CN115747340A - 一种用于检测人slco1b1基因分型的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种可用于检测人SLCO1B1基因分型的引物组及检测方法。提供的引物组可对SLCO1B1基因388A>G、521T>C位点的多态性进行检测，确定SLCO1B1基因分型。本发明对PCR‑LDR‑qPCR检测方法进行进一步优化，将第一步PCR方法替换为实验室优化的快速高效重组酶聚合酶扩增(RPA)技术，建立可用于SLCO1B1基因多态性检测的RPA‑LDR‑qPCR技术，为临床检测相关单碱基突变提供一种新的快速、高效、特异性的分子诊断方法。
Description
技术领域
本发明涉及基因多态性检测技术领域，具体涉及一种用于检测人SLCO1B1基因分型的方法。
背景技术
他汀类药物是目前临床使用最广、最有效的的降脂药，是治疗心脑血管疾病的基础用药，2016《中国成人血脂异常防治指南》给出了中国人群不同种类他汀类药物降胆固醇强度。多数人对他汀的耐受性良好，但部分患者SLCO1B1基因发生相关位点突变，则有可能表现出肌肉及肝功能异常等不良反应，如横纹肌溶解、肌肉疼痛等，这部分患者则无法接受大剂量他汀治疗。SLCO1B1基因多态性是他汀类药物毒副作用的独立决定因素。SLCO1B1基因定位于人类12号染色体上，参与编码肝脏细胞表面摄取他汀类药物的载体即有机阴离子转运多肽(organic anion transporting polypeptide 1B1,OATP1B1)。OATP1B1参与多种药物转运，在他汀类药物代谢中负责将血液中的药物转移至肝脏直接发挥药效或者转化为有活性的物质。
SLCO1B1基因主要存在两种单核苷酸多态性，分别为388A>G、521T>C，可形成4种基因型，包括SLCO1B1*1b(388G-521T)，SLCO1B1*15(388G-521C)，SLCO1B1*5(388A-521C)，SLCO1B1*1a(388A-521T)。SLCO1B1基因突变引起编码的转运蛋白活力减弱，肝脏摄取药物能力降低，他汀类药物血药浓度上升，增加横纹肌溶解症或肌病的发生风险。SLCO1B1*1b、*5、*15是常见的基因突变类型，其中*5、*15是他汀类药物主要不良反应“横纹肌溶解症”的独立决定因子。该突变基因携带者相比未突变者发生肌毒性的风险增加约20倍。服用他汀类药物前对SLCO1B1基因进行检测对发生肌毒性的预测和预防具有重要意义。
目前常用的检测基因多态性的方法有DNA直接测序法、限制性片段长度多态性分析法(PCR-PFLP)、高分辨率溶解曲线(HRM)、基因芯片、液相芯片法、荧光定量PCR法等。测序技术是公认的检测基因突变的金标准，但其设备成本高、检测周期长、检测通量低、检测灵敏度低、对实验人员的技术操作要求高、结果判定步骤繁琐等原因，较难形成商业化的诊断产品；限制性片段长度多态性分析法检测灵敏度同样不高、操作步骤繁琐，检测的结果仍需要进行一代测序法的再次验证，尤其当样本量多时极易造成PCR产物的交叉污染且容易出现酶切不充分或酶切过度而出现假阴性或假阳性结果，因此也无法应用到临床上。芯片检测因其检测结果的准确性和重复性较差，实验周期长等缺点，也不适于开发临床检测试剂盒。荧光定量PCR的检测方法拥有成本低、灵敏度高、特异性强，结果的重复性好等优点，是检测SNP的非常好的一种检测手段，但是常规的Taqman探针法探针订购成本太高，多个位点同时检测时很难保证所有引物探针在同一扩增条件下均达到非常好的扩增效果。连接酶链反应(LDR)是近年来开发出的一种基于高温连接酶检测基因分型的新方法。高温连接酶一旦检测到DNA与互补的2条寡聚核苷酸接头对应处存在着基因点突变类型的碱基错配，则连接反应就不能进行，反之则可以进行连接反应。Cristian等人建立PCR-LDR-qPCR方法检测癌症突变相关位点。这种检测方法具有高灵敏度、特异性强等优点。但该过程较为繁琐。另外，临床常用的PCR-荧光探针法检测限为200copies/μL，且对样本要求较高，因此急需建立一种简易便行、灵敏度高的基因分型检测方法。
发明内容
本发明建立一种RPA-LDR-qPCR技术，可对SLCO1B1基因388A>G、521T>C位点的多态性进行检测，确定SLCO1B1基因分型。
