CN115715782A - 一种防治溃疡性结肠炎的中药组合物及其应用 - Google Patents
一种防治溃疡性结肠炎的中药组合物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种防治溃疡性结肠炎的中药组合物,该组合物的组成包括菊苣和茯苓(以下简称菊苓)。本发明中药组合可显著降低小鼠血清炎症因子水平,改善溃疡性结肠炎诱发的炎症反应,且可有效平衡T细胞数量,调节肠道免疫功能,对溃疡性结肠炎有预防作用。本发明所述的中药组合均属于药食两用药,用于防治上述病症时安全性高。
Description
技术领域
本发明涉及中药组合物及其应用,具体涉及一种由菊苣、茯苓配伍用于防治溃疡性结肠炎的中药组合物及应用。
背景技术
溃疡性结肠炎(UC)是一种病因未明的肠道炎性病变,是大肠黏膜的慢性炎症和溃疡性病变,临床以腹泻、黏液脓血便、腹痛为主要表现,且该疾病具有病程长、易反复、并发症多、预后差等特征。近年来由于人们在快节奏生活方式、高强度工作压力及遗传等多种因素影响下,UC的发病率日益攀升,成为一种较常见的消化道疾病,威胁患者身体健康与生命安全。
目前用于治疗UC的常规药物主要有柳氮磺胺吡啶水杨酸制剂、皮质类固醇、免疫抑制剂等。治疗多以缓解症状为主,且存在停药后易复发、耐药性增加或频发不良反应等诸多问题。UC于长期慢性炎症状态下很可能转化为结直肠癌,因此寻找疗效确切、毒副作用小、价格低廉的UC防治药物是近年来探索的热点。
菊苣、茯苓均为卫生部公布的《既是食品又是药品的物品名单》中收载的品种,具有较长的药用史与食用史,安全性高。其中菊苣具有清肝利胆、健胃消食、利尿消肿的功效。现代研究显示,菊苣提取物可显著降低尿酸、血脂、血糖等水平,且对肠道机械屏障、微生物屏障等均有调节作用。茯苓具有利水渗湿,健脾宁心的功效,其多糖成分可抑制炎症因子表达,降低炎症浸润程度。但目前尚未见两者药物组合用于防治溃疡性结肠炎的研究报道。
发明内容
本发明目的在于提供一种防治溃疡性结肠炎的中药组合物及其应用,同时为溃疡性结肠炎的防治提供一种新的药物选择。
作为本发明的一个方面,本发明提供一种防治溃疡性结肠炎的中药组合物,所述中药组合物由如下原料药制成:菊苣6-18重量份、茯苓5-15重量份。
优选的,所述中药组合物由如下原料药制成:菊苣8-17重量份、茯苓8-15重量份。
进一步优选的,所述中药组合物由如下原料药制成:菊苣12-16重量份、茯苓10-15重量份。
最优选的,所述中药组合物由如下原料药制成:菊苣15重量份、茯苓15重量份。
上述技术方案中,所述中药组合物可以是上述原料药组成或制成的任何形式,包括:上述原料药分别粉碎后再混合而成的组合物;或,上述原料药混合后经粉碎得到的组合物;或,上述原料药混合后按常规提取方法提取后得到提取物,提取物进一步经过精制纯化工艺得到有效部位,将上述提取物、有效部位进一步按照常规制剂工艺制备得到常规口服剂型。
上述常规提取方法包括浸渍提取、煎煮提取、回流提取、渗漉提取、超声提取、微波提取等;所述提取溶剂包括水或常规有机溶剂,如乙醇、甲醇、乙酸乙酯、石油醚、异丙醇等;所述精制纯化工艺包括萃取、柱层析分离、高效液相色谱分离等。
上述常规口服剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、口服液。制备上述剂型时需要加入常用药学可接受的辅料,包括:填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括:淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等;崩解剂包括:淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等;润滑剂包括:硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等;助悬剂包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等;粘合剂包括,淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等。
本发明中药组合物除了以原料药的形式进行投料,还可以提取物形式或者制成颗粒进行投料。因此,作为本申请的另一个方面,本申请进一步提供一种防治溃疡性结肠炎的中药组合物,所述中药组合物由如下原料制成:菊苣提取物6-18重量份、茯苓提取物5-15重量份。
优选的,所述中药组合物由如下原料制成:菊苣提取物8-17重量份、茯苓提取物8-15重量份。
进一步优选的,所述中药组合物由如下原料制成:菊苣提取物12-16重量份、茯苓提取物10-15重量份。
最优选的,所述中药组合物由如下原料制成:菊苣提取物15重量份、茯苓提取物15重量份。
作为本发明的第三个方面,本发明提供所述中药组合物在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用。
进一步,本发明提供所述中药组合物在制备抑制溃疡性结肠炎炎性反应的药物中的应用。
进一步,本发明提供所述中药组合物在制备增强肠道免疫功能的药物中的应用。
本发明中药组合物中,菊苣具有清肝利胆、健胃消食、利尿消肿的功效,现代研究显示,菊苣提取物可显著降低尿酸、血脂、血糖等水平,且对肠道机械屏障、微生物屏障等均有调节作用。茯苓具有利水渗湿,健脾宁心的功效,其多糖成分可抑制炎症因子表达,降低炎症浸润程度。本发明经药理研究发现,二者配伍能显著降低溃疡性结肠炎小鼠疾病活动指数(DAI)、对结肠缩短均有不同程度缓解作用,且能显著降低小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β三种炎症因子水平,改善组织炎症反应,有效平衡T细胞数量,调节肠道免疫功能,对溃疡性结肠炎有不同程度的防治作用。
附图说明
图1为实施例中中药组合物提取方法流程图。
图2为实施例3中各组小鼠结肠组织HE染色病理图。
图3为实施例3中各组小鼠结肠组织免疫组化CD3蛋白表达图。
图4为实施例3中各组小鼠结肠组织免疫组化Foxp3蛋白表达图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明,以下实施方案为本发明的具体实施方式,但本发明的实施方式并不受下述实施方案的限制。
实施例1不同中药组合物防治溃疡性结肠炎的筛选研究
1、仪器和试药
电磁炉,HY-221,广东半球实业集团公司;
旋转蒸发仪,RE-501,北京神泰伟业仪器设备有限公司;
电子天平,TLE303E,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;
硫酸葡聚糖(DSS),H07D11B133497,上海源叶生物科技有限公司;
美沙拉嗪肠溶片,201025,葵花药业集团佳木斯鹿灵制药有限公司;
菊苣,200701,新疆岷海中药饮片有限公司;
茯苓,20210324,北京本草方源药业集团有限公司;
土茯苓,20210401,北京本草方源药业集团有限公司。
2、实验方法
2.1设置不同中药组合物组别(见下表1)
表1不同中药组合物组别
组别 | 菊苣(g) | 茯苓(g) | 土茯苓(g) | 组合物比例 |
组合物A组 | 15 | 15 | / | 1:1 |
组合物B组 | 15 | / | 15 | 1:1 |
组合物C组 | / | 15 | 15 | 1:1 |
2.2组合物的提取方法
具体提取方法:选择各组分用量,加入料液比为12倍质量去离子水,100℃煎煮1h进行第一次提取,将提取得到的溶液过滤至合适容器内。再次加入料液比为10倍质量去离子水,100℃煎煮1h进行第二次提取,合并两次得到的提取液,将药液充分混合,至旋转蒸发仪内在-0.09Mpa、80℃条件下减压浓缩至所需浓度,4℃保存以备用。具体操作流程见附图1。
2.3动物分组
雄性Balb/c小鼠共60只,SPF级,6-8周龄,体重为20±2g,在SPF级实验室适应性饲养3天后,按体质量随机分为6组,分别为正常组、模型组、阳药组(美沙拉嗪)、组合物A组、组合物B组、组合物C组,每组各10只。
2.4溃疡性结肠炎动物模型的建立
配制浓度为4%的硫酸葡聚糖(DSS)水溶液作为造模剂,正常组动物饮用超纯水,其余各组均饮用DSS水溶液。各组动物均常规饮食,造模周期为7d。实验期间观察各组动物一般状态、便血情况。
2.5实验给药
按照人与小鼠体表面积折算的等效剂量比值来计算给药浓度,各组合物给药浓度均为5g/kg,阳药美沙拉嗪组给药浓度为400mg/kg,给药方式为灌胃给药,给药体积为0.1ml/10g,正常组与模型组每天灌胃等体积超纯水。造模当天同时开始给药。
