科创伤应用组合物等。特别地，肠胃外施用考虑包括但不限于，皮下、肌内注射或输注。

适合于肠胃外施用的药物组合物或疫苗的制剂一般包含与药学上可接受的载体组合的活性成分，所述载体例如无菌水或无菌等渗盐水。此种制剂可以以适合于推注施用或连续施用形式进行配制、包装或销售。可注射制剂可以以单位剂型，例如在包含防腐剂的安瓿或多剂量容器中进行配制、包装或销售。用于肠胃外施用的制剂包括但不限于，在油或水媒介物中的悬浮液、溶液、乳状液、糊剂等。此种制剂可以进一步包含一种或多种另外的成分，包括但不限于悬浮、稳定或分散剂。在用于肠胃外施用的制剂的一个实施方案中，活性成分以干燥(即粉剂或粒剂)形式提供，用于在重构组合物的肠胃外施用前用合适的媒介物(例如灭菌无热原水)重构。肠胃外制剂还包括水溶液，其可以包含赋形剂例如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选至3-9的pH)，但对于某些应用，它们可以更适合于配制为无菌非水溶液或干燥形式，以与合适的媒介物例如灭菌、无热原水结合使用。示例性肠胃外施用形式包括在无菌水溶液中的溶液或悬浮液，例如丙二醇或右旋糖水溶液。需要时，此种剂型可以进行适当缓冲。有用的其他肠胃外可施用的制剂包括包含以微晶形式或在脂质体制剂中的活性成分的那些。用于肠胃外施用的制剂可以配制为立即和/或缓和释放的。缓和释放制剂包括延迟、持续、脉冲、控制、靶向和按程序释放。

例如，在一个方面，无菌可注射溶液可以通过将所需量的药物组合物或疫苗与上文列出的成分之一或组合掺入合适溶剂中进行制备，需要时，随后为过滤灭菌。一般地，分散系通过将活性化合物掺入无菌媒介物中进行制备，所述无菌媒介物包含基本分散介质和来自上文列出那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉剂的情况下，优选制备方法是真空干燥和冷冻干燥，这产生来自其先前无菌过滤溶液的活性成分加任何另外所需成分的粉末。溶液的合适流动性可以这样得到维持：例如通过使用包衣例如卵磷脂、在分散系的情况下通过维持所需粒子大小和通过使用表面活性剂。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂例如单硬脂酸盐和明胶来达到。

本公开的抗体还可以鼻内或通过吸入进行施用，一般以来自干粉吸入器的干粉(单独，作为混合物，或作为混合组分颗粒，例如与合适的药学上可接受的赋形剂混合)形式，作为来自增压容器、泵、喷射器、喷雾器(优选使用电流体动力学的喷雾器以产生精细薄雾)或雾化器的气溶胶喷雾，连同使用或不使用合适的推进剂，或作为滴鼻剂。

增压容器、泵、喷射器、喷雾器或雾化器一般包含本公开抗体的溶液或悬浮液，其包含例如合适的试剂用于分散、溶解或延长活性的释放，一种或多种推进剂作为溶剂。

在以干粉或悬浮制剂使用前，药物产品一般微粒化至适合于通过吸入递送的大小(一般小于5微米)。这可以通过任何合适的粉碎方法来达到，所述方法例如螺旋气流磨、流体床气流磨、超临界流体加工以形成纳米颗粒、高压均质化、或喷雾干燥。

可以配制用于在吸入器或吹入器中使用的胶囊、水泡和药筒，以包含本公开化合物、合适的粉基和性能改良剂的粉末混合物。用于在使用电流体动力学以产生精细薄雾的喷雾器中使用的合适的溶液制剂可以包含合适剂量的本公开抗体/启动，并且启动体积可以例如从1μL到100μL不等。

合适的调味剂例如薄荷和左薄荷脑或甜味剂例如糖精或糖精钠，可以加入预期用于吸入/鼻内施用的本公开的这些制剂中。

用于吸入/鼻内施用的制剂可以配制为立即和/或缓和释放的。缓和释放制剂包括延迟、持续、脉冲、控制、靶向和按程序释放。

在干粉吸入器和气溶胶的情况下，剂量单位借助于递送测定量的阀进行确定。依照本公开的单位一般安排为施用本公开抗体的测定量或“团(puff)”。总日剂量一般将以单次剂量或更通常地作为全天的分份剂量进行施用。

本公开的药物组合物或疫苗也可以配制用于口部途径施用。适合口服施用的药物组合物或疫苗可作为独立单元，如胶囊剂或片剂；粉末剂或颗粒剂；水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；可食用泡沫或奶油；或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂呈现。

例如，对于片剂或胶囊剂形式的口服施用，活性药物组分能与口服、无毒的药学上可接受惰性载体如乙醇、甘油、水等组合。粉末如下制备：粉碎化合物至合适细粒度，并与类似粉碎的药物载体如可食用碳水化合物(例如淀粉或甘露醇)混合。增味剂、防腐剂、分散剂和着色剂也能存在。

