CN115768456A - Tslp特异性的双环肽配体 - Google Patents

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CN115768456A CN202180038689.5A CN202180038689A CN115768456A CN 115768456 A CN115768456 A CN 115768456A CN 202180038689 A CN202180038689 A CN 202180038689A CN 115768456 A CN115768456 A CN 115768456A
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T·斯文森
P·兹拉托德斯基
L·海德斯特
L·陈
M·斯基内
S·沃茶木
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Abstract

本发明涉及多肽，其与分子支架共价结合，使得在支架的连接点之间对向存在两个或更多个肽环。特别地，本发明描述了作为胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的高亲和力结合物的肽。本发明还包括包含所述肽配体的药物组合物以及所述肽配体在预防、抑制或治疗由TSLP介导的疾病或病症中的用途。

Description

TSLP特异性的双环肽配体
技术领域
本发明涉及多肽，其与分子支架共价结合，使得在支架的连接点之间对向存在(subtend)两个或更多个肽环。特别地，本发明描述了作为胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的高亲和力结合物的肽。本发明还包括包含所述肽配体的药物组合物以及所述肽配体在预防、抑制或治疗由TSLP介导的疾病或病症中的用途。
背景技术
哮喘是一种常见的肺部气道的长期炎性疾病。其特点在于症状多变且反复发作、可逆的气流阻塞，以及容易引发支气管痉挛。症状包括喘息、咳嗽、胸闷和气短的发作。这些可能每天发生几次或每周发生几次。因人而异，哮喘症状可能在夜间或运动时加重。
哮喘被认为是由遗传和环境因素共同造成。环境因素包括暴露于空气污染和过敏原。其他潜在的触发物包括药物，如阿司匹林和β阻滞剂。诊断通常是基于症状的模式、随着时间的推移对治疗的反应、以及肺量测定法的肺功能测试。哮喘的分类是根据症状的频率、一秒内用力呼气容积(FEV1)和呼气峰值流速。它也可分为特应性或非特应性，其中特应性是指倾向于发展成1型超敏反应。
在过敏性哮喘中，气道的炎症是导致气道重塑和损伤的关键因素。由T辅助2细胞介导的免疫和它们产生的细胞因子，包括IL-3、IL-4、IL-5、IL-9、IL-13和GM-CSF，已被证明在这种疾病中发挥了重要作用(Holgate(2012)Nat.Med.18，73-83)。
胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是一种细胞因子，由上皮细胞在响应促炎症刺激时释放。TSLP通过由IL-7Rα亚基和独特的TSLP受体组成的异二聚体受体传递信号(West等人(2012)Drug Discovery Today:Disease Mechanisms 9,e83-e88)。细胞因子作用于一些不同的免疫细胞，启动炎症反应，使初始T细胞分化为表达高水平IL-4、IL-5和IL-13的TH2细胞，这些都参与哮喘的发病机制。
哮喘是无法治愈的，因此非常需要能够改善或消除呼吸疾病(如哮喘)的症状的治疗剂。
发明内容
根据本发明的第一个方面，提供了一种TSLP特异性的肽配体，其包含多肽和分子支架，所述多肽包含被至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，并且所述分子支架与所述多肽的半胱氨酸残基形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环。
根据本发明的一个进一步的方面，提供了一种药物组合物，其包含如本文所定义的肽配体与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。
根据本发明的又一个进一步的方面，提供了如本文所定义的肽配体，用于预防、抑制或治疗TSLP介导的疾病或病症。
具体实施方式
根据本发明的第一个方面，提供了一种TSLP特异性的肽配体，其包含多肽和分子支架，所述多肽包含被至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，并且所述分子支架与所述多肽的半胱氨酸残基形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环。
在一个实施方案中，所述环序列包含3、4、5、6或7个氨基酸。
在进一步的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列的第一环序列由5个氨基酸组成，第二环序列由4个氨基酸组成。
在一个实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由5个氨基酸组成，第二环序列由4个氨基酸组成，所述肽配体包含如下的氨基酸序列：
Figure BDA0003966615320000021
Figure BDA0003966615320000031
Figure BDA0003966615320000041
Figure BDA0003966615320000051
Figure BDA0003966615320000061
Figure BDA0003966615320000071
Figure BDA0003966615320000072
和
Figure BDA0003966615320000073
或其药学上可接受的盐。
在进一步的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由5个氨基酸组成，第二环序列由4个氨基酸组成，所述肽配体任选地包含N-和/或C-末端修饰并且选自：
Ac-(SEQ ID NO:1)(下文称为示例1)；
Ac-(SEQ ID NO:2)(下文称为示例2)；
Ac-(SEQ ID NO:3)(下文称为示例3)；
tertBuCO-(SEQ ID NO:3)(下文称为示例6)；
R1-(SEQ ID NO:3)(下文称为示例7)；
Ac-(SEQ ID NO:4)(下文称为示例4)；
Ac-(SEQ ID NO:5)(下文称为示例5)；
Ac-(SEQ ID NO:6)(下文称为示例8)；
Ac-(SEQ ID NO:7)(下文称为示例9)；
Ac-(SEQ ID NO:8)(下文称为示例10)；
Ac-(SEQ ID NO:9)(下文称为示例11)；
Ac-(SEQ ID NO:10)(下文称为示例12)；
Ac-(SEQ ID NO:11)(下文称为示例13)；
Ac-(SEQ ID NO:12)(下文称为示例14)；
辛酰基-(SEQ ID NO:13)(下文称为示例15)；
Ac-(SEQ ID NO:14)(下文称为示例16)；
Ac-(SEQ ID NO:15)(下文称为示例17)；
Ac-(SEQ ID NO:15)-[dA](下文称为示例33)；
(SEQ ID NO:15)-COOH(下文称为示例48)；
Ac-(SEQ ID NO:16)(下文称为示例18)；
Ac-(SEQ ID NO:17)(下文称为示例19)；
Ac-(SEQ ID NO:18)(下文称为示例20)；
Ac-(SEQ ID NO:19)(下文称为示例21)；
Ac-(SEQ ID NO:20)(下文称为示例22)；
Ac-(SEQ ID NO:21)(下文称为示例23)；
Ac-(SEQ ID NO:22)(下文称为示例24)；
(SEQ ID NO:23)(下文称为示例252)；
Ac-(SEQ ID NO:23)(下文称为示例25)；
Ac-(SEQ ID NO:23)-[dA](下文称为示例29)；
Ac-(SEQ ID NO:24)(下文称为示例26)；
Ac-(SEQ ID NO:25)(下文称为示例27)；
Ac-(SEQ ID NO:26)(下文称为示例28)；
Ac-(SEQ ID NO:27)(下文称为示例30)；
Ac-(SEQ ID NO:28)(下文称为示例31)；
Ac-(SEQ ID NO:29)(下文称为示例32)；
Ac-(SEQ ID NO:30)(下文称为示例34)；
Ac-(SEQ ID NO:31)(下文称为示例35)；
Ac-(SEQ ID NO:32)(下文称为示例36)；
Ac-(SEQ ID NO:33)(下文称为示例37)；
Ac-(SEQ ID NO:34)(下文称为示例38)；
Ac-(SEQ ID NO:34)-[dA](下文称为示例49)；
Ac-(SEQ ID NO:34)-COOH(下文称为示例69)；
Ac-(SEQ ID NO:35)(下文称为示例43)；
Ac-(SEQ ID NO:35)-COOH(下文称为示例39)；
Ac-(SEQ ID NO:36)(下文称为示例40)；
Ac-(SEQ ID NO:37)(下文称为示例41)；
A-(SEQ ID NO:38)-ADGDML(下文称为示例42)；
GTDSAE-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例45)；
Ac-A-(SEQ ID NO:38)-PLD(下文称为示例53)；
Ac-(SEQ ID NO:38)-APDERD(下文称为示例54)；
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TMEYRD-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例56)；
A-(SEQ ID NO:38)-SSSDQS(下文称为示例59)；
SDEQRT-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例61)；
DDEIMQ-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例64)；
RTDETG-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例67)；
A-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例68)；
ETNNLE-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例71)；
Ac-(SEQ ID NO:38)(下文称为示例79)；
DPPKPR-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例87)；
(SEQ ID NO:38)-DTSTHS(下文称为示例128)；
Ac-(SEQ ID NO:39)(下文称为示例44)；
Ac-(SEQ ID NO:40)(下文称为示例46)；
Ac-(SEQ ID NO:41)(下文称为示例47)；
Ac-(SEQ ID NO:42)(下文称为示例50)；
Ac-(SEQ ID NO:43)(下文称为示例51)；
Ac-(SEQ ID NO:44)(下文称为示例52)；
Ac-(SEQ ID NO:45)(下文称为示例57)；
Ac-(SEQ ID NO:46)(下文称为示例58)；
Ac-(SEQ ID NO:47)(下文称为示例60)；
Ac-(SEQ ID NO:48)(下文称为示例62)；
A-(SEQ ID NO:49)-ADS(下文称为示例63)；
Ac-(SEQ ID NO:50)(下文称为示例65)；
Ac-(SEQ ID NO:51)(下文称为示例66)；
Ac-(SEQ ID NO:52)(下文称为示例70)；
Ac-(SEQ ID NO:53)(下文称为示例72)；
SPP-(SEQ ID NO:54)-A(下文称为示例73)；
Ac-(SEQ ID NO:55)(下文称为示例74)；
A-(SEQ ID NO:56)-HLE(下文称为示例75)；
A-(SEQ ID NO:57)-A(下文称为示例76)；
Ac-(SEQ ID NO:58)(下文称为示例77)；
Ac-(SEQ ID NO:59)(下文称为示例78)；
Ac-(SEQ ID NO:60)(下文称为示例80)；
Ac-(SEQ ID NO:61)(下文称为示例81)；
Ac-(SEQ ID NO:62)(下文称为示例82)；
Ac-(SEQ ID NO:63)(下文称为示例83)；
tertBuCO-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例84)；
R1-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例89)；
R2-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例95)；
苄基-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例93)；
Ac-(SEQ ID NO:64)-[N-苯乙酰胺](下文称为示例96)；
R3-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例99)；
R4-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例103)；
Ac-(SEQ ID NO:64)-[N-苄基酰胺](下文称为示例109)；
A-(SEQ ID NO:64)-A(下文称为示例115)；
苯甲酰基-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例116)；
Ac-(SEQ ID NO:64)-R5(下文称为示例120)；
琥珀酰基-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例121)；
Ac-(SEQ ID NO:64)-[N-辛基酰胺](下文称为示例122)；
Ac-(SEQ ID NO:64)-[N-戊基酰胺](下文称为示例123)；
Ac-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例124)；
Ac-(SEQ ID NO:64)-R6(下文称为示例127)；
(SEQ ID NO:64)(下文称为示例129)；
癸酰基-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例137)；
己酰基-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例139)；
SPT-(SEQ ID NO:65)-A(下文称为示例85)；
Ac-(SEQ ID NO:66)(下文称为示例86)；
TIK-(SEQ ID NO:67)-A(下文称为示例88)；
Ac-(SEQ ID NO:68)(下文称为示例90)；
Ac-(SEQ ID NO:69)(下文称为示例91)；
Ac-(SEQ ID NO:70)(下文称为示例92)；
Ac-(SEQ ID NO:71)(下文称为示例94)；
DNH-(SEQ ID NO:72)-A(下文称为示例97)；
HPN-(SEQ ID NO:73)-A(下文称为示例98)；
Ac-(SEQ ID NO:74)-TTS(下文称为示例100)；
A-(SEQ ID NO:75)-A(下文称为示例101)；
(SEQ ID NO:76)(下文称为示例102)；
Ac-(SEQ ID NO:76)(下文称为示例104)；
Ac-(SEQ ID NO:77)(下文称为示例105)；
DQD-(SEQ ID NO:78)-A(下文称为示例106)；
Ac-(SEQ ID NO:79)(下文称为示例107)；
Ac-(SEQ ID NO:80)(下文称为示例108)；
Ac-(SEQ ID NO:81)(下文称为示例110)；
Ac-(SEQ ID NO:82)(下文称为示例111)；
Ac-(SEQ ID NO:83)(下文称为示例112)；
Ac-(SEQ ID NO:84)(下文称为示例113)；
Ac-(SEQ ID NO:85)(下文称为示例114)；
REN-(SEQ ID NO:86)-A(下文称为示例117)；
Ac-(SEQ ID NO:87)(下文称为示例118)；
Ac-(SEQ ID NO:88)(下文称为示例119)；
A-(SEQ ID NO:89)-HEE(下文称为示例125)；
Ac-(SEQ ID NO:90)(下文称为示例126)；
Ac-(SEQ ID NO:91)(下文称为示例130)；
Ac-(SEQ ID NO:92)(下文称为示例131)；
Ac-(SEQ ID NO:93)(下文称为示例132)；
Ac-(SEQ ID NO:94)(下文称为示例133)；
Ac-(SEQ ID NO:95)(下文称为示例134)；
Ac-(SEQ ID NO:96)(下文称为示例135)；
A-(SEQ ID NO:97)-HSE(下文称为示例136)；
A-(SEQ ID NO:98)-ETA(下文称为示例138)；
Ac-(SEQ ID NO:99)(下文称为示例140)；
A-(SEQ ID NO:100)-A(下文称为示例141)；
Ac-(SEQ ID NO:101)(下文称为示例142)；
Ac-(SEQ ID NO:102)(下文称为示例143)；
Ac-(SEQ ID NO:103)(下文称为示例144)；
Ac-(SEQ ID NO:104)(下文称为示例145)；
Ac-(SEQ ID NO:105)(下文称为示例146)；
Ac-(SEQ ID NO:106)(下文称为示例147)；
Ac-(SEQ ID NO:107)(下文称为示例148)；
Ac-(SEQ ID NO:108)(下文称为示例149)；
A-(SEQ ID NO:109)-A(下文称为示例150)；
Ac-(SEQ ID NO:110)(下文称为示例151)；
Ac-(SEQ ID NO:111)(下文称为示例152)；
Ac-(SEQ ID NO:112)(下文称为示例153)；
Ac-(SEQ ID NO:113)(下文称为示例154)；
Ac-(SEQ ID NO:114)(下文称为示例155)；
(SEQ ID NO:114)(下文称为示例156)；
Ac-(SEQ ID NO:115)(下文称为示例157)；
Ac-(SEQ ID NO:116)(下文称为示例158)；
Ac-(SEQ ID NO:117)(下文称为示例159)；和
Ac-(SEQ ID NO:118)(下文称为示例160)；
其中Ac代表乙酰基，tertBuCO代表
Figure BDA0003966615320000111
R1代表：
Figure BDA0003966615320000112
R2代表：
Figure BDA0003966615320000121
R3代表：
Figure BDA0003966615320000122
R4代表：
Figure BDA0003966615320000123
R5代表：
Figure BDA0003966615320000124
以及
R6代表：
Figure BDA0003966615320000125
或其药学上可接受的盐。
在进一步的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由7个氨基酸组成，第二环序列由5个氨基酸组成。
在一个实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由7个氨基酸组成，第二环序列由5个氨基酸组成，所述肽配体包含如下的氨基酸序列：
Figure BDA0003966615320000126
Figure BDA0003966615320000131
和
Figure BDA0003966615320000132
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由7个氨基酸组成，第二环序列由5个氨基酸组成，所述肽配体任选地包含N-和/或C-末端修饰并且选自：
A-(SEQ ID NO:119)-A(下文称为示例161)；
A-(SEQ ID NO:120)-A(下文称为示例162)；
A-(SEQ ID NO:121)-A(下文称为示例163)；
(SEQ ID NO:121)(下文称为示例185)；
A-(SEQ ID NO:122)-A(下文称为示例164)；
YATTQV-(SEQ ID NO:122)-A(下文称为示例171)；
KDNRVD-(SEQ ID NO:122)-A(下文称为示例172)；
EYQRDV-(SEQ ID NO:122)-A(下文称为示例173)；
A-(SEQ ID NO:122)-SNSYDMA(下文称为示例174)；
A-(SEQ ID NO:122)-SESVHTA(下文称为示例175)；
A-(SEQ ID NO:122)-SSDTTDA(下文称为示例176)；
A-(SEQ ID NO:122)-KPDHVDA(下文称为示例177)；
A-(SEQ ID NO:122)-ANV(下文称为示例186)；
RVNTHQ-(SEQ ID NO:122)-A(下文称为示例190)；
YDRDFT-(SEQ ID NO:122)-A(下文称为示例191)；
EVDTYP-(SEQ ID NO:122)-A(下文称为示例192)；
A-(SEQ ID NO:122)-ADGLYDA(下文称为示例193)；
AHP-(SEQ ID NO:123)-A(下文称为示例165)；
YGA-(SEQ ID NO:124)-A(下文称为示例166)；
A-(SEQ ID NO:125)-APN(下文称为示例167)；
A-(SEQ ID NO:126)-YDE(下文称为示例168)；
A-(SEQ ID NO:127)-AGD(下文称为示例169)；
A-(SEQ ID NO:128)-AHP(下文称为示例170)；
(SEQ ID NO:129)(下文称为示例178)；
(SEQ ID NO:130)(下文称为示例179)；
(SEQ ID NO:131)(下文称为示例180)；
(SEQ ID NO:132)(下文称为示例181)；
(SEQ ID NO:133)(下文称为示例182)；
A-(SEQ ID NO:134)-A(下文称为示例183)；
A-(SEQ ID NO:135)-A(下文称为示例184)；
RAP-(SEQ ID NO:136)-A(下文称为示例187)；
SHV-(SEQ ID NO:137)-A(下文称为示例188)；
RDL-(SEQ ID NO:138)-A(下文称为示例189)；
(SEQ ID NO:139)(下文称为示例194)；和
(SEQ ID NO:140)(下文称为示例195)；
或其药学上可接受的盐。
在进一步的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列一个由7个氨基酸组成，第二环序列由3个氨基酸组成。
在一个实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由7个氨基酸组成，第二环序列由3个氨基酸组成，所述肽配体包含如下的氨基酸序列：
Figure BDA0003966615320000141
和
Figure BDA0003966615320000151
或其药学上可接受的盐。
在一个进一步的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由7个氨基酸组成，第二环序列由3个氨基酸组成，所述肽配体任选地包含N-和/或C-末端修饰，并且选自：
A-(SEQ ID NO:141)-A(下文称为示例196)；
A-(SEQ ID NO:142)-A(下文称为示例197)；
A-(SEQ ID NO:143)-A(下文称为示例198)；
A-(SEQ ID NO:144)-A(下文称为示例199)；
DEQHHE-(SEQ ID NO:144)-A(下文称为示例209)；
SNATKQ-(SEQ ID NO:144)-A(下文称为示例210)；
GNIKKS-(SEQ ID NO:144)-A(下文称为示例211)；
A-(SEQ ID NO:144)-DPSSKQA(下文称为示例212)；
A-(SEQ ID NO:144)-YDNEMSA(下文称为示例213)；
SEAQET-(SEQ ID NO:144)(下文称为示例214)；
SPTEPP-(SEQ ID NO:144)(下文称为示例215)；
(SEQ ID NO:144)-EPETGQ(下文称为示例216)；
NRSPSE-(SEQ ID NO:144)(下文称为示例217)；
Ac-(SEQ ID NO:144)(下文称为示例218)；
R7-(SEQ ID NO:144)(下文称为示例219)；
A-(SEQ ID NO:144)-EPETGQA(下文称为示例221)；
(SEQ ID NO:144)-GDMSVS(下文称为示例222)；
(SEQ ID NO:144)-YDNEMS(下文称为示例223)；
(SEQ ID NO:144)-APDHLP(下文称为示例224)；
(SEQ ID NO:144)-DPSSKQ(下文称为示例226)；
(SEQ ID NO:144)-ANSEFE(下文称为示例227)；
(SEQ ID NO:144)-GAGESS(下文称为示例228)；
DHD-(SEQ ID NO:145)-A(下文称为示例200)；
ADG-(SEQ ID NO:146)-A(下文称为示例201)；
TLP-(SEQ ID NO:147)-A(下文称为示例202)；
SQE-(SEQ ID NO:148)-A(下文称为示例203)；
AET-(SEQ ID NO:149)-A(下文称为示例204)；
A-(SEQ ID NO:150)-DPN(下文称为示例205)；
A-(SEQ ID NO:151)-API(下文称为示例206)；
A-(SEQ ID NO:152)-ANT(下文称为示例207)；
A-(SEQ ID NO:153)-FAE(下文称为示例208)；
AND-(SEQ ID NO:154)-A(下文称为示例220)；和
ERN-(SEQ ID NO:155)-A(下文称为示例225)；
其中R7表示
Figure BDA0003966615320000161
或其药学上可接受的盐。
在进一步的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由6个氨基酸组成，第二环序列由5个氨基酸组成。
在一个实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由6个氨基酸组成，第二环序列由5个氨基酸组成，所述肽配体包含如下的氨基酸序列：
CSLDPWSCHNWWTC(SEQ ID NO:156)；和
CALDPWVCPQWWDC(SEQ ID NO:157)；
或其药学上可接受的盐。
在一个进一步的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由6个氨基酸组成，第二环序列由5个氨基酸组成，所述肽配体任选地包含N-和/或C-末端修饰，并且选自：
A-(SEQ ID NO:156)-A(下文称为示例229)；和
A-(SEQ ID NO:157)-A(下文称为示例230)；
或其药学上可接受的盐。
在进一步的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列的第一环序列由6个氨基酸组成，第二环序列由6个氨基酸组成。
在一个实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由6个氨基酸组成，第二环序列由6个氨基酸组成，所述肽配体包含如下的氨基酸序列：
CQEHDWYCLLYQPEC(SEQ ID NO:158)；和
CDELDIPCWIFKTLC(SEQ ID NO:159)；
或其药学上可接受的盐。
在进一步的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由6个氨基酸组成，第二环序列由6个氨基酸组成，所述肽配体任选地包含N-和/或C-末端修饰，并且选自：
A-(SEQ ID NO:158)-A(下文称为示例231)；和
A-(SEQ ID NO:159)-A(下文称为示例232)；
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，肽配体包含由两个修饰的氨基酸残基连接形成的额外的环。在进一步的实施方案中，两个修饰的氨基酸残基是修饰的甘氨酸残基(在此称为modG)，由一个接头部分分开。
在一个实施方案中，接头包含-(CH2)2-10-接头(如-(CH2)3-9-接头)，任选地并入双键或三嗪环(如1，2，3三嗪环)。
所述两个modG残基之间的接头的具体示例包括：
-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-CH2-；
-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-；
-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-；
-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-；
-CH2-CH2-CH2＝CH-CH-CH2-CH2-；
-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-；
-CH2-CH2-CH2＝CH-CH-CH2-；
-CH2-CH＝CH-；
-CH2-CH＝CH-；和
Figure BDA0003966615320000171
包含额外的环的肽配体的合适示例包括：
CQ[modG]LEDCW[modG]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：160)；
CQ[modG][tBuA]EDC[TrpMe][modG]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：161)；