2.6疾病活动指数(DAI)评分(评分标准见下表2)
DAI评分:①体质量下降率评分:体质量无减轻,0分;体质量下降1%~5%,1分;体质量下降5%~10%,2分;体质量下降10%~15%,3分;体质量下降>15%,4分。②大便性状评分:正常,0分;松散,2分;稀便,4分。③大便出血评分:正常,0分;肉眼可见血便,2分,肉眼可见大量血便,4分。
根据公式“DAI评分=(体质量评分+粪便性状评分+隐血评分)/3”计算各组小鼠DAI评分。
表2DAI评分标准
得分 | 体重下降率(%) | 粪便硬度 | 大便隐血 |
0 | 0 | 正常(球团状) | 正常 |
1 | 1-5 | / | / |
2 | 5-10 | 松散(松散糊状,不粘肛门) | 肉眼可见血便 |
3 | 10-15 | / | / |
4 | >15 | 稀便(粘在肛门的液体大便) | 肉眼可见大量血便 |
3、数据分析
使用GraphPad Prism7.0软件进行统计分析,数据均采用均数±标准差 表示,多组间数据比较根据各组正态及方差齐与否选择单因素方差分析或是Kruskal-Wallis轶和检验,组间两两比较根据方差齐与否选择采用Dunnett-t检验或Dunnett’s T3检验,以P<0.05为差异有统计学意义,以P<0.01表示具有极显著性差异。
4、结果
4.1实验小鼠DAI评分
结果见表3。
表3各组小鼠DAI评分(n=10)
时间 | 正常组 | 模型组 | 阳药组 | 组合物A组 | 组合物B组 | 组合物C组 |
第1d | 0.67±1.15 | 3.67±4.04 | 2.00±2.00 | 1.33±1.15 | 2.00±2.00 | 2.33±2.08 |
第2d | 2.00±2.00 | 6.67±6.43 | 4.67±3.06 | 4.33±2.08 | 5.67±2.08 | 5.67±2.52 |
第3d | 1.33±1.15 | 9.33±5.77 | 5.33±2.31 | 6.33±1.53 | 7.33±3.06 | 9.33±3.06 |
第4d | 1.00±1.73 | 11.67±7.23 | 6.33±3.21 | 7.00±4.58 | 11.67±4.51 | 10.67±5.77 |
第5d | 1.67±2.89 | 16.33±12.66 | 11.00±7.94 | 10.33±6.81 | 13.33±8.33 | 14.33±9.50 |
第6d | 0.67±1.15 | 20.00±12.00<sup>*</sup> | 12.67±8.08 | 13.00±8.66 | 14.00±9.17 | 18.6±11.02 |
第7d | 1.00±1.73 | 22.00±15.10 | 17.00±10.82 | 18.33±11.93 | 19.33±11.55 | 22.33±13.28 |
注:与正常组相比,*P<0.05;
结果显示:与正常组相比,模型组动物DAI评分呈升高趋势,且第6d,模型组小鼠出现显著升高(P<0.05)。与模型组相比,阳药组、组合物A组、组合物B组及组合物C组DAI评分均有降低趋势,但未出现显著差异。
结果分析:实验期间,观察各组小鼠精神状态、DAI评分等,显示正常组小鼠精神状态良好,DAI评分较低,模型组小鼠一般状态较差,DAI评分较高。不同组合物组与模型组相比,小鼠精神状态有所好转,DAI评分较模型组降低,出现明显改善作用。不同组合物间相比,组合物C组(茯苓、土茯苓)小鼠便溏情况最为严重,体重下降率不断升高,精神状态差;组合物B组(菊苣、土茯苓)较组合物C组(茯苓、土茯苓)小鼠便溏情况稍改善,但小鼠精神状态仍较差;组合物A组(菊苣、茯苓)与组合物B组(菊苣、土茯苓)、C组(茯苓、土茯苓)相比,小鼠便溏情况及体重下降率均明显改善,精神状态较好。
因此综合考虑动物精神状态、便溏情况、体重下降率、DAI评分等因素,下一步将进行组合物A组(菊苣、茯苓)不同比例防治溃疡性结肠炎的筛选研究。
实施例2菊苓组合物防治溃疡性结肠炎的比例筛选研究
1、仪器和试药
电磁炉,HY-221,广东半球实业集团公司;
旋转蒸发仪,RE-501,北京神泰伟业仪器设备有限公司;
电子天平,TLE303E,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;
硫酸葡聚糖(DSS),H07D11B133497,上海源叶生物科技有限公司;
美沙拉嗪肠溶片,201025,葵花药业集团佳木斯鹿灵制药有限公司;
菊苣,200701,新疆岷海中药饮片有限公司;
茯苓,20210324,北京本草方源药业集团有限公司。
2、实验方法
2.1设置菊苓组合物不同比例组(见下表4)
表4菊苓组合物不同比例组
组别 | 菊苣(g) | 茯苓(g) | 菊苣:茯苓的比例 |
菊苓A组 | 9 | 12 | 3:4 |
菊苓B组 | 15 | 15 | 1:1 |
菊苓C组 | 18 | 15 | 6:5 |
2.2菊苓组合物的提取方法
具体提取方法:选择各组分用量,加入料液比为12倍质量去离子水,100℃煎煮1h进行第一次提取,将提取得到的溶液过滤至合适容器内。再次加入料液比为10倍质量去离子水,100℃煎煮1h进行第二次提取,合并两次得到的提取液,将药液充分混合,至旋转蒸发仪内在-0.09Mpa、80℃条件下减压浓缩至所需浓度,4℃保存以备用。具体操作流程见图1。
2.3动物分组
雄性Balb/c小鼠共60只,SPF级,6-8周龄,体重为20±2g,在SPF级实验室适应性饲养3天后,按体质量随机分为6组,分别为正常组、模型组、阳药组(美沙拉嗪)、菊苓A组、菊苓B组、菊苓C组,每组各10只。
2.4溃疡性结肠炎动物模型的建立
配制浓度为4%的硫酸葡聚糖(DSS)水溶液作为造模剂,正常组动物饮用超纯水,其余各组均饮用DSS水溶液。各组动物均常规饮食,造模周期为7d。实验期间记录饮水量和摄食量。
2.5实验给药
按照人与小鼠体表面积折算的等效剂量比值来计算给药浓度,菊苓组合物各给药组给药浓度,分别为菊苓A组3.5g/kg,菊苓B组5g/kg,菊苓C组5.5g/kg,阳药美沙拉嗪组给药浓度为400mg/kg,给药方式为灌胃给药,给药体积为0.1ml/10g,正常组与模型组每天灌胃等体积超纯水。造模当天同时开始给药。
2.6疾病活动指数(DAI)评分(评分标准见表2)
3、数据分析
使用GraphPad Prism7.0软件进行统计分析,数据均采用均数±标准差 表示,多组间数据比较根据各组正态及方差齐与否选择单因素方差分析或是Kruskal-Wallis轶和检验,组间两两比较根据方差齐与否选择采用Dunnett-t检验或Dunnett’s T3检验,以P<0.05为差异有统计学意义,以P<0.01表示具有极显著性差异。
4、结果
4.1实验小鼠DAI评分
结果见表5。
表5各组小鼠DAI评分(n=10)
时间 | 正常组 | 模型组 | 阳药组 | 菊苓A组 | 菊苓B组 | 菊苓C组 |
第1d | 0.33±0.58 | 2.33±2.08 | 2.00±3.46 | 3.33±3.06 | 2.00±2.00 | 2.00±2.00 |
第2d | 1.33±2.31 | 2.00±2.00 | 0.67±1.15 | 2.33±2.52 | 0.33±0.58 | 1.33±1.15 |
第3d | 0.00±0.00 | 2.67±3.06 | 1.67±2.89 | 2.00±2.00 | 1.33±1.15 | 1.00±1.73 |
第4d | 1.67±2.89 | 3.33±3.06 | 2.67±4.62 | 2.33±4.04 | 3.33±3.06 | 1.33±2.31 |
第5d | 0.67±1.15 | 4.33±4.04 | 3.33±5.77 | 1.67±2.89 | 2.00±2.00 | 3.00±3.61 |
第6d | 0.67±1.15 | 7.33±9.45 | 3.00±3.61 | 2.33±2.52 | 0.67±1.15 | 4.67±4.16 |
第7d | 0.67±1.15 | 18.33±13.58 | 7.00±6.08 | 4.67±4.16 | 1.67±2.89 | 4.00±2.00 |
注:实验第7d,模型组与菊苓A组小鼠各死亡1例。
结果显示:与正常组相比,模型组动物DAI评分呈升高趋势,但未出现统计学差异。与模型组相比,阳药组、菊苓A组、菊苓B组及菊苓C组DAI评分均有降低趋势,但未出现显著差异。
4.2实验期间小鼠摄食量及饮水量水平变化
结果见表6。
表6各组小鼠摄食量及饮水量水平变化(n=10)