胶囊如下制备：如上所述制备粉末混合物，填充形成的胶囊套。助流剂和润滑剂如硅胶、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇能在填充操作前加入粉末混合物。还可加入崩解剂或增溶剂如琼脂-琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善吞咽胶囊时的药物利用度。

此外，需要或必要时，合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂也能造粒，粉末混合物可经过压片机，结果是未完全形成的小块会碎成颗粒。颗粒能经润滑纳入混合物。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶如阿拉伯胶、黄芪胶或藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化纳等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、皂土、黄原胶等。配制片剂，例如通过制备粉末混合物，造粒或冲击，加入润滑剂和崩解剂并压成片剂。粉末混合物如下制备：如上所述将适当粉碎的化合物与稀释剂或基质混合，可选联同粘合剂如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮，溶液阻滞剂如石蜡，再吸收促进剂如季盐和/或吸收剂如皂土、高岭土或磷酸氢钙。粉末混合物能如下造粒：用粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶粘液(acadiamucilage)或者纤维素或聚合材料溶液湿润，并迫使过筛。防止粘住压片模具的替代方式是加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油。然后，润滑的混合物压成片剂。本公开化合物还能与自由流动的惰性载体组合并直接压成片剂，而不需经历造粒或冲击步骤。可提供澄清或不透明的保护包衣，所述包衣由虫胶密封涂层、糖或聚合材料的涂层和蜡的抛光涂层组成。能向这些包衣加入染料以区分不同单位剂量。

口服液体如溶液、糖浆和酏剂能以单位剂型制备，从而给定量包含预定量的化合物。通过将化合物溶于适当调味的水溶液可制备糖浆，使用无毒醇载剂制备酏剂。通过将化合物分散于无毒载剂可配制混悬剂。还能加入增溶剂和乳化剂如乙氧基化异硬脂醇及聚氧乙烯山梨醇醚、防腐剂、香味添加剂如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人造甜味剂等。

适当时，口服施用的组合物能装入微胶囊。所述组合物还能制备成延长或维持释放，例如通过将微粒材料包被或包埋于聚合物、蜡等。

根据本公开使用的试剂还可以脂质体递送系统形式施用，如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡。脂质体能形成自多种磷脂，如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱。

适合经皮施用的药物组合物可作为独立贴片呈现，贴片旨在维持与受体表皮的长时间密切接触。例如，活性成分可通过离子导入法从贴片递送。

适合局部施用的药物组合物可配制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉末剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。

适合口腔局部施用的药物组合物包括锭剂、糖果锭剂和漱口剂。

适合直肠施用的药物组合物可以为栓剂或灌肠剂。

在另一方面，本公开提供了一种试剂盒，其包含所述疫苗组合产品、所述核酸、所述表达载体和/或所述宿主细胞。

在另一方面，本公开提供了所述试剂盒在制备用于在有相应需要的受试者中诱导针对SARS-CoV-2的免疫应答的药物组合物中的用途。

III.疫苗的联合用药

在另一方面，本公开提供了一种亲本株疫苗和突变株疫苗在制备治疗或预防与SARS-CoV-2相关的疾病或病状的疫苗组合产品中的用途。

在另一方面，本公开提供了本公开提供了一种在有相应需要的受试者中诱导针对新型冠状病毒SARS-CoV-2的免疫应答的方法，所述方法包括：

(i)向受试者施用亲本株疫苗；和

(ii)向受试者施用突变株疫苗。

在一些实施方案中，所述突变株疫苗是引发疫苗，并且所述亲本株疫苗是加强疫苗。

在一些实施方案中，所述亲本株疫苗是引发疫苗，并且所述突变株疫苗是加强疫苗。

在一些实施方案中，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约1-10周首次给予。

在一些实施方案中，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约1-10周给予，优选2-8、3-8、1-3、2-5、2-3、3-5、5-8周给予，更优选2-8、2-5，3-5周给予。

在一些实施方案中，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约1-10周首次给予，优选2-8、3-8、1-3、2-5、2-3、3-5、5-8周首次给予，更优选2-8、2-5，3-5周首次给予；所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约4-72周再次给予，优选6-52、6-45、6-30、6-25、8-52、8-30、8-25、4-12周，更优选4-12、6-25、8-25周再次给予。

在一些实施方案中，所述引发疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约1-10周再次给予，优选2-8、3-8、1-3、2-5、2-3、3-5、5-8周再次给予，更优选2-8、2-5，3-5周再次给予；所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约4-72周首次给予，优选6-52、6-45、6-30、6-25、8-52、8-30、8-25、4-12周，更优选4-12、6-25、8-25周首次给予。

在一些实施方案中，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约2-5周首次给予，并在所述引发疫苗初始给予后大约6-25周再次给予。