CQ[modG][tBuA]QDC[TrpMe][modG]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：162)；和
C[NMeA][modG][tBuA]QDC[TrpMe][modG]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：163)；
或其药学上可接受的盐。
所述含有额外的环的肽配体的具体示例包括示例233至249。
在一个实施方案中，所述肽配体包含多聚体结合复合物，其包含至少两个(如三个)双环肽配体，其中所述肽配体可以相同或可以不同，每一个所述肽配体包含多肽和分子支架，所述多肽包含被至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，并且所述分子支架与多肽的反应性基团形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环。
在进一步的实施方案中，多聚体结合复合物包含三聚体部分(即，三个双环肽)。在进一步的实施方案中，多聚体结合复合物包含三聚体部分(即，三个相同的双环肽)。在又进一步的实施方案中，肽配体包含选自示例250和251的三聚体部分。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同含义，如肽化学、细胞培养和噬菌体展示、核酸化学和生物化学领域。使用了分子生物学、遗传和生化方法的标准技术(参见Sambrook等人，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，第3版，2001，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold SpringHarbor，NY；Ausubel等人，Short Protocols in Molecular Biology(1999)，第4版，JohnWiley&Sons，Inc.)，其通过引用并入本文。
术语
编号
当提及本发明的肽内的氨基酸残基位置时，由于其不变而从编号中省略了反应性基团(例如，半胱氨酸残基)，因此，本发明的肽内的氨基酸残基的编号参照如下：
-C-Q1-TrpMe2-tBuA3-Q4-D5-C-TrpMe6-ADMA7-G8-4F3CIPhe9-C-(SEQ ID NO：1)。
出于描述的目的，假定所有双环肽都与1，1′，1″-(1，3，5-三嗪烷-1，3，5-三基)三丙-2-烯-1-酮(TATA)环化并产生三取代的结构。与TATA的环化发生在三个半胱氨酸残基的每一个上。
分子形式
双环核心序列的N-或C-末端延伸区添加于序列的左侧或右侧，以连字符分隔。例如，N-末端的βAla-Sar10-Ala尾将表示为：
βAla-Sar10-A-(SEQ ID NO：X)。
反向肽序列
根据Nair等人(2003)，J Immunol 170(3)，1362-1373中的公开，设想本文公开的肽序列也将以其逆-反形式使用。例如，该序列逆转(即N-末端变为C-末端，反之亦然)，其立体化学同样也逆转(即，D-氨基酸变为L-氨基酸，反之亦然)。
肽配体
如本文所指的，肽配体是指与分子支架共价结合的肽。通常，这样的肽包含两个或更多个能够与支架形成共价键的反应性基团(即，半胱氨酸残基)，和在反应性基团之间对向存在的序列，因为当所述肽与所述支架结合时所述序列形成环而被称为环序列。在本案例中，肽包含至少三个半胱氨酸残基，并且在支架上形成至少两个环。
肽配体的优点
本发明的某些双环肽具有许多有利的性质，其使它们被认为是适合注射、吸入、鼻、眼、口服或局部施用的类药物分子。这样的有利的性质包括：
-物种交叉反应性。这是临床前药效学和药代动力学评估的典型要求；
-蛋白酶稳定性。双环肽配体理想地应表现出对血浆蛋白酶、上皮(“膜锚定的”)蛋白酶、胃和肠蛋白酶、肺表面蛋白酶、细胞内蛋白酶等的稳定性。蛋白酶的稳定性应当在不同物种之间保持，使得可以在动物模型中开发双环先导候选物，并可以有把握地对人施用；
-理想的溶解度曲线。其是带电荷的和亲水的残基相对于疏水的残基的比例和分子内/分子间氢键的函数，其对于制剂和吸收目的很重要；
-在循环中最佳的血浆半衰期。取决于临床适应症和治疗方案，可能需要开发在急性疾病管理环境中短时间暴露的双环肽；或者开发在循环中保留增强的双环肽，其因此对于管理更慢性的疾病状态是最佳的。驱使理想的血浆半衰期的其他因素是为了最大治疗效率而持续暴露相对于由于持续暴露于试剂而伴随的毒理的要求。
-选择性。本发明的某些肽配体对其他细胞因子表现出良好的选择性。
药学上可接受的盐
应当理解，盐形式在本发明的范围内，并且提及肽配体包括所述配体的盐形式。
本发明的盐可以通过常规化学方法如Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use,P.Heinrich Stahl(编辑)，Camille G.Wermuth(编辑)，ISBN:3-90639-026-8，精装，388页,2002年8月中所述的方法由包含碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，这样的盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与合适的碱或酸在水中或在有机溶剂中、或在两者的混合物中反应来制备。
可以用很多种无机和有机酸形成酸加成盐(单盐或二盐)。酸加成盐的示例包括与酸形成的单盐或二盐，所述酸选自乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、藻酸、抗坏血酸(例如L-抗坏血酸)、L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、丁酸、(+)樟脑、樟脑磺酸、(+)-(1S)-樟脑-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环己氨磺酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳酸、龙胆酸、葡庚糖酸、D-葡萄糖酸、葡糖醛酸(例如D-葡糖醛酸)、谷氨酸(例如，L-谷氨酸)、α-氧代戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢卤酸(例如，氢溴酸、盐酸、氢碘酸)、羟基乙磺酸、乳酸(例如，(+)-L-乳酸、(±)-DL-乳酸)、乳糖酸、马来酸、苹果酸、(-)-L-苹果酸、丙二酸、(±)-DL-扁桃酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、1-羟基-2-萘酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、扑酸、磷酸、丙酸、丙酮酸、L-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、鞣酸、(+)-L-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、十一碳烯酸和戊酸，以及酰化的氨基酸和阳离子交换树脂。
一组特别的盐由以下形成的盐组成：乙酸、盐酸、氢碘酸、磷酸、硝酸、硫酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、马来酸、苹果酸、羟基乙磺酸、富马酸、苯磺酸、甲苯磺酸、硫酸、甲磺酸(mesylate)、乙磺酸、萘磺酸、戊酸、丙酸、丁酸、丙二酸、葡糖醛酸和乳糖酸。一种特别的盐是盐酸盐。另一种特别的盐是乙酸盐。
如果化合物是阴离子的，或具有可以是阴离子的官能团(例如，-COOH可以是-COO-)，则可以与有机或无机碱形成盐，生成合适的阳离子。合适的无机阳离子的示例包括但不限于：碱金属离子(如Li+、Na+和K+)、碱土金属阳离子(如Ca2+和Mg2+)和其他阳离子(如Al3+或Zn+)。合适的有机阳离子的示例包括但不限于铵离子(即NH4 +)和被取代的铵离子(例如，NH3R+、NH2R2 +、NHR3 +、NR4 +)。一些合适的取代的铵离子的示例是那些衍生自以下的：甲胺、乙胺、二乙胺、丙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺和氨丁三醇，以及氨基酸，如赖氨酸和精氨酸。常见的季铵离子的一个示例是N(CH3)4 +。
当本发明的肽包含胺官能团时，其可以形成季铵盐，例如根据技术人员众所周知的方法与烷基化剂反应。这样的季铵化合物在本发明的肽的范围内。
修饰衍生物
应当理解，本文所定义的肽配体的修饰衍生物在本发明的范围内。这样的合适的修饰衍生物的示例包括选自以下的一种或多种修饰：N-末端和/或C-末端修饰；用一个或多个非天然氨基酸残基替换一个或多个氨基酸残基(如用一个或多个电子等排的或等电子的氨基酸替换一个或多个极性氨基酸残基；用其它非天然电子等排的或等电子的氨基酸替换一个或多个非极性氨基酸残基)；间隔基团的添加；用一个或多个抗氧化氨基酸残基替换一个或多个对氧化敏感的氨基酸残基；用丙氨酸替换一个或多个氨基酸残基，用一个或多个D-氨基酸残基替换一个或多个L-氨基酸残基；双环肽配体中一个或多个酰胺键的N-烷基化；用替代键替换一个或多个肽键；肽骨架长度的修饰；用另一个化学基团取代一个或多个氨基酸残基的α-碳上的氢，用合适的胺、硫醇、羧酸和酚反应性试剂修饰氨基酸(如半胱氨酸、赖氨酸、谷氨酸/天冬氨酸和酪氨酸)以官能化所述氨基酸，以及引入或替换引入适合于官能化的正交反应活性的氨基酸，例如带有叠氮基或炔基的氨基酸，其分别允许用带有炔基或叠氮基的部分进行官能化。
在一个实施方案中，所述修饰衍生物包含N-末端和/或C-末端修饰。在一个进一步的实施方案中，其中所述修饰衍生物包含使用合适的氨基反应性化学的N-末端修饰和/或使用合适的羧基反应性化学的C-末端修饰。在一个进一步的实施方案中，所述N-末端或C-末端修饰包括添加效应基团，所述效应基团包括但不限于细胞毒性剂、放射螯合剂或发色团。
在一个进一步的实施方案中，所述修饰衍生物包含N-末端修饰。在一个进一步的实施方案中，所述N-末端修饰包含N-末端乙酰基。在该实施方案中，在肽合成过程中，N-末端半胱氨酸基团被乙酸酐或其它合适的试剂封端，产生N-末端乙酰化的分子。该实施方案提供了去除氨基肽酶的潜在识别点的优点，并避免了所述双环肽降解的可能性。
在一个可选择的实施方案中，所述N-末端修饰包括添加分子间隔基团，其促进效应基团的偶联和保持所述双环肽对其靶标的效力。
在一个进一步的实施方案中，所述修饰衍生物包含C-末端修饰。在一个进一步的实施方案中，所述C-末端修饰包含酰胺基。在该实施方案中，在肽合成过程中，C-末端半胱氨酸基团被合成为酰胺，产生C-末端酰胺化的分子。该实施方案提供了去除羧肽酶的潜在识别点的优点，并降低了所述双环肽的蛋白水解降解的可能性。
在一个实施方案中，所述修饰衍生物包括用一个或多个非天然氨基酸残基替换一个或多个氨基酸残基。在该实施方案中，可以选择具有电子等排的/等电子的侧链的非天然氨基酸，其既不被降解蛋白酶识别，也不对靶标效力产生任何不利影响。
可选地，可以使用具有受约束的氨基酸侧链的非天然氨基酸，使得附近的肽键的蛋白水解在构象和空间上受到阻碍。特别地，这些涉及脯氨酸类似物、大型侧链、Cα-二取代的衍生物(例如，氨基异丁酸(Aib))和环氨基酸，一个简单的衍生物是氨基-环丙基羧酸。
在一个实施方案中，所述修饰衍生物包括添加间隔基团。在一个进一步的实施方案中，所述修饰衍生物包括在N-末端半胱氨酸和/或C-末端半胱氨酸上添加间隔基团。
在一个实施方案中，所述修饰衍生物包括用一个或多个抗氧化氨基酸残基替换一个或多个对氧化敏感的氨基酸残基。在一个进一步的实施方案中，所述修饰衍生物包括用萘丙氨酸或丙氨酸残基替换色氨酸残基。该实施方案提供了改善所得双环肽配体的药物稳定性特征的优点。
在一个实施方案中，所述修饰衍生物包括用一个或多个疏水氨基酸残基替换一个或多个带电荷的氨基酸残基。在一个可选的实施方案中，所述修饰衍生物包括用一个或多个带电荷的氨基酸残基替换一个或多个疏水氨基酸残基。带电荷的与疏水的氨基酸残基的正确平衡是所述双环肽配体的重要特征。例如，疏水氨基酸残基影响血浆蛋白结合的程度，从而影响血浆中游离可利用部分的浓度，而带电荷的氨基酸残基(特别是精氨酸)可以影响所述肽与细胞表面磷脂膜的相互作用。两者组合起来可以影响所述肽药物的半衰期、分布体积和暴露，并且可以根据临床终点进行调整。另外，带电荷的和疏水的氨基酸残基的正确组合和数量可以减少在注射部位的刺激(如果所述肽药物已经通过皮下施用)。
在一个实施方案中，所述修饰衍生物包括用一个或多个D-氨基酸残基替换一个或多个L-氨基酸残基。该实施方案被认为通过空间位阻和通过D-氨基酸稳定β-转角构象的倾向来增加蛋白水解稳定性(Tugyi等人(2005),PNAS,102(2),413–418)。
在一个实施方案中，所述修饰衍生物包括去除任何氨基酸残基并用丙氨酸取代。该实施方案提供了去除潜在的蛋白水解进攻位点的优点。
应当指出的是，每个上述修饰用于有意地改善所述肽的效力或稳定性。可以通过以下机制进一步提高基于修饰的效力：
-并入利用疏水作用并导致较低的解离速率的疏水部分，使得实现更高的亲和力；
-并入利用长距离离子相互作用的带电基团，导致更快的结合率和更高的亲和力(参见，例如Schreiber等人(1996)Rapid,electrostatically assisted association ofproteins,Nature Struct.Biol.3,427-31)；和
-将附加的约束并入肽中，例如通过正确地约束氨基酸的侧链使得在靶标结合时熵的损失最小，通过约束骨架的扭转角使得在靶标结合时熵的损失最小，以及出于相同的原因在分子中引入另外的环化。
(综述见Gentilucci等人，Curr.Pharmaceutical Design(2010)16,3185-203和Nestor等人,Curr.Medicinal Chem(2009)16,4399-418)。
同位素变体
本发明包括本发明的所有药学上可接受的(放射性)同位素标记的肽配体，其中一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于通常自然界中存在的原子质量或质量数的原子替换，和本发明的肽配体，其中连接能够持有相关的(放射性)同位素的金属螯合基团(称为“效应子”)，和本发明的肽配体，其中某些官能团被相关的(放射性)同位素或同位素标记的官能团共价取代。
适用于包含在本发明的肽配体中的同位素的示例包括氢同位素(如2H(D)和3H(T))，碳同位素(如11C、13C和14C)，氯同位素(如36Cl)，氟同位素(如18F)，碘同位素(如123I、125I和131I)，氮同位素(如13N和15N)，氧同位素(如15O、17O和18O)，磷同位素(如32P)，硫同位素(如35S)，铜同位素(如64Cu)，镓同位素(如67Ga或68Ga)，钇同位素(如90Y)，和镥同位素(如177Lu)和铋同位素(如213Bi)。
本发明的某些同位素标记的肽配体，例如并入放射性同位素的那些，可用于药物和/或底物组织分布研究，和用于在临床上评估患病组织上TSLP靶标的存在和/或不存在。本发明的肽配体进一步可以具有有价值的诊断特性，其可用于检测或鉴定标记的化合物与其它分子、肽、蛋白质、酶或受体之间的复合物的形成。检测或鉴定方法可以使用用标记剂标记的化合物，所述标记剂如放射性同位素、酶、荧光物质、发光物质(例如，鲁米诺、鲁米诺衍生物、荧光素、水母发光蛋白和荧光素酶)等。放射性同位素氚(即3H(T))和碳-14(即14C)，由于其易于并入和现成的检测方法而特别用于此目的。
用更重的同位素如氘(即2H(D))取代，可以由于更大的代谢稳定性而提供某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或减少的剂量要求，因此在某些情况下可能是优选的。
用正电子发射同位素如11C、18F、15O和13N取代，可以用于正电子发射成像(PET)研究以检查靶标占有率。
本发明的肽配体的同位素标记的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实施例中描述的那些类似的过程，使用合适的同位素标记的试剂代替之前采用的非标记的试剂来制备。
分子支架
分子支架描述于例如WO 2009/098450和在其中引用的参考文献中，特别是WO2004/077062和WO 2006/078161。
在一个实施方案中，分子支架是非芳香族分子支架。本文提及的“非芳香族分子支架”是指不包含芳香族(即不饱和)碳环或杂环环系统的如本文所定义的任何分子支架。
非芳香族分子支架的合适示例描述于Heinis等人(2014),Angewandte Chemie,国际版53(6),1602-1606中。
如上述文档中所提及，所述分子支架可以是小分子，如有机小分子。
在一个实施方案中，所述分子支架可以是大分子。在一个实施方案中，所述分子支架是由氨基酸、核苷酸或碳水化合物组成的大分子。
在一个实施方案中，所述分子支架包含能够与多肽的官能团反应以形成共价键的反应性基团。
所述分子支架可以包含与肽形成连接的化学基团，如胺、硫醇、醇、酮、醛、腈、羧酸、酯、烯烃、炔烃、叠氮化物、酸酐、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、烷基卤和酰基卤。
含有aβ不饱和羰基的化合物的一个示例是1,1',1”-(1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三丙-2-烯-1-酮(TATA)(Angewandte Chemie，International Edition(2014),53(6),1602-1606)。
结合活性
在本文的上下文中，特异性指配体结合其同源靶标或以其他方式与其同源靶标相互作用并且排除与所述靶标相似的实体的能力。例如，特异性可以指配体抑制人酶的相互作用、而不抑制来自不同物种的同源酶的相互作用的能力。使用本文描述的方法，可以调节特异性使其增加或降低，以使配体能够更多或更少地与预期靶标的同源物或旁系同源物相互作用。特异性并不旨在与活性、亲和力或亲合力(avidity)同义，并且配体对其靶标的作用效力(如例如，结合亲和力或抑制水平)并不一定与其特异性相关。
如文中使用的结合活性，指来自结合测定中的定量结合测量，例如文中所描述的。因此，结合活性是指在给定的靶标浓度下结合的肽配体的量。
多特异性是与两个或更多个靶标结合的能力。通常，由于结合肽的构象性质，其能够结合单个靶标，如在结合肽为抗体情况下所述靶标为表位。然而，可以开发能够结合两个或更多个靶标的肽；例如，如上文提及的本领域已知的双特异性抗体。在本发明中，肽配体能够结合两个或更多个靶标抗原，因此是多特异性的。合适地，肽配体结合两个靶标，是双特异性的。结合可以是非依赖性的，这意味着肽上的靶标结合位点在结构上不受一个或另一个靶标结合的阻碍。在这种情况下，两个靶标都可以独立地结合。更普遍地，预期一个靶标的结合将至少部分地阻碍另一个靶标的结合。
双特异性配体和对包括两个相关靶标具有特异性的配体之间有根本的区别。在第一种情况下，配体对两个靶标独立地具有特异性，并以特定方式与每个靶标相互作用。例如，配体中的第一环可以与第一靶标结合，第二环与第二靶标结合。在第二种情况下，配体不区分这两个靶标因而是非特异性的，例如通过与两个靶标共同的靶标表位相互作用。
在本发明的背景下，例如，对靶标和直系同源物具有活性的配体有可能是双特异性配体。然而，在一个实施方案中，配体不是双特异性的，而是具有不那么精确的特异性，使得配体即结合靶标，又结合一个或多个直系同源物。一般来说，由于缺乏针对双特异性的选择压力，没有针对靶标和其直系同源物进行选择的配体不太可能是双特异性的。双环肽中的环长度可能在提供定制的结合表面方面起决定性作用，这样可以获得良好的靶标和直系同源物的交叉反应，同时保持针对较不相关的同源物的高选择性。
如果配体是真正的双特异性，在一个实施方案中，配体的至少一个靶标特异性将在所选择的配体中是共同的，并且该特异性的水平可以通过本文公开的方法进行调节。第二或更多的特异性不需要共享，也不需要成为本文阐述的方法的主题。
靶标是肽配体结合的或与其相互作用的分子或其部分。尽管结合被视为是大多数活性类型的先决条件，结合本身就是一种活性，还可以设想其他活性。因此，本发明可以不要求测量直接或间接结合。
分子支架是能够在多个点与肽相连以赋予肽一种或多种结构特征的任何分子。优选地，分子支架包含至少三个肽的连接点，称为支架反应性基团。这些基团能够与肽上的半胱氨酸残基反应形成共价键。这些基团不只是形成二硫键(其经还原切割和相伴的分子解体)，而且形成稳定的共价硫醚键。分子支架优选的结构如下所述。
合成
本发明的肽可以通过标准技术合成制造，然后与分子支架在体外反应。进行此操作时，可以使用标准化学方法。这使得能够快速大规模地制备可溶性材料，以用于进一步的下游实验或验证。可以使用如Timmerman等人(同上)中公开的常规化学方法来完成这样的方法。
因此，本发明还涉及如本文所述选择的多肽的制造，其中所述制造包括如下所述的任选的进一步的步骤。在一个实施方案中，这些步骤在通过化学合成制备的最终产物多肽上进行。
制造偶联物或复合物时，目的多肽中的氨基酸残基可任选地被取代。
肽也可以延伸，以并入例如另一个环并因此引入多种特异性。
为了延伸所述肽，可以使用常规固相或溶液相化学方法，使用正交保护的赖氨酸(和类似物)简单地在其N-末端或C-末端或环内进行化学延伸。可以使用标准的(生物)偶联技术来引入激活的或可激活的N-或C-末端。可选地，可以通过片段缩合或天然化学连接进行添加，例如描述见于(Dawson等人1994.Synthesis of Proteins by Native ChemicalLigation.Science 266:776-779)，或通过酶进行添加，例如使用subtiligase，如描述见于(Chang等人,Proc Natl Acad Sci U S A.1994年12月20日；91(26):12544-8或Hikari等人,Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters，第18卷，22期，2008年11月15日，6000-6003页)。
可选地，可以通过二硫键的进一步偶联来延伸或修饰所述肽。这具有额外的优点，即允许第一和第二肽一旦在细胞的还原环境中即彼此解离。在这种情况下，可以在第一肽的化学合成过程中加入分子支架(例如，TATA)，以便与三个半胱氨酸基团反应；然后可以将进一步的半胱氨酸或硫醇附加到第一肽的N-或C-末端，使得该半胱氨酸或硫醇仅与第二肽的游离半胱氨酸或硫醇反应，形成二硫键连接的双环肽-肽偶联物。
类似的技术同样用于两个双环和双特异性大环的合成/偶联，可能产生四特异性分子。
此外，可以使用适当的化学方法，以相同的方式，在N-或C-末端或经由侧链偶联来添加其他官能团或效应基团。在一个实施方案中，以不阻断任一个实体的活性的方式进行偶联。
药物组合物
根据本发明的一个进一步的方面，提供了一种药物组合物，其包含如本文所定义的肽配体与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。
一般地，本发明的肽配体将以纯化形式与药理学上合适的赋形剂或载体一起使用。通常，这些赋形剂或载体包括水性或醇/水性溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和/或缓冲介质。肠胃外载体(vehicle)包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠和乳酸林格氏液。如果需要使多肽复合物保持悬浮，则合适的生理学上可接受的佐剂可以选自增稠剂如羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、明胶和藻酸盐。
静脉内载体包括液体和营养补充剂和电解质补充剂，如基于林格氏葡萄糖的那些。也可以存在防腐剂和其它添加剂，如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体(Mack(1982),Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版)。
本发明的肽配体可以用作单独施用的组合物或与其他试剂联用。其可以包括抗体、抗体片段和各种免疫治疗药物，如环孢霉素、甲氨蝶呤、阿霉素或顺铂和免疫毒素。药物组合物可以包括各种细胞毒性或其他试剂的“混合物”与本发明的蛋白质配体组合，或甚至与具有不同特异性的根据本发明选择的多肽组合，如使用不同靶标配体选择的多肽，无论其在施用前合并与否。
根据本发明的药物组合物的施用途径可以是本领域普通技术人员通常已知的任何途径。为了治疗，可以根据标准技术将本发明的肽配体施用于任何患者。所述施用可以通过任何合适的方式进行，包括肠胃外、静脉内、肌肉内、腹膜内、经皮、经由肺途径、或者适当地通过用导管直接输注进行。优选地，根据本发明的药物组合物将通过吸入施用。施用的剂量和频率将取决于患者的年龄、性别和状况、其他药物的同时施用、禁忌症和临床医生要考虑的其他参数。
可以将本发明的肽配体冻干用于储存，并在使用前在合适的载体中重构。已经表明该技术是有效的，并且可以采用本领域已知的冻干和重构技术。本领域技术人员将认识到，冻干和重构可以导致不同程度的活性损失，并且可能必须向上调节水平以进行补偿。
可以施用包含本发明的肽配体或其混合物的组合物以进行预防性和/或治疗性治疗。在某些治疗应用中，将足以完成所选择的细胞群体的至少部分抑制(inhibition)、抑制(suppression)、调节、杀死或一些其他可测量参数的量定义为“治疗有效剂量”。达到该剂量所需的量将取决于疾病的严重程度和患者自身免疫系统的一般状态，但一般为每千克体重0.005至5.0mg选择的肽配体，更常用的剂量为0.05至2.0mg/kg/剂量。对于预防性应用，也可以以相似或稍低的剂量施用包含本发明的肽配体或其混合物的组合物。
包含根据本发明的肽配体的组合物可以用于预防和治疗环境，以协助哺乳动物中所选择的靶细胞群体的改变、失活、杀死或去除。另外，本文所述的肽配体可以在离体(extracorporeally)或体外(in vitro)选择性地用于从异质细胞集合中杀死、消耗或以其他方式有效地去除靶细胞群体。可以将来自哺乳动物的血液与所选择的肽配体离体组合，从而将不期望的细胞杀死或以其他方式从血液中去除，用于根据标准技术返回至哺乳动物。
治疗用途
本发明的双环肽作为TSLP结合剂具有特殊的用途。胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是一种属于细胞因子家族的蛋白质。已知TSLP通过激活抗原呈递细胞在T细胞群的成熟过程中发挥重要作用。TSLP主要由非造血细胞产生，如成纤维细胞、上皮细胞和不同类型的基质或基质样细胞。这些细胞位于需要TSLP活性的区域。TSLP主要影响髓样细胞，诱导单核细胞释放吸引T细胞的趋化因子，并增强髓样(CD11c+)树突状细胞的成熟。TSLP还被证明激活位于表皮内的特定树突状细胞亚群(即朗格汉斯细胞)的成熟。在胸腺内，TSLP激活髓样和浆细胞样(CD123+)树突状细胞，导致调节性T细胞的产生。TSLP通过由胸腺基质淋巴细胞生成素受体CRLF2和IL-7Rα链组成的异二聚化的受体复合物传递信号。结合后，诱导STAT5磷酸化，导致上游转录因子的表达。
根据本发明的方法选择的多肽配体可以用于体内治疗和预防应用、体外和体内诊断应用、体外测定和试剂应用等。具有所选择的特异性水平的配体可以用于涉及在期望交叉反应性的非人动物中进行测试的应用中，或在需要小心控制与同源物或旁系同源物的交叉反应性的诊断应用中。在某些应用如疫苗应用中，可以利用对预定范围的抗原引起免疫反应的能力来调整疫苗适应特定的疾病和病原体。
对哺乳动物的施用优选具有至少90％至95％同质性的基本纯的肽配体，对于药物用途，尤其是当所述哺乳动物是人时，最优选98％至99％或更高的同质性。所选择的多肽一旦部分纯化或纯化至所期望的同质性，就可以用于诊断或治疗(包括离体)或用于开发和进行测定方法、免疫荧光染色等(Lefkovite和Pernis(1979和1981),ImmunologicalMethods,卷I和卷II，Academic Press,NY)。
根据本发明的一个进一步的方面，提供了如本文所定义的肽配体，其用于预防、抑制或治疗TSLP介导的疾病或病症。
根据本发明的一个进一步的方面，提供了一种预防、抑制或治疗TSLP介导的疾病或病症的方法，其包括向需要其的患者施用如本文所定义的肽配体。
在一个实施方案中，TSLP是哺乳动物TSLP。在一个进一步的实施方案中，哺乳动物TSLP是人TSLP。
在一个实施方案中，由TSLP介导的疾病或病症选自：呼吸系统病症、炎性病症、皮肤病症和过敏性病症。
在进一步的实施方案中，由TSLP介导的疾病或病症选自：呼吸系统病症(如哮喘)、炎性病症(如炎性关节炎和嗜酸粒细胞性食管炎)、皮肤病症(如特应性皮炎和湿疹)和过敏性病症。
在又进一步的实施方案中，由TSLP介导的疾病或病症选自：呼吸系统病症(如哮喘和COPD)。
在又进一步的实施方案中，由TSLP介导的疾病或病症选自：哮喘、炎性关节炎、特应性皮炎、湿疹和嗜酸粒细胞性食管炎。
在又进一步的实施方案中，TSLP介导的疾病或病症是哮喘。
本文提到的术语“预防”涉及在诱导疾病之前施用保护性组合物。“抑制”是指在诱导事件之后但在疾病的临床表现之前施用组合物。“治疗”涉及在疾病症状变得明显之后施用保护性组合物。
已有可以用于筛选肽配体在预防或治疗疾病中的有效性的动物模型系统。本发明促进动物模型系统的使用，其允许开发可以与人和动物靶标交叉反应的多肽配体，从而允许使用动物模型。
以下参考下列实施例以进一步描述本发明。
实施例
缩写
Anbu 3-(正丁基)-丙氨酸
Ac 乙酸盐
ACN 乙腈
3-AcNH4ClPhe 3-(乙酰氨基)-4-氯苯丙氨酸
ADMA 不对称的二甲基精氨酸
Agb 2-氨基-4-胍基丁酸
AMe N-甲基丙氨酸
Bn 苄基
BnA 3-苄基-丙氨酸
Boc2O 二碳酸二叔丁酯
3-BrPhe 3-溴苯丙氨酸
4-BrPhe 4-溴苯丙氨酸
ButG 正丁基甘氨酸
Bz 苯甲酰基
Can 刀豆氨酸
CDI 1,1′-羰基二咪唑
4-CF3Phe 4-三氟甲基-苯丙氨酸
Cha 3-环己基丙氨酸
ChMeA 3-环己基甲基丙氨酸
Chx-P L-八氢-1H-吲哚-2-羧酸(环己基)脯氨酸
Cit 瓜氨酸
4-ClNal 4-氯-1-萘丙氨酸
3-ClPhe 3-氯-苯丙氨酸
4-ClPhe 4-氯-苯丙氨酸
3-CNPhe 3-氰-苯丙氨酸
4-CNPhe 4-氰-苯丙氨酸
CpentA 3-环戊基-丙氨酸
CproA 3-环丙基-丙氨酸
Dap 二氨基丙酸
DCM 二氯甲烷
DIC N,N-二异丙基碳二亚胺
diF-P 4,4二氟脯氨酸
3,4diFPhe 3,4-二氟甲基-苯丙氨酸
3,4diClPhe 3,4-二氯甲基-苯丙氨酸