本发明提供的一种用于检测SLCO1B1基因多态性的组合物，包括针对用于检测待检样品中分别与SLCO1B1 388位点和SLCO1B1 521位点相关的特异性引物对和探针，包括：
SLCO1B1 388位点基因分型检测引物组：
S388-RPA-正向引物：CGGTTTTGGCGCAGTGACG；
S388-RPA-反向引物：AGGCGCTCGGGTTGGCTATCT；
S388-LDR-Probe-A：CGGTTTTGGCGCAGTGACGGGTCGATGTTGAATTTTCTGATGAATT；
S388-LDR-Probe-G：CGGTTTTGGCGCAGTGACGGGTCGATGTTGAATTTTCTGATGAATC；
S388-LDR-M：GATATTAGTTTCTTTAGAATACCTGTAGATAGCCAACCCGAGCGCCT；
qPCR-正向引物：CGGTTTTGGCGCAGTGACG；
qPCR-反向引物：AGGCGCTCGGGTTGGCTATCT；
和SLCO1B1 521位点基因分型检测引物组：
S521-RPA-正向引物：GCCACTCTCTTATCTACATAGGTTGTTT；
S521-RPA-反向引物：CGAAATCATCAATGTAAGAAAGCC；
S521-LDR-Probe-T：CGGTTTTGGCGCAGTGACGATTCCACGAAGCATATTACCCATGAACA
S521-LDR-Probe-C：CGGTTTTGGCGCAGTGACGATTCCACGAAGCATATTACCCATGAACG
S521-LDR-M：CATATATCCACATGTATGACCCAGATTAGATAGCCAACCCGAGCGCCT；
qPCR-正向引物：CGGTTTTGGCGCAGTGACG；
qPCR-反向引物：AGGCGCTCGGGTTGGCTATCT。
本发明提供的一种用于检测SLCO1B1基因多态性的试剂盒，所述试剂盒包括以上所述的用于检测SLCO1B1 388位点和SLCO1B1 521位点基因多态性检测的引物组。
本发明提供一种用于检测人SLCO1B1 388位点基因分型的方法，包括以下步骤：
(1)利用特异性扩增引物S388-RPA-正向引物和S388-RPA-反向引物，使用RPA反应体系扩增SLCO1B1 388位点基因片段；
(2)利用特异性探针S388-LDR-Probe-A、S388-LDR-Probe-G和S388-LDR-M，使用LDR反应体系对步骤(1)扩增产物进行处理；
(3)利用qPCR扩增引物qPCR-正向引物和qPCR-反向引物，使用qPCR反应体系对步骤(2)的反应产物判别基因分型结果。
在一些实施方案中，步骤(1)RPA反应体系中包含以下组分，2μL模板、10μM的S388-RPA-正向引物、10μM的S388-RPA-反向引物各2μL，41.5μL A Buffer，所述模板为提取的患者DNA。
在一些实施方案中，步骤(1)RPA反应程序为：添加2.5μL浓度为280mM的乙酸镁启动反应，并在37℃孵育30min。
在一些实施方案中，步骤(2)LDR反应体系包含以下组分，30nM的S388-LDR-Probe-A或30nM的S388-LDR-Probe-G 1μL，S388-LDR-Probe-M(30nM)1μL，10×Taq DNA LigaseBuffer 1μL，Taq DNA Ligase(30U/μL)0.25μL，RPA扩增产物1μL，超纯水5.75μL。
在一些实施方案中，步骤(2)LDR反应程序为：混合反应物瞬时离心后，先在95℃变性3min，接着在60℃连接5min。
在一些实施方案中，步骤(3)qPCR反应体系包括以下组分，MonAmpTMChemoHS qPCRMix 10μL，qPCR-正向引物0.4μL，qPCR-反向引物0.4μL，模板1μL，超纯水8.2μL。
在一些实施方案中，步骤(3)qPCR反应程序为：在95℃预变性10min，在95℃变性10s，在60℃下退火和延伸30s，40个循环。
本发明提供一种用于检测人SLCO1B1 521位点基因分型的方法，包括以下步骤：
(1)利用特异性扩增引物S521-RPA-正向引物和S521-RPA-反向引物，使用RPA反应体系扩增SLCO1B1 521位点基因片段；
