CN115697487A - 神经障碍的活性依赖性基因疗法 - Google Patents

神经障碍的活性依赖性基因疗法 Download PDF

Info

Publication number
CN115697487A
CN115697487A CN202180037438.5A CN202180037438A CN115697487A CN 115697487 A CN115697487 A CN 115697487A CN 202180037438 A CN202180037438 A CN 202180037438A CN 115697487 A CN115697487 A CN 115697487A
Authority
CN
China
Prior art keywords
vector
gene
nucleotide sequence
expression vector
expression
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180037438.5A
Other languages
English (en)
Inventor
G·利尼亚尼
D·M·库尔曼
S·肖格
Y·邱
M·C·沃克
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
UCL Business Ltd
Original Assignee
UCL Business Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by UCL Business Ltd filed Critical UCL Business Ltd
Publication of CN115697487A publication Critical patent/CN115697487A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A61K48/0058—Nucleic acids adapted for tissue specific expression, e.g. having tissue specific promoters as part of a contruct
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00—Modified animals
    • A01K2207/20—Animals treated with compounds which are neither proteins nor nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
    • A01K2267/0356—Animal model for processes and diseases of the central nervous system, e.g. stress, learning, schizophrenia, pain, epilepsy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPRs]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/001—Vector systems having a special element relevant for transcription controllable enhancer/promoter combination
    • C12N2830/002—Vector systems having a special element relevant for transcription controllable enhancer/promoter combination inducible enhancer/promoter combination, e.g. hypoxia, iron, transcription factor

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了包含编码多肽的多核苷酸序列的表达载体或载体系统，其中所述基因可操作地连接到适于驱动所述基因产物在受试者的神经细胞中表达的神经元活性依赖性启动子。所述表达载体的特征相结合以有利地改善对受试者的与神经元过度兴奋相关的神经障碍的治疗。本发明还提供了在相关治疗方法中使用的表达载体或载体系统，以及使用所述表达载体或载体系统的病毒颗粒、细胞、试剂盒和方法。