3,5diF,4ClPhe 3,5-二氟甲基-4-氯苯丙氨酸
DIPEA 二异丙基乙胺
DMAP 4-N,N-二甲氨基吡啶
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
DODT 3,6-氧杂-1,8-辛二硫醇
dppf 1,1′-双(二苯基膦)二茂铁
EDC N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐/酯
ES/ESI 电喷雾离子化
EtOH 乙醇
EtOAc 乙酸乙酯
2-FPhe 2-氟苯丙氨酸
3-FPhe 3-氟苯丙氨酸
4-FPhe 4-氟苯丙氨酸
3-F,4-ClPhe 3-氟-4-氯-苯丙氨酸
4-F3C3ClPhe 4-三氟甲基-3-氯-苯丙氨酸
Fmoc-Cl 9-芴甲基氯甲酸酯
5-FTrp 5-氟色氨酸
h 小时
HArg 高精氨酸
HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶3-氧化六氟磷酸盐/酯
HOBt 1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇水合物
HPLC 高效液相色谱法
iPrMeA 3-异丙基甲基丙氨酸
LHMDS 双(三甲基硅基)酰胺锂
LMe Nα-甲基亮氨酸
LysMe3 ω,ω,ω-三甲基赖氨酸
mCPBA 3-氯过氧苯甲酸
MeD N-甲基天冬氨酸
4-MenL 4-甲基正亮氨酸
MeOH 甲醇
3-MePhe 3-甲基-苯丙氨酸
4-MePhe 4-甲基-苯丙氨酸
4-MeOPhe 4-甲氧基-苯丙氨酸
M(O) 蛋氨酸氧化物
MTBE 甲基叔丁基醚
Nal1 1-萘基丙氨酸
Nal2 2-萘基丙氨酸
NeopentA 3-新戊基-丙氨酸
Nle 正亮氨酸
NMP N-甲基吡咯烷酮
NMeA N-甲基丙氨酸
Nva 正缬氨酸
7-OMeTrp 7-甲氧基-色氨酸
Orn 鸟氨酸
Oxyma 含氰基(羟基亚氨基)乙酸乙酯
PentFPhe 五氟-苯丙氨酸
5-Ph-P 5-苯基脯氨酸
4-PipA 3-(4-哌啶基)-丙氨酸
Piv 新戊酰基
2-PyrA 3-(2-吡啶基)-丙氨酸
3-PyrA 3-(3-吡啶基)-丙氨酸
4-PyrA 3-(4-吡啶基)-丙氨酸
rt 室温
RT 保留时间：
RP-HPLC 反相HPLC
SFC 超临界流体色谱法
SPPS 固相肽合成法
TATA 1,3,5-三丙烯酰基-1,3,5-三嗪烷
TEA 三乙胺
T3P 2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧代三膦烷2,4,6-三氧化物
TBAF 四正丁基氟化铵
TBDMSCl 叔丁基二甲基氯硅烷
TBDMSOTf 叔丁基二甲基硅基三氟甲磺酸盐/酯
TBTU 2-(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基异脲四氟硼酸盐/酯
tBuA 叔丁基丙氨酸
TFA 三氟乙酸
TFAA 三氟乙酸酐
THF 四氢呋喃
2-ThienylA 3-(2-噻吩基)-丙氨酸
3-ThienylA 3-(3-噻吩基)-丙氨酸
TIS 三异丙基硅烷
TriFMeA 3-三氟甲基丙氨酸
TriMeK ω,ω,ω-三甲基赖氨酸
TrpMe 1-甲基色氨酸
3,4,5triFPhe 3,4,5-三氟甲基-苯丙氨酸
一般方法
NMR谱记录在Bruker Avance、Avance II或Avance III光谱仪上，质子频率为300、400、500或600MHz。氯仿-δ(H 7.26ppm)、CD3OD(H 3.30ppm)或DMSO-d6(H 2.50ppm)的中心峰被用作内部参考。
LCMS实验使用Waters Acquity系统，组合Waters Xevo Q-ToF Mass在ESI模式下进行。LC在两种设置下运行：1)BEH C18柱(1.7μm 2.1×50mm)，结合pH值为10的46mM水性碳酸铵/氨缓冲液(A)和MeCN(B)的梯度(2-95％B，5分钟)，流速为1.0mL/min，或结合水和TFA(0.05％)(A)和CH3CN和TFA(0.05％)的梯度(5-95％B，2分钟)，流速为1.0mL/min(B)。HRMS(高分辨质谱)在高分辨率(R＝9000fwhm)LCMS系统(Waters Acquity-Xevo Q-ToF)上运行，采用电喷雾电离(ESI)。制备型HPLC使用集成MS检测的Waters FractionLynx系统，或使用集成UV检测的Gilson GX-281系统，使用各种柱进行。示例为Waters Sunfire C18 OBD5μm19mm×150mm或30mm×150mm、XBridge BEH C18 OBD 5μm 19mm×150mm或30mm×150mm，Xselect CSH C18 OBD 5μm 19mm×150mm或Chromasil C8 10μm 20mm×250mm或50mm×250mm柱。
材料和方法
蛋白质试剂
人TSLP和TSLP受体
克隆
全长的人TSLP含有TEV可切割的N-末端的6×HN标签、C-末端的Avi-tag、将天然信号序列交换为cd33信号序列，针对HEK细胞进行了密码子优化并由Genscript合成。使用SacII和NotI限制性酶位点将所得到的构建体spCD33-6×HN-TEV-hTSLP(29-159)-Avi克隆到内部的pEBNAZ载体(pDEST12.2衍生物)。
TSLP序列：
Figure BDA0003966615320000311
全长的人TSLP受体含有TEV可切割的N-末端的6×HN标签，并将天然信号序列交换为IgK信号序列，针对HEK细胞进行了密码子优化并由Genscript合成。使用SacII和NotI限制性酶位点将所得到的构建体spCD33-6×HN-TEV-hTSLPR(25-231)克隆到内部的pEBNAZ载体(pDEST12.2衍生物)。
TSLPR序列：
Figure BDA0003966615320000321
细胞培养和瞬时转染
编码靶标spCD33-6×HN-TEV-hTSLP(29-159)的转染级质粒是从Genscript获得的。Expi293F细胞生长在无血清的Expi293表达介质(Thermo Fisher Scientific)中，在37℃和8％的CO2下维持在25mm轨道摇动培养器(Infors HT)中的Erlenmeyer烧瓶(CorningInc.)中。在转染前一天，将细胞以2×10e6 c/ml接种在Optimum生长烧瓶(ThomsonInstrument Company)中。转染当天，将1.5μg/ml的DNA和6μg/ml的PEI Max(Polysciences,Inc.)分别在Expi293表达介质中稀释，然后混合(以1:4的DNA/PEI比率)，在rt下孵育15分钟。将得到的转染复合物加入到细胞培养物中，然后孵育在37℃、8％CO2、115rpm。转染后24小时，向细胞补料50％(v/v)的Expi293表达介质。孵育6天后，收获培养上清液。
纯化
在5mM的咪唑的存在下，通过与Excel树脂的批量结合，直接从介质中捕获hTSLP和hTSLPR。然后将树脂转移到小柱子上，用含有20mM Tris·HCl pH 7.5，500mM NaCl和20mM咪唑的缓冲液进行洗涤。用同样但含有400mM咪唑的缓冲液洗脱树脂。蛋白质在含有20mMTris·HCl pH 7.5和200mM NaCl的缓冲液中脱盐。用TEV(以1：1化学计量加入)在10℃下进一步处理TSLP达3小时，然后进行阴性固定金属亲和色谱。
人IL7受体α
人IL7Rα(His&FC标签)购自Sino Biological，目录号10975-H08H-100。
肽合成
线性肽通过基于Fmoc化学的固相肽合成法(SPPS)，使用以下肽合成仪之一进行合成：由Peptide Instruments制造的Symphony、来自Biotage的Biotage Initiator+Alstra和Syro II以及来自CEM的Liberty Blue。除非另有说明，否则使用Biotage的Rink AmideChemMatrix树脂(100-200目)，上样量约为0.5mmol/g。使用具有以下侧链保护基团的标准的Fmoc-氨基酸：Arg(Pbf)或Arg(Boc)2；Asn(Trt)；Asp(OtBu)；Cys(Trt)；Glu(OtBu)；Gln(Trt)；His(Trt)；Lys(Boc)；Ser(tBu)；Thr(tBu)；Trp(Boc)；和Tyr(tBu)。通过LCMS和HRMS确定产物的识别和纯度。
除非另有说明，所有氨基酸均以L-构型使用。
用上述的一般方法将非天然氨基酸并入到肽的序列中。
这里采用的非天然氨基酸前体的列表总结在表1中：
表1：采用的非天然氨基酸
Figure BDA0003966615320000331
Figure BDA0003966615320000341
操作方案1:使用Symphony合成仪进行合成
基于Fmoc化学，使用Peptide Instruments制造的Symphony肽合成仪合成肽。采用带有合适的侧链保护基团的标准Fmoc-氨基酸(Sigma，Merck)：在每种情况下均使用适用的标准偶联条件，然后使用标准方法进行脱保护。肽使用HPLC进行纯化，在分离后，将肽用1,3,5-三丙烯酰基六氢-1,3,5-三嗪(TATA，Sigma)进行修饰。为此，将线性肽用50:50的MeCN:H2O稀释至约35mL，加入约500μL的100mM TATA的乙腈溶液，然后用5mL的1M NH4HCO3的H2O溶液引发反应。使反应在室温进行约30-60分钟，一旦反应完成即冻干(通过MALDI判断)。一旦完成，将1ml的1M L-半胱氨酸盐酸盐一水合物(Sigma)的H2O溶液加入反应，在室温下持续约60分钟以淬灭任何过量的TATA。冻干后，将修饰的肽如上进行纯化，同时用Gemini C18柱(Phenomenex)替换Luna C8，并将酸改为0.1％的三氟乙酸。将含有正确的TATA修饰的材料的纯级分进行合并，冻干并保持在-20℃储存。
操作方案2:使用Biotage Initiator+Alstra合成仪进行合成
在Biotage Initiator+Alstra合成仪上，在10或30mL反应瓶中以0.1-0.5mmol的规模对肽进行合成。在涡旋和暂停的循环中进行搅拌。在微波单节点腔体中进行加热反应。氨基酸的溶液和试剂保存在N2气氛中。
典型的方法描述如下。
树脂在DCM或DMF中溶胀(对于10mL的反应器为4.5mL，对于30mL的反应器为9mL)之后，将反应器清空。向树脂(1eq)中依次加入Fmoc-氨基酸的DMF溶液(0.1-0.3M，4eq)、乙基含氰(异亚硝基)乙酸(Oxyma)的DMF溶液(0.24M，4eq)和N,N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)的DMF溶液(1.0M，4eq)。将反应在75℃下加热5分钟，但与Fmoc-S-三苯甲基-半胱氨酸偶联情况除外，其在45-50℃下偶联20分钟。对于Fmoc-Arg-Pbf，将偶联步骤重复两次。在反应结束后，用DMF洗涤树脂四次(对于10mL反应器为4.5mL，对于30mL的反应器为9mL)。
Fmoc-基团的脱保护如下进行：向洗涤过的树脂中加入哌啶的DMF溶液(20％，对于10mL反应器为4.5mL，对于30mL的反应器为9mL)。将反应在室温下进行3分钟。去除溶剂，重复该过程，但这次反应进行了10分钟。将反应器清空，用DMF洗涤树脂四次(对于10mL反应器为4.5mL，对于30mL的反应器为9mL)。在制备出期望的肽序列后，通常切割下Fmoc基团，并在N-末端用乙酰基团封端，如下：在洗涤过的树脂中加入乙酸酐的DMF溶液(5M，4eq)和DIPEA的NMP溶液(2M，4eq)。在10分钟的反应之后，用DMF洗涤树脂四次(对于10mL反应器为4.5mL，对于30mL的反应器为9mL)。
在切割之前的最后一次洗涤如下进行：向洗涤过的树脂加入DCM(对于10mL的反应器为4.5mL，对于30mL的反应器为9mL)，将反应器清空。该方法重复六次，然后将树脂在真空下干燥并储存在冰箱中。
操作方案3:使用Biotage SYRO II合成仪进行合成
在Biotage SYRO II(自动平行肽合成仪)上在10mL反应瓶中以0.05或0.1mmol的规模对肽进行合成。在室温中在N2气氛下操作合成仪，在涡旋和暂停的循环中进行搅拌。
如下在DMF中对树脂进行六次溶胀：向树脂中加入DMF(1.3mL)，搅拌5分钟，将反应器清空。
如下，以4倍摩尔过量进行两次氨基酸的偶联：向洗涤过的树脂(1eq)中依次加入Fmoc-氨基酸的DMF溶液(0.25M，4eq)，然后加入1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶3-氧化六氟磷酸酯(HATU，0.24M，4eq)的DMF溶液和DIPEA的NMP溶液(1.0M，4eq)。反应40分钟后，用DMF(2.1mL)洗涤树脂三次。在每个偶联步骤之后(最后一个氨基酸的偶联除外)，如下用Ac2O封端余下的未反应的胺，然后进行Fmoc脱保护：向洗涤过的树脂中加入Ac2O/2,6-二甲基砒啶/NMP(5/6/89v/v，4eq)溶液。反应10分钟后，用DMF(1.1mL)洗涤树脂三次。
胺的Fmoc-脱保护如下进行：向洗涤过的树脂中加入哌啶的DMF溶液(40％，1.2mL)。反应进行3分钟。清空溶剂，加入更多的哌啶的DMF溶液(40％，0.6mL)，然后加入DMF(0.6mL)。反应10分钟后，用DMF(1.3mL)洗涤树脂六次。
在最后一个氨基酸偶联后，如上所述，在Fmoc-脱保护后进行乙酰化处理。随后，如下用七种溶剂进行最后的洗涤：向洗过的树脂中加入溶剂(3mL)。在涡旋1分钟后，将反应器清空并加入下一种溶剂。使用的溶剂依次是：DCM(2×)、MeOH、DCM、MeOH(2×)和Et2O。合成后的树脂在真空下干燥并储存在冰箱里。
操作方案4:CEM Liberty Blue合成仪
在CEM Liberty Blue(自动微波肽合成仪)上以0.1或0.25mmol的规模对肽进行合成。通过在混合物中鼓泡氮气来实现搅拌。溶剂、氨基酸的溶液和试剂保存在N2气氛中。在微波单节点腔体中在N2气氛中加热反应。
如下在DMF中对树脂进行溶胀：向树脂中加入DMF(15mL)，混合物停留5分钟，然后将反应器清空。
如下，以4倍摩尔过量进行氨基酸的偶联：向洗涤过的树脂(1eq)中依次加入Fmoc-氨基酸的DMF溶液(0.2M，4eq)，接着是DIC溶液(0.5M，4eq)和Oxyma的DMF溶液(1M，4eq)。将反应在90℃下加热4分钟。将Fmoc-Arg-Pbf偶联两次。将反应器清空，用DMF(7mL)洗涤树脂四次。
胺的Fmoc-脱保护如下进行：向洗涤过的树脂中加入哌啶的DMF溶液(20％，10mL)。将反应在90℃下加热2分钟。清空溶剂，加入更多的哌啶的DMF溶液(20％，10mL)。将反应在90℃中加热另外的2分钟。将反应器清空，用DMF(7mL)洗涤树脂四次。
在需要进行N-乙酰化的情况下，在Fmoc-脱保护后进行以下步骤：向洗涤过的树脂中加入Ac2O的DMF溶液(5M，4eq)和DIPEA的DMF溶液(2M，对于10mL反应器为2.5mL或浓缩的，对于30mL的反应器为4eq)。在10分钟的反应之后，用DMF洗涤树脂四次(对于10mL反应器为4.5mL，对于30mL的反应器为9mL)。
在切割之前的最后一次洗涤如下进行：向洗涤过的树脂加入DCM(对于10mL的反应器为4.5mL，对于30mL的反应器为9mL)，将反应器清空。该步骤重复六次，然后将树脂在真空下干燥并储存在冰箱中。
操作方案5:从树脂上切割下肽
从树脂上切割下线性肽和脱保护按照如下进行：将三氟乙酸(TFA)/三异丙基硅烷(TIS)/3,6-二氧-1,8-辛二硫醇(DODT)/水(92.5/2.5/2.5/2.5，90/2.5/2.5/5或95/2.5/0/2.5体积/体积，5-20mL)的溶液加入到干燥的树脂中。将反应在室温下涡旋2-4小时。通过过滤去除树脂，用DCM(3×10mL)、MeOH(3×10mL)和再次用DCM(3×10mL)进行洗涤。将合并的滤液体积减至10-20mL，用冰冷的Et2O或MTBE(20-40mL)对肽进行沉淀。将混合物离心，倾析出液体，将沉淀物重新悬浮在冷乙醚中，并再次进行离心。将该沉淀过程再重复两次。
将肽在真空下干燥，或从MeCN和水的混合物中冻干并储存在冰箱里。通常情况下，在TATA环化步骤中使用线性肽而无需进一步的纯化。
滤液的体积在真空中减少至约20mL，通过加入庚烷-MTBE 1:1v/v的混合物(100mL)对肽进行沉淀。离心后，倾析出液体，将在庚烷-MTBE中重悬的混合物中重悬固体，再次离心。整个过程再重复一次。
操作方案6:用TATA环化线性肽
将溶于MeCN(2-4mL)的1,3,5-三丙烯酰基-1,3,5-三嗪烷(TATA，1eq)和NH4HCO3水溶液(0.06M，pH7.9，10-20mL)加入到粗的线性肽(10-200mg)在MeCN(8-16mL)和水(10-20mL)的混合物中的溶液。将反应在室温下搅拌2-24小时，通过LCMS进行监测。通常情况下，用HCO2H(0.5-2mL)淬灭反应，但也可以省略该步骤。随后，对混合物进行过滤，将滤液冷冻干燥，并通过RP-HPLC纯化所得到的粗产物。在纯化之后，合并和冻干相关的级分，以产生期望的产物。
如下所述制备几种氨基酸。
中间体1:4-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-3-氟-L-苯丙氨酸
Figure BDA0003966615320000371
步骤1：甲基4-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-3-氟-L-苯丙氨酸酯
Figure BDA0003966615320000372
Ross,A.J.、Lang,L.H.和Jackson,R.F.W.(J.Org.Chem.2010,75,245–248)所描述的方法见下文。将锌粉(1.2g，18.35mmol)在10％盐酸中活化20秒，用去矿物质水和甲醇洗涤，并在高真空中干燥12小时。将活化的锌悬浮在无水DMF中(25ml)。加入碘(30mg，0.12mmol)，搅拌所得混合物，直到碘的棕色消失。然后，加入N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-3-碘-L-丙氨酸甲酯(Sigma Aldrich，2.5g，5.54mmol)的DMF溶液(25mL)，接着加入碘(30mg)。混合物搅拌90分钟，然后将Pd2(dba)3(22.9mg，0.025mmol)和S-Phos(19.4mg，0.05mmol)混合在abs.DMF(5mL)中，搅拌5分钟，同时向混合物鼓泡氮气。将所得溶液加入有机锌试剂中，随后加入4-氯-3-氟-1-溴苯(1.563g，6.09mmol)。该混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过用TBME洗脱的硅胶垫(10g的SiO2)，在减压下蒸发滤液。将残余物在硅胶上通过用Biotage自动闪蒸系统(洗脱剂庚烷-EtOAc 0-50％)进行色谱法纯化。对含有产物的级分进行蒸发，以产生呈琥珀色固体的标题化合物(1.81g，72％)。LCMS ES+m/z＝454,456[M+H]+.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.87(dd,J＝13.8,10.6Hz,1H),3.07(dd,J＝13.7,4.7Hz,1H),3.63(s,3H),4.19–4.39(m,4H),7.11(d,J＝8.2Hz,1H),7.24-7.53(m,6H),7.61(d,J＝7.4Hz,2H),7.88(d,J＝7.6Hz,2H),7.90(bs,1H)。
步骤2：4-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-3-氟-L-苯丙氨酸
将步骤1的甲酯(1.80g，3.96mmol)溶于二氧己烷(20mL)中，在冰浴中将混合物冷却至0℃，然后滴加溶于水(10mL)中的LiOH溶液(0.211g，8.77mmol)。所得的混合物在0℃搅拌30分钟，用1N盐酸进行酸化，用EtOAc萃取(3×)。将有机相在MgSO4上进行干燥并在减压下蒸发，留下呈油状的标题化合物，无需进一步纯化即可使用(1.51g,78％)。LCMS ES-m/z＝438,440[M-H]-.1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.86(dd,J＝13.8,10.1Hz,1H),3.09(dd,J＝13.7,4.5Hz,1H),4.07-4.14(m,1H),4.16-4.24(m,3H),7.22-7.34(m,4H),7.48(dd,J＝7.3,2.0Hz,1H),7.56(bd,J＝7.6Hz,1H),7.62(d,J＝7.5Hz,2H),7.88(d,J＝7.6Hz,2H)。
中间体2、3和4按照中间体1所述的方法进行制备。
中间体2:(2S)-3-(4-氯萘-1-基)-2-({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)丙酸
Figure BDA0003966615320000381
步骤1：甲基(2S)-3-(4-氯萘-1-基)-2-({[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)丙酸酯
Figure BDA0003966615320000382
规模：5.56mmol碘-L-丙氨酸酯；产量：2.11g，78％。LCMS ES-m/z＝486，488[M+H]+。
步骤2：(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}氨基)-3-(4-氯萘-1-基)丙酸
产量：1.11g,54％。LCMS ES-m/z＝470,472[M-H]-.1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ3.26(dd,J＝14.2,10.6Hz,1H),3.66(dd,J＝14.1,4.1Hz,1H),4.11–4.16(m,2H),4.19(dd,J＝12.5,9.9Hz,1H),4.29(td,J＝10.5,4.2Hz,1H),7.25(td,J＝7.5,0.9Hz,1H),7.30(td,J＝7.4,0.9Hz,1H),7.37–7.47(m,3H),7.58(d,J＝7.5Hz,1H),7.62(d,J＝7.6Hz,2H),7.69–7.75(m,2H),7.83–7.92(m,3H),8.18–8.26(m,2H),12.93(s,1H)。
中间体3:4-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-3,5-二氟-L-苯丙氨酸
Figure BDA0003966615320000391
步骤1：甲基4-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-3,5-二氟-L-苯丙氨酸酯
Figure BDA0003966615320000392
规模：2g，4.43mmol碘-L-丙氨酸酯；产量：0.8g，38％。LCMS ES+m/z＝494，496[M+Na]+。
步骤2：4-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-3,5-二氟-L-苯丙氨酸
规模：1.4g,2.97mmol；产量：500mg,36.8％。LCMS ES-m/z＝456,458[M-H]-.1H NMR(300MHz,DMSO)δ2.89(dd,J＝15.1,9.5Hz,1H),3.15(dd,J＝13.8,4.2Hz,1H),4.10-4.32(m,4H),7.21–7.34(m,4H),7.40(t,J＝7.4Hz,2H),7.61(d,J＝7.4Hz,2H),7.76(d,J＝8.6Hz,1H),7.87(d,J＝7.5Hz,2H),12.88(s,1H)。
中间体4:3-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-4-氟-L-苯丙氨酸
Figure BDA0003966615320000393
步骤1：甲基3-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-4-氟-L-苯丙氨酸酯
Figure BDA0003966615320000401
规模：24g，(53.18mmol)碘-L-丙氨酸酯；4批产量各6g；合并的产量：16.0g,66％。LCMS ES+m/z＝476,478[M+Na]+.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.04(dd,J＝14.1,6.0Hz,1H),3.12(dd,J＝14.0,5.7Hz,1H),3.77(s,3H),4.24(t,J＝6.6Hz,1H),4.36–4.46(m,1H),4.51(dd,J＝10.6,7.1Hz,1H),4.61–4.71(m,1H),5.33(d,J＝7.9Hz,1H),6.96(s,1H),7.06(t,J＝8.6Hz,1H),7.17(d,J＝6.1Hz,1H),7.31–7.39(m,2H),7.43(t,J＝7.2Hz,2H),7.55–7.66(m,2H),7.80(d,J＝7.5Hz,2H)。
步骤2：3-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-4-氟-L-苯丙氨酸
规模：17.1g，37.67mmol碘-L-丙氨酸酯；产量：3.0g,18％。LCMS ES-m/z＝438,440[M-H]-.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.86(dd,J＝13.5,10.4Hz,1H),3.10(dd,J＝13.6,3.8Hz,1H),3.64(bs,4-6H),4.10-4.24(m,4H),7.22-7.34(m,3H),7.40(t,J＝7.4Hz,2H),7.48(d,J＝6.6Hz,1H),7.54(d,J＝8.1Hz,1H),7.62(d,J＝7.4Hz,2H),7.87(d,J＝7.5Hz,2H)。
中间体5:3-乙酰胺基-4-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-L-苯丙氨酸
Figure BDA0003966615320000402
步骤1：甲基3-氨基-4-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-L-苯丙氨酸酯
Figure BDA0003966615320000403
按照步骤1中对中间体1的描述，从0.10-2.52g(0.22-5.58mmol)的碘-L-丙氨酸酯和0.549-1.38g(0.27-6.70mmol)的5-溴-2-氯苯胺中制备标题化合物。产量：0.073-0.52g,21–73％。LCMS ES+m/z＝451,453[M+H]+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ2.73(dd,J＝13.6,9.9Hz,1H),2.89(dd,J＝13.6,5.3Hz,1H),3.62(s,3H),4.16–4.21(m,4H),5.26(bs,2H),6.43(dd,J＝8.1,1.9Hz,1H),6.66(d,J＝1.9Hz,1H),7.06(d,J＝8.1Hz,1H),7.26–7.36(m,2H),7.38-7.44(m,2H),7.64(t,J＝8.4Hz,2H),7.85(d,J＝8.1Hz,1H),7.88(d,J＝7.6Hz,2H)。
步骤2：甲基3-乙酰胺基-4-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-L-苯丙氨酸酯
Figure BDA0003966615320000411
将乙酸酐(0.105mL，1.12mmol)滴加到前述产物(300mg，0.56mmol)和TEA(0.234mL，1.68mmol)的DCM(3mL)的搅拌溶液中，在冰浴上冷却至0℃。得到的混合物在室温下搅拌过夜。将反应用DCM进行稀释，用饱和的NaHCO3洗涤，通过分相器进行干燥，在减压下浓缩。将残余物在
Figure BDA0003966615320000413
KP-SIL 25g柱上通过自动闪蒸色谱法进行纯化。在10个柱体积(CV)上使用从6％到55％的庚烷中的EtOAc梯度，然后在5个CV上使用55％的EtOAc作为流动相。将期望的级分合并和浓缩，以产生黄色固体的标题化合物(177mg，64％)。LCMS ES+m/z＝493,495[M+H]+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ2.06(s,3H),2.88(dd,J＝13.7,10.0Hz,1H),3.02(dd,J＝13.8,5.0Hz,1H),3.62(s,3H),4.15–4.28(m,4H),7.01–7.1(m,1H),7.26–7.35(m,2H),7.40(dt,J＝16.0,7.9Hz,3H),7.59–7.69(m,3H),7.89(dd,J＝7.8,4.8Hz,3H),9.45(s,1H)。
步骤3：3-乙酰胺基-4-氯-N-{[(9H-芴-9-基)甲氧基]羰基}-L-苯丙氨酸
将上述化合物(137mg，0.28mmol)溶于二氧己烷(1.60mL)。所得溶液用冰浴冷却，然后滴加溶于水(0.8mL)的LiOH(13.31mg，0.56mmol)，将所得混合物在0℃搅拌。在35分钟后进行LCMS分析，显示反应完全。反应混合物用盐酸(1M)进行酸化。形成沉淀，通过过滤分离出来，用水洗涤并在50℃下在真空中干燥过夜。标题化合物(87mg，65％)无需进一步纯化即可使用。LCMS ES+m/z＝479,481[M+H]+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ2.05(s,3H),2.8–2.92(m,1H),3.05(dd,J＝14.1,4.2Hz,1H),4.09–4.26(m,4H),7.09(d,J＝7.3Hz,1H),7.26–7.35(m,2H),7.36–7.45(m,3H),7.61–7.7(m,3H),7.75(d,J＝8.5Hz,1H),7.88(d,J＝7.6Hz,2H),9.45(s,1H),12.78(bs,1H)。