(2)利用特异性探针S521-LDR-Probe-T、S521-LDR-Probe-C和S521-LDR-Probe-M，使用LDR反应体系对步骤(1)扩增产物进行处理；
(3)利用qPCR扩增引物qPCR-正向引物和qPCR-反向引物，使用qPCR反应体系对步骤(2)的反应产物判别基因分型结果。
在一些实施方案中，步骤(1)RPA反应体系中包含以下组分，2μL模板，S521-RPA-正向引物(10μM)、S521-RPA-反向引物(10μM)各2μL，所述模板为提取的患者DNA。
在一些实施方案中，步骤(1)RPA反应程序为：添加2.5μL浓度为280mM的乙酸镁启动反应，并在37℃孵育30min。
在一些实施方案中，步骤(2)LDR反应体系包含以下组分，S521-LDR-probe-T(30nM)或S521-LDR-probe-C(30nM)1μL，S521-LDR-probe-M(30nM)1μL，10×Taq DNALigase Buffer 1μL，Taq DNA Ligase(20U/μL)0.25μL，RPA扩增产物1μL，超纯水5.75μL。
在一些实施方案中，步骤(2)LDR反应程序为：混合反应物瞬时离心后，先在95℃变性3min，接着在60℃连接5min。
在一些实施方案中，步骤(3)qPCR反应体系包括以下组分，MonAmpTMChemoHS qPCRMix 10μL，qPCR-正向引物0.4μL，qPCR-反向引物0.4μL，模板1μL，超纯水8.2μL。
在一些实施方案中，步骤(3)qPCR反应程序为：在95℃预变性10min，在95℃预变性10s，在60℃下退火和延伸30s，40个循环。
本发明的具体原理是：利用RPA反应对样品DNA进行扩增，利用LDR反应对特定DNA序列进行连接，从而产生不同DNA间量的差异，利用qPCR反应进一步放大该量的差异并进行定量定性分析，从而得出基因分型结论。
本发明的有益效果：本发明提供了检测人SLCO1B1基因分型的引物组及检测方法。提供的引物组可对SLCO1B1基因388A>G、521T>C位点的多态性进行检测，确定SLCO1B1基因分型，不涉及昂贵的NGS设备，整个过程可以在临床实验室中常见的仪器上进行。此外，该方法还具有高灵敏度、特异性强等优点。
相关定义
RPA：重组酶聚合酶等温核酸扩增技术
LDR：连接酶技术
qPCR：实时荧光定量PCR
附图说明
图1RPA-LDR-qPCR方法的可行性，对SLCO1B1 388A>G三种不同基因型进行分型检测，以其中AA为野生纯合型，AG为突变杂，GG为突变纯合型。
图2RPA-LDR-qPCR方法的可行性，对SLCO1B1 521T>C三种不同基因型进行分型检测，以其中TT为野生纯合型，CC为突变杂，TC为突变纯合型。
图3RPA-LDR-qPCR灵敏度检测，对SLCO1B1 388A>G三种不同基因型分型灵敏度检测，样品浓度为103,102,101,和100copies/μL，AA(A)、GG(B)和AG(C)多态性的qPCR步骤的荧光曲线。
图4RPA-LDR-qPCR灵敏度检测对SLCO1B1 521T>C三种不同基因型进行分型灵敏度检测，样品浓度为103,102,101,和100copies/μL，检测TT(A)、CC(B)和TC(C)多态性的qPCR步骤的荧光曲线。
具体实施方案
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
样本来源
临床样本基因组DNA，由江苏省中医院提供，-20℃保存。
试剂和仪器
pMDTM18-T载体购自宝生物工程有限公司；Taq DNA连接酶购自生工生物工程(上海)股份有限公司；MonAmpTM 
Green qPCR Mix、Taq-HS PCR Master Mix购自莫纳生物科技有限公司；LightCycler480II实时荧光定量PCR仪购自罗氏。
引物与探针的设计
根据SNP位点的序列利用Geneious软件设计引物和探针，引物和探针由通用生物系统(安徽)有限公司合成，序列见表1。
表1引物和探针序列
实施例1构建标准质粒
根据相关文献报道查找SLCO1B1 388A>G序列号rs4244285，SLCO1B1 521T>Crs4149056，并在NCBI网站下载位点附近碱基序列，设计一对上下游引物(表1)，分别以携带野生型、突变型序列的患者基因组DNA为模板，扩增包含两位点在内的657bp大小片段，扩增体系(20μL)：Taq-HS PCR Master Mix(2×)10μL，引物(10μM)各1μL，DNA样品1μL及超纯水7μL。反应条件：预变性95℃2min；变性95℃30s，退火51℃30s，延伸72℃35s，30个循环；再延伸72℃5min。构建包含SLCO1B1基因两个位点在内的野生型和突变型的标准质粒，两个位点在一个质粒上，将质粒进行DNA测序分析(生工生物工程(上海)股份有限公司)，测序结果与GenBank上公布的对应基因序列进行比对分析。将测序正确的质粒放-20℃保存。
实施例2SLCO1B1 388位点的基因分型检测
RPA反应体系
RPA扩增部分根据RPA核酸扩增试剂盒说明书进行，向装有反应干粉的检测单元管中加入41.5μLABuffer、S388-RPA-正向引物和反向引物(浓度为10μM)各2μL、模板DNA 2μL。接着，向检测单元管盖上加入2.5μL乙酸镁(280mM)启动反应，混匀离心后在38℃下孵育30min。A buffer为杭州众测生物科技有限公司的该试剂盒提供。该反应的模板为提取的患者DNA。
LDR反应体系
连接酶检测反应技术，采用Taq DNA链接酶，反应总体系为10μL。在两个200μL管子中按顺序分别加入超纯水5.75μL，探针S388-LDR-Probe-M(30nM)1μL，10×Taq DNA LigaseBuffer 1μL,Taq DNA Ligase(30U/μL)0.25μL，RPA扩增产物1μL；然后，一管中加入探针S388-LDR-Probe-A(30nM)1μL，另一管中加入探针S388-LDR-Probe-G(30nM)1μL。混合反应物瞬时离心后，先在95℃变性3min后，接着在60℃连接5min。
qPCR反应体系
qPCR反应根据莫纳生物MonAmpTMChemoHS qPCR Mix的说明书进行，总体系为20μL。在八连排管子中依次加入下列各组分：以LDR反应产物1μL为模板，MonAmpTMChemoHS qPCRMix 10μL，qPCR-正向引物0.4μL，qPCR-反向引物0.4μL，超纯水8.2μL，轻微涡旋混匀后短暂离心，即刻将反应管放入罗氏LightCycler480II实时荧光定量PCR仪按照qPCR两步法进行反应。反应程序为：预变性95℃10min；变性95℃10s，退火和延伸60℃30s，40个循环，实时检测荧光强度。
实施例3SLCO1B1 521位点的基因分型检测
RPA反应体系
RPA扩增部分根据RPA核酸扩增试剂盒说明书进行，向装有反应干粉的检测单元管中加入41.5μL A Buffer、S521-RPA-正向引物和反向引物(浓度为10uM)各2μL、模板DNA 2μL。接着，向检测单元管盖上加入2.5μL乙酸镁(280mM)启动反应，混匀离心后在38℃下孵育30min。A buffer为杭州众测生物科技有限公司的该试剂盒提供。该反应的模板为提取的患者DNA。
LDR反应体系
连接酶检测反应技术，采用Taq DNA链接酶，反应总体系为10μL。在两个200μL管子中按顺序分别加入超纯水5.75μL，探针S521-LDR-Probe-M(30nM)1uL，10×Taq DNA LigaseBuffer 1uL,Taq DNA Ligase(20U/μL)0.25uL，RPA扩增产物1uL；然后，一管中加入探针S521-LDR-Probe-T(30nM)1μL，另一管中加入探针S521-LDR-Probe-C(30nM)1μL。混合反应物瞬时离心后，先在95℃变性3min后，接着在60℃延伸5min。
qPCR反应体系
qPCR反应根据莫纳生物MonAmpTMChemoHS qPCR Mix的说明书进行，总体系为20μL。在八连排管子中依次加入下列各组分：以LDR反应产物1μL为模板，MonAmpTMChemoHS qPCRMix 10μL，qPCR-正向引物0.4μL，qPCR-反向引物0.4μL，超纯水8.2μL，轻微涡旋混匀后短暂离心，即刻将反应管放入罗氏LightCycler480II实时荧光定量PCR仪按照qPCR两步法进行反应。反应程序为：预变性95℃10min；变性95℃10s，退火和延伸60℃30s，40个循环，实时检测荧光强度。