Description

神经障碍的活性依赖性基因疗法
本申请要求于2020年3月27日提交的GB2004498.8的优先权，其内容和要素出于所有目的通过引用并入本文。
技术领域
本发明总体上涉及包括以活性依赖方式表达的基因产物的方法和材料，所述基因产物可以用于治疗神经障碍，如癫痫。
背景技术
以神经元异常放电为特征的神经回路障碍给社会造成了巨大负担，并且药物治疗不充分。例如，癫痫影响高达1％的人群。在这些患者中，30％对药物治疗是难治的(“耐药”)，并且手术切除发生癫痫发作的脑区域(致癫痫区)仍然是实现无癫痫发作的最佳希望。然而，这种手术不适合许多人，因为有损害皮质的雄辩区域或涉及诸如记忆、语言、视觉或运动控制等功能的白质通路的风险(Kwan,P.等人(2011),N.Engl.J.Med.365,919-926；Picot,M.C.等人(2008),Epilepsia 49,1230-1238)。
新的抗癫痫药物对难治性癫痫几乎没有影响，并且癫痫发作未受控制的人继续经历共病、社会排斥和癫痫猝死(SUDEP)的重大风险。难治性癫痫主要是局灶性的(即，以致癫痫区引起的癫痫发作为特征)，但原发性全身性癫痫也可能对药物疗法具有抗性。
尽管手术切除致癫痫区可以实现无癫痫发作，但它不适合90％患有难治性癫痫的人。此外，手术切除的范围受到不可逆神经缺损风险的限制，这意味着许多接受手术的患者继续患有癫痫发作。使用激光的微创消融术在靶向脑中难以接近的深部结构方面具有作用，但是也受到损害邻近结构的风险的限制。深部脑刺激和其他神经调节治疗的有效性有限。
基因疗法作为手术治疗耐药性局灶性癫痫的合理替代方案是一种有前景的候选方案。例子包括神经肽Y和Y2受体的过表达(Woldbye等人,2010)、Kv1.1过表达(Wykes等人,2012；Snowball等人,2019；WO2018/229254)；使用只由设计药物激活的设计受体(DREADD)的化学遗传学，所述受体例如hM4Di(Katzel等人,2014)；以及使用增强型谷氨酸门控氯化物通道eGluCl(Lieb等人,2018)。
然而，目前的实验性基因疗法基于神经元兴奋性的永久性改变(神经递质、离子通道或受体过表达)或者光或化学物质的外源递送以实现神经元活性的按需调节(光遗传学和化学遗传学)。这些方法由于脱靶效应而具有局限性。它们不会区分参与癫痫发作的神经元与混合的“旁观者”神经元。通过类比，深部脑刺激(DBS)是靶向特定脑部位的疗法(例如，针对帕金森病、OCD和抑郁症)的一个例子，但是它不是细胞类型特异性的并且可产生副作用。此外，尽管可以按需使用光遗传学和化学遗传学，但决定何时通过光或药物递送来激活疗法需要另外的步骤，如人为干预或检测癫痫发作的计算机。一种避免这些限制中的一些限制的基因疗法是使用eGluCl，它响应于细胞外谷氨酸的积累(就像在癫痫中发生的那样)而打开，但是这种方法在常见形式的癫痫中的有效性是未知的，并且它依赖于非哺乳动物膜蛋白的永久性表达，这可能表示有免疫原性的风险。
因此，迫切需要开发具有更少的脱靶效应或副作用的对于难治性癫痫以及其他神经障碍的替代疗法。
发明内容
诸位发明人已经发现，通过使用神经元活性依赖性启动子来驱动或改变影响神经元特性的基因的表达，可以实现对驱动癫痫发作或促成在脑中传播癫痫发作的神经元的选择性调节。以这种方式，可以在更少的脱靶效应或副作用的情况下治疗神经障碍，如难治性癫痫。
例如，在一种情况下，当将钾通道基因KCNA1置于活性依赖性c-Fos启动子的控制下时，响应于强烈的神经元活性(例如，癫痫发作)而诱导KCNA1表达的上调，并且这会导致神经元兴奋性和神经递质释放降低，从而引起对癫痫发作开始或传播的易感性降低。如果回路活性恢复到接近正常水平，则启动子活性降低，并且钾通道的表达恢复到基线。因此，这种基因疗法对过度活跃的神经元(与旁观者神经元相反)和极度活跃持续的时间都是特异性的。
在另一种情况下，当将由dCas9(也称为核酸内切酶缺陷型cas9)和转录激活因子构成的融合蛋白置于活性依赖性c-Fos启动子的控制下时，响应于强烈的神经元活性(例如，癫痫发作)而诱导该蛋白的上调，并且在存在适当的单一指导RNA(sgRNA)的情况下，这可导致内源基因的表达改变。然后内源基因(例如，KCNA1)的表达改变会导致神经元兴奋性和神经递质释放降低，从而引起对癫痫发作开始或传播的易感性降低。如果回路活性恢复到接近正常水平，则启动子活性降低，并且融合蛋白(和内源基因)的表达恢复到基线。因此，同样，这种基因疗法对过度活跃的神经元(与旁观者神经元相反)和极度活跃持续的时间都是特异性的。
已经显示c-Fos启动子的活性响应于几种形式的强烈神经元激活而增加(例如，Hunt等人,1987PMID:3112583；Singewald等人,2003PMID:12586446)，并且还在星形胶质细胞(Morishita等人,PMID:21785243)、少突胶质细胞(Muir和Compston,1996PMID:8926624)和小胶质细胞(Eun等人,2004PMID:15522236)中报道了c-Fos激活。因此，无法预测在癫痫治疗中使用活性依赖性启动子将产生更少的脱靶效应。此外，无法预测以这种方式使用的活性依赖性启动子将提供足够的表达以在体内具有功能效应或改进的功能效应。
因此，在一个方面，本发明提供了一种用于在治疗受试者的与神经元过度兴奋相关的神经障碍的方法中使用的表达载体或载体系统，所述载体或载体系统如权利要求中所定义。在相关的情况下，术语“载体”在详细描述中可指“载体系统”。
在另一个方面，本发明提供了一种如权利要求中所定义的表达载体或表达载体系统。
在另一个方面，本发明提供了一种如权利要求中所定义的制备病毒颗粒的体外方法。在另一个方面，本发明提供了一种如权利要求中所定义的病毒颗粒，以及在如权利要求中所定义的方法中使用的此类病毒颗粒。
在另一个方面，本发明提供了一种如权利要求中所定义的试剂盒。
在另一个方面，本发明提供了一种如权利要求中所定义的治疗神经障碍的方法。在另一个方面，本发明提供了一种确认基因产物的存在的方法，所述方法如权利要求中所定义。
在另一个方面，本发明提供了一种如权利要求中所定义的细胞。
现在将更详细地讨论本发明的一些特定方面。
活性依赖性启动子
术语“神经元活性依赖性启动子”(或如本文可互换使用的“活性依赖性启动子”)是指响应于神经细胞中的神经元活性的变化而改变或驱动靶基因的表达的启动子。神经元活性的此类变化可能是由神经细胞变得过度兴奋(例如在癫痫发作期间)引起的。
所述神经细胞可以是神经元或神经胶质细胞。在特别优选的实施方案中，所述神经细胞是神经元。在一些实施方案中，所述神经元是皮质神经元。
在一些优选的实施方案中，所述神经元活性依赖性启动子是立即早期基因(IEG)启动子。如本文所用，术语“立即早期基因”(IEG)是在对包含lEG的细胞进行刺激后其表达立即增加的基因。例如，由神经元表达的在神经元刺激后立即展现出表达快速增加的基因是神经元IEG。已经发现此类神经元IEG编码多种多肽，包括转录因子、细胞骨架多肽、生长因子和代谢酶以及参与信号转导的多肽。对神经元IEG和它们编码的多肽的鉴定提供了关于神经元在例如学习、记忆、突触传递、耐受性和神经元可塑性中的功能的重要信息。
根据本发明可以使用许多合适的IEG启动子。在一些优选的实施方案中，所述IEG启动子包括c-Fos(或“cFos”)。c-Fos是一种核原癌基因，它牵涉许多重要的细胞事件，包括细胞增殖(Holt等人(1986)Proc.Natl.Acad.Set USA 831:4794-4798；Riabowol等人(1988)J.Cell.Biol.8:1670-1676)、分化(Distel等人(1987)Cell 49:835-844；Lord等人(1993)Mol Cell.Biol.13:841-851)和肿瘤发生(Cantor等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:10932-10936；Miller等人(1984)Cell 36:51-60；Ruther等人(1989)Oncogene4:861-865。
c-Fos编码一种62kDa的蛋白质，所述蛋白质与c-Jun形成异二聚体，从而形成AP-1转录因子，所述转录因子在AP-1元件处与DNA结合并刺激转录。Fos基因产物也可以抑制基因表达。Sassone等人(1988)Nature 334:314-319表明c-Fos抑制其自身的启动子，并且Gius等人(1990)和Hay等人(1989)表明c-Fos抑制早期响应基因Egr-1和c-myc。还已经显示AP-1因子可抑制MHC I类和PEPCK基因的表达(参见Gurney等人(1992)J Biol.Chem.267:18133-18139)。
c-Fos调节区域的激活可以发生在多种细胞类型中。当靶细胞是神经元时，足以激活c-Fos调节区域的刺激可包括但不限于例如神经元激活，包括突触激活、电生理激活等。
在一些实施方案中，c-Fos启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQID NO:3的核苷酸序列。在一些实施方案中，c-Fos启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：与SEQ ID NO:3的核苷酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列。
在一些情况下，c-Fos启动子包含CREB、SRE、AP1和SIF基序。在一些情况下，c-Fos启动子由CREB、SRE、AP1和SIF基序组成。
CREB-TF(CREB，cAMP响应元件结合蛋白)是一种细胞转录因子。它与某些称为cAMP响应元件(CRE)的DNA序列结合，从而增加或减少基因的转录。血清响应因子(也称为SRF)是一种转录因子蛋白。这种蛋白与靶基因的启动子区域中的血清响应元件(SRE)结合。这种蛋白调节许多立即早期基因(例如，c-fos)的活性，从而参与细胞周期调节、凋亡、细胞生长和细胞分化。激活蛋白1(AP1)是一种响应于各种刺激(包括细胞因子、生长因子、应激以及细菌和病毒感染)而调节基因表达的转录因子。Sis诱导因子(SIF)结合元件赋予c-fos启动子sis/PDGF诱导能力。
在其他实施方案中，活性依赖性启动子是Egr1(也称为Zif268)、Arc、Homer1a、Bdnf、Creb、Srf、Mef2、Fosb和Npas4或合成的活性依赖性启动子(如PRAM(
Figure BDA0003952754770000031
等人,eLife2016)和ESARE(Kawashima等人,Nature Methods 2013PMID:23852453))，或者可以使用它们的一部分或上述的组合来代替c-Fos。
在一些实施方案中，Egr1启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQID NO:18的核苷酸序列。在一些实施方案中，Egr1启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：与SEQ ID NO:18的核苷酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列。
在一些实施方案中，活性依赖性启动子是Arc或Arc最小序列(mArc)。Arc是一种主要在海马体和新皮质中的谷氨酸能神经元中表达的活性调节的细胞骨架相关蛋白，在神经胶质细胞中很少表达或不表达。在一些实施方案中，Arc或mArc启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:15的核苷酸序列。在一些实施方案中，mArc启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：与SEQ ID NO:15的核苷酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列。mArc启动子是全长Arc启动子的截短形式。
在其他实施方案中，活性依赖性启动子是PRAM(启动子稳健活性标记)或该合成启动子的部分：NRAM(NPAS4稳健活性标记)或FRAM(Fos稳健活性标记)。PRAM由插入中央中线元件(CME)中以形成由转录激活支持的二级结构的核心NRE/AP-1DNA基序的重复组成。它们具有更长的激活窗口，潜在地能够驱动更稳定和更少地瞬时表达可操作连接的基因。NRAM包含具有最小人c-fos启动子的NPAS-4响应元件(NPAS4的共有结合基序)。FRAM由AP-1模块(FOS/JUN家族转录因子的共有结合序列)和人c-fos最小启动子组成(参见例如Sun等人,Cell第181卷,第2期,2020年4月16日,第410-423页.e17)。在一些实施方案中，PRAM、FRAM和NRAM启动子包含含有以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:17的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：与SEQ ID NO:17的核苷酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列。
在其他实施方案中，活性依赖性启动子是E-SARE(增强型突触活性响应元件)。这种合成启动子含有五个用于CREB、MEF2和SRF结合以供转录起始的SARE基序的重复以及一个最小Arc启动子(mArc)。SARE是Arc启动子的一部分。SARE基序调节立即早期基因Arc的诱导。Mef2是心脏发育和心脏基因表达的关键调节因子。在一些实施方案中，E-SARE启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:16的核苷酸序列。在一些实施方案中，E-SARE启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：与SEQ IDNO:16的核苷酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列。
NRAM和E-SARE都由来自天然启动子的序列构成。NRAM包含Npas4启动子的一部分。E-SARE基于来自Arc启动子的序列的串联重复。
在一些实施方案中，活性依赖性启动子例如通过驱动短发夹RNA(shRNA)或与内源钠通道的信使RNA结合的另一种类型的RNA或其他蛋白质的转录来抑制基因的表达水平。
优选基因和基因产物
在一些优选的实施方案中，可操作地连接到权利要求中定义的活性依赖性启动子的基因是KCNA1。KCNA1(基因ID 3736，又称为钾电压门控通道亚家族A成员1，KV1.1、HBK1和RBK1)是编码人Kv1.1钾通道亚单位(又称为钾电压门控通道亚家族A成员1)的人基因。“野生型KCNA1基因”是指在人细胞中发现的编码人Kv1.1钾通道亚单位的核酸分子。KCNA1基因可包括编码序列上游或下游的调节序列。野生型KCNA1基因的核苷酸序列(包括非编码5'和3'非翻译区(5'和3'UTR)在NCBI参考序列NM_000217.2中提供。野生型KCNA1基因的编码序列具有SEQ ID NO:4的核苷酸序列，所述核苷酸序列对应于NCBI参考序列NM_000217.2的位置1106至2593。
在一些优选的实施方案中，由权利要求中定义的基因编码的基因产物是Kv1.1钾通道亚单位。Kv1家族通道由四个亚单位构成。尽管四个Kv1.1亚单位本身可以构成一个功能性通道，但哺乳动物神经系统中存在的含Kv1.1的钾通道通常也含有来自Kv1家族的其他亚单位，因此完整的四聚体通道可含有Kv1.1以及不同化学计量的Kv1.2或Kv1.4。术语“Kv1.1通道”可互换使用以指示Kv1.1通道亚单位或者指示含有至少一个Kv1.1亚单位的同源四聚体或异源四聚体通道。
Kv1.1钾通道是一种在系统发生上与果蝇Shaker通道有关的电压门控延迟整流钾通道。野生型Kv1.1钾通道亚单位的氨基酸序列具有与NCBI参考序列NP_000208.2相同的SEQ ID NO:5的氨基酸序列。电压依赖性钾通道通过响应于电压而打开和关闭钾选择性孔隙来调节兴奋性。在许多情况下，当细胞内颗粒堵塞孔隙时，钾离子流会中断，这一过程称为快速失活。Kv1钾通道亚单位具有六个推定的跨膜区段，并且构成完整通道的四个Kv1亚单位中的每个亚单位的第五个区段与第六个区段之间的环形成孔隙。
在细胞中的正常生产期间，细胞中的一些KCNA1 RNA由作用于RNA的腺苷脱氨酶(ADAR)编辑，所述ADAR在位于第六个跨膜结构域内的单个位置I400处引起异亮氨酸/缬氨酸(I/V)重新编码事件并且铺垫于离子传导孔隙的内部前庭(Hoopengardner等人,Science301(5634):832-6,2003)。在负膜电位下，含有未编辑I400的通道从失活恢复的速率比它们的编辑(V400)对应物慢大约二十倍(Bhalla等人,2004)。
在一些优选的实施方案中，本发明涉及基因产物的活性依赖性表达，所述基因产物是编辑的Kv1.1钾通道。“编辑的Kv1.1钾通道”是功能性Kv1.1钾通道，但含有上述异亮氨酸/缬氨酸突变。认为这些编辑的Kv1.1钾通道从失活恢复比它们的未编辑对应物快得多。
在一些实施方案中，编辑的Kv1.1钾通道具有与SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列，条件是它还在对应于SEQ ID NO:2中所示的氨基酸残基400的位置(“编辑位置”)处含有缬氨酸氨基酸残基。在一些优选的实施方案中，编辑的Kv1.1钾通道具有包含以下或由以下组成的氨基酸序列：SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列。
可以通过本领域已知的方法来鉴定在对应于SEQ ID NO:2中所示的氨基酸残基400的位置处含有缬氨酸氨基酸残基的编辑的Kv1.1钾通道。例如，可以通过SEQ ID NO:2的氨基酸序列与感兴趣的编辑的Kv1.1钾通道的氨基酸序列之间的序列比对来鉴定编辑位置。然后，此类序列比对可以用于鉴定感兴趣的编辑的Kv1.1钾通道中的编辑位置，所述编辑位置至少在所述比对中与SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列中的氨基酸残基400处的编辑位置接近或处于相同位置。
功能性Kv1.1钾通道是一种保留钾通道的正常活性的蛋白质，例如，所述通道能够响应于电压而打开和关闭。测试Kv1.1钾通道有功能的方法是本领域已知的，其中一些方法在本文中描述。简而言之，用于确认Kv1.1钾通道有功能的合适方法包括用编码Kv1.1钾通道的表达载体转染细胞以及使用诸如膜片钳的电生理技术来记录钾通道的电流。
野生型Kv1.1钾通道在如SEQ ID NO:5中所示的位置379处包含酪氨酸氨基酸。在一些实施方案中，编辑的Kv1.1钾通道在对应于SEQ ID NO:2中所示的氨基酸残基379的位置处包含酪氨酸氨基酸残基。
在其他实施方案中，编辑的Kv1.1钾通道在对应于SEQ ID NO:2中所示的氨基酸残基379的位置处包含缬氨酸氨基酸残基。具有该氨基酸序列的编辑的Kv1.1钾通道的一个例子在SEQ ID NO:12中示出。不希望受任何特定理论的束缚，认为Y379V突变会降低Kv1.1通道对四乙铵(TEA)的敏感性，而不改变钾通道的功能特性。例如，这种敏感性的变化允许在膜片钳电生理学实验中将转基因Kv1.1通道与它们的野生型对应物在药理学上分离(Heeroma等人2009)。
在一些实施方案中，使用“工程化KCNA1基因”。工程化KCNA1基因不同于如本文所述的野生型KCNA1基因的核苷酸序列，但仍编码功能性Kv1.1钾通道。如本文所用，工程化KCNA1基因具有与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。在一些优选的实施方案中，工程化KCNA1基因具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQID NO:7中所示的核苷酸序列。
如上所述，本发明的一个实施方案包括编码编辑的钾通道的工程化KCNA1基因，所述编辑的钾通道在位置379处包含缬氨酸氨基酸残基，如SEQ ID NO:12中所示。编码SEQIDNO:12中所示的氨基酸序列的工程化KCNA1基因的一个例子是SEQ ID NO:11中所示的核苷酸序列。在一些实施方案中，工程化KCNA1基因具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:11中所示的核苷酸序列，或者与SEQ ID NO:11中所示的核苷酸序列具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
在其他实施方案中，基因产物是影响神经元兴奋性或神经递质释放的另一种蛋白质，包括其他钾通道(如Kv1.2)或神经递质受体(如GABAa或GABAb受体、腺苷A1受体和NPYY2或Y5受体)或神经肽(如甘丙肽、NPY或强啡肽)。
在一些优选的实施方案中，可操作地连接到活性依赖性启动子的基因在权利要求中定义为KCNJ2。KCNJ2编码通常在骨骼肌中表达的内向整流钾通道Kir2.1。Kir2.1有助于维持负静息膜电位，从而降低内在兴奋性。
在一些优选的实施方案中，由权利要求中定义的基因编码的基因产物是上文所述的内向整流钾通道Kir2.1。本文提供了KCNJ2的核苷酸序列。
在一些实施方案中，KCNJ2基因具有与SEQ ID NO:13中所示的核苷酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，Kir2.1基因具有与SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，本发明涉及中间基因产物的活性依赖性表达，所述中间基因产物通过改变(增加或减少)另外的基因或基因产物的表达来间接地影响神经元兴奋性，所述另外的基因或基因产物可以是内源的基因或基因产物。另外/内源的基因或基因产物可以是本文所述的任何基因或基因产物，如KCNA1或KCNJ2。其他另外/内源的基因或基因产物包括神经递质受体(如GABAa或GABAb受体、腺苷A1受体和NPY Y2或Y5受体)或神经肽(如甘丙肽、NPY或强啡肽)。
在一些情况下，通过中间基因产物的活性依赖性表达来改变另外的基因或基因产物的表达可以通过由dCas9(也称为核酸内切酶缺陷型Cas9)和转录激活因子构成的融合蛋白的活性依赖性表达来实现。融合蛋白也可由任何合适的dcas蛋白(如spCas9或saCas9)构成。在存在适当的单一指导RNA(sgRNA)的情况下，这种策略(也称为CRISPR激活(CRISPRa))可导致另外的基因(如降低神经元兴奋性的KCNA1)的转录增加。在一些情况下，sgRNA以100％的效率靶向靶序列。sgRNA可组成型表达并且可操作地连接到单独的启动子，如RNA聚合酶III(例如，U6)。单独的启动子也可以是适于表达sgRNA的任何启动子，如RNA聚合酶，例如RNA聚合酶II。sgRNA和单独的启动子也可包含在本文公开的表达载体和载体系统中或与它们分开。在一些情况下，sgRNA也可以可操作地连接到活性依赖性启动子或中间诱导型启动子如Tet-On。
在一些实施方案中，sgRNA包含以下或由以下组成：与SEQ ID NO:37中所示的核苷酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。
间接地影响神经元兴奋性的中间基因产物的活性依赖性表达可经由中间表达系统(如中间诱导型表达系统)来实现。此类中间表达系统在一般意义上是本领域已知的，并且可由技术人员适当地选择以便优化中间基因或另外的基因的表达。
例如，中间表达系统可以是诱导型表达系统，如Tet-On。参见例如Gaia Colasante等人(Brain,第143卷,第3期,2020年3月,第891-905页,https://doi.org/10.1093/brain/awaa045)，其内容通过引用以其整体并入本文。本发明的此方面的一个示例性实施方案在图25中示出。在该实施方案中，中间基因是rtTA和/或dCas9，并且还可编码另外的转录激活因子。
在目前可用的诱导型基因表达系统中，Tet-On是最广泛表征的。在一些实施方案中，为了改善人受试者的脑渗透并减少副作用，中间诱导型基因表达系统可以是“GeneSwitchTM”系统。“GeneSwitchTM”使用由对内源性类固醇无反应的截短人孕酮受体连同Gal4 DNA结合结构域和P65激活结构域组成的嵌合蛋白。所述受体被米非司酮激活，米非司酮将复合物从共阻遏物中释放出来，并允许其通过与上游激活序列(UAS)结合来启动所需基因在细胞核中的转录。
中间表达系统还可以包括调节优化的蜕皮激素响应性启动子的经修饰蜕皮激素受体的表达。中间表达系统还可以基于cumate诱导的cumate阻遏物与cumate操纵子的结合、雷帕霉素诱导的FKBP12与FRAP之间的相互作用、FKCsA诱导的FKBP与亲环蛋白之间的相互作用、ABA诱导的PYL1与ABI1之间的相互作用以及“核糖开关”系统。(Kallunki等人PMC6721553)。
已经报道，上调小鼠Kcna1表达的组成型CRISPRa具有抗癫痫作用(Colasante等人,2020)。然而，无法预测将CRISPRa置于活性依赖性启动子如c-Fos的控制下将产生具有本文公开的有利特性(例如，参与癫痫发作的神经元的时间可逆性和空间特异性)的活性依赖性抗癫痫活性。本文提供了dCas9和转录激活因子VP64的核苷酸序列，以及识别小鼠Kcna1基因的启动子序列的sgRNA的序列。
氨基酸或核苷酸序列同一性百分比的比对和计算可以以本领域技术人员已知的各种方式来实现，例如，使用可公开获得的计算机软件，如ClustalW 1.82、T-coffee或Megalign(DNASTAR)软件。在使用这种软件时，优选地使用例如关于空位罚分和延伸罚分的默认参数。ClustalW 1.82的默认参数为：蛋白质空位开放罚分＝10.0，蛋白质空位延伸罚分＝0.2，蛋白质矩阵＝Gonnet，蛋白质/DNA ENDGAP＝-1，蛋白质/DNA GAPDIST＝4。
然后可以由多重比对将同一性百分比计算为(N/T)*100，其中N是两个序列共享相同残基的位置的数量，并且T是所比较的位置的总数量。替代性地，可以将同一性百分比计算为(N/S)*100，其中S是所比较的较短序列的长度。氨基酸/多肽/核酸序列可从头合成，或者可以是天然氨基酸/多肽/核酸序列或其衍生物。
由于遗传密码的简并性，显然任何核酸序列可以在基本上不影响由此编码的蛋白质的序列的情况下进行变化或改变，以提供其功能变体。合适的核苷酸变体是具有通过在序列内取代编码相同氨基酸的不同密码子，从而产生沉默变化而改变的序列的那些。其他合适的变体是具有同源核苷酸序列，但是包含通过以下方式改变的序列的全部或一部分的那些：用与它所取代的氨基酸具有相似的生物物理特性的侧链取代编码氨基酸的不同密码子以产生保守变化。例如，小的非极性疏水性氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甲硫氨酸。大的非极性疏水性氨基酸包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。极性中性氨基酸包括丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。带正电的(碱性)氨基酸包括赖氨酸、精氨酸和组氨酸。带负电的(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。
在一些实施方案中，基因产物的表达水平在神经元变得更加兴奋时增加并且在神经元变得不那么兴奋时降低。
障碍
本发明的一个方面提供了在如权利要求中所定义的治疗与受试者的神经元过度兴奋相关的神经障碍的方法中使用的表达载体。所述治疗方法可以是预防性的。
在某些方面，本发明还提供了如本文所述的表达载体和病毒颗粒用来制造用于治疗人或动物受试者的所述神经障碍的药物的用途、在治疗人或动物受试者的所述神经障碍中使用的如本文所述的表达载体以及治疗所述神经障碍的方法，所述方法包括将如本文所述的表达载体和病毒颗粒施用于对其有需要的个体。所述动物受试者可以是小鼠或大鼠。
在一些实施方案中，所述治疗方法在癫痫发作结束后是自限性的(“闭环”或“闭合环路”疗法)。
如本文所述的神经障碍与神经元过度兴奋相关。如本文所用，“过度兴奋”是癫痫的典型特征，其中神经网络变得过度同步、神经元过度放电的可能性增加。潜在的机制还没有完全了解，并且可包括抑制性神经元(如GABAergic中间神经元)(其通常会平衡其他神经元的兴奋性)的丧失；或者兴奋神经元的内在特性发生变化，这使它们更有可能异常放电。其他可能的机制包括GABA的水平和GABAA受体对神经递质的敏感性可能降低，从而导致抑制更少。
与神经元过度兴奋相关的神经障碍的非限制性例子包括癫痫发作障碍(如癫痫)、阿尔茨海默病、多发性硬化症、帕金森病、震颤和其他运动障碍、慢性疼痛、偏头痛、重度抑郁症、双相障碍、焦虑和精神分裂症。在特别优选的实施方案中，所述治疗用于癫痫，例如特发性、症状性和隐源性癫痫。在特别优选的实施方案中，所述癫痫是新皮质癫痫、颞叶癫痫，尤其是它对在治疗浓度下使用的药物有抗性的情况(耐药性或难治性癫痫)。
在一些情况下，癫痫发作伴随着深度去极化和皮质中锥体神经元以大于50Hz的频率放电的脉冲群，这些在生理环境中很少发生。尽管活性依赖性启动子已被用于标记已被非常强烈的感觉刺激或其他刺激(外周伤害感受器刺激、诱发恐惧的电击、可卡因)募集的神经元，但来自神经元的记录暗示着癫痫发作诱发的活性水平远高于此类刺激。此外，已经显示其中此类感觉刺激诱导活性依赖性启动子功能的CNS区域与癫痫发作中通常涉及的那些区域不同。
在一些优选的实施方案中，神经障碍是以一种以细胞活性异常发作为特征的障碍，如偏头痛、丛集性头痛、三叉神经痛、疱疹后神经痛、阵发性运动障碍、单相或双相情感障碍、焦虑和恐惧。在一些此类障碍(特别是偏头痛)中，异常活性可导致神经元去极化和电静默(称为皮质扩散去极化或皮质扩散抑制)，并且这种现象与癫痫猝死(SUDEP)有关。
本文所述的治疗可用于猝灭或阻断癫痫活性。所述治疗可用于减少癫痫发作的频率。所述治疗可用于暂时(例如，在2、6、24、48或72小时内)或永久降低异常神经元兴奋性。
在一些实施方案中，所述载体不影响受试者的自发运动或记忆，任选地其中使用旷场测试、目标定位测试或T形迷宫测试来测量自发运动或记忆。
在一些实施方案中，所述表达载体仅在受试者的脑的癫痫发作病灶中局部活跃。在一些情况下，所述表达载体仅在能够驱动癫痫发作和/产生持续放电的神经元中局部活跃。在一些情况下，所述表达载体仅在过度去极化的神经元中局部活跃。
在一些实施方案中，所述载体或载体系统可以引起受试者的神经元的尖峰频率降低超过5％、或超过10％、或超过20％、或超过30％、或超过40％、或超过50％、或超过60％、或超过70％、或超过80％、或超过90％、或超过91％、或超过92％、或超过93％、或超过94％、或超过95％、或超过96％、或超过97％、或超过98％、或超过99％或100％。
在一些实施方案中，所述载体或载体系统可以引起受试者的神经元的尖峰频率降低超过75％。可以在21DIV(体外天数)时或之后使用多电极阵列来测量神经元的尖峰频率的所述降低。也可在21DIV时或之后使用钙成像或细胞外场电位记录来测量尖峰频率的所述降低。相对于包含SEQ ID NO:6的载体测量神经元的尖峰频率的所述降低。在一些情况下，所述神经元是原代皮质神经元。
在一些实施方案中，所述载体或载体系统可以在神经元中引起每秒少于10个动作电位、或每秒少于5个动作电位、或每秒少于4个动作电位、或每秒少于3个动作电位、或每秒少于2个动作电位、或每秒没有动作电位。在一些实施方案中，所述载体或载体系统可以引起每秒动作电位降低大于50％、大于55％、大于60％、大于65％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％、大于95％或100％。可使用离体急性海马体切片电生理学来测量动作电位的数量。
在一些实施方案中，所述载体或载体系统可以导致神经元中的静息膜电位为小于-50mV、或小于-60mV、或小于-70mV、或小于-80mV、或小于-90mV、或小于-100mV。在一些实施方案中，所述载体或载体系统可以将神经元中的动作电位的阈值增加到超过50pA、或超过75pA、或超过100pA、或超过150pA、或超过200pA、或超过250pA、或超过300pA、或超过350pA、或超过400pA、或超过450pA、或超过500pA、或超过550pA、或超过600pA、或超过700pA、或超过800pA、或超过900pA、或超过1000pA，其中所述阈值是电流阈值与维持电流之和。
在一些实施方案中，所述载体或载体系统可以在多电极阵列(MEA)上生长的原代神经元培养物中引起小于5个尖峰/秒，如实施例中所述。尖峰被定义为聚合的神经元活性。在一些实施方案中，所述载体或载体系统可以在MEA上生长的原代神经元培养物中引起小于10次或小于5次脉冲群/分钟，如实施例中所述。在一些实施方案中，所述载体或载体系统可以在MEA上生长的原代神经元培养物中引起脉冲群持续时间小于200毫秒，如实施例中所述。在一些实施方案中，所述载体或载体系统可以在MEA上生长的原代神经元培养物中引起每次脉冲群的平均尖峰数量少于20或少于15，如实施例中所述。
在一些实施方案中，在来自受试者的急性海马体切片中测量动作电位的数量、静息膜电位或动作电位的阈值。在一些实施方案中，使用急性海马体切片电生理学和/或膜片钳电生理学来测量动作电位的数量、静息膜电位或动作电位的阈值。
在一些实施方案中，所述载体或载体系统可以在驱动受试者第二次癫痫发作的神经元中产生比驱动受试者第一次癫痫发作的神经元中的抗癫痫作用更大的抗癫痫作用。在一些实施方案中，使用本文所述的任何适当方法来测量抗癫痫作用。
在一些情况下，所述载体或载体系统可以预防受试者第二次癫痫发作，其中所述第二次癫痫发作在受试者第一次癫痫发作之后。
施用和剂量
可以以多种方式将本文所述的病毒颗粒和表达载体递送给受试者，如将病毒颗粒直接注射到脑中。例如，所述治疗可涉及将病毒颗粒直接注射到大脑皮质，特别是新皮质或海马体结构。另一个注射部位是疑似产生癫痫发作的皮质畸形或错构瘤区域，如在局灶性皮质发育不良或结节性硬化症中发生的那样。所述治疗可涉及将病毒颗粒直接注射到脑中的被认为在功能上与障碍相关的位置。例如，在所述治疗用于肌阵挛型癫痫的情况下，这可涉及将病毒颗粒直接注射到运动皮质中；在所述治疗用于慢性或阵发性疼痛的情况下，这可涉及将病毒颗粒直接注射到背根神经节、三叉神经节或蝶腭骨神经节中；并且在所述治疗用于帕金森病的情况下，这可涉及将病毒颗粒直接注射到黑质、丘脑底核、苍白球或壳核中。特定的施用方法和部位将由医师决定，该医师还将使用他/她的公知常识和熟练的从业者已知的那些技术来选择施用技术。
本发明还可用于通过直接注射到多个鉴定的基因座中来同时治疗多个癫痫病灶。
患者可以是已被诊断为患有耐药性或药物难治性癫痫的人，所述耐药性或药物难治性癫痫意味着尽管充分施用抗癫痫药物，但癫痫发作仍在继续。
受试者可以是已被诊断为患有影响脑新皮质的单个区域的明确局灶性癫痫的人。例如，局灶性癫痫可由发育异常或者在中风、肿瘤、穿透性脑损伤或感染后引起。
在施用病毒颗粒后，接受个体可展现出正在治疗的疾病或障碍的症状减轻。例如，对于正在治疗的患有癫痫发作障碍(如癫痫)的个体，接受个体可展现出癫痫发作的频率或严重程度降低。这可能对个体的疾病状况具有有益效果。
如本文在治疗病症的上下文中所用的术语“治疗”通常涉及人的治疗和疗法，其中实现了一些希望的治疗效果(例如，抑制病症的进展)，并且包括降低进展速度、停止进展速度、消退病症、改善病症和治愈病症。还包括作为预防措施的治疗(即，预防、防范)。
可以以治疗有效量递送所述病毒颗粒。
如本文所用的术语“治疗有效量”涉及当根据期望的治疗方案施用时有效产生一些期望的治疗效果(与合理的益处/风险比相称)的病毒颗粒的量。
类似地，如本文所用的术语“预防有效量”涉及当根据期望的治疗方案施用时有效产生一些期望的预防效果(与合理的益处/风险比相称)的病毒颗粒的量。
本说明书的上下文中的“预防”不应被理解为描述完全成功，即完全保护或完全防范。相反，本上下文中的预防是指在检测到症状性病症之前施用的措施，其目的是通过帮助延迟、减轻或避免该特定病症来保持健康。
虽然可以单独使用(例如，施用)病毒颗粒，但通常优选将其作为组合物或配制品例如与药学上可接受的载体或稀释剂一起提供。
如本文所用的术语“药学上可接受的”涉及在合理的医学判断范围内适合用于与有关受试者(例如，人)的组织接触使用而没有过多的毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症(与合理的益处/风险比相称)的化合物、成分、材料、组合物、剂型等。在与配制品的其他成分相容的意义上，每种载体、稀释剂、赋形剂等也必须是“可接受的”。
在一些实施方案中，所述组合物是包含如本文所述的病毒颗粒(作为唯一活性成分)和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂或者基本上由或由如本文所述的病毒颗粒和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂组成的药物组合物(例如，配制品、制剂、药物)。
如WO 2008096268中所述，在采用病毒颗粒递送的基因疗法实施方案中，可按照所施用的病毒颗粒的剂量来计算单位剂量。病毒剂量包括特定数量的病毒颗粒或噬斑形成单位(pfu)。对于涉及腺病毒的实施方案，特定的单位剂量包括103、104、105、106、107、108、109、1010、1011、1012、1013或1014个pfu。由于存在感染缺陷型颗粒，颗粒剂量可能略微更高(10至100倍)。
在一些实施方案中，可将本发明的方法或治疗与其他疗法(无论是症状修正还是疾病修正)组合。
术语“治疗”包括其中将两种或更多种治疗或疗法例如依序或同时组合的组合治疗和疗法。
例如，将用如本文所述的化合物治疗与一种或多种其他(例如，1、2、3、4种)药剂或疗法组合可能是有益的。
基于本文的公开文本，本领域技术人员将知晓联合治疗剂的适当例子。通常，联合治疗剂可以是本领域已知的任何被认为可在治疗本文所述的疾病中产生治疗效果(受制于正在治疗的个体的诊断)的药物。例如，癫痫有时可以通过直接治疗潜在病因来改善，但抑制异常放电和癫痫发作的抗惊厥药物(如苯妥英、加巴喷丁、拉莫三嗪、左乙拉西坦、卡马西平、氯巴占、托吡酯等)是常规治疗的支柱(Rho&Sankar,1999,Epilepsia 40:1471-1483)。
特定的组合将由医师决定，该医师还将使用他/她的公知常识和熟练的从业者已知的给药方案来选择剂量。
所述药剂(即，病毒颗粒，加上一种或多种其他药剂)可同时或依序施用，并且可以按个体变化的剂量方案和经由不同途径施用。例如，当依序施用时，可以以紧密的间隔(例如，在5-10分钟的时间段内)或以更长的间隔(例如，相隔1、2、3、4个或更多个小时，或在必要时相隔甚至更长的时间段)施用所述药剂，精确的剂量方案与所述一种或多种治疗剂的特性相称。
表达载体
如本文所用的表达载体是用于在细胞中转移和表达外来遗传物质的DNA分子。此类载体包括可操作地连接到编码待表达蛋白质的基因的启动子序列。“启动子”意指足以指导与其可操作连接的DNA序列转录的最小DNA序列。“启动子”还意在涵盖那些足以用于关于细胞类型特异性表达而言可控制的启动子依赖性基因表达的启动子元件；此类元件可位于天然基因的5'或3'区域。替代性地，表达载体可以是由于逆转录酶而经历逆转录成DNA的RNA分子。
表达载体还可包括终止密码子和表达增强子。任何合适的载体、增强子和终止密码子都可用于从根据本发明的表达载体表达基因产物，如编辑的Kv1.1钾通道。合适的载体包括质粒、二元载体、噬菌体、噬菌粒、病毒载体和人工染色体(例如，酵母人工染色体或细菌人工染色体)。如下文更详细地描述，优选的表达载体包括病毒载体，如AAV载体。
表达载体可另外包括编码报告蛋白的报告基因。报告蛋白的一个例子是绿色荧光蛋白(“GFP”)。报告基因可以可操作地连接到其自身的启动子，或更优选地，可以可操作地连接到与如本发明中所定义的基因产物相同的启动子。作为一个例子，KCNA1基因和报告基因可以位于编码2A肽(如T2A肽)的序列的任一侧。2A肽是短序列(约20个氨基酸)，它们通过在核糖体介导的翻译期间削弱肽键形成来允许从单个启动子表达多顺反子基因(Szymczak和Vignali,2005)。使报告基因可操作地连接到与基因产物相同的启动子被认为充当基因产物表达的可靠指标。包括报告基因的表达载体在临床前应用中可能特别有用，例如用于其中它可以用于帮助评估基因表达的定位的动物模型。所述编码GFP的基因可以是GFP、dsGFP或dscGFP。
在其他实施方案中，所述表达载体缺少编码报告蛋白的序列。例如，出于监管原因，这可能是优选的。在本发明的实施方案中，报告或检测本公开文本的基因产物可以按不同的方式来实现-例如基于其工程化序列。在一些实施方案中，所述表达载体缺少编码GFP的序列和/或编码2A肽如T2A肽的序列。
一般而言，本领域技术人员能够很好地构建用于重组基因表达的载体和设计方案。可以选择或构建合适的载体，除上述本发明的元件外，所述载体还含有适当的调节序列，包括启动子序列、终止子片段、多腺苷酸化序列、标记基因和适当的其他序列。适用于在细胞中表达多肽的分子生物学技术是本领域熟知的。有关进一步的细节，参见例如Molecular Cloning:a Laboratory Manual:第2版,Sambrook等人,1989,Cold SpringHarbor Laboratory Press或Current Protocols in Molecular Biology,第2版,Ausubel等人编,John Wiley&Sons(1995，以及定期增刊)。
本文使用的术语“可操作地连接”包括以下情况：选择的基因和启动子以将基因的表达(即，多肽编码)置于启动子的影响或控制下的方式共价连接。因此，如果启动子能够影响基因在细胞中转录成RNA，则启动子可操作地连接到基因。在适当的情况下，所得的RNA转录物然后可被翻译成期望的蛋白质或多肽。所述启动子适用于实现可操作连接的基因在哺乳动物细胞中的表达。优选地，所述哺乳动物细胞是人细胞。
所公开的基因(如工程化KCNA1基因)和基因产物(如编辑的Kv1.1钾通道)可以具有如本文关于表达载体所述的必要特征和序列同一性。
在一些优选的实施方案中，所述表达载体包含以下或由以下组成：与以下序列中的一个具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列：
mArc-dsGFP-KCNA1(SEQ ID NO:19)；mArc-dsGFP-KCNJ2(SEQ ID NO:21)；ESARE-dsGFP-KCNA1(SEQ ID NO:23)；ESARE-dsGFP-KCNJ2(SEQ ID NO:25)；NRAM-hCfos-dsGFP-KCNA1(SEQ ID NO:27)；NRAM-hCfos-dsGFP-KCNJ2(SEQ IDNO:29)；Egr1-dsGFP-KCNA1(SEQID NO:31)；Egr1-dsGFP-KCNJ2(SEQ ID NO:33)。
在一些实施方案中，所述表达载体如图1-图35中的任一个所示。
病毒载体
用于与本发明一起使用的优选表达载体是病毒载体，如慢病毒或AAV载体。特别优选的表达载体是腺相关病毒载体(AAV载体)。