制备具有N-末端乙酸酯或游离氨基的5×4双环
示例129的制备
Figure BDA0003966615320000412
步骤1：制备Cys-His-Trp-Leu-Glu-Asn-Cys-Trp-Arg-Gly-Phe-Cys-NH2
根据操作方案2中描述的方法，在30mL的反应瓶中，在Biotage Initiator+Alstra上以0.25mmol的规模制备树脂结合的保护肽，但省略最后的乙酰化步骤。树脂的溶胀在DCM中在室温下进行30分钟。在偶联最后一个氨基酸，并将其脱保护之后，用10mL的TFA/TIS/苯酚/H2O混合物(10mL，88:2:5:5)处理与0.08mmol肽的量相当的树脂2小时。粗产物通过制备型HPLC进行纯化(柱：Chromasil C8 10μm 250×20mm。流动相：A-H2O/MeCN/TFA 95/5/0.1和B-MeCN；梯度为5-27％的B达5分钟，然后是27-32％的B达25分钟；流速19mL/分钟)，以产生线性肽(55mg，44％)。LCMS(Acquity CSH C18 1.7μm，pH 3，rt1.10分钟，10至90％的MeCN达4分钟)：ES+m/z＝776.1[M+2H]2+，纯度100％。
步骤2：TATA环化
按照TATA环化的方法，将上述线性肽(55mg，0.03mmol)与TATA进行环化1.5小时。将肽通过制备型HPLC柱进行纯化：Waters Atlantis T3 ODB 5μm，150×19mm；流动相：A–H2O/TFA 100/0.15和B–MeCN，梯度为5％的B达1分钟，5-22％的B达3分钟，22-27％的B达15分钟；流速为30mL/分钟，室温，检测为220nm，注射体积为2mL，样品浓度为10mg/mL)，以得到标题化合物(11mg，17％)。HRMS：计算为(C81H108N24O18S3+2H)2+901.3796；发现为(ESI[M+2H]2+)901.3743，纯度97％。
示例252的制备
Figure BDA0003966615320000421
步骤1：制备C-(NMe-Ala)-(1-萘基-Ala)-(tBu-Ala)-Q-D-C-(NMe-Trp)-(二甲基-Arg)-G-(4-F-Phe)-C-a-NH2
按照示例1中描述的方法，制备线性肽。规模：730mg的rink酰胺树脂(0.35mmol，0.48mmol/g)。用TFA(20mL)、水(1.5mL)、TIS(0.8mL)和0.8ml的DODT(0.8mL)的混合物在4小时内对树脂进行切割和脱保护。过滤出树脂，用DCM(3×10ml)和MeOH(3×10ml)进行洗涤。使滤液的体积在真空中减少至约20mL，通过加入庚烷-MTBE 1:1v/v的混合物(100mL)对肽进行沉淀。离心后，倾析出液体，将沉淀重悬于在庚烷-MTBE的混合物中，再次离心。将残余物溶解在MeCN-水1:1的混合物中(约100mL)并冻干，以得到线性肽(463mg，80％)。LCMS(Acquity CSH C18 1.7μm，pH 3，rt1.10分钟，10至90％的MeCN达4分钟)：ES+m/z＝830.3[M+2H]2+，纯度82％。
步骤2：TATA环化
在氮气气氛中，将上述线性肽(463mg，0.28mmol)溶解在MeCN(95mL)、水(100mL)和60mM的NH4HCO3缓冲液(60mM，100mL)的混合物中。在约3分钟内分次加入溶于MeCN(5mL)的TATA(69.7mg，0.28mmol)。所得混合物在室温下搅拌1小时，用甲酸酸化(4mL)并冷冻干燥。使残余物经制备型RP-LC(柱：Chromasil C-18 5×100cm，流动相：A–H2O/TFA(0.2％TFA)和B-MeCN，梯度为10％-60％的B达30分钟，流速为100mL/分钟)，以得到标题化合物(99mg，17％)。HRMS：计算为(C88H121FN22O19S3+2H)2+953.4240；发现为(ESI[M+2H]2+)953.4250，纯度90％。
示例76的制备
Figure BDA0003966615320000431
通过操作方案1中描述的方法进行制备。
HRMS：计算为(C87H118N26O20S3+2H)2+947.8953；发现为(ESI[M+2H]2+)947.8984，纯度82％。
示例5的制备：
Figure BDA0003966615320000432
步骤1：Ac-Cys-(NMe-Ala)-(NMe-Trp)-(tBu-Ala)-Gln-Asp-Cys-(NMe-Trp)-(二甲基-Arg)-Gly-(4-F-Phe)-Cys-NH2的制备
按照操作方案2和示例129中规定的方法，在Biotage Initiator+Alstra上以0.2mmol的规模制备线性肽，得到215mg(66％)。LCMS(Acquity CSH C18 1.7μm，pH 3，rt6.02分钟，20至60％的MeCN，10分钟)：ES+819.3[M+2H]2+。
步骤2：TATA环化
按照操作方案2和示例129中规定的方法，通过制备型HPLC进行纯化后(柱：WatersAtlantis T3 ODB 5μm，150×19mm；流动相：A–H2O/TFA 100/0.15和B–MeCN，梯度为5％的B达0.5分钟，5-33％的B达1.5分钟，33-38％的B达14钟；流速为30mL/分钟，室温，检测230nm)，将线性肽环化以产生标题化合物(29mg，19％)。HRMS：计算为(C86H119FN22O19S3+2H)2+940.4162；发现为(ESI[M+2H]2+)940.4159，纯度93％。
除乙酸酯外的N-末端修饰
示例84的制备
Figure BDA0003966615320000441
步骤1：Piv-Cys-His-Trp-Leu-Glu-Asn-Cys-Trp-Arg-Gly-Phe-Cys-NH2的制备
根据操作方案2中描述的方法，在30mL的反应瓶中，在Biotage Initiator+lstra中以0.25mmol的规模制备被Fmoc保护的肽。树脂的溶胀在DCM中在室温下进行20分钟。中间体聚合物结合的产物储存在冰箱里，使用相当于0.123mmol肽的量在Biotage Initiator+Alstra中引入N-末端基团。在溶胀和Fmoc-脱保护之后，树脂在75℃下与特戊酸(0.3M，6eq)、DIC(0.5M，6eq)和oxyma(0.5M，6eq)偶联5分钟。用10mL的TFA/TIS/H2O(92.5:2.5:2)在摇床上处理树脂3小时，实现脱保护和切割。蒸发TFA，用冷的Et2O沉淀，离心并在真空下干燥，得到无色固体的标题化合物(108mg，54％)。LCMS(Acquity CSH，C18 1.7μm，pH3，rt2.27分钟，10至90％的MeCN在4分钟)：ES+m/z＝819.3[M+2H]2+-；纯度73％。
步骤2：与TATA环化
按照TATA环化方法，将上述肽(108mg，0.07mmol)与TATA(16mg，0.07mmol)进行环化2小时。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化(柱：Waters Atlantis T3 ODB 5μm，150×19mm。流动相：A–H2O/TFA 100/0.15和B–MeCN；梯度：5％的B达1分钟，5-23％的B达3分钟，23-28％的B达15分钟；在室温下流速为30mL/分钟，检测为230nm，注射体积为0.6mL，样品浓度50mg/mL)，以得到呈无色固体的标题化合物(14mg，11％)。HRMS：计算为(C86H116N24O19S3+2H)2+943.4083；发现为(ESI[M+2H]2+)943.3998，纯度96％。
示例93的制备
Figure BDA0003966615320000442
步骤1：Bn-Cys-His-Trp-Leu-Glu-Asn-Cys-Trp-Arg-Gly-Phe-Cys-NH2的制备
根据操作方案2，在30mL的反应瓶中，在Biotage Initiator+Alstra上以0.25mmol的规模制备树脂结合的保护肽，省略最后的乙酰化步骤，以得到具有游离的N-末端氨基基团的中间体。用相当于0.1mmol肽的量的树脂引入苄基基团。在树脂溶胀和过滤后，加入DCM(10mL)，然后加入苯甲醛(0.104mL，1.00mmol)和三乙酰氧基氢硼酸钠(0.218g，1.00mmol)。将小瓶密封并在室温下震荡15小时。得到的树脂用MeOH(3×)和DCM(3×)洗涤，然后在真空中在室温下干燥2小时。用20mL的TFA/TIS/苯酚(w/v)/H2O(88：2：5：5)处理树脂2小时伴随氮气鼓泡进入混合物中，以实现脱保护和切割。在蒸发TFA之后，用冷的Et2O沉淀，离心并在真空下干燥，获得呈无色固体的标题化合物(127mg，77％)。LCMS(Acquity CSH，C18 1.7μm，pH 3，RT 5.19分钟，3至60％MeCN，10分钟)：ES+m/z＝822.2[M+2H]2+，纯度75％。
步骤2：与TATA环化
根据TATA环化方法，将上述肽(127mg，0.06mmol)与TATA进行环化2小时。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化(柱：XBridge 5μm，150×19mm；流动相：A–H2O/MeCN/NH3 95/5/0.2和B–MeCN；梯度为5％的B达1分钟，5-28％的B达3分钟，28-33％的B达15分钟；在室温下流速为30mL/分钟，检测为230nm)，以得到标题化合物(14mg，13％)。HRMS：计算为(C88H114N24O18S3+2H)2+946.4031；发现为(ESI[M+2H]2+)946.3397，纯度93％。
根据上述示例84和93的方法制备表2中的化合物。
表2：N-末端修饰的5×4双环RCys-His-Trp-Leu-Glu-Asn-Cys-Trp-Arg-Gly-Phe-Cys-NH2
Figure BDA0003966615320000451
Figure BDA0003966615320000452
Figure BDA0003966615320000461
示例15的制备
Figure BDA0003966615320000462
步骤1：正辛酰
-Cys-NMeAla-1MeW-Ala(tBu)-Gln-Asp-Cys-1MeW-ADMA-Gly-4Fphe-Cys-NH2的制备
根据操作方案2，在30mL的反应瓶中，在Biotage Initiator+Alstra中以0.2mmol的规模制备被Fmoc保护的肽。树脂在70℃下在DMF中溶胀20分钟。中间体聚合物结合的产物储存在冰箱里。从中取出相当于0.1mmol肽的量。在CEM Liberty Blue上以下列方式引入N-末端基团：在溶胀和Fmoc-脱保护后，将树脂与辛酸(58mg,4eq)、DIC和oxyma在90℃下偶联4分钟。用10mL的TFA/TIS/H2O 92.5：2.5：2.5的混合物在摇床上3小时，将肽脱保护并从树脂上切割下来。得到的标题化合物(110mg，64％)发现为无色的固体，直接用于下一步骤。LCMS(Acquity CSH C18 1.7μm，pH 3，rt8.73分钟，20至60％MeCN，10分钟)：ES+m/z＝858.4[M+2H]2+-；纯度71％。
步骤2：与TATA环化
根据TATA环化方法，将上述化合物(110mg，0.05mmol)与TATA进行环化3小时。将肽通过制备型HPLC进行纯化(柱：Waters XSelect CSH Fluoro Phenyl5μm，150×19mm；流动相：A–H2O/TFA 100/0.15和B–MeCN，梯度为5％的B达0.5分钟，5-35％的B达1.5分钟，35-40％的B达14钟。在室温下流速为30mL/分钟)，在冻干之后得到标题化合物(13mg，14％)。HRMS：计算为(C92H131FN22O19S3+2H)2+946.4031；发现为(ESI[M+2H]2+)946.3397，纯度93％。
根据示例15所述的方法制备表3中的化合物。
表3：N-末端修饰的5×4双环R-C-Q-(NMe-Trp)-(tBu-Ala)-E-D-C-(NMe-Trp)-(二甲基-Arg)-G-(4-F-Phe)-C-NH2
Figure BDA0003966615320000471
示例编号 N-末端基团(R) Mw MS发现[M+2H]<sup>2+</sup> 纯度(％)
6 Pv 1966.3 984.2 90
7 1,4-哒嗪基C＝O 1988.3 995.2 98
5×4双环的C-末端修饰
示例96的制备
Figure BDA0003966615320000472
步骤1：树脂的制备
Figure BDA0003966615320000473
将4-((4-苯基)甲氧基)-2,6-二甲氧基苯甲醛聚苯乙烯树脂(1g，每克上样1-1.5mmol，
Figure BDA0003966615320000474
)在二氯乙烷(10mL)中溶胀20分钟，然后加入10mL的2-苯基乙烷-1-胺(0.485g，4.00mmol)的二氯乙烷溶液，将所得混合物震荡30分钟。向该混合物中加入三乙酰氧基氢硼化钠(1.696g，8.00mmol)，并继续震荡过夜。通过过滤分离出树脂，用DCM(3×10mL)、MeOH+含5％TEA(5×10mL)和MeOH(3×10mL)洗涤，最后在真空中干燥。
步骤2：上样Fmoc-Cys(Tr)
Figure BDA0003966615320000481
将N-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-S-三苯甲基-L-半胱氨酸(3.51g，6.0mmol)溶于无水DCM(50mL)。加入DIPEA(1.1mL，6.30mmol)和氟-N,N,N',N'-四甲基甲酰胺(tetramethylformamidinium)六氟磷酸酯(1.6g，6.06mmol)，并在氮气下将混合物搅拌3小时，以生成相应的氨基酸氟化物。向该混合物中加入在步骤1中制备的树脂(1.2g，相当于约1.5mmol)，然后加入DIPEA(1.1mL，6.3mmol)。将混合物震荡160分钟，然后通过过滤分离出树脂，用DCM(2×20mL)、MeOH(5×20mL)和DCM(3×20mL)进行洗涤。在真空中干燥后，用含有TES(0.1mL)的TFA(1mL)处理52mg的树脂1小时。过滤，用DCM(3×1mL)和MeOH(3×1mL)洗涤树脂，得到滤液，蒸发至干燥，得到粗制的Fmoc-半胱氨酸苯乙酰胺(14mg，Mw＝446.6Da；树脂上样计算为0.6mmol/g)。LCMS ES+m/z＝447.5[M+H]+。
步骤3：Ac-Cys-His-Trp-Leu-Glu-Asn-Cys-Trp-Arg-Gly-Phe-Cys-NHCH2CH2Ph的制备
根据操作方案2，将上述树脂(0.7g，0.42mmol)用于在30mL反应瓶中的BiotageInitiator+Alstra上，以合成标题化合物。从树脂上切割后，得到199mg(17％)的无色粉末，无需进一步纯化即可使用。LCMS(Acquity CSH，C18 1.7μm，pH 3，RT 2.09分钟，20至60％的MeCN，4分钟)，ES+m/z＝850.1[M+2H]2+，纯度47％。
步骤4：与TATA环化
根据TATA环化方法，将上述肽(85mg，0.05mmol)与TATA进行环化2小时。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化(柱：XBridge 5μm，150×19mm；流动相：A–H2O/MeCN/NH3 95/5/0.2和B–MeCN；梯度为5％的B达0.5分钟，5-29％的B，1.5分钟，29-34％的B，14分钟；在室温下流速为30mL/分钟，检测为230nm)，以得到标题化合物(6mg，6％)。HRMS：计算为(C91H118N24O19S3+2H)2+974.4162；发现为(ESI[M+2H]2+)974.4167，纯度为97％。
使用氯三苯甲基树脂制备示例123
Figure BDA0003966615320000491
步骤1：9H-芴-9-基甲基N-[(1R)-2-氧代-2-(戊基氨基)-1-(三苯甲基磺酰甲基)乙基]氨基甲酸酯
Figure BDA0003966615320000492
将N-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-S-三苯甲基-L-半胱氨酸(3g，5.12mmol)溶于无水DCM(50mL)。加入DIPEA(0.984mL，5.63mmol)和氟N,N,N',N'-四甲基甲酰胺六氟磷酸酯(1.488g，5.63mmol)，混合物在室温下搅拌1小时。然后加入DIPEA(0.984mL，5.63mmol)和戊烷-1-胺(0.66mL，5.63mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌1小时。反应混合物用DCM(50mL)稀释，并用5％的柠檬酸(25mL)洗涤。将相分离，将水相用DCM重新萃取，合并的有机相在MgSO4上干燥。蒸发得到标题化合物(3.21g，96％)，无需进一步纯化即可使用。
步骤2：9H-芴-9-基甲基N-[(1R)-2-氧代-2-(戊基氨基)-1-(磺酰甲基)乙基]氨基甲酸酯
Figure BDA0003966615320000493
将步骤1的化合物(3.21g，4.9mmol)用含有TES(1.1mL)的50％TFA的DCM溶液(20mL)处理2小时。在真空中除去挥发物，残余的油在
Figure BDA0003966615320000494
KP-SIL(340g柱，庚烷-EtOAc0-60％)上通过闪蒸色谱法进行纯化。合并并蒸发含有期望产物的级分以产生呈泡沫状的标题化合物(1.69g,84％)。LCMS ES+m/z＝413.6[M+H]+.1H NMR(500MHz,CD2Cl2)δ0.89(t,J＝7.4Hz,3H),1.11–1.18(m,1H),1.32-1.42(m,1H),1.45-1.60(m,5H),2.66-2.79(m,1H),2.99-3.11(m,2H),3.14–3.22(m,1H),4.24(t,J＝6.6Hz,1H),4.25-4.33(m,1H),4.36–4.40(m,2H),5.63,(bs,1H),6.12(bs,1H),7.33(t,J＝7.5Hz,2H),7.41(t,J＝7.4Hz,2H),7.61(d,J＝7.5Hz,2H),7.79(d,J＝7.6Hz,2H)。
步骤3：树脂的制备
Figure BDA0003966615320000501
将前述化合物(1.69g，4.1mmol)溶于无水DCM(30mL)，加入氯三苯甲基氯化树脂(
Figure BDA0003966615320000502
1g，1.9mmol/g)和TEA(0.7mL)，将混合物在室温下震荡过夜。用DCM(3×20mL)、MeOH(3×20mL)和DCM再次(3×20mL)洗涤树脂，在真空中干燥。用含有TES(0.1mL)的TFA(1mL)处理41mg的树脂1小时。过滤，用DCM(3×1mL)和MeOH(3×1mL)洗涤树脂，产生滤液，将滤液蒸发至干燥，以产生8.1mg的9H-芴-9-基甲基N-[(1R)-2-氧代-2-(戊基氨基)-1-(磺酰甲基)乙基]氨基甲酸酯，对应的树脂上样约为0.50mmol/g。
步骤4：Ac-Cys-His-Trp-Leu-Glu-Asn-Cys-Trp-Arg-Gly-Phe-Cys-NH(CH2)4CH3的制备
根据操作方案2，将前述树脂(1.0g，0.5mmol)用于在30mL反应瓶中的BiotageInitiator+Alstra上，以合成标题化合物。从树脂上切割后，获得了线性肽(312mg，37％)，无需进一步纯化即可使用。LCMS(Acquity CSH，C18 1.7μm，pH 3，RT 2.06分钟，20至60％MeCN，4分钟)：ES+m/z＝833.1[M+2H]2+，纯度68％。
步骤5：与TATA环化
根据TATA环化方法，将上述肽(103mg，0.06mmol)与TATA进行环化2小时。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化(柱：XBridge 5μm，150×19mm；流动相：A–H2O/TFA 95/5和B–MeCN；梯度为5％的B达0.5分钟，5-29％的B，1.5分钟，29-34％的B，14分钟；在室温下流速为30mL/分钟，检测为230nm)，以得到呈无色固体的标题化合物(19mg，15％)。HRMS：计算为(C88H120N24O19S3+2H)2+957.4240；发现为(ESI[M+2H]2+)957.4255，纯度为95％。
用类似于示例96和123中所述的方法合成表4中的肽
表4：C-末端修饰的5×4双环AcCHWLENCWRGFC-NHZ
Figure BDA0003966615320000511
Figure BDA0003966615320000512
5×4双环肽的多聚化
示例250的制备
Figure BDA0003966615320000513
步骤1：N2,N6-二戊-4-炔酰基-L-赖氨酸乙酯
Figure BDA0003966615320000514
在L-赖氨酸乙酯二盐酸盐(650mg，2.63mmol)的悬浮液中，加入HATU(2.5g，6.57mmol)、戊-4-炔酸(645mg，6.57mmol)和Et3N(1.823mL，13.15mmol)的DCM溶液(25mL)。该反应在室温下搅拌过夜。用NaHCO3水溶液(8％，25mL)淬灭反应，水相用DCM(3×25mL)萃取。将有机相合并，用H3PO4(1M，25mL)和盐水(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。将残余物在
Figure BDA0003966615320000521
KP-SIL 50g柱上通过自动闪蒸色谱法进行纯化。将梯度为从40％至100％的EtOAc的庚烷溶液(10CV)作为流动相，以得到含有一些杂质的呈无色油状的标题化合物(1.05g，119％)，其在放置后缓慢凝固。1H NMR(500MHz,DMSO)δ1.17(t,J＝7.1Hz,3H),1.21–1.44(m,4H),1.52-1.61(m,1H),1.62-1.70(m,1H),2.22–2.27(m,2H),2.341-2.37(m,6H),2.75(t,J＝2.4Hz,1H),2.77(t,J＝2.6Hz,1H),3.01(q,J＝6.7Hz,2H),4.06(q,J＝7.1Hz,2H),4.17(ddd,J＝9.0,7.6,5.2Hz,1H),7.86(t,J＝5.5Hz,1H),8.25(d,J＝7.5Hz,1H)。
步骤2：N2,N6-二戊-4-炔酰基-L-赖氨酸
Figure BDA0003966615320000522
将NaOH(aq)(4.0M,1.314mL,5.26mmol)加入到N2,N6-二戊-4-炔酰基-L-赖氨酸乙酯(879mg,2.63mmol)在1,4-二氧己烷(10mL)/水(10mL)的溶液中。该反应在室温下搅拌4.5小时。然后，加入H2O(30mL)，用Et2O(2×25mL)洗涤水相。将水相用H3PO4酸化至pH 1，向其中加入一些NaCl，用DCM(8×20mL)萃取。合并有机相，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发，以获得呈无色油状的标题化合物(618mg，77％)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ1.22–1.43(m,4H),1.48–1.60(m,1H),1.62–1.75(m,1H),2.24(t,J＝7.2Hz,2H),2.27–2.39(m,6H),2.74(t,J＝2.6Hz,1H),2.75–2.77(m,1H),3.01(d,J＝6.4Hz,2H),4.15(ddd,J＝9.0,8.0,4.9Hz,1H),7.86(t,J＝5.5Hz,1H),8.14(d,J＝7.9Hz,1H),12.53(s,1H)。
步骤3：N-丁-3-炔-1-基-N2,N6-二戊-4-炔酰基-L-赖氨酰胺
Figure BDA0003966615320000523
将HATU(920mg，2.42mmol)加入到N2,N6-二戊-4-炔酰基-L-赖氨酸(618mg，2.02mmol)、丁-3-炔-1-氯化铵(319mg，3.03mmol)和Et3N(0.559mL，4.03mmol)的DMF和DCM(5和10mL)混合物的悬浮液中。该反应在室温下搅拌18小时。用Na2CO3的水溶液(10％，25mL)淬灭反应，用DCM(3×25mL)萃取水相。将有机相合并，用H3PO4的水溶液(1M，25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。将残余物在
Figure BDA0003966615320000524
KP-SIL 50g柱上通过自动闪蒸色谱法进行纯化。将梯度为从0％至10％的MeOH的EtOAc溶液(10CV)作为流动相，得到标题化合物(799mg，111％)，其无需进一步纯化即可使用。少量样品用RP-HPLC纯化以获得光谱数据。LCMS ES+m/z＝358.2[M+H]+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ1.18–1.3(m,2H),1.32–1.4(m,2H),1.42–1.51(m,1H),1.56–1.65(m,1H),2.25(dt,J＝14.7,6.6Hz,3H),2.31–2.4(m,6H),2.74(t,J＝2.6Hz,1H),2.74–2.76(m,1H),2.81(t,J＝2.5Hz,1H),2.95–3.06(m,3H),3.07–3.16(m,1H),3.16–3.24(m,1H),4.12–4.23(m,1H),7.82(t,J＝5.3Hz,1H),7.99(d,J＝8.1Hz,1H),8.02(t,J＝5.7Hz,1H)。
步骤4：线性肽N3CH2C(O)NH(CH2CH2O)3CH2CH2(CO)-Cys-NMeAla-1MeW-Ala(tBu)-Gln-Asp-Cys-1MeW-ADMA-Gly-4Fphe-Cys-NH2的制备
根据操作方案2，在30mL的反应瓶中，在Biotage Initiator+Alstra中以0.2mmol的规模制备肽。在70℃在DMF中进行树脂溶胀20分钟。使最后两个偶联(Fmoc-NH-PEG3-CH2CH2COOH，接着是N3CH2COOH)在室温下进行60分钟。用20mL的TFA/TIS/DODT/H2O 92.5:2.5:2.5:2.5的混合物从树脂上进行切割2小时之后，得到呈无色固体的标题化合物(263mg，70％)，无需进一步纯化即可使用，发现为白色固体。LCMS(Acquity CSH C18 1.7μm，pH 3，rt6.32分钟，20至60％的MeCN，10分钟)：ES+m/z＝938.4[M+2H]2+-；纯度82％。
步骤5：TATA环化
Figure BDA0003966615320000531
根据TATA环化方法，将前述线性肽(263mg，0.12mmol)与TATA进行环化2天。将肽通过制备型HPLC进行纯化(柱：Waters Atlantis T3 ODB 5μm，150×19mm；流动相：A–H2O/TFA100/0.15和B–MeCN，梯度为5％的B达0.5分钟，5-34％的B，1.5分钟，34-39％的B，14分钟；在室温下流速为30mL/分钟，检测为230nm，注射体积为1mL)，以得到标题化合物(30mg，12％)。HRMS：计算为(C95H135FN26O23S3+2H)2+1062.4747；发现为(ESI[M+2H]2+)1062.4716，纯度98％。
步骤6：示例250的制备
Figure BDA0003966615320000541
在N2气氛下，将(+)-L-抗坏血酸钠(4.7mg，0.02mmol)加入前述化合物(25mg，0.01mmol)、N-丁-3-炔-1-基-N2,N6-二戊-4-炔酰基-L-赖氨酰胺(2.103mg，5.88μmol)和CuSO4·5H2O(5.88mg，0.02mmol)的t-BuOH(5mL)/H2O(10mL)溶液中。溶液变成乳白色。4小时后，用Na2CO3水溶液(10％，0.050mL，0.05mmol)淬灭反应，并进行过滤。将滤液冻干，残余物通过制备型RP-HPLC进行纯化(柱：Waters XSelect CSH C18 ODB 5μm 150×19mm；流动相：A–H2O/TFA 100/0.15和B-MeCN，梯度为5％的B达0.5分钟，5-36％的B，1.5分钟，36-41％的B，14分钟；在室温时流速为30mL/分钟，检测为230nm)，得到标题化合物(6.8mg，9％)。HRMS：计算为(C305H432F3N81O72S9+4H)4+1682.5096；发现为(ESI[M+4H]4+)1682.5154，纯度97％。
示例251的制备
Figure BDA0003966615320000542
步骤1：N3CH2C(O)NH(CH2CH2O)2CH2C(O)-Cys-NMeAla-1MeW-Ala(tBu)-Gln-Asp-Cys-1MeW-ADMA-Gly-4Fphe-Cys-NH2的制备
Figure BDA0003966615320000543
按照示例250、步骤4中的描述，以0.1mmol的规模，在倒数第二个偶联步骤中使用Fmoc-NH-(CH2CH2O)2-CH2COOH以制备标题化合物。获得98mg(54％)的标题化合物。LCMS(Acquity CSH C18 1.7μm，pH 3，rt 6.26分钟，20至60％的MeCN，10分钟)：ES+m/z[M+2H]2+＝909.4，纯度78％。
步骤2：TATA环化
Figure BDA0003966615320000551
根据TATA环化的方法，将上述线性肽(98mg，0.04mmol)与TATA进行环化18小时，得到105mg粗产物，在下一步中无需进一步纯化。LCMS(Acquity CSH C18 1.7μm，pH 3，rt2.47分钟，20至60％的MeCN，4分钟)：ES+m/z＝1033.8[M+2H]2+，纯度91％。
步骤3：示例251的制备
Figure BDA0003966615320000552