实施例4RPA-LDR-qPCR方法验证
为了验证开发区分SNP方法的可行性，分别将构建的野生型和突变型标准质粒作为靶标模板。SLCO1B1 388A>G野生型质粒代表野生纯合型模板(AA型)，突变型质粒代表突变纯合型模板(GG型)，野生型质粒与突变型质粒1：1混合代表突变杂合型模板(AG型)。将三种类型的模板分别加入两种探针即野生型探针和突变型探针。结果显示，SLCO1B1388A>G野生纯合型模板与完全匹配的野生型探针率先出现荧光信号，与不匹配的突变型探针后出现荧光信号，突变纯合型模板则出现相反情况，突变杂合型模板则是两种类型探针同时出现荧光信号(图1)。结果表明，建立的方法可对SLCO1B1 388A>G进行分型。SLCO1B1基因521T>C位点也观察到相似的情况(图2)。
实施例5RPA-LDR-qPCR方法的灵敏度
由于临床样本中目标序列的含量较低，需评价所建立检测方法的灵敏度。应用建立的方法条件，通过检测10倍连续稀释103～100copies/μL的含有SLCO1B1基因序列的构建3种类型质粒来评估方法的敏感性。结果表明(图3和图4)，建立的RPA-LDR-qPCR方法最低检测限为1copies/μL。
实施例6应用RPA-LDR-qPCR检测临床样本
我们对江苏省中医院提供的9份临床样本进行了检测，并与医院常用的PCR-荧光探针法进行比较，并进行三次独立重复性实验，结果显示，这两种方法的实际检测结果是完全一致的(表2)。
表2 9份临床样本进行PCR-荧光探针和RPA-LDR-qPCR方法的检测结果
Claims (10)
1.一种用于检测SLCO1B1基因多态性的组合物，包括针对用于检测待检样品中分别与SLCO1B1 388位点和SLCO1B1 521位点相关的特异性引物组和探针，包括：
SLCO1B1 388位点基因分型检测引物组：
S388-RPA-正向引物：CGGTTTTGGCGCAGTGACG；
S388-RPA-反向引物：AGGCGCTCGGGTTGGCTATCT；
S388-LDR-Probe-A：CGGTTTTGGCGCAGTGACGGGTCGATGTTGAATTTTCTGATGAATT；
S388-LDR-Probe-G：CGGTTTTGGCGCAGTGACGGGTCGATGTTGAATTTTCTGATGAATC；
S388-LDR-M：GATATTAGTTTCTTTAGAATACCTGTAGATAGCCAACCCGAGCGCCT；
qPCR-正向引物：CGGTTTTGGCGCAGTGACG；
qPCR-反向引物：AGGCGCTCGGGTTGGCTATCT；
和SLCO1B1 521位点基因分型检测引物组：
S521-RPA-正向引物：GCCACTCTCTTATCTACATAGGTTGTTT；
S521-RPA-反向引物：CGAAATCATCAATGTAAGAAAGCC；
S521-LDR-Probe-T：CGGTTTTGGCGCAGTGACGATTCCACGAAGCATATTACCCATGAACA
S521-LDR-Probe-C：CGGTTTTGGCGCAGTGACGATTCCACGAAGCATATTACCCATGAACG
S521-LDR-M：CATATATCCACATGTATGACCCAGATTAGATAGCCAACCCGAGCGCCT；
qPCR-正向引物：CGGTTTTGGCGCAGTGACG；
qPCR-反向引物：AGGCGCTCGGGTTGGCTATCT。
2.一种用于检测SLCO1B1基因多态性的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组和探针。
3.一种用于检测SLCO1B1 388位点基因分型的方法，包括以下步骤：
(1)利用特异性扩增引物S388-RPA-正向引物和S388-RPA-反向引物，使用RPA反应体系扩增SLCO1B1 388位点基因片段；
(2)利用探针S388-LDR-Probe-A、S388-LDR-Probe-G和S388-LDR-M，使用LDR反应体系对步骤(1)扩增产物进行处理；
(3)利用qPCR-正向引物和qPCR-反向引物，使用qPCR反应体系对步骤(2)的反应产物判别基因分型结果。