在一些实施方案中，所述引发疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约2-5周再次给予，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约6-25周首次给予

用于给药的剂型包括，例如，口服制剂(例如：片剂、胶囊、颗粒剂、粉剂、口服溶液、糖浆剂、口服胶冻剂等)、口腔黏膜制剂(例如：口腔黏膜应用的片剂、口腔黏膜应用的喷雾剂、口腔黏膜应用的半固体制剂、漱口剂等)、用于注射的制剂(例如：注射剂等)、鼻喷雾剂或滴鼻剂、用于吸入的制剂(例如：雾化吸入剂等)、用于直肠的制剂(例如：栓剂、用于直肠应用的半固体制剂、用于直肠应用的灌肠剂等)、用于皮肤应用的制剂(例如：用于皮肤应用的固体制剂、用于皮肤应用的液体和溶液、喷雾剂、软膏剂、霜剂、凝胶剂、贴剂等)及类似形式。

在一些实施方案中，所述疫苗通过皮内注射、皮下注射、肌肉注射、静脉注射、滴鼻或雾化吸入的方式进行施用。

在一些实施方案中，所述疫苗通过注射进行施用。

本公开提供了一种提高新冠疫苗应对新冠病毒及多种突变株协同免疫效果的免疫程序。综合评估了亲本株与南非株疫苗组成的，包括不同注射部位施打组合、二价混合疫苗组合、不同注射程序组合、等不同免疫程序在小鼠体内产生保护力的差异。本公开的免疫程序可使体内获得更高滴度的中和抗体与更广谱的保护力，可显著提升对新冠病毒及多种突变株病毒的防御能力，达到协同免疫的效果。

为了达到清楚和简洁描述的目的，本文中作为相同的或分开的一些实施方案的一部分来描述特征，然而，将要理解的是，本公开的范围可包括具有所描述的所有或一些特征的联合的一些实施方案。

实施例

实施例1：疫苗的制备

本实施例中的亲本株疫苗(V-01)和突变株疫苗(南非株，V-01-351)均是包含IFN、新冠S蛋白的RBD结构域与IgG Fc的融合蛋白。其中，亲本株疫苗的氨基酸序列如SEQ ID NO13所示，其编码核酸序列如SEQ ID NO 15所示；南非株疫苗的氨基酸序列如SEQ ID NO 14所示，其编码核酸序列如SEQ ID NO 16所示。本实施例涉及的所有基因都是通过全基因合成，然后通过Hind III和Pac I双酶切连接到哺乳细胞表达载体pCGS3(购自：Sigma-Aldrich)，分别构建表达亲本株疫苗和突变株疫苗的表达载体，并采用ExpiCHO表达系统对蛋白进行表达，细胞培养液经澄清后的样品直接上Protein A亲和层析柱进行捕获，分别获得纯化的亲本株疫苗和突变株疫苗。

实施例2：小鼠体内效力评估-滴度

疫苗免疫动物后产生特异性的抗体，但该抗体是否能够保护机体不被病毒攻击，还需要进行免疫后血清对于病毒攻击的保护力进行评估。由于新冠病毒的危险性，用真病毒进行攻毒评估非常困难。因此，本实施例采用实施例1制备的亲本株疫苗(V-01，图中简称V01)、突变株疫苗(V-01-351，图中简称351)免疫C57BL/6小鼠，利用重组的新冠病毒S蛋白、以VSV G/HIV为骨架构建包装、并且携带萤光素酶报告基因的假病毒检测免疫后小鼠血清中抗体的中和效价，对亲本株疫苗(V-01)、突变株疫苗(V-01-351)的不同免疫程序的体内效力进行评估。

研究方法：将实施例1制备的亲本株疫苗(V-01)、突变株疫苗(V-01-351)按照不同的免疫程序(表1)，分9组免疫6～8周龄C57BL/6小鼠，疫苗浓度20μg/ml，每只小鼠每次大腿肌肉注射0.1mL，10只/组，每只小鼠共免疫2～3次(第0天、第14天、第28天各一次)。初免28天(即2免14天)、初免42天(即3免14天)后眼眶采血，血液室温静置待凝固后，4000rpm，2～8℃，离心10min，取上清。