在N2气氛下，将(+)-L-抗坏血酸钠(16mg，0.08mmol)加入前述化合物(105mg，0.05mmol)、N2,N6-二戊基-4-炔酰基-L-赖氨酸(6mg，0.02mmol)和CuSO4·5H2O(20mg，0.08mmol)的t-BuOH(10mL)/H2O(20mL)溶液中。溶液变成乳白色。反应在室温下搅拌6.5小时，并加入更多的N2,N6-二戊基-4-炔酰基-L-赖氨酸(6mg，0.02mmol)。23小时后，用Na2CO3水溶液(0.166mL，0.16mmol)淬灭反应并过滤。将滤液冷冻干燥，将粗产物通过制备型HPLC进行纯化(柱：Waters Atlantis T3 ODB 5μm 150×19mm；流动相：A–H2O/TFA 100/0.15和B-MeCN，梯度为5％的B达0.5分钟，5-38％的B，1.5分钟，38-43％的B，14分钟；在室温下流速为30mL/分钟，检测为230nm)，得到获得的标题化合物(5.5mg，3％)。HRMS：计算为(C200H280F2N54O48S6+3H)3+1479.6552；发现为(ESI[M+3H]3+)1479.6583，纯度82％。
桥式5×4双环肽的制备
示例234(异构体1)和示例235(异构体2)的制备
Figure BDA0003966615320000561
步骤1：在树脂上制备线性前体
Figure BDA0003966615320000562
手动制备树脂结合的肽，使用TGR R树脂(NovaSyn，2g，0.48mmol，上样：0.24mmol/g)，其在合成前用DCM(40mL)处理并放置30分钟。将合适的被Fmoc保护的氨基酸(1.5eq)和HATU(1.5eq)溶解在DMF(10mL)中，并将该溶液加入到树脂中，然后加入DIPEA(3eq)。将反应在室温下搅拌45分钟。每次偶联之后，用DMF(3×5mL)、DCM(3×5mL)和MeOH(3×5mL)洗涤树脂。通过在20％哌啶的DMF溶液(5mL，v/v)中搅拌树脂10分钟来去除Fmoc保护基团，用DMF(3×5mL)洗涤。该步骤又重复了两次。在最后一个偶联步骤之后，Fmoc保护基团没有被去除。然后，用DMF(3×5mL)、DCM(3×10分钟)和MeOH(3×5mL)洗涤该树脂，并在真空下室温干燥，得到2.13g的官能化的树脂。
步骤2：闭环置换
Figure BDA0003966615320000563
将步骤1的干燥树脂(2.13g，0.24mmol/g，肽的理论上样量0.48mmol)与无水DCM(130mL)混合，并向溶液中鼓泡氮气达5分钟。向所得混合物中加入溶解在DCM(5mL)中的苯亚甲基双(三环己基膦)-二氯钌(Grubbs第一代催化剂，107mg，0.128mmol)，在氮气下于40℃搅拌反应混合物72小时。此时，将反应混合物从树脂中切割下来，通过LCMS(AcquityCSH，氟苯基柱，2.1×50mm，1.8μm，pH 3，30至70％的MeCN，10分钟)进行分析，表明形成两个位置异构体产物(RT 4.54和4.71分钟，分别为35％和42％)和约11％的残余线性肽(RT6.95分钟)。通过过滤分离出树脂，用DMF、DCM和MeOH(各3×5mL)进行洗涤并干燥。
步骤3：N-乙酰化和切割
Figure BDA0003966615320000571
通过在20％哌啶的DMF溶液(5mL，v/v)中搅拌树脂10分钟来去除Fmoc基团，用DMF(3×5mL)洗涤。脱保护步骤又重复了两次。然后，用DMF(3×5mL)、DCM(3×10分钟)和MeOH(3×5mL)洗涤该树脂，并在真空下干燥。用Ac2O(10eq)处理，在室温下在5mL的DMF和i-Pr2NEt中溶解20分钟，用来安装N-末端乙酰基团。然后，用DMF(3×5mL)、DCM(3×5mL)、MeOH(3×5mL)和Et2O(3×5mL)洗涤树脂，并在真空下干燥。在TFA/TIS/H2O/DODT(92.5/2.5/2.5/2.5，v/v，20mL)的混合物中轻轻搅拌2.5小时，将结合的肽从树脂中切割下来并进行脱保护。在冷醚中进行沉淀，离心并在高真空中干燥，得到所期望的粗肽(284mg，41％)，无需进一步纯化即可使用。
步骤4：TATA环化
Figure BDA0003966615320000572
将步骤3中获得的粗肽(146mg，0.1mmol)溶解在MeCN/H2O(10mL，1:1，v/v)的混合物中，加入NH4CO3水性缓冲液(0.06M，20mL)，然后滴加TATA(20mg，0.08mmol)的MeCN溶液(5mL)，35分钟。将混合物在室温搅拌1小时。然后，加入甲酸(0.5mL)，并将所得混合物冷冻干燥。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化(柱：Waters Atlantis T3 ODB 5μm 150×19mm；流动相：A-H2O/TFA 100/0.1和B-MeCN，梯度为5％的B达0.5分钟，5-23％的B，2分钟，23-33％的B，30分钟；流速30mL/分钟，室温，检测为210nm)，得到标题化合物的异构体1(8.2mg，4.8％)作为第一级分，异构体2(9.5mg，5.6％)作为第二级分。
异构体1：HRMS：计算为(C75H101FN18O21S3+2H)2+853.3345；发现为(ESI[M+2H]2+)853.3354，纯度92％。
异构体2：HRMS：计算为(C75H101FN18O21S3+2H)2+853.3345；发现为(ESI[M+2H]2+)853.3353，纯度86％。
示例236的制备
Figure BDA0003966615320000581
步骤1：氢化和从树脂上切割
Figure BDA0003966615320000582
将如示例234/235的步骤2所述制备的1.5克树脂(理论的肽上样为0.25mmol)悬浮在高压釜中的DCM/MeOH(10mL，v/v)混合物中。加入Wilkinson催化剂(100mg，0.11mmol)，并在氢气压力(4bar)下于40℃搅拌反应24小时。通过过滤将树脂分离，用DMF(3×5mL)、DCM(3×5mL)和MeOH(3×5mL)进行洗涤。如示例234/235的步骤3所述，从树脂上进行肽的Fmoc切割、乙酰化和切割，得到57mg(16％)的粗产物，其无需进一步纯化即可使用。
步骤3：TATA环化
Figure BDA0003966615320000591
如示例23/235的步骤4中所述，将来自前述步骤的粗肽(57mg，0.04mmol)与TATA进行环化。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化(柱：Waters
Figure BDA0003966615320000592
CSH Prep，C18 5μm OBDTM，19×150mm；流动相：A–H2O/TFA(0.1％)和B–MeCN+TFA(0.1％)，梯度为5％的B达0.5分钟，5-20％的B，2分钟，20-30％的B，20分钟；在室温下流速为30mL/分钟，检测为210nm)，得到标题化合物(3.3mg，3.9％)。HRMS：计算为(C75H103FN18O21S3+2H)2+854.3424；发现为(ESI[M+2H]2+854.3429，纯度99％。
使用示例234至236中描述的方法，制备表5和表6中所示的化合物。
表5：合订的(Stapled)5×4双环
Figure BDA0003966615320000593
Figure BDA0003966615320000594
Figure BDA0003966615320000601
表6：合订的(Stapled)5×4双环
Figure BDA0003966615320000602
Figure BDA0003966615320000603
示例248的制备
Figure BDA0003966615320000604
步骤1.Ac-Cys-Gln-X2-Leu-Glu-Asp-Cys-Trp-X1-G-Phe(4-F)-CysNH2(X1＝L-2-氨基-叠氮丁酸，X2＝L-2-氨基庚-6-炔酸)的制备
树脂结合的肽是用Chemmatrix Rink酰胺树脂(Biotage，531mg，0.25mmol，上样：0.48mmol/g)手动制备的，其在合成前用DCM(20mL)处理并放置30分钟。将合适的被Fmoc保护的氨基酸(1.5eq)和HATU(1.5eq)溶解在DMF(10mL)中，将该溶液加入到树脂中，然后加入DIPEA(3eq)。将反应在室温下搅拌45分钟。每次偶联之后，用DMF(3×5mL)、DCM(3×5mL)和MeOH(3×5mL)洗涤树脂。通过在20％哌啶的DMF溶液(5mL，v/v)中搅拌树脂10分钟来去除Fmoc保护基团，用DMF(3×5mL)洗涤。这个步骤又重复了两次。在最后一次偶联和去除Fmoc保护基团后，用Ac2O(10eq)和DIPEA(10eq)的DMF溶液(5mL)处理树脂60分钟。过滤后，用DMF(3×5mL)、DCM(3×10分钟)和Et2O(3×5mL)洗涤树脂，在真空下干燥。在TFA/TIS/H2O/DODT(92.5/2.5/2.5/2.5，v/v，27mL)的混合物中轻轻搅拌2.5小时，将结合的肽从树脂中切割下来并进行脱保护。在冷醚中进行沉淀，离心并在高真空中干燥，得到所期望的粗肽(353mg，92％)，其无需进一步纯化即可使用。
步骤2：TATA环化
将从前述步骤中获得的粗肽(353mg，0.24mmol，70％纯度)溶解在MeCN/H2O(20mL，1:1，v/v)中，加入NH4CO3水性缓冲液(0.06M，40mL)，然后滴加TATA(48mg，0.192mmol)的MeCN溶液(10mL)20分钟。将混合物在室温搅拌1小时。然后，加入甲酸(2mL)，将所得混合物冷冻干燥，得到210mg的粗产物。
步骤3：链接反应
将步骤2中获得的粗产物(100mg，0.06mmol)和五水合CuSO4(66mg，0.26mmol)溶于水和叔丁醇(2：1，v/v，100mL)的混合物中。向该混合物中缓慢加入抗坏血酸钠(52mg，0.26mmol)的水溶液(2mL)。获得的混合物在室温下搅拌2小时。在真空中蒸发掉酒精，将残余物冻干。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化(柱：Waters
Figure BDA0003966615320000612
CSH Prep，C18 5μmOBDTM，19×150mm；流动相：A–H2O/TFA(0.1％)和B–MeCN+TFA(0.1％)，梯度为5％的B达0.5分钟，5-25％的B在2分钟，25-30％的B，20分钟；在室温下流速为30mL/分钟，检测为210nm)，得到标题化合物(1.2mg，1％)。HRMS：计算为(C75H100FN21O21S3+2H)2+873.8353；发现为(ESI[M+2H]2+873.8361，纯度99％。
示例249的制备
Figure BDA0003966615320000611
按照示例248所述的方法，得到标题化合物(0.6mg，0.5％)。LCMS：计算为(C75H100FN21O21S3+2H)2+874.5；发现为ESI[M+2H]2+874.4，纯度95％。
生物数据
人TSLP表面等离子体共振(SPR)结合测定
生物素化的人TSLP固定在链霉亲和素包被的生物传感器芯片上(GE Helathcare或XanTec bioanalytics GmbH)。通常的捕获水平是500-2000个反应单位(RU)。缓冲液条件为50mM HEPES pH 7.4，150mM NaCl，0.005％(v/v)的Tween20和1％的DMSO。将肽以30μL/分钟的流速注入，以7或10个浓度反应系列确定结合，最大浓度为10或100μM和1/3稀释步骤。通常的接触时间是60秒，接着是180-600秒的解离。用稳态或动力学的1:1结合模型拟合传感器图，以获得KD值。实验是在20℃进行的。
示例1至252的化合物在上述人TSLP SPR测定中进行测试，结果显示在下表7中。
表7：针对本发明的肽配体的人TSLP SPR数据
Figure BDA0003966615320000631
Figure BDA0003966615320000641
Figure BDA0003966615320000651
Figure BDA0003966615320000661
Figure BDA0003966615320000671
Figure BDA0003966615320000681
人外周血单个核细胞测定
根据制造商的说明，使用Lymphoprep(StemCell Technologies,Vancouver,BC)通过密度梯度离心法从肝素化全血(健康捐赠者)中获得人外周血单个核细胞(PMBC)。PBMC用含有2mM的EDTA和2％的胎牛血清(FCS)的PBS洗涤两次，在含有10％的FCS和2％的PenStrep的RPMI中复溶，终浓度为300万细胞/mL。该细胞悬浮液(100μL)被等分到96孔平底组织培养板的孔中。然后，加入5μL的双环肽或载体(0.1％的在完全介质中的DMSO)，与5μL的TSLP载体(完全介质)混合。测定中TSLP(100ng/mL)的终浓度为50、400或666pM。将板在室温下孵育30分钟。将10μL的该混合物加入到细胞中，将板在37℃的湿度培养箱中、在10％的CO2中孵育24小时。将板在300×g下离心5分钟，将收集的上清液冷冻在-20℃中，用于后续CCL17/TARC分析。
根据制造商的说明由MSD(MesoScale Discovery,Maryland,USA)确定CCL17/TARC。
用GraphPad Prism软件计算化合物对受试化合物的抑制效果，计算方法如下：
化合物％效果＝100*[(X-min)/(max-min)]。
其中，X代表基于最小值(DMSO)和最大值(在50、400或666pM时的TSLP)时的化合物的标准化值。
在上述CCL17结合测定中测试本发明的某些化合物，其结果显示于下表8中。
表8：针对本发明的肽配体的CCL17结合数据
Figure BDA0003966615320000691
Figure BDA0003966615320000701
序列表
<110> 拜斯科技术开发有限公司
<120> TSLP特异性的双环肽配体
<130> BIC-C-P2786PCT
<150> 63/005,744
<151> 2020-04-06
<160> 165
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
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<220>
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<223> Xaa是TrpMe
<220>
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<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是4F3ClPhe
<400> 1
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1 5 10
<210> 2
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
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<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 2
Cys Gln Xaa Xaa Gln Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 3
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<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是4-FPhe
<400> 4
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
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<220>
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<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
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<220>
<221> Xaa
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<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是4-FPhe
<400> 5
Cys Xaa Xaa Xaa Gln Xaa Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 6
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
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<400> 6
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1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
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<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是LysMe3
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 7
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1 5 10
<210> 8
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 8
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 9
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是3,4diClPhe
<400> 9
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 10
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
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<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
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<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
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<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是4-FPhe
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1 5 10
<210> 11
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是4-FPhe
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
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<220>
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<221> Xaa
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<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是4-FPhe
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
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<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是4-FPhe
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<223> Xaa是4-FPhe
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是AMe
<220>
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<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
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<220>
<221> Xaa
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<223> Xaa是4-FPhe
<400> 16
Cys Xaa Xaa Xaa Gln Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
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<212> PRT
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<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
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Cys His Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 18
Cys Gln Trp Leu Gln Asp Cys Trp Xaa Gly Xaa Cys
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<210> 19
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是5FTrp
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是5FTrp
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 19
Cys Gln Xaa Leu Glu Asp Cys Xaa Arg Gly Xaa Cys
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<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是3,4diFPhe
<400> 20
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 21
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 21
Cys Gln Trp Leu Glu Asn Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 22
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是AMe
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是AcK
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 22
Cys Xaa Xaa Xaa Gln Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 23
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是AMe
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是Nal1
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 23
Cys Xaa Xaa Xaa Gln Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 24
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-BrPhe
<400> 24
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 25
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是Nal1
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 25
Cys Gln Xaa Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 26
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 26
Cys Trp Trp Leu Gln Asp Cys Trp Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 27
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是AMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 27
Cys Xaa Trp Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 28
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是iPrMeA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 28
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 29
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是3-ClPhe
<400> 29
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 30
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是AMe
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是NeopentA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 30
Cys Xaa Xaa Xaa Gln Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 31
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是AMe
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是Cha
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 31
Cys Xaa Xaa Xaa Gln Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 32
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是AMe
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是Nal1
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 32
Cys Xaa Xaa Leu Gln Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 33
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是3,4,5triFPhe
<400> 33
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 34
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是Nal1
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 34
Cys Gln Xaa Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 35
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 35
Cys Gln Trp Leu Phe Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 36
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是AMe
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是5FTrp
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 36
Cys Xaa Xaa Xaa Gln Asp Cys Xaa Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 37
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是3-F,4-ClPhe
<400> 37
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 38
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 38
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 39
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<400> 39
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 40
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是AMe
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是BnA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 40
Cys Xaa Xaa Xaa Gln Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 41
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是Nal1
<400> 41
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 42
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是Nal2
<400> 42
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 43
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 43
Cys Gln Trp Met Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 44
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是AMe
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (5)..(5)
<223> Xaa是Aib
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 44
Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 45
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 45
Cys Gln Trp Ile Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 46
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是3,5diF,4ClPhe
<400> 46
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 47
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是4-ClNal
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 47
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Xaa Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 48
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是Nal1
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是Harg
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 48
Cys Ala Xaa Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 49
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 49
Cys Thr Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 50
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是CpentA
<400> 50
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 51
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是Nal1
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 51
Cys Ala Trp Leu Glu Asp Cys Xaa Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 52
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是4-PipA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 52
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 53
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是AMe
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-ClNal
<400> 53
Cys Xaa Xaa Xaa Gln Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 54
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 54
Cys Val Trp Leu Asp Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 55
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是3-MePhe
<400> 55
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 56
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 56
Cys His Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 57
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 57
Cys Thr Trp Leu Asp Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 58
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-CF3Phe
<400> 58
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 59
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 59
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Ala Xaa Cys
1 5 10
<210> 60
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是CproA
<400> 60
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 61
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是TriMeK
<400> 61
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 62
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<400> 62
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 63
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是Cha
<400> 63
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 64
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 64
Cys His Trp Leu Glu Asn Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 65
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 65
Cys Leu Trp Leu Asp Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 66
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是AMe
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是3AcNH4ClPhe
<400> 66
Cys Xaa Xaa Xaa Gln Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 67
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 67
Cys Thr Trp Leu Glu Asp Cys Trp His Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 68
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是Nva
<400> 68
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 69
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是3-FPhe
<400> 69
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 70
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-MePhe
<400> 70
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 71
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是ChMeA
<400> 71
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 72
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 72
Cys His Trp Leu Asp Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 73
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 73
Cys Asp Trp Leu Asp Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 74
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 74
Cys Asp Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 75
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 75
Cys Glu Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 76
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是Cit
<400> 76
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 77
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (5)..(5)
<223> Xaa是3-ClPhe
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 77
Cys Gln Trp Leu Xaa Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 78
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 78
Cys Ala Trp Leu Thr Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 79
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是7-OMeTrp
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 79
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Xaa Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 80
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是Nle
<400> 80
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 81
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是2-FPhe
<400> 81
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 82
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是TriFMeA
<400> 82
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 83
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是HArg
<400> 83
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 84
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是Cha
<400> 84
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 85
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是Nal1
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是Nal1
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是HArg
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 85
Cys Ala Xaa Leu Glu Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 86
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 86
Cys Arg Trp Leu Asp Asp Cys Trp Gln Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 87
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 87
Cys Gln Trp Leu Gln Asp Cys Phe Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 88
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-CNPhe
<400> 88
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 89
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 89
Cys Asn Trp Leu Glu Asp Cys Trp His Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 90
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 90
Cys Ala Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 91
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是3-CNPhe
<400> 91
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 92
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是Can
<400> 92
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 93
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是3-噻吩基A
<400> 93
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 94
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是Agb
<400> 94
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 95
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ADMA
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 95
Cys Ala Trp Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 96
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是2噻吩基A
<400> 96
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 97
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 97
Cys Glu Trp Leu Glu Asp Cys Trp Lys Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 98
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 98
Cys Phe Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Tyr Cys
1 5 10
<210> 99
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 99
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Trp Cys
1 5 10
<210> 100
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 100
Cys Asp Trp Leu Asp Asp Cys Trp Lys Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 101
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-MeOPhe
<400> 101
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 102
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是3-BrPhe
<400> 102
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 103
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (5)..(5)
<223> Xaa是3-ClPhe
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 103
Cys Trp Trp Leu Xaa Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 104
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是ButG
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是ButG
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 104
Cys Gln Xaa Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 105
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是2PyrA
<400> 105
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 106
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是M(O)
<400> 106
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 107
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是BnA
<400> 107
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 108
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 108
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Ala Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 109
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 109
Cys Thr Ile Leu Glu Asp Cys Trp Met Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 110
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是Abu
<400> 110
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 111
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 111
Cys His Trp Leu Glu Asn Cys Trp Ala Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 112
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是PentFPhe
<400> 112
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 113
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是LMe
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 113
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 114
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是Dap
<400> 114
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Xaa Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 115
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-PyrA
<400> 115
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 116
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是3-PyrA
<400> 116
Cys Gln Trp Leu Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 117
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是Dap
<400> 117
Cys His Trp Leu Glu Asn Cys Trp Xaa Gly Phe Cys
1 5 10
<210> 118
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是4-MenL
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 118
Cys Gln Trp Xaa Glu Asp Cys Trp Arg Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 119
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 119
Cys Glu Ser Leu Asp Pro Trp Ser Cys Pro Val Trp Trp Arg Cys
1 5 10 15
<210> 120
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 120
Cys Pro Ser Leu Asp Pro Trp Thr Cys Gln Ser Trp Tyr Glu Cys
1 5 10 15
<210> 121
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 121
Cys Thr Glu Leu Asp Pro Trp Thr Cys Glu Thr Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 122
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 122
Cys Arg Asp Leu Asp Pro Trp Thr Cys Ser Ser Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 123
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 123
Cys Ala Asp Leu Asp Pro Trp Thr Cys Pro Asn Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 124
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 124
Cys Val Asp Leu Asp Pro Trp Thr Cys Glu Gln Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 125
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 125
Cys Lys Asp Leu Asp Pro Trp Thr Cys Ser Ser Trp Trp Glu Cys
1 5 10 15
<210> 126
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 126
Cys Arg Asp Leu Asp Pro Trp Thr Cys Pro Thr Trp Trp Thr Cys
1 5 10 15
<210> 127
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 127
Cys Thr Asp Leu Asp Pro Trp Thr Cys Asn Ser Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 128
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 128
Cys Arg Asp Leu Asp Pro Trp Thr Cys Glu Glu Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 129
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 129
Cys Arg Glu Leu Asp Pro Trp Thr Cys Glu Thr Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 130
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 130
Cys Lys Glu Leu Asp Pro Trp Thr Cys Glu Thr Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 131
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是Orn
<400> 131
Cys Xaa Glu Leu Asp Pro Trp Thr Cys Glu Thr Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 132
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 132
Cys Gln Glu Leu Asp Pro Trp Thr Cys Glu Thr Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 133
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (6)..(6)
<223> Xaa是diF-P
<400> 133
Cys Thr Glu Leu Asp Xaa Trp Thr Cys Glu Thr Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 134
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 134
Cys Val Asp Leu Asp Pro Trp Ser Cys Glu Asp Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 135
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 135
Cys Pro Asp Leu Asp Pro Trp Thr Cys Pro Leu Trp Trp Thr Cys
1 5 10 15
<210> 136
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 136
Cys Pro Asp Leu Asp Pro Trp Thr Cys Ser Asp Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 137
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 137
Cys Arg Asp Leu Asp Pro Trp Thr Cys Asp Ser Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 138
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 138
Cys Thr Asp Leu Asp Pro Trp Thr Cys Pro Asp Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 139
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (6)..(6)
<223> Xaa是5-Ph-P
<400> 139
Cys Thr Glu Leu Asp Xaa Trp Thr Cys Glu Thr Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 140
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (6)..(6)
<223> Xaa是Chx-P
<400> 140
Cys Thr Glu Leu Asp Xaa Trp Thr Cys Glu Thr Trp Trp Leu Cys
1 5 10 15
<210> 141
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 141
Cys Asp Trp Gln Trp Ser Tyr Asp Cys Trp Leu Pro Cys
1 5 10
<210> 142
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 142
Cys Asp Trp Val Trp Glu Tyr Asp Cys Trp Leu Pro Cys
1 5 10
<210> 143
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 143
Cys Asp Trp Asp Trp Glu Tyr Asp Cys Trp Leu His Cys
1 5 10
<210> 144
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 144
Cys Asp Trp His Trp Glu Tyr Asp Cys Trp Leu Ser Cys
1 5 10
<210> 145
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 145
Cys Thr Trp Asn Trp Glu Tyr Asp Cys Trp Leu Asp Cys
1 5 10
<210> 146
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 146
Cys Glu Trp Asn Trp Ala Tyr Asp Cys Trp Leu Gly Cys
1 5 10
<210> 147
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 147
Cys Glu Trp Asn Trp Glu Tyr Asp Cys Trp Leu Asp Cys
1 5 10
<210> 148
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 148
Cys Gln Trp Asn Trp Thr Tyr Asp Cys Trp Leu Gly Cys
1 5 10
<210> 149
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 149
Cys Lys Trp Met Trp Glu Tyr Asp Cys Trp Leu Ser Cys
1 5 10
<210> 150
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 150
Cys Asp Trp Gln Trp Glu Tyr Asp Cys Trp Leu Ser Cys
1 5 10
<210> 151
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 151
Cys Asp Trp Asn Trp Thr Tyr Asp Cys Trp Leu Asp Cys
1 5 10
<210> 152
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 152
Cys Asp Trp Asn Trp Ser Tyr Asp Cys Trp Leu Pro Cys
1 5 10
<210> 153
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 153
Cys Asp Trp Asp Trp Asp Tyr Asp Cys Trp Leu Pro Cys
1 5 10
<210> 154
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 154
Cys Val Trp His Trp Glu Tyr Asp Cys Trp Leu Asp Cys
1 5 10
<210> 155
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 155
Cys Ile Trp Asp Trp Lys Tyr Asp Cys Trp Leu Gly Cys
1 5 10
<210> 156
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 156
Cys Ser Leu Asp Pro Trp Ser Cys His Asn Trp Trp Thr Cys
1 5 10
<210> 157
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 157
Cys Ala Leu Asp Pro Trp Val Cys Pro Gln Trp Trp Asp Cys
1 5 10
<210> 158
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 158
Cys Gln Glu His Asp Trp Tyr Cys Leu Leu Tyr Gln Pro Glu Cys
1 5 10 15
<210> 159
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 159
Cys Asp Glu Leu Asp Ile Pro Cys Trp Ile Phe Lys Thr Leu Cys
1 5 10 15
<210> 160
<400> 160
000
<210> 161
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是modG
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是modG
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 161
Cys Gln Xaa Xaa Glu Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 162
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是modG
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是modG
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 162
Cys Gln Xaa Xaa Gln Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 163
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> Xaa
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是NMeA
<220>
<221> Xaa
<222> (3)..(3)
<223> Xaa是modG
<220>
<221> Xaa
<222> (4)..(4)
<223> Xaa是tBuA
<220>
<221> Xaa
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是TrpMe
<220>
<221> Xaa
<222> (9)..(9)
<223> Xaa是modG
<220>
<221> Xaa
<222> (11)..(11)
<223> Xaa是4-FPhe
<400> 163
Cys Xaa Xaa Xaa Gln Asp Cys Xaa Xaa Gly Xaa Cys
1 5 10
<210> 164
<211> 183
<212> PRT
<213> 人
<400> 164
Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala
1 5 10 15
His Asn His Asn His Asn His Asn His Asn His Asn Ala Ala Glu Asn
20 25 30
Leu Tyr Phe Gln Tyr Asp Phe Thr Asn Cys Asp Phe Glu Lys Ile Lys
35 40 45
Ala Ala Tyr Leu Ser Thr Ile Ser Lys Asp Leu Ile Thr Tyr Met Ser
50 55 60
Gly Thr Lys Ser Thr Glu Phe Asn Asn Thr Val Ser Cys Ser Asn Arg
65 70 75 80
Pro His Cys Leu Thr Glu Ile Gln Ser Leu Thr Phe Asn Pro Thr Ala
85 90 95
Gly Cys Ala Ser Leu Ala Lys Glu Met Phe Ala Met Lys Thr Lys Ala
100 105 110
Ala Leu Ala Ile Trp Cys Pro Gly Tyr Ser Glu Thr Gln Ile Asn Ala
115 120 125
Thr Gln Ala Met Lys Lys Arg Arg Lys Arg Lys Val Thr Thr Asn Lys
130 135 140
Cys Leu Glu Gln Val Ser Gln Leu Gln Gly Leu Trp Arg Arg Phe Asn
145 150 155 160
Arg Pro Leu Leu Lys Gln Gln Gln Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala
165 170 175
Gln Lys Ile Glu Trp His Glu
180
<210> 165
<211> 247
<212> PRT
<213> 人
<400> 165
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly His Asn His Asn His Asn His Asn His Asn His Asn
20 25 30
Ala Ala Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Ala Ala Glu Gly Val Gln Ile
35 40 45
Gln Ile Ile Tyr Phe Asn Leu Glu Thr Val Gln Val Thr Trp Asn Ala
50 55 60
Ser Lys Tyr Ser Arg Thr Asn Leu Thr Phe His Tyr Arg Phe Asn Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Tyr Asp Gln Cys Thr Asn Tyr Leu Leu Gln Glu Gly His
85 90 95
Thr Ser Gly Cys Leu Leu Asp Ala Glu Gln Arg Asp Asp Ile Leu Tyr
100 105 110
Phe Ser Ile Arg Asn Gly Thr His Pro Val Phe Thr Ala Ser Arg Trp
115 120 125
Met Val Tyr Tyr Leu Lys Pro Ser Ser Pro Lys His Val Arg Phe Ser
130 135 140
Trp His Gln Asp Ala Val Thr Val Thr Cys Ser Asp Leu Ser Tyr Gly
145 150 155 160
Asp Leu Leu Tyr Glu Val Gln Tyr Arg Ser Pro Phe Asp Thr Glu Trp
165 170 175
Gln Ser Lys Gln Glu Asn Thr Cys Asn Val Thr Ile Glu Gly Leu Asp
180 185 190
Ala Glu Lys Cys Tyr Ser Phe Trp Val Arg Val Lys Ala Met Glu Asp
195 200 205
Val Tyr Gly Pro Asp Thr Tyr Pro Ser Asp Trp Ser Glu Val Thr Cys
210 215 220
Trp Gln Arg Gly Glu Ile Arg Asp Ala Cys Ala Glu Thr Pro Thr Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Leu Ser Lys
245

Claims (22)

1.一种TSLP特异性的肽配体，所述肽配体包含多肽和分子支架，所述多肽包含被至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，并且所述分子支架与所述多肽的半胱氨酸残基形成共价键，使得在所述分子支架上形成至少两个多肽环。
2.根据权利要求1所限定的肽配体，其中所述环序列包含3、4、5、6或7个氨基酸。
3.根据权利要求1或权利要求2所限定的肽配体，其中所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由5个氨基酸组成，第二环序列由4个氨基酸组成。
4.根据权利要求3所限定的肽配体，其中所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由5个氨基酸组成，第二环序列由4个氨基酸组成，所述肽配体包含以下的氨基酸序列：
CQ[TrpMe][tBuA]QDC[TrpMe][ADMA]G[4F3CIPhe]C(SEQ ID NO：1)；
CQ[TrpMe][tBuA]QDC[TrpMe]ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：2)；
CQ[TrpMe][tBuA]EDC[TrpMe][ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：3)；
CQW[tBuA]EDCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：4)；
C[AMe][TrpMe][tBuA]Q[MeD]C[TrpMe][ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：5)；
CQWLEDCWRG[4F3CIPhe]C(SEQ ID NO：6)；
C[AMe][TrpMe][tBuA]QDC[TrpMe][LysMe3]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：7)；
CQWLQDCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：8)；
CQWLEDCWRG[3，4diCIPhe]C(SEQ ID NO：9)；
Figure FDA0003966615310000011
(SEQ ID NO：10)；
CQ[TrpMe]LEDC[TrpMe][ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：11)；
CQWLEDCWRG[4-CIPhe]C(SEQ ID NO：12)；
C[AMe][TrpMe][tBuA]QDC[TrpMe][ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：13)；
CQ[TrpMe]LEDC[TrpMe]RG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：14)；
CQWLEDCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：15)；
C[AMe][TrpMe][tBuA]QDC[TrpMe][ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：16)；
CHWLEDCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：17)；
CQWLQDCW[ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：18)；
CQ[5FTrp]LEDC[5FTrp]RG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：19)；
CQWLEDCWRG[3，4diFPhe]C(SEQ ID NO：20)；
CQWLENCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：21)：
C[AMe][TrpMe][tBuA]QDC[TrpMe][AcK]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：22)；
C[AMe][Nal1][tBuA]QDC[TrpMe][ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：23)；
CQWLEDCWRG[4-BrPhe]C(SEQ ID NO：24)；
CQ[Nal1]LEDCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：25)；
CWWLQDCW[ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：26)；
C[AMe]WLEDCW[ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：27)；
CQW[iPrMeA]EDCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：28)；
CQWLEDCWRG[3-CIPhe]C(SEQ ID NO：29)；
C[AMe][TrpMe][tBuA]QDC[TrpMe][NeopentA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：30)；
C[AMe][TrpMe][tBuA]QDC[TrpMe][Cha]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：31)；
C[AMe][Nal1]LQDC[TrpMe][ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：32)；
CQWLEDCWRG[3，4，5triFPhe]C(SEQ ID NO：33)；
CQ[Nal1]LEDCW[ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：34)；
CQWLFDCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：35)；
C[AMe][TrpMe][tBuA]QDC[5FTrp]RG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：36)；
CQWLEDCWRG[3-F，4-CIPhe]C(SEQ ID NO：37)；
CQWLEDCWRGFC(SEQ ID NO：38)；
CQW[tBuA]EDCWRGFC(SEQ ID NO：39)；
C[AMe][TrpMe][tBuA]QDC[TrpMe][BnA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：40)；
CQWLEDCWRG[Nal1]C(SEQ ID NO：41)；
CQWLEDCWRG[Nal2]C(SEQ ID NO：42)；
CQWMEDCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：43)；
C[AMe][TrpMe][tBuA][Aib]DC[TrpMe][ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：44)；
CQWIEDCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：45)；
CQWLEDCWRG[3，5diF，4CIPhe]C(SEQ ID NO：46)；
CQWLEDC[4-CINal]RG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：47)；
CA[Nal1]LEDCW[Harg]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：48)；
CTWLEDCWRGFC(SEQ ID NO：49)；
CQW[CpentA]EDCWRGFC(SEQ ID NO：50)v
CAWLEDC[Nal1]RG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：51)；
CQWLEDCW[4-PipA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：52)；
C[AMe][TrpMe][tBuA]QDC[rrpMe][ADMA]G[4-CINal]C(SEQ ID NO：53)；
CVWLDDCWRGFC(SEQ ID NO：54)；
CQWLEDCWRG[3-MePhe]C(SEQ ID NO：55)；
CHWLEDCWRGFC(SEQ ID NO：56)；
CTWLDDCWRGFC(SEQ ID NO：57)；
CQWLEDCWRG[4-CF3Phe]C(SEQ ID NO：58)；
CQWLEDCWRa[4-FPhe]C(SEQ ID NO：59)；
CQW[CproA]EDCWRGFC(SEQ ID NO：60)；
CQWLEDCW[TriMeK]GFC(SEQ ID NO：61)；
CQWLEDCW[ADMA]GFC(SEQ ID NO：62)；
CQW[Cha]EDCWRGFC(SEQ ID NO：63)；
CHWLENCWRGFC(SEQ ID NO：64)；
CLWLDDCWRGFC(SEQ ID NO：65)；
C[AMe][TrpMe[tBuA]QDC[TrpMe][ADMA]G[3AcNH4CIPhe]C(SEQ ID NO：66)；
CTWLEDCWHGFC(SEQ ID NO：67)；
CQW[Nva]EDCWRGFC(SEQ ID NO：68)；
CQWLEDCWRG[3-FPhe]C(SEQ ID NO：69)；
CQWLEDCWRG[4-MePhe]C(SEQ ID NO：70)；
CQW[ChMeA]EDCWRGFC(SEQ ID NO：71)；
CHWLDDCWRGFC(SEQ ID NO：72)；
CDWLDDCWRGFC(SEQ ID NO：73)；
CDWLEDCWRGFC(SEQ ID NO：74)；
CEWLEDCWRGFC(SEQ ID NO：75)；
CQWLEDCW[Cit]GFC(SEQ ID NO：76)；
CQWL[3-CIPhe]DCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：77)；
CAWLTDCWRGFC(SEQ ID NO：78)；
CQWLEDC[7-OMeTrp]RG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：79)；
CQW[Nle]EDCWRGFC(SEQ ID NO：80)；
CQWLEDCWRG[2-FPhe]C(SEQ ID NO：81)；
CQW[TriFMeA]EDCWRGFC(SEQ ID NO：82)；
CQWLEDCW[HArg]GFC(SEQ ID NO：83)；
CQWLEDCWRG[Cha]C(SEQ ID NO：84)；
CA[Nal1]LEDC[Nal1][HArg]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：85)；
CRWLDDCWQGFC(SEQ ID NO：86)；
CQWLQDCFRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：87)；
CQWLEDCWRG[4-CNPhe]C(SEQ ID NO：88)；
CNWLEDCWHGFC(SEQ ID NO：89)；
C[dA]WLEDCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：90)；
CQWLEDCWRG[3-CNPhe]C(SEQ ID NO：91)；
CQWLEDCW[Can]GFC(SEQ ID NO：92)；
CQWLEDCWRG[3-ThienylA]C(SEQ ID NO：93)；
CQWLEDCW[Agb]GFC(SEQ ID NO：94)；
C[dA]WLEDCW[ADMA]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：95)；
CQWLEDCWRG[2ThienylA]C(SEQ ID NO：96)；
CEWLEDCWKGFC(SEQ ID NO：97)；
CFWLEDCWRGYC(SEQ ID NO：98)；
CQWLEDCWRGWC(SEQ ID NO：99)；
CDWLDDCWKGFC(SEQ ID NO：100)；
CQWLEDCWRG[4-MeOPhe]C(SEQ ID NO：101)；
CQWLEDCWRG[3-BrPhe]C(SEQ ID NO：102)；
CWWL[3-CIPhe]DCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：103)；
CQ[ButG]LEDCW[ButG]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：104)；
CQWLEDCWRG[2PyrA]C(SEQ ID NO：105)；
CQW[M(O)]EDCWRGFC(SEQ ID NO：106)；
CQWLEDCWRG[BnA]C(SEQ ID NO：107)；
CQWLEDCWAGFC(SEQ ID NO：108)；
CTILEDCWMGFC(SEQ ID NO：109)；
CQW[Abu]EDCWRGFC(SEQ ID NO：110)；
CHWLENCWAGFC(SEQ ID NO：111)；
CQWLEDCWRG[PentFPhe]C(SEQ ID NO：112)；
CQW[LMe]EDCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：113)；
CQWLEDCW[Dap]GFC(SEQ ID NO：114)；
CQWLEDCWRG[4-PyrA]C(SEQ ID NO：115)；
CQWLEDCWRG[3-PyrA]C(SEQ ID NO：116)；
CHWLENCW[Dap]GFC(SEQ ID NO：117)；和
CQW[4-MenL]EDCWRG[4-FPhe]C(SEQ ID NO：118)；
或其药学上可接受的盐，
如：
Ac-(SEQ ID NO：1)(下文称为示例1)；
Ac-(SEQ ID NO：2)(下文称为示例2)；
Ac-(SEQ ID NO：3)(下文称为示例3)；
tertBuCO-(SEQ ID NO：3)(下文称为示例6)；
R1-(SEQ ID NO：3)(下文称为示例7)；
Ac-(SEQ ID NO：4)(下文称为示例4)；
Ac-(SEQ ID NO：5)(下文称为示例5)；
Ac-(SEQ ID NO：6)(下文称为示例8)；
Ac-(SEQ ID NO：7)(下文称为示例9)；
Ac-(SEQ ID NO：8)(下文称为示例10)；
Ac-(SEQ ID NO：9)(下文称为示例11)；
Ac-(SEQ ID NO：10)(下文称为示例12)；
Ac-(SEQ ID NO：11)(下文称为示例13)；
Ac-(SEQ ID NO：12)(下文称为示例14)；
辛酰基-(SEQ ID NO：13)(下文称为示例15)；
Ac-(SEQ ID NO：14)(下文称为示例16)；
Ac-(SEQ ID NO：15)(下文称为示例17)；
Ac-(SEQ ID NO：15)-[dA](下文称为示例33)；
(SEQ ID NO：15)-COOH(下文称为示例48)；
Ac-(SEQ ID NO：16)(下文称为示例18)；
Ac-(SEQ ID NO：17)(下文称为示例19)；
Ac-(SEQ ID NO：18)(下文称为示例20)；
Ac-(SEQ ID NO：19)(下文称为示例21)；
Ac-(SEQ ID NO：20)(下文称为示例22)；
Ac-(SEQ ID NO：21)(下文称为示例23)；
Ac-(SEQ ID NO：22)(下文称为示例24)；
(SEQ ID NO:23)(下文称为示例252)；
Ac-(SEQ ID NO:23)(下文称为示例25)；
Ac-(SEQ ID NO:23)-[dA](下文称为示例29)；
Ac-(SEQ ID NO:24)(下文称为示例26)；
Ac-(SEQ ID NO:25)(下文称为示例27)；
Ac-(SEQ ID NO:26)(下文称为示例28)；
Ac-(SEQ ID NO:27)(下文称为示例30)；
Ac-(SEQ ID NO:28)(下文称为示例31)；
Ac-(SEQ ID NO:29)(下文称为示例32)；
Ac-(SEQ ID NO:30)(下文称为示例34)；
Ac-(SEQ ID NO:31)(下文称为示例35)；
Ac-(SEQ ID NO:32)(下文称为示例36)；
Ac-(SEQ ID NO:33)(下文称为示例37)；
Ac-(SEQ ID NO:34)(下文称为示例38)；
Ac-(SEQ ID NO:34)-[dA](下文称为示例49)；
Ac-(SEQ ID NO:34)-COOH(下文称为示例69)；
Ac-(SEQ ID NO:35)(下文称为示例43)；
Ac-(SEQ ID NO:35)-COOH(下文称为示例39)；
Ac-(SEQ ID NO:36)(下文称为示例40)；
Ac-(SEQ ID NO:37)(下文称为示例41)；
A-(SEQ ID NO:38)-ADGDML(下文称为示例42)；
GTDSAE-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例45)；
Ac-A-(SEQ ID NO:38)-PLD(下文称为示例53)；
Ac-(SEQ ID NO:38)-APDERD(下文称为示例54)；
A-(SEQ ID NO:38)-DDAHAP(下文称为示例55)；
TMEYRD-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例56)；
A-(SEQ ID NO:38)-SSSDQS(下文称为示例59)；
SDEQRT-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例61)；
DDEIMQ-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例64)；
RTDETG-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例67)；
A-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例68)；
ETNNLE-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例71)；
Ac-(SEQ ID NO:38)(下文称为示例79)；
DPPKPR-(SEQ ID NO:38)-A(下文称为示例87)；
(SEQ ID NO:38)-DTSTHS(下文称为示例128)；
Ac-(SEQ ID NO:39)(下文称为示例44)；
Ac-(SEQ ID NO:40)(下文称为示例46)；
Ac-(SEQ ID NO:41)(下文称为示例47)；
Ac-(SEQ ID NO:42)(下文称为示例50)；
Ac-(SEQ ID NO:43)(下文称为示例51)；
Ac-(SEQ ID NO:44)(下文称为示例52)；
Ac-(SEQ ID NO:45)(下文称为示例57)；
Ac-(SEQ ID NO:46)(下文称为示例58)；
Ac-(SEQ ID NO:47)(下文称为示例60)；
Ac-(SEQ ID NO:48)(下文称为示例62)；
A-(SEQ ID NO:49)-ADS(下文称为示例63)；
Ac-(SEQ ID NO:50)(下文称为示例65)；
Ac-(SEQ ID NO:51)(下文称为示例66)；
Ac-(SEQ ID NO:52)(下文称为示例70)；
Ac-(SEQ ID NO:53)(下文称为示例72)；
SPP-(SEQ ID NO:54)-A(下文称为示例73)；
Ac-(SEQ ID NO:55)(下文称为示例74)；
A-(SEQ ID NO:56)-HLE(下文称为示例75)；
A-(SEQ ID NO:57)-A(下文称为示例76)；
Ac-(SEQ ID NO:58)(下文称为示例77)；
Ac-(SEQ ID NO:59)(下文称为示例78)；
Ac-(SEQ ID NO:60)(下文称为示例80)；
Ac-(SEQ ID NO:61)(下文称为示例81)；
Ac-(SEQ ID NO:62)(下文称为示例82)；
Ac-(SEQ ID NO:63)(下文称为示例83)；
tertBuCO-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例84)；
R1-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例89)；
R2-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例95)；
苄基-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例93)；
Ac-(SEQ ID NO:64)-[N-苯乙酰胺](下文称为示例96)；
R3-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例99)；
R4-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例103)；
Ac-(SEQ ID NO:64)-[N-苄基酰胺](下文称为示例109)；
A-(SEQ ID NO:64)-A(下文称为示例115)；
苯甲酰基-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例116)；
Ac-(SEQ ID NO:64)-R5(下文称为示例120)；
琥珀酰基-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例121)；
Ac-(SEQ ID NO:64)-[N-辛基酰胺](下文称为示例122)；
Ac-(SEQ ID NO:64)-[N-戊基酰胺](下文称为示例123)；
Ac-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例124)；
Ac-(SEQ ID NO:64)-R6(下文称为示例127)；
(SEQ ID NO:64)(下文称为示例129)；
癸酰基-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例137)；
己酰基-(SEQ ID NO:64)(下文称为示例139)；
SPT-(SEQ ID NO:65)-A(下文称为示例85)；
Ac-(SEQ ID NO:66)(下文称为示例86)；
TIK-(SEQ ID NO:67)-A(下文称为示例88)；
Ac-(SEQ ID NO:68)(下文称为示例90)；
Ac-(SEQ ID NO:69)(下文称为示例91)；
Ac-(SEQ ID NO:70)(下文称为示例92)；
Ac-(SEQ ID NO:71)(下文称为示例94)；
DNH-(SEQ ID NO:72)-A(下文称为示例97)；
HPN-(SEQ ID NO:73)-A(下文称为示例98)；
Ac-(SEQ ID NO:74)-TTS(下文称为示例100)；
A-(SEQ ID NO:75)-A(下文称为示例101)；
(SEQ ID NO:76)(下文称为示例102)；
Ac-(SEQ ID NO:76)(下文称为示例104)；
Ac-(SEQ ID NO:77)(下文称为示例105)；
DQD-(SEQ ID NO:78)-A(下文称为示例106)；
Ac-(SEQ ID NO:79)(下文称为示例107)；
Ac-(SEQ ID NO:80)(下文称为示例108)；
Ac-(SEQ ID NO:81)(下文称为示例110)；
Ac-(SEQ ID NO:82)(下文称为示例111)；
Ac-(SEQ ID NO:83)(下文称为示例112)；
Ac-(SEQ ID NO:84)(下文称为示例113)；
Ac-(SEQ ID NO:85)(下文称为示例114)；
REN-(SEQ ID NO:86)-A(下文称为示例117)；
Ac-(SEQ ID NO:87)(下文称为示例118)；
Ac-(SEQ ID NO:88)(下文称为示例119)；
A-(SEQ ID NO:89)-HEE(下文称为示例125)；
Ac-(SEQ ID NO:90)(下文称为示例126)；
Ac-(SEQ ID NO:91)(下文称为示例130)；
Ac-(SEQ ID NO:92)(下文称为示例131)；
Ac-(SEQ ID NO:93)(下文称为示例132)；
Ac-(SEQ ID NO:94)(下文称为示例133)；
Ac-(SEQ ID NO:95)(下文称为示例134)；
Ac-(SEQ ID NO:96)(下文称为示例135)；
A-(SEQ ID NO:97)-HSE(下文称为示例136)；
A-(SEQ ID NO:98)-ETA(下文称为示例138)；
Ac-(SEQ ID NO:99)(下文称为示例140)；
A-(SEQ ID NO:100)-A(下文称为示例141)；
Ac-(SEQ ID NO:101)(下文称为示例142)；
Ac-(SEQ ID NO:102)(下文称为示例143)；
Ac-(SEQ ID NO:103)(下文称为示例144)；
Ac-(SEQ ID NO:104)(下文称为示例145)；
Ac-(SEQ ID NO:105)(下文称为示例146)；
Ac-(SEQ ID NO:106)(下文称为示例147)；
Ac-(SEQ ID NO:107)(下文称为示例148)；
Ac-(SEQ ID NO:108)(下文称为示例149)；
A-(SEQ ID NO:109)-A(下文称为示例150)；
Ac-(SEQ ID NO:110)(下文称为示例151)；
Ac-(SEQ ID NO:111)(下文称为示例152)；
Ac-(SEQ ID NO:112)(下文称为示例153)；
Ac-(SEQ ID NO:113)(下文称为示例154)；
Ac-(SEQ ID NO:114)(下文称为示例155)；
(SEQ ID NO:114)(下文称为示例156)；
Ac-(SEQ ID NO:115)(下文称为示例157)；
Ac-(SEQ ID NO:116)(下文称为示例158)；
Ac-(SEQ ID NO:117)(下文称为示例159)；和
Ac-(SEQ ID NO:118)(下文称为示例160)；
其中Ac代表乙酰基，tertBuCO代表
Figure FDA0003966615310000101
R1代表：
Figure FDA0003966615310000102
R2代表：
Figure FDA0003966615310000111
R3代表：
Figure FDA0003966615310000112
R4代表：
Figure FDA0003966615310000113
R5代表：
Figure FDA0003966615310000114
以及
R6代表：
Figure FDA0003966615310000115
或其药学上可接受的盐。
5.根据权利要求1或权利要求2所限定的肽配体，其中所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由7个氨基酸组成，第二环序列由5个氨基酸组成。
6.根据权利要求5所限定的肽配体，其中所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由7个氨基酸组成，第二环序列由5个氨基酸组成，并且所述肽配体包含以下的氨基酸序列：
CESLDPWSCPVWWRC(SEQ ID NO：119)；
CPSLDPWTCQSWYEC(SEQ ID NO：120)；
CTELDPWTCETWWLC(SEQ ID NO：121)；
CRDLDPWTCSSWWLC(SEQ ID NO：122)；
CADLDPWTCPNWWLC(SEQ ID NO：123)；
CVDLDPWTCEQWWLC(SEQ ID NO：124)；
CKDLDPWTCSSWWEC(SEQ ID NO：125)；
CRDLDPWTCPTWWTC(SEQ ID NO：126)；
CTDLDPWTCNSWWLC(SEQ ID NO：127)；
CRDLDPWTCEEWWLC(SEQ ID NO：128)；
CRELDPWTCETWWLC(SEQ ID NO：129)；
CKELDPWWTCETWWLC(SEQ ID NO：130)；
C[Orn]ELDPWTCETWWLC(SEQ ID NO：131)；
CQELDPWTCETWWLC(SEQ ID NO：132)；
CTELD[diF-P]WTCETWWLC(SEQ ID NO：133)；
CVDLDPWSCEDWWLC(SEQ ID NO：134)；
CPDLDPWTCPLWWTC(SEQ ID NO：135)；
CPDLDPWTCSDWWLC(SEQ ID NO：136)；
CRDLDPWTCDSWWLC(SEQ ID NO：137)；
CTDLDPWTCPDWWLC(SEQ ID NO：138)；
CTELD[5-Ph-P]WTCETWWLC(SEQ ID NO：139)；和
CTELD[Chx-P]WTCETWWLC(SEQ ID NO：140)；
或其药学上可接受的盐，
如
A-(SEQ ID NO：119)-A(下文称为示例161)；
A-(SEQ ID NO：120)-A(下文称为示例162)；
A-(SEQ ID NO：121)-A(下文称为示例163)；
(SEQ ID NO：121)(下文称为示例185)；
A-(SEQ ID NO：122)-A(下文称为示例164)；
YATTQV-(SEQ ID NO：122)-A(下文称为示例171)；
KDNRVD-(SEQ ID NO：122)-A(下文称为示例172)；
EYQRDV-(SEQ ID NO：122)-A(下文称为示例173)；
A-(SEQ ID NO：122)-SNSYDMA(下文称为示例174)；
A-(SEQ ID NO：122)-SESVHTA(下文称为示例175)；
A-(SEQ ID NO：122)-SSDTTDA(下文称为示例176)；
A-(SEQ ID NO：122)-KPDHVDA(下文称为示例177)；
A-(SEQ ID NO：122)-ANV(下文称为示例186)；
RVNTHQ-(SEQ ID NO：122)-A(下文称为示例190)；
YDRDFT-(SEQ ID NO：122)-A(下文称为示例191)；
EVDTYP-(SEQ ID NO：122)-A(下文称为示例192)；
A-(SEQ ID NO：122)-ADGLYDA(下文称为示例193)；
AHP-(SEQ ID NO：123)-A(下文称为示例165)；
YGA-(SEQ ID NO：124)-A(下文称为示例166)；
A-(SEQ ID NO：125)-APN(下文称为示例167)；
A-(SEQ ID NO：126)-YDE(下文称为示例168)；
A-(SEQ ID NO：127)-AGD(下文称为示例169)；
A-(SEQ ID NO：128)-AHP(下文称为示例170)；
(SEQ ID NO：129)(下文称为示例178)；
(SEQ ID NO：130)(下文称为示例179)；
(SEQ ID NO：131)(下文称为示例180)；
(SEQ ID NO：132)(下文称为示例181)；
(SEQ ID NO：133)(下文称为示例182)；
A-(SEQ ID NO：134)-A(下文称为示例183)；
A-(SEQ ID NO：135)-A(下文称为示例184)；
RAP-(SEQ ID NO：136)-A(下文称为示例187)；
SHV-(SEQ ID NO：137)-A(下文称为示例188)；
RDL-(SEQ ID NO：138)-A(下文称为示例189)；
(SEQ ID NO：139)(下文称为示例194)；和
(SEQ ID NO：140)(下文称为示例195)；
或其药学上可接受的盐。
7.根据权利要求1或权利要求2所限定的肽配体，其中所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由7个氨基酸组成，第二环序列由3个氨基酸组成。
8.根据权利要求7所限定的肽配体，其中所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由7个氨基酸组成，第二环序列由3个氨基酸组成，所述肽配体包含以下的氨基酸序列：
CDWQWSYDCWLPC(SEQ ID NO：141)；
CDWVWEYDCWLPC(SEQ ID NO：142)；
CDWDWEYDCWLHC(SEQ ID NO：143)；
CDWHWEYDCWLSC(SEQ ID NO：144)；
CTWNWEYDCWLDC(SEQ ID NO：145)；
CEWNWAYDCWLGC(SEQ ID NO：146)；
CEWNWEYDCWLDC(SEQ ID NO：147)；
CQWNWTYDCWLGC(SEQ ID NO：148)；
CKWWEYDCWLSC(SEQ ID NO：149)；
CDWQWEYDCWLSC(SEQ ID NO：150)；
CDWNWTYDCWLDC(SEQ ID NO：151)；
CDWNWSYDCWLPC(SEQ ID NO：152)；
CDWDWDYDCWLPC(SEQ ID NO：153)；
CVWHWEYDCWLDC(SEQ ID NO：154)；和
CIWDWKYDCWLGC(SEQ ID NO：155)；
或其药学上可接受的盐，
如
A-(SEQ ID NO：141)-A(下文称为示例196)；
A-(SEQ ID NO：142)-A(下文称为示例197)；
A-(SEQ ID NO：143)-A(下文称为示例198)；
A-(SEQ ID NO：144)-A(下文称为示例199)；
DEQHHE-(SEQ ID NO：144)-A(下文称为示例209)；
SNATKQ-(SEQ ID NO：144)-A(下文称为示例210)；
GNIKKS-(SEQ ID NO：144)-A(下文称为示例211)；
A-(SEQ ID NO：144)-DPSSKQA(下文称为示例212)；
A-(SEQ ID NO：144)-YDNEMSA(下文称为示例213)；
SEAQET-(SEQ ID NO：144)(下文称为示例214)；
SPTEPP-(SEQ ID NO：144)(下文称为示例215)；
(SEQ ID NO：144)-EPETGQ(下文称为示例216)；
NRSPSE-(SEQ ID NO：144)(下文称为示例217)；
Ac-(SEQ ID NO：144)(下文称为示例218)；
R7-(SEQ ID NO：144)(下文称为示例219)；
A-(SEQ ID NO：144)-EPETGQA(下文称为示例221)；
(SEQ ID NO：144)-GDMSVS(下文称为示例222)；
(SEQ ID NO：144)-YDNEMS(下文称为示例223)；
(SEQ ID NO：144)-APDHLP(下文称为示例224)；
(SEQ ID NO：144)-DPSSKQ(下文称为示例226)；
(SEQ ID NO：144)-ANSEFE(下文称为示例227)；
(SEQ ID NO：144)-GAGESS(下文称为示例228)；
DHD-(SEQ ID NO：145)-A(下文称为示例200)；
ADG-(SEQ ID NO：146)-A(下文称为示例201)；
TLP-(SEQ ID NO：147)-A(下文称为示例202)；
SQE-(SEQ ID NO：148)-A(下文称为示例203)；
AET-(SEQ ID NO：149)-A(下文称为示例204)；
A-(SEQ ID NO：150)-DPN(下文称为示例205)；
A-(SEQ ID NO：151)-API(下文称为示例206)；
A-(SEQ ID NO：152)-ANT(下文称为示例207)；
A-(SEQ ID NO：153)-FAE(下文称为示例208)；
AND-(SEQ ID NO：154)-A(下文称为示例220)；和
ERN-(SEQ ID NO：155)-A(下文称为示例225)；
其中R7表示
Figure FDA0003966615310000151
或其药学上可接受的盐。
9.根据权利要求1或权利要求2所限定的肽配体，其中1个所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列的第一环序列由6个氨基酸组成，第二环序列由5个氨基酸组成。
10.根据权利要求9所限定的肽配体，其中所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由6个氨基酸组成，第二环序列由5个氨基酸组成，所述肽配体包含以下的氨基酸序列：
CSLDPWSCHNWWTC(SEQ ID NO：156)；和
CALDPWVCPQWWDC(SEQ ID NO：1 57)；
或其药学上可接受的盐，
如
A-(SEQ ID NO：156)-A(下文称为示例229)；和
A-(SEQ ID NO：157)-A(下文称为示例230)；
或其药学上可接受的盐。
11.根据权利要求1或权利要求2所限定的肽配体，其中所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由6个氨基酸组成，第二环序列由6个氨基酸组成。
12.根据权利要求11所限定的肽配体，其中在一个实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由6个氨基酸组成，第二环序列由6个氨基酸组成，所述肽配体包含以下的氨基酸序列：
CQEHDWYCLLYQPEC(SEQ ID NO：158)；和
CDELDIPCWIFKTLC(SEQ ID NO：159)；
或其药学上可接受的盐，
如
A-(SEQ ID NO：158)-A(下文称为示例231)；和
A-(SEQ ID NO：159)-A(下文称为示例232)；
或其药学上可接受的盐。
13.根据权利要求1至12中任一项所限定的肽配体，其中所述肽配体包含由两个修饰的氨基酸残基连接形成的额外的环，如由接头部分隔开的两个修饰的甘氨酸残基(在本文称为modG)，所述接头部分选自-(CH2)2-10-接头(如-(CH2)3-9-接头)，任选地并入双键或三嗪基环(如1，2，3三嗪基环)，特别地所述两个modG残基之间的所述接头选自：
-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-CH2-；
-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-；
-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-；
-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-；
-CH2-CH2-CH2＝CH-CH-CH2-CH2-；
-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-；
-CH2-CH2-CH2＝CH-CH-CH2-；
-CH2-CH＝CH-；
-CH2-CH＝CH-；和
Figure FDA0003966615310000161
14.根据权利要求13所限定的肽配体，其中所述肽配体选自：
CQ[modG]LEDCW[modG]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：160)；
CQ[modG][tBuA]EDC[TrpMe][modG]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：161)；
CQ[modG][tBuA]QDC[TrpMe][modG]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：162)；和
C[NMeA][modG][tBuA]QDC[TrpMe][modG]G[4-FPhe]C(SEQ ID NO：163)；
或其药学上可接受的盐，
如示例233至249。
15.根据权利要求1至14中任一项所限定的肽配体，其中所述肽配体包含含有至少两个(如三个)双环肽配体的多聚体结合复合物，其中所述肽配体可以相同或可以不同，每一个所述肽配体包含多肽和分子支架，所述多肽包含被至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，所述分子支架与所述多肽的反应性基团形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环。
16.根据权利要求15所限定的肽配体，其中所述多聚体结合复合物包含三聚体部分(即三个双环肽，如三个相同的双环肽)，特别是选自示例250和251的三聚体部分。
17.根据权利要求1至16中任一项所限定的肽配体，其中所述分子支架选自1，1′，1″-(1，3，5-三嗪-1，3，5-三基)三丙基-2-烯-1-酮(TATA)。
18.根据权利要求1至17中任一项所限定的肽配体，其中所述药学上可接受的盐选自游离酸或钠盐、钾盐、钙盐、铵盐。
19.一种药物组合物，其包含权利要求1至18中任一项的肽配体与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。
20.根据权利要求1至18中任一项所限定的肽配体或权利要求19中所限定的药物组合物，用于预防、抑制或治疗由TSLP介导的疾病或病症。
21.用于根据权利要求20所限定的用途的肽配体或药物组合物，其中所述TSLP是哺乳动物TSLP，如人TSLP。
22.用于权利要求20或权利要求21所限定的用途的肽配体或药物组合物，其中所述由TSLP介导的疾病或病症选自：呼吸系统病症、炎性病症、皮肤病症和过敏性病症，如哮喘、炎性关节炎、特应性皮炎、湿疹和嗜酸性食管炎，特别是哮喘。
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