组别 | 摄食量(g/d/只) | 饮水量(ml/d/只) |
正常组 | 3.15±0.65 | 5.73±1.02 |
模型组 | 2.71±0.70 | 5.16±0.96 |
阳药组 | 2.29±0.47 | 4.53±0.99 |
菊苓A组 | 2.83±0.58 | 4.77±0.95 |
菊苓B组 | 2.80±0.60 | 4.65±1.09 |
菊苓C组 | 2.71±0.54 | 4.57±1.21 |
结果显示,实验期间,各组小鼠摄食量及饮水量之间未见显著差异。
结果分析:实验期间,观察各组小鼠一般状态、体重及粪便性状,显示正常组小鼠一般状态良好,体重较为稳定,模型组小鼠体重呈下降趋势,随着造模时间的延长,出现便溏、便血等症状,且第7d时出现小鼠死亡1例,考虑原因可能为造模剂诱导小鼠状态不佳所致。菊苓不同比例组与模型组相比,小鼠一般状态有所好转,体重下降趋势有所减小,出现明显改善作用。菊苓不同比例组相比,菊苓A组小鼠第7d禁食后出现死亡1例,分析原因可能为体重减小及禁食所致。菊苓B组小鼠一般状态相对较好,且未出现死亡。菊苓C组小鼠一般状态与菊苓B组相比较差。
因此综合考虑动物一般状态、体重及各组小鼠DAI评分等因素,菊苓不同比例组中,菊苓B组(即菊苣:茯苓为1:1)小鼠一般状态较好,且实验过程中未出现死亡,因此下一步将针对菊苣:茯苓为1:1的组合物比例进行菊苓组合物防治溃疡性结肠炎的药效研究。
实施例3菊苓组合物防治溃疡性结肠炎的药效研究
1、仪器与试药
1.1仪器
1.2试药
2、实验方法
2.1动物分组
雄性Balb/c小鼠共50只,SPF级,6-8周龄,体重为20±2g,在SPF级实验室适应性饲养3天后,按体质量随机分为5组,分别为正常组、模型组、阳药组(美沙拉嗪)、菊苓高剂量组(JL-H)、菊苓低剂量组(JL-L),每组各10只。
2.2溃疡性结肠炎动物模型的建立
配制浓度为4%的硫酸葡聚糖(DSS)水溶液作为造模剂,正常组饮用超纯水,其余各组均饮用DSS水溶液。各组动物均常规饮食,造模周期为7d。
2.3菊苓组合物的提取方法
具体提取方法:各组分用量为菊苣15g,茯苓15g,加入料液比为12倍质量去离子水,100℃煎煮1h进行第一次提取,将提取得到的溶液过滤至合适的容器内。再次加入料液比为10倍质量去离子水,100℃煎煮1h进行第二次提取,合并两次得到的提取液,将药液充分混合,至旋转蒸发仪内在-0.09Mpa、80℃条件下减压浓缩至1g/ml及1g/2ml的浓度(按生药量计算),4℃保存以备用。具体操作流程见附图1。
2.4实验给药
菊苓高剂量组给药浓度为10g/kg,菊苓低剂量组给药浓度为5g/kg,阳药美沙拉嗪组给药浓度为400mg/kg,给药方式为灌胃给药,给药体积为0.1ml/10g,正常组和模型组每天灌胃等体积的超纯水。造模当天同时开始给药。
2.5取材
实验周期为7d,于第7d晚8:00禁食不禁水12h,第8d早8:00处死小鼠取血清约1ml,用于检测血清IL-6、TNF-α及IL-1β炎症因子水平。剖开小鼠腹部,暴露腹腔,取小鼠脾脏,称其重量,计算小鼠脾脏指数。取小鼠结肠段组织,测量其结肠长度,并沿肠系膜边缘纵向剖开,用生理盐水冲洗其内容物,滤纸蘸干,称结肠重量,计算结肠指数。将结肠组织分为两段,一段放入10%福尔马林缓冲液中固定备用,另一段迅速放入液氮中,置于-80℃保存。
脾脏指数(%)=小鼠脾脏重量(g)/第7d小鼠体重(g)×100%
结肠指数(%)=小鼠结肠重量(g)/第7d小鼠体重(g)×100%
2.6结肠组织病理学观察
将组织切成标准切片,HE染色结果用于组织病理学评分。组织病理学评分依据Cooper炎症分级标准进行。每组随机选取6个样本,在放大400倍下,每个标本在同一结肠区段的病理切片区域里,随机选取6个视野,对每个视野进行观察和评分。将这6个评分的平均值作为这个标本的组织病理学评分值,具体评分如下:
结肠组织镜下病理损伤评分标准为:0分,正常且无炎症细胞浸润;1分,轻微炎症细胞浸润和黏膜下组织损伤(损伤范围在<10%);2分,中度炎症细胞浸润和黏膜下组织被破坏(损伤范围在10%~25%);3分,明显的炎性细胞浸润,黏膜下组织被破坏,结肠壁增厚(损伤范围在25%~50%);4分,严重的炎性细胞浸润,大规模结肠组织损伤(损伤范围>50%)和结肠壁增厚。
2.7结肠组织免疫组化染色