在一些情况下，所述载体是重组AAV载体。AAV载体是大小相对较小的DNA病毒，它们可以以稳定和位点特异性方式整合到它们感染的细胞的基因组中。它们能够感染广泛的细胞，而不会对细胞生长、形态或分化产生显著影响。AAV基因组已被克隆、测序和表征。它涵盖大约4700个碱基，并且在每个末端含有大约145个碱基的反向末端重复(ITR)区域，所述区域用作病毒复制的起点。基因组的其余部分被分为两个承载衣壳化功能的必要区域：基因组的左侧部分，它含有参与病毒复制和病毒基因表达的rep基因；以及基因组的右侧部分，它含有编码病毒的衣壳蛋白的cap基因。
可使用本领域的标准方法来制备AAV载体。任何血清型的腺相关病毒都是合适的(参见例如Blacklow,"Parvoviruses and Human Disease"J.R.Pattison编(1988)的第165-174页；Rose,Comprehensive Virology 3:1,1974；P.Tattersall"The Evolution ofParvovirus Taxonomy"in Parvoviruses(J R Kerr,S F Cotmore.M E Bloom,R MLinden,C R Parrish编)第5-14页,Hudder Arnold,London,UK(2006)；以及D E Bowles,JE Rabinowitz,R JSamulski"The Genus Dependovirus"(J R Kerr,S F Cotmore.M EBloom,R M Linden,C RParrish编)第15-23页,Hudder Arnold,London,UK(2006)，这些文献的公开内容通过引用以其整体据此并入本文)。用于纯化载体的方法可见于例如美国专利号6,566,118、6,989,264和6995006以及标题为“Methods for Generating High TiterHelper-free Preparation of Recombinant AAV Vectors”的国际专利申请公开号W0/1999/011764，这些文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。
杂合载体的制备描述于例如PCT申请号PCT/US2005/027091，其公开内容通过引用以其整体并入本文。已经描述了使用来源于AAV的载体在体外和体内转移基因(参见例如国际专利申请公开号WO 1/18088和WO 93/09239；美国专利号4,797,368、6,596,535和5,139,941；以及欧洲专利号0488528，所有这些文献通过引用以其整体并入本文)。这些出版物描述了其中rep和/或cap基因被缺失并且被目的基因替代的各种源于AAV的构建体，以及使用这些构建体在体外(转移到培养细胞中)或在体内(直接转移到生物体中)转移目的基因。可以通过如下方式来制备根据本发明的复制缺陷型重组AAV：将含有两侧为两个AAV反向末端重复(ITR)区域的目的核酸序列的质粒以及携带AAV衣壳化基因(rep和cap基因)的质粒共转染到被人辅助病毒(例如腺病毒)感染的细胞系中。然后通过标准技术来纯化产生的AAV重组体。
在一些情况下，用于如本文所述的表达构建体的有用AAV载体包括被衣壳化在病毒颗粒(例如，AAV病毒颗粒，包括但不限于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV14、AAV15、AAV16和AAVrh10)中的那些。因此，本公开文本包括包含本文所述的任何载体的重组病毒颗粒(重组是因为它含有重组多核苷酸)。
在一些实施方案中，所述病毒载体含有编码报告蛋白如荧光蛋白的序列。在其他实施方案中，所述病毒载体缺少编码报告蛋白如荧光蛋白的序列。
在一些实施方案中，所述载体包含与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10的核苷酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述病毒载体是SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10的核苷酸序列。
在一些优选的实施方案中，所述病毒载体包含以下或由以下组成：与以下序列中的一个具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列：
AAV-mArc-dsGFP-KCNA1(SEQ ID NO:20)；AAV-mArc-dsGFP-KCNJ2(SEQ ID NO:22)；AAV-ESARE-dsGFP-KCNA1(SEQ ID NO:24)；AAV-ESARE-dsGFP-KCNJ2(SEQ ID NO:26)；AAV-NRAM-hCfos-dsGFP-KCNA1(SEQ ID NO:28)；AAV-NRAM-hCfos-dsGFP-KCNJ2(SEQ IDNO:30)；AAV-Egr1-dsGFP-KCNA1(SEQ ID NO:32)；Egr1-dsGFP-KCNJ2(SEQ ID NO:34)。
在一些实施方案中，所述病毒载体另外包含编码病毒包装和包膜蛋白的基因。
在一些实施方案中，所述病毒载体是慢病毒载体。在一些实施方案中，所述慢病毒载体是非整合慢病毒载体(NILV)。由这些载体产生的载体颗粒不会将它们的病毒基因组整合到细胞的基因组中，因此在需要瞬时表达的应用中有用或可用于持续游离基因表达(如在静止细胞中)。可以通过整合酶的突变或通过改变5'LTR和/或3'LTR以防止整合酶附接这些序列来产生NILV。这些修饰消除了整合酶活性，而不影响逆转录和预整合复合物向细胞核的转运。不希望受任何特定理论的束缚，当NILV进入细胞时，预计慢病毒DNA将作为游离基因留在细胞核中，从而导致在非分裂细胞(有丝分裂后细胞)如神经元中持续表达。
在一些实施方案中，所述载体进一步包含AmpR基因和/或hGh poly(A)信号基因和/或一个或多个复制起点基因。
病毒颗粒
本发明还包括制备病毒颗粒如慢病毒颗粒或腺相关病毒颗粒的体外方法。在一个实施方案中，该方法涉及用如本文所述的病毒载体转导哺乳动物细胞并且在细胞中表达颗粒形成所必需的病毒包装和包膜蛋白，以及在培养基中培养转导的细胞，使得细胞产生释放到培养基中的病毒颗粒。合适的哺乳动物细胞的一个例子是人胚肾(HEK)293细胞。
可以使用编码病毒颗粒形成和功能所需的所有病毒组分的单个表达载体。然而，很多时候，利用稳定地整合到宿主细胞中的多个质粒表达载体或单独表达盒来分离产生病毒载体颗粒的各种遗传组分。
在一些实施方案中，编码一种或多种病毒包装蛋白和包膜蛋白的表达盒已被稳定地整合到哺乳动物细胞中。在这些实施方案中，用本文所述的病毒载体转导这些细胞足以导致病毒颗粒的产生，而无需添加另外的表达载体。
在其他实施方案中，所述体外方法涉及使用多种表达载体。在一些实施方案中，所述方法包括用一种或多种编码颗粒形成所必需的病毒包装和包膜蛋白的表达载体转导哺乳动物细胞。
合适的病毒包装和包膜蛋白以及编码这些蛋白的表达载体的例子是可商购的并且是本领域熟知的。通常，所述病毒包装表达载体或表达盒表达HIV-1的gag、pol、rev和tat基因区域，这些基因区域编码载体颗粒形成和载体加工所需的蛋白质。通常，所述病毒包膜表达载体或表达盒表达如VSV-G的包膜蛋白。在一些情况下，所述包装蛋白在两个单独的载体上提供-一个编码Rev，一个编码Gag和Pol。慢病毒载体连同其相关包装和包膜载体的例子包括Dull,T.等人,"A Third-generation lentivirus vector with a conditionalpackaging system"J.Virol 72(11):8463-71(1998)的那些，该文献通过引用并入本文。
ssDNA AAV基因组含有两个开放阅读框Rep和Cap，其两侧为两个145个碱基的反向末端重复(ITR)，这对于互补DNA链的合成至关重要。Rep和Cap产生多种蛋白质(Rep78、Rep68、Rep52、Rep40，它们是AAV生命周期所需的；以及VP1、VP2、VP3，它们是衣壳蛋白)。转基因将反式插入ITR与Rep和Cap之间。AAV2骨架是常用的并且描述于Srivastava等人,J.Virol.,45:555-564(1983)中。指导病毒DNA复制(ori)、包装(pkg)和宿主细胞染色体整合(int)的顺式作用序列包含在ITR内。AAV还需要含有来自腺病毒的基因的辅助质粒。这些基因(E4、E2a和VA)介导AAV复制。pAAV质粒的一个例子可以以质粒编号112865或60958从Addgene(美国马萨诸塞州剑桥(Cambridge，MA，USA))获得。
在病毒颗粒释放之后，可收集包含病毒颗粒的培养基，并且任选地可从培养基中分离病毒颗粒。任选地，可浓缩病毒颗粒。
在产生和任选的浓缩之后，可例如通过在-80℃下冷冻来储存病毒颗粒，以准备好通过施用于细胞来使用和/或用于疗法。
本发明还提供了病毒颗粒，例如通过本文所述方法产生的那些。如本文所用，病毒颗粒包含包装在病毒包膜内的DNA或RNA基因组，所述基因组能够感染细胞，例如哺乳动物细胞。病毒颗粒可以是整合酶缺陷型的，例如，它可含有突变整合酶或含有如本文所述的5'和/或3'LTR的改变。
细胞
本发明还提供了一种包含上述核酸或载体的细胞。在一些实施方案中，该细胞是哺乳动物细胞，如人细胞。在一些实施方案中，所述细胞是人胚肾细胞(HEK)293。在一些实施方案中，所述细胞来源于成神经细胞瘤细胞系。
试剂盒
本发明还提供了包含如本文所述的表达载体和同样本文所述的一种或多种病毒包装和包膜表达载体的试剂盒。在一些实施方案中，所述病毒包装表达载体是整合酶缺陷型病毒包装表达载体。
确认基因产物的存在的方法
本发明还提供了一种确认如本文所述的基因产物(如工程化KCNA1)在细胞中的存在的方法。
使用某些基因序列进行临床转化的局限性是很难在脑中存在的背景内源通道的情况下检测它们的表达。
如本文所述的基因产物的序列可能不同于在细胞中发现的内源野生型基因产物，因此当该基因被转录成RNA时，它包含独特的RNA序列(“RNA指纹”)。这种RNA指纹允许利用RNA靶向技术对转基因表达进行特异性跟踪，否则将无法区分转基因与内源基因产物。这在确定基因表达的定位很重要而不必包括编码可能潜在导致免疫原性的荧光标签或表位的序列的情况下特别有用。
例如，可以检查从已经用基因产物治疗的患者身上取出的组织，以确定基因产物存在的位置和细胞类型(如预期的兴奋性神经元，或者抑制性神经元或神经胶质细胞)。例如，可从癫痫手术(在癫痫基因疗法失败的情况下)或验尸中获得这种组织。预期该数据对临床前剂量计算、生物分布研究、监管批准和基因疗法的进一步临床开发有用。
因此，在一个实施方案中，所述方法包括在允许目的基因产物表达的条件下用如本文所述的表达载体转导细胞或将如本文所述的病毒颗粒施用于细胞，以及使用杂交测定检测基因产物RNA在细胞中的存在。所述方法可以体外或离体进行，例如，在细胞培养物中或者在从人体或动物体移植的细胞中进行。替代性地，所述方法可以体内进行，例如在从人或动物受试者中提取细胞或组织以便使用杂交测定检测基因产物RNA在细胞中的存在之前，将病毒颗粒施用于人或动物受试者的细胞。
在一些实施方案中，从已经用本发明的病毒颗粒治疗的受试者中提取细胞或组织，以便检查表达的基因产物的定位。例如，可从癫痫手术(在癫痫基因疗法失败的情况下)或验尸中获得这种组织。
本发明还提供了一种确认基因产物在已经从被施用本文所述的病毒颗粒的受试者获得的细胞中的存在的体外或离体方法，所述方法包括使用杂交测定检测工程化基因产物RNA在细胞中的存在。
杂交测定是本领域已知的并且通常涉及使用互补核酸探针(如使用标记探针的原位杂交、RNA印迹和相关技术)。在一些实施方案中，杂交测定是使用标记探针如荧光标记探针的原位杂交测定。
如本文所用，术语“探针”是指用于检测互补核酸的核酸。通常，所述探针是RNA探针。
适合17至30个碱基的寡核苷酸的选择性杂交条件包括在42℃下在6X SSC中杂交过夜，并且在从42℃至65℃的一系列升高的温度下在6X SSC中洗涤。计算实现具有指定序列同源性的核酸分子之间的杂交所需的严格条件的一个常用公式是(Sambrook等人,1989)：双链体中的Tm＝81.5℃+16.6Log[Na+]+0.41(％G+C)-0.63(％甲酰胺)-600/#bp。
本文中的任何子标题仅出于便利而被包括，并且不应被解释为以任何方式限制本公开文本。现在将参考以下非限制性附图和实施例进一步描述本发明。本领域技术人员根据这些内容将会想到本发明的其他实施方案。本文引用的所有参考文献的公开文本，因为本领域技术人员可以使用它们来实施本发明，因此通过交叉引用特此具体地并入本文。
附图说明
图1是本发明的某些方面的示意性表示。图1A(上图)表示具有正常活性水平的神经元。图1A(下图)表示具有驱动癫痫发作的高活性(较深阴影)的过度兴奋神经元。图1B表示当前的基因疗法方法，其中对所有神经元进行永久修正以便调节神经元兴奋性并治疗癫痫发作。图1C表示本发明的某些方面，其中仅对过度兴奋的神经元进行修正以便调节神经元兴奋性并治疗癫痫发作。图1D示出c-Fos-KCNA1作用的假设分子机制，以及本公开文本的示例性载体。过度活跃(神经元兴奋性强增加)/癫痫活性或癫痫发作将诱导c-fos或其他活性依赖性启动子激活，进而将激活KCNA1或能够降低神经元兴奋性的其他转基因(Kv1.1通道HL＝12d)。活性依赖性启动子激活可导致KCNA1过表达。启动子的激活是瞬时的，但是表达的蛋白质将在神经元中表达更长的时间(例如，数天)，即具有持续的抗癫痫作用。一旦病理状态被纠正，所述工具就被关闭(并且必要时将被重新激活)。图1E示出适合在本发明中使用的活性依赖性基因的概况。图1F示出在啮齿动物和人中由过度活跃引起的c-fos激活的一个例子。图1G示出适合在本发明中使用的活性依赖性启动子和转基因的不同组合。如所示的其他转基因也可适合与本发明一起使用。所述转基因对神经元兴奋性具有不同的特性和功能影响。所述启动子在激活时间设定、细胞特异性和失活方面具有不同的特性。图1在实施例1中进一步描述。
图2示出c-Fos免疫染色实验的结果(图2A和图2B)。癫痫发作样活性(由4-氨基吡啶+印防己毒素诱导)导致内源c-Fos表达快速但瞬时增加。图2在实施例2中进一步描述。
图3示出慢病毒c-Fos-dsGFP(图3A)荧光成像实验(图3B和图3C)的结果。图3D示出AAV9 cfos-dsGFP-KCNJ2(中)和mArc-dsGFP-KCNJ2(右)荧光成像实验的结果。这些表明启动子跟随神经元活性。图3在实施例3中进一步描述。
图4示出与AAV c-Fos-dsGFP相比，AAV c-Fos-dsGFP-KCNA1降低了皮质神经元中的神经元网络兴奋性，如通过尖峰数/秒、脉冲群数/分钟和每次脉冲群的平均尖峰数(参见 下部小图)所测量的。来自EEG实验的示例性记录在下部小图中显示(竖直比例尺对应于20μV；水平比例尺对应于1s)。图4在实施例4中进一步描述。
图5示出与AAV c-Fos-dsGFP相比，AAV c-Fos-dsGFP-KCNA1在48小时内在体外降低了神经元网络兴奋性，如通过尖峰数/秒(图4A)、脉冲群数/分钟(图4B)、脉冲群持续时间(毫秒)(图4C)和每次脉冲群的平均尖峰数(图4D)所测量的。PTX是一种促惊厥剂(印防己毒素)。图5E示出与AAV c-Fos-dsGFP相比，AAV c-Fos-dsGFP-KCNA1、cfos-dsGFP-KCNJ2、mArc-dsGFP-KCNA1、mArc-dsGFP-KCNJ2和ESARE-dsGFP-KCNA1降低了皮质神经元中的神经元网络兴奋性，如通过放电率尖峰数/秒所测量的。图5在实施例4和5中进一步描述。
图6示出体内荧光实验的结果，证明与细胞依赖性基因表达(图6A)相比，活性依赖性基因表达(图6B)对癫痫发作病灶具有特异性。图6A的比例尺为500μm；图6B的比例尺为50μm。实验过程的示意图在图6C中示出。图6在实施例6中进一步描述。
图7示出在大鼠癫痫模型中进行的活性依赖性基因疗法临床前试验的结果。图7在实施例7中进一步描述。水平比例尺对应于500μm。“CA1”是指海马体的阿蒙角1亚区，并且“DG”是指齿状回。
图8示出在实施例4-11中使用的载体pX552-c-FosP-dscGFP-T2A-KCNA1co.I400V的图谱。
图9示出载体pX552-c-FosP-KCNA1co.I400V的图谱。图9在实施例7中进一步描述。图9还在实施例11中进一步描述。
图10示出离体海马体切片电生理学实验的实验计划，以证明癫痫发作后活性依赖性启动子的激活以及当它们驱动KCNA1或KCNJ2时对神经元兴奋性的影响。PTZ是一种急性化学惊厥剂(戊四唑)。图10在实施例8中进一步描述。
图11和图12示出急性海马体神经元中的离体电生理学实验的结果，证明癫痫发作激活的活性依赖性KCNA1表达足以降低神经元兴奋性。图11示出神经元放电的代表性痕迹。图12是示出用不同电流注入引发的动作电位数量的图表，证明了活性依赖性基因疗法在选择性降低神经元兴奋性方面的效率。图11和图12在实施例8中进一步描述。
图13示出离体电生理学实验的结果，证明癫痫发作激活的活性依赖性KCNA1或KCNJ2表达足以降低神经元兴奋性。左侧：KCNJ2使神经元超极化(RMP：静息膜电位)。右侧：
活性依赖性启动子驱动的KCNA1或KCNJ2表达增加了引发动作电位所需的电流。图14在实施例8中进一步描述。
图14和图15示出离体电生理学实验后的切片的荧光，证明癫痫发作激活的活性依赖性启动子仅选择性地激活了一些神经元。图14和图15在实施例8中进一步描述。
图16和图17示出体内实验的结果，显示对反复癫痫发作的保护作用。活性依赖性基因疗法被第一次癫痫发作激活，并且当第二次癫痫发作被诱导时，它显示出抗癫痫作用。作为一个例子，已经使用c-Fos-dsGFP-KCNJ2进行本实验。图16和图17在实施例9中进一步描述。
图18、图19和图20示出在小鼠癫痫模型中进行的活性依赖性基因疗法临床前试验的结果。这些数据表明，活性依赖性基因治疗挽救了重度慢性顽固性癫痫模型中的癫痫表型。图18、图19和图20在实施例10中进一步描述。
图21示出在小鼠癫痫模型中进行的活性依赖性基因疗法临床前试验的结果。这些数据表明，活性依赖性基因疗法保护癫痫动物免受进一步的严重损伤，所述严重损伤会导致注射对照病毒的癫痫动物死亡。图21在实施例10中进一步描述。
图22示出在小鼠癫痫模型中进行的活性依赖性基因疗法临床前试验的结果。这些数据表明，活性依赖性基因疗法是自调节的(闭环)。用活性依赖性基因疗法治疗的动物未展现出癫痫发作并且未显示可检测到的荧光，这意味着活性依赖性方法(和表达)被关闭，因为动物被治愈。图22在实施例10中进一步描述。
图23总结了用于测试活性依赖性基因疗法对行为的影响的测试。数据表明，活性依赖性基因疗法对自发运动、焦虑和记忆没有影响。使用旷场、目标定位测试和T形迷宫来筛选活性依赖性基因疗法对健康动物的影响。图23在实施例11中进一步描述。
图24示出在大鼠癫痫模型中进行的活性依赖性基因疗法临床前试验的另外的结果。B中的水平比例尺对应于500μm。图21在实施例7中进一步描述。
图25示出与AAV c-Fos-dCas9-VP64-eGFP(2个AAV)相比，AAV c-Fos-dCas9-VP64-eGFP-Kcna1(2个AVV)降低了暴露于PTX(促惊厥剂)的皮质神经元中的神经元网络兴奋性，如通过48小时内的尖峰数/秒所测量的。多西环素已被用于激活驱动dCAS9-VP64的诱导型启动子。所有工具都由驱动诱导型启动子的反式激活因子的c-Fos启动子控制。图25在实施例5中进一步描述。
图26示出载体pX552-c-FosP-dscGFP-T2A-KCNJ2的图谱。图26在实施例4、8和9中进一步描述。
图27示出载体pX552-miniARC-dscGFP-T2A-KCNA1co.I400V的图谱。图27在实施例4和8中进一步描述。
图28示出载体pX552-miniARC-dscGFP-T2A-KCNJ2的图谱。图28在实施例4和8中进一步描述。
图29示出载体pX552-ESARE-dscGFP-T2A-KCNA1co.I400V的图谱。图29在实施例4和8中进一步描述。
图30示出载体pX552-ESARE-dscGFP-T2A-KCNJ2的图谱。图30在实施例8中进一步描述。
图31示出载体pX552-NRAM-hcfos-dscGFP-T2A-KCNA1co.I400V的图谱。图31在实施例8中进一步描述。
图32示出载体pX552-NRAM-hcfos-dscGFP-T2A-KCNJ2的图谱。
图33示出载体pX552-Egr1-dscGFP-T2A-KCNA1co.I400V的图谱。
图34示出载体pX552-Egr1-dscGFP-T2A-KCNJ2的图谱。
图35示出CRISPRa载体pAAV-TetO-dCAS9VP64和pAAV-U6-sgRNA_Kcna1-cFos-rtTA-T2A-EGFP的图谱。图35在实施例5中进一步描述。
实施例
实施例1-活性依赖性疗法和c-Fos-KCNA1作用的假设分子机制的说明
本发明的一个方面是一种使用活性依赖性启动子治疗癫痫的方法，以便选择性地靶向驱动癫痫发作或有助于传播癫痫发作的神经元(图1A中的较深阴影)，与不驱动癫痫发作的神经元(图1A中的较浅阴影)相比，进而将改变影响神经元特性的基因的表达。
一些目前的实验性基因疗法依赖于神经元兴奋性的永久修正，例如在细胞特异性启动子的控制下使用Kv1.1离子通道，而这可能无法区分参与癫痫发作的神经元和健康神经元(图1B)。
神经元激发引发一组称为立即早期基因(IEG)的基因(如c-Fos和Arc)的快速诱导。c-Fos可区分参与或不参与癫痫发作的那些神经元，因为已经在小鼠模型和人癫痫脑中(其中c-Fos具有瞬时表达)观察到癫痫发作后c-Fos在特定神经元中的表达增加。
在腺相关病毒载体中使用c-Fos启动子能够上调编码钾通道Kv1.1的效应基因(KCN1A)的表达，进而减少了神经元放电。预计KCNA1的表达增加将恢复癫痫病灶中的正常神经元行为。在回路活性恢复到接近正常水平之后，启动子活性降低，并且钾通道的表达恢复到基线(图1D)。
c-Fos启动子将被癫痫发作激活，然后立即开启，持续6-12小时。在这段滞后时间里，治疗基因将被表达并进行蛋白质转录。蛋白质将保持稳定更长的时间(KCNA1应该在膜中稳定>96小时)。
在这种情况下，可以“保护”患者数天不会发生癫痫发作，并且由于许多患者经历丛集性癫痫发作，因此所述治疗应减少丛集内经历的癫痫发作的次数。此外，对丛集性癫痫发作进行挽救可使生理状态得到恢复，从而根本不会导致癫痫发作。
如果后期发生其他癫痫发作，则所述系统将再次开启。
图1E示出适合在本发明中使用的活性依赖性基因的概况。图1F示出在啮齿动物和人中由过度活跃引起的c-fos激活的一个例子。图1G示出适合在本发明中使用的活性依赖性启动子和转基因的不同组合。其他转基因如其他钾通道(右侧)也可适合与本发明一起使用。所述转基因对神经元兴奋性具有不同的特性和功能影响。所述启动子在激活时间设定、细胞特异性和失活方面具有不同的特性。
实施例2-癫痫发作样活性增加IEG表达
材料和方法
用促惊厥药物刺激原代成熟皮质神经元，并且在固定后的不同时间点(2、6、24和48)通过免疫荧光评估c-fos表达。
结果与讨论
图2示出癫痫发作样活性(由4-氨基吡啶(“4AP”)+印防己毒素(“PTX”)诱导)导致内源c-Fos表达快速但瞬时增加。
实施例3-c-Fos启动子可以驱动GFP表达，并且Arc启动子可以驱动GFP表达材料和 方法
使用c-Fos连同5'UTR的一部分和嵌合内含子的最小启动子以加强转基因的表达。然后将所述启动子插入具有经密码子优化的dsGFP和KCNA1的AAV骨架中。
而且，使用Arc的最小启动子来加强转基因的表达。将所述启动子插入具有KCNJ2的AAV骨架中。
结果与讨论
图3示出，当4AP和PTX在神经细胞中诱导癫痫发作样活性时，c-Fos启动子可以驱动GFP表达。
而且，图3D示出，当用4AP和PTX在神经细胞中诱导癫痫发作样活性时，Arc可以驱动GFP表达。
实施例4-兴奋性的活性依赖性抑制
材料和方法
使原代皮质神经元在多电极阵列(MEA)上生长21DIV，并且在7DIV用AAV c-Fos-dsGFP或AAV c-Fos-dsGFP-KCNA1转导。在21DIV评估网络活性。重复是n＝6(C-Fos-dsGFP)和n＝7(C-Fos-KCNA1)。
而且，使原代皮质神经元在多电极阵列(MEA)上生长21DIV(体外天数)，并且在7DIV用AAV c-Fos-dsGFP或AAV c-Fos-dsGFP-KCNA1或c-Fos-dsGFP-KCNJ2或mArc-dsGFP-KCNA1或mArc-dsGFP-KCNJ2或ESARE-dsGFP-KCNA1转导。在21DIV评估网络活性。重复是n＝6(C-Fos-dsGFP)，n＝7(C-Fos-KCNA1)，n＝16(c-Fos-dsGFP-KCNJ2)，n＝6(mArc-dsGFP-KCNA1)，n＝5(mArc-dsGFP-KCNJ2)和n＝5(ESARE-dsGFP-KCNA1)。
结果与讨论
图4示出，与AAV c-Fos-dsGFP相比，AAV c-Fos-dsGFP-KCNA1降低了皮质神经元中的神经元网络兴奋性，如通过尖峰数/秒(图4A)、脉冲群数/分钟(图4B)、脉冲群持续时间(毫秒)(图4C)和每次脉冲群的平均尖峰数(图4C)所测量的。来自MEA实验的示例性记录在上部小图中示出。
而且，图5E示出，与AAV c-Fos-dsGFP相比，AAV c-Fos-dsGFP-KCNA1、c-Fos-dsGFP-KCNJ2、mArc-dsGFP-KCNA1、mArc-dsGFP-KCNJ2或ESARE-dsGFP-KCNA1降低了皮质神经元中的神经元网络兴奋性，如通过尖峰数/秒所测量的。
如实施例5中所讨论的，图5示出，与AAV c-Fos-dsGFP相比，AAV c-Fos-dsGFP-KCNA1降低了皮质神经元中的神经元网络兴奋性，如通过尖峰数/秒、脉冲群数/分钟、脉冲群持续时间(毫秒)和每次脉冲群的平均尖峰数所测量的。
实施例5-活性依赖性抑制兴奋性的时间历程
材料和方法
使原代皮质神经元在多电极阵列(MEA)上生长21DIV，并且在7DIV用AAV c-Fos-dsGFP或AAV c-Fos-dsGFP-KCNA1转导。在21DIV以及在添加30μM印防己毒素后(基线/0小时)的不同时间点(2、6、24、48小时)评估网络活性。重复是n＝6(c-Fos-dsGFP)和n＝7(c-Fos-dsKCNA1)。
而且，使原代皮质神经元在多电极阵列(MEA)上生长21DIV，并且在7DIV用c-Fos-dCAS9-VP64-GFP或c-Fos-dCAS9-VP64-GFP-KCNA1(2个AAV)转导。在21DIV以及在添加30μM印防己毒素后(基线/0小时)的不同时间点(2、6、24、48小时)评估网络活性。重复是n＝16(c-Fos-dCAS9-VP64-GFP)和n＝10(c-Fos-dCAS9-VP64-GFP-KCNA1)。
结果与讨论
图5示出，与AAV c-Fos-GFP相比，AAV c-Fos-dsGFP-KCNA1减缓了由PTX诱导的神经元网络兴奋性增加，如通过脉冲群持续时间(毫秒)所清晰显示的。
而且，图25示出，与c-Fos-dCAS9-VP64-GFP相比，c-Fos-dCAS9-VP64-GFP-KCNA1减缓了由PTX诱导的神经元网络兴奋性增加，如通过脉冲群持续时间(毫秒)或尖峰数/秒所清晰显示的。用两个AAV递送的基因疗法允许多西环素使用TeT-On系统开启所述疗法。
实施例6-活性依赖性基因疗法比常规过表达影响更少的神经元
材料和方法
在视觉皮质中病毒性注射AAV Camk2a-GFP或AAV cfos-GFP后进行急性匹鲁卡品注射。急性匹鲁卡品注射会导致局灶性癫痫发作。评价了病毒的扩散和GFP阳性的神经元的数量。
结果与讨论
图6示出，与组成型基因表达相比，体内活性依赖性基因表达对癫痫发作病灶具有特异性。与常规基因疗法(图6A)相比，使用活性依赖性基因表达，仅少数神经元被靶向，并且GFP报告物仅在癫痫发作后亮起(图6B)。
因为使用的病毒血清型相同(AAV9)，所以转导的扩散是可比的，并且这提供了直接证据表明所述治疗不会影响不参与癫痫发作的旁观者神经元。因此，治疗效果专门针对变得过度激活的神经元。
实验过程的示意图在图6C中示出。
实施例7-临床前癫痫模型
材料和方法
使用红藻氨酸(KA)的腹膜内(IP)注射创建了慢性大鼠颞叶癫痫(TLE)模型。12周后，植入EEG发射器和插管，并且连续记录大鼠5周(基线)。然后，通过插管注射AAV-cfos-dsGFP或AAV-cfos-dsGFP-KCNA1(如图8所示)，并且再记录动物8周。
结果与讨论
图7展示了使用图8的构建体在大鼠癫痫模型中的体内活性依赖性基因疗法。与AAV-cfos-dsGFP相比，在注射AAV-cfos-dsGFP-KCNA1的大鼠中观察到癫痫发作的次数减少(图7A)。在一些情况下，图8的构建体将缺少编码报告蛋白的序列，如图9和SEQ IDNO:10所示。例如，出于监管原因，这可能是优选的。
图24提供了进一步的数据，也展示了使用图8的构建体在大鼠癫痫模型中的体内活性依赖性基因疗法。与AAV-cfos-dsGFP相比，在注射AAV-cfos-dsGFP-KCNA1的大鼠中观察到癫痫发作的次数减少(图24C、图24D)。在一些情况下，图8的构建体将缺少编码报告蛋白的序列，如图9和SEQ ID NO:10所示。例如，出于监管原因，这可能是优选的。
实施例8-活性依赖性基因疗法被单次癫痫发作激活并且选择性地抑制过度活跃神经元中的神经元兴奋性
材料和方法
在病毒性注射AAV cfos-GFP或c-Fos-dsGFP-KCNJ2或mArc-dsGFP-KCNA1、mArc-dsGFP-KCNJ2或ESARE-dsGFP-KCNA1或ESARE-dsGFP-KCNA1或NRAM-dsGFP-KCNA1后进行急性腹膜内戊四唑(PTZ)注射。急性PTZ注射会导致单次强直阵挛全身性癫痫发作。用单细胞膜片钳评价>2小时后对荧光细胞(被癫痫发作激活)的影响。实验设置在图10中示出。
结果与讨论
图11至图15示出，在体内，活性依赖性基因表达对癫痫发作具有特异性，并且能够用不同的启动子和转基因抑制神经元兴奋性。所述启动子的强度不同(图12、图14和图15)。在海马体CA3齿状回(颗粒细胞和苔藓细胞)、下托和深部海马体CA1神经元中观察到表达。ESARE显现最强，尤其是在CA1中。KCNA1或KCNJ2对神经元的影响也不同(图13)，但是启动子和转基因的所有排列都会导致神经元兴奋性显著降低。KCNA1降低了放电频率，而KCNJ2使膜静息电位超极化以使神经元不那么兴奋(图11至图13)。
因为荧光对一小部分神经元具有选择性，所以这提供了直接证据表明所述治疗不会影响不参与癫痫发作的旁观者神经元。因此，治疗效果专门针对变得过度激活的神经元。KCNA1或KCNJ2的瞬时表达足以降低神经元兴奋性。这提供了直接证据表明所述治疗选择性地降低了参与癫痫发作的过度兴奋神经元的活性。
实施例9-活性依赖性基因疗法被单次癫痫发作激活并且具有抗癫痫作用
材料和方法
在病毒性注射AAV cfos-GFP或c-Fos-dsGFP-KCNJ2后进行两次连续的急性腹膜内戊四唑(PTZ)注射。每次PTZ注射通常会导致单次强直阵挛全身性癫痫发作，从而允许通过第二次注射来评价活性依赖性疗法的保护作用。实验设置在图16中示出。
结果与讨论
图17示出针对化学惊厥剂注射的保护作用。活性依赖性基因疗法被第一次癫痫发作激活，并且防止第二次化学惊厥剂注射引发癫痫发作。这一结果提供了直接证据表明所述治疗将防止重复癫痫发作。
实施例10-活性依赖性基因疗法在临床前癫痫模型中抑制癫痫发作
材料和方法
使用红藻氨酸(KA)的杏仁核内注射创建了慢性小鼠颞叶癫痫(TLE)模型。2周后，植入EEG发射器和插管，并且连续记录小鼠2周(基线)。然后，通过插管注射AAV-cfos-dsGFP或AAV-cfos-dsGFP-KCNA1(如图18-图20所示)，并且等待2周病毒表达后，再对动物记录2周。记录后，一些动物用于分析荧光表达(图22)或接受急性PTZ注射(图21)。
结果与讨论
图18-图20展示了小鼠癫痫模型中的体内活性依赖性基因疗法。与AAV-cfos-dsGFP相比，在注射AAV-cfos-dsGFP-KCNA1的小鼠中观察到癫痫发作的次数明显减少(图19和图20)。与注射AAV-cfos-dsGFP的动物相比，注射AAV-cfos-dsGFP-KCNA1且接受进一步PTZ注射的动物显示出更高的存活率(图21)。此外，用AAV-cfos-dsGFP-KCNA1治疗且癫痫发作得到抑制的动物未展现出荧光，表明所述疗法在成功治疗后被关闭(图22)。N＝6(AAV-cfos-dsGFP)和n＝5(AAV-cfos-dsGFP-KCNA1)。
这些数据证实了活性依赖性基因疗法的自调节抗癫痫作用。
在一些情况下，图8的构建体将缺少编码报告蛋白的序列，如图9和SEQ ID NO:10所示。例如，出于监管原因，这可能是优选的。
实施例11-活性依赖性基因疗法对生理行为(自发运动、焦虑和记忆)没有影响材 料和方法
在注射AAV-cfos-dsGFP或AAV-cfos-dsGFP-KCNA1之前和之后，使用旷场、目标定位测试和T形迷宫自发交替来测试小鼠的不同行为。
结果与讨论
图23总结了用于显示用AAV-cfos-dsGFP-KCNA1治疗对包括自发运动在内的生理行为没有有害影响的测试以及焦虑和记忆测试。N＝5(AAV-cfos-dsGFP)和n＝3(AAV-cfos-dsGFP-KCNA1)。
这些数据证实了活性依赖性基因疗法耐受性良好。
本发明的进一步实施方案
以下实施方案E1至E33也构成本发明的一部分：
E1.一种在治疗受试者的与神经元过度兴奋相关的神经障碍的方法中使用的表达载体，所述载体包含：
(i)编码多肽(“基因产物”)的多核苷酸序列(“基因”)，所述多肽在所述受试者的神经细胞中表达时改善所述障碍，其中所述基因可操作地连接到
(ii)适于驱动所述基因产物在所述受试者的神经细胞中表达的神经元活性依赖性启动子。
E2.根据E1所述的用于所述用途的表达载体，其中所述基因产物的表达水平在所述神经元变得更加兴奋时增加并且在所述神经元变得不那么兴奋时降低。
E3.根据上述实施方案中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子是锥体神经元活性依赖性启动子。
E4.根据上述实施方案中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子是立即早期基因(IEG)启动子。
E5.根据上述实施方案中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子是c-Fos、Arc或Egr1。
E6.根据上述实施方案中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:3中所示的核苷酸序列或者与SEQID NO:3中所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列。
E7.根据上述实施方案中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述基因是离子通道基因，并且所述基因产物是离子通道。
E8.根据上述实施方案中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述基因是钾离子通道基因，并且所述基因产物是钾离子通道。
E9.根据上述实施方案中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述基因是KCNA1基因，并且所述基因产物是Kv1.1钾通道。
E10.根据上述实施方案中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述基因是工程化KCNA1基因，并且所述基因产物是编辑的Kv1.1钾通道。
E11.根据上述实施方案中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述工程化KCNA1基因具有与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的核苷酸序列，并且
其中所述编辑的Kv1.1钾通道具有与SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且在对应于SEQ ID NO:2中所示的氨基酸残基400的位置处包含缬氨酸氨基酸残基。
E12.根据上述实施方案中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述治疗方法是闭环疗法。
E13.根据上述实施方案中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述神经障碍是癫痫发作障碍。
E14.根据E13所述的用于所述用途的表达载体，其中所述癫痫发作障碍是癫痫，任选地新皮质癫痫、颞叶癫痫或难治性癫痫。
E15.根据E1-12中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述神经障碍是帕金森病、慢性疼痛、癫痫猝死(SUDEP)、偏头痛、丛集性头痛、三叉神经痛、疱疹后神经痛、阵发性运动障碍、单相或双相情感障碍、焦虑或恐惧。
E16.根据上述实施方案中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述载体是病毒载体。
E17.根据E16所述的用于所述用途的表达载体，其中所述病毒载体是重组腺相关病毒(AAV)载体或慢病毒载体，任选地其中所述慢病毒载体是非整合慢病毒载体。
E18.根据E16所述的用于所述用途的表达载体，其中所述载体包含与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10的核苷酸序列具有至少95％同一性的核苷酸序列。
E19.一种表达载体，所述表达载体包含：
(a)工程化KCNA1基因，所述工程化KCNA1基因具有与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的核苷酸序列，编码编辑的Kv1.1钾通道，所述编辑的Kv1.1钾通道具有与SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且在对应于SEQ ID NO:2中所示的氨基酸残基400的位置处包含缬氨酸氨基酸残基；以及
(b)活性依赖性启动子，所述活性依赖性启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:3中所示的核苷酸序列或者与SEQ ID NO:3中所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列，
其中所述基因可操作地连接到所述启动子。
E20一种制备病毒颗粒的体外方法，所述体外方法包括：
用根据E1-19中任一项所述的载体转导哺乳动物细胞并且在所述细胞中表达颗粒形成所必需的病毒包装和包膜蛋白；以及
在培养基中培养所转导的细胞，使得所述细胞产生释放到所述培养基中的病毒颗粒。
E21.根据E20所述的体外方法，其中所述方法包括用编码颗粒形成所必需的病毒包装和包膜蛋白的一种或多种病毒包装和包膜表达载体转导所述哺乳动物细胞。
E22.根据E20或E21所述的体外方法，其中所述一种或多种包装蛋白包括非功能性整合酶，使得所述载体不能将其病毒基因组整合到所述细胞的基因组中。
E23.根据E20-22中任一项所述的体外方法，所述体外方法进一步包括从所述培养基中分离所述病毒颗粒并且任选地浓缩所述病毒颗粒。
E24.一种病毒颗粒，所述病毒颗粒通过根据E20-23中任一项所述的方法产生，所述病毒颗粒任选地包含从根据E1-19中任一项所述的表达载体转录的RNA分子或DNA分子。
E25.一种病毒颗粒，所述病毒颗粒包含编码根据E1-19中任一项所述的基因的单链RNA分子或DNA分子，
其中所述基因编码根据E1-19中任一项所定义的基因产物，
其中所述启动子任选地如E1-19中任一项所定义，并且
其中所述病毒颗粒任选地是AAV。
E26.一种试剂盒，所述试剂盒包含根据E1-19中任一项所述的表达载体以及一种或多种病毒包装和包膜表达载体，所述一种或多种病毒包装和包膜表达载体编码在细胞中表达时颗粒形成所必需的病毒包装和包膜蛋白。
E27.根据E26所述的试剂盒，其中所述病毒包装表达载体是整合酶缺陷型病毒包装表达载体。
E28.根据E24或E25所述的病毒颗粒，用于在治疗方法中使用，其中所述治疗方法在E12-15中任一项中定义。
E29.一种治疗根据E1和12-15中任一项所定义的神经障碍的方法，所述方法包括向患有所述神经障碍的个体施用根据E1-19中任一项所述的表达载体或者根据E24或E25所述的病毒颗粒。
E30.一种确认根据E1-19中任一项所定义的基因产物的存在的方法，所述方法包括：
在允许所述基因产物表达的条件下用根据E1-19中任一项所述的表达载体转导细胞或将根据E24或E25所述的病毒颗粒施用于细胞；以及
使用杂交测定检测所述基因产物在所述细胞中的存在。
E31.一种确认已经从被施用根据E24或E25所述的病毒颗粒的受试者获得的根据E1-19中任一项所定义的基因产物的存在的体外或离体方法，所述方法包括：
使用杂交测定检测所述基因产物在所述细胞中的存在。
E32.根据E29或E30所述的方法，其中所述杂交测定是使用标记的RNA探针的原位杂交测定，任选地其中所述标记的RNA探针是荧光标记的。
E33.一种细胞，所述细胞包含根据E1-19中任一项所述的表达载体。
序列附录
示例性工程化人KCNA1基因的核苷酸序列(SEQ ID NO:1)
ATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGTAnCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTCTGA
其中n是T或C
在位置400(加下划线)处包含缬氨酸的经编辑人Kv1.1的氨基酸序列(SEQ ID NO: 2)
MTVMSGENVDEASAAPGHPQDGSYPRQADHDDHECCERVVINISGLRFETQLKTLAQFPNTLLGNPKKRMRYFDPLRNEYFFDRNRPSFDAILYYYQSGGRLRRPVNVPLDMFSEEIKFYELGEEAMEKFREDEGFIKEEERPLPEKEYQRQVWLLFEYPESSGPARVIAIVSVMVILISIVIFCLETLPELKDDKDFTGTVHRIDNTTVIYNSNIFTDPFFIVETLCIIWFSFELVVRFFACPSKTDFFKNIMNFIDIVAIIPYFITLGTEIAEQEGNQKGEQATSLAILRVIRLVRVFRIFKLSRHSKGLQILGQTLKASMRELGLLIFFLFIGVILFSSAVYFAEAEEAESHFSSIPDAFWWAVVSMTTVGYGDMYPVTIGGKIVGSLCAIAGVLTVALPVPVIVSNFNYFYHRETEGEEQAQLLHVSSPNLASDSDLSRRSSSTMSKSEYMEIEEDMNNSIAHYRQVNIRTANCTTANQNCVNKSKLLTDV
cfos启动子的核苷酸序列(SEQ ID NO:3)