各组小鼠疫苗接种的免疫程序如下：

表1实验动物分组与疫苗接种的免疫程序

注：(1)“+”表示混合；

(2)第8组和第9组为左腿注射亲本株疫苗(V-01)，右腿注射突变株疫苗(V-01-351)。

待测血清样本提前采用56℃水浴灭活30min。取抗新冠病毒S蛋白的RBD小鼠中和抗体(购自novoprotein，货号DA035)，先用检测培养液(10％FBS DMEM)稀释至25μg/mL，作为阳性质控品(PC)。取待测血清样本，在96孔全白细胞板中用检测培养液稀释至首孔浓度为5％(即1:20)，然后与阳性质控品一起按照1:3进行倍比稀释，共8个稀释梯度，各稀释梯度的血清样本为100μL/孔。提前在4℃融化假病毒，用检测培养液将假病毒(包括野生型假病毒(购自北京天坛生物，货号80033)、南非突变假病毒(购自北京天坛生物，货号80044)、美国突变假病毒(购自南京诺唯赞生物，货号DD1448)、印度一代突变假病毒(购自南京诺唯赞生物，货号DD1452)、印度二代突变假病毒(购自北京天坛生物，货号80048))稀释至20000TCID50/mL，在血清稀释板中加入50μL/孔假病毒稀释液，假病毒量即为1000TCID50/孔，血清初始稀释度即为1:30。同时设置假病毒对照(VC，不含血清)以及细胞对照(CC，不含血清和假病毒)，然后将全白细胞板置于37℃、5％CO₂培养箱孵育1～2h。收集HEK293T-ACE2细胞(购自吉满生物，货号GM-C09233)，用检测培养液重悬计数，并调整细胞浓度至2.5×10⁵个/mL，按照100μL/孔加入细胞，即每孔细胞为2.5×10⁴个。将全白细胞板置于37℃，5％CO₂培养箱培养20～28h。检测前先吸弃150μL/孔上清，然后按100μL/孔加入萤光素酶检测试剂，并用多道移液器将反应孔中的液体反复吹吸6～8次，室温避光反应5min。酶标仪读取化学发光单位RLU值，按照如下公式进行抑制率计算：抑制率(％)＝[1－(样品组RLU值－细胞对照CC均值)/(假病毒对照VC均值－细胞对照CC均值)]×100％。

将抑制率数据结果导入软件，横坐标为倍比稀释倍数的对数值(Log Titer)，纵坐标为抑制率百分比(％Inhibition)，进行四参数拟合分析，软件自动计算pNT50值，取整即为假病毒中和效价。

结果与结论：

(1)小鼠体内效力评估-二免与三免比较

如图1所示，对于野生株假病毒，三免后中和效价相比于对应二免提高2.4～7.1倍，各种免疫联合三免后均能达到或超过亲本株疫苗(V-01)二免后的效价水平。

如图2所示，对于南非株(501Y.V2)假病毒，三免后中和效价相比于对应二免提高3.2～9.6倍，且除亲本株疫苗(V-01)三免以外，其他各种免疫联合三免后均能达到或超过突变株疫苗(V-01-351)二免后的效价水平。

如图3所示，对于其他突变假病毒(美国株CAL.20C假病毒、印度株B.1.617.1假病毒和印度株B.1.167.2假病毒)，三免后中和效价相比于对应二免有不同比例的提高，且三免后对于美国株假病毒(CAL.20C)和印度株假病毒(B.1.617.1)有较好的中和能力。对于印度株假病毒(B.1.167.2)，虽然中和滴度较差，但是三免后中和能力有2～3倍的提升。

(2)小鼠体内效力评估-免疫程序比较

对于野生株假病毒，三免后中和效价由高至低的免疫程序依次为V01+V01+V01>每腿(V01+351)三免>V01+V01+351>V01+351+351>351+351+351。二免后中和效价V01+V01>每腿(V01+351)二免>V01+351>351+351。中和效价均与亲本株疫苗(V-01)的免疫次数呈正相关，各种免疫联合在三免后均能达到或超过亲本株疫苗(V-01)二免后的中和效价水平。

对于南非株假病毒，三免后效价由高至低依次为351+351+351>每腿(V01+351)三免>V01+V01+351>V01+351+351>V01+V01+V01。二免后效价351+351>每腿(V01+351)二免>V01+351>V01+V01。与突变株疫苗(V-01-351)的免疫次数呈一定相关性。各种免疫联合三免后均能对南非株假病毒产生保护效果。

综合考虑野生株和突变株假病毒的情况，亲本株疫苗(V-01)和突变株疫苗(V-01-351)混打的方式(如每腿(V01+351)、V01+V01+351、V01+351+351)均能够兼顾两者，其中每腿一针的免疫程序在效价水平更优，但是其注射次数最多，实操有一定难度。对比V01+V01+351、V01+351+351这两种免疫程序，前者能够在二免后对野生株产生更好的保护效果，三免后对野生株和南非株的保护力更好。因此，两剂亲本株疫苗(V-01)配合一剂突变株疫苗加强针能够产生更为有效的保护效果。

实施例3：联合使用免疫程序比较

实施例2验证了亲本株疫苗(V-01)和突变株疫苗(V-01-351)混打的方式能够产生更好的免疫效果，且每腿一针(V01+351)的方式效价水平更优，本实施例同样利用实施例2中所述假病毒检测免疫后C57BL/6小鼠血清中抗体的中和效价，来比较亲本株疫苗(V-01)和突变株疫苗(V-01-351)不同混打给药方式的免疫程序对免疫效果的影响，具体给药方式如下：

(1)联合注射给药的免疫程序：

左腿注射亲本株疫苗(V-01)、右腿同时注射突变株疫苗(V-01-351)，分三组实验，注射不同的剂量，分别为1μg(V-01，左腿)+1μg(V-01-351，右腿)、2μg(V-01，左腿)+2μg(V-01-351，右腿)、2μg(V-01，左腿)+4μg(V-01-351，右腿).

(2)二价苗注射给药的免疫程序：

先预混不同比例的亲本株疫苗(V-01)和突变株疫苗(V-01-351)，以混合物的形式注射给药，分三组实验，注射不同的剂量，分别为：1μg(V-01)+1μg(V-01-351)、1μg(V-01)+3μg(V-01-351)、1μg(V-01)+6μg(V-01-351)。

结果与结论：

如图4所示，对于野生株假病毒，混打亲本株疫苗(V-01)和突变株疫苗(V-01-351)二免后，由于联合注射给药和二价苗给药两种免疫方式中亲本株疫苗(V-01)注射剂量相当，效价基本一致，且与亲本株疫苗(V-01)二免后效价相当。

如图5所示，对于南非株假病毒，混打亲本株疫苗(V-01)和突变株疫苗(V-01-351)二免后，联合注射给药和二价苗给药两种免疫方式亦没有呈现明显的剂量依赖趋势，且远低于突变株疫苗(V-01-351)二免后效价。分析原因，可能是突变株疫苗(V-01-351)与亲本株疫苗(V-01)同时注射，两者存在一定的竞争关系，导致突变株疫苗(V-01-351)免疫效果降低。

综合考虑，同时注射亲本株疫苗(V-01)和突变株疫苗(V-01-351)，会导致其对南非株假病毒的效价降低，说明同样的疫苗的不同免疫程序也会影响疫苗对人体的免疫保护。

SEQUENCE LISTING

<110> 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司

<120> 新型冠状病毒SARS-CoV-2的协同免疫及其用途

<130> MTI21245

<160> 16

<170> PatentIn version 3.5

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<212> PRT

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Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

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65 70 75 80

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Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

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Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

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Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

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Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

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Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

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<221> MOD_RES

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Ala Lys Phe Val Ala Ala Tyr Thr Leu Lys Ala Ala Ala

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<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (3)..(3)

<223> Xaa 可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 9

Ala Lys Xaa Val Ala Ala Tyr Thr Leu Lys Ala Ala Ala

1 5 10

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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<210> 13

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<212> PRT

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Leu Arg Ser Lys Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

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Gly Gly Gly Ser Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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aagagccggt ggcagcaggg caacgtgttc tcctgctccg tgctgcatga ggccctgcac 1920

aaccattaca cacagaagag cctgtctctg tcccccggca ag 1962

<210> 16

<211> 1962

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

tgcgacctgc ctcagaccca ctccctgggc tctaggagga ccctcatgct gctggctcag 60

atgagacgga tctctctgtt ctcttgtttg aaggaccggc acgacttcgg ctttcctcag 120

gaagagttcg gcaatcagtt ccagaaggcc gaaaccatcc cagtgctgca cgagatgatc 180

cagcagatct tcaacctgtt ttccaccaag gattcctccg cagcttggga cgagacactg 240

ctggacaagt tctacaccga gctgtaccag cagctgaacg atctggaagc ctgcgtgatc 300

cagggcgtgg gagtgaccga gacacctctg atgaaagagg actctatcct ggccgtgcgg 360

aagtactttc ggagaatcac cctgtacctg aaagaaaaga agtatagccc ctgtgcctgg 420

gaagtggtga gagccgagat catgcggtcc ttcagcctgt ccaccaacct gcaagagagc 480

ctgagatcca aagagggcgg aggcggctct ggcggtggcg gctccggcgg cggagggtcc 540

gccaagttcg tggctgcctg gaccctgaag gccgctgctg gctctggatc tggctcccgc 600

gtgcagccta ccgaaagcat cgtgagattc cctaacatca ccaacctgtg cccctttggc 660

gaggtgttca atgccaccag attcgcctct gtgtacgctt ggaaccggaa gcggatcagc 720

aattgtgtcg ctgactattc cgtcctgtac aactctgcct ccttttctac cttcaagtgc 780

tacggcgtct cgcctaccaa gctgaacgac ctgtgcttca ccaacgtgta cgctgattcc 840

ttcgtgatca gaggcgacga agtccggcag atcgccccag gccaaaccgg aaacattgcc 900

gactacaact acaaactccc tgacgacttc accggctgcg ttatcgcctg gaactccaac 960

aacctggact ccaaggtggg cggcaactac aactacctgt accggctgtt cagaaagtct 1020

aatctgaagc ctttcgagag agacatctcc accgagatct accaggccgg ctccaccccg 1080

tgcaacggcg tgaagggctt caactgctat ttccccctgc agtcctacgg ctttcagccc 1140

acctacggcg tgggctacca accttacaga gtcgtcgtgc tgagcttcga actgcttcac 1200

gcccctgcta ccgtgtgcgg cccaaagaaa tctacaaacc tggtcaagaa caagtgcgtg 1260

aacttcgagc ccaagtcctg tgacaaaact cacacctgtc ctccttgccc tgcccccgaa 1320

ctgctgggag gcccctccgt gtttctgttc ccacctaagc ctaaggacca gctgatgatc 1380

tcccgcacac ccgaggtgac ctgtgtggtg gtcgacgtgt ctcatgagga tcctgaggtg 1440

aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggaa gtgcacaacg ccaagacgaa gcccagagag 1500