对各组病变组织蜡块应用CD3、Foxp3进行免疫组化染色,查看病变部位T细胞及调节性T细胞浸润变化。每组随机选取6个样本,在放大400倍下,每个标本在同一结肠区段的病理切片区域里,随机选取5个互不重叠视野,利用Imagine Pro-Plus6.0图像分析系统对免疫组化图片进行分析,测定阳性表达面积(Area),阳性表达积分光密度IOD(IntegralOptical density)。
3、数据分析
使用GraphPad Prism7.0软件进行统计分析,数据均采用均数±标准差 表示,多组间数据比较根据各组正态及方差齐与否选择单因素方差分析或是Kruskal-Wallis轶和检验,组间两两比较根据方差齐与否选择采用Dunnett-t检验或Dunnett’s T3检验,以P<0.05为差异有统计学意义,以P<0.01表示具有极显著性差异。
4、结果
4.1实验小鼠血清IL-6、TNF-α及IL-1β炎症因子水平
结果见表7。
表7各组小鼠血清IL-6、TNF-α及IL-1β炎症因子水平(n=10)
组别 | IL-6(pg/ml) | TNF-α(pg/ml) | IL-1β(pg/ml) |
正常组 | 4.82±1.22 | 68.73±9.26 | 24.51±8.07 |
模型组 | 14.03±3.10<sup>**</sup> | 116.66±25.76<sup>**</sup> | 68.67±23.49<sup>**</sup> |
阳药组 | 6.60±1.50<sup>##</sup> | 84.09±14.57<sup>##</sup> | 23.65±5.63<sup>##</sup> |
JL-H组 | 7.71±1.69<sup>##</sup> | 74.59±19.99<sup>##</sup> | 26.54±6.23<sup>##</sup> |
JL-L组 | 9.22±1.25<sup>##</sup> | 95.53±12.37<sup>#</sup> | 27.09±9.67<sup>#</sup> |
注:与正常组相比,**P<0.01;与模型组相比,#P<0.05,##P<0.01。
结果显示,实验期间,与正常组相比,模型组小鼠血清IL-6、TNF-α及IL-1β炎症因子水平均显著升高,且出现极显著差异(P<0.01);与模型组相比,阳性药组、JL-H组及JL-L组小鼠血清IL-6、TNF-α及IL-1β炎症因子水平均显著降低,且出现显著差异(P<0.05或P<0.01)。
4.2实验小鼠结肠长度
结果见表8。
表8各组小鼠结肠长度(n=10)
组别 | 结肠长度(cm) |
正常组 | 7.11±0.49 |
模型组 | 5.68±0.71<sup>**</sup> |
阳药组 | 6.36±0.52<sup>#</sup> |
JL-H组 | 6.46±0.83<sup>#</sup> |
JL-L组 | 6.14±0.76 |
注:与正常组相比,**P<0.01;与模型组相比,#P<0.05。
结果显示,实验期间,与正常组相比,模型组小鼠结肠长度显著缩短,且出现显著差异(P<0.01);与模型组相比,阳性药组与JL-H组小鼠结肠长度显著缓解舒展变长,且出现显著差异(P<0.05)。
4.3实验小鼠结肠指数、脾脏指数
结果见表9。
表9各组小鼠结肠指数、脾脏指数(n=10)
组别 | 结肠指数(%) | 脾脏指数(%) |
正常组 | 1.25±0.30 | 0.60±0.08 |
模型组 | 1.37±0.34 | 0.66±0.22 |
阳药组 | 1.28±0.42 | 0.53±0.19 |
JL-H组 | 1.19±0.26 | 0.66±0.19 |
JL-L组 | 1.18±0.31 | 0.61±0.08 |
结果显示,实验期间,各组小鼠结肠指数与脾脏指数均未见明显差异。
4.4实验小鼠结肠组织病理学评分
结肠组织HE染色病理组织图片见图2。病理学评分结果见表10。
表10各组小鼠结肠组织病理学评分(n=6)
注:与正常组相比,*P<0.05;与模型组相比,##P<0.01。
小鼠结肠组织病理切片HE染色结果显示,正常组小鼠结肠腺体组织完整,部分组织黏膜下层出现轻微炎性细胞浸润。模型组小鼠结肠组织黏膜上皮细胞大量脱落,腺体结构破坏严重,且黏膜下层可见大量炎性细胞浸润。而阳药组、菊苓高、低剂量组经给药治疗后,小鼠结肠组织上皮细胞较模型组脱落减少,且黏膜下层炎性细胞浸润减少,出现不同程度的缓解作用,其中阳药组及菊苓高剂量组作用显著。
病理学评分结果显示,实验期间,与正常组相比,模型组小鼠结肠组织病理评分高于正常组,且出现显著差异(P<0.05);与模型组相比,阳药组与JL-H组小鼠结肠组织病理评分低于模型组,且出现显著差异(P<0.01)。
4.5实验小鼠结肠组织免疫组化染色CD3蛋白表达分析
免疫组化染色CD3蛋白表达图见图3。CD3蛋白表达分析结果见表11。
表11各组小鼠结肠组织CD3蛋白表达分析(n=6)
组别 | Area(×10<sup>^3</sup>) | IOD(×10<sup>^3</sup>) |
正常组 | 676.68±34.10 | 832.60±41.96 |
模型组 | 878.34±89.32<sup>**</sup> | 1080.75±109.90<sup>**</sup> |
阳药组 | 692.27±91.03<sup>##</sup> | 851.80±112.01<sup>##</sup> |
JL-H组 | 712.45±75.86<sup>##</sup> | 876.63±93.34<sup>##</sup> |
JL-L组 | 751.90±73.47<sup>#</sup> | 924.84±90.24<sup>#</sup> |
注:与正常组相比,**P<0.01;与模型组相比,#P<0.05,##P<0.01。
结果显示,实验期间,与正常组相比,模型组小鼠结肠组织CD3蛋白表达面积及积分光密度均高于正常组,且出现显著差异(P<0.01);与模型组相比,阳性药组与JL-H组小鼠结肠组织CD3蛋白表达面积及积分光密度均低于模型组,且出现显著差异(P<0.01),JL-L组小鼠结肠组织CD3蛋白表达面积及积分光密度低于模型组,且出现显著差异(P<0.05)。
4.6实验小鼠结肠组织免疫组化染色Foxp3蛋白表达分析
免疫组化染色Foxp3蛋白表达图见图4。Foxp3蛋白表达分析结果见表12。
表12各组小鼠结肠组织Foxp3蛋白表达分析(n=6)
组别 | Area | IOD |
正常组 | 2159.73±1126.92 | 2353.98±1292.19 |
模型组 | 746.83±419.90<sup>*</sup> | 761.85±293.29<sup>*</sup> |
阳药组 | 2043.66±1602.57 | 2514.62±1971.88 |
JL-H组 | 1760.20±1798.41 | 2165.84±2212.86 |
JL-L组 | 1723.10±895.77<sup>#</sup> | 2120.19±1102.20<sup>#</sup> |
注:与模型组相比,#P<0.05。
结果显示,实验期间,与正常组相比,模型组小鼠结肠组织Foxp3蛋白表达面积及积分光密度均显著降低(P<0.05);与模型组相比,阳药组小鼠结肠组织Foxp3蛋白表达面积及积分光密度均出现升高趋势(P=0.08,P=0.06),JL-L组小鼠结肠组织Foxp3蛋白表达面积及积分光密度均高于模型组,且出现显著差异(P<0.05)。
5、结果分析
本研究对菊苓组合物防治溃疡性结肠炎作用进行初步探讨,结果显示,阳药组、菊苓高、低剂量组在给予相应药物后,各组小鼠一般状态好转,DAI评分、病理评分均提示小鼠结肠炎症状缓解,且小鼠血清IL-6、TNF-α及IL-1β炎症因子水平较模型组均显著降低,提示菊苓组合物可有效降低溃疡性结肠炎小鼠炎症反应。
免疫失衡可能是导致溃疡性结肠炎发病的重要因素之一。本实验小鼠结肠组织病理切片经CD3、Foxp3免疫组化染色结果显示,模型组小鼠T细胞亚群中CD3水平显著升高,而Foxp3水平呈现下降趋势,表明模型组小鼠已存在T细胞免疫失衡。经给药后,可见阳药组、菊苓高、低剂量组CD3水平显著降低,而Foxp3水平显著升高或有升高趋势,提示菊苓组合物可有效平衡T细胞数量,调节肠道免疫功能。
因此本研究结论为,菊苓组合物可有效降低溃疡性结肠炎小鼠的炎症反应,有良好的防治作用,并提示其可能是通过平衡T细胞数量发挥免疫调节作用,本发明初步探索了菊苓组合物在溃疡性结肠炎中的作用机制,为溃疡性结肠炎的防治提供了一种新的药物选择。
实施例4中药组合物胶囊剂的制备
组方:菊苣15g、茯苓15g。
制备方法:
S1,按比例取菊苣和茯苓,加入12倍重量去离子水,采用煎煮法,提取1h,收集提取液,再次加入10倍重量去离子水,第二次煎煮1h,合并两次提取液;
S2,浓缩:将得到的混合药液,在-0.09Mpa、80℃减压浓缩为稠膏;
S3,制备药粉:将得到的稠膏在-0.09Mpa、80℃减压干燥,得到干浸膏;取干浸膏,粉碎,过60目筛;
S4,加入适量的胶囊剂辅料,以常规方法制成胶囊剂。
实施例5中药组合物片剂的制备
组方:菊苣12g、茯苓15g。
制备方法:
步骤S1-S3同实施例1,加入适量的片剂辅料,以常规方法制成片剂。
实施例6中药组合物颗粒剂的制备
组方:菊苣10g、茯苓15g。
制备方法:
步骤S1-S3同实施例1,加入适量的颗粒剂辅料,以常规方法制成颗粒剂。
实施例7中药组合物滴丸剂的制备
组方:菊苣8g、茯苓15g。
制备方法:
步骤S1-S3同实施例1,加入适量的滴丸剂辅料,以常规方法制成滴丸剂。
实施例8中药组合物胶囊剂的制备
组方:菊苣提取物15g、茯苓提取物15g。
所述提取物分别为菊苣和茯苓的水提取物;加入适量的胶囊剂辅料,以常规方法制成胶囊剂。
实施例9中药组合物片剂的制备
组方:菊苣提取物13g、茯苓提取物15g。
所述提取物分别为菊苣和茯苓的水提取物;加入适量的片剂辅料,以常规方法制成片剂。
实施例10中药组合物颗粒剂的制备
组方:菊苣提取物9g、茯苓提取物15g。
所述提取物分别为菊苣和茯苓的水提取物;加入适量的颗粒剂辅料,以常规方法制成颗粒剂。
实施例11中药组合物滴丸剂的制备
组方:菊苣提取物11g、茯苓提取物15g。
所述提取物分别为菊苣和茯苓的水提取物;加入适量的滴丸剂辅料,以常规方法制成滴丸剂。
实施例12
组方:菊苣颗粒15g、茯苓颗粒15g。
所述颗粒分别为菊苣和茯苓的水提取物经过浓缩、干燥、制粒制备得到的颗粒。
实施例13
组方:菊苣颗粒17g、茯苓颗粒15g。
所述颗粒分别为菊苣和茯苓的水提取物经过浓缩、干燥、制粒制备得到的颗粒。
实施例14
组方:菊苣颗粒16g、茯苓颗粒15g。
所述颗粒分别为菊苣和茯苓的水提取物经过浓缩、干燥、制粒制备得到的颗粒。
实施例15
组方:菊苣颗粒14g、茯苓颗粒15g。
所述颗粒分别为菊苣和茯苓的水提取物经过浓缩、干燥、制粒制备得到的颗粒。
Claims (10)
1.一种防治溃疡性结肠炎的中药组合物,其特征在于,所述中药组合物的原料药为:菊苣和茯苓。
2.如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,所述中药组合物由如下原料药制成:菊苣6-18重量份、茯苓5-15重量份。
3.如权利要求2所述的中药组合物,其特征在于,所述中药组合物由如下原料药制成:菊苣8-17重量份、茯苓8-15重量份。
4.如权利要求3所述的中药组合物,其特征在于,所述中药组合物由如下原料药制成:菊苣12-16重量份、茯苓10-15重量份。
5.如权利要求4所述的中药组合物,其特征在于,所述中药组合物由如下原料药制成:菊苣15重量份、茯苓15重量份。
6.如权利要求1-5任一项所述的中药组合物,其特征在于,所述中药组合物为:原料药分别粉碎后再混合而成的组合物;或,原料药混合后经粉碎得到的组合物;或,上述原料药混合后按常规提取方法提取后得到提取物,提取物进一步经过精制纯化工艺得到有效部位,将上述提取物、有效部位进一步按照常规制剂工艺制备得到常规口服剂型。
7.如权利要求6所述的中药组合物,其特征在于,所述常规口服剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、口服液。
8.如权利要求1-5任一项所述的中药组合物在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎的药物中的应用。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述中药组合物在制备抑制溃疡性结肠炎炎症反应的药物中的应用。
10.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述中药组合物在制备增强肠道免疫功能的药物中的应用。
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