GCGGCCGCAGCTTTCCTTTAGGAACAGAGGCTTCGAGCCTTTAAGGCTGCGTACTTGCTTCTCCTAATACCAGAGACTCAAAAAAAAAAAAAAAGTTCCAGATTGCTGGACAATGACCCGGGTCTCATCCCTTGACCCTGGGAACCGGGTCCACATTGAATCAGGTGCGAATGTTCGCTCGCCTTCTCTGCCTTTCCCGCCTCCCCTCCCCCGGCCGCGGCCCCGGTTCCCCCCCTGCGCTGCACCCTCAGAGTTGGCTGCAGCCGGCGAGCTGTTCCCGTCAATCCCTCCCTCCTTTACACAGGATGTCCATATTAGGACATCTGCGTCAGCAGGTTTCCACGGCCGGTCCCTGTTGTTCTGGGGGGGGGACCATCTCCGAAATCCTACACGCGGAAGGTCTAGGAGACCCCCTAAGATCCCAAATGTGAACACTCATAGGTGAAAGATGTATGCCAAGACGGGGGTTGAAAGCCTGGGGCGTAGAGTTGACGACAGAGCGCCCGCAGAGGGCCTTGGGGCGCGCTTCCCCCCCCTTCCAGTTCCGCCCAGTGACGTAGGAAGTCCATCCATTCACAGCGCT
在核苷酸位置1998(加下划线)处包含腺嘌呤的野生型KCNA1编码序列的核苷酸序 列(SEQ ID NO:4)
ATGACGGTGATGTCTGGGGAGAACGTGGACGAGGCTTCGGCCGCCCCGGGCCACCCCCAGGATGGCAGCTACCCCCGGCAGGCCGACCACGACGACCACGAGTGCTGCGAGCGCGTGGTGATCAACATCTCCGGGCTGCGCTTCGAGACGCAGCTCAAGACCCTGGCGCAGTTCCCCAACACGCTGCTGGGCAACCCTAAGAAACGCATGCGCTACTTCGACCCCCTGAGGAACGAGTACTTCTTCGACCGCAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTCTACTACTACCAGTCCGGCGGCCGCCTGCGGAGGCCGGTCAACGTGCCCCTGGACATGTTCTCCGAGGAGATCAAGTTTTACGAGTTGGGCGAGGAGGCCATGGAGAAGTTCCGGGAGGACGAGGGCTTCATCAAGGAGGAGGAGCGCCCTCTGCCCGAGAAGGAGTACCAGCGCCAGGTGTGGCTGCTCTTCGAGTACCCCGAGAGCTCGGGGCCCGCCAGGGTCATCGCCATCGTCTCCGTCATGGTCATCCTCATCTCCATCGTCATCTTTTGCCTGGAGACGCTCCCCGAGCTGAAGGATGACAAGGACTTCACGGGCACCGTCCACCGCATCGACAACACCACGGTCATCTACAATTCCAACATCTTCACAGACCCCTTCTTCATCGTGGAAACGCTGTGTATCATCTGGTTCTCCTTCGAGCTGGTGGTGCGCTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACGGACTTCTTCAAAAACATCATGAACTTCATAGACATTGTGGCCATCATTCCTTATTTCATCACGCTGGGCACCGAGATAGCTGAGCAGGAAGGAAACCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCTCCCTGGCCATCCTCAGGGTCATCCGCTTGGTAAGGGTTTTTAGAATCTTCAAGCTCTCCCGCCACTCTAAGGGCCTCCAGATCCTGGGCCAGACCCTCAAAGCTAGTATGAGAGAGCTAGGGCTGCTCATCTTTTTCCTCTTCATCGGGGTCATCCTGTTTTCTAGTGCAGTGTACTTTGCCGAGGCGGAAGAAGCTGAGTCGCACTTCTCCAGTATCCCCGATGCTTTCTGGTGGGCGGTGGTGTCCATGACCACTGTAGGATACGGTGACATGTACCCTGTGACAATTGGAGGCAAGATCGTGGGCTCCTTGTGTGCCATCGCTGGTGTGCTAACAATTGCCCTGCCCGTACCTGTCATTGTGTCCAATTTCAACTATTTCTACCACCGAGAAACTGAGGGGGAAGAGCAGGCTCAGTTGCTCCACGTCAGTTCCCCTAACTTAGCCTCTGACAGTGACCTCAGTCGCCGCAGTTCCTCTACTATGAGCAAGTCTGAGTACATGGAGATCGAAGAGGATATGAATAATAGCATAGCCCATTATAGACAGGTCAATATCAGAACTGCCAATTGCACCACTGCTAACCAAAACTGCGTTAATAAGAGCAAGCTACTGACCGATGTTTAA
在位置400(加下划线)处包含异亮氨酸的野生型人Kv1.1的氨基酸序列(SEQ ID NO:5)
MTVMSGENVDEASAAPGHPQDGSYPRQADHDDHECCERVVINISGLRFETQLKTLAQFPNTLLGNPKKRMRYFDPLRNEYFFDRNRPSFDAILYYYQSGGRLRRPVNVPLDMFSEEIKFYELGEEAMEKFREDEGFIKEEERPLPEKEYQRQVWLLFEYPESSGPARVIAIVSVMVILISIVIFCLETLPELKDDKDFTGTVHRIDNTTVIYNSNIFTDPFFIVETLCIIWFSFELVVRFFACPSKTDFFKNIMNFIDIVAIIPYFITLGTEIAEQEGNQKGEQATSLAILRVIRLVRVFRIFKLSRHSKGLQILGQTLKASMRELGLLIFFLFIGVILFSSAVYFAEAEEAESHFSSIPDAFWWAVVSMTTVGYGDMYPVTIGGKIVGSLCAIAGVLTIALPVPVIVSNFNYFYHRETEGEEQAQLLHVSSPNLASDSDLSRRSSSTMSKSEYMEIEEDMNNSIAHYRQVNIRTANCTTANQNCVNKSKLLTDVcfos-GFP构建体的核苷酸序列(SEQ ID NO:6)
GCGGCCGCAGCTTTCCTTTAGGAACAGAGGCTTCGAGCCTTTAAGGCTGCGTACTTGCTTCTCCTAATACCAGAGACTCAAAAAAAAAAAAAAAGTTCCAGATTGCTGGACAATGACCCGGGTCTCATCCCTTGACCCTGGGAACCGGGTCCACATTGAATCAGGTGCGAATGTTCGCTCGCCTTCTCTGCCTTTCCCGCCTCCCCTCCCCCGGCCGCGGCCCCGGTTCCCCCCCTGCGCTGCACCCTCAGAGTTGGCTGCAGCCGGCGAGCTGTTCCCGTCAATCCCTCCCTCCTTTACACAGGATGTCCATATTAGGACATCTGCGTCAGCAGGTTTCCACGGCCGGTCCCTGTTGTTCTGGGGGGGGGACCATCTCCGAAATCCTACACGCGGAAGGTCTAGGAGACCCCCTAAGATCCCAAATGTGAACACTCATAGGTGAAAGATGTATGCCAAGACGGGGGTTGAAAGCCTGGGGCGTAGAGTTGACGACAGAGCGCCCGCAGAGGGCCTTGGGGCGCGCTTCCCCCCCCTTCCAGTTCCGCCCAGTGACGTAGGAAGTCCATCCATTCACAGCGCTTCTATAAAGGCGCCAGCTGAGGCGCCTACTACTCCAACCGCGACTGCAGCGAGCAACTGAGAAGACTGGATAGAGCCGGCGGTTCCGCGAACGAGCAGTGACCGCGCTCCCACCCAGCTCTGCTCTGCAGCTCCCACCAGTGTCTGGCCGCATCGATTCTAGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGTGA
cfos-dsGFP-KCNA1构建体的核苷酸序列(SEQ ID NO:7)
GCGGCCGCAGCTTTCCTTTAGGAACAGAGGCTTCGAGCCTTTAAGGCTGCGTACTTGCTTCTCCTAATACCAGAGACTCAAAAAAAAAAAAAAAGTTCCAGATTGCTGGACAATGACCCGGGTCTCATCCCTTGACCCTGGGAACCGGGTCCACATTGAATCAGGTGCGAATGTTCGCTCGCCTTCTCTGCCTTTCCCGCCTCCCCTCCCCCGGCCGCGGCCCCGGTTCCCCCCCTGCGCTGCACCCTCAGAGTTGGCTGCAGCCGGCGAGCTGTTCCCGTCAATCCCTCCCTCCTTTACACAGGATGTCCATATTAGGACATCTGCGTCAGCAGGTTTCCACGGCCGGTCCCTGTTGTTCTGGGGGGGGGACCATCTCCGAAATCCTACACGCGGAAGGTCTAGGAGACCCCCTAAGATCCCAAATGTGAACACTCATAGGTGAAAGATGTATGCCAAGACGGGGGTTGAAAGCCTGGGGCGTAGAGTTGACGACAGAGCGCCCGCAGAGGGCCTTGGGGCGCGCTTCCCCCCCCTTCCAGTTCCGCCCAGTGACGTAGGAAGTCCATCCATTCACAGCGCTTCTATAAAGGCGCCAGCTGAGGCGCCTACTACTCCAACCGCGACTGCAGCGAGCAACTGAGAAGACTGGATAGAGCCGGCGGTTCCGCGAACGAGCAGTGACCGCGCTCCCACCCAGCTCTGCTCTGCAGCTCCCACCAGTGTCTGGCCGCATCGATTCTAGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGGTGCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTCTGA
经优化的AAV-cfos-dsGFP-KCNA1载体的核苷酸序列(SEQ ID NO: 8)
cctgcaggcagctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcctgcggccgcacgcgtTTCGCTATTACGCCAGTTTTATTGCGGCCGCAGCTTTCCTTTAGGAACAGAGGCTTCGAGCCTTTAAGGCTGCGTACTTGCTTCTCCTAATACCAGAGACTCAAAAAAAAAAAAAAAGTTCCAGATTGCTGGACAATGACCCGGGTCTCATCCCTTGACCCTGGGAACCGGGTCCACATTGAATCAGGTGCGAATGTTCGCTCGCCTTCTCTGCCTTTCCCGCCTCCCCTCCCCCGGCCGCGGCCCCGGTTCCCCCCCTGCGCTGCACCCTCAGAGTTGGCTGCAGCCGGCGAGCTGTTCCCGTCAATCCCTCCCTCCTTTACACAGGATGTCCATATTAGGACATCTGCGTCAGCAGGTTTCCACGGCCGGTCCCTGTTGTTCTGGGGGGGGGACCATCTCCGAAATCCTACACGCGGAAGGTCTAGGAGACCCCCTAAGATCCCAAATGTGAACACTCATAGGTGAAAGATGTATGCCAAGACGGGGGTTGAAAGCCTGGGGCGTAGAGTTGACGACAGAGCGCCCGCAGAGGGCCTTGGGGCGCGCTTCCCCCCCCTTCCAGTTCCGCCCAGTGACGTAGGAAGTCCATCCATTCACAGCGCTTCTATAAAGGCGCCAGCTGAGGCGCCTACTACTCCAACCGCGACTGCAGCGAGCAACTGAGAAGACTGGATAGAGCCGGCGGTTCCGCGAACGAGCAGTGACCGCGCTCCCACCCAGCTCTGCTCTGCAGCTCCCACCAGTGTCTGGCCGCATCGATTCTAGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGGTGCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTCTGAgTCGACAATCAACCTCATcgataccgagcgctgctcgagagatctacgggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttctgattttgtaggtaaccacgtgcggaccgagcggccgcaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagctgcctgcaggggcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatacgtcaaagcaaccatagtacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaattttatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtcatgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgt
cfos-KCNA1构建体的核苷酸序列(SEQ ID NO:9)
GCGGCCGCAGCTTTCCTTTAGGAACAGAGGCTTCGAGCCTTTAAGGCTGCGTACTTGCTTCTCCTAATACCAGAGACTCAAAAAAAAAAAAAAAGTTCCAGATTGCTGGACAATGACCCGGGTCTCATCCCTTGACCCTGGGAACCGGGTCCACATTGAATCAGGTGCGAATGTTCGCTCGCCTTCTCTGCCTTTCCCGCCTCCCCTCCCCCGGCCGCGGCCCCGGTTCCCCCCCTGCGCTGCACCCTCAGAGTTGGCTGCAGCCGGCGAGCTGTTCCCGTCAATCCCTCCCTCCTTTACACAGGATGTCCATATTAGGACATCTGCGTCAGCAGGTTTCCACGGCCGGTCCCTGTTGTTCTGGGGGGGGGACCATCTCCGAAATCCTACACGCGGAAGGTCTAGGAGACCCCCTAAGATCCCAAATGTGAACACTCATAGGTGAAAGATGTATGCCAAGACGGGGGTTGAAAGCCTGGGGCGTAGAGTTGACGACAGAGCGCCCGCAGAGGGCCTTGGGGCGCGCTTCCCCCCCCTTCCAGTTCCGCCCAGTGACGTAGGAAGTCCATCCATTCACAGCGCTTCTATAAAGGCGCCAGCTGAGGCGCCTACTACTCCAACCGCGACTGCAGCGAGCAACTGAGAAGACTGGATAGAGCCGGCGGTTCCGCGAACGAGCAGTGACCGCGCTCCCACCCAGCTCTGCTCTGCAGCTCCCACCAGTGTCTGGCCGCATCGATTCTAGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGGTGCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTCTGA
经优化的AAV-cfos-KCNA1载体的核苷酸序列(SEQ ID NO:10)
cctgcaggcagctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcctgcggccgcacgcgtTTCGCTATTACGCCAGTTTTATTGCGGCCGCAGCTTTCCTTTAGGAACAGAGGCTTCGAGCCTTTAAGGCTGCGTACTTGCTTCTCCTAATACCAGAGACTCAAAAAAAAAAAAAAAGTTCCAGATTGCTGGACAATGACCCGGGTCTCATCCCTTGACCCTGGGAACCGGGTCCACATTGAATCAGGTGCGAATGTTCGCTCGCCTTCTCTGCCTTTCCCGCCTCCCCTCCCCCGGCCGCGGCCCCGGTTCCCCCCCTGCGCTGCACCCTCAGAGTTGGCTGCAGCCGGCGAGCTGTTCCCGTCAATCCCTCCCTCCTTTACACAGGATGTCCATATTAGGACATCTGCGTCAGCAGGTTTCCACGGCCGGTCCCTGTTGTTCTGGGGGGGGGACCATCTCCGAAATCCTACACGCGGAAGGTCTAGGAGACCCCCTAAGATCCCAAATGTGAACACTCATAGGTGAAAGATGTATGCCAAGACGGGGGTTGAAAGCCTGGGGCGTAGAGTTGACGACAGAGCGCCCGCAGAGGGCCTTGGGGCGCGCTTCCCCCCCCTTCCAGTTCCGCCCAGTGACGTAGGAAGTCCATCCATTCACAGCGCTTCTATAAAGGCGCCAGCTGAGGCGCCTACTACTCCAACCGCGACTGCAGCGAGCAACTGAGAAGACTGGATAGAGCCGGCGGTTCCGCGAACGAGCAGTGACCGCGCTCCCACCCAGCTCTGCTCTGCAGCTCCCACCAGTGTCTGGCCGCATCGATTCTAGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCACCGGTATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGGTGCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTCTGAgTCGACAATCAACCTCATcgataccgagcgctgctcgagagatctacgggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttctgattttgtaggtaaccacgtgcggaccgagcggccgcaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagctgcctgcaggggcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatacgtcaaagcaaccatagtacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaattttatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtcatgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgt
编码具有Y379V取代的经编辑Kv1.1的工程化人KCNA1基因(SEQ ID NO:11)
atgaccgtgatgagcggcgagaacgtggacgaggcctctgccgctcctggacaccctcaggatggcagctatcccagacaggccgaccacgacgatcacgagtgctgcgagcgggtcgtgatcaacatcagcggcctgagattcgagacacagctgaaaaccctggcccagttccccaacaccctgctgggcaaccccaagaaacggatgcggtacttcgaccccctgcggaacgagtacttcttcgaccggaaccggcccagcttcgacgccatcctgtactactaccagagcggcggcagactgcggaggcccgtgaatgtgcccctggacatgttcagcgaggaaatcaagttctacgagctgggcgaggaagccatggaaaagttcagagaggacgagggcttcatcaaagaggaagagaggcccctgcccgagaaagaataccagagacaagtgtggctgctgttcgagtaccccgagtctagcggccctgccagagtgatcgccatcgtgtccgtgatggtcatcctgatctctatcgtgatcttctgcctggaaaccctgcctgagctgaaggacgacaaggacttcaccggcaccgtgcaccggatcgacaacaccaccgtgatctacaacagcaatatcttcaccgacccattcttcatcgtggaaacactgtgcatcatctggttcagcttcgagctggtcgtgcggttcttcgcctgccccagcaagaccgacttcttcaagaacatcatgaacttcattgatatcgtggccatcatcccctacttcatcaccctgggcaccgagatcgccgagcaggaaggcaatcagaagggcgagcaggccaccagcctggccattctgagagtgatcagactcgtgcgggtgttccggatcttcaagctgagccggcacagcaagggcctgcagatcctgggccagacactgaaggccagcatgagagagctgggcctgctgatcttctttctgttcatcggcgtgatcctgttcagcagcgccgtgtacttcgccgaggccgaagaagccgagagccacttcagctctatccccgacgccttttggtgggccgtggtgtccatgaccacagtgggctacggcgacatggtgcccgtgacaatcggcggcaagatcgtgggcagcctgtgtgccattgccggcgtgctgacagtcgccctgcctgtgcctgtgatcgtgtccaacttcaactacttctaccaccgggaaaccgagggggaggaacaggctcagctgctgcacgtgtccagccccaatctggccagcgacagcgacctgagcagacggtctagcagcaccatgagcaagagcgagtacatggaaatcgaagaggacatgaacaactctatcgcccactaccgccaagtgaacatccggaccgccaactgcaccaccgccaaccagaactgcgtgaacaagagcaagctgctgaccgatgtctga
在位置400(加下划线)处包含缬氨酸且在位置379取代(加粗)处包含缬氨酸的经 编辑人Kv1.1的氨基酸序列(SEQ ID NO:12)
Figure BDA0003952754770000291
示例性KCNJ2基因的核苷酸序列(SEQ ID NO:13)
ATGGGCAGTGTGAGAACCAACCGCTACAGCATCGTCTCTTCAGAAGAAGACGGTATGAAGTTGGCCACCATGGCAGTTGCAAATGGCTTTGGGAACGGGAAGAGTAAAGTCCACACCCGACAACAGTGCAGGAGCCGCTTTGTGAAGAAAGATGGCCACTGTAATGTTCAGTTCATCAATGTGGGTGAGAAGGGGCAACGGTACCTCGCAGACATCTTCACCACGTGTGTGGACATTCGCTGGCGGTGGATGCTGGTTATCTTCTGCCTGGCTTTCGTCCTGTCATGGCTGTTTTTTGGCTGTGTGTTTTGGTTGATAGCTCTGCTCCATGGGGACCTGGATGCATCCAAAGAGGGCAAAGCTTGTGTGTCCGAGGTCAACAGCTTCACGGCTGCCTTCCTCTTCTCCATTGAGACCCAGACAACCATAGGCTATGGTTTCAGATGTGTCACGGATGAATGCCCAATTGCTGTTTTCATGGTGGTGTTCCAGTCAATCGTGGGCTGCATCATCGATGCTTTCATCATTGGCGCAGTCATGGCCAAGATGGCAAAGCCAAAGAAGAGAAACGAGACTCTTGTCTTCAGTCACAATGCCGTGATTGCCATGAGAGACGGCAAGCTGTGTTTGATGTGGCGAGTGGGCAATCTTCGGAAAAGCCACTTGGTGGAAGCTCATGTTCGAGCACAGCTCCTCAAATCCAGAATTACTTCTGAAGGGGAGTATATCCCTCTGGATCAAATAGACATCAATGTTGGGTTTGACAGTGGAATCGATCGTATATTTCTGGTGTCCCCAATCACTATAGTCCATGAAATAGATGAAGACAGTCCTTTATATGATTTGAGTAAACAGGACATTGACAACGCAGACTTTGAAATCGTGGTCATACTGGAAGGCATGGTGGAAGCCACTGCCATGACGACACAGTGCCGTAGCTCTTATCTAGCAAATGAAATCCTGTGGGGCCACCGCTATGAGCCTGTGCTCTTTGAAGAGAAGCACTACTACAAAGTGGACTACTCCAGGTTCCACAAAACTTACGAAGTCCCCAACACTCCCCTTTGTAGTGCCAGAGACTTAGCAGAAAAGAAATATATCCTCTCAAATGCAAATTCATTTTGCTATGAAAATGAAGTTGCCCTCACAAGCAAAGAGGAAGACGACAGTGAAAATGGAGTTCCAGAAAGCACTAGTACGGACACGCCCCCTGACATAGACCTTCACAACCAGGCAAGTGTACCTCTAGAGCCCAGGCCCTTACGGCGAGAGTCGGAGATATGA
Kir2.1的氨基酸序列(SEQ ID NO:14)
MGSVRTNRYSIVSSEEDGMKLATMAVANGFGNGKSKVHTRQQCRSRFVKKDGHCNVQFINVGEKGQRYLADIFTTCVDIRWRWMLVIFCLAFVLSWLFFGCVFWLIALLHGDLDASKEGKACVSEVNSFTAAFLFSIETQTTIGYGFRCVTDECPIAVFMVVFQSIVGCIIDAFIIGAVMAKMAKPKKRNETLVFSHNAVIAMRDGKLCLMWRVGNLRKSHLVEAHVRAQLLKSRITSEGEYIPLDQIDINVGFDSGIDRIFLVSPITIVHEIDEDSPLYDLSKQDIDNADFEIVVILEGMVEATAMTTQCRSSYLANEILWGHRYEPVLFEEKHYYKVDYSRFHKTYEVPNTPLCSARDLAEKKYILSNANSFCYENEVALTSKEEDDSENGVPESTSTDTPPDIDLHNQASVPLEPRPLRRESEI
mArc启动子的核苷酸序列(SEQ ID NO:15)
CGCGCAGCAGAGCACATTAGTCACTCGGGGCTGTGAAGGGGCGGGTCCTTGAGGGCACCCACGGGAGGGGAGCGAGTAGGCGCGGAAGGCGGGGCCTGCGGCAGGAGAGGGCGCGGGCGGGCTCTGGCGCGGAGCCTGGGCGCCGCCAATGGGAGCCAGGGCTCCACGAGCTGCCGCCCACGGGCCCCGCGCAGCATAAATAGCCGCTGGTGGCGGTTTCGGTGCAGAGCTCAAGCGAGTTCTCCCGCAGCCGCAGTCTCTGGGCCTCTCTAGCTTCAGCGGCGACGAGCCTGCCACACTCGCTAAGCTCCTCCGGCACCGCACACCTGCCACTGCCGCTGCAGCCGCCGGCTCTGCTCCCTTCCGGCTTCTGCCTCAGAGGAGTTCTTAGCCTGTTCGGAGCCGCAGCACCGACGACCAG
ESARE启动子的核苷酸序列(SEQ ID NO:16)
AGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTCGCGCAGCAGAGCACATTAGTCACTCGGGGCTGTGAAGGGGCGGGTCCTTGAGGGCACCCACGGGAGGGGAGCGAGTAGGCGCGGAAGGCGGGGCCTGCGGCAGGAGAGGGCGCGGGCGGGCTCTGGCGCGGAGCCTGGGCGCCGCCAATGGGAGCCAGGGCTCCACGAGCTGCCGCCCACGGGCCCCGCGCAGCATAAATAGCCGCTGGTGGCGGTTTCGGTGCAGAGCTCAAGCGAGTTCTCCCGCAGCCGCAGTCTCTGGGCCTCTCTAGCTTCAGCGGCGACGAGCCTGCCACACTCGCTAAGCTCCTCCGGCACCGCACACCTGCCACTGCCGCTGCAGCCGCCGGCTCTGCTCCCTTCCGGCTTCTGCCTCAGAGGAGTTCTTAGCCTGTTCGGAGCCGCAGCACCGACGACCAG
NRAM-人cFos启动子的核苷酸序列(SEQ ID NO:17)
CTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGAACTCATTCATAAAACGCTTGTTATAAAAGCAGTGGCTGCGGCGCCTCGTACTCCAACCGCATCTGCAGCGAGCAACTGAGAAGCCAAGACTGAGCCGGCGGCC
Egr1启动子的核苷酸序列(SEQ ID NO:18)
GCTGGCCCTCCCCACGCGGGCGTCCCCGACTCCCGCGCGCGCTCAGGCTCCCAGTTGGGAACCAAGGAGGGGGAGGATGGGGGGGGGGGTGTGCGCCGACCCGGAAACGCCATATAAGGAGCAGGAAGGATCCCCCGCCGGAACAGACCTTATTTGGGCAGCGCCTTATATGGAGTGGCCCAATATGGCCCTGCCGCTTCCGGCTCTGGGAGGAGGGGCGAGCGGGGGTTGGGGCGGGGGCAAGCTGGGAACTCCAGGCGCCTGGCCCGGGAGGCCACTGCTGCTGTTCCAATACTAGGCTTTCCAGGAGCCTGAGCGCTCGCGATGCCGGAGCGGGTCGCAGGGTGGAGGTGCCCACCACTCTTGGATGGGAGGGCTTCACGTCACTCCGGGTCCTCCCGGCCGGTCCTTCCATATTAGGGCTTCCTGCTTCCCATATATGGCCATGTACGTCACGGCGGAGGCGGGCCCGTGCTGTTCCAGACCCTTGAAATAGAGGCCGATTCGGGGAGTCGC
mArc-dsGFP-KCNA1构建体的核苷酸序列(SEQ ID NO:19)
CAGAGCACATTAGTCACTCGGGGCTGTGAAGGGGCGGGTCCTTGAGGGCACCCACGGGAGGGGAGCGAGTAGGCGCGGAAGGCGGGGCCTGCGGCAGGAGAGGGCGCGGGCGGGCTCTGGCGCGGAGCCTGGGCGCCGCCAATGGGAGCCAGGGCTCCACGAGCTGCCGCCCACGGGCCCCGCGCAGCATAAATAGCCGCTGGTGGCGGTTTCGGTGCAGAGCTCAAGCGAGTTCTCCCGCAGCCGCAGTCTCTGGGCCTCTCTAGCTTCAGCGGCGACGAGCCTGCCACACTCGCTAAGCTCCTCCGGCACCGCACACCTGCCACTGCCGCTGCAGCCGCCGGCTCTGCTCCCTTCCGGCTTCTGCCTCAGAGGAGTTCTTAGCCTGTTCGGAGCCGCAGCACCGACGACCAGGCTAGCAGagaattcGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGGTGCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTC
经优化的AAV-mArc-dsGFP-KCNA1载体的核苷酸序列(SEQ ID NO:20)
gcaggcagctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcctgcggccgcacgcgtCGCGCAGCAGAGCACATTAGTCACTCGGGGCTGTGAAGGGGCGGGTCCTTGAGGGCACCCACGGGAGGGGAGCGAGTAGGCGCGGAAGGCGGGGCCTGCGGCAGGAGAGGGCGCGGGCGGGCTCTGGCGCGGAGCCTGGGCGCCGCCAATGGGAGCCAGGGCTCCACGAGCTGCCGCCCACGGGCCCCGCGCAGCATAAATAGCCGCTGGTGGCGGTTTCGGTGCAGAGCTCAAGCGAGTTCTCCCGCAGCCGCAGTCTCTGGGCCTCTCTAGCTTCAGCGGCGACGAGCCTGCCACACTCGCTAAGCTCCTCCGGCACCGCACACCTGCCACTGCCGCTGCAGCCGCCGGCTCTGCTCCCTTCCGGCTTCTGCCTCAGAGGAGTTCTTAGCCTGTTCGGAGCCGCAGCACCGACGACCAGGCTAGCAGagaattcGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGGTGCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTCTGAgTCGACAATCAACCTCATcgataccgagcgctgctcgagagatctacgggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttctgattttgtaggtaaccacgtgcggaccgagcggccgcaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagctgcctgcaggggcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatacgtcaaagcaaccatagtacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaattttatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtcatgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcac
mArc-dsGFP-KCNJ2构建体的核苷酸序列(SEQ ID NO:21)
GCAGCAGAGCACATTAGTCACTCGGGGCTGTGAAGGGGCGGGTCCTTGAGGGCACCCACGGGAGGGGAGCGAGTAGGCGCGGAAGGCGGGGCCTGCGGCAGGAGAGGGCGCGGGCGGGCTCTGGCGCGGAGCCTGGGCGCCGCCAATGGGAGCCAGGGCTCCACGAGCTGCCGCCCACGGGCCCCGCGCAGCATAAATAGCCGCTGGTGGCGGTTTCGGTGCAGAGCTCAAGCGAGTTCTCCCGCAGCCGCAGTCTCTGGGCCTCTCTAGCTTCAGCGGCGACGAGCCTGCCACACTCGCTAAGCTCCTCCGGCACCGCACACCTGCCACTGCCGCTGCAGCCGCCGGCTCTGCTCCCTTCCGGCTTCTGCCTCAGAGGAGTTCTTAGCCTGTTCGGAGCCGCAGCACCGACGACCAGGCTAGCAGagaattcGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTatgggcagtgtgagaaccaaccgctacagcatcgtctcttcagaagaagacggtatgaagttggccaccatggcagttgcaaatggctttgggaacgggaagagtaaagtccacacccgacaacagtgcaggagccgctttgtgaagaaagatggccactgtaatgttcagttcatcaatgtgggtgagaaggggcaacggtacctcgcagacatcttcaccacgtgtgtggacattcgctggcggtggatgctggttatcttctgcctggctttcgtcctgtcatggctgttttttggctgtgtgttttggttgatagctctgctccatggggacctggatgcatccaaagagggcaaagcttgtgtgtccgaggtcaacagcttcacggctgccttcctcttctccattgagacccagacaaccataggctatggtttcagatgtgtcacggatgaatgcccaattgctgttttcatggtggtgttccagtcaatcgtgggctgcatcatcgatgctttcatcattggcgcagtcatggccaagatggcaaagccaaagaagagaaacgagactcttgtcttcagtcacaatgccgtgattgccatgagagacggcaagctgtgtttgatgtggcgagtgggcaatcttcggaaaagccacttggtggaagctcatgttcgagcacagctcctcaaatccagaattacttctgaaggggagtatatccctctggatcaaatagacatcaatgttgggtttgacagtggaatcgatcgtatatttctggtgtccccaatcactatagtccatgaaatagatgaagacagtcctttatatgatttgagtaaacaggacattgacaacgcagactttgaaatcgtggtcatactggaaggcatggtggaagccactgccatgacgacacagtgccgtagctcttatctagcaaatgaaatcctgtggggccaccgctatgagcctgtgctctttgaagagaagcactactacaaagtggactactccaggttccacaaaacttacgaagtccccaacactcccctttgtagtgccagagacttagcagaaaagaaatatatcctctcaaatgcaaattcattttgctatgaaaatgaagttgccctcacaagcaaagaggaagacgacagtgaaaatggagttccagaaagcactagtacggacacgccccctgacatagaccttcacaaccaggcaagtgtacctctagagcccaggcccttacggcgagagtcggaga
经优化的AAV-mArc-dsGFP-KCNJ2载体的核苷酸序列(SEQ ID NO:22)
ggcagctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcctgcggccgcacgcgtCGCGCAGCAGAGCACATTAGTCACTCGGGGCTGTGAAGGGGCGGGTCCTTGAGGGCACCCACGGGAGGGGAGCGAGTAGGCGCGGAAGGCGGGGCCTGCGGCAGGAGAGGGCGCGGGCGGGCTCTGGCGCGGAGCCTGGGCGCCGCCAATGGGAGCCAGGGCTCCACGAGCTGCCGCCCACGGGCCCCGCGCAGCATAAATAGCCGCTGGTGGCGGTTTCGGTGCAGAGCTCAAGCGAGTTCTCCCGCAGCCGCAGTCTCTGGGCCTCTCTAGCTTCAGCGGCGACGAGCCTGCCACACTCGCTAAGCTCCTCCGGCACCGCACACCTGCCACTGCCGCTGCAGCCGCCGGCTCTGCTCCCTTCCGGCTTCTGCCTCAGAGGAGTTCTTAGCCTGTTCGGAGCCGCAGCACCGACGACCAGGCTAGCAGagaattcGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTatgggcagtgtgagaaccaaccgctacagcatcgtctcttcagaagaagacggtatgaagttggccaccatggcagttgcaaatggctttgggaacgggaagagtaaagtccacacccgacaacagtgcaggagccgctttgtgaagaaagatggccactgtaatgttcagttcatcaatgtgggtgagaaggggcaacggtacctcgcagacatcttcaccacgtgtgtggacattcgctggcggtggatgctggttatcttctgcctggctttcgtcctgtcatggctgttttttggctgtgtgttttggttgatagctctgctccatggggacctggatgcatccaaagagggcaaagcttgtgtgtccgaggtcaacagcttcacggctgccttcctcttctccattgagacccagacaaccataggctatggtttcagatgtgtcacggatgaatgcccaattgctgttttcatggtggtgttccagtcaatcgtgggctgcatcatcgatgctttcatcattggcgcagtcatggccaagatggcaaagccaaagaagagaaacgagactcttgtcttcagtcacaatgccgtgattgccatgagagacggcaagctgtgtttgatgtggcgagtgggcaatcttcggaaaagccacttggtggaagctcatgttcgagcacagctcctcaaatccagaattacttctgaaggggagtatatccctctggatcaaatagacatcaatgttgggtttgacagtggaatcgatcgtatatttctggtgtccccaatcactatagtccatgaaatagatgaagacagtcctttatatgatttgagtaaacaggacattgacaacgcagactttgaaatcgtggtcatactggaaggcatggtggaagccactgccatgacgacacagtgccgtagctcttatctagcaaatgaaatcctgtggggccaccgctatgagcctgtgctctttgaagagaagcactactacaaagtggactactccaggttccacaaaacttacgaagtccccaacactcccctttgtagtgccagagacttagcagaaaagaaatatatcctctcaaatgcaaattcattttgctatgaaaatgaagttgccctcacaagcaaagaggaagacgacagtgaaaatggagttccagaaagcactagtacggacacgccccctgacatagaccttcacaaccaggcaagtgtacctctagagcccaggcccttacggcgagagtcggagatatgagTCGACAATCAACCTCATcgataccgagcgctgctcgagagatctacgggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttctgattttgtaggtaaccacgtgcggaccgagcggccgcaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagctgcctgcaggggcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatacgtcaaagcaaccatagtacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaattttatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtcatgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcaca
ESARE-dsGFP-KCNA1构建体的核苷酸序列(SEQ ID NO:23)
TTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTCGCGCAGCAGAGCACATTAGTCACTCGGGGCTGTGAAGGGGCGGGTCCTTGAGGGCACCCACGGGAGGGGAGCGAGTAGGCGCGGAAGGCGGGGCCTGCGGCAGGAGAGGGCGCGGGCGGGCTCTGGCGCGGAGCCTGGGCGCCGCCAATGGGAGCCAGGGCTCCACGAGCTGCCGCCCACGGGCCCCGCGCAGCATAAATAGCCGCTGGTGGCGGTTTCGGTGCAGAGCTCAAGCGAGTTCTCCCGCAGCCGCAGTCTCTGGGCCTCTCTAGCTTCAGCGGCGACGAGCCTGCCACACTCGCTAAGCTCCTCCGGCACCGCACACCTGCCACTGCCGCTGCAGCCGCCGGCTCTGCTCCCTTCCGGCTTCTGCCTCAGAGGAGTTCTTAGCCTGTTCGGAGCCGCAGCACCGACGACCAGGCTAGCAGagaattcGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGGTGCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTCTGA
经优化的AAV-ESARE-dsGFP-KCNA1载体的核苷酸序列(SEQ ID NO:24)
gcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcctgcggccgcACGCGTGTGTCTAGACTGCAGACCATGGGGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTCGCGCAGCAGAGCACATTAGTCACTCGGGGCTGTGAAGGGGCGGGTCCTTGAGGGCACCCACGGGAGGGGAGCGAGTAGGCGCGGAAGGCGGGGCCTGCGGCAGGAGAGGGCGCGGGCGGGCTCTGGCGCGGAGCCTGGGCGCCGCCAATGGGAGCCAGGGCTCCACGAGCTGCCGCCCACGGGCCCCGCGCAGCATAAATAGCCGCTGGTGGCGGTTTCGGTGCAGAGCTCAAGCGAGTTCTCCCGCAGCCGCAGTCTCTGGGCCTCTCTAGCTTCAGCGGCGACGAGCCTGCCACACTCGCTAAGCTCCTCCGGCACCGCACACCTGCCACTGCCGCTGCAGCCGCCGGCTCTGCTCCCTTCCGGCTTCTGCCTCAGAGGAGTTCTTAGCCTGTTCGGAGCCGCAGCACCGACGACCAGGCTAGCAGagaattcGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGGTGCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTCTGAgTCGACAATCAACCTCATcgataccgagcgctgctcgagagatctacgggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttctgattttgtaggtaaccacgtgcggaccgagcggccgcaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagctgcctgcaggggcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatacgtcaaagcaaccatagtacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaattttatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtcatgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgtcctgcag
ESARE-dsGFP-KCNJ2构建体的核苷酸序列(SEQ ID NO:25)
AGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTCGCGCAGCAGAGCACATTAGTCACTCGGGGCTGTGAAGGGGCGGGTCCTTGAGGGCACCCACGGGAGGGGAGCGAGTAGGCGCGGAAGGCGGGGCCTGCGGCAGGAGAGGGCGCGGGCGGGCTCTGGCGCGGAGCCTGGGCGCCGCCAATGGGAGCCAGGGCTCCACGAGCTGCCGCCCACGGGCCCCGCGCAGCATAAATAGCCGCTGGTGGCGGTTTCGGTGCAGAGCTCAAGCGAGTTCTCCCGCAGCCGCAGTCTCTGGGCCTCTCTAGCTTCAGCGGCGACGAGCCTGCCACACTCGCTAAGCTCCTCCGGCACCGCACACCTGCCACTGCCGCTGCAGCCGCCGGCTCTGCTCCCTTCCGGCTTCTGCCTCAGAGGAGTTCTTAGCCTGTTCGGAGCCGCAGCACCGACGACCAGGCTAGCAGagaattcGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTatgggcagtgtgagaaccaaccgctacagcatcgtctcttcagaagaagacggtatgaagttggccaccatggcagttgcaaatggctttgggaacgggaagagtaaagtccacacccgacaacagtgcaggagccgctttgtgaagaaagatggccactgtaatgttcagttcatcaatgtgggtgagaaggggcaacggtacctcgcagacatcttcaccacgtgtgtggacattcgctggcggtggatgctggttatcttctgcctggctttcgtcctgtcatggctgttttttggctgtgtgttttggttgatagctctgctccatggggacctggatgcatccaaagagggcaaagcttgtgtgtccgaggtcaacagcttcacggctgccttcctcttctccattgagacccagacaaccataggctatggtttcagatgtgtcacggatgaatgcccaattgctgttttcatggtggtgttccagtcaatcgtgggctgcatcatcgatgctttcatcattggcgcagtcatggccaagatggcaaagccaaagaagagaaacgagactcttgtcttcagtcacaatgccgtgattgccatgagagacggcaagctgtgtttgatgtggcgagtgggcaatcttcggaaaagccacttggtggaagctcatgttcgagcacagctcctcaaatccagaattacttctgaaggggagtatatccctctggatcaaatagacatcaatgttgggtttgacagtggaatcgatcgtatatttctggtgtccccaatcactatagtccatgaaatagatgaagacagtcctttatatgatttgagtaaacaggacattgacaacgcagactttgaaatcgtggtcatactggaaggcatggtggaagccactgccatgacgacacagtgccgtagctcttatctagcaaatgaaatcctgtggggccaccgctatgagcctgtgctctttgaagagaagcactactacaaagtggactactccaggttccacaaaacttacgaagtccccaacactcccctttgtagtgccagagacttagcagaaaagaaatatatcctctcaaatgcaaattcattttgctatgaaaatgaagttgccctcacaagcaaagaggaagacgacagtgaaaatggagttccagaaagcactagtacggacacgccccctgacatagaccttcacaaccaggcaagtgtacctctagagcccaggcccttacggcgagagtcggagatatga
经优化的AAV-ESARE-dsGFP-KCNJ2载体的核苷酸序列(SEQ ID NO:26)
cctgcaggcagctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcctgcggccgcACGCGTGTGTCTAGACTGCAGACCATGGGGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTAGATCCAGCGCACAGAGCCTTCCTGCGTGGGGAAGCTCCTTGCTGCGTCATGGCTCAGCTATTCTCAGCCTCTCTCCTTTTATGGTGCCGGAAGCAGGCAGGCTGCTGCTCGCGCAGCAGAGCACATTAGTCACTCGGGGCTGTGAAGGGGCGGGTCCTTGAGGGCACCCACGGGAGGGGAGCGAGTAGGCGCGGAAGGCGGGGCCTGCGGCAGGAGAGGGCGCGGGCGGGCTCTGGCGCGGAGCCTGGGCGCCGCCAATGGGAGCCAGGGCTCCACGAGCTGCCGCCCACGGGCCCCGCGCAGCATAAATAGCCGCTGGTGGCGGTTTCGGTGCAGAGCTCAAGCGAGTTCTCCCGCAGCCGCAGTCTCTGGGCCTCTCTAGCTTCAGCGGCGACGAGCCTGCCACACTCGCTAAGCTCCTCCGGCACCGCACACCTGCCACTGCCGCTGCAGCCGCCGGCTCTGCTCCCTTCCGGCTTCTGCCTCAGAGGAGTTCTTAGCCTGTTCGGAGCCGCAGCACCGACGACCAGGCTAGCAGagaattcGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTatgggcagtgtgagaaccaaccgctacagcatcgtctcttcagaagaagacggtatgaagttggccaccatggcagttgcaaatggctttgggaacgggaagagtaaagtccacacccgacaacagtgcaggagccgctttgtgaagaaagatggccactgtaatgttcagttcatcaatgtgggtgagaaggggcaacggtacctcgcagacatcttcaccacgtgtgtggacattcgctggcggtggatgctggttatcttctgcctggctttcgtcctgtcatggctgttttttggctgtgtgttttggttgatagctctgctccatggggacctggatgcatccaaagagggcaaagcttgtgtgtccgaggtcaacagcttcacggctgccttcctcttctccattgagacccagacaaccataggctatggtttcagatgtgtcacggatgaatgcccaattgctgttttcatggtggtgttccagtcaatcgtgggctgcatcatcgatgctttcatcattggcgcagtcatggccaagatggcaaagccaaagaagagaaacgagactcttgtcttcagtcacaatgccgtgattgccatgagagacggcaagctgtgtttgatgtggcgagtgggcaatcttcggaaaagccacttggtggaagctcatgttcgagcacagctcctcaaatccagaattacttctgaaggggagtatatccctctggatcaaatagacatcaatgttgggtttgacagtggaatcgatcgtatatttctggtgtccccaatcactatagtccatgaaatagatgaagacagtcctttatatgatttgagtaaacaggacattgacaacgcagactttgaaatcgtggtcatactggaaggcatggtggaagccactgccatgacgacacagtgccgtagctcttatctagcaaatgaaatcctgtggggccaccgctatgagcctgtgctctttgaagagaagcactactacaaagtggactactccaggttccacaaaacttacgaagtccccaacactcccctttgtagtgccagagacttagcagaaaagaaatatatcctctcaaatgcaaattcattttgctatgaaaatgaagttgccctcacaagcaaagaggaagacgacagtgaaaatggagttccagaaagcactagtacggacacgccccctgacatagaccttcacaaccaggcaagtgtacctctagagcccaggcccttacggcgagagtcggagatatgagTCGACAATCAACCTCATcgataccgagcgctgctcgagagatctacgggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttctgattttgtaggtaaccacgtgcggaccgagcggccgcaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagctgcctgcaggggcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatacgtcaaagcaaccatagtacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaattttatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtcatgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgt
NRAM-hCfos-dsGFP-KCNA1构建体的核苷酸序列(SEQ ID NO:27)
TGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGAactcattcataaaacgcttgttataaaagcagtggctgcggcgcctcgtactccaaccgcatctgcagcgagcaactgagaagccaagactgagccggcggccGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGGTGCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTCTGAgTCGACAATCAACCTCA
经优化的AAV-NRAM-hCfos-dsGFP-KCNA1载体的核苷酸序列(SEQ ID NO:28)
cctgcaggcagctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcctgcggccgcacgcgtTTCGCTATTACGCCAGTTTTATTCTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGAactcattcataaaacgcttgttataaaagcagtggctgcggcgcctcgtactccaaccgcatctgcagcgagcaactgagaagccaagactgagccggcggccGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGGTGCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTCTGAgTCGACAATCAACCTCATcgataccgagcgctgctcgagagatctacgggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttctgattttgtaggtaaccacgtgcggaccgagcggccgcaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagctgcctgcaggggcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatacgtcaaagcaaccatagtacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaattttatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtcatgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgt
NRAM-hCfos-dsGFP-KCNJ2构建体的核苷酸序列(SEQ ID NO:29)
GAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGAACTCATTCATAAAACGCTTGTTATAAAAGCAGTGGCTGCGGCGCCTCGTACTCCAACCGCATCTGCAGCGAGCAACTGAGAAGCCAAGACTGAGCCGGCGGCCGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCATGCCCGCCATGAAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGGGCAGTGTGAGAACCAACCGCTACAGCATCGTCTCTTCAGAAGAAGACGGTATGAAGTTGGCCACCATGGCAGTTGCAAATGGCTTTGGGAACGGGAAGAGTAAAGTCCACACCCGACAACAGTGCAGGAGCCGCTTTGTGAAGAAAGATGGCCACTGTAATGTTCAGTTCATCAATGTGGGTGAGAAGGGGCAACGGTACCTCGCAGACATCTTCACCACGTGTGTGGACATTCGCTGGCGGTGGATGCTGGTTATCTTCTGCCTGGCTTTCGTCCTGTCATGGCTGTTTTTTGGCTGTGTGTTTTGGTTGATAGCTCTGCTCCATGGGGACCTGGATGCATCCAAAGAGGGCAAAGCTTGTGTGTCCGAGGTCAACAGCTTCACGGCTGCCTTCCTCTTCTCCATTGAGACCCAGACAACCATAGGCTATGGTTTCAGATGTGTCACGGATGAATGCCCAATTGCTGTTTTCATGGTGGTGTTCCAGTCAATCGTGGGCTGCATCATCGATGCTTTCATCATTGGCGCAGTCATGGCCAAGATGGCAAAGCCAAAGAAGAGAAACGAGACTCTTGTCTTCAGTCACAATGCCGTGATTGCCATGAGAGACGGCAAGCTGTGTTTGATGTGGCGAGTGGGCAATCTTCGGAAAAGCCACTTGGTGGAAGCTCATGTTCGAGCACAGCTCCTCAAATCCAGAATTACTTCTGAAGGGGAGTATATCCCTCTGGATCAAATAGACATCAATGTTGGGTTTGACAGTGGAATCGATCGTATATTTCTGGTGTCCCCAATCACTATAGTCCATGAAATAGATGAAGACAGTCCTTTATATGATTTGAGTAAACAGGACATTGACAACGCAGACTTTGAAATCGTGGTCATACTGGAAGGCATGGTGGAAGCCACTGCCATGACGACACAGTGCCGTAGCTCTTATCTAGCAAATGAAATCCTGTGGGGCCACCGCTATGAGCCTGTGCTCTTTGAAGAGAAGCACTACTACAAAGTGGACTACTCCAGGTTCCACAAAACTTACGAAGTCCCCAACACTCCCCTTTGTAGTGCCAGAGACTTAGCAGAAAAGAAATATATCCTCTCAAATGCAAATTCATTTTGCTATGAAAATGAAGTTGCCCTCACAAGCAAAGAGGAAGACGACAGTGAAAATGGAGTTCCAGAAAGCACTAGTACGGACACGCCCCCTGACATAGACCTTCACAACCAGGCAAGTGTACCTCTAGAGCCCAGGCCCTTACGGCGAGAGTCGGAGATATGA
经优化的AAV-NRAM-hCfos-dsGFP-KCNJ2载体的核苷酸序列(SEQ ID NO:30)
CAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTGCGGCCGCACGCGTTTCGCTATTACGCCAGTTTTATTCTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGACTAGAAGTTTGTTCGTGACTGTGAACTCATTCATAAAACGCTTGTTATAAAAGCAGTGGCTGCGGCGCCTCGTACTCCAACCGCATCTGCAGCGAGCAACTGAGAAGCCAAGACTGAGCCGGCGGCCGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCATGCCCGCCATGAAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGGGCAGTGTGAGAACCAACCGCTACAGCATCGTCTCTTCAGAAGAAGACGGTATGAAGTTGGCCACCATGGCAGTTGCAAATGGCTTTGGGAACGGGAAGAGTAAAGTCCACACCCGACAACAGTGCAGGAGCCGCTTTGTGAAGAAAGATGGCCACTGTAATGTTCAGTTCATCAATGTGGGTGAGAAGGGGCAACGGTACCTCGCAGACATCTTCACCACGTGTGTGGACATTCGCTGGCGGTGGATGCTGGTTATCTTCTGCCTGGCTTTCGTCCTGTCATGGCTGTTTTTTGGCTGTGTGTTTTGGTTGATAGCTCTGCTCCATGGGGACCTGGATGCATCCAAAGAGGGCAAAGCTTGTGTGTCCGAGGTCAACAGCTTCACGGCTGCCTTCCTCTTCTCCATTGAGACCCAGACAACCATAGGCTATGGTTTCAGATGTGTCACGGATGAATGCCCAATTGCTGTTTTCATGGTGGTGTTCCAGTCAATCGTGGGCTGCATCATCGATGCTTTCATCATTGGCGCAGTCATGGCCAAGATGGCAAAGCCAAAGAAGAGAAACGAGACTCTTGTCTTCAGTCACAATGCCGTGATTGCCATGAGAGACGGCAAGCTGTGTTTGATGTGGCGAGTGGGCAATCTTCGGAAAAGCCACTTGGTGGAAGCTCATGTTCGAGCACAGCTCCTCAAATCCAGAATTACTTCTGAAGGGGAGTATATCCCTCTGGATCAAATAGACATCAATGTTGGGTTTGACAGTGGAATCGATCGTATATTTCTGGTGTCCCCAATCACTATAGTCCATGAAATAGATGAAGACAGTCCTTTATATGATTTGAGTAAACAGGACATTGACAACGCAGACTTTGAAATCGTGGTCATACTGGAAGGCATGGTGGAAGCCACTGCCATGACGACACAGTGCCGTAGCTCTTATCTAGCAAATGAAATCCTGTGGGGCCACCGCTATGAGCCTGTGCTCTTTGAAGAGAAGCACTACTACAAAGTGGACTACTCCAGGTTCCACAAAACTTACGAAGTCCCCAACACTCCCCTTTGTAGTGCCAGAGACTTAGCAGAAAAGAAATATATCCTCTCAAATGCAAATTCATTTTGCTATGAAAATGAAGTTGCCCTCACAAGCAAAGAGGAAGACGACAGTGAAAATGGAGTTCCAGAAAGCACTAGTACGGACACGCCCCCTGACATAGACCTTCACAACCAGGCAAGTGTACCTCTAGAGCCCAGGCCCTTACGGCGAGAGTCGGAGATATGAGTCGACAATCAACCTCATCGATACCGAGCGCTGCTCGAGAGATCTACGGGTGGCATCCCTGTGACCCCTCCCCAGTGCCTCTCCTGGCCCTGGAAGTTGCCACTCCAGTGCCCACCAGCCTTGTCCTAATAAAATTAAGTTGCATCATTTTGTCTGACTAGGTGTCCTTCTATAATATTATGGGGTGGAGGGGGGTGGTATGGAGCAAGGGGCAAGTTGGGAAGACAACCTGTAGGGCCTGCGGGGTCTATTGGGAACCAAGCTGGAGTGCAGTGGCACAATCTTGGCTCACTGCAATCTCCGCCTCCTGGGTTCAAGCGATTCTCCTGCCTCAGCCTCCCGAGTTGTTGGGATTCCAGGCATGCATGACCAGGCTCAGCTAATTTTTGTTTTTTTGGTAGAGACGGGGTTTCACCATATTGGCCAGGCTGGTCTCCAACTCCTAATCTCAGGTGATCTACCCACCTTGGCCTCCCAAATTGCTGGGATTACAGGCGTGAACCACTGCTCCCTTCCCTGTCCTTCTGATTTTGTAGGTAACCACGTGCGGACCGAGCGGCCGCAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGGGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATACGTCAAAGCAACCATAGTACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTTGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGGCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGT
Egr1-dsGFP-KCNA1构建体的核苷酸序列(SEQ ID NO:31)
cgtctcgagctggccctccccacgcgggcgtccccgactcccgcgcgcgctcaggctcccagttgggaaccaaggagggggaggatgggggggggggtgtgcgccgacccggaaacgccatataaggagcaggaaggatcccccgccggaacagaccttatttgggcagcgccttatatggagtggcccaatatggccctgccgcttccggctctgggaggaggggcgagcgggggttggggcgggggcaagctgggaactccaggcgcctggcccgggaggccactgctgctgttccaatactaggctttccaggagcctgagcgctcgcgatgccggagcgggtcgcagggtggaggtgcccaccactcttggatgggagggcttcacgtcactccgggtcctcccggccggtccttccatattagggcttcctgcttcccatatatggccatgtacgtcacggcggaggcgggcccgtgctgttccagacccttgaaatagaggccgattcggggagtcgcGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGGTGCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTCTGAgTC
经优化的AAV-Egr1-dsGFP-KCNA1载体的核苷酸序列(SEQ ID NO:32)
cctgcaggcagctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcctgcggccgcacgcgtctcgagctggccctccccacgcgggcgtccccgactcccgcgcgcgctcaggctcccagttgggaaccaaggagggggaggatgggggggggggtgtgcgccgacccggaaacgccatataaggagcaggaaggatcccccgccggaacagaccttatttgggcagcgccttatatggagtggcccaatatggccctgccgcttccggctctgggaggaggggcgagcgggggttggggcgggggcaagctgggaactccaggcgcctggcccgggaggccactgctgctgttccaatactaggctttccaggagcctgagcgctcgcgatgccggagcgggtcgcagggtggaggtgcccaccactcttggatgggagggcttcacgtcactccgggtcctcccggccggtccttccatattagggcttcctgcttcccatatatggccatgtacgtcacggcggaggcgggcccgtgctgttccagacccttgaaatagaggccgattcggggagtcgcGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGACCGTGATGAGCGGCGAGAACGTGGACGAGGCCTCTGCCGCTCCTGGACACCCTCAGGATGGCAGCTATCCCAGACAGGCCGACCACGACGATCACGAGTGCTGCGAGCGGGTCGTGATCAACATCAGCGGCCTGAGATTCGAGACACAGCTGAAAACCCTGGCCCAGTTCCCCAACACCCTGCTGGGCAACCCCAAGAAACGGATGCGGTACTTCGACCCCCTGCGGAACGAGTACTTCTTCGACCGGAACCGGCCCAGCTTCGACGCCATCCTGTACTACTACCAGAGCGGCGGCAGACTGCGGAGGCCCGTGAATGTGCCCCTGGACATGTTCAGCGAGGAAATCAAGTTCTACGAGCTGGGCGAGGAAGCCATGGAAAAGTTCAGAGAGGACGAGGGCTTCATCAAAGAGGAAGAGAGGCCCCTGCCCGAGAAAGAATACCAGAGACAAGTGTGGCTGCTGTTCGAGTACCCCGAGTCTAGCGGCCCTGCCAGAGTGATCGCCATCGTGTCCGTGATGGTCATCCTGATCTCTATCGTGATCTTCTGCCTGGAAACCCTGCCTGAGCTGAAGGACGACAAGGACTTCACCGGCACCGTGCACCGGATCGACAACACCACCGTGATCTACAACAGCAATATCTTCACCGACCCATTCTTCATCGTGGAAACACTGTGCATCATCTGGTTCAGCTTCGAGCTGGTCGTGCGGTTCTTCGCCTGCCCCAGCAAGACCGACTTCTTCAAGAACATCATGAACTTCATTGATATCGTGGCCATCATCCCCTACTTCATCACCCTGGGCACCGAGATCGCCGAGCAGGAAGGCAATCAGAAGGGCGAGCAGGCCACCAGCCTGGCCATTCTGAGAGTGATCAGACTCGTGCGGGTGTTCCGGATCTTCAAGCTGAGCCGGCACAGCAAGGGCCTGCAGATCCTGGGCCAGACACTGAAGGCCAGCATGAGAGAGCTGGGCCTGCTGATCTTCTTTCTGTTCATCGGCGTGATCCTGTTCAGCAGCGCCGTGTACTTCGCCGAGGCCGAAGAAGCCGAGAGCCACTTCAGCTCTATCCCCGACGCCTTTTGGTGGGCCGTGGTGTCCATGACCACAGTGGGCTACGGCGACATGGTGCCCGTGACAATCGGCGGCAAGATCGTGGGCAGCCTGTGTGCCATTGCCGGCGTGCTGACAGTCGCCCTGCCTGTGCCTGTGATCGTGTCCAACTTCAACTACTTCTACCACCGGGAAACCGAGGGGGAGGAACAGGCTCAGCTGCTGCACGTGTCCAGCCCCAATCTGGCCAGCGACAGCGACCTGAGCAGACGGTCTAGCAGCACCATGAGCAAGAGCGAGTACATGGAAATCGAAGAGGACATGAACAACTCTATCGCCCACTACCGCCAAGTGAACATCCGGACCGCCAACTGCACCACCGCCAACCAGAACTGCGTGAACAAGAGCAAGCTGCTGACCGATGTCTGAgTCGACAATCAACCTCATcgataccgagcgctgctcgagagatctacgggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttctgattttgtaggtaaccacgtgcggaccgagcggccgcaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagctgcctgcaggggcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatacgtcaaagcaaccatagtacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaattttatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtcatgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgt
Egr1-dsGFP-KCNJ2构建体的核苷酸序列(SEQ ID NO:33)
ctggccctccccacgcgggcgtccccgactcccgcgcgcgctcaggctcccagttgggaaccaaggagggggaggatgggggggggggtgtgcgccgacccggaaacgccatataaggagcaggaaggatcccccgccggaacagaccttatttgggcagcgccttatatggagtggcccaatatggccctgccgcttccggctctgggaggaggggcgagcgggggttggggcgggggcaagctgggaactccaggcgcctggcccgggaggccactgctgctgttccaatactaggctttccaggagcctgagcgctcgcgatgccggagcgggtcgcagggtggaggtgcccaccactcttggatgggagggcttcacgtcactccgggtcctcccggccggtccttccatattagggcttcctgcttcccatatatggccatgtacgtcacggcggaggcgggcccgtgctgttccagacccttgaaatagaggccgattcggggagtcgcGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTatgggcagtgtgagaaccaaccgctacagcatcgtctcttcagaagaagacggtatgaagttggccaccatggcagttgcaaatggctttgggaacgggaagagtaaagtccacacccgacaacagtgcaggagccgctttgtgaagaaagatggccactgtaatgttcagttcatcaatgtgggtgagaaggggcaacggtacctcgcagacatcttcaccacgtgtgtggacattcgctggcggtggatgctggttatcttctgcctggctttcgtcctgtcatggctgttttttggctgtgtgttttggttgatagctctgctccatggggacctggatgcatccaaagagggcaaagcttgtgtgtccgaggtcaacagcttcacggctgccttcctcttctccattgagacccagacaaccataggctatggtttcagatgtgtcacggatgaatgcccaattgctgttttcatggtggtgttccagtcaatcgtgggctgcatcatcgatgctttcatcattggcgcagtcatggccaagatggcaaagccaaagaagagaaacgagactcttgtcttcagtcacaatgccgtgattgccatgagagacggcaagctgtgtttgatgtggcgagtgggcaatcttcggaaaagccacttggtggaagctcatgttcgagcacagctcctcaaatccagaattacttctgaaggggagtatatccctctggatcaaatagacatcaatgttgggtttgacagtggaatcgatcgtatatttctggtgtccccaatcactatagtccatgaaatagatgaagacagtcctttatatgatttgagtaaacaggacattgacaacgcagactttgaaatcgtggtcatactggaaggcatggtggaagccactgccatgacgacacagtgccgtagctcttatctagcaaatgaaatcctgtggggccaccgctatgagcctgtgctctttgaagagaagcactactacaaagtggactactccaggttccacaaaacttacgaagtccccaacactcccctttgtagtgccagagacttagcagaaaagaaatatatcctctcaaatgcaaattcattttgctatgaaaatgaagttgccctcacaagcaaagaggaagacgacagtgaaaatggagttccagaaagcactagtacggacacgccccctgacatagaccttcacaaccaggcaagtgtacctctagagcccaggcccttacggcgagagtcggagatatgagTCGACAATC
经优化的AAV-Egr1-dsGFP-KCNJ2载体的核苷酸序列(SEQ ID NO:34)
cctgcaggcagctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcctgcggccgcacgcgtctcgagctggccctccccacgcgggcgtccccgactcccgcgcgcgctcaggctcccagttgggaaccaaggagggggaggatgggggggggggtgtgcgccgacccggaaacgccatataaggagcaggaaggatcccccgccggaacagaccttatttgggcagcgccttatatggagtggcccaatatggccctgccgcttccggctctgggaggaggggcgagcgggggttggggcgggggcaagctgggaactccaggcgcctggcccgggaggccactgctgctgttccaatactaggctttccaggagcctgagcgctcgcgatgccggagcgggtcgcagggtggaggtgcccaccactcttggatgggagggcttcacgtcactccgggtcctcccggccggtccttccatattagggcttcctgcttcccatatatggccatgtacgtcacggcggaggcgggcccgtgctgttccagacccttgaaatagaggccgattcggggagtcgcGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCGCCACCatgcccgccatgaagatcgagtgccgcatcaccggcaccctgaacggcgtggagttcgagctggtgggcggcggagagggcacccccgaGCAGGGCCGCATGACCAACAAGATGAAGAGCACCAAAGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGGTGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGTGCTGGTGGGCAGCTTCGCCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTTCGTGGTGGACAGCCACATGCACTTCAAGAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGCTGCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCCATCGCCTTCGCCAGATCTCGAGATATCAGCCATGGCTTCCCGCCGGCGGTGGCGGCGCAGGATGATGGCACGCTGCCCATGTCTTGTGCCCAGGAGAGCGGGATGGACCGTCACCCTGCAGCCTGTGCTTCTGCTAGGATCAATGTGACCGGTGAGGGCAGAGGAAGTCTTCTAACATGCGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTatgggcagtgtgagaaccaaccgctacagcatcgtctcttcagaagaagacggtatgaagttggccaccatggcagttgcaaatggctttgggaacgggaagagtaaagtccacacccgacaacagtgcaggagccgctttgtgaagaaagatggccactgtaatgttcagttcatcaatgtgggtgagaaggggcaacggtacctcgcagacatcttcaccacgtgtgtggacattcgctggcggtggatgctggttatcttctgcctggctttcgtcctgtcatggctgttttttggctgtgtgttttggttgatagctctgctccatggggacctggatgcatccaaagagggcaaagcttgtgtgtccgaggtcaacagcttcacggctgccttcctcttctccattgagacccagacaaccataggctatggtttcagatgtgtcacggatgaatgcccaattgctgttttcatggtggtgttccagtcaatcgtgggctgcatcatcgatgctttcatcattggcgcagtcatggccaagatggcaaagccaaagaagagaaacgagactcttgtcttcagtcacaatgccgtgattgccatgagagacggcaagctgtgtttgatgtggcgagtgggcaatcttcggaaaagccacttggtggaagctcatgttcgagcacagctcctcaaatccagaattacttctgaaggggagtatatccctctggatcaaatagacatcaatgttgggtttgacagtggaatcgatcgtatatttctggtgtccccaatcactatagtccatgaaatagatgaagacagtcctttatatgatttgagtaaacaggacattgacaacgcagactttgaaatcgtggtcatactggaaggcatggtggaagccactgccatgacgacacagtgccgtagctcttatctagcaaatgaaatcctgtggggccaccgctatgagcctgtgctctttgaagagaagcactactacaaagtggactactccaggttccacaaaacttacgaagtccccaacactcccctttgtagtgccagagacttagcagaaaagaaatatatcctctcaaatgcaaattcattttgctatgaaaatgaagttgccctcacaagcaaagaggaagacgacagtgaaaatggagttccagaaagcactagtacggacacgccccctgacatagaccttcacaaccaggcaagtgtacctctagagcccaggcccttacggcgagagtcggagatatgagTCGACAATCAACCTCATcgataccgagcgctgctcgagagatctacgggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttctgattttgtaggtaaccacgtgcggaccgagcggccgcaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagctgcctgcaggggcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatacgtcaaagcaaccatagtacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaattttatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtcatgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgt
Tet-On-dCAS9VP64构建体的核苷酸序列(SEQ ID NO:35)
ATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGCTCGGTACCCACCGGTGTCGACTCTAGAgccaccATGCCCAAGAAGAAGAGGAAGGTGGGAAGGGGGATGGACAAGAAGTACTCCATTGGGCTCGCTATCGGCACAAACAGCGTCGGCTGGGCCGTCATTACGGACGAGTACAAGGTGCCGAGCAAAAAATTCAAAGTTCTGGGCAATACCGATCGCCACAGCATAAAGAAGAACCTCATTGGCGCCCTCCTGTTCGACTCCGGGGAGACGGCCGAAGCCACGCGGCTCAAAAGAACAGCACGGCGCAGATATACCCGCAGAAAGAATCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTTAGTAATGAGATGGCTAAGGTGGATGACTCTTTCTTCCATAGGCTGGAGGAGTCCTTTTTGGTGGAGGAGGATAAAAAGCACGAGCGCCACCCAATCTTTGGCAATATCGTGGACGAGGTGGCGTACCATGAAAAGTACCCAACCATATATCATCTGAGGAAGAAGCTTGTAGACAGTACTGATAAGGCTGACTTGCGGTTGATCTATCTCGCGCTGGCGCATATGATCAAATTTCGGGGACACTTCCTCATCGAGGGGGACCTGAACCCAGACAACAGCGATGTCGACAAACTCTTTATCCAACTGGTTCAGACTTACAATCAGCTTTTCGAAGAGAACCCGATCAACGCATCCGGAGTTGACGCCAAAGCAATCCTGAGCGCTAGGCTGTCCAAATCCCGGCGGCTCGAAAACCTCATCGCACAGCTCCCTGGGGAGAAGAAGAACGGCCTGTTTGGTAATCTTATCGCCCTGTCACTCGGGCTGACCCCCAACTTTAAATCTAACTTCGACCTGGCCGAAGATGCCAAGCTTCAACTGAGCAAAGACACCTACGATGATGATCTCGACAATCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCAGACCTTTTTTTGGCGGCAAAGAACCTGTCAGACGCCATTCTGCTGAGTGATATTCTGCGAGTGAACACGGAGATCACCAAAGCTCCGCTGAGCGCTAGTATGATCAAGCGCTATGATGAGCACCACCAAGACTTGACTTTGCTGAAGGCCCTTGTCAGACAGCAACTGCCTGAGAAGTACAAGGAAATTTTCTTCGATCAGTCTAAAAATGGCTACGCCGGATACATTGACGGCGGAGCAAGCCAGGAGGAATTTTACAAATTTATTAAGCCCATCTTGGAAAAAATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTAAAGCTTAACAGAGAAGATCTGTTGCGCAAACAGCGCACTTTCGACAATGGAAGCATCCCCCACCAGATTCACCTGGGCGAACTGCACGCTATCCTCAGGCGGCAAGAGGATTTCTACCCCTTTTTGAAAGATAACAGGGAAAAGATTGAGAAAATCCTCACATTTCGGATACCCTACTATGTAGGCCCCCTCGCCCGGGGAAATTCCAGATTCGCGTGGATGACTCGCAAATCAGAAGAGACCATCACTCCCTGGAACTTCGAGGAAGTCGTGGATAAGGGGGCCTCTGCCCAGTCCTTCATCGAAAGGATGACTAACTTTGATAAAAATCTGCCTAACGAAAAGGTGCTTCCTAAACACTCTCTGCTGTACGAGTACTTCACAGTTTATAACGAGCTCACCAAGGTCAAATACGTCACAGAAGGGATGAGAAAGCCAGCATTCCTGTCTGGAGAGCAGAAGAAAGCTATCGTGGACCTCCTCTTCAAGACGAACCGGAAAGTTACCGTGAAACAGCTCAAAGAAGACTATTTCAAAAAGATTGAATGTTTCGACTCTGTTGAAATCAGCGGAGTGGAGGATCGCTTCAACGCATCCCTGGGAACGTATCACGATCTCCTGAAAATCATTAAAGACAAGGACTTCCTGGACAATGAGGAGAACGAGGACATTCTTGAGGACATTGTCCTCACCCTTACGTTGTTTGAAGATAGGGAGATGATTGAAGAACGCTTGAAAACTTACGCTCATCTCTTCGACGACAAAGTCATGAAACAGCTCAAGAGGCGCCGATATACAGGATGGGGGCGGCTGTCAAGAAAACTGATCAATGGGATCCGAGACAAGCAGAGTGGAAAGACAATCCTGGATTTTCTTAAGTCCGATGGATTTGCCAACCGGAACTTCATGCAGTTGATCCATGATGACTCTCTCACCTTTAAGGAGGACATCCAGAAAGCACAAGTTTCTGGCCAGGGGGACAGTCTTCACGAGCACATCGCTAATCTTGCAGGTAGCCCAGCTATCAAAAAGGGAATACTGCAGACCGTTAAGGTCGTGGATGAACTCGTCAAAGTAATGGGAAGGCATAAGCCCGAGAATATCGTTATCGAGATGGCCCGAGAGAACCAAACTACCCAGAAGGGACAGAAGAACAGTAGGGAAAGGATGAAGAGGATTGAAGAGGGTATAAAAGAACTGGGGTCCCAAATCCTTAAGGAACACCCAGTTGAAAACACCCAGCTTCAGAATGAGAAGCTCTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCAGGGACATGTACGTGGATCAGGAACTGGACATCAATCGGCTCTCCGACTACGACGTGGCTGCTATCGTGCCCCAGTCTTTTCTCAAAGATGATTCTATTGATAATAAAGTGTTGACAAGATCCGATAAAgcTAGAGGGAAGAGTGATAACGTCCCCTCAGAAGAAGTTGTCAAGAAAATGAAAAATTATTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAACTGATCACACAACGGAAGTTCGATAATCTGACTAAGGCTGAACGAGGTGGCCTGTCTGAGTTGGATAAAGCCGGCTTCATCAAAAGGCAGCTTGTTGAGACACGCCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAAATTCTCGATTCACGCATGAACACCAAGTACGATGAAAATGACAAACTGATTCGAGAGGTGAAAGTTATTACTCTGAAGTCTAAGCTGGTCTCAGATTTCAGAAAGGACTTTCAGTTTTATAAGGTGAGAGAGATCAACAATTACCACCATGCGCATGATGCCTACCTGAATGCAGTGGTAGGCACTGCACTTATCAAAAAATATCCCAAGCTTGAATCTGAATTTGTTTACGGAGACTATAAAGTGTACGATGTTAGGAAAATGATCGCAAAGTCTGAGCAGGAAATAGGCAAGGCCACCGCTAAGTACTTCTTTTACAGCAATATTATGAATTTTTTCAAGACCGAGATTACACTGGCCAATGGAGAGATTCGGAAGCGACCACTTATCGAAACAAACGGAGAAACAGGAGAAATCGTGTGGGACAAGGGTAGGGATTTCGCGACAGTCCGGAAGGTCCTGTCCATGCCGCAGGTGAACATCGTTAAAAAGACCGAAGTACAGACCGGAGGCTTCTCCAAGGAAAGTATCCTCCCGAAAAGGAACAGCGACAAGCTGATCGCACGCAAAAAAGATTGGGACCCCAAGAAATACGGCGGATTCGATTCTCCTACAGTCGCTTACAGTGTACTGGTTGTGGCCAAAGTGGAGAAAGGGAAGTCTAAAAAACTCAAAAGCGTCAAGGAACTGCTGGGCATCACAATCATGGAGCGATCAAGCTTCGAAAAAAACCCCATCGACTTTCTCGAGGCGAAAGGATATAAAGAGGTCAAAAAAGACCTCATCATTAAGCTTCCCAAGTACTCTCTCTTTGAGCTTGAAAACGGCCGGAAACGAATGCTCGCTAGTGCGGGCGAGCTGCAGAAAGGTAACGAGCTGGCACTGCCCTCTAAATACGTTAATTTCTTGTATCTGGCCAGCCACTATGAAAAGCTCAAAGGGTCTCCCGAAGATAATGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAACAACACAAACACTACCTTGATGAGATCATCGAGCAAATAAGCGAATTCTCCAAAAGAGTGATCCTCGCCGACGCTAACCTCGATAAGGTGCTTTCTGCTTACAATAAGCACAGGGATAAGCCCATCAGGGAGCAGGCAGAAAACATTATCCACTTGTTTACTCTGACCAACTTGGGCGCGCCTGCAGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATAGACAGAAAGCGGTACACCTCTACAAAGGAGGTCCTGGACGCCACACTGATTCATCAGTCAATTACGGGGCTCTATGAAACAAGAATCGACCTCTCTCAGCTCGGTGGAGACAGCAGGGCTGACCCCAAGAAGAAGAGGAAGGTGGAGGCCAGCGGTTCCGGACGGGCTGACGCATTGGACGATTTTGATCTGGATATGCTGGGAAGTGACGCCCTCGATGATTTTGACCTTGACATGCTTGGTTCGGATGCCCTTGATGACTTTGACCTCGACATGCTCGGCAGTGACGCCCTTGATGATTTCGACCTGGACATGCTGATTAACTCT
经优化的AAV-Tet-On-dCAS9VP64载体的核苷酸序列(SEQ ID NO:36)
cctgcaggcagctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcctgcggcctCTAGACCAGTTTGGTTAGATCTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAGTCGAGCTCGGTACCCACCGGTGTCGACTCTAGAgccaccATGCCCAAGAAGAAGAGGAAGGTGGGAAGGGGGATGGACAAGAAGTACTCCATTGGGCTCGCTATCGGCACAAACAGCGTCGGCTGGGCCGTCATTACGGACGAGTACAAGGTGCCGAGCAAAAAATTCAAAGTTCTGGGCAATACCGATCGCCACAGCATAAAGAAGAACCTCATTGGCGCCCTCCTGTTCGACTCCGGGGAGACGGCCGAAGCCACGCGGCTCAAAAGAACAGCACGGCGCAGATATACCCGCAGAAAGAATCGGATCTGCTACCTGCAGGAGATCTTTAGTAATGAGATGGCTAAGGTGGATGACTCTTTCTTCCATAGGCTGGAGGAGTCCTTTTTGGTGGAGGAGGATAAAAAGCACGAGCGCCACCCAATCTTTGGCAATATCGTGGACGAGGTGGCGTACCATGAAAAGTACCCAACCATATATCATCTGAGGAAGAAGCTTGTAGACAGTACTGATAAGGCTGACTTGCGGTTGATCTATCTCGCGCTGGCGCATATGATCAAATTTCGGGGACACTTCCTCATCGAGGGGGACCTGAACCCAGACAACAGCGATGTCGACAAACTCTTTATCCAACTGGTTCAGACTTACAATCAGCTTTTCGAAGAGAACCCGATCAACGCATCCGGAGTTGACGCCAAAGCAATCCTGAGCGCTAGGCTGTCCAAATCCCGGCGGCTCGAAAACCTCATCGCACAGCTCCCTGGGGAGAAGAAGAACGGCCTGTTTGGTAATCTTATCGCCCTGTCACTCGGGCTGACCCCCAACTTTAAATCTAACTTCGACCTGGCCGAAGATGCCAAGCTTCAACTGAGCAAAGACACCTACGATGATGATCTCGACAATCTGCTGGCCCAGATCGGCGACCAGTACGCAGACCTTTTTTTGGCGGCAAAGAACCTGTCAGACGCCATTCTGCTGAGTGATATTCTGCGAGTGAACACGGAGATCACCAAAGCTCCGCTGAGCGCTAGTATGATCAAGCGCTATGATGAGCACCACCAAGACTTGACTTTGCTGAAGGCCCTTGTCAGACAGCAACTGCCTGAGAAGTACAAGGAAATTTTCTTCGATCAGTCTAAAAATGGCTACGCCGGATACATTGACGGCGGAGCAAGCCAGGAGGAATTTTACAAATTTATTAAGCCCATCTTGGAAAAAATGGACGGCACCGAGGAGCTGCTGGTAAAGCTTAACAGAGAAGATCTGTTGCGCAAACAGCGCACTTTCGACAATGGAAGCATCCCCCACCAGATTCACCTGGGCGAACTGCACGCTATCCTCAGGCGGCAAGAGGATTTCTACCCCTTTTTGAAAGATAACAGGGAAAAGATTGAGAAAATCCTCACATTTCGGATACCCTACTATGTAGGCCCCCTCGCCCGGGGAAATTCCAGATTCGCGTGGATGACTCGCAAATCAGAAGAGACCATCACTCCCTGGAACTTCGAGGAAGTCGTGGATAAGGGGGCCTCTGCCCAGTCCTTCATCGAAAGGATGACTAACTTTGATAAAAATCTGCCTAACGAAAAGGTGCTTCCTAAACACTCTCTGCTGTACGAGTACTTCACAGTTTATAACGAGCTCACCAAGGTCAAATACGTCACAGAAGGGATGAGAAAGCCAGCATTCCTGTCTGGAGAGCAGAAGAAAGCTATCGTGGACCTCCTCTTCAAGACGAACCGGAAAGTTACCGTGAAACAGCTCAAAGAAGACTATTTCAAAAAGATTGAATGTTTCGACTCTGTTGAAATCAGCGGAGTGGAGGATCGCTTCAACGCATCCCTGGGAACGTATCACGATCTCCTGAAAATCATTAAAGACAAGGACTTCCTGGACAATGAGGAGAACGAGGACATTCTTGAGGACATTGTCCTCACCCTTACGTTGTTTGAAGATAGGGAGATGATTGAAGAACGCTTGAAAACTTACGCTCATCTCTTCGACGACAAAGTCATGAAACAGCTCAAGAGGCGCCGATATACAGGATGGGGGCGGCTGTCAAGAAAACTGATCAATGGGATCCGAGACAAGCAGAGTGGAAAGACAATCCTGGATTTTCTTAAGTCCGATGGATTTGCCAACCGGAACTTCATGCAGTTGATCCATGATGACTCTCTCACCTTTAAGGAGGACATCCAGAAAGCACAAGTTTCTGGCCAGGGGGACAGTCTTCACGAGCACATCGCTAATCTTGCAGGTAGCCCAGCTATCAAAAAGGGAATACTGCAGACCGTTAAGGTCGTGGATGAACTCGTCAAAGTAATGGGAAGGCATAAGCCCGAGAATATCGTTATCGAGATGGCCCGAGAGAACCAAACTACCCAGAAGGGACAGAAGAACAGTAGGGAAAGGATGAAGAGGATTGAAGAGGGTATAAAAGAACTGGGGTCCCAAATCCTTAAGGAACACCCAGTTGAAAACACCCAGCTTCAGAATGAGAAGCTCTACCTGTACTACCTGCAGAACGGCAGGGACATGTACGTGGATCAGGAACTGGACATCAATCGGCTCTCCGACTACGACGTGGCTGCTATCGTGCCCCAGTCTTTTCTCAAAGATGATTCTATTGATAATAAAGTGTTGACAAGATCCGATAAAgcTAGAGGGAAGAGTGATAACGTCCCCTCAGAAGAAGTTGTCAAGAAAATGAAAAATTATTGGCGGCAGCTGCTGAACGCCAAACTGATCACACAACGGAAGTTCGATAATCTGACTAAGGCTGAACGAGGTGGCCTGTCTGAGTTGGATAAAGCCGGCTTCATCAAAAGGCAGCTTGTTGAGACACGCCAGATCACCAAGCACGTGGCCCAAATTCTCGATTCACGCATGAACACCAAGTACGATGAAAATGACAAACTGATTCGAGAGGTGAAAGTTATTACTCTGAAGTCTAAGCTGGTCTCAGATTTCAGAAAGGACTTTCAGTTTTATAAGGTGAGAGAGATCAACAATTACCACCATGCGCATGATGCCTACCTGAATGCAGTGGTAGGCACTGCACTTATCAAAAAATATCCCAAGCTTGAATCTGAATTTGTTTACGGAGACTATAAAGTGTACGATGTTAGGAAAATGATCGCAAAGTCTGAGCAGGAAATAGGCAAGGCCACCGCTAAGTACTTCTTTTACAGCAATATTATGAATTTTTTCAAGACCGAGATTACACTGGCCAATGGAGAGATTCGGAAGCGACCACTTATCGAAACAAACGGAGAAACAGGAGAAATCGTGTGGGACAAGGGTAGGGATTTCGCGACAGTCCGGAAGGTCCTGTCCATGCCGCAGGTGAACATCGTTAAAAAGACCGAAGTACAGACCGGAGGCTTCTCCAAGGAAAGTATCCTCCCGAAAAGGAACAGCGACAAGCTGATCGCACGCAAAAAAGATTGGGACCCCAAGAAATACGGCGGATTCGATTCTCCTACAGTCGCTTACAGTGTACTGGTTGTGGCCAAAGTGGAGAAAGGGAAGTCTAAAAAACTCAAAAGCGTCAAGGAACTGCTGGGCATCACAATCATGGAGCGATCAAGCTTCGAAAAAAACCCCATCGACTTTCTCGAGGCGAAAGGATATAAAGAGGTCAAAAAAGACCTCATCATTAAGCTTCCCAAGTACTCTCTCTTTGAGCTTGAAAACGGCCGGAAACGAATGCTCGCTAGTGCGGGCGAGCTGCAGAAAGGTAACGAGCTGGCACTGCCCTCTAAATACGTTAATTTCTTGTATCTGGCCAGCCACTATGAAAAGCTCAAAGGGTCTCCCGAAGATAATGAGCAGAAGCAGCTGTTCGTGGAACAACACAAACACTACCTTGATGAGATCATCGAGCAAATAAGCGAATTCTCCAAAAGAGTGATCCTCGCCGACGCTAACCTCGATAAGGTGCTTTCTGCTTACAATAAGCACAGGGATAAGCCCATCAGGGAGCAGGCAGAAAACATTATCCACTTGTTTACTCTGACCAACTTGGGCGCGCCTGCAGCCTTCAAGTACTTCGACACCACCATAGACAGAAAGCGGTACACCTCTACAAAGGAGGTCCTGGACGCCACACTGATTCATCAGTCAATTACGGGGCTCTATGAAACAAGAATCGACCTCTCTCAGCTCGGTGGAGACAGCAGGGCTGACCCCAAGAAGAAGAGGAAGGTGGAGGCCAGCGGTTCCGGACGGGCTGACGCATTGGACGATTTTGATCTGGATATGCTGGGAAGTGACGCCCTCGATGATTTTGACCTTGACATGCTTGGTTCGGATGCCCTTGATGACTTTGACCTCGACATGCTCGGCAGTGACGCCCTTGATGATTTCGACCTGGACATGCTGATTAACTCTAGATAAGaattcAATAAAAGATCTTTATTTTCATTAGATCTGTGTGTTGGTTTTTTGTGTgcggccgcaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagctgcctgcaggggcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatacgtcaaagcaaccatagtacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaattttatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtcatgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtggaagccgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgt
sgRNA_KCNA1的核苷酸序列(SEQ ID NO:37)
AGTCAATGATCACATCCTCC
sgRNA_LacZ(对照)的核苷酸序列(SEQ ID NO:38)
TGCGAATACGCCCACGCGAT
经优化的AAV-sgRNA_KCNA1-cFos-rTTA-EGFP载体的核苷酸序列(SEQ ID NO:39)
ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcctgcggccgcacgcgtTTAACGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCGagtcaatgatcacatcctccGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCTTTTTTGTTAACATCGATtCTCGAGTTCGCTATTACGCCAGTTTTATTGCGGCCGCAGCTTTCCTTTAGGAACAGAGGCTTCGAGCCTTTAAGGCTGCGTACTTGCTTCTCCTAATACCAGAGACTCAAAAAAAAAAAAAAAGTTCCAGATTGCTGGACAATGACCCGGGTCTCATCCCTTGACCCTGGGAACCGGGTCCACATTGAATCAGGTGCGAATGTTCGCTCGCCTTCTCTGCCTTTCCCGCCTCCCCTCCCCCGGCCGCGGCCCCGGTTCCCCCCCTGCGCTGCACCCTCAGAGTTGGCTGCAGCCGGCGAGCTGTTCCCGTCAATCCCTCCCTCCTTTACACAGGATGTCCATATTAGGACATCTGCGTCAGCAGGTTTCCACGGCCGGTCCCTGTTGTTCTGGGGGGGGGACCATCTCCGAAATCCTACACGCGGAAGGTCTAGGAGACCCCCTAAGATCCCAAATGTGAACACTCATAGGTGAAAGATGTATGCCAAGACGGGGGTTGAAAGCCTGGGGCGTAGAGTTGACGACAGAGCGCCCGCAGAGGGCCTTGGGGCGCGCTTCCCCCCCCTTCCAGTTCCGCCCAGTGACGTAGGAAGTCCATCCATTCACAGCGCTTCTATAAAGGCGCCAGCTGAGGCGCCTACTACTCCAACCGCGACTGCAGCGAGCAACTGAGAAGACTGGATAGAGCCGGCGGTTCCGCGAACGAGCAGTGACCGCGCTCCCACCCAGCTCTGCTCTGCAGCTCCCACCAGTGTCTGGCCGCATCGATTCTAGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCATGTCTAGACTGGACAAGAGCAAAGTCATAAACGGCGCTCTGGAATTACTCAATGGAGTCGGTATCGAAGGCCTGACGACAAGGAAACTCGCTCAAAAGCTGGGAGTTGAGCAGCCTACCCTGTACTGGCACGTGAAGAACAAGCGGGCCCTGCTCGATGCCCTGCCAATCGAGATGCTGGACAGGCATCATACCCACTTCTGCCCCCTGGAAGGCGAGTCATGGCAAGACTTTCTGCGGAACAACGCCAAGTCATTCCGCTGTGCTCTCCTCTCACATCGCGACGGGGCTAAAGTGCATCTCGGCACCCGCCCAACAGAGAAACAGTACGAAACCCTGGAAAATCAGCTCGCGTTCCTGTGTCAGCAAGGCTTCTCCCTGGAGAACGCACTGTACGCTCTGTCCGCCGTGGGCCACTTTACACTGGGCTGCGTATTGGAGGAACAGGAGCATCAAGTAGCAAAAGAGGAAAGAGAGACACCTACCACCGATTCTATGCCCCCACTTCTGAGACAAGCAATTGAGCTGTTCGACCGGCAGGGAGCCGAACCTGCCTTCCTTTTCGGCCTGGAACTAATCATATGTGGCCTGGAGAAACAGCTAAAGTGCGAAAGCGGCGGGCCGGCCGACGCCCTTGACGATTTTGACTTAGACATGCTCCCAGCCGATGCCCTTGACGACTTTGACCTTGATATGCTGCCTGCTGACGCTCTTGACGATTTTGACCTTGACATGCTCCCCGGGTTCGAAGCtGAgGGTCGGGGCTCTCTGCTCACATGTGGCGACGTCGAGGAGAATCCCGGACCGGCCCCgGGTGTACAAatggtgagcaagggcgaggagctgttcaccggggtggtgcccatcctggtcgagctggacggcgacgtaaacggccacaagttcagcgtgtccggcgagggcgagggcgatgccacctacggcaagctgaccctgaagttcatctgcaccaccggcaagctgcccgtgccctggcccaccctcgtgaccaccctgacctacggcgtgcagtgcttcagccgctaccccgaccacatgaagcagcacgacttcttcaagtccgccatgcccgaaggctacgtccaggagcgcaccatcttcttcaaggacgacggcaactacaagacccgcgccgaggtgaagttcgagggcgacaccctggtgaaccgcatcgagctgaagggcatcgacttcaaggaggacggcaacatcctggggcacaagctggagtacaactacaacagccacaacgtctatatcatggccgacaagcagaagaacggcatcaaggtgaacttcaagatccgccacaacatcgaggacggcagcgtgcagctcgccgaccactaccagcagaacacccccatcggcgacggccccgtgctgctgcccgacaaccactacctgagcacccagtccgccctgagcaaagaccccaacgagaagcgcgatcacatggtcctgctggagttcgtgaccgccgccgggatcactctcggcatggacgagctgtacaagtaaACCGGTGCTAGCtaaTctagagTCGACAATCAACCTCATcgataccgagcgctgctcgagagatctacgggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttctgattttgtaggtaaccacgtgcggaccgagcggccgcaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagctgcctgcaggggcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatacgtcaaagcaaccatagtacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaattttatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtcatgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctca
经优化的AAV-sgRNA_LacZ-cFos-rTTA-EGFP载体的核苷酸序列(SEQ ID NO:40)
cctgcaggcagctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcctgcggccgcacgcgtTTAACGAGGGCCTATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGTAAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTATGTTTTAAAATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCGATTTCTTGGCTTTATATATCTTGTGGAAAGGACGAAACACCGTGCGAATACGCCCACGCGATGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCTTTTTTGTTAACATCGATtTCCCACGGGGTCTCGAGTTCGCTATTACGCCAGTTTTATTGCGGCCGCAGCTTTCCTTTAGGAACAGAGGCTTCGAGCCTTTAAGGCTGCGTACTTGCTTCTCCTAATACCAGAGACTCAAAAAAAAAAAAAAAGTTCCAGATTGCTGGACAATGACCCGGGTCTCATCCCTTGACCCTGGGAACCGGGTCCACATTGAATCAGGTGCGAATGTTCGCTCGCCTTCTCTGCCTTTCCCGCCTCCCCTCCCCCGGCCGCGGCCCCGGTTCCCCCCCTGCGCTGCACCCTCAGAGTTGGCTGCAGCCGGCGAGCTGTTCCCGTCAATCCCTCCCTCCTTTACACAGGATGTCCATATTAGGACATCTGCGTCAGCAGGTTTCCACGGCCGGTCCCTGTTGTTCTGGGGGGGGGACCATCTCCGAAATCCTACACGCGGAAGGTCTAGGAGACCCCCTAAGATCCCAAATGTGAACACTCATAGGTGAAAGATGTATGCCAAGACGGGGGTTGAAAGCCTGGGGCGTAGAGTTGACGACAGAGCGCCCGCAGAGGGCCTTGGGGCGCGCTTCCCCCCCCTTCCAGTTCCGCCCAGTGACGTAGGAAGTCCATCCATTCACAGCGCTTCTATAAAGGCGCCAGCTGAGGCGCCTACTACTCCAACCGCGACTGCAGCGAGCAACTGAGAAGACTGGATAGAGCCGGCGGTTCCGCGAACGAGCAGTGACCGCGCTCCCACCCAGCTCTGCTCTGCAGCTCCCACCAGTGTCTGGCCGCATCGATTCTAGAATTCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATGACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGCGGTGATGCCTTTGAGGGTGGCCGCGTCCATCTGGTCAGAAAAGACAATCTTTTTGTTGTCAAGCTTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAACTGCAGCCCAAGCGGAGGATCCATGTCTAGACTGGACAAGAGCAAAGTCATAAACGGCGCTCTGGAATTACTCAATGGAGTCGGTATCGAAGGCCTGACGACAAGGAAACTCGCTCAAAAGCTGGGAGTTGAGCAGCCTACCCTGTACTGGCACGTGAAGAACAAGCGGGCCCTGCTCGATGCCCTGCCAATCGAGATGCTGGACAGGCATCATACCCACTTCTGCCCCCTGGAAGGCGAGTCATGGCAAGACTTTCTGCGGAACAACGCCAAGTCATTCCGCTGTGCTCTCCTCTCACATCGCGACGGGGCTAAAGTGCATCTCGGCACCCGCCCAACAGAGAAACAGTACGAAACCCTGGAAAATCAGCTCGCGTTCCTGTGTCAGCAAGGCTTCTCCCTGGAGAACGCACTGTACGCTCTGTCCGCCGTGGGCCACTTTACACTGGGCTGCGTATTGGAGGAACAGGAGCATCAAGTAGCAAAAGAGGAAAGAGAGACACCTACCACCGATTCTATGCCCCCACTTCTGAGACAAGCAATTGAGCTGTTCGACCGGCAGGGAGCCGAACCTGCCTTCCTTTTCGGCCTGGAACTAATCATATGTGGCCTGGAGAAACAGCTAAAGTGCGAAAGCGGCGGGCCGGCCGACGCCCTTGACGATTTTGACTTAGACATGCTCCCAGCCGATGCCCTTGACGACTTTGACCTTGATATGCTGCCTGCTGACGCTCTTGACGATTTTGACCTTGACATGCTCCCCGGGTTCGAAGCtGAgGGTCGGGGCTCTCTGCTCACATGTGGCGACGTCGAGGAGAATCCCGGACCGGCCCCgGGTGTACAAatggtgagcaagggcgaggagctgttcaccggggtggtgcccatcctggtcgagctggacggcgacgtaaacggccacaagttcagcgtgtccggcgagggcgagggcgatgccacctacggcaagctgaccctgaagttcatctgcaccaccggcaagctgcccgtgccctggcccaccctcgtgaccaccctgacctacggcgtgcagtgcttcagccgctaccccgaccacatgaagcagcacgacttcttcaagtccgccatgcccgaaggctacgtccaggagcgcaccatcttcttcaaggacgacggcaactacaagacccgcgccgaggtgaagttcgagggcgacaccctggtgaaccgcatcgagctgaagggcatcgacttcaaggaggacggcaacatcctggggcacaagctggagtacaactacaacagccacaacgtctatatcatggccgacaagcagaagaacggcatcaaggtgaacttcaagatccgccacaacatcgaggacggcagcgtgcagctcgccgaccactaccagcagaacacccccatcggcgacggccccgtgctgctgcccgacaaccactacctgagcacccagtccgccctgagcaaagaccccaacgagaagcgcgatcacatggtcctgctggagttcgtgaccgccgccgggatcactctcggcatggacgagctgtacaagtaaACCGGTGCTAGCtaaTctagagTCGACAATCAACCTCATcgataccgagcgctgctcgagagatctacgggtggcatccctgtgacccctccccagtgcctctcctggccctggaagttgccactccagtgcccaccagccttgtcctaataaaattaagttgcatcattttgtctgactaggtgtccttctataatattatggggtggaggggggtggtatggagcaaggggcaagttgggaagacaacctgtagggcctgcggggtctattgggaaccaagctggagtgcagtggcacaatcttggctcactgcaatctccgcctcctgggttcaagcgattctcctgcctcagcctcccgagttgttgggattccaggcatgcatgaccaggctcagctaatttttgtttttttggtagagacggggtttcaccatattggccaggctggtctccaactcctaatctcaggtgatctacccaccttggcctcccaaattgctgggattacaggcgtgaaccactgctcccttccctgtccttctgattttgtaggtaaccacgtgcggaccgagcggccgcaggaacccctagtgatggagttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagctgcctgcaggggcgcctgatgcggtattttctccttacgcatctgtgcggtatttcacaccgcatacgtcaaagcaaccatagtacgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaattttaacaaaatattaacgtttacaattttatggtgcactctcagtacaatctgctctgatgccgcatagttaagccagccccgacacccgccaacacccgctgacgcgccctgacgggcttgtctgctcccggcatccgcttacagacaagctgtgaccgtctccgggagctgcatgtgtcagaggttttcaccgtcatcaccgaaacgcgcgagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtcatgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaacccctatttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaatgcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtattgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgtagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttttgctcacatgt

Claims (68)

1.一种在治疗受试者的与神经元过度兴奋相关的神经障碍的方法中使用的表达载体，所述载体包含：
(a)(i)编码多肽(“基因产物”)的多核苷酸序列(“基因”)，所述多肽在所述受试者的神经细胞中表达时改善所述障碍，其中所述基因可操作地连接到
(ii)适于驱动所述基因产物在所述受试者的神经细胞中表达的神经元活性依赖性启动子；或者
(b)(i)编码中间多肽(“中间基因产物”)的中间多核苷酸序列(“中间基因”)，所述中间多肽改变另外的多核苷酸序列(“另外的基因”)的表达，所述另外的基因编码另外的多肽(“另外的基因产物”)，所述另外的多肽在所述受试者的神经细胞中表达时改善所述障碍，其中所述中间基因可操作地连接到：
(ii)适于驱动所述中间基因产物在所述受试者的神经细胞中表达的神经元活性依赖性启动子。
2.根据权利要求1所述的用于所述用途的表达载体，其中所述基因产物或中间基因产物或另外的基因产物的表达水平在所述神经元变得更加兴奋时增加并且在所述神经元变得不那么兴奋时降低。
3.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子是锥体神经元活性依赖性启动子。
4.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子是立即早期基因(IEG)启动子。
5.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子是c-Fos。
6.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:3中所示的核苷酸序列或者与SEQ IDNO:3中所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子是Arc，或者其中所述启动子包含含有Arc核苷酸序列的一部分的核苷酸序列。
8.根据权利要求1-4中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子是mArc(“最小Arc”)。
9.根据权利要求7或权利要求8所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:15中所示的核苷酸序列或者与SEQIDNO:15中所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列。
10.根据权利要求1-4中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子是ESARE(“增强型突触活性响应元件”)。
11.根据权利要求9所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:16中所示的核苷酸序列或者与SEQ ID NO:16中所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列。
12.根据权利要求1-4中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子是NRAM(“Npas4特异性稳健活性标记”)。
13.根据权利要求11所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:17中所示的核苷酸序列或者与SEQ ID NO:17中所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列。
14.根据权利要求1-4中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子是Egr1。
15.根据权利要求13所述的用于所述用途的表达载体，其中所述启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:18中所示的核苷酸序列或者与SEQ ID NO:18中所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列。
16.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述基因或另外的基因是离子通道基因，并且所述基因产物或另外的基因产物是离子通道。
17.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述基因或另外的基因是钾离子通道基因，并且所述基因产物或另外的基因产物是钾离子通道。
18.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述基因或另外的基因是KCNA1基因，并且所述基因产物或另外的基因产物是Kv1.1钾通道。
19.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述基因或另外的基因是工程化KCNA1基因，并且所述基因产物或另外的基因产物是编辑的Kv1.1钾通道。
20.根据权利要求19所述的用于所述用途的表达载体，其中所述工程化KCNA1基因具有与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的核苷酸序列，并且
其中所述编辑的Kv1.1钾通道具有与SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且在对应于SEQ ID NO:2中所示的氨基酸残基400的位置处包含缬氨酸氨基酸残基。
21.根据权利要求1-16中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述基因或另外的基因是KNCJ2基因，并且所述基因产物或另外的基因产物是Kir2.1钾通道。
22.根据权利要求21所述的用于所述用途的表达载体，其中所述KNCJ2基因具有与SEQID NO:13中所示的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的核苷酸序列，并且
其中所述Kir2.1钾通道具有与SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
23.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述另外的基因是内源基因，并且所述另外的基因产物是内源基因产物。
24.根据权利要求23所述的用于所述用途的表达载体，其中所述内源基因是KCNA1或KCNJ2。
25.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述中间基因是核酸内切酶缺陷型cas(“dcas”)，如dcas9、spCas9或saCas9。
26.根据权利要求25所述的用于所述用途的表达载体，所述表达载体进一步包含：
(a)RNA聚合酶III，任选地其中所述聚合酶III是U6；以及
(b)靶向所述另外的基因的sgRNA(“单一指导RNA”)。
27.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体，其中所述中间基因产物经由中间表达系统、任选地中间诱导型表达系统增加所述另外的基因的表达。
28.根据权利要求27所述的用于所述用途的表达载体，其中所述中间诱导型表达系统是Tet-On表达系统。
29.一种在治疗受试者的与神经元过度兴奋相关的神经障碍的方法中使用的表达载体系统，所述表达载体系统包含：
(a)第一核苷酸序列，所述第一核苷酸序列包含适于驱动反向四环素控制的反式激活因子(“rtTA”)在所述受试者的神经细胞中表达的神经元活性依赖性启动子；以及
(b)第二核苷酸序列，所述第二核苷酸序列包含适于驱动根据前述权利要求中任一项所述的中间基因或另外的基因的表达的Tet-On启动子，
其中所述第一核苷酸、第二核苷酸或表达系统任选地进一步包含：
(c)RNA聚合酶，任选地其中所述RNA聚合酶是RNA聚合酶II或RNA聚合酶III，进一步任选地其中所述RNA聚合酶III是U6；以及
(d)靶向所述另外的基因的sgRNA(“单一指导RNA”)，
和/或
(e)四环素，任选地多西环素。
30.根据权利要求29所述的用于所述用途的表达载体系统，所述表达载体系统包含：
(a)第一核苷酸序列，所述第一核苷酸序列包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37或39中所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:37或39中所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列；以及
(b)第二核苷酸序列，所述第二核苷酸序列包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:35或36中所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO:35或36中所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列。
31.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述载体或载体系统可以引起所述受试者的神经元的尖峰频率降低超过5％、或超过10％、或超过20％、或超过30％、或超过40％、或超过50％、或超过60％、或超过70％、或超过80％、或超过90％、或超过91％、或超过92％、或超过93％、或超过94％、或超过95％、或超过96％、或超过97％、或超过98％、或超过99％或100％。
32.根据权利要求31所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述载体或载体系统可以引起所述受试者的神经元的尖峰频率降低超过75％。
33.根据权利要求31或权利要求32所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中在21DIV(体外天数)时或之后使用多电极阵列来测量神经元的尖峰频率的所述降低。
34.根据权利要求31-33中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中相对于包含SEQ ID NO:6的载体测量神经元的尖峰频率的所述降低。
35.根据权利要求31-34中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述神经元是原代皮质神经元。
36.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述载体或载体系统可以在神经元中引起每秒少于10个动作电位、或每秒少于5个动作电位、或每秒少于4个动作电位、或每秒少于3个动作电位、或每秒少于2个动作电位、或每秒没有动作电位。
37.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述载体或载体系统可以导致神经元中的静息膜电位为小于-50mV、或小于-60mV、或小于-70mV、或小于-80mV、或小于-90mV、或小于-100mV。
38.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述载体或载体系统可以将神经元中的动作电位的阈值增加到超过50pA、或超过75pA、或超过100pA、或超过150pA、或超过200pA、或超过250pA、或超过300pA、或超过350pA、或超过400pA、或超过450pA、或超过500pA、或超过550pA、或超过600pA、或超过700pA、或超过800pA、或超过900pA、或超过1000pA，其中所述阈值是电流阈值与维持电流之和。
39.根据权利要求36-38中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中在来自受试者的急性海马体切片中测量动作电位的数量、静息膜电位或动作电位的阈值。
40.根据权利要求36-39中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中使用急性海马体切片电生理学和/或膜片钳电生理学来测量动作电位的数量、静息膜电位或动作电位的阈值。
41.根据权利要求36-40中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述神经元能够驱动癫痫发作并且/或者其中所述神经元产生持续放电并且/或者其中所述神经元变得过度去极化。
42.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述载体或载体系统可以在驱动受试者第二次癫痫发作的神经元中产生比驱动所述受试者第一次癫痫发作的神经元中的抗癫痫作用更大的抗癫痫作用，其中所述第二次癫痫发作在所述第一次癫痫发作之后。
43.根据权利要求42所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中使用根据权利要求23-33中所述的任何方法来测量抗癫痫作用。
44.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述载体或载体系统可以预防受试者第二次癫痫发作，其中所述第二次癫痫发作在所述受试者第一次癫痫发作之后。
45.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述治疗方法是闭环疗法。
46.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述神经障碍是癫痫发作障碍。
47.根据权利要求46所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述癫痫发作障碍是癫痫，任选地新皮质癫痫、颞叶癫痫或难治性癫痫。
48.根据权利要求1-45中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述神经障碍是帕金森病、慢性疼痛、癫痫猝死(SUDEP)、偏头痛、丛集性头痛、三叉神经痛、疱疹后神经痛、阵发性运动障碍、单相或双相情感障碍、焦虑或恐惧。
49.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述载体或载体系统是病毒载体或载体系统。
50.根据权利要求49所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述病毒载体或载体系统是重组腺相关病毒(AAV)载体或载体系统或者慢病毒载体或载体系统，任选地其中所述慢病毒载体或载体系统是非整合慢病毒载体或载体系统。
51.根据权利要求49所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述载体或载体系统包含与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10的核苷酸序列具有至少95％同一性的核苷酸序列。
52.根据权利要求49所述的用于所述用途的表达载体或载体系统，其中所述载体或载体系统包含与SEQ ID NO:20-34中的任一个具有至少95％同一性的核苷酸序列。
53.一种表达载体，所述表达载体包含：
(a)工程化KCNA1基因，所述工程化KCNA1基因具有与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的核苷酸序列，编码编辑的Kv1.1钾通道，所述编辑的Kv1.1钾通道具有与SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且在对应于SEQ ID NO:2中所示的氨基酸残基400的位置处包含缬氨酸氨基酸残基；以及
(b)活性依赖性启动子，所述活性依赖性启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:3中所示的核苷酸序列或者与SEQ ID NO:3中所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列，
其中所述基因可操作地连接到所述启动子。
54.一种表达载体系统，所述表达载体系统包含：
(a)(i)工程化KCNA1基因，所述工程化KCNA1基因具有与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的核苷酸序列，编码编辑的Kv1.1钾通道，所述编辑的Kv1.1钾通道具有与SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且在对应于SEQ ID NO:2中所示的氨基酸残基400的位置处包含缬氨酸氨基酸残基；或者
(ii)KCNJ2基因，所述KCNJ2基因具有与SEQ ID NO:13中所示的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的核苷酸序列，编码Kir2.1钾通道，所述Kir2.1钾通道具有与SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
以及
(b)活性依赖性启动子，所述活性依赖性启动子具有包含以下或由以下组成的核苷酸序列：SEQ ID NO:3和13-18中任一个中所示的核苷酸序列或者与SEQ ID NO:3和13-18中任一个中所示的核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列，
其中
(c)所述KCNA1或KCNJ 2基因可操作地连接到所述启动子；或者
(d)所述KCNA1或KCNJ 2基因的表达可以通过根据前述权利要求中任一项所定义的中间基因来改变，其中所述中间基因可操作地连接到所述活性依赖性启动子。
55.一种制备病毒颗粒的体外方法，所述体外方法包括：
用根据前述权利要求中任一项所述的载体或载体系统转导哺乳动物细胞并且在所述细胞中表达颗粒形成所必需的病毒包装和包膜蛋白；以及
在培养基中培养所转导的细胞，使得所述细胞产生释放到所述培养基中的病毒颗粒。
56.根据权利要求55所述的体外方法，其中所述方法包括用编码颗粒形成所必需的病毒包装和包膜蛋白的一种或多种病毒包装和包膜表达载体转导所述哺乳动物细胞。
57.根据权利要求55或权利要求56所述的体外方法，其中所述一种或多种包装蛋白包括非功能性整合酶，使得所述载体或载体系统不能将其病毒基因组整合到所述细胞的基因组中。
58.根据权利要求55-57中任一项所述的体外方法，所述方法进一步包括从所述培养基中分离所述病毒颗粒并且任选地浓缩所述病毒颗粒。
59.一种病毒颗粒，所述病毒颗粒通过根据权利要求55-58中任一项所述的方法产生，所述病毒颗粒任选地包含从根据前述权利要求中任一项所述的表达载体或载体系统转录的RNA分子或DNA分子。
60.一种病毒颗粒，所述病毒颗粒包含编码根据前述权利要求中任一项所述的基因和/或中间基因和/或另外的基因的单链RNA分子或DNA分子，
其中所述基因和/或中间基因和/或另外的基因编码根据前述权利要求中任一项所述的基因产物和/或中间基因产物和/或另外的基因产物，
其中所述启动子任选地如前述权利要求中任一项所定义，并且
其中所述病毒颗粒任选地是AAV。
61.一种试剂盒，所述试剂盒包含根据前述权利要求中任一项所述的表达载体或载体系统以及一种或多种病毒包装和包膜表达载体，所述一种或多种病毒包装和包膜表达载体编码在细胞中表达时颗粒形成所必需的病毒包装和包膜蛋白。
62.根据权利要求61所述的试剂盒，其中所述病毒包装表达载体是整合酶缺陷型病毒包装表达载体。
63.根据权利要求59或权利要求60所述的病毒颗粒，用于在治疗方法中使用，其中所述治疗方法定义于权利要求45-48中的任一项中。
64.一种治疗根据权利要求1和45-48中任一项所定义的神经障碍的方法，所述方法包括向患有所述神经障碍的个体施用根据前述权利要求中任一项所述的表达载体或载体系统或者根据权利要求59或60所述的病毒颗粒。
65.一种确认根据前述权利要求中任一项所定义的基因产物和/或中间基因产物和/或另外的基因产物的存在的方法，所述方法包括：
在允许所述基因产物和/或中间基因产物和/或另外的基因产物表达的条件下用根据前述权利要求中任一项所述的表达载体转导细胞或将根据权利要求59或60所述的病毒颗粒施用于细胞；以及
使用杂交测定检测所述基因产物和/或中间基因产物和/或另外的基因产物在所述细胞中的存在。
66.一种确认已经从被施用根据权利要求59或60所述的病毒颗粒的受试者获得的根据前述权利要求中任一项所定义的基因产物和/或中间基因产物和/或另外的基因产物的存在的体外或离体方法，所述方法包括：
使用杂交测定检测所述基因产物和/或中间基因产物和/或另外的基因产物在所述细胞中的存在。
67.根据权利要求65或权利要求66所述的方法，其中所述杂交测定是使用标记的RNA探针的原位杂交测定，任选地其中所述标记的RNA探针是荧光标记的。
68.一种细胞，所述细胞包含根据前述权利要求中任一项所述的表达载体或载体系统。
CN202180037438.5A 2020-03-27 2021-03-29 神经障碍的活性依赖性基因疗法 Pending CN115697487A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB2004498.8A GB202004498D0 (en) 2020-03-27 2020-03-27 Activity-dependent gene therapy for neurological disorders
GB2004498.8 2020-03-27
PCT/EP2021/058210 WO2021191474A1 (en) 2020-03-27 2021-03-29 Activity-dependent gene therapy for neurological disorders