gaacagtaca actccaccta cagagtggtg tccgtgctga cagttctgca ccaggactgg 1560

ctgaatggca aagagtacaa gtgcaaggtg tccaacaagg ctctgcccgc tcctatcgag 1620

aagacaatca gcaaggccaa aggccagcct agagagcctc aagtgtacac cctgcctcct 1680

tctagagatg agctgactaa gaaccaggtg tctctgacct gcctggtgaa gggcttctac 1740

ccttctgata tcgctgtgga atgggagtct aatggccagc ctgagaacaa ctacaagacc 1800

acccctccag tgctcgattc cgacggatct ttcttcctgt attccaagct gaccgtggac 1860

aagtccagat ggcagcaggg caacgtgttc tcctgctccg tgctgcacga ggccctgcat 1920

aaccactaca cccagaaatc tctgtccctg tctcctggca ag 1962

Claims (16)

1.一种治疗或预防与SARS-CoV-2相关的疾病或病状的疫苗组合产品，所述疫苗组合产品包含：

(i)亲本株疫苗，所述亲本株疫苗包含野生型SARS-CoV-2多肽的融合蛋白，所述野生型SARS-CoV-2融合蛋白包含：(1)干扰素或其功能片段；(2)野生型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD或其功能片段；和(3)免疫球蛋白Fc区；和

(ii)突变株疫苗，所述突变株疫苗包含突变型SARS-CoV-2多肽的融合蛋白，所述突变型SARS-CoV-2融合蛋白包含：(1)干扰素或其功能片段；(2)突变型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD或其功能片段；和(3)免疫球蛋白Fc区；

其中，所述亲本株疫苗或所述突变株疫苗中的一种作为引发疫苗施用，所述亲本株疫苗或所述突变株疫苗中的一种作为加强疫苗施用，并且所述亲本株疫苗和所述突变株疫苗两者均被施用。

2.亲本株疫苗和突变株疫苗在制备治疗或预防与SARS-CoV-2相关的疾病或病状的疫苗组合产品中的用途，所述疫苗组合产品包含：

(i)亲本株疫苗，所述亲本株疫苗包含野生型SARS-CoV-2多肽的融合蛋白，所述野生型SARS-CoV-2融合蛋白包含：(1)干扰素或其功能片段；(2)野生型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD或其功能片段；和(3)免疫球蛋白Fc区；和

(ii)突变株疫苗，所述突变株疫苗包含突变型SARS-CoV-2多肽的融合蛋白，所述突变型SARS-CoV-2融合蛋白包含：(1)干扰素或其功能片段；(2)突变型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD或其功能片段；和(3)免疫球蛋白Fc区；

其中所述亲本株疫苗或所述突变株疫苗中的一种作为引发疫苗施用，所述亲本株疫苗或所述突变株疫苗中的一种作为加强疫苗施用，并且所述亲本株疫苗和所述突变株疫苗两者均被施用。

3.一种在有相应需要的受试者中诱导针对SARS-CoV-2的免疫应答的方法，所述方法包括：

(i)向受试者施用亲本株疫苗，所述亲本株疫苗包含野生型SARS-CoV-2多肽的融合蛋白，所述野生型SARS-CoV-2融合蛋白包含：(1)干扰素或其功能片段；(2)野生型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD或其功能片段；和(3)免疫球蛋白Fc区；和

(ii)向受试者施用突变株疫苗，所述突变株疫苗包含突变型SARS-CoV-2多肽的融合蛋白，所述突变型SARS-CoV-2融合蛋白包含：(1)干扰素或其功能片段；(2)突变型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD或其功能片段；和(3)免疫球蛋白Fc区；

其中所述亲本株疫苗或所述突变株疫苗中的一种作为引发疫苗施用，所述亲本株疫苗或所述突变株疫苗中的一种作为加强疫苗施用，并且所述亲本株疫苗和所述突变株疫苗两者均被施用；

优选地，所述受试者是哺乳动物或鸟类；

优选地，所述受试者是人类、牛、犬、猫、山羊、绵羊、猪、马、火鸡、鸭或鸡。

4.权利要求1所述的疫苗组合产品、权利要求2所述的用途或权利要求3所述的方法，其中，所述干扰素选自I型干扰素、II型干扰素和/或III型干扰素；

优选地，所述干扰素可来自人源或鼠源；

优选地，所述I型干扰素选自IFN-α、IFN-β、IFN-κ、IFN-δ、IFN-ε、IFN-τ、IFN-ω和IFN-ζ；

优选地，所述II型干扰素为干扰素γ；

优选地，所述III型干扰素选自IFN-λ1(IL-29)、IFN-λ2(IL-28a)和IFN-λ(IL-28b)；

优选地，所述干扰素选自人IFN-α1、IFN-α2、IFN-α4、IFN-α5、IFN-α6、IFN-α7、IFN-α8、IFN-α10、IFN-α13、IFN-α14、IFN-α16、IFN-α17和IFN-α21；

更优选地，所述干扰素为IFN-α2a；优选地，所述IFN-α2a的氨基酸序列包含与SEQ IDNO 1所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述IFN-α-2a的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

5.根据权利要求1或4所述的疫苗组合产品、权利要求2或4所述的用途或权利要求3或4所述的方法，其中，所述野生型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD包含与SEQ ID NO 2所示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述野生型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；

优选地，所述突变型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD包含与SEQ ID NO 3所示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述突变型SARS-CoV-2的S蛋白的RBD的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

6.根据权利要求1、4或5任一项所述的疫苗组合产品、权利要求2、4或5任一项所述的用途或权利要求3-5任一项所述的方法，其中，所述免疫球蛋白Fc区选自IgG1、IgG2、IgG3和/或IgG4的恒定区氨基酸序列；

优选地，所述免疫球蛋白Fc区为IgG1的Fc区；优选地，所述IgG1 Fc区包含与SEQ ID NO4所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述IgG1Fc区的氨基酸序列如SEQ ID NO 4所示。

7.根据权利要求1、4-6任一项所述的疫苗组合产品、权利要求2、4-6任一项所述的用途或权利要求3-6任一项所述的方法，其中，所述融合蛋白还包含一个或多个Th细胞辅助表位和/或连接片段；

优选地，所述Th细胞辅助表位为PADRE或其衍生物；所述PADRE或其衍生物的氨基酸序列选自SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 9和SEQ ID NO10；

优选地，所述连接片段为柔多肽序列；优选地，所述柔性肽的氨基酸序列选自SEQ IDNO 11和SEQ ID NO 12。

8.根据权利要求1、4-7任一项所述的疫苗组合产品、权利要求2、4-7任一项所述的用途或权利要求3-7任一项所述的方法，其中，所述亲本株疫苗和/或所述突变株疫苗独立地还包含一种或更多种药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或佐剂；

优选地，所述佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝、皂苷例如Quil A、QS-21、GPI-0100、油包水型乳状液、水包油型乳状液、水包油包水型乳状液；

优选地，其中所述亲本株疫苗和/或所述突变株疫苗呈液体、乳液、固体、气雾剂、薄雾或气体的形式；

优选地，所述野生型SARS-CoV-2的融合蛋白包含与选自SEQ ID NO 13所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；优选地，所述野生型SARS-CoV-2的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 13所示；

优选地，所述突变型SARS-CoV-2的融合蛋白包含与选自SEQ ID NO 14所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；优选地，所述突变型SARS-CoV-2的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 14所示；

优选地，所述突变株疫苗是引发疫苗，并且所述亲本株疫苗是加强疫苗；

优选地，所述亲本株疫苗是引发疫苗，并且所述突变株疫苗是加强疫苗；

优选地，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后间隔一段时间给予以进行免疫；

优选地，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后间隔一段时间首次给予以进行第一次加强免疫，并且，所述加强疫苗在引发疫苗初始给予后间隔另一段时间再次给予以进行第二次加强免疫；优选地，所述亲本株疫苗是引发疫苗，并且所述突变株疫苗是加强疫苗，所述突变株疫苗在所述亲本株疫苗初始给予后间隔一段时间首次给予，并且，所述突变株疫苗在亲本株疫苗初始给予后间隔另一段时间再次给予；

优选地，所述引发疫苗在所述引发疫苗初始给予后间隔一段时间再次给予以进行第一次加强免疫，并且，所述加强疫苗在引发疫苗初始给予后间隔另一段时间首次给予以进行第二次加强免疫；优选地，所述亲本株疫苗是引发疫苗，并且所述突变株疫苗是加强疫苗，所述亲本株疫苗在所述亲本株疫苗初始给予后间隔一段时间再次给予，并且，所述突变株疫苗在亲本株疫苗初始给予后间隔另一段时间首次给予；

优选地，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约1-10周给予，优选2-8、3-8、1-3、2-5、2-3、3-5、5-8周给予，更优选2-8、2-5，3-5周给予；

更优选地，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约1-10周首次给予，优选2-8、3-8、1-3、2-5、2-3、3-5、5-8周首次给予，更优选2-8、2-5，3-5周首次给予；所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约4-72周再次给予，优选6-52、6-45、6-30、6-25、8-52、8-30、8-25、4-12周，更优选4-12、6-25、8-25周再次给予；

更优选地，所述引发疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约1-10周再次给予，优选2-8、3-8、1-3、2-5、2-3、3-5、5-8周再次给予，更优选2-8、2-5，3-5周再次给予；所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约4-72周首次给予，优选6-52、6-45、6-30、6-25、8-52、8-30、8-25、4-12周，更优选4-12、6-25、8-25周首次给予；

更优选地，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约2-5周首次给予，并在所述引发疫苗初始给予后大约6-25周再次给予；

更优选地，所述引发疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约2-5周再次给予，所述加强疫苗在所述引发疫苗初始给予后大约6-25周首次给予。

9.编码1、4-7任一项所述的疫苗组合产品的核酸；

优选地，所述包含野生型SARS-CoV-2多肽融合蛋白的编码核酸包含与SEQ ID NO:15所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序列；所述野生型SARS-CoV-2的融合蛋白的编码核酸为SEQ ID NO 15所示的核酸；

优选地，所述包含突变型SARS-CoV-2多肽融合蛋白的编码核酸包含与SEQ ID NO:16所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序列；所述突变型SARS-CoV-2融合蛋白的编码核酸为SEQ ID NO 16所示的核酸；

优选地，所述核酸是mRNA。

10.一种包含权利要求9所述的核酸的表达载体；

优选地，所述表达载体选自质粒、粘粒、病毒载体、RNA载体或线性或圆形DNA或RNA分子；

优选地，所述质粒选自pCI、puc57、pcDNA3、pSG5、pJ603和pCMV；

优选地，所述病毒载体选自腺病毒、逆转录病毒、细小病毒(例如，腺伴随病毒)、冠状病毒、负链RNA病毒诸如正粘病毒(例如，流感病毒)、弹状病毒(例如，狂犬病和水疱性口炎病毒)、副粘病毒(例如，麻疼和仙台)、正链RNA病毒诸如小RNA病毒和甲病毒，和双链DNA病毒；

优选地，所述腺病毒载体选自人、黑猩猩或恒河猴腺病毒；优选地，所述腺病毒选自血清型Ad2、Ad4、Ad5、Ad6、Ad11、Ad12、Ad24、Ad26、Ad34、Ad35、Ad40、Ad48、Ad49、Ad50、Ad52和Pan9腺病毒；

优选地，所述逆转录病毒选自禽造白细胞组织增生-肉瘤、哺乳动物C-型、B-型病毒、D-型病毒、HTLV-BLV集合、慢病毒和泡沫病毒；

优选地，所述慢病毒载体选自HIV-1、HIV_2、SIV、FIV、BIV、EIAV、CAEV和绵羊脱髓鞘性脑白质炎慢病毒；

优选地，所述双链DNA病毒包括腺病毒、疱疹病毒(例如，单纯疱疹病毒1和2型、愛泼斯坦-巴尔病毒、巨细胞病毒)和痘病毒(例如，牛痘病毒、鸡痘病毒和金丝雀痘病毒)、诺沃克病毒、披膜病毒、黄病毒、呼肠孤病毒、乳多泡病毒、嗜肝DNA病毒、杆状病毒和肝炎病毒。

11.一种表达权利要求1、4-7任一项所述的疫苗组合产品、包含权利要求9所述的核酸和/或包含权利要求10所述的表达载体的宿主细胞；

优选地，所述宿主细胞是原核细胞或真核细胞；

优选地，所述原核细胞是细菌细胞；优选地，所述原核细胞是大肠杆菌细胞；

优选地，所述真核细胞选自酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞；优选地，所述哺乳动物细胞选自CHO、HEK293、SP2/0、BHK、C127等；更优选地，所述真核细胞为CHO细胞。

12.一种药物组合物，其包含权利要求1、4-7任一项所述的疫苗组合产品、权利要求9所述的核酸、权利要求10所述的表达载体和/或权利要求11所述的宿主细胞，以及任选地一种或多种药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂。

13.一种试剂盒，其包含权利要求1-8任一项所述的疫苗组合产品、权利要求9所述的核酸、权利要求10所述的表达载体、权利要求11所述的宿主细胞和/或权利要求12所述的药物组合物。

14.成套药盒，其包括以下组分：

亲本株疫苗，与药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂联合；

突变株疫苗，与药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂联合；

其中所述组分以分开施用的形式提供。

15.权利要求14所述成套药盒，其包括：

含亲本株疫苗与药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂的第一容器；和含突变株疫苗与药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂的第二容器。

16.权利要求12所述的药物组合物、权利要求13所述的试剂盒或权利要求14或15所述的成套药盒在制备用于在有相应需要的受试者中诱导针对SARS-CoV-2的免疫应答的药物组合物中的用途。

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