4.根据权利要求3所述的检测SLCO1B1 388位点基因分型的方法，其特征在于，所述步骤(1)RPA反应体系中包含以下组分，2μL模板、浓度为10μM的S388-RPA-正向引物、浓度为10μM的S388-RPA-反向引物各2μL，所述模板为提取的患者DNA；优选地，步骤(1)RPA反应程序为：添加2.5μL浓度为280mM的乙酸镁启动反应，并在37℃孵育30min。
5.根据权利要求3所述的检测SLCO1B1 388位点基因分型的方法，其特征在于，所述步骤(2)LDR反应体系包含以下组分，1μL浓度为30nM的S388-LDR-Probe-A或浓度为30nM的S388-LDR-Probe-G、1μL浓度为30nM的S388-LDR-Probe-M，10×Taq DNA Ligase Buffer 1μL，Taq DNA Ligase(30U/μL)0.25μL，RPA扩增产物1μL，超纯水5.75μL；优选地，步骤(2)LDR反应程序为：混合反应物瞬时离心后，先在95℃变性3min，接着在60℃连接5min。
6.根据权利要求3所述的检测SLCO1B1 388位点基因分型的方法，其特征在于，所述步骤(3)qPCR反应体系包括以下组分，MonAmpTMChemoHS qPCR Mix 10μL，qPCR-正向引物0.4μL，qPCR-反向引物0.4μL，模板1μL，超纯水8.2μL；优选地，所述步骤(3)qPCR反应程序为：在95℃预变性10min，在95℃变性10s，在60℃下退火和延伸30s，40个循环。
7.一种用于检测人SLCO1B1 521位点基因分型的方法，包括以下步骤：
(1)利用特异性扩增引物S521-RPA-正向引物和S521-RPA-反向引物，使用RPA反应体系扩增SLCO1B1 521位点基因片段；
(2)利用探针S521-LDR-Probe-T、S521-LDR-Probe-C和S521-LDR-Probe-M，使用LDR反应体系对步骤(1)扩增产物进行处理；
(3)利用qPCR-正向引物和qPCR-反向引物，使用qPCR反应体系对步骤(2)的反应产物判别基因分型结果。
8.根据权利要求7所述的检测SLCO1B1 521位点基因分型的方法，其特征在于，所述步骤(1)RPA反应体系中包含以下组分，2μL模板，浓度为10μM的S521-RPA-正向引物、浓度为10μM的S521-RPA-反向引物各2μL，所述模板为提取的患者DNA；优选地，所述步骤(1)RPA反应程序为：添加2.5μL浓度为280mM的乙酸镁启动反应，并在37℃孵育30min。
9.根据权利要求7所述的检测SLCO1B1 521位点基因分型的方法，其特征在于，所述步骤(2)LDR反应体系包含以下组分，浓度为30nM的S521-LDR-T或浓度为30nM的S521-LDR-C和浓度为30nM的S521-LDR-M各1μL，10×Taq DNA Ligase Buffer 1μL，Taq DNA Ligase(20U/μL)0.25μL，RPA扩增产物1μL，超纯水5.75μL；优选地，步骤(2)LDR反应程序为：混合反应物瞬时离心后，先在95℃变性3min，接着在60℃连接5min。
10.根据权利要求7所述的检测SLCO1B1 521位点基因分型的方法，其特征在于，步骤(3)qPCR反应体系包括以下组分，MonAmpTMChemoHS qPCR Mix 10μL，qPCR-正向引物0.4μL，qPCR-反向引物0.4μL，模板1μL，超纯水8.2μL；优选地，步骤(3)qPCR反应程序为：在95℃预变性10min，在95℃变性10s，在60℃下退火和延伸30s，40个循环。
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2022
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| CN116790724A (zh) * | 2023-06-27 | 2023-09-22 | 北京百奥纳芯生物科技有限公司 | 一种检测单个碱基差异的方法及基因芯片 |
| CN116790724B (zh) * | 2023-06-27 | 2024-04-12 | 北京百奥纳芯生物科技有限公司 | 一种检测单个碱基差异的方法及基因芯片 |
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