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115697487A true CN115697487A (zh) 2023-02-03

Family

ID=70553503

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180037438.5A Pending CN115697487A (zh) 2020-03-27 2021-03-29 神经障碍的活性依赖性基因疗法

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20230165975A1 (zh)
EP (1) EP4126227A1 (zh)
JP (1) JP2023520374A (zh)
CN (1) CN115697487A (zh)
AU (1) AU2021244834A1 (zh)
BR (1) BR112022019152A2 (zh)
CA (1) CA3173181A1 (zh)
GB (1) GB202004498D0 (zh)
WO (1) WO2021191474A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023131682A1 (en) 2022-01-06 2023-07-13 Ucl Business Ltd Endogenous gene regulation to treat neurological disorders and diseases
GB202201744D0 (en) 2022-02-10 2022-03-30 Ucl Business Ltd Treatment of acquired focal epilepsy

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4169180A (en) 1977-09-16 1979-09-25 Stauffer Chemical Company Resin laminate having protective layer
US4797368A (en) 1985-03-15 1989-01-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector
US5139941A (en) 1985-10-31 1992-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV transduction vectors
US5173414A (en) 1990-10-30 1992-12-22 Applied Immune Sciences, Inc. Production of recombinant adeno-associated virus vectors
US5252479A (en) 1991-11-08 1993-10-12 Research Corporation Technologies, Inc. Safe vector for gene therapy
US6989264B2 (en) 1997-09-05 2006-01-24 Targeted Genetics Corporation Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors
DK1944362T3 (en) 1997-09-05 2016-01-25 Genzyme Corp Fremgangsmåder til fremstilling af hjælpevirusfri præparater med høj titer af rekombinante AAV-vektorer
US6566118B1 (en) 1997-09-05 2003-05-20 Targeted Genetics Corporation Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors
ATE403715T1 (de) 1999-08-09 2008-08-15 Targeted Genetics Corp Erhöhung der expression einer einzelsträngigen, heterologen nukleotidsequenz von einem rekombinanten viralen vektor durch ausgestaltung der sequenz in einer art und weise, dass basenpaarungen innerhalb der sequenz entstehen
WO2008096268A2 (en) 2007-02-07 2008-08-14 Vegenics Limited Autologous lymph node transfer in combination with vegf-c or vegf-d growth factor therapy to treat secondary lymphedema and to improve reconstructive surgery
US10266844B2 (en) * 2015-07-31 2019-04-23 California Institute Of Technology Activity-dependent expression of nucleic acids
KR20200108514A (ko) * 2015-09-17 2020-09-21 코다 바이오테라퓨틱스 인코포레이티드 신경 장애를 치료하기 위한 조성물 및 방법
GB201709551D0 (en) 2017-06-15 2017-08-02 Ucl Business Plc Expression vectors comprising engineered genes

Also Published As

Publication number Publication date
GB202004498D0 (en) 2020-05-13
WO2021191474A1 (en) 2021-09-30
BR112022019152A2 (pt) 2022-11-08
EP4126227A1 (en) 2023-02-08
US20230165975A1 (en) 2023-06-01
AU2021244834A1 (en) 2022-10-20
JP2023520374A (ja) 2023-05-17
CA3173181A1 (en) 2021-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2910637A1 (en) Vectors for delivery of light-sensitive proteins and methods of use
US20210015898A1 (en) Rescuing voltage-gated sodium channel function in inhibitory neurons
US20100168215A1 (en) Methods and compositions for the treatment of neurological disease
JP7303816B2 (ja) Ａａｖベクター
US20220195457A1 (en) Interneuron-specific therapeutics for normalizing neuronal cell excitability and treating dravet syndrome
CN115697487A (zh) 神经障碍的活性依赖性基因疗法
JP2022188238A (ja) 神経ペプチド発現ベクター及びてんかんの治療のための方法
US20220347320A1 (en) Regeneration of retinal ganglion cells
NZ533833A (en) Targeted retrograde gene delivery to motor neurons
KR20220003566A (ko) 신규한 유형의 효소 조성물
CN114127296A (zh) Ube3a基因和表达盒及其应用
CA3189657A1 (en) Methods and compositions for treatment of fragile x syndrome
US20220088222A1 (en) Compositions and methods for the treatment of degenerative ocular diseases
JP2020059719A (ja) 網膜色素変性症の治療
US20050070493A1 (en) Methods and compositions for treating Parkinson's disease
EP3261679B1 (en) Gene therapy to improve vision
WO2023131682A1 (en) Endogenous gene regulation to treat neurological disorders and diseases
Khabou Development of safe and efficient aav vectors for retinal gene therapy
Hirai et al. Recent developments in gene therapy research targeted to cerebellar disorders
JP2017025008A (ja) 網膜色素変性症の治療

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination