CN115697410A

CN115697410A - 用于治疗急性呼吸窘迫综合征的组合物和方法

Info

Publication number: CN115697410A
Application number: CN202180043755.8A
Authority: CN
Inventors: M·J·布鲁克斯; B·R·G·戈登; P·尼哈万
Original assignee: Adesa Biotechnology Research Co ltd
Current assignee: Adesa Biotechnology Research Co ltd
Priority date: 2020-04-20
Filing date: 2021-04-20
Publication date: 2023-02-03
Also published as: CA3174429A1; EP4138912A1; IL297363A; JP2023523096A; EP4138912A4; WO2021212222A1; US20230192881A1; AU2021261060A1

Abstract

本发明主要涉及特异性结合Toll样受体4(TLR‑4)的单克隆抗体或其抗原结合片段，以及使用抗TLR4抗体治疗或预防急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的症状的方法。本发明还涉及特异性结合IP‑10的单克隆抗体或其抗原结合片段，以及使用抗IL‑10抗体治疗或预防ARDS的症状的方法。本发明进一步提供了关于所述方法的施用途径和制剂。

Description

用于治疗急性呼吸窘迫综合征的组合物和方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年4月20日提交的美国临时申请号63/012,783、于2020年4月20日提交的美国临时申请号63/012,786、以及于2020年9月22日提交的美国临时申请号63/081,662的优先权和利益。这些申请各自的内容在此通过引用以其整体并入。

技术领域

本发明涉及结合Toll样受体4 (TLR4)/髓样分化蛋白-2 (MD-2)复合物的单克隆抗体(例如，人源化抗体)、产生此类抗体的方法以及在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的治疗中使用此类抗体的方法。本发明还涉及结合IP-10的抗体及其抗原结合片段、产生此类抗体的方法以及在ARDS的治疗中使用此类抗体的方法。

序列表的并入

于2021年4月20日创建且大小为161 KB、命名为“EDBI-001_001WO_SeqListing_ST25.txt”的文本文件的内容，在此通过引用以其整体并入。

背景技术

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，人中的严重急性肺损伤(ALI)的临床相关因素，是危重病患者中的发病率和死亡率的重要原因(Ware，L. B.和M. A Matthay，2000. N Engl JMed 342:1334-1349. Goss，C. H.等人2003. Crit Care Med 31: 1607-1611. Mendez，J.L.和RD. Hubmayr，2005. Curr Opin Crit Care 11:29-36. Rubenfeld，G. D.等人2005.N Engl J Med 353:1685-1693)。ARDS是一种复杂的临床综合征。败血病和感染性肺炎(包括流感和冠状病毒感染)是ALI/ARDS的主要原因(Ware，L. B.和M. A Matthay，2000.Goss，C. H.等人2003)，并且ARDS可以因呼吸机诱发的损伤而加重。尽管最佳的ICU支持性护理，但ARDS相关的死亡率仍然高达30-50% (Ware. L. B.和M. A Matthay，2000. TheAcute Respiratory Distress Syndrome Network，2000. Matthay，M. A.等人2003.Slutsky，A. S.和L. D. Hudson，2006)。目前的治疗性治疗是有限的，并且包括广泛的管理技术，例如机械通气和流体管理。需要开发新的ARDS治疗性治疗。

病毒感染，包括人和禽流感病毒以及冠状病毒，例如中东呼吸综合征(MERS或MERS-CoV)、严重急性呼吸综合征(SARS或SARS-CoV)和引起2019冠状病毒的新型冠状病毒(COVID-19、2019-nCoV或SARS-CoV-2)是对人群的威胁。COVID-19对全世界人口构成严重威胁，并且是当前全球大流行病的起源。可以起于COVID-19感染的一种危及生命的并发症是ARDS。在当前的研究中，因重症和危重COVID-19而住院治疗的多于40%的个体发展ARDS，并且超过50%的确诊患者死于该疾病(Wu等人，JAMA Intern Med. March 13，2020. doi:10.1001/jamainternmed.2020.0994)。

关于SARS和MERS的先前经验已揭示了，尽管病毒载量减小，ARDS仍在患者中发生，提示了单独的抗病毒疗法可能不足以阻止疾病进展以及甚至由旺盛的宿主免疫应答引起的死亡。过去一年关于COVID-19的经验已提示了COVID-19发病机制的两个占优势的驱动因素。在疾病的早期阶段过程中，SARS-CoV-2的复制和病毒载量是疾病症状的主要元凶。然而，随着疾病进展，由于初始病毒感染的过度激活的免疫/炎症应答导致组织损害、炎症和住院治疗。

当前的努力集中于受感染个体的收容和隔离上。由于COVID-19感染对宿主的严重作用、广泛的感染率以及COVID-19的全球大流行爆发，因此迫切需要新的治疗。

相应地，需要开发疗法和方法来治疗、预防且改善患有ARDS、流感感染或冠状病毒感染例如COVID-19的患者的存活。

发明内容

本公开内容提供了治疗、预防或减轻有此需要的受试者中的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的症状的方法，其包括向受试者施用包含特异性结合Toll样受体4 (TLR4)的抗体和MD-2复合物的组合物。

在一些实施方案中，抗体包括a)包含以下的重链可变区：包含SEQ ID NO: 1、20或28的氨基酸序列的互补决定区1 (CDRH1)；包含SEQ ID NO: 2、21或29的氨基酸序列的互补决定区2 (CDRH2)；以及包含SEQ ID NO: 3、22、30、186或187的氨基酸序列的互补决定区3(CDRH3)；以及b)包含以下的轻链可变区：包含SEQ ID NO: 4、24、33的氨基酸序列的互补决定区1 (CDRL1)；包含SEQ ID NO: 5、25或34的氨基酸序列的互补决定区2 (CDRL2)；以及包含SEQ ID NO: 6、17、26、35、188、189、190或191的氨基酸序列的互补决定区3 (CDRL3)。

在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的CDRH1区；包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的CDRH2区，包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的CDRH3区；包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的CDRL1区；包含SEQ ID NO: 5的氨基酸序列的CDRL2区；以及包含SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的CDRL3区。

在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的CDRH1区；包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的CDRH2区，包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的CDRH3区；包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的CDRL1区；包含SEQ ID NO: 5的氨基酸序列的CDRL2区；以及包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的CDRL3区。

在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 20的氨基酸序列的CDRH1区；包含SEQ ID NO: 21的氨基酸序列的CDRH2区，包含SEQ ID NO: 22的氨基酸序列的CDRH3区；包含SEQ ID NO: 24的氨基酸序列的CDRL1区；包含SEQ ID NO: 25的氨基酸序列的CDRL2区；以及包含SEQ ID NO: 26的氨基酸序列的CDRL3区。

在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 28的氨基酸序列的CDRH1区；包含SEQ ID NO: 29的氨基酸序列的CDRH2区，包含SEQ ID NO: 30的氨基酸序列的CDRH3区；包含SEQ ID NO: 33的氨基酸序列的CDRL1区；包含SEQ ID NO: 34的氨基酸序列的CDRL2区；以及包含SEQ ID NO: 35的氨基酸序列的CDRL3区。

在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 350、14、15、19、27、31、36或38的氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID NO: 351、16、18、23、32、40、42、44或46的氨基酸序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 350的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 351的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQID NO: 14的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQID NO: 18的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 23的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 27的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 32的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 31的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 32的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 36的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 40的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 36的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 42的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 44的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 36的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 40的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括包含SEQ ID NO: 38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 42的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 44的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 46的氨基酸序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，重链氨基酸序列包含SEQ ID NO: 9的氨基酸序列，并且轻链氨基酸序列包含SEQ ID NO: 10的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。

在一些实施方案中，抗体是IgG同种型。在一些实施方案中，抗体是IgG1同种型。在一些实施方案中，在IgG1的CH2结构域的EU位置325-328处的氨基酸残基由SKAF (SEQ IDNO: 193)的氨基酸基序组成。

在一些实施方案中，抗体通过吸入、经鼻、静脉内、皮下、肌内或其任何组合进行施用。在一些实施方案中，抗体以下述剂量进行施用：0.01 mg/kg、约0.02 mg/kg、约0.03 mg/kg、约0.04 mg/kg、约0.05 mg/kg、约0.06 mg/kg、约0.07 mg/kg、约0.08 mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1 mg/kg、约0.2 mg/kg、约0.3 mg/kg、约0.4 mg/kg、约0.5 mg/kg、约0.6 mg/kg、约0.7 mg/kg、约0.8 mg/kg、约0.9 mg/kg、约1 mg/kg、约2 mg/kg、约3mg/kg、约4 mg/kg、约5 mg/kg、约6 mg/kg、约7 mg/kg、约8 mg/kg、约9 mg/kg、约10 mg/kg、约11 mg/kg、约12 mg/kg、约13 mg/kg、约14 mg/kg、约15 mg/kg、约16 mg/kg、约17 mg/kg、约18 mg/kg、约19 mg/kg、约20 mg/kg、约21 mg/kg、约22 mg/kg、约23 mg/kg、约24 mg/kg、约25 mg/kg、约26 mg/kg、约27 mg/kg、约28 mg/kg、约29 mg/kg、约30 mg/kg、约35 mg/kg、约40 mg/kg或约50 mg/kg。在一些实施方案中，抗体以约15 mg/kg进行施用。

在一些实施方案中，抗体施用至少1次、至少2次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次、至少9次或至少10次。在一些实施方案中，抗体施用一次。

在一些实施方案中，抗体以约15 mg/kg的剂量静脉内施用一次。

在一些实施方案中，ARDS的症状是双侧肺泡浸润的急性发作、低氧血症、急性低氧血症、肺叶萎陷、肺萎陷、痰咳、疲劳、发烧、胸痛、呼吸急促、呼吸费力、心率增加(increasedheart rage)、低血压、意识模糊、极度疲倦、呼吸衰竭、肺血管渗漏、肺水肿、肺泡上皮细胞损伤、肺泡内皮细胞损伤、肺泡毛细血管膜屏障破坏或其任何组合。

在一些实施方案中，受试者患有冠状病毒感染、病毒感染、流感感染、败血病、吸入性肺炎、感染性肺炎、严重外伤、骨折、肺挫伤、吸入性损伤、输血相关性损伤、HSCT、胰腺炎、来自癌症治疗剂的细胞因子风暴、胶原血管疾病、来自摄入物的药物效应、来自吸入剂的药物效应、休克、急性嗜酸性粒细胞性肺炎、免疫介导的肺出血和血管炎、放射性肺炎或其任何组合。

在一些实施方案中，受试者患有冠状病毒感染。在一些实施方案中，受试者疑似患有冠状病毒感染。在一些实施方案中，受试者已暴露于冠状病毒或其中受试者疑似已暴露于冠状病毒；并且受试者并未发展冠状病毒感染的症状。在一些实施方案中，冠状病毒是229E α冠状病毒、NL63 α冠状病毒、OC43 β冠状病毒、HKU1 β冠状病毒、中东呼吸综合征β冠状病毒(MERS-CoV或MERS)、严重急性呼吸综合征β冠状病毒(SARS-CoV或SARS)、SARS-CoV的B1.1.7变体、SARS-CoV的B.1.351变体、SARS-CoV的P.1变体、SARS-CoV的B.1.427变体、SARS-CoV-CoV的B.1.4变体、或引起2019冠状病毒病的新型冠状病毒(SARS-CoV-2或COVID-19)。

在一些实施方案中，冠状病毒感染的症状是呼吸急促、呼吸困难、干咳、发烧、流鼻涕、鼻充血、嗅觉缺失、嗅觉丧失、肌肉酸痛、肌肉痛、疲劳、呼吸生痰、头痛、呕吐、咯血、咽喉痛、肌痛、腹泻或其任何组合。

在一些实施方案中，本公开内容的方法进一步包括施用抗病毒药物、ACE抑制剂、免疫增强药物、皮质类固醇或其任何组合。在一些实施方案中，抗病毒药物是瑞德西韦、巴尼韦单抗(bamlanivimab)、埃特司韦单抗(etesevimab)、卡西瑞单抗(casirivimab)、伊德维单抗(imdevimab)或靶向病毒的单克隆抗体。在一些实施方案中，ACE抑制剂是羟氯喹或可溶性重组ACE2。在一些实施方案中，免疫增强药物是抗IL6抗体、抗IP-10抗体、抗IL-1抗体或抗TNF抗体。在一些实施方案中，IL6抗体是托珠单抗或沙利姆单抗(sarilumab)。在一些实施方案中，免疫增强药物是阿托伐他汀或普伐他汀。在一些实施方案中，皮质类固醇是地塞米松。

本公开内容还提供了可注射的药物制剂，其包含约10 mg/mL的特异性结合TLR4的抗体、约1.88 mg/mL的L-组氨酸、约2.70 mg/mL的L-组氨酸单盐酸盐一水合物、约68.46mg/mL的蔗糖和约0.05 mg/mL的聚山梨醇酯80。

本公开内容还提供了可注射的药物制剂，其包含约150 mg/mL的特异性结合TLR4的抗体、约5.24 mg/mL的L-组氨酸单盐酸盐、约40.15 mg/mL的L-精氨酸单盐酸盐、约1.65mg/mL的L-精氨酸和约0.20 mg/mL的聚山梨醇酯80。

在一些实施方案中，特异性结合TLR4的抗体包括包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的CDRH1区；包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的CDRH2区，包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的CDRH3区；包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的CDRL1区；包含SEQ ID NO: 5的氨基酸序列的CDRL2区，以及包含SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的CDRL3区；在一些实施方案中，特异性结合TLR4的抗体包括包含SEQ ID NO: 350的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:351的氨基酸序列的轻链可变区。

本公开内容提供了治疗、预防或减轻有此需要的受试者中的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的症状的方法，其包括向受试者施用包含结合IP-10的抗体或其抗原结合片段的组合物。

在一些实施方案中，抗体包括a)包含以下的重链可变区：包含SEQ ID NO: 201、230、240、260、282、291或323的氨基酸序列的互补决定区1 (CDRH1)；包含SEQ ID NO: 202、211、231、241、261、283、292或324的氨基酸序列的互补决定区2 (CDRH2)；以及包含SEQ IDNO: 203、217、232、242、248、253、262、274、284、293、301、325、326或334的氨基酸序列的互补决定区3 (CDRH3)；以及 b)包含以下的轻链可变区：包含SEQ ID NO: 204、212、233、243、267、275、294、302、308、315、327或335的氨基酸序列的互补决定区1 (CDRL1)；包含SEQ IDNO: 205、234、244、254、268、276、285、295、309、316或336的氨基酸序列的互补决定区2(CDRL2)；和

包含SEQ ID NO: 206、220、235、235、245、255、269、277、286、296、303、310、317、322或337的互补决定区3 (CDRL3)。

在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 201的氨基酸序列的CDRH1区；包含SEQ ID NO: 202的氨基酸序列的CDRH2区，包含SEQ ID NO: 203的氨基酸序列的CDRH3区；包含SEQ ID NO: 204的氨基酸序列的CDRL1区；包含SEQ ID NO: 205的氨基酸序列的CDRL2区；以及包含SEQ ID NO: 206的氨基酸序列的CDRL3区。

在一些实施方案中，抗体包括a)包含SEQ ID NO: 198、208、214、222、227、237、247、250、257、264、271、279、288、298、305、312、319或331的氨基酸序列的重链可变区，以及b)包含SEQ ID NO: 200、210、219、224、229、239、252、259、266、273、281、290、300、307、314、321、333或339的氨基酸序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，抗体包括包含SEQ ID NO: 198的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 200的氨基酸序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗体是IgG同种型。在一些实施方案中，抗体是IgG1同种型。在一些实施方案中，抗体通过吸入、经鼻、静脉内、皮下、肌内或其任何组合进行施用。

在一些实施方案中，抗体以下述剂量进行施用：约0.5 mg/kg、约1 mg/kg、约2 mg/kg、约3mg/kg、约4 mg/kg、约5 mg/kg、约6 mg/kg、约7 mg/kg、约8 mg/kg、约9 mg/kg、约10mg/kg、约11 mg/kg、约12 mg/kg、约13 mg/kg、约14 mg/kg、约15 mg/kg、约16 mg/kg、约17mg/kg、约18 mg/kg、约19 mg/kg、约20 mg/kg、约21 mg/kg、约22 mg/kg、约23 mg/kg、约24mg/kg、约25 mg/kg、约26 mg/kg、约27 mg/kg、约28 mg/kg、约29 mg/kg、约30 mg/kg、约35mg/kg、约40 mg/kg或约50 mg/kg。在一些实施方案中，抗体施用至少1次、至少2次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次、至少9次或至少10次。

在一些实施方案中，ARDS的症状是双侧肺泡浸润的急性发作、低氧血症、急性低氧血症、肺叶萎陷、肺萎陷、痰咳、疲劳、发烧、胸痛、呼吸急促、呼吸费力、心率增加、低血压、意识模糊、极度疲倦、呼吸衰竭、肺血管渗漏、肺水肿、肺泡上皮细胞损伤、肺泡内皮细胞损伤、肺泡毛细血管膜屏障破坏或其任何组合。

在一些实施方案中，本公开内容的方法进一步包括施用抗病毒药物、ACE抑制剂、免疫增强药物、皮质类固醇或其任何组合。在一些实施方案中，抗病毒药物是瑞德西韦、巴尼韦单抗、埃特司韦单抗、卡西瑞单抗、伊德维单抗或靶向病毒的单克隆抗体。在一些实施方案中，ACE抑制剂是羟氯喹或可溶性重组ACE2。在一些实施方案中，免疫增强药物是抗IL6抗体、抗TLR4抗体、抗IL-1抗体或抗TNF抗体。在一些实施方案中，抗TLR4抗体是NI-0101。在一些实施方案中，IL6抗体是托珠单抗或沙利姆单抗。在一些实施方案中，免疫增强药物是阿托伐他汀或普伐他汀。在一些实施方案中，皮质类固醇是地塞米松。

附图说明

图1A-1C显示了5E3以剂量依赖性方式抑制小鼠血液中的LPS诱导的细胞因子风暴。CD1小鼠用0.2、0.04、0.008或0.0016 mg/kg的5E3 mAb或者0.2 mg/kg的同种型对照mAb进行i.v.注射。1小时后，小鼠用1 µg/kg的LPS进行i.v.注射。2小时后，对小鼠实施安乐死，并且测量血清细胞因子和趋化因子。图1A显示了TNF-α浓度。图1B显示了IL-6浓度。图1C显示了CCL5浓度。

图2显示了描绘5E3和5E3 IgG2a D265A突变体对LPS依赖性嗜中性粒细胞募集到肺内的抑制作用的条形图。

图3A-3C显示了5E3抑制BAL液中的LPS诱导的IL-6、TNFα和CXCL10分泌。5E3 (黑色条)、5E3 IgG_2a D265A (空白条)或同种型对照(灰色条)。BAL上清液通过离心与细胞分开。对细胞因子和趋化因子进行定量。图3A显示了BAL中的IL-6浓度。图3B显示了BAL中的TNFα浓度。图3C显示了BAL中的CXCL10浓度。

图4显示了在5E3 (对数/线性)的静脉内施用之后，小鼠中的5E3的平均血清浓度(μg/mL)。

具体实施方式

本发明涉及结合Toll样受体4 (TLR4)/髓样分化蛋白-2 (MD-2)复合物的单克隆抗体(例如，人源化抗体或全人抗体)或其抗原结合片段，以及结合干扰素诱导蛋白10 (IP-10、CXCL10)的单克隆抗体。IP-10抗体在本文中统称为huIP-10抗体。TLR4抗体在本文中统称为抗TLR4抗体。

本发明还提供了在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的治疗中使用这些抗体的方法。本发明还提供了在流感或冠状病毒感染症状的治疗、预防或减轻中使用这些抗体的方法。示例性的冠状病毒感染包括但不限于SARS、MERS和COVID-19。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体及其抗原结合片段结合TLR4。抗TLR4抗体包括结合人TLR4/MD-2受体复合物并且还不依赖于MD-2的存在结合TLR4的抗体。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体或其抗原结合片段进一步至少包含Fc区的FγR结合部分。在一些实施方案中，抗TLR4抗体或其抗原结合片段包括在γ重链恒定区中的至少一个特定的氨基酸取代，使得与未改变的抗体相比，改变的抗体引发抗原依赖性效应子功能的改变，同时保留与抗原的结合。

本发明的改变的抗体包括这样的改变的抗体，其中至少在抗体的Fc部分的CH2结构域中的EU位置328处的氨基酸残基已进行修饰。例如，至少在EU位置328处的氨基酸残基已由苯丙氨酸取代。在本文所述的改变的抗体中，与未改变的抗体相比，至少单独或连同EU氨基酸位置325和326一起的在EU位置328处的氨基酸残基由不同的残基取代。

与未改变的抗体相比，具有修饰的Fc部分的这些改变的抗体引发修饰的效应子功能，例如修饰的Fc受体活性。例如，人Fc受体是CD32A。在一些实施方案中，与未改变的抗体相比，改变的抗体引发在与CD32A连接之后的促炎介质释放的阻止。因此，本文所述改变的抗体引发修饰的Fc受体活性，例如促炎介质释放的阻止，同时保留结合靶抗原的能力。在一些实施方案中，改变的抗体是中和抗体，其中所述改变的抗体引发修饰的Fc受体活性，同时保留中和靶抗原的一种或多种生物活性的能力。

本发明的抗TLR4抗体抑制经由LPS的受体激活和后续细胞内信号传导。抗TLR4抗体中和TLR4/MD-2受体复合物的激活。这些抗TLR4抗体阻断LPS诱导的和其它TLR4配体诱导的促炎细胞因子(例如IL-6、IL-8、TNFα)产生。

急性呼吸综合征

ARDS是特征在于肺中的广泛炎症的快速发作的一类呼吸衰竭。肺泡-毛细血管屏障的破坏导致肺泡腔积水和肺中的积液。Seattle的一项案例研究描述了呈现急性低氧血症的24个感染SARS-CoV-2的危重病患者入住ICU，具有不良预后和50%的病死率。此外，入住ICU的COVID-19患者已显示了继发性噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(sHLH)以及其为病毒感染特性的细胞因子谱。

压倒性的炎症应答可以引起ARDS和急性肺损伤(ALI)。感染COVID-19的患者可以在所谓的“细胞因子风暴”(CS)中发展大量促炎细胞因子和炎症标记物。CS的病理学尚未完全了解。关于CS的问题之一是为何一些个体似乎特别易受影响，而其它人似乎相对抗性。当病毒攻击呼吸道上皮细胞时，免疫细胞的模式识别受体(PRR)识别病毒并且发出产生细胞因子的信号，所述细胞因子如干扰素γ (IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)和趋化因子。

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，人中的严重急性肺损伤(ALI)的临床相关因素，是危重病患者中的发病率和死亡率的重要原因(Ware，L. B.和M. A Matthay，2000. N Engl JMed 342:1334-1349. Goss，C. H.等人2003. Crit Care Med 31: 1607-1611. Mendez，J.L.和RD. Hubmayr，2005. Curr Opin Crit Care 11:29-36. Rubenfeld，G. D.等人2005.N Engl J Med 353:1685-1693)。急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是一种急性、弥漫性炎症形式的肺损伤，其与各种病因相关。ARDS的病因和诱发因素包括但不限于表1中描述的那些因素。

表1：急性呼吸综合征的病因和诱发因素

病因	临床特征/症状
		败血病	发烧、低血压、白细胞增多、乳酸性酸中毒、传染源
吸入性肺炎	支气管镜检查(cronchoscopy)时目击吸入或关于吸入的风险、食物、富含脂质的巨噬细胞、气道红斑
		感染性肺炎(包括分枝杆菌、病毒、真菌、寄生虫)	免疫抑制患者中的痰咳、胸膜炎性疼痛、发烧、白细胞增多、肺叶实变或双侧浸润
严重外伤和/或多发性骨折	上周内的外伤或骨折史
		肺挫伤	胸部外伤(钝性或穿透性)史、胸痛
烧伤和烟雾吸入	暴露于火或烟雾、咳嗽、呼吸困难、DIC、支气管镜检查时的颗粒性物质、表面烧伤
		输血相关的急性肺损伤和大量输血	输血史，在输血期间或输血后不久的呼吸困难
HSCT	HSCT史
		胰腺炎	腹痛、呕吐、危险因素(例如胆结石、酒精、病毒感染)
除烟雾外的吸入性损伤(例如接近淹溺、气体)	吸入暴露(例如，氯气)史
		胸部手术(例如心肺旁路术后)或其它大手术	手术史、术中通气、术中输血
药物(化学治疗剂、胺碘酮、放射)	新药物或历史上的辐射暴露，灌洗时淋巴细胞增多，灌洗可能具有胺碘酮毒性的暗示特征(“泡沫状巨噬细胞”)，但是非特异性的
		流感	发烧、咳嗽、咽喉痛、流鼻涕、鼻塞、肌肉酸痛、身体酸痛、头痛、疲劳、呕吐、呼吸急促、胸部或腹部持续受压
新冠病毒(MERS、SARS、COVID-19)	呼吸急促、呼吸困难、干咳、发烧、流鼻涕、鼻充血、嗅觉缺失、嗅觉丧失、肌肉酸痛、肌肉痛、咽喉痛、肌痛、腹泻

ARDS的特征在于各种症状。ARDS的症状包括但不限于双侧肺泡浸润的急性发作、低氧血症、呼吸急促、呼吸费力、低血压、意识模糊、极度疲倦、呼吸衰竭、肺血管渗漏、肺水肿、肺泡上皮细胞损伤、肺泡内皮细胞损伤、肺泡毛细血管膜屏障破坏或其任何组合。

ARDS可以分成三个病理诊断和阶段。1)早期渗出阶段 - 这个阶段在前7-10天期间发生，特征在于弥漫性肺泡损害(DAD)，是对出于各种原因的肺损伤的非特异性反应。症状包括但不限于间质性水肿、急性炎症和慢性炎症、II型细胞增生、透明膜形成。2)纤维增殖阶段–在大约7-10天后，发展增殖阶段。症状包括但不限于II型肺泡细胞增殖、鳞状化生、由肌成纤维细胞的间质浸润、胶原的早期沉积、肺动脉高压，3)纤维化阶段 - 在此阶段，症状包括正常肺体系结构的消失、纤维化和囊肿形成。

在组织学上，人中的ALI/ARDS的特征在于肺中的严重急性炎症应答和嗜中性粒细胞性肺泡炎(Ware. L. B.和M. A Matthay，2000)。来自微生物病原体的炎症刺激物，如内毒素(脂多糖，LPS)，因其诱导肺炎症的能力而广为人知，并且LPS的全身和气管内的实验性施用已用于在ALI的动物模型中诱导肺炎症(Kitamura. Y，S.等人2001. Am J RespirCrit Care Med 163:762-769. Matute-Bello，G.等人2004. Clin Diagn Lab Immunol11:358-361. Rojas，M.等人2005. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 288: L333-341. Altemeier，W. A.等人2005. J Immunol 175:3369-3376. Gharib，S. A等人2006.Am J Respir Crit Care Med 173:653-658)。

ARDS的生理标志是肺泡-毛细血管膜屏障的破坏(即，肺血管渗漏)，导致非心源性肺水肿的发展，其中蛋白质渗出物淹没肺泡空间，损伤气体交换，并促成呼吸衰竭(Ware，L.B.和M. A Matthay，2000. Ware，L. B.和M. A Matthay，2001. Am J Respir Crit. CareMed 163: 1376-1383. Guidot，D. M.等人2006. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol291:L301-306)。肺泡上皮细胞和内皮细胞两者的损伤和/或死亡均已牵涉ALI/ARDS的发病机制(Ware，L. B.和M. A Matthay，2000)。然而，尽管数十年的研究，已出现用于临床ARDS的少数治疗策略，并且当前的特定治疗选项是有限的(Crimi，E.和A S. Slutsky，2004.Best Pract Res Clin Anaesthesiol 18:477-492. The Acute Respiratory DistressSyndrome Network，2000. N Engl J Med 342: 1301-1308. Matthay. M. A等人2003. AmJ Respir Crit Care Med 167: 1027-1035. Mehta，D. J. Bhattacharya. M. A Matthay和A B. Malik，2004. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 287:L1081-1090.Slutsky，A S.和L. D. Hudson，2006. N Engl J Med 354: 1839-1841)。ARDS仍然是重症监护病房(ICU)中的机械通气延长的重要贡献者，并且尽管最佳的ICU支持性护理，ARDS相关死亡率仍然高达30-50% (Ware. L. B.和M. A Matthay，2000. The Acute RespiratoryDistress Syndrome Network，2000. Matthay，M. A.等人2003. Slutsky，A. S.和L. D.Hudson，2006)。

ARDS是一种复杂的临床综合征，其通过对肺的损伤引发，经常在肺炎和/或败血病的背景下，并且因呼吸机诱发的损伤而加重。ARDS的一些早期特征可以通过细菌内毒素(LPS)的施用进行再现，所述LPS经由Toll样受体4 (TLR4)起作用，以增加炎性细胞因子和趋化因子的表达，并且上调白细胞粘附分子，导致EC激活(Kitamura，Y，S.等人2001.Matute-Bello. G.等人2004. Rojas，M.等人2005. Altemeier. W. A.等人2005. Gharib.S. A等人2006. Fan，J等人J Clin Invest 112: 1234-1243)。相应地，使用抗TLR4抗体或其抗原结合片段来中和或拮抗TLR4信号传导途径可以用于治疗ARDS。

冠状病毒

2019冠状病毒病(COVID-19)是由RNA β-冠状病毒严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的传染性呼吸系统疾病，其与SARS-CoV具有系统发育相似性。该病毒于2019年12月下旬首次被鉴定。到2020年3月11日，病毒波及各大洲的国家。随后，世界卫生组织(World Health Organization) (WHO)宣布COVID-19为大流行病。截至2021年4月5日，COVID-19已影响221个国家和地区，报告了超过132,211,138例确诊病例，导致多于2,869,491例死亡。

COVID-19的体征和症状不同，然而，在整个疾病过程中，大多数人经历下述：发烧(83-99%)、咳嗽(59-82%)、疲劳(44-70%)、厌食(40-84%)、呼吸急促(31-40%)、生痰(28-33%)和肌痛(11-35%)。已报告了头痛、意识模糊、鼻漏、咽喉痛、咯血和呕吐，但较不频繁(<10%)。因此，COVID-19呈现了范围可以从轻微到危重严重程度的临床表现。轻度病例通常可以在家中消退，而中度或重度COVID-19患者需要住院治疗用于观察和支持性护理。较大的年龄与发展急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的更高风险相关(风险比[HR]，3.26；95% CI 2.08-5.11)。可以增加发展重度或危重疾病的风险的其它并存病包括心血管疾病(HR，21.4；95%4.64 - 98.76)、糖尿病(HR，2.38；95% 1.35 - 4.05)、高血压(HR，1.82；95% 1.13-2.95)、慢性肺病(HR，5.40；95% CI 0.96-30.40)和肥胖(7，8)。

病毒感染，包括人和禽流感病毒以及冠状病毒感染，是对人群的严重威胁。在人中，冠状病毒可以引起范围可以从轻度到致命的呼吸道感染。存在冠状病毒的四个主要子分组，称为α、β、γ和δ。冠状病毒属于隶属冠状病毒科(Coronaviridae)的RNA病毒。可以感染人的冠状病毒包括但不限于29E α冠状病毒、NL63 α冠状病毒、OC43 β冠状病毒、HKU1 β冠状病毒、中东呼吸综合征β冠状病毒(MERS-CoV或MERS)、严重急性呼吸综合征β冠状病毒(SARS-CoV或SARS)、或引起2019冠状病毒病的新型冠状病毒(COVID-19、2019-nCoV或SARS-CoV-2)、或其突变体和/或变体。SARS-CoV-2的变体包括但不限于B.1.1.7、B.1.351、P.1、B.1.427或B.1.429。应理解，可以出现具有新型突变或突变集合的冠状病毒的新变体。

COVID-19冠状病毒感染的症状包括但不限于呼吸急促、呼吸困难、干咳、发烧、流鼻涕、鼻充血、嗅觉缺失、嗅觉丧失、肌肉酸痛、肌肉痛、疲劳、呼吸生痰、头痛、呕吐、咯血、咽喉痛、肌痛、腹泻或其任何组合。该疾病的进一步发展可以导致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、严重肺炎、败血病、败血性休克和死亡。

COVID-19发病机制仍是未知的。然而，IP-10 (CXCL10)已显示在病毒感染的危重患者中是过表达的(Wang等人，Cell Research (2013) 23:577-580. doi:10.1038/cr.2013.25)。此外，提示了重症患者中存在轻度或重度细胞因子风暴，其也是重要的死亡原因。相应地，细胞因子风暴的治疗可能是减轻症状严重程度的重要部分。促炎细胞因子如IL-6和TNF-α的过量产生是促成细胞因子释放综合征(CRS)、疾病进展、肺组织损害和最终呼吸衰竭的主要因素。因此，阻断LPS诱导的和其它TLR4配体诱导的促炎细胞因子(例如IL-6、IL-8、TNFα)产生的抗TLR4抗体可以用于治疗COVID-19感染。

TLR4抗体

Toll样受体(TLR)是其为广泛范围的传感器的部分的一类PRR，所述传感器包括核苷酸寡聚化结构域(NOD)样受体(NLR)、视黄酸诱导基因(RIG)样受体(RLR)和DNA受体。在人中存在的十类TLR中，TLR4是最广泛研究的。TLR4在内皮细胞、肠和肺上皮细胞、肥大细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞中表达。TLR4介导的炎症过程的过度激活已与各种炎症状况相联系。在COVID-19之前，通过宿主衍生的损伤相关分子模式分子(DAMP)例如氧化磷脂(Ox-PL)的TLR4信号传导的过度激活，已显示是病毒介导的急性肺损伤的关键驱动因素。患者队列研究进一步支持了TLR4在COVID-19发病机制中起占优势的作用。证据似乎提示了，当病毒介导的细胞损害在肺中发生时，启动促炎级联，导致DAMP分子如S100A8/A9 (钙卫蛋白)、HMGB1、抵抗素和Ox-PL的释放。这些DAMP是巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突状细胞和其它先天免疫细胞上发现的TLR4的有效激活剂，并且导致促炎分子的释放。多重患者队列研究最近已显示了，住院治疗的COVID-19患者中的HMGB1和S100A8/A9血清水平两者均与嗜中性粒细胞计数、疾病严重程度呈正相关，并且重要的是作为疾病进展的早期预测物。特别地，与CRP或D-二聚体相比，即使在初次住院治疗时，S100A8/A9也似乎具有与不良结果的更高程度的关联性，并且S100A8/A9水平是死亡的强有力预测物。

最近的研究显示了，SARS-CoV-2刺突蛋白直接结合TLR4，具有通常对于病毒-受体相互作用观察到的亲和力水平。另外，刺突蛋白与TLR4的结合刺激了促炎细胞因子如IL-1β的产生，并且这些细胞因子的诱导可以被TLR4的小分子抑制剂阻断。

先前已证实了，TLR4信号传导的治疗性拮抗作用可以保护免于流感诱导的ALI。在小鼠中，显示了TLR4拮抗剂的施用阻断了流感诱发的致死性，以及肺病理学、临床症状、细胞因子和Ox-PL表达，并且降低了病毒滴度。此外，TLR4的拮抗作用可以帮助调节通过单核细胞和树突状细胞的促炎细胞因子(IL-6、IL8和MIP-1β)分泌。在小鼠中，TLR4信号传导的治疗性阻断提供了免受流感病毒致死性的保护，并且减少了肺中的细胞因子基因表达，保护免受ALI。此外，TLR4-S100A8/A9与S100A8/A9抑制剂帕喹莫德的相互作用的消除，将人源化ACE2小鼠从SARS-COV-2感染中拯救出来。

重度COVID-19患者中似乎存在不同的单核细胞和嗜中性粒细胞群体，并且S100A8/A9被认为在维持这些患者中存在的正炎症反馈回路中具有作用。此外，已显示了，与轻度和健康对照相比，重症COVID-19患者具有在肺中更高水平的嗜中性粒细胞。事实上，嗜中性粒细胞浸润已显示为一般而言的急性肺损伤(ALI)/ARDS的标志。

本发明的TLR4抗体包括例如具有下文所示的重链和轻链序列的组合的抗体。

本发明的示例性抗体包括例如于2005年6月14日提交并作为WO 2007/110678公开的PCT/IB2005/004206中描述的抗TLR4抗体，于2008年5月14日提交并作为WO 2009/101479公开的PCT申请PCT/IB2008/003978中描述的抗TLR4抗体，所述专利各自的内容在此通过引用以其整体并入，以及商购可得的抗体如HTA125。

本发明的示例性抗体包括例如在本文中被称为NI-0101的抗体，其结合人TLR4/MD2复合物并且还不依赖于MD-2的存在结合TLR4。NI-0101 (hu15c1)抗体的序列在下文显示，其中CDR序列在VH和VL氨基酸序列中是加下划线的：

NI-0101重链核苷酸序列：

NI-0101重链氨基酸序列：

NI-0101 VH氨基酸序列：

NI-0101轻链核苷酸序列：

NI-0101轻链氨基酸序列：

NI-0101 VL氨基酸序列：

NI-0101 (hu15c1)抗体包括具有序列ggyswh (SEQ ID NO: 1)、yihysgytdfnpslkt (SEQ ID NO: 2)和KDPSDAFPY (SEQ ID NO: 3)的VH CDR，以及具有序列rasqsisdhlh (SEQ ID NO: 4)、yashais (SEQ ID NO: 5)和QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)的VL CDR。

抗TLR4/MD-2抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的氨基酸和核酸序列显示于下文。在一些实施方案中，构成如通过Chothia等人1989，E.A. Kabat等人，1991限定的互补决定区(CDR)的氨基酸在下文以加下划线且斜体的文本突出显示。(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein of immunologicalinterest，第五版，US Department of Health and Human Services，US GovernmentPrinting Office (1991))。在一些实施方案中，本发明的示例性抗体包括选自根据IMGT命名法(参见IMGT^®，国际ImMunoGeneTics信息系统^®。可在线获取：http://www.imgt.org/)限定的CDR序列的重链和互补决定区和轻链互补决定区(CDR)的组合。

抗TLR4抗体包括在以下中描述的抗体：于2004年12月10日提交的共同未决的美国申请11/009939和于2004年6月15日提交的11/151916，以及于2004年12月10日提交的WO05/065015和于2004年6月15日提交的PCT/US2005/020930，所述专利各自在此通过引用以其整体并入。几种示例性抗体包括在其中被称为18H10、16G7、15C1和7E3的抗体。

抗TLR4抗体包括在以下中描述的抗体：于2004年6月15日提交的共同未决的美国申请11/151916 (美国专利公开号US 2008-0050366 A1)、以及于2004年6月15日提交的PCT/IB2005/004206 (PCT公开号WO 07/110678)，所述专利各自在此通过引用以其整体并入。几种示例性抗体的序列显示于下文。

15C1 Hu V_H形式4-28

其中X₁是Thr或Ser

其中X₂是Ile或Met

其中X₃是Val或Ile

其中X₄是Met或Ile。

15C1 Hu V_H形式3-66

其中X₁是Ala或Val

其中X₂是Val或Met

其中X₃是Leu或Phe。

15C1 Hu VL形式L6

其中X₁是Lys或Tyr。

15C1 Hu VL形式A26

18H10 Hu VH形式1-69

其中X₁是Met或Ile

其中X₂是Lys或Thr

其中X₃是Met或Leu。

18H10 Hu VL形式L6

其中X₁是Phe或Tyr。

7E3 Hu VH形式2-70

其中X₁是Ser或Thr

其中X₂是Ile或Phe

其中X₃是Ile或Ala。

7E3 Hu VH形式3-66

其中X₁是Phe或Ala

其中X₂是Val或Leu

其中X₃是Ile或Phe

其中X₄是Lys或Arg

其中X₅是Leu或Val

其中X₆是Ile或Ala。

7E3 Hu VL形式L19

其中X₁是Phe或Tyr

其中X₂是Tyr或Phe。

抗TLR4抗体包括在于2008年5月14日提交的PCT/IB2008/003978 (PCT公开号WO2009/101479)中描述的抗体，所述专利的内容在此通过引用以其整体并入。这些抗TLR4抗体进行修饰，以包括在CDR3部分中的一种或多种突变。几种示例性抗体的序列显示于下文。

15C1人源化VH突变体1氨基酸序列：

15C1人源化VH突变体1核酸序列：

15C1人源化VH突变体2氨基酸序列：

15C1人源化VH突变体2核酸序列：

15C1人源化VL突变体1氨基酸序列：

15C1人源化VL突变体1核酸序列：

15C1人源化VL突变体2氨基酸序列：

15C1人源化VL突变体2核酸序列：

15C1人源化VL突变体3氨基酸序列：

15C1人源化VL突变体3核酸序列：

15C1人源化VL突变体4氨基酸序列：

15C1人源化VL突变体4核酸序列：

变体CDR3区包括VH CDR3- KDPSDAFPY (SEQ ID NO: 186)；VH CDR3 - KDPSEGFPY(SEQ ID NO: 187)；VL CDR3 - QNSHSFPLT (SEQ ID NO: 188)；VL CDR3 - QQGHSFPLT(SEQ ID NO: 189)；VL CDR3 - QNSSSFPLT (SEQ ID NO: 190)；和VL CDR3 - QQSHSFPLT(SEQ ID NO: 191)。

抗TLR4抗体包括在于2008年5月14日提交的PCT/IB2008/003978 (PCT公开号WO2009/101479)中描述的抗体，所述专利的内容在此通过引用以其整体并入。这些抗TLR4抗体进行修饰，以包括在CH2结构域中的一种或多种突变。几种示例性抗体的序列显示于下文。

本发明还提供了包括γ1 Fc (γ1Fc)区的分离的多肽，其中在CH2结构域的EU位置325-328处的氨基酸残基。表2显示了IgG1的CH2结构域的EU位置325-328的示例性突变。本发明还提供了包括γ1 Fc (γ1Fc)区的分离的多肽，其中在IgG1的CH2结构域的EU位置325-328处的氨基酸残基由选自SAAF (SEQ ID NO: 192)、SKAF (SEQ ID NO: 193)、NAAF(SEQ ID NO: 194)和NKAF (SEQ ID NO: 195)的氨基酸基序组成。

表2：在嵌合IgG1 15C1的CH2结构域内的EU位置325至328处的6种突变体(C至H)的氨基酸序列。人残基为粗体

嵌合IgG1 15C1突变体	在限定的EU位置处从人到小鼠氨基酸残基的突变	人CH2中总体剩余的小鼠残基数目	在EU位置325至328处的氨基酸残基	SEQ ID NO:
					人			NKAL	196
# H	L 328 F	1	NKAF	195
					# E	K 326 A	1	NAAL	197
# D	N 325 S；K 326 A	2	SAAL	198
					# G	K 326 A；L 328 F	2	NSAF	194
# F	N 325 S；L 328 F	2	SKAF	193
					# C	N 325 S；K 326 A	3	SAAF	192
小鼠			SAAF	192

在一些实施方案中，改变的抗体包括变体Fc区和变体CDR3区两者。在一些实施方案中，改变的抗体包括所示的变体Fc区和变体CDR3区(SEQ ID NO: 186-191)两者。在一些实施方案中，改变的抗体包括Fc区中的变体CH2结构域和变体CDR3区两者。在一些实施方案中，改变的抗体包括表2中所示的Fc区中的变体CH2结构域和变体CDR3区例如SEQ ID NO:186-191两者。在一些实施方案中，改变的抗体包括Fc区中的变体CH2结构域和变体CDR3区两者，所述变体CH2结构域在对应于残基325、326和/或328 (使用如EU索引，Edelman等人中的γ重链中的残基编号)的一个或多个残基处是突变的。在一些实施方案中，改变的抗体包括Fc区中的变体CH2结构域和变体CDR3区SEQ ID NO: 186-191两者，所述变体CH2结构域在对应于残基325、326和/或328 (使用如EU索引，Edelman等人中的γ重链中的残基编号)的一个或多个残基处是突变的。

本发明还提供了通过单克隆抗体靶向人CD32A的方法，在所述单克隆抗体中，至少γ重链恒定区的EU氨基酸位置328连同对应于重γ链恒定区的EU位置325和326的一个或两个氨基酸残基一起，由在相同位置处的小鼠IgG1的相应EU氨基酸残基取代，其与未改变的抗体中的相应氨基酸残基不同，使得与未改变的抗体相比，所述抗体在结合人CD32A后引发增加的促炎介质释放抑制，同时保留与抗原的结合。在一些实施方案中，改变的抗体进一步包括变体VH CDR3- KDPSDAFPY (SEQ ID NO: 186)；VH CDR3 - KDPSEGFPY (SEQ ID NO:187)；VL CDR3 - QNSHSFPLT (SEQ ID NO: 188)；VL CDR3 - QQGHSFPLT (SEQ ID NO:189)；VL CDR3 - QNSSSFPLT (SEQ ID NO: 190)；和VL CDR3 - QQSHSFPLT (SEQ ID NO:191)。

在一些实施方案中，对应于γ重链恒定区的EU位置325的氨基酸残基由丝氨酸取代。在一些实施方案中，对应于γ重链恒定区的EU位置326的氨基酸残基由丙氨酸取代。在一些实施方案中，对应于γ重链恒定区的EU位置328的氨基酸残基由苯丙氨酸取代。在一些实施方案中，改变的抗体进一步包括变体VH CDR3- KDPSDAFPY (SEQ ID NO: 186)；VHCDR3 - KDPSEGFPY (SEQ ID NO: 187)；VL CDR3 - QNSHSFPLT (SEQ ID NO: 188)；VLCDR3 - QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 189)；VL CDR3 - QNSSSFPLT (SEQ ID NO: 190)；和VLCDR3 - QQSHSFPLT (SEQ ID NO: 191)。

本发明的抗体干扰或以其它方式拮抗经由人TLR4和/或人TLR4/MD-2复合物的信号传导。在一些实施方案中，本发明的抗体还结合食蟹猴TLR4和/或食蟹猴TLR4/MD-2复合物。在一些实施方案中，抗体结合具有下述序列的包括在人和/或食蟹猴TLR4上的一个或多个氨基酸残基的表位：

>人TLR4氨基酸序列

>食蟹猴TLR4氨基酸序列1

本发明的抗体干扰或以其它方式拮抗经由人和/或食蟹猴TLR4和/或人和/或食蟹猴TLR4/MD-2复合物的信号传导。在一些实施方案中，抗体结合这样的表位，其包括在人和/或食蟹猴TLR4上、在SEQ ID NO: 11-(人TLR4)和/或SEQ ID NO: 77 (食蟹猴TLR4)的残基289和375之间的一个或多个氨基酸残基。例如，TLR4抗体特异性结合包括SEQ ID NO: 11(人)和/或SEQ ID NO: 77 (食蟹猴)的残基349的表位。在一些实施方案中，表位还包括另外的残基，例如，选自以下的残基：至少SEQ ID NO: 11 (人)和/或SEQ ID NO: 77 (食蟹猴)的残基328和329；至少SEQ ID NO: 11 (人)和/或SEQ ID NO: 77 (食蟹猴)的残基351；以及至少SEQ ID NO: 11 (人)和/或SEQ ID NO: 77 (食蟹猴)的残基369直至371，及其任何组合。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体或其免疫活性片段是或衍生自识别细胞表面上表达的人和/或食蟹猴TLR4/MD-2受体的单克隆抗体。抗体能够阻断例如中和TLR4配体，例如LPS或本文所述的任何其它TLR4配体诱导的受体激活和后续细胞内信号传导。本发明的抗体包括结合人和食蟹猴TLR4/MD-2受体复合物并且还不依赖于MD-2的存在结合TLR4的抗体。

在一些实施方案中，例如通过阻断由LPS诱导的受体激活和后续细胞内信号传导，抗TLR4抗体或其免疫活性片段干扰或以其它方式拮抗经由细胞表面上表达的人和/或食蟹猴TLR4/MD-2受体的信号传导。这些实施方案的示例性单克隆抗体包括：1A1、1A6、1B12、1C7、1C10、1C12、1D10、1E11、1E11 N103D、1G12、1E11.C1、1E11.C2、1E11.C3、1E11.C4、1E11.C5、1E11.C6、1E11.E1、1E11.E2、1E11.E3、1E11.E4、1E11.E5、1E11.C2E1、1E11.C2E3、1E11.C2E4和1E11.C2E5。这些抗体的序列显示于下文。

这些抗体具有不同的特异性。一些抗体显示了对于人和食蟹猴TLR4两者和/或人和食蟹猴TLR4/MD-2受体复合物两者的特异性，并且它们已显示了抑制经由LPS的受体激活和后续细胞内信号传导。例如，1C12、1E11、1E11 N103D、1E11.C1、1E11.C2、1E11.C3、1E11.C4、1E11.C5、1E11.C6、1E11.C2E1、1E11.C2E2、1E11.C2E3、1E11.C2E4和1E11.C2E5不依赖于人或食蟹猴MD-2的存在结合人和食蟹猴TLR4两者。1A1、1A6、1B12、1C7、1C10、1D10和1G12不依赖于食蟹猴MD-2的存在仅结合食蟹猴TLR4。1E11.E1、1E11.E2、1E11.E3、1E11.E4和1E11.E5不依赖于人MD-2的存在仅结合人TLR4。

在一些实施方案中，本发明提供了特异性结合Toll样受体4 (TLR4)的分离的抗体，其中所述抗体结合至少包括SEQ ID NO: 11的残基349的表位和至少包括SEQ ID NO:77的残基349的表位。在一些实施方案中，抗体包括重链和轻链，所述重链具有包括以下的三个互补决定区(CDR)：GYSITGGYS (SEQ ID NO: 49)的氨基酸序列的可变重链互补决定区1 (CDRH1)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)的氨基酸序列的可变重链互补决定区2 (CDRH2)；以及ARKDSG(X₁) (X₂) (X₃)PY (SEQ ID NO: 57)的氨基酸序列的可变重链互补决定区3(CDRH3)，其中X₁是N、Q、D或E，X₂是任何疏水性氨基酸，且X₃是任何疏水性氨基酸；所述轻链具有包括以下的三个CDR：QSISDH (SEQ ID NO: 68)的氨基酸序列的可变轻链互补决定区1(CDRL1)；YAS (SEQ ID NO: 69)的氨基酸序列的可变轻链互补决定区2 (CDRL2)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)的氨基酸序列的可变轻链互补决定区3 (CDRL3)。在一些实施方案中，表位进一步至少包括SEQ ID NO: 11和SEQ ID NO: 77的残基328和329。在一些实施方案中，表位进一步至少包括SEQ ID NO: 11和SEQ ID NO: 77的残基351。在一些实施方案中，表位进一步包括在SEQ ID NO: 11和SEQ ID NO: 77的残基369直至371之间的一个或多个残基。在一些实施方案中，表位进一步至少包括SEQ ID NO: 11和SEQ ID NO: 77的残基369直至371。在一些实施方案中，抗体特异性结合至少包括SEQ ID NO: 11和SEQ ID NO:77的残基328、329、349、351和369直至371的表位。一些实施方案，抗体进一步包括在γ重链恒定区中的EU氨基酸位置325处的氨基酸取代以及在EU氨基酸位置328处的氨基酸取代。在一些实施方案中，在EU氨基酸位置325处取代的氨基酸是丝氨酸，并且其中在EU氨基酸位置328处取代的氨基酸是苯丙氨酸。

在一些实施方案中，三个重链CDR包括与以下具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列：选自G(F/Y)PI(R/G/W) (Y/F/G)GYS(SEQ ID NO: 48)、GYSITGGYS (SEQ ID NO: 49)；GFPIRYGYS (SEQ ID NO: 50)；GYPIRFGYS(SEQ ID NO: 51)；GYPIRHGYS (SEQ ID NO: 52)；GFPIGQGYS (SEQ ID NO: 53)；GYPIWGGYS(SEQ ID NO: 54)和GYPIGGGYS (SEQ ID NO: 55)的可变重链互补决定区1 (VH CDR1，在本文中也被称为CDRH1)氨基酸序列，IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)的可变重链互补决定区2 (VHCDR2，在本文中也被称为CDRH2)氨基酸序列；以及选自其中X₁和X₂各自独立地是任何疏水性氨基酸的ARKDSG(N/Q/D/E)X₁X₂PY (SEQ ID NO: 57)、ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 58)；ARKDSGRLLPY (SEQ ID NO: 59)；ARKDSGKWLPY (SEQ ID NO: 60)；ARKDSGHLMPY (SEQ IDNO: 61)；ARKDSGHNYPY (SEQ ID NO: 62)；ARKDSGKNFPY (SEQ ID NO: 63)；ARKDSGQLFPY(SEQ ID NO: 64)；ARKDSGHNLPY (SEQ ID NO: 65)；ARKDSGDYFPY (SEQ ID NO: 66)和ARKDSGRYWPY (SEQ ID NO: 67)的可变重链互补决定区3 (VH CDR3，在本文中也被称为CDRH3)氨基酸序列。三个轻链CDR包括与以下具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)的可变轻链互补区1(VL CDR1，在本文中也被称为CDRL1)氨基酸序列；YAS (SEQ ID NO: 69)的可变轻链互补决定区2 (VL CDR2，在本文中也被称为CDRL2)氨基酸序列；以及选自其中X是任何疏水性氨基酸的QQG(Y/N) (D/E) (F/Y)PXT (SEQ ID NO: 70)、QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)；QQGNDFPVT (SEQ ID NO: 71)；QQGYDEPFT (SEQ ID NO: 72)；QQGYDFPLT (SEQ ID NO:73)；QQGYDYPLT (SEQ ID NO: 74)和QQGYEFPLT (SEQ ID NO: 75)的可变轻链互补决定区3(VL CDR3，在本文中也被称为CDRL3)氨基酸序列。抗体结合人和食蟹猴TLR4/MD-2复合物，结合并未与人和食蟹猴MD-2复合时的人和食蟹猴TLR4，结合人TLR4/MD-2复合物，结合并未与人MD-复合时的人TLR42，结合食蟹猴TLR4/MD-2复合物或并未与食蟹猴MD-2复合时的食蟹猴TLR4。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11抗体。如下文所示，1E11抗体包括由SEQ ID NO: 78中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 79)、以及由SEQ ID NO:80中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 81)。

>1E11 VH核酸序列

>1E11 VH氨基酸序列

>1E11 VL核酸序列

>1E11 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；以及ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO: 58)。1E11抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1A1抗体。

>1A1 VH核酸序列

>1A1 VH氨基酸序列

>1A1 VL核酸序列

>1A1 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1A1抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；以及ARKDSGRLLPY (SEQ ID NO: 59)。1A1抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1A6抗体。

>1A6 VH核酸序列

>1A6 VH氨基酸序列

>1A6 VL核酸序列

>1A6 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1A6抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；以及ARKDSGKWLPY (SEQ ID NO: 60)。1A6抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1B12抗体。

>1B12 VH核酸序列

>1B12 VH氨基酸序列

>1B12 VL核酸序列

>1B12 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1A6抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；以及ARKDSGHLMPY (SEQ ID NO: 61)。1B12抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1C7抗体。

>1C7 VH核酸序列

>1C7 VH氨基酸序列

>1C7 VL核酸序列

>1C7 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1C7抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；以及ARKDSGHNYPY (SEQ ID NO: 62)。1C7抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1C10抗体。

>1C10 VH核酸序列

>1C10 VH氨基酸序列

>1C10 VL核酸序列

>1C10 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1C10抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；以及ARKDSGKNFPY (SEQ ID NO: 63)。1C10抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1C12抗体。

>1C12 VH核酸序列

>1C12 VH氨基酸序列

>1C12 VL核酸序列

>1C12 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1C12抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；以及ARKDSGQLFPY (SEQ ID NO: 64)。1C12抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1D10抗体。

>1D10 VH核酸序列

>1D10 VH氨基酸序列

>1D10 VL核酸序列

>1D10 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1D10抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；以及ARKDSGHNLPY (SEQ ID NO: 65)。1D10抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11 N103D抗体。

>1E11 N103D VH核酸序列

>1E11 N103D VH氨基酸序列

>1E11 N103D VL核酸序列

>1E11 N103D VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11 N103D抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS (SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；以及ARKDSGDYFPY (SEQ ID NO:66)。1E11 N103D抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ IDNO: 69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1G12抗体。

>1G12 VH核酸序列

>1G12 VH氨基酸序列

>1G12 VL核酸序列

>1G12 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1G12抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS(SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；以及ARKDSGRYWPY (SEQ ID NO: 67)。1E11N103D抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C1抗体。

>1E11.C1 VH核酸序列

>1E11.C1 VH氨基酸序列

>1E11.C1 VL氨基酸序列

>1E11.C1 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.C1抗体的重链CDR具有下述序列：GFPIRYGYS (SEQ ID NO: 50)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11.C1抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO:69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C2抗体。

>1E11.C2 VH核酸序列

>1E11.C2 VH氨基酸序列

>1E11.C2 VL核酸序列

>1E11.C2 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.C2抗体的重链CDR具有下述序列：GYPIRFGYS (SEQ ID NO: 51)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11.C1抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO:69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C3抗体。

>1E11.C3 VH核酸序列

>1E11.C3 VH氨基酸序列

>1E11.C3 VL核酸序列

>1E11.C3 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.C3抗体的重链CDR具有下述序列：GYPIRHGYS (SEQ ID NO: 52)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11.C1抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO:69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C4抗体。

>1E11.C4 VH核酸序列

>1E11.C4 VH氨基酸序列

>1E11.C4 VL核酸序列

>1E11.C4 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.C4抗体的重链CDR具有下述序列：GFPIGQGYS (SEQ ID NO: 53)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11.C1抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO:69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C5抗体。

>1E11.C5 VH核酸序列

>1E11.C5 VH氨基酸序列

>1E11.C5 VL核酸序列

>1E11.C5 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.C5抗体的重链CDR具有下述序列：GYPIWGGYS (SEQ ID NO: 54)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11.C1抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO:69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C6抗体。

>1E11.C6 VH核酸序列

>1E11.C6 VH氨基酸序列

>1E11.C6 VL核酸序列

>1E11.C6 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.C6抗体的重链CDR具有下述序列：GYPIGGGYS (SEQ ID NO: 55)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11.C1抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO:69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.E1抗体。

>1E11.E1 VH核酸序列

>1E11.E1 VH氨基酸序列

>1E11.E1 VL核酸序列

>1E11.E1 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.E1抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS (SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGHSFPLT (SEQ ID NO: 6)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.E2抗体。

>1E11.E2 VH核酸序列

>1E11.E2 VH氨基酸序列

>1E11.E2 VL核酸序列

>1E11.E2 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.E2抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS (SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGYDEPFT (SEQ ID NO: 72)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.E3抗体。

>1E11.E3 VH核酸序列

>1E11.E3 VH氨基酸序列

>1E11.E3 VL核酸序列

>1E11.E3 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.E3抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS (SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGYDFPLT (SEQ ID NO: 73)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.E4抗体。

>1E11.E4 VH核酸序列

>1E11.E4 VH氨基酸序列

>1E11.E4 VL核酸序列

>1E11.E4 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.E4抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS (SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGYDYPLT (SEQ ID NO: 74)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.E5抗体。

>1E11.E5 VH核酸序列

>1E11.E5 VH氨基酸序列

>1E11.E5 VL核酸序列

>1E11.E5 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.E5抗体的重链CDR具有下述序列：GYSITGGYS (SEQ ID NO: 49)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGYEFPLT (SEQ ID NO: 75)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C2E1抗体。

>1E11.C2E1 VH核酸序列

>1E11.C2E1 VH氨基酸序列

>1E11.C2E1 VL核酸序列

>1E11.C2E1 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.C2E1抗体的重链CDR具有下述序列：GYPIRFGYS (SEQ ID NO: 51)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGNDFPVT (SEQ ID NO: 71)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C2E3抗体。

>1E11.C2E3 VH核酸序列

>1E11.C2E3 VH氨基酸序列

>1E11.C2E3 VL核酸序列

>1E11.C2E3 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.C2E3抗体的重链CDR具有下述序列：GYPIRFGYS (SEQ ID NO: 51)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGYDFPLT (SEQ ID NO: 73)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C2E4抗体。

>1E11.C2E4 VH核酸序列

>1E11.C2E4 VH氨基酸序列

>1E11.C2E4 VL核酸序列

>1E11.C2E4 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.C2E4抗体的重链CDR具有下述序列：GYPIRFGYS (SEQ ID NO: 51)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGYDYPLT (SEQ ID NO: 74)。

示例性的TLR4单克隆抗体是本文描述的1E11.C2E5抗体。

>1E11.C2E5 VH核酸序列

>1E11.C2E5 VH氨基酸序列

>1E11.C2E5 VL核酸序列

>1E11.C2E5 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley and Sons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。1E11.C2E5抗体的重链CDR具有下述序列：GYPIRFGYS (SEQ ID NO: 51)；IHYSGYT (SEQ ID NO: 56)；和ARKDSGNYFPY (SEQ ID NO:58)。1E11抗体的轻链CDR具有下述序列：QSISDH (SEQ ID NO: 68)；YAS (SEQ ID NO: 69)；以及QQGYEFPLT (SEQ ID NO: 75)。

在一些实施方案中，TLR4抗体以IgG同种型进行格式化。在一些实施方案中，TLR4抗体以IgG1同种型进行格式化。

示例性的IgG1格式化的抗体是包含SEQ ID NO: 178的重链序列和SEQ ID NO:179的轻链序列的IgG1格式化的1E11抗体，如下所示：

>1E11重链氨基酸序列

>1E11轻链氨基酸序列

>1E11轻链核酸序列

>1E11重链核酸序列

示例性的IgG1格式化的抗体是包含SEQ ID NO: 182的重链序列和SEQ ID NO:183的轻链序列的IgG1格式化的1E11.C11抗体，如下所示：

>1E11.C1轻链氨基酸序列

>1E11.C1重链氨基酸序列

>1E11.C1轻链核酸序列

>1E11.C1重链核酸序列

在一些实施方案中，本发明的TLR4抗体特异性结合人和/或猕猴TLR4/MD-2复合物，其中所述抗体结合这样的表位，其包括在人和/或食蟹猴TLR4上、在SEQ ID NO: 11(人)和SEQ ID NO: 77 (食蟹猴)的残基325和374之间的一个或多个氨基酸残基。可替代地，单克隆抗体是结合与1A1、1A6、1B12、1C7、1C10、1C12、1D10、1E11、1E11 N103D、1G12、1E11.C1、1E11.C2、1E11.C3、1E11.C4、1E11.C5、1E11.C6、1E11.E1、1E11.E2、1E11.E3、1E11.E4、1E11.E5、1E11.C2E1、1E11.C2E3、1E11.C2E4和1E11.C2E5相同的表位的抗体。

本发明的抗TLR4抗体包括改变的抗体，其中在抗体的Fc部分的CH2结构域中的至少在EU位置325处的氨基酸残基和至少在EU位置328处的氨基酸残基已进行修饰。例如，至少在EU位置325处的氨基酸残基已由丝氨酸取代，并且至少在EU位置328处的氨基酸残基已由苯丙氨酸取代。

与未改变的抗体相比，具有修饰的Fc部分的这些抗TLR4抗体引发修饰的效应子功能，例如修饰的Fc受体活性。例如，人Fc受体是CD32A。在一些实施方案中，与未改变的抗体相比，这些抗TLR4抗体引发在与CD32A连接之后的促炎介质释放的阻止。因此，这些抗TLR4抗体引发修饰的Fc受体活性，例如促炎介质释放的阻止，同时保留结合靶抗原的能力。在一些实施方案中，这些抗TLR4抗体是中和抗体，其中所述抗TLR4抗体引发修饰的Fc受体活性，同时保留中和靶抗原的一种或多种生物活性的能力。

例如，本发明的抗TLR4抗体包括结合人TLR4/MD-2受体复合物的单克隆抗体。这种受体复合物被脂多糖(LPS)激活，所述脂多糖是革兰氏阴性菌的外膜的主要组分。本发明的抗TLR4抗体抑制经由LPS的受体激活和后续细胞内信号传导。因此，抗TLR4抗体中和TLR4/MD-2受体复合物的激活。特别地，本发明提供了识别细胞表面上表达的TLR4/MD-2受体复合物的抗TLR4抗体。这些抗TLR4抗体阻断LPS诱导的和其它TLR4配体诱导的促炎细胞因子(例如IL-6、IL-8、TNFα)产生。另外，本发明的一些抗TLR4抗体还识别并未与MD-2复合时的TLR4。改变的抗体是例如人源化抗体。

本发明的单克隆抗体(例如，鼠单克隆抗体、人源化抗体或全人单克隆抗体)特异性结合TLR4。在本发明中还包括的是结合与本文所述的抗体相同的表位的抗体。例如，特异性结合TLR4和/或TLR4/MD-2复合物的本发明的抗体结合包括人TLR4 (SEQ ID NO: 11)上的一个或多个氨基酸残基的表位。

在一些实施方案中，TLR4抗体是在小鼠IgG2a ĸ Fc同种型中格式化的替代TLR4抗体。这种嵌合替代mAb被称为5E3。

示例性TLR4单克隆抗体是下文所示的本文所述的“5E3”或“5E3 Rat_VH_mIgG2aFC IGHV9-4”或“5E3 Chimeric Rat_mIgG2a”抗体。构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过M.P. Lefranc (参见Lefranc，M.-P.，Current Protocols in Immunology，J. Wiley andSons，New York supplement 40，A1.P.1-A.1P.37 (2000) LIGM:230)限定的。CDR序列在下文以粗体且加下划线的字体显示。

>5E3重链氨基酸序列

>5E3 VH氨基酸序列

>5E3轻链氨基酸序列

>5E3 VL氨基酸序列

5E3抗体的重链CDR具有下述序列：GYTFTDYV (SEQ ID NO: 344)；INTNTGKP (SEQID NO: 345)；和TRGNYPGLRVMDA (SEQ ID NO: 346)。5E3抗体的轻链CDR具有下述序列：QDVGIY (SEQ ID NO: 347)；RAT (SEQ ID NO: 348)；和LQYDEYPLT (SEQ ID NO: 349)。

本领域技术人员将认识到，无需过度实验，通过确定单克隆抗体(例如鼠单克隆抗体或人源化抗体)是否阻止本文所述的单克隆抗体与TLR4/MD-2复合物或并未与MD-2复合时的TLR4结合，来确定前者是否具有与后者相同的特异性是可能的。如果待测试的单克隆抗体与本发明的单克隆抗体竞争，如通过经由本发明的单克隆抗体的结合降低所示的，则两种单克隆抗体结合相同的或密切相关的表位。用于确定单克隆抗体是否具有本发明的单克隆抗体的特异性的替代方法是使本发明的单克隆抗体与TLR4/MD-2复合物或可溶性TLR4蛋白(它通常与之反应)一起预温育，然后加入待测试的单克隆抗体，以确定待测试的单克隆抗体在其结合TLR4/MD-2复合物或结合TLR4以及与MD-2复合的TLR4的能力方面是否受到抑制。如果待测试的单克隆抗体被抑制，则很可能它具有与本发明的单克隆抗体相同或功能上等价的表位特异性。

huIP-10抗体

huIP-10抗体是例如调节IP-10的至少一种生物活性的IP-10拮抗剂或抑制剂。IP-10的生物活性包括例如结合IP-10受体(CXCR3)、IP-10诱导的钙通量、IP-10诱导的细胞趋化性、IP-10与糖胺聚糖的结合和IP-10寡聚化。例如，huIP-10抗体通过部分或完全阻断IP-10与IP-10受体(CXCR3)的结合而完全或部分抑制IP-10活性。当与不存在与本文所述的huIP-10抗体的结合下的IP-10活性水平相比，在huIP-10抗体的存在下的IP-10活性水平的降低至少95%，例如96%、97%、98%、99%或100%时，IP-10抗体被视为完全抑制IP-10活性。当与不存在与本文所述的huIP-10抗体的结合下的IP-10活性水平相比，在huIP-10抗体的存在下的IP-10活性水平的降低小于95%，例如10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、75%、80%、85%或90%时，IP-10抗体被视为部分抑制IP-10活性。

本发明的huIP-10抗体通过用IP-10免疫动物来产生，所述IP-10例如鼠或人IP-10或者其免疫原性片段、衍生物或变体。可替代地，动物用由含有编码IP-10的核酸分子的载体转染的细胞进行免疫，使得IP-10被表达并且与转染细胞的表面结合。可替代地，通过就与IP-10的结合筛选含有抗体或抗原结合结构域序列的文库来获得抗体。这个文库例如在细菌噬菌体中制备为与细菌噬菌体外壳蛋白的蛋白质或肽融合物，所述细菌噬菌体外壳蛋白在组装的噬菌体颗粒和噬菌体颗粒内包含的编码DNA序列的表面上表达(即“噬菌体展示文库”)。

本发明的huIP-10抗体包括例如下表3中所示的重链互补决定区(CDR)、表4中所示的轻链CDR及其组合。

表3：来自结合且中和IP-10的抗体克隆的VH CDR序列

克隆ID	重CDR1	重CDR2	重CDR3
				NI-0801	NSGIH....	VISY.....DGSNKYYADSVKG	LRDNAEYT...............DY
CF1N1R3P4_C7	NSGIH....	VISY.....DGSNKFYADSVKG	LRDNAEYT...............DY
				CF1H1R3P3_G11	NSGIH....	VISY.....DGSNKFYADSVKG	LRDNGEYL...............DY
CF1A11R3P3_F3	NSGIH....	VISY.....DGSNKFYADSVKG	LRDNGEYL...............DY
				CF1H1R3P4_B5	NSGIH....	VISY.....DGSNKFYADSVKG	LRDNGEYL...............DY
CC21R3P1_F1	NSGIH....	VISY.....DGSNKFYADSVKG	DGSESEYL...............DY
				CC21R3P1_B9	SYGMH....	VISY.....DGSNKYYADSVKG	DGGWYDWYF..............DL
CB21R3P3_E5	SYGMH....	VISY.....DGSIKYYADSVKG	APDGHQL................DY
				CC21R3P1_H6	NYGMH....	VISY.....DGSNRYYADSVKG	DAGGPL.................DY
CC21R3P5_C5	TYGMH....	VISY.....DGGTKYYADSVKG	DLGDLPPGL..............DY
				CB1R3P4_D3	SYGMH....	VISY.....DGSIKYYADSVKG	AGYSTDWHP..............DY
CB2R2P4_C3	TSGMSVI..	RID......SDDEKHYNTSLKT	LRAGSGPYVF.............DS
				CC21R3P4_F4	NYGMH....	VISY.....DGSNRYYADSVKG	DAGGPL.................DY
CC21R3P1_C1a	SYGMH....	VISY.....DGSNKYYADSVKG	DEFDAF.................DI
				CC21R3P3_C1	SYGMH....	VISY.....DGSIKYYADSVKG	DWGFSGSLTF.............DY
CC21R3P1_E7	TYGMH....	VISY.....DGGTKYYADSVKG	DLGDLPPGL..............DY
				CE7C1R3H8_J9	TYGMH....	VISY.....DGGTKYYADSVKG	DLGDLPPGL..............DY
CB21R3P1_F1	SYGMH....	VISY.....DGSIKYYADSVKG	VMGTDPHSYYYM...........DV
				CC21R3P1_A2	DTYMN....	SIY......SDDSTYYADSVKG	DKEYVTSTGGAYYYFYYM.....DV
CB21R3P6_G7	SFSIT....	EITP.....MFGIANYAQKFQG	DGRFDVSDLLTDKPKVTINYNGMDV

表4. 来自结合且中和IP-10的抗体克隆的VL CDR序列

克隆ID	轻CDR1	轻CDR2	轻CDR3
				NI-0801	TGSGGS......IASNYVQ	ED.....NQRPS	QSYDPLPV........WV
CF1N1R3P4_C7	TGSGGS......IDRNYVQ	ED.....NQRPS	QSYDPLPV........WV
				CF1H1R3P3_G11	TGSGGS......IDRNYVQ	ED.....NQRPS	QSYDPLPV........WV
CF1A11R3P3_F3	TGSGGS......IDRNYVQ	ED.....NQRPS	QSYDSINL........WV
				CF1H1R3P4_B5	TGSGGS......IDRNYVQ	ED.....NQRPS	QSYVETPE........WV
CC21R3P1_F1	TGSGGS......IDRNYVQ	ED.....NQRPS	QSYDSINL........WV
				CC21R3P1_B9	QGDS........LTSYYAS	GN.....DNRPS	GSRDSSGYQ.......VV
CB21R3P3_E5	TGSSGS......IASNYVQ	ED.....DQRPS	QSYVSSK.........WV
				CC21R3P1_H6	GGDN........IGRKSVH	DD.....TDRPS	QVWDSSIDHS......WV
CC21R3P5_C5	GGSS........IESKSVH	KD.....SNRPS	QVWDSSTG........VV
				CB1R3P4_D3	QGDS........LRSYYAS	GK.....NNRPS	NSRDSSGNH.......VV
CB2R2P4_C3	SGSSSN......IGSNTVN	NN.....DQRPS	ASWDDSLNG.......RV
				CC21R3P4_F4	GGNN........IGDKSVQ	DD.....SDRPS	QVWDSSSDHPE.....VV
CC21R3P1_C1a	GGNN........IGSRSVH	YD.....SDRPS	QVWDTSSGH.......YV
				CC21R3P3_C1	GGNN........IGSKSVH	YD.....SDRPS	QVWDSSSDH.......VV
CC21R3P1_E7	SGSSSN......IGSNTVN	TN.....NQRPS	AAWDDSLNGN......VV
				CE7C1R3H8_J9	SGSSSN......IGSNTVN	TN.....NQRPS	AAWDDSSEPR......VV
CB21R3P1_F1	QGDS........LRSYYAS	GK.....NNRPS	NSRDSSGNH.......VL
				CC21R3P1_A2	SGSSSN......IGSDTVN	NN.....NQRPS	AAWDDSLNG.......LV
CB21R3P6_G7	SGSSSN......IGSNTVN	NN.....DQRPS	ASWDDSLNG.......RV

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的NI-0801抗体。如下所示，NI-0801抗体包括由SEQ ID NO: 197中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 198)、以及由SEQ ID NO: 200中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 199)。

>NI-0801 VH核酸序列

>NI-0801 VH氨基酸序列

>NI-0801 VL核酸序列

>NI-0801 VL氨基酸序列

IgG1重新格式化的NI-0801抗体的核酸序列和氨基酸序列显示于下文：

>NI-0801轻链氨基酸序列

>NI-0801重链氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。NI-0801抗体的重链CDR具有下述序列：NSGIH (SEQ ID NO: 201)；VISYDGSNKYYADSVKG (SEQ ID NO: 202)；和LRDNAEYTDY (SEQID NO: 203)。NI-0801抗体的轻链CDR具有下述序列：TGSGGSIASNYVQ (SEQ ID NO: 204)；EDNQRPS (SEQ ID NO: 205)；和QSYDPLPVWV (SEQ ID NO: 206)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CF1N1R3P4_C7 (“C7”)抗体。如下所示，C7抗体包括由SEQ ID NO: 207中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO:208)、以及由SEQ ID NO: 209中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 210)。

>CF1N1R3P4_C7 VH核酸序列

>CF1N1R3P4_C7 VH氨基酸序列

> CF1N1R3P4_C7 VL核酸序列

> CF1N1R3P4_C7 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。C7抗体的重链CDR具有下述序列：NSGIH(SEQ ID NO: 201)；VISYDGSNKFYADSVKG (SEQ ID NO: 211)；和LRDNAEYTDY (SEQ ID NO:203)。C7抗体的轻链CDR具有下述序列：TGSGGSIDSNYVQ (SEQ ID NO: 212)；EDNQRPS (SEQID NO: 205)；和QSYDPLPVWV (SEQ ID NO: 206)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CF1H1R3P3_G11 (“G11”)抗体。如下所示，G11抗体包括由SEQ ID NO: 213中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO:214)、以及由SEQ ID NO: 215中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 216)。

> CF1H1R3P3_G11 VH核酸序列

> CF1H1R3P3_G11 VH氨基酸序列

> CF1H1R3P3_G11 VL核酸序列

> CF1H1R3P3_G11 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。G11抗体的重链CDR具有下述序列：NSGIH(SEQ ID NO: 201)；VISYDGSNKFYADSVKG (SEQ ID NO: 211)；和LRDNGEYLDY (SEQ ID NO:217)。G11抗体的轻链CDR具有下述序列：TGSGGSIDSNYVQ (SEQ ID NO: 212)；EDNQRPS (SEQID NO: 205)；和QSYDPLPVWV (SEQ ID NO: 206)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CF1H1R3P4_B5 (“B5”)抗体。如下所示，B5抗体包括由SEQ ID NO: 213中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO:214)、以及由SEQ ID NO: 215中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 216)。

> CF1H1R3P4_B5 VH核酸序列

> CF1H1R3P4_B5 VH氨基酸序列

> CF1H1R3P4_B5 VL核酸序列

> CF1H1R3P4_B5 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。B5抗体的重链CDR具有下述序列：NSGIH(SEQ ID NO: 201)；VISYDGSNKFYADSVKG (SEQ ID NO: 211)；和LRDNGEYLDY (SEQ ID NO:217)。B5抗体的轻链CDR具有下述序列：TGSGGSIDSNYVQ (SEQ ID NO: 212)；EDNQRPS (SEQID NO: 205)；和QSYVETPEWV (SEQ ID NO: 220)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CF1A11R3P3_F3 (“F3”)抗体。如下所示，F3抗体包括由SEQ ID NO: 213中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO:214)、以及由SEQ ID NO: 223中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 224)。

>CF1A11R3P3_F3 VH核酸序列

>CF1A11R3P3_F3 VH氨基酸序列

>CF1A11R3P3_F3 VL核酸序列

>CF1A11R3P3_F3 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。F3抗体的重链CDR具有下述序列：NSGIH(SEQ ID NO: 201)；VISYDGSNKFYADSVKG (SEQ ID NO: 211)；和LRDNGEYLDY (SEQ ID NO:217)。F3抗体的轻链CDR具有下述序列：TGSGGSIDSNYVQ (SEQ ID NO: 212)；EDNQRPS (SEQID NO: 205)；和QSYDSINLWV (SEQ ID NO: 225)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CB1R3P4_D3 (“D3”)抗体。如下所示，D3抗体包括由SEQ ID NO: 226中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 227)、以及由SEQ ID NO: 228中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 229)。

>CB1R3P4_D3 VH核酸序列

>CB1R3P4_D3 VH氨基酸序列

>CB1R3P4_D3 VL核酸序列

>CB1R3P4_D3 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。D3抗体的重链CDR具有下述序列：SYGMH(SEQ ID NO: 230)；VISYDGSIKYYADSVKG (SEQ ID NO: 231)；和AGYSTDWHPDY (SEQ ID NO:232)。D3抗体的轻链CDR具有下述序列：QGDSLRSYYAS (SEQ ID NO: 233)；GKNNRPS (SEQ IDNO: 234)；和NSRDSSGNHVV (SEQ ID NO: 235)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CB2R2P4_C3 (“C3”)抗体。如下所示，C3抗体包括由SEQ ID NO: 236中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 237)、以及由SEQ ID NO: 238中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 239)。

>CB2R2P4_C3 VH核酸序列

>CB2R2P4_C3 VH氨基酸序列

>CB2R2P4_C3 VL核酸序列

>CB2R2P4_C3 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。C3抗体的重链CDR具有下述序列：TSGMSVI(SEQ ID NO: 240)；RIDSDDEKHYNTSLKT (SEQ ID NO: 241)；和LRAGSGPYVFDS (SEQ ID NO:242)。C3抗体的轻链CDR具有下述序列：SGSSSNIGSNTVN (SEQ ID NO: 243)；NNDQRPS (SEQID NO: 244)；和ASWDDSLNGRV (SEQ ID NO: 245)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CB21R3P1_F1 (“CB_F1”)抗体。如下所示，CB_F1抗体包括由SEQ ID NO: 246中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO:247)、以及由SEQ ID NO: 338中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 339)。

>CB21R3P1_F1 VH核酸序列

>CB21R3P1_F1 VH氨基酸序列

>CB21R3P1_F1 VL核酸序列

>CB21R3P1_F1 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。CB_F1抗体的重链CDR具有下述序列：SYGMH(SEQ ID NO: 230)；VISYDGSIKYYADSVKG (SEQ ID NO: 231)；和VMGTDPHSYYYMDV (SEQ IDNO: 232)。CB_F1抗体的轻链CDR具有下述序列：QGDSLRSYYAS (SEQ ID NO: 233)；GKNNRPS(SEQ ID NO: 234)；和NSRDSSGNHVL (SEQ ID NO: 235)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CB21R3P3_E5 (“E5”)抗体。如下所示，E5抗体包括由SEQ ID NO: 249中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 250)、以及由SEQ ID NO: 251中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 252)。

>CB21R3P3_E5 VH核酸序列

>CB21R3P3_E5 VH氨基酸序列

>CB21R3P3_E5 VL核酸序列

>CB21R3P3_E5 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。E5抗体的重链CDR具有下述序列：SYGMH(SEQ ID NO: 230)；VISYDGSIKYYADSVKG (SEQ ID NO: 231)；和APDGHQLDY (SEQ ID NO:253)。E5抗体的轻链CDR具有下述序列：TGSSGSIASNYVQ (SEQ ID NO: 327)；EDDQRPS (SEQID NO: 254)；和QSYVSSKWV (SEQ ID NO: 255)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CB21R3P6_G7 (“G7”)抗体。如下所示，G7抗体包括由SEQ ID NO: 256中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 257)、以及由SEQ ID NO: 258中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 259)。

>CB21R3P6_G7 VH核酸序列

>CB21R3P6_G7 VH氨基酸序列

>CB21R3P6_G7 VL核酸序列

>CB21R3P6_G7 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。G7抗体的重链CDR具有下述序列：SFSIT(SEQ ID NO: 260)；EITPMFGIANYAQKFQG (SEQ ID NO: 261)；和DGRFDVSDLLTDKPKVTINYNGMDV (SEQ ID NO: 262)。G7抗体的轻链CDR具有下述序列：SGSSSNIGSNTVN (SEQ ID NO: 243)；NNDQRPS (SEQ ID NO: 244)；和ASWDDSLNGRV (SEQ IDNO: 245)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CC21R3P1_A2 (“A2”)抗体。如下所示，A2抗体包括由SEQ ID NO: 263中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 264)、以及由SEQ ID NO: 265中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 266)。

>CC21R3P1_A2 VH核酸序列

>CC21R3P1_A2 VH氨基酸序列

>CC21R3P1_A2 VL核酸序列

>CC21R3P1_A2 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。A2抗体的重链CDR具有下述序列：DTYMN(SEQ ID NO: 323)；SIYSDDSTYYADSVKG (SEQ ID NO: 324)；和DKEYVTSTGGAYYYFYYMDV(SEQ ID NO: 325)。A2抗体的轻链CDR具有下述序列：SGSSSNIGSDTVN (SEQ ID NO: 267)；NNNQRPS (SEQ ID NO: 268)；和AAWDDSLNGLV (SEQ ID NO: 269)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CC21R3P1_C1A (“C1a”)抗体。如下所示，C1a抗体包括由SEQ ID NO: 270中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO:271)、以及由SEQ ID NO: 272中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 273)。

>CC21R3P1_C1A VH核酸序列

>CC21R3P1_C1A VH氨基酸序列

>CC21R3P1_C1A VL核酸序列

> CC21R3P1_C1A VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。C1a抗体的重链CDR具有下述序列：SYGMH(SEQ ID NO: 230)；VISYDGSNKYYADSVKG (SEQ ID NO: 202)；和DEFDAFDI (SEQ ID NO:274)。C1a抗体的轻链CDR具有下述序列：GGNNIGSRSVH (SEQ ID NO: 275)；YDSDRPS (SEQID NO: 276)；和QVWDTSSGHYV (SEQ ID NO: 277)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CC21R3P3_C1 (“C1”)抗体。如下所示，C1抗体包括由SEQ ID NO: 297中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 298)、以及由SEQ ID NO: 299中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 300)。

>CC21R3P3_C1 VH核酸序列

>CC21R3P3_C1 VH氨基酸序列

>CC21R3P3_C1 VL核酸序列

>CC21R3P3_C1 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。C1抗体的重链CDR具有下述序列：SYGMH(SEQ ID NO: 230)；VISYDGSIKYYADSVKG (SEQ ID NO: 231)；和DWGFSGSLTF (SEQ ID NO:301)。C1抗体的轻链CDR具有下述序列：GGNNIGSKSVH (SEQ ID NO: 302)；YDSDRPS (SEQ IDNO: 276)；和QVWDSSSDHVV (SEQ ID NO:303)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CC21R3P1_E7 (“E7”)抗体。如下所示，E7抗体包括由SEQ ID NO: 278中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 279)、以及由SEQ ID NO: 280中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 281)。

>CC21R3P1_E7 VH核酸序列

>CC21R3P1_E7 VH氨基酸序列

>CC21R3P1_E7 VL核酸序列

>CC21R3P1_E7 VL氨基酸序列

。

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。E7抗体的重链CDR具有下述序列：TYGMH(SEQ ID NO: 282)；VISYDGGTKYYADSVKG (SEQ ID NO: 283)；和DLGDLPPGLDY (SEQ ID NO:284)。E7抗体的轻链CDR具有下述序列：SGSSSNIGSNTVN (SEQ ID NO: 243)；TNNQRPS (SEQID NO: 285)；和AAWDDSLNGNVV (SEQ ID NO: 286)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CC21R3P1_H6 (“H6”)抗体。如下所示，H6抗体包括由SEQ ID NO: 287中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 288)、以及由SEQ ID NO: 289中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 290)。

>CC21R3P1_H6 VH核酸序列

>CC21R3P1_H6 VH氨基酸序列

>CC21R3P1_H6 VL核酸序列

>CC21R3P1_H6 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。H6抗体的重链CDR具有下述序列：NYGMH(SEQ ID NO: 291)；VISYDGSNRYYADSVKG (SEQ ID NO: 292)；和DAGGPLDY (SEQ ID NO:293)。H6抗体的轻链CDR具有下述序列：GGDNIGRKSVH (SEQ ID NO: 294)；DDTDRPS (SEQ IDNO: 295)；和QVWDSSIDHSWV (SEQ ID NO: 296)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CC21R3P4_F4 (“F4”)抗体。如下所示，F4抗体包括由SEQ ID NO: 304中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 305)、以及由SEQ ID NO: 306中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 307)。

>CC21R3P4_F4 VH核酸序列

>CC21R3P4_F4 VH氨基酸序列

>CC21R3P4_F4 VL核酸序列

>CC21R3P4_F4 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。F4抗体的重链CDR具有下述序列：NYGMH(SEQ ID NO: 291)；VISYDGSNRYYADSVKG (SEQ ID NO: 292)；和DAGGPLDY (SEQ ID NO:293)。F4抗体的轻链CDR具有下述序列：GGNNIGDKSVQ (SEQ ID NO: 308)；DDSDRPS (SEQ IDNO: 309)；和QVWDSSSDHPEVV (SEQ ID NO: 310)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CC21R3P5_C5 (“C5”)抗体。如下所示，C5抗体包括由SEQ ID NO: 311中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 312)、以及由SEQ ID NO: 313中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 314)。

>CC21R3P5_C5 VH核酸序列

>CC21R3P5_C5 VH氨基酸序列

>CC21R3P5_C5 VL核酸序列

>CC21R3P5_C5 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。C5抗体的重链CDR具有下述序列：TYGMH(SEQ ID NO: 282)；VISYDGGTKYYADSVKG (SEQ ID NO: 283)；和DLGDLPPGLDY (SEQ ID NO:284)。C5抗体的轻链CDR具有下述序列：GGSSIESKSVH (SEQ ID NO: 315)；KDSNRPS (SEQ IDNO: 316)；和QVWDSSTGVV (SEQ ID NO: 317)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CE7C1R3H8_J9 (“J9”)抗体。如下所示，J9抗体包括由SEQ ID NO: 318中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO:319)、以及由SEQ ID NO: 320中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 321)。

>CE7C1R3H8_J9 VH核酸序列

>CE7C1R3H8_J9 VH氨基酸序列

>CE7C1R3H8_J9 VL核酸序列

>CE7C1R3H8_J9 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。J9抗体的重链CDR具有下述序列：TYGMH(SEQ ID NO: 282)；VISYDGGTKYYADSVKG (SEQ ID NO: 283)；和DLGDLPPGLDY (SEQ ID NO:284)。J9抗体的轻链CDR具有下述序列：SGSSSNIGSNTVN (SEQ ID NO: 243)；TNNQRPS (SEQID NO: 285)；和AAWDDSSEPRVV (SEQ ID NO: 322)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CC21R3P1_B9 (“B9”)抗体。如下所示，B9抗体包括由SEQ ID NO: 330中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO: 331)、以及由SEQ ID NO: 332中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 333)。

>CC21R3P1_B9 VH核酸序列

>CC21R3P1_B9 VH氨基酸序列

>CC21R3P1_B9 VL核酸序列

>CC21R3P1_B9 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。B9抗体的重链CDR具有下述序列：SYGMH(SEQ ID NO: 230)；VISYDGSNKYYADSVKG (SEQ ID NO: 202)；和DGGWYDWYFDL (SEQ ID NO:334)。B9抗体的轻链CDR具有下述序列：QGDSLTSYYAS (SEQ ID NO: 335)；GNDNRPS (SEQ IDNO: 336)；和GSRDSSGYQVV (SEQ ID NO: 337)。

示例性的huIP-10单克隆抗体是本文描述的CC21R3P1_F1 (“CC_F1”)抗体。如下所示，CC_F1抗体包括由SEQ ID NO: 221中所示的核酸序列编码的重链可变区(SEQ ID NO:222)、以及由SEQ ID NO: 223中所示的核酸序列编码的轻链可变区(SEQ ID NO: 224)。

>CC21R3P1_F1 VH核酸序列

>CC21R3P1_F1 VH氨基酸序列

>CC21R3P1_F1 VL核酸序列

>CC21R3P1_F1 VL氨基酸序列

构成互补决定区(CDR)的氨基酸如通过Chothia等人和E.A. Kabat等人(参见Chothia，C等人，Nature 342:877-883 (1989)；Kabat，EA等人，Sequences of Protein ofimmunological interest，第五版，US Department of Health and Human Services，USGovernment Printing Office (1991))限定的。CC_F1抗体的重链CDR具有下述序列：NSGIH(SEQ ID NO: 201)；VISYDGSNKFYADSVKG (SEQ ID NO: 211)；和DGSESEYLDY (SEQ ID NO:326)。CC_F1抗体的轻链CDR具有下述序列：TGSGGSIDSNYVQ (SEQ ID NO: 212)；EDNQRPS(SEQ ID NO: 205)；和QSYDSINLWV (SEQ ID NO: 225)。

本发明的huIP-10抗体还包括这样的抗体，其包括与SEQ ID NO: 198、208、214、222、227、237、247、250、257、264、271、279、288、298、305、312、319或331的氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或更多同一性的重链可变氨基酸序列，和/或与SEQ ID NO:200、210、219、224、229、239、252、259、266、273、281、290、300、307、314、321、333或339的氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或更多同一性的轻链可变氨基酸。

本发明提供了特异性结合干扰素诱导蛋白10 (IP-10，在本文中也被称为CXCL10)的全人单克隆抗体。示例性单克隆抗体包括NI-0801；CF1N1R3P4_C7 (“C7”)；CF1H1R3P3_G11 (“G11”)；CF1H1R3P4_B5 (“B5”)；CF1A11R3P3_F3 (“F3”)；CC21R3P1_F1 (“CC_F1”)；CB21R3P3_E5 (“E5”)；CC21R3P1_H6 (“H6”)；CC21R3P5_C5 (“C5”)；CB1R3P4_D3 (“D3”)；CB2R2P4_C3 (“C3”)；CC21R3P4_F4 (“F4”)；CC21R3P1_C1a (“C1a”)；CC21R3P3_C1 (“C1”)；CC21R3P1_E7 (“E7”)；CE7C1R3H8_J9 (“J9”)；CB21R3P1_F1 (“CB_F1”)；CC21R3P1_A2(“A2”)；CB21R3P6_G7 (“G7”)；和CC21R3P1_B9 (“B9”)。

可替代地，单克隆抗体是结合与NI-0801、C7、G11、B5、F3、CC_F1、E5、H6、C5、D3、F4、C1a、C1、E7、J9、CB_F1、A2、G7、C3或B9相同的表位的抗体。这些抗体在本文中分别被称为huIP-10抗体。

优选地，三个重链互补决定区(CDR)包括与以下各自具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列：(i)选自SEQ ID NO: 201、230、240、260、282、291和323的VH CDR1序列；(ii)选自SEQ ID NO: 202、211、231、241、261、283、292和324的VH CDR2序列；(iii)选自SEQ ID NO: 203、217、232、242、248、253、262、274、284、293、301、325、326和334的VH CDR3序列；以及具有三个CDR的轻链，所述三个CDR包括与以下各自具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或更多同一性的氨基酸序列：(iv)选自SEQ ID NO: 204、212、233、243、267、275、294、302、308、315、327和335的VL CDR1序列；(v)选自SEQ ID NO: 205、234、244、254、268、276、285、295、309、316和336的VL CDR2序列；以及(vi)选自SEQ ID NO:206、220、225、235、245、255、269、277、286、296、303、310、317、322和337的VL CDR3序列。

在一个实施方案中，本发明的huIP-10抗体包括包含SEQ ID NO: 198的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 200的氨基酸序列的轻链可变区。

本发明的huIP-10抗体包括包含SEQ ID NO: 201的氨基酸序列的V_H CDR1区、包含SEQ ID NO: 202的氨基酸序列的V_H CDR2区；以及包含SEQ ID NO: 203的氨基酸序列的V_HCDR3区。huIP-10抗体包括包含SEQ ID NO: 204的氨基酸序列的V_L CDR1区；包含SEQ IDNO: 205的氨基酸序列的V_L CDR2区；以及包含SEQ ID NO: 206的氨基酸序列的V_L CDR3区。在一个优选实施方案中，huIP-10抗体包括包含SEQ ID NO: 201的氨基酸序列的V_H CDR1区、包含SEQ ID NO: 202的氨基酸序列的V_H CDR2区；包含SEQ ID NO: 203的氨基酸序列的V_H CDR3区，包含SEQ ID NO: 204的氨基酸序列的V_L CDR1区；包含SEQ ID NO: 205的氨基酸序列的V_L CDR2区；以及包含SEQ ID NO: 206的氨基酸序列的V_L CDR3区。

优选地，huIP-10抗体以IgG同种型进行格式化。更优选地，huIP-10抗体以IgG1同种型进行格式化。示例性的IgG1格式化的抗体是包含SEQ ID NO: 329的重链序列和SEQ IDNO: 328的轻链序列的IgG1格式化的NI-0801抗体，如下所示：

>NI-0801轻链氨基酸序列

>NI-0801重链氨基酸序列

关于本文所述的huIP-10抗体的最接近种系显示于下表5中：

表5：关于huIP-10抗体的最接近种系

克隆ID	VH dp编号	VL dp编号
			NI-0801	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda6_6a
CF1N1R3P4_C7	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda6_6a
			CF1H1R3P3_G11	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda6_6a
CF1A11R3P3_F3	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda6_6a
			CF1H1R3P4_B5	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda6_6a
CC21R3P1_F1	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda6_6a
			CC21R3P1_B9	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda3_DPL16_(3l)
CB21R3P3_E5	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda6_6a
			CC21R3P1_H6	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda3_3h
CC21R3P5_C5	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda3_3j
			CB1R3P4_D3	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda3_DPL16_(3l)
CB2R2P4_C3	Vh2_DP-27,28_(2-70)	Vlambda1_DPL2_(1c)
			CC21R3P4_F4	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda3_3h
CC21R3P1_C1a	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda3_3h
			CC21R3P3_C1	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda3_3h
CC21R3P1_E7	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda1_DPL2_(1c)
			CE7C1R3H8_J9	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda1_DPL2_(1c)
CB21R3P1_F1	Vh3_DP-49_(3-30.5)	Vlambda3_DPL16_(3l)
			CC21R3P1_A2	Vh3_DP-86_(3-66)	Vlambda1_DPL2_(1c)
CB21R3P6_G7	Vh1_DP-10_(1-69)	Vlambda1_DPL2_(1c)

使用方法

本发明的治疗制剂(即包括抗TLR4抗体或抗IP-10抗体的制剂)用于抑制ARDS和/或改善患有ARDS的受试者的存活。

治疗的有效性与用于诊断或治疗ARDS或其它移植相关病症的任何已知方法相关进行确定。抑制ARDS或改善患有ARDS的受试者的存活指示了该抗体赋予临床益处。

抗TLR4抗体以药物组合物的形式进行施用。制备此类组合物所涉及的原则和考虑因素以及组分的选择中的指导在例如以下中提供：Remington : The Science AndPractice Of Pharmacy第19版(Alfonso R. Gennaro等人，编辑) Mack Pub. Co.，Easton，Pa.: 1995；Drug Absorption Enhancement : Concepts，Possibilities，Limitations，And Trends， Harwood Academic Publishers，Langhorne，Pa.， 1994；以及Peptide AndProtein Drug Delivery (Advances In Parenteral Sciences，第4卷)，1991，M. Dekker，New York。

当使用抗体片段时，特异性结合靶蛋白的结合结构域的最小抑制片段是优选的。例如，基于抗体的可变区序列，可以设计保留结合靶蛋白序列的能力的肽分子。此类肽可以用化学方法合成和/或通过重组DNA技术产生。(参见例如，Marasco等人，Proc. Natl.Acad. Sci. USA，90: 7889-7893 (1993))。制剂还可以含有如对于待治疗的特定适应症所必要的多于一种活性化合物，优选具有并不彼此不利地影响的互补活性的那些活性化合物。可替代地或另外，组合物可以包含增强其功能的试剂，例如细胞毒素剂、细胞因子、化学治疗剂或生长抑制剂。此类分子适当地以对于预期目的有效的量存在于组合中。

活性成分也可以包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中，例如分别在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球体、微乳状液、纳米颗粒和纳米胶囊)或粗乳状液中的羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。

待用于体内施用的制剂必须是无菌的。这通过经由无菌过滤膜过滤容易地完成。

可以制备缓释制剂。缓释制剂的合适实例包括含有抗体的固体疏水聚合物的半透性基质，所述基质是成形制品的形式，例如薄膜或微胶囊。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(美国专利号3,773,919)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸盐的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRON DEPOT ™ (由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林构成的可注射微球体)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然聚合物例如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸使得能够释放分子超过100天，但某些水凝胶释放蛋白质更短的时间段。

在一些实施方案中，抗体含有可检测标记。抗体是多克隆的，或更优选地是单克隆的。使用完整抗体或其片段(例如，F_ab、scFv或F (_ab)2)。关于探针或抗体的术语“标记的”预期包括通过将可检测物质偶联(即，物理连接)到探针或抗体的探针或抗体的直接标记，以及通过与直接标记的另一种试剂的反应性的探针或抗体的间接标记。间接标记的实例包括使用荧光标记的二抗的一抗检测以及DNA探针用生物素的末端标记，使得它可以用荧光标记的链霉抗生物素蛋白进行检测。术语“生物样品”预期包括从受试者中分离的组织、细胞和生物流体，以及存在于受试者内的组织、细胞和流体。因此，在术语“生物样品”的用法内包括的是血液和血液的级分或组分，包括血清、血浆或淋巴。即，本发明的检测方法可以用于在体外以及在体内检测生物样品中的分析物mRNA、蛋白质或基因组DNA。例如，用于检测分析物mRNA的体外技术包括RNA杂交和原位杂交。用于检测分析物蛋白质的体外技术包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白质印迹、免疫沉淀和免疫荧光。用于检测分析物基因组DNA的体外技术包括DNA杂交。用于进行免疫测定的程序在例如以下中进行描述：“ELISA:Theory and Practice: Methods in Molecular Biology”，第42卷，J. R. Crowther (编辑) Human Press，Totowa，NJ，1995；“Immunoassay”，E. Diamandis and T.Christopoulus，Academic Press，Inc.，San Diego，CA，1996；以及“Practice and Theoryof Enzyme Immunoassays”，P. Tijssen，Elsevier Science Publishers，Amsterdam，1985。此外，用于检测分析物蛋白质的体内技术包括将标记的抗分析物蛋白质抗体引入受试者内。例如，抗体可以用放射性标记物进行标记，所述放射性标记物在受试者中的存在和定位可以通过标准成像技术进行检测。

NI-0101的示例性制剂

在本文提供的组合物和方法中，抗TLR4抗体配制为纯化的散装原料药。可以通过测量分化的U937细胞中TLR4介导的IL6信号传导的抑制来评价抗TLR4抗体制剂的效力。可以通过与参考标准相比较来确定分批的相对效力。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以下述靶浓度进行配制：1 mg/mL至10 mg/mL、10 mg/mL至20 mg/mL、20 mg/mL至30 mg/mL、30 mg/mL至40 mg/mL、40 mg/mL至50 mg/mL、50 mg/mL至60 mg/mL、60 mg/mL至70 mg/mL、70 mg/mL至80 mg/mL、80 mg/mL至90 mg/mL、90 mg/mL至100 mg/mL、100 mg/mL至110 mg/mL、110mg/mL至120 mg/mL、120 mg/mL至130 mg/mL、130 mg/mL至140 mg/mL、140 mg/mL至150 mg/mL、150 mg/mL至160 mg/mL、160 mg/mL至170 mg/mL、170 mg/mL至180 mg/mL、180 mg/mL至190 mg/mL、190 mg/mL至200 mg/mL、200 mg/mL至300 mg/mL、300 mg/mL至400 mg/mL或400mg/mL至500 mg/mL。

在一些实施方案中，TLR-4抗体以下述靶浓度进行配制：约1 mg/mL、约2 mg/mL、约3 mg/mL、4 mg/mL、约5 mg/mL、约6 mg/mL、约7 mg/mL、约8 mg/mL、约9 mg/mL、10 mg/mL、约11 mg/mL、约12 mg/mL、约13 mg/mL、14 mg/mL、约15 mg/mL、约16 mg/mL、约17 mg/mL、约18mg/mL、约19 mg/mL或约20 mg/mL。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以约10 mg/mL的浓度进行配制。

在一些实施方案中，TLR-4抗体以下述靶浓度进行配制：约140 mg/mL、141 mg/mL、约142 mg/mL、约143 mg/mL、144 mg/mL、约145 mg/mL、约146 mg/mL、约147 mg/mL、约148mg/mL、约149 mg/mL、150 mg/mL、约151 mg/mL、约152 mg/mL、约153 mg/mL、154 mg/mL、约155 mg/mL、约156 mg/mL、约157 mg/mL、约158 mg/mL、约159 mg/mL或约160 mg/mL。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以约150 mg/mL的浓度进行配制。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体根据表6进行配制。在一些实施方案中，抗TLR4抗体在约25 mM组氨酸、约200 mM蔗糖中进行配制，并且其中pH为约5.8-6.2。在一些实施方案中，抗TLR4抗体在25 mM组氨酸、200 mM蔗糖中进行配制，并且其中pH为6.0。在一些实施方案中，抗TLR4抗体如下进行配制：约10 mg NI-0101、约1.88 mg L-组氨酸、约2.70 mg L-组氨酸单盐酸盐一水合物、约68.46 mg蔗糖、约0.05 mg聚山梨醇酯80，其中pH为5.8至6.2。在一些实施方案中，抗TLR4抗体如下进行配制：约10 mg NI-0101、约1.88 mg L-组氨酸、约2.70 mg L-组氨酸单盐酸盐一水合物、约68.46 mg蔗糖、约0.05 mg聚山梨醇酯80，并且其中pH为6.0。

表6. NI-0101的示例性制剂

成分	功能	数量(每mL)
			NI-0101	活性
L-组氨酸	缓冲剂
			L-组氨酸单盐酸盐一水合物	缓冲剂
蔗糖	缓冲剂
			聚山梨醇酯80	表面活性剂
注射用水		至1mL

在一些实施方案中，抗TLR4抗体根据表7进行配制。在一些实施方案中，抗TLR4抗体在约0.02%聚山梨醇酯80中进行配制，并且其中pH为约5.8-6.2。在一些实施方案中，抗TLR4抗体在约0.02%聚山梨醇酯80中进行配制，并且其中pH为6.0。在一些实施方案中，抗TLR4抗体如下进行配制：约150 mg NI-0101、约5.24 mg L-组氨酸单盐酸盐、约40.15 mgL-精氨酸单盐酸盐、约1.65 mg L-精氨酸、约0.20 mg聚山梨醇酯80 (0.02%)，其中pH为5.8至6.2。在一些实施方案中，抗TLR4抗体如下进行配制：约150 mg NI-0101、约5.24 mg L-组氨酸单盐酸盐、约40.15 mg L-精氨酸单盐酸盐、约1.65 mg L-精氨酸、约0.20 mg聚山梨醇酯80，并且其中pH为6.0。

表7. NI-0101的示例性制剂

材料	功能	数量(每mL)
			NI-0101	活性	150 mg
L-组氨酸单盐酸盐	缓冲剂	5.24 mg
			L-精氨酸单盐酸盐	缓冲剂	40.15 mg
L-精氨酸	缓冲剂	1.65 mg
			聚山梨醇酯80 (0.02%)	表面活性剂	0.20 mg
注射用水		至1mL

NI-0801的示例性制剂

在本文提供的组合物和方法中，抗huIP-10抗体配制为用于输注的无菌浓缩物(每mL)。在一些实施方案中，抗huIP-10抗体配制为等渗溶液。在一些实施方案中，抗huIP-10抗体配制为澄清、无色至淡黄色溶液。在一些实施方案中，抗huIP-10抗体以下述靶浓度进行配制：约1 mg/mL、约2 mg/mL、约3 mg/mL、4 mg/mL、约5 mg/mL、约6 mg/mL、约7 mg/mL、约8mg/mL、约9 mg/mL、10 mg/mL、约11 mg/mL、约12 mg/mL、约13 mg/mL、14 mg/mL、约15 mg/mL、约16 mg/mL、约17 mg/mL、约18 mg/mL、约19 mg/mL或约20 mg/mL。在一些实施方案中，抗huIP-10抗体以约10 mg/mL的浓度进行配制。

在一些实施方案中，抗huIP-10抗体根据表8进行配制。在一些实施方案中，抗huIP-10抗体在约25 mM组氨酸盐酸盐、约200 mM蔗糖中进行配制，并且其中pH为约5.8-6.2。在一些实施方案中，抗huIP-10抗体在25 mM组氨酸盐酸盐、200 mM蔗糖中进行配制，并且其中pH为6.0。在一些实施方案中，抗huIP-10抗体如下进行配制：约10 mg NI-0801、约1.88 mg L-组氨酸、约2.70 mg L-组氨酸单盐酸盐一水合物、约68.46 mg蔗糖，其中pH为5.8至6.2。在一些实施方案中，抗huIP-10抗体如下进行配制：约10 mg NI-0801、约1.88 mgL-组氨酸、约2.70 mg L-组氨酸单盐酸盐一水合物、约68.46 mg蔗糖，其中pH为6.0。

表8. NI-0801的示例性制剂

成分	功能	参考	数量(每mL)
				NI-0801	活性
L-组氨酸	缓冲剂
				L-组氨酸单盐酸盐一水合物	缓冲剂
蔗糖	缓冲剂
				注射用水		至1 g

制剂还可以含有如对于待治疗的特定适应症所必要的多于一种活性化合物，优选具有并不彼此不利地影响的互补活性的那些活性化合物。可替代地或另外，组合物可以包含增强其功能的试剂，例如细胞毒素剂、细胞因子、化学治疗剂或生长抑制剂。此类分子适当地以对于预期目的有效的量存在于组合中。

在一个实施方案中，活性化合物在组合疗法中进行施用，即，与可用于治疗冠状病毒感染的其它药剂例如治疗剂组合。在该上下文中，术语“组合”意指药剂同时地或序贯地基本上同时给予。如果序贯地给予，则在第二种化合物的施用开始时，两种化合物中的第一种优选在治疗部位处仍可以有效浓度检测到。

例如，组合疗法可以包括本发明的一种或多种抗体，其可以与一种或多种另外的治疗剂共配制和/或共施用。示例性的治疗剂包括但不限于抗病毒药物、ACE抑制剂、免疫增强药物、皮质类固醇或恢复期血清或其任何组合。示例性抗病毒药物包括但不限于瑞德西韦、巴尼韦单抗、埃特司韦单抗、卡西瑞单抗、伊德维单抗、靶向病毒的单克隆抗体或其任何组合。示例性的ACE抑制剂包括但不限于羟氯喹(Plaquenil)或可溶性重组ACE2。示例性的免疫增强药物包括抗TNF抗体、抗IP-10抗体、抗IL-1抗体、抗IL-6单克隆抗体如托珠单抗(Actemra®)或沙利姆单抗(Kevzara®)、阿托伐他汀(Lipitor)或普伐他汀(Pravachol)。此类组合疗法可以有利地利用较低剂量的所施用的治疗剂，因此避免与各种单一疗法相关的可能的毒性或并发症。

任选地，进一步向受试者施用可用于治疗与自身免疫性病症或炎性病症相关的症状的第二药剂。第二药剂包括但不限于抗细胞因子或抗趋化因子试剂，其识别细胞因子如白细胞介素1 (IL-1)、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31，和/或趋化因子，例如MIP1 α、MIP1 β，RANTES、MCP1、IP-10、ITAC、MIG、SDF和fractalkine。

与本发明的抗体组合使用的优选治疗剂是在冠状病毒感染的不同阶段干扰的那些药剂。在一个实施方案中，本文所述的一种或多种抗体可以与一种或多种另外的药剂共配制和/或共施用。

药物组合物

本发明的药物组合物配制为与其预期的施用途径相容。施用途径的实例包括肠胃外，例如静脉内、皮内、皮下、经口(例如吸入)、经皮(即局部)、经粘膜和直肠施用。用于肠胃外、皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可以包括下述组分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调整张力的试剂，例如氯化钠或右旋糖。pH可以用酸或碱例如盐酸或氢氧化钠进行调整。肠胃外制剂可以包封在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。

适合于可注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(在水溶性的情况下)或分散体，以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL™ (BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，组合物都必须是无菌的，并且应该是流动至存在可容易注射性的程度。它在制造和贮存条件下必须是稳定的，并且必须针对微生物例如细菌和真菌的污染作用进行防腐。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等等)、以及其合适混合物。例如，可以通过使用包衣如卵磷脂、通过在分散体的情况下维持所需的粒度和通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等等，来达到微生物作用的预防。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨糖醇、氯化钠。可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，来达到可注射组合物的延长吸收。

可以通过将所需量的活性化合物与根据需要的上文列举的成分之一或组合一起掺入适当的溶剂中，随后为过滤灭菌，来制备无菌可注射溶液。一般地，分散体通过将活性化合物掺入无菌媒介物内进行制备，所述无菌媒介物含有基本分散介质和来自上文列举那些的所需其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其从其先前无菌过滤的溶液产生活性成分加上任何另外所需成分的粉末。

经口组合物一般包括惰性稀释剂或可食用载体。它们可以包封在明胶胶囊中或压制成片剂。为了经口治疗施用的目的，活性化合物可以与赋形剂合并，并且以片剂、锭剂或胶囊的形式使用。经口组合物也可以使用流体载体进行制备用于作为漱口水使用，其中流体载体中的化合物经口应用并漱口并吐出或吞咽。可以包括药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等等可以含有下述成分或类似性质的化合物中的任一种：粘合剂例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂例如淀粉或乳糖，崩解剂例如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂例如胶体二氧化硅；甜味剂例如蔗糖或糖精；或调味剂例如薄荷、水杨酸甲酯或橙子调味料。

对于通过吸入的施用，化合物以气溶胶喷雾剂的形式从压力容器或分配器或喷雾器中递送，所述压力容器或分配器含有合适的推进剂，例如气体如二氧化碳。

活性化合物通过经鼻吸入、经由口吸入、静脉内、经口或其任何组合进行施用。可替代地，活性化合物经由肠溶胶囊进行经口施用。在一些实施方案中，抗体、其制剂或药物组合物(例如，包括抗TLR4或抗IP-10的制剂或药物组合物是静脉内施用的。

通过吸入的施用可以是吸入器或喷雾器的形式。

全身施用也可以通过经粘膜或经皮手段。对于经粘膜或经皮施用，在制剂中使用对于待渗透屏障适当的渗透剂。此类渗透剂是本领域一般已知的，并且包括例如用于经粘膜施用的去污剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。经粘膜施用可以通过使用鼻喷雾剂或栓剂来完成。对于经皮施用，活性化合物配制成本领域众所周知的软膏、油膏、凝胶或乳膏。

化合物也可以以用于直肠递送的栓剂 (例如，使用常规栓剂基质，例如可可脂和其它甘油酯)或保留灌肠剂的形式进行制备。

在一个实施方案中，活性化合物与保护化合物免于从体内快速消除的载体一起制备，例如控制释放制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的方法对于本领域技术人员将是显而易见的。材料也可以从Alza Corporation andNova Pharmaceuticals，Inc商购获得。脂质体悬浮液(包括靶向受感染细胞的脂质体，具有针对病毒抗原的单克隆抗体)也可以用作药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法进行制备，例如如美国专利号4,522,811中所述。

尤其有利的是配制以剂量单位形式的经口或肠胃外组合物，用于容易施用和剂量的均匀性。如本文使用的剂量单位形式指适合作为待治疗受试者的单位剂量的物理离散单元；每个单元含有与所需药物载体结合的，计算为产生所需疗效的预定数量的活性化合物。关于本发明的剂量单位形式的规格由以下决定并且直接取决于以下：活性化合物的独特特性和待实现的特定疗效，以及将此类活性化合物调配用于个体治疗的领域中固有的局限性。

药物组合物可以连同施用说明书一起包括在容器、包装或分配器中。

本发明将在下述实施例中进一步描述，所述实施例并不限制权利要求中描述的本发明的范围。

剂量方案

本公开内容提供了使用抗TLR4抗体用于治疗患有ARDS的受试者的给药方案。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以下述剂量进行施用：约0.01 mg/kg、约0.02 mg/kg、约0.03mg/kg、约0.04 mg/kg、约0.05 mg/kg、约0.06 mg/kg、约0.07 mg/kg、约0.08 mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1 mg/kg、约0.2 mg/kg、约0.3 mg/kg、约0.4 mg/kg、约0.5 mg/kg、约0.6 mg/kg、约0.7 mg/kg、约0.8 mg/kg、约0.9 mg/kg、约1 mg/kg、约2 mg/kg、约3mg/kg、约4 mg/kg、约5 mg/kg、约6 mg/kg、约7 mg/kg、约8 mg/kg、约9 mg/kg、约10 mg/kg、约11 mg/kg、约12 mg/kg、约13 mg/kg、约14 mg/kg、约15 mg/kg、约16 mg/kg、约17 mg/kg、约18 mg/kg、约19 mg/kg、约20 mg/kg、约21 mg/kg、约22 mg/kg、约23 mg/kg、约24 mg/kg、约25 mg/kg、约26 mg/kg、约27 mg/kg、约28 mg/kg、约29 mg/kg、约30 mg/kg、约35 mg/kg、约40 mg/kg或约50 mg/kg。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以约0.01mg/kg至约0.05 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以约0.05mg/kg至约0.1 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以约0.1 mg/kg至约0.5 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以约0.5mg/kg至约1 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以约1mg/kg至约5 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以约5 mg/kg至约10 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以约10 mg/kg至约15 mg/kg进行施用。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以约15mg/kg至约20 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以约20 mg/kg至约25 mg/kg进行施用。在一些实施方案中，抗TLR4抗体以约15 mg/kg的剂量进行施用。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体的剂量在约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时或约10小时的时期内施用于患有ARDS的受试者。在一些实施方案中，抗TRL4抗体在3小时的时期内施用于患有ARDS的受试者。在一些实施方案中，抗TLR4抗体在3小时内静脉内施用于患有ARDS的受试者。

在一些实施方案中，将多重剂量的抗TLR4施用于患有ARDS的受试者。在一些实施方案中，抗体施用至少1次、至少2次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次、至少9次或至少10次。在一些实施方案中，将抗TLR4抗体施用于患有ARDS的受试者一次。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体作为初始剂量施用，并且随后为一个或多个维持剂量。在一些实施方案中，一个或多个维持剂量是与初始剂量基本上相似的剂量。在一些实施方案中，一个或多个维持剂量是小于初始剂量的剂量。在一些实施方案中，一个或多个维持剂量是大于初始剂量的剂量。

在一些实施方案中，一个或多个维持剂量包含至少两个或更多个剂量，其中每个维持剂量是相同的剂量。在一些实施方案中，两个或更多个维持剂量与初始剂量基本上相似。在一些实施方案中，两个或更多个维持剂量大于初始剂量。在一些实施方案中，两个或更多个维持剂量小于初始剂量。

在一些实施方案中，一个或多个维持剂量包括至少两个或更多个剂量，其中每个维持剂量以递增的剂量量进行施用。在一些实施方案中，两个或更多个维持剂量以递减的剂量量进行施用。

在一些实施方案中，一个或多个维持剂量包括至少两个或更多个剂量，其中每个维持剂量以周期性时间间隔进行施用。在一些实施方案中，两个或更多个剂量以递增的时间间隔进行施用。在一些实施方案中，两个或更多个剂量以递减的时间间隔进行施用。

在一些实施方案中，抗TLR4抗体的剂量每天施用一次。在一些实施方案中，在抗TLR4抗体的每个剂量之间的时间为约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天或约12天。

示例性抗IP-10剂量方案

本公开内容提供了使用抗IP10抗体用于治疗患有ARDS的受试者的给药方案。在一些实施方案中，抗IP10抗体以下述剂量进行施用：约0.5 mg/kg、约1 mg/kg、约2 mg/kg、约3mg/kg、约4 mg/kg、约5 mg/kg、约6 mg/kg、约7 mg/kg、约8 mg/kg、约9 mg/kg、约10 mg/kg、约11 mg/kg、约12 mg/kg、约13 mg/kg、约14 mg/kg、约15 mg/kg、约16 mg/kg、约17 mg/kg、约18 mg/kg、约19 mg/kg、约20 mg/kg、约21 mg/kg、约22 mg/kg、约23 mg/kg、约24 mg/kg、约25 mg/kg、约26 mg/kg、约27 mg/kg、约28 mg/kg、约29 mg/kg、约30 mg/kg、约35 mg/kg、约40 mg/kg或约50 mg/kg。在一些实施方案中，抗IP-10抗体以约1mg/kg至约5 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IP-10抗体以约5 mg/kg至约10 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IP-10抗体以约10 mg/kg至约15 mg/kg进行施用。在一些实施方案中，抗IP-10抗体以约15mg/kg至约20 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IP-10抗体以约20 mg/kg至约25 mg/kg进行施用。在一些实施方案中，抗IP-10抗体以约1 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IP-10抗体以约3 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IP-10抗体以约10 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IP-10抗体以约15 mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IP-10抗体以约20 mg/kg的剂量施用。

在一些实施方案中，将多重剂量的抗IP-10施用于患有ARDS的受试者。在一些实施方案中，抗体施用至少1次、至少2次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次、至少9次或至少10次。在一些实施方案中，将抗IP-10抗体施用于患有ARDS的受试者一次。

在一些实施方案中，抗IP-10抗体作为初始剂量施用，并且随后为一个或多个维持剂量。在一些实施方案中，一个或多个维持剂量是与初始剂量基本上相似的剂量。在一些实施方案中，一个或多个维持剂量是小于初始剂量的剂量。在一些实施方案中，一个或多个维持剂量是大于初始剂量的剂量。

在一些实施方案中，抗IP-10抗体的剂量每天施用一次。在一些实施方案中，在抗IP-10抗体的每个剂量之间的时间为约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天或约12天。

定义

除非另有定义，否则与本发明结合使用的科学和技术术语应该具有由本领域普通技术人员通常理解的含义。进一步地，除非上下文另有要求，否则单数术语应该包括复数，且复数术语应该包括单数。一般地，与本文所述的细胞和组织培养、分子生物学、以及蛋白质和寡核苷酸或多核苷酸化学和杂交结合利用的命名法和技术是本领域众所周知和常用的那些。标准技术用于重组DNA、寡核苷酸合成、以及组织培养和转化(例如，电穿孔、脂转染)。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书或者如本领域通常完成的或如本文所述的执行。前述技术和程序一般根据本领域众所周知，并且如本说明书自始至终引用且讨论的各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法来执行。参见例如，Sambrook等人Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第2版，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，N.Y. (1989))。与本文所述的分析化学、合成有机化学、以及医学和药物化学结合利用的命名法以及实验室程序和技术是本领域众所周知和常用的那些。标准技术用于化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送以及患者的治疗。

如按照本公开内容利用的，除非另有说明，否则下述术语应该理解为具有下述含义：

如本文使用的，术语“抗体”指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的免疫活性部分，即，含有特异性结合(与之免疫反应)抗原的抗原结合位点的分子。“特异性结合”或“与之免疫反应”或“免疫特异性结合”意指抗体与所需抗原的一种或多种抗原决定簇反应，并且不与其它多肽反应或以低得多的亲和力(K_d > 10^-6)结合。抗体包括但不限于多克隆、单克隆、嵌合、结构域抗体、单链、F_ab、F_ab’和F (_ab')2片段、scFv和F_ab表达文库。

已知基本抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对等同的多肽链组成，每对具有一条“轻”链(约25 kDa)和一条“重”链(约50-70 kDa)。每条链的氨基末端部分包括主要负责抗原识别的约100至110个或更多个氨基酸的可变区。每条链的羧基末端部分限定了主要负责效应子功能的恒定区。一般而言，从人获得的抗体分子涉及类别IgG、IgM、IgA、IgE和IgD中的任一种，其通过分子中存在的重链的性质而彼此不同。某些类别还具有亚类，例如IgG1、IgG2及其它。此外，在人中，轻链可以是κ链或λ链。

如本文使用的，术语“单克隆抗体”(mAb)或“单克隆抗体组合物”指抗体分子群体，其仅含有抗体分子的一个分子种类，所述抗体分子由独特的轻链基因产物和独特的重链基因产物组成。特别地，单克隆抗体的互补决定区(CDR)在群体的所有分子中都是等同的。mAb含有能够与抗原的特定表位免疫反应的抗原结合位点，所述特定表位的特征在于关于其独特的结合亲和力。

术语“抗原结合位点”或“结合部分”指参与抗原结合的免疫球蛋白分子的部分。抗原结合位点由重链(“H”)和轻链(“L”)的N末端可变(“V”)区的氨基酸残基形成。重链和轻链的V区内的三个高度趋异段，称为“高变区”，插入在称为“构架区”或“FR”的更保守的侧翼段之间。因此，术语“FR”指在免疫球蛋白中的高变区之间天然发现且与之相邻的氨基酸序列。在抗体分子中，轻链的三个高变区和重链的三个高变区在三维空间中相对于彼此设置，以形成抗原结合表面。抗原结合表面与结合抗原的三维表面互补，并且重链和轻链各自的三个高变区被称为“互补决定区”或“CDR”。对于每个结构域的氨基酸分配按照KabatSequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes ofHealth，Bethesda，Md. (1987和1991))，或者Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)，Chothia等人Nature 342:878-883 (1989)的定义。本领域已知用于对抗体的氨基酸序列进行编号和鉴定互补决定区的各种方法。例如，Kabat编号系统(参见Kabat，E.A.等人，Sequences of Protein of immunological interest，第五版，US Departmentof Health and Human Services，US Government Printing Office (1991))、Chothia编号系统(参见Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)，Chothia等人Nature342:878-883 (1989))、或IMGT编号系统(参见IMGT^®，国际ImMunoGeneTics信息系统^®。可在线获取：：http://www.imgt.org/)。IMGT编号系统被常规使用并且公认为本领域可靠且准确的系统，以确定编码序列中的氨基酸位置、等位基因的比对，以及容易地比较来自所有脊椎动物物种的免疫球蛋白(IG)和T细胞受体(TR)中的序列。IMGT数据的准确性和一致性基于IMGT-ONTOLOGY，其是第一个也是迄今为止唯一的用于免疫遗传学和免疫信息学的本体(参见Lefranc. M.P.等人，Biomolecules，2014年12月；4 (4)，1102-1139)。IMGT工具和数据库针对由大型序列储库构建的IMGT参考目录运行。在IMGT系统中，IG V-DOMAIN和IG C-DOMAIN在适当时考虑到外显子定界线进行定界。因此，更多序列对IMGT数据库的可用性，IMGT外显子编号系统可以并且被本领域技术人员可靠地“使用”，以确定编码序列中的氨基酸位置和用于等位基因的比对。另外，IMGT唯一编号与其它编号(即Kabat)之间的对应关系可在IMGT Scientific图表(参见Lefranc. M.P.等人，Biomolecules，2014年12月；4 (4)，1102-1139)中找到。

术语“高变区”或“可变区”指抗体的通常负责抗原结合的氨基酸残基。高变区一般包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(例如，当按照Kabat编号系统进行编号时，V_L中的约残基24-34 (LI)、50-56 (L2)和89-97 (L3)左右，以及V_H 中的约31-35 (HI)、50-65(H2)和95-102 (H3)左右；Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md. (1991))；和/或来自“高变环”的那些残基(例如，当按照Chothia编号系统进行编号时，V_L中的残基24-34 (LI)、50-56 (L2)和89-97 (L3)，以及V_H 中的26-32 (HI)、52-56 (H2)和95-101 (H3)；Chothia和Lesk，J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))；和/或来自“高变环”VCDR的那些残基(例如，当按照IMGT编号系统进行编号时，V_L中的残基27-38 (LI)、56-65(L2)和105-120 (L3)，以及V_H 中的27-38 (HI)、56-65 (H2)和105-120 (H3)；Lefranc，M.P.等人Nucl. Acids Res. 27:209-212 (1999)，Ruiz，M.等人Nucl. Acids Res. 28:219-221 (2000))。任选地，当按照AHo；Honneger，A.和Plunkthun，A. J. Mol. Biol. 309:657-670 (2001))进行编号时，抗体具有在下述点中的一个或多个处的对称插入：V_L中的28、36 (LI)、63、74-75 (L2)和123 (L3)，以及V_H 中的28、36 (HI)、63、74-75 (H2)和123(H3)。

如本文使用的，术语“表位”包括能够与免疫球蛋白、scFv或者T细胞受体特异性结合的任何蛋白质决定簇。术语“表位”包括能够与免疫球蛋白或T细胞受体特异性结合的任何蛋白质决定簇。表位决定簇通常由分子的化学活性表面分组例如氨基酸或糖侧链组成，并且通常具有特定的三维结构特性以及比电荷特性。例如，可以产生针对多肽的N末端或C末端肽的抗体。当解离常数≤ 1 μM；优选≤ 100 nM且最优选≤10 nM时，抗体被说成特异性结合抗原。

如本文使用的，术语“免疫结合”和“免疫结合性质”指在免疫球蛋白分子和免疫球蛋白对于其特异性的抗原之间发生的非共价相互作用类型。免疫结合相互作用的强度或亲和力可以依据相互作用的解离常数(K_d)进行表示，其中较小的K_d代表较大的亲和力。可以使用本领域众所周知的方法来定量所选多肽的免疫结合性质。一种此类方法需要测量抗原结合位点/抗原复合物形成和解离的速率，其中这些速率取决于复合物配偶体的浓度、相互作用的亲和性、以及在两个方向上同等地影响速率的几何参数。因此，“结合速率常数” (K_on)和“解离速率常数” (K_off)两者均可以通过计算浓度以及结合和解离的实际速率进行确定。(参见Nature 361:186-87 (1993))。K_off /K_on的比率使得能够消除与亲和力无关的所有参数，并且等于解离常数K_d。(一般参见，Davies等人(1990) Annual Rev Biochem 59:439-473)。当如通过测定如放射性配体结合测定或本领域技术人员已知的类似测定所测量的，平衡结合常数(K_d) ≤1 μM，优选≤ 100 nM，更优选≤ 10 nM，且最优选≤ 100 pM至约1pM时，本发明的抗体被说成特异性结合Toll样受体4 (TLR4)/MD-2复合物或并未与MD-2复合时的TLR4。

如本文使用的，术语“分离的多核苷酸”应该意指基因组、cDNA或合成起源或其某种组合的多核苷酸，由于其起源，所述“分离的多核苷酸”(1)不与其中“分离的多核苷酸”在自然界中发现的多核苷酸的全部或一部分结合，(2)可操作地连接到它在自然界中并未与之连接的多核苷酸，或(3)在自然界中并不作为较大序列的部分存在。按照本发明的多核苷酸包括编码本文所示的重链免疫球蛋白分子的核酸分子，以及编码本文所示的轻链免疫球蛋白分子的核酸分子。

本文提及的术语“分离的蛋白质”意指cDNA、重组RNA或合成起源或其某种组合的蛋白质，由于其起源或衍生来源，所述“分离的蛋白质”(1)并不与自然界中发现的蛋白质相关，(2)不含来自同一来源的其它蛋白质，例如不含海洋蛋白质，(3)由来自不同物种的细胞表达，或(4)在自然界中不存在。

术语“多肽”在本文中用作通用术语，以指多肽序列的天然蛋白质、片段或类似物。因此，天然蛋白质片段和类似物是多肽属的物种。按照本发明的多肽包含本文所示的重链免疫球蛋白分子和本文所示的轻链免疫球蛋白分子，以及由包含重链免疫球蛋白分子与轻链免疫球蛋白分子如κ轻链免疫球蛋白分子的组合形成的抗体分子，并且反之亦然，以及其片段和类似物。

如本文使用的，当应用于物体时，术语“天然存在的”指物体可以在自然界中发现的事实。例如，可以从自然界中的来源分离，并且并未在实验室中通过人为或以其它方式有意修饰的，存在于生物(包括病毒)中的多肽或多核苷酸序列是天然存在的。

如本文使用的，术语“可操作地连接的”指如此描述的组分的位置处于允许它们以其预期方式起作用的关系中。与编码序列“可操作地连接的”控制序列以这样的方式连接，使得在与控制序列相容的条件下实现编码序列的表达。

如本文使用的，术语“控制序列”指实现它们与之连接的编码序列的表达和加工所必要的多核苷酸序列。此类控制序列的性质因原核生物中的宿主生物而异，此类控制序列在真核生物中一般包括启动子、核糖体结合位点和转录终止序列，一般地，此类控制序列包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”预期最少包括其存在对于表达和加工是必需的所有组分，并且还可以包括其存在是有利的另外组分，例如前导序列和融合配偶体序列。如本文提及的术语“多核苷酸”意指长度为至少10个碱基的核苷酸的聚合硼(boron)，所述核苷酸是核糖核苷酸或脱氧核苷酸或任一类核苷酸的修饰形式。该术语包括单链和双链形式的DNA。

本文提及的术语“寡核苷酸”包括通过天然存在的和非天然存在的寡核苷酸键合连接在一起的天然存在的和修饰的核苷酸。寡核苷酸是一般包含长度为200个碱基或更少的多核苷酸子集。优选地，寡核苷酸长度为10至60个碱基，且最优选长度为12、13、14、15、16、17、18、19或20至40个碱基。寡核苷酸通常是单链的，例如用于探针，尽管寡核苷酸也可以是双链的，例如用于构建基因突变体。本发明的寡核苷酸是有义或反义寡核苷酸。

本文提及的术语“天然存在的核苷酸”包括脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。本文提及的术语“修饰的核苷酸”包括具有修饰或取代的糖基等等的核苷酸。本文提及的术语“寡核苷酸键合”包括寡核苷酸键合，例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯(phosphoroselerloate)、二硒酸磷酸酯、苯胺磷酸硫醇酯(phosphoroanilothioate)、苯胺基磷酸酯、氨基磷酸酯(phosphoronmidate)等等。参见例如，LaPlanche等人Nucl. AcidsRes. 14:9081 (1986)；Stec等人J. Am. Chem. Soc. 106:6077 (1984)，Stein等人Nucl.Acids Res. 16:3209 (1988)，Zon等人Anti-Cancer Drug Design 6:539 (1991)；Zon等人Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach，第87-108页(F. Eckstein，编辑，Oxford University Press，Oxford England (1991))；Stec等人，美国专利号5,151,510；Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990)。需要时，寡核苷酸可以包括用于检测的标记。

下述术语用于描述两个或更多个多核苷酸或氨基酸序列之间的序列关系：“参考序列”、“比较窗口”、“序列同一性”、“序列同一性百分比”和“基本同一性”。“参考序列”是用作序列比较基础的限定序列，参考序列可以是较大序列的子集，例如，作为序列表中给出的全长cDNA或基因序列的区段，或可以包含完整的cDNA或基因序列。一般地，参考序列的长度为至少18个核苷酸或6个氨基酸，频繁地长度为至少为24个核苷酸或8个氨基酸，并且经常长度为至少48个核苷酸或16个氨基酸。由于两个多核苷酸或氨基酸序列可以各自(1)包含在两个分子之间相似的序列(即，完整多核苷酸或氨基酸序列的一部分)，并且(2)可以进一步包含在两个多核苷酸或氨基酸序列之间趋异的序列，在两个(或更多个)分子之间的序列比较通常通过以下执行：在“比较窗口”上比较两个分子的序列，以鉴定且比较序列相似性的局部区域。如本文使用的，“比较窗口”指至少18个邻接核苷酸位置或6个氨基酸的概念区段，其中多核苷酸序列或氨基酸序列可以与至少18个邻接核苷酸或6个氨基酸序列的参考序列进行比较，并且其中比较窗口中的多核苷酸序列部分可以包含与参考序列(其不包含添加或缺失)相比20%或更少的添加、缺失、取代等等(即，空位)，用于两个序列的最佳比对。用于比对比较窗口的最佳序列比对可以通过以下进行：Smith和Waterman Adv. Appl.Math. 2:482 (1981)的局部同源性算法，Needleman和Wunsch J. Mol. Biol. 48:443(1970)的同源性比对算法，Pearson和Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 85:2444 (1988)的相似性搜索方法，这些算法的计算机化实现(Wisconsin GeneticsSoftware Package Release 7.0，(Genetics Computer Group，575 Science Dr.，Madison，Wis.)，Geneworks或MacVector软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)，或检查，并且选择通过各种方法生成的最佳比对(即，导致在比较窗口上最高的同源性百分比)。

术语“序列同一性”意指两个多核苷酸或氨基酸序列在比较窗口上是等同的(即，在逐个核苷酸或逐个残基的基础上)。术语“序列同一性百分比”通过以下进行计算：在比较窗口上比较两个最佳比对的序列，确定在其处等同的核酸碱基(例如，A、T、C、G、U或I)或残基在两个序列中出现的位置数目，以产生匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗口中的位置总数(即，窗口大小)，并且将结果乘以100以产生序列同一性的百分比。如本文使用的，术语“基本同一性”表示多核苷酸或氨基酸序列的特性，其中所述多核苷酸或氨基酸包含在至少18个核苷酸(6个氨基酸)位置的比较窗口上，频繁地在至少24-48个核苷酸(8-16个氨基酸)位置的窗口上，与参考序列相比具有至少85%序列同一性，优选至少90至95%序列同一性，更通常为至少99%序列同一性的序列，其中所述序列同一性的百分比通过比较参考序列与可能包括缺失或添加的序列进行计算，其中所述参考序列的总共20%或更少在比较窗口上。参考序列可以是更大序列的子集。

如本文使用的，二十种常规氨基酸及其缩写遵循常规用法。参见Immunology - ASynthesis (第2版，E. S. Golub和D. R. Gren，编辑，Sinauer Associates，Sunderland7Mass. (1991))。二十种常规氨基酸、非天然氨基酸如α-,α-二取代氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸和其它非常规氨基酸的立体异构体(例如D-氨基酸)也可以是用于本发明的多肽的合适组分。非常规氨基酸的实例包括：4羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸盐、ε-N,N,N-三甲基赖氨酸、ε-N-乙酰赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰丝氨酸、N-甲酰甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、σ-N-甲基精氨酸以及其它类似的氨基酸和亚氨基酸(例如4-羟脯氨酸)。在本文使用的多肽符号中，按照标准用法和惯例，左手方向是氨基末端方向，且右手方向是羧基末端方向。

类似地，除非另有说明，否则单链多核苷酸序列的左手端是5'端，且双链多核苷酸序列的左手方向被称为5'方向。新生RNA转录物的5'至3'添加的方向被称为转录方向，DNA链上与RNA具有相同序列并且是RNA转录物的5'至5'端的序列区域被称为“上游序列”，DNA链上与RNA具有相同序列并且是RNA转录物的3'至3'端的序列区域被称为“下游序列”。

当应用于多肽时，术语“基本同一性”意指当例如通过程序GAP或BESTFIT使用默认空位权重进行最佳比对时，两个肽序列共享至少80%的序列同一性，优选至少90%的序列同一性，更优选至少95%的序列同一性，且最优选至少99%的序列同一性。

优选地，并不等同的残基位置因保守氨基酸取代而异。

保守氨基酸取代指具有相似侧链的残基的互换性。例如，具有脂肪族侧链的一组氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；具有脂肪族羟基侧链的一组氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；具有含酰胺侧链的一组氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳香族侧链的一组氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸是赖氨酸、精氨酸和组氨酸；并且具有含硫侧链的一组氨基酸是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。

如本文讨论的，抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列中的微小变化考虑由本发明涵盖，条件是氨基酸序列中的变化维持至少75%，更优选至少80%、90%、95%，且最优选99%。特别地，考虑了保守氨基酸替换。保守替换是在其侧链中相关的氨基酸家族内发生的替换。遗传编码的氨基酸一般分成以下家族：(1)酸性氨基酸是天冬氨酸盐、谷氨酸盐；(2)碱性氨基酸是赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性氨基酸是丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸，并且(4)非荷电的极性氨基酸是甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。亲水性氨基酸包括精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸盐、谷氨酰胺、谷氨酸盐、组氨酸、赖氨酸、丝氨酸和苏氨酸。疏水性氨基酸包括丙氨酸、半胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。其它氨基酸家族包括(i)丝氨酸和苏氨酸，其是脂肪族羟基家族；(ii)天冬酰胺和谷氨酰胺，其是含酰胺家族；(iii)丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸，其是脂肪族家族；并且(iv)苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸，其是芳香族家族。例如，可合理地预计，亮氨酸由异亮氨酸或缬氨酸、天冬氨酸盐由谷氨酸盐、苏氨酸由丝氨酸的分开替换，或者氨基酸由结构上相关的氨基酸的类似替换并不对所得到的分子的结合或性质具有主要作用，尤其是如果替换并不涉及构架位点内的氨基酸。通过测定多肽衍生物的比活性可以容易地确定氨基酸变化是否导致功能性肽。本文详细描述了测定。抗体或免疫球蛋白分子的片段或类似物可以通过本领域普通技术人员容易地制备。片段或类似物的优选的氨基末端和羧基末端出现在功能结构域的边界附近。结构和功能结构域可以通过核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共或专有序列数据库的比较进行鉴定。优选地，计算机化的比较方法用于鉴定在具有已知结构和/或功能的其它蛋白质中出现的序列基序或预测的蛋白质构象结构域。鉴定折叠成已知三维结构的蛋白质序列的方法是已知的。Bowie等人Science 253:164 (1991)。因此，前述实例证实了本领域技术人员可以识别序列基序和结构构象，其可以按照本发明用于限定结构和功能结构域。

优选的氨基酸取代是这样的氨基酸取代，其：(1)减少对蛋白酶解的敏感性，(2)减少对氧化的敏感性，(3)改变用于形成蛋白质复合物的结合亲和力，(4)改变结合亲和力，并且(4)赋予或修饰此类类似物的其它物理化学或功能性质。类似物可以包括除天然存在的肽序列外的序列的各种突变蛋白。例如，可以在天然存在的序列中(优选在形成分子间接触的结构域之外的多肽部分中)制备单一或多重氨基酸取代(优选保守氨基酸取代)。保守氨基酸取代不应基本上改变亲本序列的结构特性(例如，替换氨基酸不应倾向于破坏亲本序列中出现的螺旋，或破坏表征亲本序列的其它类型的二级结构)。领域公认的多肽二级和三级结构的实例在Proteins，Structures and Molecular Principles (Creighton，编辑，W.H. Freeman and Company，New York (1984))；Introduction to Protein Structure(C. Branden和J. Tooze，编辑，Garland Publishing，New York，N.Y. (1991))；以及Thornton等人Nature 354:105 (1991)中进行描述。

如本文使用的，术语“多肽片段”指具有氨基末端和/或羧基末端缺失的多肽，但其中剩余的氨基酸序列与例如由全长cDNA序列推断的天然存在的序列中的相应位置等同。片段通常为至少5、6、8或10个氨基酸长，优选为至少14个氨基酸长，更优选为至少20个氨基酸长，通常为至少50个氨基酸长，且甚至更优选为至少70个氨基酸长。如本文使用的，术语“类似物”指由至少25个氨基酸的区段构成的多肽，所述区段与推断的氨基酸序列的一部分具有基本同一性，并且在合适的结合条件下，与TLR4/MD2复合物或单独的TLR4具有特异性结合。通常，多肽类似物包含关于天然存在的序列的保守氨基酸取代(或添加或缺失)。类似物通常为至少20个氨基酸长，优选为至少50个氨基酸长或更长，并且经常可以与全长天然存在的多肽一样长。

肽类似物在制药工业中通常用作非肽药物，其性质类似于模板肽的性质。这些类型的非肽化合物称为“肽模拟物”或“拟肽”。Fauchere，J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986)，Veber和Freidinger TINS第392页(1985)；以及Evans等人J. Med. Chem. 30:1229(1987)。此类化合物经常借助于计算机化的分子建模进行开发。与治疗有用的肽结构上相似的肽模拟物可以用于产生等价的治疗或预防效应。一般地，拟肽在结构上类似于范例多肽(即，具有生物化学性质或药理活性的多肽)，例如人抗体，但具有通过本领域众所周知的方法，任选地由选自以下的键合替换的一个或多个肽键合：--CH₂NH--、--CH₂S-、--CH₂-CH₂--、--CH=CH-- (顺式和反式)、--COCH₂--、CH(OH)CH₂--和-CH₂SO--。共有序列的一个或多个氨基酸由相同类型的D-氨基酸的系统取代(例如，用D-赖氨酸代替L-赖氨酸)可以用于生成更稳定的肽。另外，可以通过本领域已知的方法(Rizo和Gierasch Ann. Rev.Biochem. 61:387 (1992))；例如，通过添加能够形成使肽环化的分子内二硫键的内部半胱氨酸残基，来生成包含共有序列或基本上等同的共有序列变化的限制性肽。

术语“药剂”在本文中用于表示化学化合物、化学化合物的混合物、生物大分子或由生物材料制备的提取物。

如本文使用的，术语“标记”或“标记的”指例如通过掺入放射性标记的氨基酸或附着至生物素基部分的多肽而掺入可检测标记物，所述生物素基部分可以通过标记的抗生物素蛋白(例如，含有可以通过光学或量热法检测的荧光标记物或酶促活性的链霉抗生物素蛋白)检测到。在某些情形下，标记或标记物也可以是治疗性的。标记多肽和糖蛋白的各种方法是本领域已知的并且可以使用。用于多肽的标记的实例包括但不限于下述：放射性同位素或放射性核素(例如³H、¹⁴C、¹⁵N、³⁵S、⁹⁰Y、⁹⁹Tc、¹¹¹In、¹²⁵I、¹³¹I)、荧光标记(例如FITC、罗丹明、镧系磷光体)、酶促标记(例如辣根过氧化物酶、p-半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酶)、化学发光、生物素基团、由二级报告分子识别的预定多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、二级抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)。在一些实施方案中，标记通过各种长度的间隔臂附着，以减少潜在的空间位阻。如本文使用的，术语“药物试剂或药物”指当适当地施用于患者时，能够诱导所需疗效的化学化合物或组合物。

本文中的其它化学术语根据本领域的常规用法使用，如通过The McGraw-HillDictionary of Chemical Terms (Parker，S.，编辑，McGraw-Hill，San Francisco(1985))例示的。

术语“抗肿瘤剂”在本文中用于指具有抑制人中的赘生物发展或进展的功能性质的药剂，所述赘生物特别是恶性(癌性)病变，例如癌、肉瘤、淋巴瘤或白血病。转移的抑制频繁地是抗肿瘤剂的性质。

如本文使用的，“基本上纯的”意指目标种类是存在的占优势种类(即，在摩尔基础上，它比组合物中的任何其它各个种类更丰富)，并且优选地，基本上纯化的级分是其中目标种类构成存在的所有大分子种类的至少约50% (在摩尔基础上)的组合物。

一般地，基本上纯的组合物将包含组合物中存在的所有大分子种类的多于约80%，更优选多于约85%、90%、95%和99%。最优选地，目标种类纯化至基本同质性(通过常规检测方法无法在组合物中检测到污染物种类)，其中所述组合物基本上由单一大分子种类组成。

如本文使用的，术语“病毒感染”指属于冠状病毒科、布尼亚病毒科(Bunyaviridae)、丝状病毒科(Filoviridae)、黄病毒科(Flaviviridae)、副粘病毒科(Paramyxoviridae)、小RNA病毒科(Picornaviridae)、正粘病毒科(Orthomyxoviridae)或弹状病毒科(Rhabdoviridae)的一种或多种RNA病毒。其它实施方案包括属于嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)、呼肠孤病毒科(Reoviridae)或逆转录病毒科(Retroviridae)的一种或多种病毒。另一个实施方案包括属于腺病毒科(Adenoviridae)、疱疹病毒科(Herpesviridae)、乳头状瘤病毒科(Papillomaviridae)或乳多空病毒科(Papovaviridae)的一种或多种DNA病毒。

如本文使用的，术语“冠状病毒感染”或“冠状病毒科感染”指由属于冠状病毒科的病毒引起的感染。例如，冠状病毒可能包括但不限于29E α冠状病毒、NL63 α冠状病毒、OC43β冠状病毒、HKU1 β冠状病毒、中东呼吸综合征β冠状病毒(MERS-CoV或MERS)、严重急性呼吸综合征β冠状病毒(SARS-CoV或SARS)、引起2019冠状病毒病的新型冠状病毒(COVID-19、2019-nCoV或SARS-CoV-2)、或其突变体和/或变体。SARS-CoV-2的变体包括但不限于B.1.1.7、B.1.351、P.1、B.1.427或B.1.429。应理解，可以出现具有新型突变或突变集合的冠状病毒的新变体。

术语患者包括人和兽医学受试者。

本文引用的所有出版物和专利文件都通过引用并入本文，如同每个此类出版物或文件具体地且个别地指示通过引用并入本文。出版物和专利文件的引用并不预期作为任何内容是相关的现有技术的承认，它也不构成关于其内容或日期的任何承认。现在已通过书面说明书描述了本发明，本领域技术人员将认识到本发明可以在各个实施方案中进行实施，并且前面的说明书和下文的实施例用于说明而不是限制下述权利要求的目的。

实施例

实施例1 - NI-0101抗TLR4抗体和5E3小鼠替代抗TLR4抗体的药理学和毒理学研究

1.1 非临床药理学研究

1.1.1. NI-0101的体外结合特性

NI-0101是一种人源化IgG1k mAb，其不依赖于MD-2特异性结合人TLR4，通过阻断受体二聚化来抑制信号传导。

由于NI-0101的靶是膜结合且非可溶性的，因此使用动力学排斥测定(KinExA)和ELISA的组合来确定对人TLR4的平均结合亲和力。这些实验证实了，NI-0101对于人TLR4具有139 pM的平均解离常数(Kd)值。

免疫球蛋白FcR在造血细胞上表达，并且在免疫复合物介导的细胞功能激活或抑制中起作用。人IgG与白细胞的结合经由人Fcγ (γ) R家族发生，所述家族包括FcγRI(CD64)、FcγRIIa (CD32a)、FcγRIIb (CD32b)、FcγRIIIa (CD16a)和FcγRIIIb(CD16b)。在这些受体中，FcγRIIa具有在位置131处的多态性(精氨酸(R)或组氨酸(H))，而FcγRIIIa具有在位置158处的多态性(缬氨酸(V)或苯丙氨酸(F))，其导致对于IgG不同的结合亲和力。关于结合亲和力，FcγRI以最高的亲和力与人IgG结合(10^-8至10^-10 M)，并且因此可以接合单体IgG，而FcγRII或FcγRIII以更低的亲和力结合(10^-5至10^-7 M)，并且需要多聚体免疫复合物用于其相互作用。FcgRs也展示了不同的效应子功能，例如，仅FcγRIII接合激发ADCC。因此，将两个突变(参见第1.2节)引入NI-0101的Fc部分内，以特异性去除与FcγRIII的结合，从而避免ADCC的可能性。如表9中概括的，NI-0101的解离常数证实与FcγRIII没有相互作用，同时维持与FcγRI和FcγRII的结合。此外，与涉及IgG血清水平稳态的新生儿FcR (FcRn)的亲和力不受突变的影响。作为基准，包括NI-0101的原始非突变形式Hu15C1用于比较。

表9：如通过KinExA (hTLR4)和表面等离振子共振(FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIII和FcRn)确定的，并以摩尔表示的NI-0101及其亲本抗体Hu 15C1对于人TLR4和人FcR的结合亲和力

分析物	FcγRIIIa 158V	FcγRIIIa 158F	FcγRIIIb	FcRn
					Hu 15C1	8.71E<sup>-7</sup> ± 0.62	5.02E<sup>-6</sup> ± 2.02	7.18E<sup>-5</sup> ± 3.2	1.77E<sup>-9</sup> ± 0.28
NI-0101	无显著结合	无显著结合	无显著结合	1.82E<sup>-9</sup>± 0.09

1.1.2 NI-0101对相关生物靶的体外活性

1.1.2.1. 人TLR4生物活性的NI-0101抑制

NI-0101以相似的能力阻断由三种不同剂量的LPS (0.05、0.25和1.25 ng/mL)诱导的IL-6产生。结果提示了，NI-0101的抑制能力不依赖于配体浓度。此外，NI-0101以相似的效力(对于LPS，IC50 = 10.4 pM，对于腱生蛋白-C为22 pM且对于镍为15 pM)抑制LPS、腱生蛋白-C和镍介导的人原代巨噬细胞中的细胞因子产生。这些实验证实了NI-0101以不依赖配体的方式阻断TLR4信号传导。

1.1.2.2. 通过NI-0101的Fc部分的FcγR接合

研究了通过NI-0101的人FcγRI和FcγRIIa接合对单核细胞系的后果。当NI-0101能够接合TLR4和FcγRI或FcγRIIa时，它在阻断TLR4介导的细胞因子释放方面变得更有力。这些结果证实了FcγRI和FcγRII在NI-0101对炎症细胞的抑制机制方面起作用。然而，NI-0101接合并不诱导通过FcγR的信号传导。

1.1.2.3. 人FcgRIIa多态性和NI-0101

如先前提到的，FcγRIIa具有在氨基酸位置131处的多态性。NI-0101的Fc部分与131R的结合亲和力是与131H变体的两倍(表9)。使用取自121个健康受试者的全血，发现基因型的分布为21% 131RR、33% 131HH和46% 131RH。NI-0101对于所有三个群体阻断了LPS诱导的IL-6释放。NI-0101的IC50对于131RR群体为128 pM，对于131RH群体为223 pM，且对于131HH群体为2191 pM。由于全血中的FcgRI通过循环IgG的饱和，在该区室中，通过NI-0101的IL-6分泌抑制受到供体的FcgRIIa 131基因型的影响。

1.1.2.4. FcgRI相对于FcgRIIa的效应

NI-0101的效力用来自单核细胞谱系的两种髓样细胞系THP1和U937进行测试，所述髓样细胞系表达FcγRI和FcγRIIa两者。THP1携带FcγRIIa 131HH基因型，而U937携带131RR基因型。NI-0101在两种细胞系中均以相似的IC50有力地阻断LPS诱导的IL-6释放；对于THP1的2.7 pM相对于对于U937的2.0 pM。结果证实了，当FcγRI和FcγRIIa两者均可用于NI-0101接合时，FcγRIIa多态性对NI-0101效力具有最低限度的作用。

1.1.2.5. NI-0101对于人TLR4的特异性

测试了NI-0101阻断不同TLR的激活的能力。NI-0101阻断TLR4激活，但不阻断其它TLR。

1.1.2.6. NI-0101的表位和交叉反应性

发现人TLR4上的NI-0101表位跨越氨基酸残基289至375，涉及TLR4二聚化的区域。在这个高变区内，三个框(氨基酸残基328至329、349至351和369至371)被鉴定为对于NI-0101与人TLR4的结合所必需的。另外，NI-0101与TLR4的结合不依赖于MD-2。人TLR4的NI-0101表位和其它物种的直系同源物中的氨基酸差异预计阻止NI-0101与来自任何标准实验室物种的TLR4交叉反应。这一预测在小鼠、兔和食蟹猴中得到确认。

总之，结构信息和实验室结果两者一致显示了NI-0101不与来自任何标准实验室物种的TLR4交叉反应。

1.1.2.7. TLR4受体密度

来自健康供体的血液中的受体密度分析证实了，单核细胞表达最高数目的TLR4分子/细胞(1888 ± 639/细胞)。粒细胞显示具有第二高的表达水平(1307 ± 490/细胞)。TLR4分子的总数目计算为5.38 ± 1.31 × 109 TLR4分子/mL血液(9 pM左右)，其中粒细胞和单核细胞一起代表血液中的TLR4分子来源的大约84%。

1.1.3. 小鼠替代mAb 5E3的体外表征

由于NI-0101不与来自任何标准实验室动物物种的TLR4交叉反应，根据相关指南(ICH S6 (R1) CHMP/ICH/731268/1998和CHMP/SWP/28367/07)，开发了替代抗体以在NI-0101的临床前开发期间使用。通过免疫大鼠生成抗小鼠TLR4 mAb，并且对来自所得到的杂交瘤的可变区进行测序并移植到小鼠IgG2a ĸ Fc上。这种嵌合替代mAb被称为5E3。如表10中概括的， 5E3对于小鼠TLR4展示的特性类似于NI-0101对于人TLR4的特性，并且因此被视为进行代表NI-0101的研究的合适替代试剂。下述节段更详细地提供了支持证据。

表10：5E3与NI-0101的比较

	NI-0101	5E3
			TLR4亲和力	139 pM	27 pM
MD-2不依赖性结合	ü	ü
			TLR4上的表位	在对于受体二聚化关键的区域中	在对于受体二聚化关键的区域中
LPS诱导的TLR4信号传导的阻断	IC50 2.19 nM (324 ng/mL)<sup>a)</sup>	IC50 1.16 nM (173 ng/mL)<sup> b)</sup>
			FcγR结合牵涉	ü	ü

a) 95%置信区间：人全血中的1.664 - 2.767 nM (对于FcγRIIa_HH)

b) 95%置信区间：小鼠全血中的0.582 - 2.361 nM。

1.1.3.1. 5E3与小鼠TLR4的结合亲和力和表位表征

5E3对于小鼠TLR4具有27 pM的平均亲和常数(Kd)值。该值在与NI-0101对于人TLR4相同的皮摩尔范围内。

5E3的表位显示在对于TLR4二聚化所需的区域中，模拟NI-0101与人TLR4的结合。此外，5E3不依赖于小鼠MD-2结合小鼠TLR4，类似于NI-0101对于人TLR4的结合。

1.1.3.2. 5E3与小鼠FcγR的结合亲和力

5E3对于小鼠FcγRI和FcγRII具有的亲和力类似于NI-0101对于可比较的人受体的亲和力。

表11：5E3对小鼠Fc受体的结合亲和力(按M计的Kd)

分析物	mFcγRI	mFcγRII	mFcγRIII	mFcγRIV	mFcRn
						5E3	5.08E<sup>-08</sup>± 0.63	3.26E<sup>-06</sup>± 1.61	5.05E<sup>-07</sup>± 0.94	1.13E<sup>-07</sup>± 0.25	2.93E<sup>-09</sup> ± 0.02

1.1.3.3. 通过5E3阻断LPS诱导的IL-6产生以及FcγR接合对5E3抑制效力的贡献

5E3阻断小鼠全血中的LPS诱导的细胞因子产生，具有1.16 nM的平均IC50。与来自FcγRIIa 131HH供体的人全血中的NI-0101相比，该值在可接受的范围内(2.19 nM的IC50)。另外，5E3的Fc部分涉及其作用机制。

总体而言，5E3的体外表征证实了这种替代抗体相对于临床候选物NI-0101的功能等价性。这对于使用这种替代物用于临床前原理验证和功效研究以及用于安全性评价的目的提供了充分的理由。

此外，替代抗体5E3使用与NI-0101类似的过程产生，除了纯化仅包括前两个层析步骤和低pH保持之外。分析测试的结果证实了该材料的质量适合于药理学、药代动力学和毒理学研究。5E3毒理学材料和NI-0101 GMP原料药的分批分析显示了对比结果。

1.1.4. 支持TLR4在ARDS发病机制中的作用的药理学研究

1.1.4.1. CD1小鼠中的LPS诱导的内毒素血症模型

5E3用于全身性鼠炎症模型(内毒素血症)中。在1 µg/kg LPS (等价于4 ng/kg的人剂量)的i.v.注射之前用5E3的i.v.预治疗，以剂量依赖性方式降低细胞因子/趋化因子血清水平(图1A-1C)。在该实验中，5E3的0.2 mg/kg剂量(人等价剂量，0.017 mg/kg)是饱和(Emax)剂量，0.04 mg/kg (人等价剂量，对于HH基因型为0.003 mg/kg)是最小有效剂量。CD1小鼠用0.2、0.04、0.008或0.0016 mg/kg的5E3 mAb或者0.2 mg/kg的同种型对照mAb进行i.v.注射。1小时后，小鼠用1 µg/kg的LPS进行i.v.注射。2小时后，对小鼠实施安乐死，并且使用Luminex技术测量血清细胞因子和趋化因子。剂量前表示mAb治疗前24小时的细胞因子和趋化因子水平。图1A-1C显示了5E3以剂量依赖性方式抑制小鼠血液中的LPS诱导的细胞因子风暴。

1.1.4.2. 急性肺损伤(ALI)的LPS滴注模型

TLR4已报道在ALI的模型中起重要作用。为了确定TLR4阻断是否具有改善ALI的潜力，5E3在小鼠LPS肺滴注模型中进行评估。

LPS诱导肺中的大量嗜中性粒细胞流入和细胞因子释放。用5E3的i.v.预治疗以剂量依赖性方式阻断肺中的LPS诱导的嗜中性粒细胞募集和细胞因子/趋化因子累积(图2)。TNFα和IL-6 (经由MyD88途径诱导)以及CCL5 (经由TRIF途径上调)的累积被5E3治疗阻断(图3A-3C)。这些结果提示了5E3在体内中和MyD88和TRIF依赖性TLR4途径两者。该模型中5E3的饱和(Emax)剂量为33 mg/kg (人等价剂量，2.7 mg/kg)。导致细胞因子产生和嗜中性粒细胞流入肺的显著减少的最小有效剂量为0.33 mg/kg (人等价剂量，对于FcγRIIa131HH基因型为0.027 mg/kg)。

还在该模型中评价了5E3的Fc部分对其抑制效力的贡献。与野生型(WT)抗体相比，未能接合FcγR的5E3的D265A突变体在抑制LPS诱导的嗜中性粒细胞募集和细胞因子释放方面的效力是大约1/10 (图2和图3A-3C)，其中100 mg/kg的5E3 D265A将嗜中性粒细胞数目和细胞因子浓度减少到与10 mg/kg 5E3组中测量的相似的水平。这些结果证实了，Fc部分还在ALI的LPS肺滴注模型中增强了5E3的体内抑制效力。小鼠接受了所指示浓度的5E3(黑色条)、5E3 IgG2a D265A (空白条)或同种型对照(灰色条) (对于每组n = 10)的i.v.注射，随后为10 μg LPS的i.n.施用到肺内；24小时后，收集支气管肺泡灌洗(BAL)液并且用于计数嗜中性粒细胞的绝对数目。图2显示了5E3和5E3 IgG2a D265A突变体对LPS依赖性嗜中性粒细胞募集到肺内的抑制作用。

如图2的图例中所述的，小鼠用5E3 (黑色条)、5E3 IgG2a D265A (空白条)或同种型对照(灰色条)进行治疗。BAL上清液通过离心与细胞分开。对细胞因子和趋化因子进行定量。图3A-3C显示了5E3抑制LPS诱导的IL-6、TNFα和CXCL10分泌到BAL液内。

该研究确认了TLR4作为ALI中的潜在治疗靶。5E3共接合TLR4和FcγR的能力在体内改善了其抑制LPS诱导的病理学的效力。5E3的非临床药代动力学

作为4周和16/26周GLP毒理学研究的部分，在一项单一剂量PK/PD研究中以及在多重注射后，评估了5E3的药代动力学概况。

1.1.5. 替代抗体5E3的单一剂量PK/PD概况

将50或75 mg/kg 5E3的单次i.v.剂量施用于CD1小鼠。5E3显示了双相、剂量依赖性和线性药代动力学(PK)概况。终末半衰期(T1/2)为大约15.4天。LPS诱导的离体IL-6产生在注射后长达14天受到抑制。

1.1.6. 5E3的4周重复剂量药代动力学

作为4周GLP毒理学研究的部分，30只小鼠/性别/组的卫星研究被分配用于毒代动力学评估。小鼠以60、120或240 mg/kg/周i.v.施用5E3共4周。

总体分析指示了下述：

在240 mg/kg的最后一次注射后的Cmax = 7315 μg/mL (雄性和雌性值的平均值)。

在第28天以240 mg/kg的AUC0-168h = 518000 μg.hrs/mL (雄性和雌性值的平均值)。

跨越60至240 mg/kg剂量范围，暴露趋于在第1周期间按比例增加，然后在第4周期间以亚比例方式增加。

t_1/2 = 16d (雄性和雌性值的平均值)。

在每周一次的重复施用后观察到累积。

分布体积Vz估计值大于小鼠中的血浆体积，提示了存在组织分布。

在毒理学研究中使用的高剂量下，5E3的动力学是线性的。

不存在免疫原性的证据。

1.1.7. 5E3的16/26周重复剂量药代动力学

作为小鼠中5E3的组合16/26周GLP毒性研究的部分，12-21只小鼠/性别/组的卫星研究被分配用于毒代动力学评估。小鼠每周一次用5E3以40、80和160 mg/kg/周进行i.v.施用，总共16或26周。

在所有剂量水平下，平均谷浓度在第8周和第16周之间达到最大值。关于平均谷浓度的累积比率范围为0.687至2.05，指示了从其中浓度基本达到稳态的第4周开始的一些5E3累积。

在所有剂量水平下，平均C15浓度在第8周和第16周之间达到最大值。关于平均C15浓度的累积比率范围为1.03至2.47，指示了从其中浓度基本达到稳态状况的第4周开始的一些5E3累积。

总体而言，平均谷浓度和C15浓度的增加与40至80 mg/kg/周之间的剂量水平成比例，但在160 mg/kg/周下是亚比例的。

在以160 mg/kg/周的最后一个剂量施用之后，5E3的半衰期在雄性和雌性中分别估计为约20天和13天，这与在最后一个剂量施用之后13周内观察到的5E3的几乎完全消除一致。

在5E3的血清浓度中不存在显著的性别相关差异。

在最后一个剂量之后的AUC(tau)在雄性和雌性中分别为20300和19500 µg.天/mL。直至研究的第26周(主要阶段动物)或第39周(恢复期动物)的暴露概况呈现于图4中。在这项16/26周研究过程中并未评价免疫原性，但根据PK/药物浓度概况不存在关于抗药物抗体(ADA)发展的证据。不存在与ADA有关的研究发现，并且对5E3的暴露在研究的给药阶段自始至终都得到维持。出于这些原因， ADA数据的缺乏并不影响研究结果的解释。图4显示了在5E3的静脉内施用之后，小鼠中的5E3的平均血清浓度。

1.2. 毒理学

由于NI-0101不与任何标准实验室物种交叉反应，因此化合物的安全性评价包括用鼠替代抗体5E3执行的毒理学研究、以及用NI-0101进行的体外实验。

1.2.1. 单一剂量毒理学研究

在安全药理学下描述了单一剂量研究，以评价在5E3的单次推注i.v.施用(以60、120和240 mg/kg)之后，对小鼠中的一般活性、行为和体温的作用。在8天的时期内，当与媒介物治疗的组相比时，在5E3治疗的动物中并未观察到行为、生理或体温变化。

1.2.2. 重复剂量毒理学研究

1.2.2.1. 用替代抗体5E3在小鼠中的4周重复剂量毒理学研究

这项符合GLP的研究(Covance研究编号8248643)的目标是研究使用每周一次的5E3经由i.v. (推注)施用于小鼠4周阻断TLR4的毒性。在8周的无治疗期过程中，进行了毒性的可逆性的评价。

四组CD-1小鼠用0 (媒介物对照)、60、120或240 mg/kg/周(第1、8、15和22天)的推注i.v. 5E3剂量施用4周。

9只小鼠/性别/组在第2周和第3周分别取血用于血液学和生物化学分析。在最后一个剂量一周后(第29天)，对12只小鼠/性别/组实施安乐死，而剩余6只小鼠/性别/组(仅对照和高剂量组)在8周恢复期后实施安乐死。根据相同的时间表，向另外30只卫星小鼠/性别/组施用相同剂量的5E3抗体，并且用于毒代动力学评估。

当5E3以高达240 mg/kg/周的剂量水平每周一次通过对小鼠的i.v. (推注)注射施用28天时，并未观察到对体重、食物消耗、主要器官(即脑、心脏、肾、睾丸/附睾、脾和肝)的重量的作用。临床和组织病理学检查并未揭示任何异常。

在研究过程中在任何剂量水平下记录的任何参数中并未观察到5E3有关变化。因此，未观察到不良作用水平(NOAEL)假定为测试的最高剂量，即240 mg/kg/周。

1.2.2.2. 用替代抗体5E3在小鼠中的组合16/26周重复剂量毒理学研究

这项符合GLP的研究(Covance研究编号8296471)的目标是确定在每周一次i.v.施用于Crl:CD1 (ICR)小鼠长达26周之后的5E3毒性，伴随在13周恢复期过程中的任何毒性的可逆性的评价。

该研究是组合设计，其涉及直至160 mg/kg/周的测试物品共16或26周的小鼠治疗。还执行了毒代动力学和免疫毒性评价。

毒代动力学数据在第1.2.3节中进行讨论。

在研究期间不存在与5E3有关的死亡率。

在以直至并包括160 mg/kg/周的剂量水平下，每周一次i.v. 施用(推注)于小鼠共26周后，不存在关于体重、食物消耗、血液学、临床化学、检眼镜检查或免疫毒性(对匙孔血蓝蛋白(KLH)的T细胞依赖性抗体应答)参数的5E3有关变化。

不存在器官重量和/或器官重量比变化，或者被视为与5E3有关的宏观或微观发现。

在研究过程中在任何剂量水平下记录的任何参数中并未观察到5E3有关变化。因此，未观察到不良作用水平(NOAEL)假定为测试的最高剂量，即160 mg/kg/周。

总的来说，直至并包括240 mg/kg共4周的重复剂量、以及直至并包括160 mg/kg共26周的长期重复给药，毒理学研究并未揭示任何安全性关注。

1.2.3. 遗传毒性

遗传毒性研究并未执行，并且被视为对于mAb开发不是必需的。NI-0101在哺乳动物细胞中产生，并且制备方法并不包括罕见的步骤或包括反应物质的使用。NI-0101是IgG1同种型的mAb，并且不含任何非天然氨基酸、化学接头或螯合剂。NI-0101通过结合TLR4起作用，对于所述TLR4不存在致突变效应的证据。NI-0101预计并不具有与DNA完整性有关的作用。出于这些原因，将不执行遗传毒性研究(按照ICH S6)。

1.2.4. 致癌性

并未执行致癌性研究。根据ICH S6 (R1)，用同源产物(例如5E3 mAb)的啮齿类动物生物测定(或短期致癌性研究)对于评价临床候选物的致癌潜力一般具有有限的价值。因此，尚未用5E3 mAb执行啮齿类动物致癌性研究。

1.2.5. 生殖和发育毒理学

并未进行生殖毒理学研究。

然而，生殖道的组织学检查在4周和16/26周符合GLP的小鼠毒性研究中用替代抗体5E3进行评价，并未注意到5E3有关的不良发现。

到目前为止还没有进行特定的发育毒性研究，但此类研究在mAb的这个开发阶段被视为不是必需的。

实施例2随机化、双盲、安慰剂对照研究，以评估NI-0101 + SOC相对于安慰剂 +SOC在患有COVID-19的成人住院患者中的安全性和功效。

1. 目标和终点

1.1目标

主要研究

主要目标

评估NI-0101 + SOC相对于安慰剂 + SOC在患有轻度至重度COVID-19疾病(定义为WHO-COVID严重程度量表评分3 - 6)的成人住院患者中的临床功效。

次要目标

评估NI-0101在患有轻度至重度COVID-19疾病(定义为WHO-COVID严重程度量表评分3 - 6)的成人住院患者中的安全性。

子(探索性)研究

主要目标

评估NI-0101 + SOC相对于安慰剂 + SOC在患有极重度COVID-19疾病(定义为通气需要多于5天或WHO-COVID严重程度量表评分7)的成人住院患者中的临床功效。

次要目标

评估NI-0101在患有极重度COVID-19疾病(定义为通气需要多于5天或WHO-COVID严重程度量表评分7)的成人住院患者中的安全性。

1.2终点

COVID-19相关呼吸系统疾病的严重程度在下述WHO九点顺序量表上进行评价：

主要功效终点

主要研究

在上述量表中定义为3或更低的评分，存活且不需要任何氧支持的患者比例。主要终点将在治疗开始后28天进行评价。

子(探索性)研究

在治疗开始后60天的累积死亡率。

次要功效终点

主要研究和子(探索性)研究

到治疗应答的时间(主要研究的主要功效终点)。

具有临床改善的患者比例，所述临床改善定义为在第28天在WHO 9点顺序量表上的两点或更多点降低。

在第28天无需任何氧支持(WHO量表≤ 2)，存活且出院回家的患者比例。

在第28天存活且没有呼吸衰竭(WHO量表≤ 4)的患者比例。

具有临床改善的患者比例，所述临床改善定义为在第60天在WHO 9点顺序量表上的两点或更多点降低。

具有临床改善的患者比例，所述临床改善定义为在第60天在WHO 9点顺序量表上的一点或更多点降低。

在第60天无需任何氧支持(WHO量表≤ 2)，存活且出院回家的患者比例。

在第60天存活且没有呼吸衰竭(WHO量表≤ 4)的患者比例。

到上述WHO顺序量表上的2点临床改善的时间。

到上述WHO顺序量表上的1点临床改善的时间。

在28天在NEWS-2量表中的变化。

到NEWS-2 = 0的时间。

经历疾病进展的患者比例，所述疾病进展定义为在第28天在WHO 9点顺序量表中的一点或更多点增加。

无呼吸机天数。

通气时间。

在治疗开始后28天和60天的死亡率。

住院时间。

到不依赖于补充性氧疗的时间。

到氧饱和度正常化的时间，所述氧饱和度正常化定义为持续最少24小时的室内空气SpO2/SaO2 > 94%。

在住院治疗时，序贯器官衰竭评价(SOFA)评分的变化。

基于胸部计算机断层扫描(CT-扫描)或胸部X光，对治疗的放射学应答。

细胞因子包括IL-6和C反应蛋白(CRP)水平的变化。

不使用退热药至少48小时的退烧时间。

o定义为体温<37.2℃ (口腔)，或<37.6℃ (直肠或鼓膜)或<36.8℃ (颞侧或腋窝)。

由主治医生决定开始用另一种靶向免疫调节剂(例如，地塞米松)的治疗。

柏林ARDS严重程度量表的变化。

急性肾损伤网络(AKIN)分类的变化。

肌钙蛋白水平的变化。

子(探索性)研究

主要研究的所有次要终点包括仅用于子研究的下述：

在上述量表中定义为3或更低的评分，无需任何氧支持而存活的患者比例。

在ECMO上的持续时间。

安全终点

治疗期间出现的不良事件(TEAE)和严重TEAE的数目。

2. 研究设计

2.1总体设计

这是一项多中心、随机化、双盲、安慰剂对照的两阶段研究，以评估NI-0101在患有COVID-19的成人住院患者中的安全性和功效。该研究由以下构成：

对患有轻度至重度COVID-19疾病(定义为WHO-COVID-19严重程度量表评分3至6)的住院患者进行的主要研究。

对患有极重度COVID-19疾病(定义为通气需要多于5天或WHO-COVID严重程度量表评分7)的患者进行的子(探索性)研究。

除接受护理标准(SOC)之外，将患者随机分配(1:1比率)到NI-0101 (NI-0101 +SOC)或安慰剂(安慰剂 + SOC)。该研究将在位于加拿大、美国、LATAM和欧洲的大约60个研究场所执行。

患者应该在执行任何筛选程序前提供知情同意书。当参与受试者不能提供知情同意书时，如果在其中进行研究的国家/地区的适用法律和法规允许，则他或她的法定/授权代表可以提供知情同意书。在提供知情同意书后，受试者将经历筛选，并且满足所有纳入标准的那些受试者并且排除标准的受试者无一被接受到研究内。

在入选主要研究之后，合格受试者在基线时进行随机化(1:1)，以接受NI-0101或安慰剂的输注。所有患者还将接受按照在每个参与场所的常规护理的SOC治疗。随机化按场所以及定义为3-4级和5-6级的基线WHO COVID-19严重程度层次进行分层。对于子(探索性)研究合格的患者以1:1的比率进行随机化，以接受NI-0101或安慰剂的输注。对于子(探索性)研究，随机化按场所进行分层。

每个患者的随访持续时间将是从用研究产品治疗起直到60天。除了28天和60天评价(如果患者在此评价之前已出院，则所述评价将通过电话完成)之外，所有评价都将在医院内进行。

对于主要研究的阶段1 (II期)，计划入选大约316个可评估患者，其将平均随机分配到两个治疗组，158个用NI-0101 + SOC进行治疗，而158个用安慰剂 + SOC进行治疗。考虑到20%的流失，总共396个患者入选主要研究。

将在每个阶段进行一次期中分析，其通过独立的数据监查委员会(IndependentData Monitoring Committee) (IDMC)进行审查。当来自50%患者的数据可用于主要终点评价时，将进行期中分析。期中分析的结果将用于确定研究是应该继续或还是应该出于无效或安全性关注而提前终止。IDMC审查会议至少每8周通过电话或由委员会主席提交的报告进行。

在子研究中，当已观察到总共30个事件(死亡)时，完成入选。对于子(探索性)研究执行两次期中分析。这些分别在10个事件(死亡)和20个事件后发生。基于目前可用的估计量，预料大约100个患者入选子(探索性)研究。

2.2关于研究设计的科学原理

随机化用于将患者分配至治疗组，因此减少偏差。由于用于COVID-19管理的SOC跨越研究场所而不同，因此随机化按临床场所进行分层。鼓励场所遵循作为最低限度SOC的地区或NIH 2019冠状病毒病(COVID-19)治疗指南(Regional or NIH Coronavirus Disease2019 (COVID-19) Treatment Guidelines) (https://www.covid19treatmentguidelines.nih.gov/)。另外，由于取决于疾病的初始严重程度在COVID-19病例的轨迹中的可能差异，因此主要研究中的随机化基于入选时的COVID-19严重程度进一步进行分层(嵌套在临床场所内)。这将限定两个层次，具体而言(i)轻度疾病(九点COVID-19严重程度量表的3-4级)；(ii)重度疾病(九点COVID-19严重程度量表的5-6级)。因此，在每个场所内，随机化将根据基线疾病严重程度分层为两个层次(3 - 4级相对于5 - 6级)。

对于处于COVID-19病的晚期阶段(7级)或已处于机械通气多于5天对于其疾病进展的下一阶段为死亡的患者管理，存在未满足的需要。鉴于NI-0101的特异性、靶向免疫调节活性，即使在患有重度/极度呼吸衰竭的患者中，疾病进程的逆转也是科学上合理且明智的预期。基于这点，在子(探索性)研究中评价NI-0101预防这个患者群体中的疾病进展(即死亡率)的效应。

鉴于所选的功效结果测量是客观的，以患者为中心的确认偏差预计并不影响研究结果。然而，以研究者为中心的选择或适应症偏差可以是潜在的风险。具有安慰剂对照的双盲设计的使用将减少偏差的可能性。

具有采用的序贯组分析的所提议的适应性设计被视为适合于在可能的最短时间内评价NI-0101的治疗潜力，以便由于无效或安全性关注而停止研究。适应性设计允许研究纳入标准的潜在修改，以确保选择富集的患者群体，其优化来自NI-0101的治疗益处的检测。另外，使用期中分析，对样本量要求的修改、结果测量以及如何可以在研究的整体数据分析和设计中考虑到不断进化的护理标准的更好理解将是可能的。

2.3研究结束的定义

研究结束定义为从住院到出院的时间或第28天评价之间最短的，如事件时间表表1中所示的。对于所有随机化的患者进行在第28天时的随访评价(在提前出院的情况下)以及在第60天时的随访评价，无论治疗依从性或住院状况如何，用于安全性的充分评估。

3. 研究群体

3.1 主要研究的纳入标准：

如果受试者满足所有下述纳入标准，则他们对于参与研究是合格的：

在同意时≥18岁的男性和女性。

COVID-19的实验室确认诊断。

因COVID-19相关疾病而住院治疗。

患者属于九点WHO COVID-19严重程度量表中的下述四个类别之一：

住院治疗，不需要补充氧 - 九点COVID-19严重程度量表的3级。

住院治疗，需要通过面罩或鼻导管的氧疗 - 九点COVID-19严重程度量表的4级。

住院治疗，需要无创通气或高流量氧 - 九点COVID-19严重程度量表的5级。

住院治疗，需要插管和机械通气 - 九点COVID-19严重程度量表的6级。

对于涉及可以导致怀孕的任何性交的有生育潜力的女性：在研究药物注射后的11周(五个半衰期)期间，阴性妊娠测试并且愿意使用避孕用具(符合地方性法规)。

注意：避孕方法的使用不适用于在第1天前节制至少4周，并且将在研究药物注射后11周(五个半衰期)继续节制阴茎-阴道性交的受试者。性欲节制的可靠性需要关于临床试验的持续时间以及参与者的首选和通常的生活方式进行评估。

注：无生育潜力的女性如下进行定义：

年龄≥60岁。

已具有手术绝育(子宫切除术、双侧卵巢切除术或双侧输卵管切除术)

已停止月经至少12个月而无备选医学原因，并且促卵泡激素(FSH)测试确认了无生育潜力(关于确认水平参考实验室参考范围)。

从能够给予同意书的任何患者获得的知情同意书，或者当患者不能给予同意书时，从他或她的法定/授权代表获得的知情同意书。

子(探索性)研究

主要研究的所有纳入标准具有纳入标准(4)的下述取代：

住院治疗，需要通气多于5天或插管 + 另外的器官支持 - 加压器、RRT、ECMO -九点COVID-19严重程度量表的7级。

3.2排除标准

如果受试者在基线时满足下述标准中的任一，则他们对于参与研究将是不合格的：

受试者是母乳喂养或怀孕的女性。

对NI-0101或其赋形剂的已知超敏反应。

根据研究者的意见，无论提供何种治疗，在接下来的48 - 72小时内进展到死亡是即将发生且不可避免的。

积极参与其它免疫调节剂或免疫抑制剂药物的临床试验。

参与COVID-19抗病毒、抗凝和恢复期血浆试验可能是许可的；然而，视具体情况而定来处理入选正在参与其它临床试验的患者的决定。

在随机化前5个半衰期或30天(以较长者为准)内，用免疫调节剂或免疫抑制药物，包括但不限于TNF抑制剂和抗IL-1药剂的治疗。(应注意，作为SOC的部分，用免疫调节剂或免疫抑制药物例如皮质类固醇的治疗是许可的)。

根据临床医生的判断，已知禁忌NI-0101且不能治疗或解决的其它临床状况。

3.3停药和失访

受试者有权在任何时间出于任何原因退出研究而不受惩罚。

如果受试者退出研究，则应该进行关于提前终止就诊的完整最终评估，伴随受试者为何退出研究的解释。

停止研究的受试者将不被替换。关于停药的可能原因包括下述：

受试者可以出于任何其它原因退出研究，包括撤回同意书。

主办者或监管机构出于任何原因终止研究。在这种情况下，所有受试者都将停止研究。在以其整体或在临床试验场所通过主办者的研究停止时，研究者立即将停止告知受试者和研究伦理委员会两者，向他们提供停止的原因，并且以书面形式通知他们对受试者或其它人健康的任何潜在风险。

失访

考虑到研究的住院性质，在研究中预料没有失访。

3.4筛选失败

筛选失败定义为同意参与临床试验，但随后并未随机分配到研究产品的个体。需要关于筛选失败患者的最小数据集，以评价选择偏差的可能性并回应来自监管机构的询问。最低限度的信息包括人口统计、疾病严重程度和筛选失败的原因。

如果由研究者视为可接受的，则不符合参与该试验的标准(筛选失败)的个体可以重新筛选一次。应该对重新筛选的受试者分配不同的受试者基线就诊，包括签署新的同意书表格，然后执行。

4. 治疗

4.1 施用的研究治疗

在第1天时，向受试者施用15mg/kg直至最多1440 mg (10个小瓶)的单次NI-0101IV输注或单次安慰剂IV输注，连同护理标准(SOC) COVID- 19治疗。SOC治疗可能因临床场所而异，然而，鼓励场所遵循作为最低限度护理标准的NIH 2019冠状病毒病(COVID-19)治疗指南。每个患者的总随访持续时间将是从用研究产品治疗起直到60天。

NI-0101研究治疗和安慰剂由Edesa Biotech Research Inc提供。与SOC有关的治疗不由Edesa Biotech Research Inc提供或报销(reimbursed)。

NI-0101必须仅由研究者或代表作为研究性医药产品(IMP)给予。接受IMP的受试者应该处于其中可获得适当监督和监测的环境中，以允许不良反应的早期检测及其及时治疗。

NI-0101必须进行稀释且通过经过3小时的IV输注进行施用。在施用前，含有NI-0101的小瓶应该就颗粒性物质和变色进行检查。起始和终止时间以及以mg计的施用总剂量将记录在eCRF上。

关于治疗施用的更多细节将在研究手册中进行描述。关于研究产品的概括细节可以在下表12中找到。

表12. 研究治疗

标签的内容按照所有适用的监管要求。

4.2制备/处理/贮存/问责制

制备/贮存/处理

该药物产品是用于输注溶液的浓缩物。每个2 mL小瓶含有1.2 mL在配制缓冲液(25 mM组氨酸/200 mM精氨酸、0.02% (w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0)中的150 mg/mL溶液。

该产品中不存在防腐剂或抑菌剂；因此，小瓶仅用于一次性使用。当制备NI-0101或匹配的安慰剂用于施用时，必须使用标准无菌处理程序。

关于制备的完整说明，包括稀释步骤和IMP的施用方法，可在IMP手册的研究药物NI-0101/安慰剂的个体剂量制备和施用说明书中获得。

NI-0101的小瓶应该在5 ± 3℃ (41 ± 5℉)的冷藏条件下运输且贮存，并且不应该摇动或冷冻。

所有研究产品都必须贮存在安全区域中，具有限于研究者和授权的场所人员的接近。研究产品只能由授权的场所人员提供，并且只能施用于入选研究的受试者。

有效期将打印在标签上。

问责制

研究者或代表负责维护最初收到的研究产品和使用的研究产品的准确记录。在通过主办者或指定人员核实研究产品问责制后，用过的产品将被安全贮存，直至销毁/退回。在分配和退回的量之间的任何差异将要求解释。

所有研究产品问责表和治疗日志必须保留在研究者的研究文件中。产品库存和问责记录按照GCP和ICH指南进行维护。这些记录必须可用于通过主办者、其指定人员或监管机构在任何时间的检查。

研究手册中提供了关于研究治疗的最终处置的进一步指导和信息。

4.3随机化

在研究场所，每个筛选的受试者将在筛选期间分配受试者标识号，其将在所有受试者文件上使用。受试者标识号将含有场所编号和受试者编号，并且将基于筛选日期的时间次序按在基线就诊时的数字次序分配(例如，02-010用于在场所#02筛选的第10个受试者)。

该研究将由两个治疗组组成，所述两个治疗组将以1:1的比率进行随机分配：(1)NI-0101 + SOC和(2)安慰剂 + SOC。

随机化将在第一次给药前，在基线时发生，并且将进行分层：

主要研究

按临床场所；按入选时COVID-19病的严重程度定义为：

a. 轻度至中度疾病：九点COVID-19严重程度量表的3或4级

b. 重度至危重疾病：九点COVID-19严重程度量表的5或6级

基于上文，在每个研究场所，随机化如下分层为两个层次：

COVID-19严重程度(基线)	层次
		3 – 4级	1
5 – 6级	2

将阻断随机化，以确保每个层次内的治疗组的相等1:1分配，并且使关于两个治疗组之间受到的SOC的匹配达到最大。

子(探索性)研究

按临床场所：

随机化列表将使用验证的软件生成，并且安全保管，直到治疗分配盲性在研究结束时被打破。此列表将上传到交互式网络应答/电子数据捕获(Interactive WebResponse/Electronic Data Capture) (IWR/EDC)系统。研究者或指定人员将能够通过利用IWR/EDC系统获得关于合格受试者的随机化编号。

关于随机化程序的进一步指导和信息将在研究手册中进行描述。

设盲

该研究将是双盲的。在任何时候，治疗和随机化信息都将保持机密，并且直到研究结束后才透露给研究者、研究人员、合同研究组织(CRO)或主办者的研究团队。使用IWR系统，试剂盒在从药物仓库(Drug Depot)运出时已经是设盲的。来自每个治疗组的最小量将在现场，使得它可以根据分配的随机化编号分配给受试者。

出于受试者安全的原因，盲码应该仅在紧急情况下被打破。只要有可能，研究者应该在破盲前联系主办者或其指定人员。如果破盲，则研究者应该及时告知医学监查员。破盲的文件记录应该记录有日期/时间、破盲原因以及涉及人员的姓名。

已经破盲的受试者将停止研究并经历治疗程序的结束。在其中存在伦理原因让受试者留在研究中的情况下，研究者必须获得来自主办者或其指定人员的特别批准，用于受试者继续研究。将记录停止的原因(导致揭盲的事件或状况)。

在研究期间，期中分析将由独立的第三方(JSS Medical Research)以设盲方式执行。更具体而言，分析者将不知道治疗的身份，因为组被标识为A组或B组。在研究进行期间，主办者/研究团队将无法接近关于个体治疗分配的信息、或期中分析结果。期中分析的结果将直接提交给独立的数据监查委员会。

研究治疗依从性

在第1天时的研究药物的医院内施用将记录在eCRF上。在其中并未施用研究药物的情况下，将记录关于未施用的原因。

4.4 伴随疗法

必须记录在研究自始至终服用的所有用药。

用药条目可以作为通用名称或商品名称捕获。商品名称应该用于组合药物。条目应该尽可能包括下述信息：剂量、单位、施用频率、施用途径、起始日期、停药日期和施用原因。如果停止用药或改变剂量，则必须记录这些细节。

禁止的疗法或程序

在研究过程期间不存在禁止的治疗或程序。在研究期间向患者提供的用药和治疗的所有细节将记录在合并用药部分中。如果在研究期间的任何点，主治医生决定用另一种靶向免疫调节剂(例如IL-6抑制剂)的治疗是有必要的，则这将记录在eCRF上。

5. 研究评价

5.1功效评价

为确保一致性并减少变异性，同一评价者应该尽可能执行关于给定受试者的所有评价。

症状评价

将每天评价下述症状的存在(是相对于否)：

发烧，定义为体温≥37.2℃ (口腔)，或≥37.6℃ (直肠或鼓膜)或≥36.8℃ (颞侧或腋窝)。目前使用的退热药也将记录在eCRF的这一部分中；这些也应该记录在eCRF的合并用药部分中。

咳嗽咳痰

咳嗽有血痰/咯血

咽喉痛

流鼻涕(鼻漏)

耳朵痛

喘鸣

胸痛

肌肉酸痛(肌痛)

关节疼痛(关节痛)

疲劳/不适

呼吸急促(呼吸困难)

下胸壁凹陷

头痛

意识改变/意识模糊

癫痫发作

腹痛

呕吐/恶心

腹泻

结膜炎

皮疹

皮肤溃疡

淋巴结病

出血(流血)和出血部位

除SARS CoV2外的感染

在基线时，评价将在研究药物施用前进行。

九点顺序WHO COVID-19严重程度量表

COVID-19相关呼吸系统疾病的严重程度每天在下述九点顺序量表上进行评价：

在基线时，评价将在研究药物施用前进行。

氧饱和度

氧饱和度(SpO2)用脉搏血氧仪进行测量。如果或当还获得动脉血氧饱和度(SaO2)时，这也将进行记录。

在基线时，评价将在研究药物施用前进行。在住院随访期间，氧饱和度按照常规护理以及在由医院工作人员认为有必要时进行评价。

序贯器官衰竭评价(SOFA)评分

SOFA评分是一种简单且客观的评分，其测量六个器官系统中的器官功能障碍：呼吸、神经、心血管、肝、凝血和肾。对于每个系统，分配从0到4的评分，其中增加的评分反映恶化的器官功能障碍。

在基线时，评价将在研究药物施用前进行。在住院随访期间，评价SOFA评分的频率按照常规护理。SOFA评分也将在第28天或提前出院时执行。取决于在每个临床场所的常规护理，SOFA和修改的SOFA两者对于数据收集均是可接受的。

除个体器官系统评分之外，还将分析下述累积评分：

每日最高SOFA评分：基于前24小时内每个子评分的最严重值进行计算。

总SOFA评分：计算为所有子评分的总和。

国家早期预警评分–2 (NEWS-2)

该量表基于六个测量的评价，其汇聚成单一累积评分。每个参数关于与正常值的差异进行评价，并且更高的评分指示更严重的疾病。测量下述参数：

呼吸频率

氧饱和度

收缩压

脉搏

意识水平或新的意识模糊

温度。

关于每个参数的评分范围为0到3，其中更高的评分指示与正常值的更高偏差。如果患者需要氧补充以维持推荐的氧饱和度水平，则总分增加2点。

在基线时，评价将在研究药物施用前进行。在住院随访期间，NEWS-2评分按照常规护理以及在由医院工作人员认为有必要时进行评价。NEWS-2评分也将在第28天或提前出院时执行。

下表概括了关于NEWS-2量表的临床严重程度阈值：

NEWS-2评分	严重程度：
		累积0 – 4	低
在任何单一参数中的评分= 3	低 - 中
		累积5 – 6	中
累积> 6	高

ARDS严重程度(柏林量表)

ARDS量表如下进行定义：

轻度：PaO2/FiO2：200 – 300

中度：PaO2/FiO2：100 – 200

重度：PaO2/FiO2：< 100。

按照常规护理收集确定ARDS水平所需的数据。基线ARDS量表将基于在治疗施用日期时或在治疗开始前的最近日期的测试结果。在研究期间，使用按照常规护理的测试结果来计算ARDS严重程度。

肺成像

对于基线评价，将使用在研究药物施用前获得的肺成像结果。将记录使用的成像方法(胸部计算机断层扫描[CT扫描]或胸部X光)以及具有肺部浸润的肺视野的双侧百分比(%)。在住院随访期间，按照在每个临床场所的常规护理执行胸部成像。

IL-6水平

按照在每个临床场所的常规护理记录IL-6水平(按照在每个临床场所的常规护理的血清或血浆)。

在基线时，评价将在研究药物施用前进行。

另外，在来自所选场所的100个患者的亚组中，IL-6水平将作为研究的部分在基线、IP施用后12小时、第3天、第14天和第28天或提前出院时进行评价，即使不是常规护理的部分。

常规炎性细胞因子

按照在每个临床场所的常规护理记录常规炎性细胞因子(按照在每个临床场所的常规护理的血清或血浆)。

在基线时，评价将在研究药物施用前进行。

另外，在来自所选场所的100个患者的亚组中，标准实验对象组炎性细胞因子将作为研究的部分在基线、IP施用后12小时、第3天、第14天和第28天或提前出院时进行评价，即使不是常规护理的部分。

5.2安全性评价

生命体征和人体测量

在基线时，在研究药物施用前，除氧饱和度(上文描述的)之外，还将记录温度、心率、呼吸频率和收缩压/舒张压，其中受试者在已平静地坐下几分钟后处于坐姿。

在住院随访期间，按照常规护理评价生命体征，并且研究者认为具有临床意义的异常发现应该报告为AE。

在表1中指定的就诊时收集重量(kg)和身高(cm)。仅在基线就诊时测量身高。

体格检查

当可能时，在研究药物施用前在基线时完成完整的体格检查。在不可能进行完整的体格检查的情况下，将记录按照医院规程进行的检查结果。

包括下述部位/系统：

总体外观

皮肤病学

头、眼、耳、鼻、喉(HEENT)

呼吸系统

心血管

腹部

神经学

肌肉骨骼

淋巴。

在住院随访期间，将以症状或疾病驱动的方式进行定向体格检查，并且如果由研究者认为适当，则具有临床意义的异常发现应该报告为AE。关于所有体格检查的信息都必须包括在源文件中。

临床实验室测试

临床实验室测试将在研究药物施用前在基线时和在第28天时(或提前出院时，如果适用的话)执行。在剩余的天数里，临床实验室测试如临床指示的按照常规护理执行。测试将包括血液学鉴别、血清化学实验对象组、尿分析。

妊娠测试也对于有生育潜力的女性在筛选期间在基线时和在第28天时(或提前出院时)执行。

将在研究中确定的具体实验室测试结果在下表13中列出。

表13. 临床实验室测试

ALT = 丙氨酸氨基转移酶；AST = 天冬氨酸氨基转移酶；BUN = 血尿素氮；CBC =全血细胞计数；CRP = C反应蛋白。

心电图

十二导联ECG将仅在临床指示时按照常规护理执行。距离基线的任何临床显著恶化将记录为AE。

急性肾损伤网络(AKIN)标准

AKIN标准将在研究药物施用前在基线时进行记录。对于剩余的天数，只有按照在每个临床场所的常规护理进行评价时，它们才被记录在eCRF上。任何显著变化都应该报告为AE。

肌钙蛋白水平

肌钙蛋白水平(按照在每个临床场所的常规护理的血清或血浆)将在研究药物施用前在基线时进行记录。对于剩余的天数，只有按照在每个临床场所的常规护理进行评价时，肌钙蛋白水平才被记录在eCRF上。任何显著变化都应该报告为AE。

5.3 不良事件

不良事件的定义

AE是在施用药物产品的受试者中的任何不利的医学发生，并且不一定与该治疗具有因果关系。因此，AE可以是与研究产品的使用暂时相关的任何不利和意外的体征(包括异常实验室发现)、症状或疾病，无论是否被认为与研究产品有关。AE和严重不良事件(SAE)将从在基线时研究药物的第一个剂量的时间直到最后一次就诊/接触进行收集；在获得知情同意书和研究药物的第一个剂量之前之间发生的任何AE或SAE都应该记录为患者的病史的部分。

机会性感染将被记下，并且无论生物(即病毒或非病毒)如何，研究中发生的任何新感染都将被捕获。另外，还将记录感染部位和培养物来源(BAL、气管抽吸物、痰、血液、尿等)。

治疗期间出现的不良事件(TEAE)的定义

TEAE是这样的任何状况，其在用研究产品治疗前不存在但在治疗之后出现，在治疗开始时存在但在治疗期间恶化，或在治疗开始时存在但消退，然后在个体处于治疗时再次出现(无论治疗开始时AE的强度如何)。

严重不良事件的定义

SAE或反应是任何不利的医学发生，在任何剂量下，其：

导致死亡

是危及生命的*

需要受试者的住院治疗¥或现有住院治疗的延长

导致持续或严重的残疾/无能力

是先天性异常/出生缺陷

具有医学意义/医学重要的事件

*注释1：“严重”的定义中的术语“危及生命的”指其中受试者在事件时处于死亡的风险中的事件；它并不指如果它更严重的话，则假设可能已导致死亡的事件。

¥注释2：由于研究患者将在筛选时进行住院治疗，因此当患者由于不良事件需要转移到重症监护病房或进入另一个医院科室时，将应用此标准。

在决定速报在其它情形下是否适当时应该进行医学和科学判断，所述其它情形例如可能并非立即危及生命或者导致死亡或住院治疗，但可能危及受试者和/或可能需要干预以预防上文定义中列出的其它结果之一的重要医疗事件。这些通常也应该被视为严重的。

此类事件的实例是在急诊室或家中用于过敏性支气管痉挛、血液恶液质或抽搐的强力治疗，其并不导致住院治疗、或者药物依赖或药物滥用的发展。

不良事件的评价

与研究治疗的关系

研究者将建立AE与实验治疗的因果关系。研究者必须包括是否存在合理可能性的因果关系评价，即药物引起的事件可能是敏感的，以区别可能与药物有关的事件相对于由于潜在的疾病过程和/或伴随疗法的事件。研究者应该考虑受试者的临床状态(例如，病史、并存病、合并用药)和作为对药物采取行动的结果的去激发/再激发信息。研究者应该记录关于因果关系评价的理由。下述定义将用于确定AE的因果关系：

明确有关的：与研究药物施用的合理时间关系；遵循已知的应答模式(即，已知药物引起这种AE)；不存在备选病因。

很可能有关的：合理的时间关系；遵循可疑的应答模式(即，基于类似的药物)；关于更可能的备选病因的一些证据。

可能有关的：合理的时间关系；关于更可能的备选病因的很少证据或没有证据。

不太可能有关的：与药物摄入时间相关的事件使得关系不太可能，但并非不可能，疾病或其它药物提供了似是而非的解释。

无关的：没有时间关系或明确地是由于备选病因。

不良事件严重程度

AE的强度是通过研究者基于他或她的临床经验和对文献的熟悉程度做出的事件相对严重程度的估计量。下述定义用于评定AE的严重程度：

轻度：症状对于受试者是几乎察觉不到的，并且不影响日常活动的表现。通常不需要治疗。

中度：症状足以严重到使得受试者不舒服，并且日常活动的表现受到影响。治疗可能是有必要的。

重度：症状引起严重不适，并且日常活动明显受损或受阻。治疗可能是有必要的。

预期

医学监查员将评价与研究产品有关的每种SAE的预期用于速报。

关于事件评价和随访的时间段和频率

AE或SAE的发生可能在研究就诊和用于医疗护理的研究受试者的访谈期间，或在通过研究监查员审查时引起研究人员的注意。

所有AE，包括局部反应和全身反应，将在适当的eCRF上捕获。待收集的信息包括事件描述、发作时间、临床医生对严重程度的评价、与研究产品的关系(仅由受过训练并有权做出诊断的人员进行评价)、以及事件消退/稳定化的日期。无论关系如何，在研究时发生的所有AE都必须适当地进行记录。

如果受试者在第一次研究药物施用后的任何时间经历SAE，则该事件将在源文件和eCRF中记录为SAE。

在受试者入选前，研究场所人员将在源文件和eCRF的适当部分中记下每个受试者的医学状况的发生和性质。在研究期间，场所人员将记下任何AE的状况以及发生和性质的任何变化。

在签署同意时存在的任何医学状况将被视为病史的部分并且不报告为AE。然而，如果研究受试者的状况在第一次研究药物施用后恶化，则它将被记录为AE。

如果受试者在第一次研究药物施用后直到研究参与结束的任何时间经历AE，则该事件将在源文件和eCRF中记录为AE。

研究者负责受试者在研究期间适当的医疗护理。研究者还负责跟踪检查在研究结束时进行中的所有AE的适当卫生保健选项。应该跟踪受试者，直到事件消退或稳定。随访频率将由研究者自行决定执行，但在出院后至少每月一次，直至从用研究产品的治疗起60天。出院后的随访可以经由电话来进行。

只要有可能，具有临床意义的异常实验室结果将使用导致具有临床意义的异常实验室结果而不是实际异常测试的诊断来报告。

不良事件报告

研究者负责监测参与本研究的受试者的安全，并且负责提醒主办者看似不寻常的任何事件，即使该事件可能被视为对受试者出乎意料的益处。

SAE报告

医疗监查员将负责关于本研究的总体药物警戒过程。在研究期间发生的所有SAE，无论是否与实验治疗有关，都必须在知道发生的24小时内在SAE表格上向医疗监查员(参见下文)报告(这指满足上述严重标准中的一个或多个的任何AE)。SAE报告期在随访期结束时或受试者开始替代疗法时结束。

研究者必须在其知道SAE的24小时内在eCRF (即AE表)中报告所有SAE，无论SAE是否被认为药物相关的。

如果出于任何原因不能在EDC中报告SAE，则必须完成纸质SAE报告表并在24小时内提交给JSS PV。报告应该通过将完成的SAE表格发送到下述电子邮件地址来完成(在发送电子邮件不可能的情况下，传真也可以作为第二选项来完成)。

医疗监查员将在知道新SAE的1个工作日内告知主办者，并且收到报告后立即评估所有SAE。对于收到的每个SAE，医疗监查员将确定是否已满足向有关监管机构速报的标准。医疗监查员将遵循当地法律和法规，管理有关安全信息向相关监管机构的速报。

5.4 妊娠报告

鉴于排除孕妇或哺乳期女性的研究纳入/排除标准、以及通过其所有受试者都将住院治疗的研究性质，女性受试者不太可能在研究期间变得怀孕。无论如何，在女性受试者或男性受试者的女性伴侣在研究期间或研究药物施用后11周内变得怀孕的不太可能的情形下，研究者必须在确认妊娠后完成研究特定的妊娠表格，并且在确认妊娠的24小时内将其发送给下述电子邮件地址的医疗监查员(在发送电子邮件不可能的情况下，传真也可以作为第二选项来完成)。

医学监查员将及时向主办者报告所有妊娠病例。应进行治疗后随访以确保受试者的安全。妊娠本身不是AE或SAE；然而，母体/胎儿并发症或异常将适当地记录为AE或SAE。研究者将跟踪妊娠直至完成或妊娠终止，并且在活产后代的情况下，直至该婴儿1月龄时。研究者将结果告知医疗监查员和主办者作为对初始妊娠表格的跟进。所有妊娠都应该在适当时向伦理委员会报告。

6. 统计考虑

样本量确定和样本量计算：

主要研究

关于瑞德西韦在COVID-19管理中的功效评估公布的最近结果已显示了，无需氧而存活且出院回家或没有呼吸衰竭的患者比例为大约63%。对于主要研究，我们可以假定处于SOC治疗的60%患者将达到研究的主要终点。

阶段1 (II期研究)

关于II期研究的样本量计算基于下述假定：

1:1随机化

效应量：比值比 = 2.00有利于NI-0101在实现主要终点方面的功效，具有0.025的单侧α (等价于0.05的双侧α)和80%功效(β = 0.20)。

在50%的患者达到28天随访时的一项期中分析。

关于α和β的O-Brien Fleming α消耗函数。

基于α - 消耗函数的功效边界。

非约束性无效边界

基于上述要求，每组将需要总共158个可评估患者，总共316个可评估患者。考虑到20%的流失，总共396个患者入选研究。

当50%的患者达到28天随访时间点时，对于II期研究进行一项设盲的比较期中分析。期中分析将O-Brien Fleming α消耗函数与每次分析时的额定、增量和累积α结合起来，如下表中所述的：

分析	1	2
			百分比	50	100
样本量(可评估的)	158	316
			额定α	0.002	0.024
增量α	0.002	0.023
			累积α	0.002	0.025

阶段2 (III期研究)

关于II期研究的样本量计算基于下述假定：

1:1随机化

效应量：比值比 = 1.50有利于NI-0101在实现主要终点方面的功效，具有0.025的单侧α (等价于0.05的双侧α)和80%功效(β = 0.20)。

在50%的患者达到28天随访时的一项期中分析。

关于α和β的O-Brien Fleming α消耗函数。

基于α - 消耗函数的功效边界。

非约束性无效边界。

基于上述要求，对于阶段2 (III期研究)将需要总共884个可评估患者。其中，442个将用NI-0101 + SOC进行治疗，而442个将用安慰剂 + SOC进行治疗。考虑到20%的流失，总共1,106个患者入选这个阶段。

已计划在阶段2 (III期研究)期间的一项设盲的比较期中分析。下表描述了基于 O-Brien Fleming α消耗函数，在每次分析时的额定、增量和累积α

分析	1	2
			百分比	50	100
样本量(可评估的)	442	884
			额定α	0.002	0.024
增量α	0.002	0.023
			累积α	0.002	0.025

子(探索性)研究：

下述假设已用于确定用于子(探索性)研究的样本量要求：

主要功效结果测量 = 在60天的累积死亡率。

关于SOC组的估计累积死亡率 = 40%。

最低限度的临床上重要的死亡率的相对减少 = 25% – 50%。

等价于死亡率的10% - 20%绝对减少。

为了该子研究的目的，将使用50%的相对减少(20%的绝对)减少作为估计的效应量。

SOC+NI-0101中的估计累积死亡率 = 20%。

关于SOC/NI-0101 + SOC的风险比率 = 2.2892。

显著性(单尾) = 0.10 (α = 0.10)；鉴于该子研究的探索性质，已使用这一显著性水平。

功效 = 80% (β = 0.20)。

具有Obrien-Fleming α消耗函数和非约束性无效边界的两项期中分析和一项最终分析(总共 = 3次观察)。

总共三个分析。

事件总数(死亡) = 30。

估计的患者数目 = 100。

基于上述要求，当已观察到总共30个事件(死亡)时，用于子研究的入选将完成。基于目前可用的估计量，预料大约100个患者入选子(探索性)研究。

6.2 分析群体

对意向治疗(ITT)群体进行主要功效分析。还对符合方案(PP)群体进行用于主要终点的支持性分析。安全性在安全性(SAF)群体中进行评估。

意向治疗群体(ITT)：该群体将包括随机化的所有入选受试者。所有受试者将根据他们随机分配到其的治疗组进行分析。

符合方案群体(PP)：PP群体将包括所有入选的受试者，其进行随机化并具有研究产品的至少一个剂量、没有显著的方案偏差并且提供用于主要终点的可评估数据。所有受试者将根据他们接受的治疗组进行分析。

安全群体(SAF)：该群体定义为接受研究产品的至少一个剂量的所有受试者。所有受试者将根据他们接受的治疗组进行分析。

6.3 统计分析

6.3.1一般考虑

将报告描述性统计，包括受试者数目、平均值、中值、标准差、最小值、最大值和连续参数的平均值的95% CI，以及关于分类参数的频率分布(数目和比例)。

为了验证两个治疗组的可比性，关键基线患者和疾病特性将用关于连续变量的独立样本t检验(或者如果违反正态性假设，则曼怀二氏检验)以及关于分类变量的卡方检验进行比较。对于其临床上重要的差异定义为双重因素或统计学上值得注意的差异定义为P< 0.15的基线特性将被视为潜在的混杂因素，并且将包括在稍后描述的敏感性分析中。

对于缺失数据不存在插补。所有分析都对观察到的数据进行。

关于功效和安全性变量定义、分析策略、统计理由和用于处理缺失值的技术的所有细节将在分开的统计分析计划(SAP)中进行详述，所述统计分析计划将在第一次计划的期中分析前完成。除非SAP中另有规定，否则所有统计检验都是双侧的，并且以0.05的显著性水平执行。分析使用SAS®版本9或更高版本来执行。

6.3.2. 分析以解决研究目标：

6.3.2.1. 主要功效终点：

主要功效终点的组间差异用简单的逻辑回归进行评价，其中治疗组是主要自变量并且达到主要功效终点将是二元因变量。由逻辑回归估计的比值比用作达到主要功效终点的相对风险(OR)的估计量。OR的点估计量周围的95%置信区间用于评价估计量的精确度，而统计显著性用Wald卡方进行评价，并且拟合优度用Hosmer Lemeshow检验进行评价。

将进行下述敏感性分析：

具有场所、抗病毒药物的使用和基线COVID-19疾病严重程度作为协变量输入的多变量逻辑回归分析。更具体而言，在此分析中，研究场所将作为分类变量输入，抗病毒药物的使用作为二元变量输入，基线COVID-19严重程度作为顺序变量输入，其中4级用作参考。入选少于10个患者的场所在一个类别中聚集。将进行第二次验证性分析，其中逻辑回归模型还包括场所x治疗组和基线COVID-19严重程度x治疗组相互作用项。

按基线COVID-19疾病严重程度的分层。

具有如上所述鉴定的所有潜在混杂因素作为协变量输入的多变量逻辑回归模型。

其中治疗组的所有相互作用项都具有潜在的混杂因素的多变量逻辑回归。

场所效应将通过下述进行评价：

按场所的治疗效应的描述性统计。

将场所作为随机效应包括在用于主要功效分析的逻辑回归模型中。

将场所×治疗组相互作用项包括在用于主要功效分析的逻辑回归模型中。

敏感性分析将包括按基线疾病严重程度的分层和多变量逻辑回归分析，其中患者人口统计学、有关并存病和合并用药使用作为协变量输入。

6.3.2.2. 次要功效终点：

下表概括了用于就研究次要终点评价治疗组间差异的分析方法：

6.3.2.3. 安全性分析

TEAE和严重的TEAE将根据MedDRA分类呈现并进行制表。AE的描述将包括严重性、严重程度、与研究产品的关系和结果。

报告的TEAE和严重的TEAE将按报告事件的受试者的数目和比例以及每个SOC内的系统器官类别和优先项进行概括。除按严重性的总体TEAE和严重TEAE概括之外，还产生严重程度以及与研究产品的关系。对于按严重程度的AE概括，通过对于每次分析使用在每个类别内具有最高强度的AE，每个受试者在SOC或每个SOC内的PT内仅计数一次。对于按与研究产品的关系的AE概括，通过使用在每个类别内具有最大报告关系的AE，每个受试者在SOC或每个SOC内的PT内仅计数一次。

在研究期间记下的关于TEAE和严重TEAE的所有信息都按受试者、逐字详细说明、SOC、PT、起始日期、终止日期、严重性、严重程度、结果以及与研究产品的关系进行列表。AE发作也将相对于研究药物施用日(以天数计)进行显示。

来自生命体征、ECG、体格检查和临床实验室测试的结果使用描述性统计按治疗和就诊进行制表。将描述性地呈现在每次就诊的值以及距离基线的变化。

并不对安全性变量完成推断统计。

公布的瑞德西韦研究结果显示了，SOC组中的26%患者经历了严重不良事件，且13%经历了3-4级严重不良事件。假定在当前研究中，用SOC治疗的患者中的25%将经历严重不良事件。总体研究将具有80%的功效来检测2.00的比值比。

指示了关于NI-0101组的严重不良事件的增加风险。独立的DMC将审查两个治疗组中的治疗期间出现的严重不良事件的发生率，并且将确定是否观察到严重不良事件的风险中的临床上重要的增加(比值比> 1.50)。

其它分析

合并用药将用世界卫生组织-药物全球词典(World Health Organization-DrugGlobal Dictionary) (WHO Drug Global)进行编码，并且按使用每种用药的受试者数目和比例进行概括。

另外，将提供停止研究的受试者连同相关原因的列表。

对于所有受试者，将呈现基线特性的描述性概括，包括人口统计数据和医疗/手术史、以及受试者处置。

方案偏差将按治疗和类别进行概括。

亚组分析

通过以下对于主要终点进行亚组分析：

基线COVID-19严重程度水平；

年龄组；

性别；

居住地(家庭或长期护理设施)；

疑似传播途径(旅行、与到高风险地区旅行的个体接触、社区、未知)；

有关共病状况的存在；

先前的疫苗接种史；

先前的流感疾病。

计划的期中分析

在II期研究期间，当来自50%患者的数据可用于主要终点评价时，将进行期中分析。期中分析就治疗分配而言是设盲的。更具体而言，治疗组被标识为A组或B组。期中分析的结果将报告给独立的数据监查委员会(DMC)。期中分析的结果将用于确定研究是否应该出于无效或安全而终止。

下表描述了期中分析参数以及由于无效而提前终止的要求。

1功效边界仅呈现用于参考。研究并不由于功效而终止。

在III期研究期间，将进行一项设盲的比较期中分析，其结果将用于确定研究是否应该继续或是否有正当理由出于无效而提前终止。下表描述了关于III期期中分析的参数和无效终止条件

下表描述了关于子(探索性)研究的期中分析参数

1功效边界仅呈现用于参考。研究并不由于功效而终止。

实施例3 - 使用NI-0801抗IP10抗体用于治疗急性呼吸窘迫综合征 - 2期研究设计

2期研究 - 多中心、双臂(NI-0801+SOC相对于SOC)、双盲。具有在期中分析时宣布功效的能力的序贯适应性设计。该研究的阶段1将评价是否存在关于多重推定的主要功效结果的功效信号(参见下文的主要终点)。28天研究期。

给药 - 15mg/kg的单次IV输注(如果患者没有改善，则可以包括关于多重后续剂量的选项)。

主要终点 - 定义为入住重症监护病房(ICU)、使用机械通气或死亡的患者比例。表14显示了与ARDS有关的最近流行病学数据。

表14. 与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)有关的流行病学数据

来源	N	ARDS	ICU	死亡	通气(有创)	复合物
							Huang, Lancet, 2020	41	29%	32%	15%	10%	N/A
Chen, Lancet, 2020	99	17%	23%	11%	4%	N/A
							Guan, NEJM, 2020	173	16%	19%	8%	15%	25%
Wang, JAMA, 2020	138	20%	26%	4%	11%	N/A

从随机化到两点改善(距离随机化时的状态)的时间在七类顺序量表上或活着出院进行测量，以先到者为准(七类顺序量表由下述类别组成：1，未住院治疗，恢复正常活动；2，未住院治疗，但未能恢复正常活动；3，住院治疗，不需要补充氧；4，住院治疗，需要补充氧；5，住院治疗，需要经鼻高流量氧疗、无创机械通气或两者；6，住院治疗，需要ECMO、有创机械通气或两者；以及7，死亡)。参见下文功效(来自Wang等人NEJM，2020)。

从治疗起始到维持至少72小时的发热、呼吸频率和SPO2正常化以及咳嗽缓解(其中在入选时存在有关异常症状)的持续时间。

次要终点 - 1)入住ICU的患者比例；2)需要通气的患者比例；3)进展至ARDS的患者比例；4)死亡的患者比例；5)住院治疗的持续时间；6)按天计算的到不依赖于无创机械通气的时间；7)按天计的到不依赖于氧疗的时间；8)SOFA (序贯器官衰竭评价)的变化：它评估6个变量，每个变量代表一个器官系统(关于呼吸系统、心血管系统、肝脏系统、凝血系统、肾脏系统和神经系统各一个)，并且评分为0 (正常)到4 (高度功能障碍/衰竭)。因此，最高评分可能范围为0至24；9)放射学应答：胸部CT扫描或胸部XR

纳入标准- 1)任何性别；2)无年龄限制；3)参与研究的知情同意书；4) Sars-CoV2感染的病毒学诊断(PCR)；5)由于肺炎的临床/仪器诊断的住院治疗；6)环境空气中的静息血氧饱和度≤93%或200<PaO2/FiO2≤300。

排除标准 - 1)对NI-0101或其赋形剂的已知超敏反应；2)患者已经进展至ARDS；3)正在用免疫调节剂或抗排斥药物治疗的患者；4)已知其它活动性感染，或者禁忌NI-0101且根据临床医生的判断无法治疗或解决的其它临床状况；5)受试者在72小时内转移至非研究医院的可能性；6)在筛选时如通过尿妊娠测试确定的，处于哺乳期或妊娠的具有生殖潜力的女性。

其它实施方案

虽然本发明已与其详细描述结合进行描述，但前述说明书预期说明而不是限制本发明的范围，其由所附权利要求的范围限定。其它方面、优点和修改在下述权利要求的范围内。

序列表

<110> Edesa Biotech Research Inc.

<120> 用于治疗急性呼吸窘迫综合征的组合物和方法

<130> EDBI-001/001WO 340538-2004

<150> US 63/012,783

<151> 2020-04-20

<150> US 63/012,786

<151> 2020-04-20

<150> US 63/081,662

<151> 2020-09-22

<160> 351

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区1

<400> 1

Gly Gly Tyr Ser Trp His

1 5

<210> 2

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区2

<400> 2

Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu Lys Thr

1 5 10 15

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区3

<400> 3

Lys Asp Pro Ser Asp Ala Phe Pro Tyr

1 5

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变轻链互补决定区1

<400> 4

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His Leu His

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变轻链互补决定区2

<400> 5

Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变轻链互补决定区3

<400> 6

Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 7

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链

<400> 7

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Pro Ser Asp Ala Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变轻链

<400> 8

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 467

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4重链

<400> 9

Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Cys Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys

20 25 30

Pro Ser Asp Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile

35 40 45

Thr Gly Gly Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly

50 55 60

Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn

65 70 75 80

Pro Ser Leu Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn

85 90 95

Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Lys Asp Pro Ser Asp Ala Phe Pro Tyr Trp Gly

115 120 125

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

130 135 140

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

145 150 155 160

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

165 170 175

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

180 185 190

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

195 200 205

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

210 215 220

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys

225 230 235 240

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

245 250 255

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

260 265 270

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

275 280 285

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

290 295 300

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

305 310 315 320

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

325 330 335

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Ser Lys Ala Phe Pro Ala Pro Ile

340 345 350

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

355 360 365

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

370 375 380

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

385 390 395 400

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

405 410 415

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

420 425 430

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

435 440 445

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

450 455 460

Pro Gly Lys

465

<210> 10

<211> 233

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4轻链

<400> 10

Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val

20 25 30

Thr Pro Lys Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile

35 40 45

Ser Asp His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys

50 55 60

Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg

65 70 75 80

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser

85 90 95

Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser

100 105 110

Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr

115 120 125

Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu

130 135 140

Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly

165 170 175

Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr

180 185 190

Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His

195 200 205

Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val

210 215 220

Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230

<210> 11

<211> 839

<212> PRT

<213> 智人

<400> 11

Met Met Ser Ala Ser Arg Leu Ala Gly Thr Leu Ile Pro Ala Met Ala

1 5 10 15

Phe Leu Ser Cys Val Arg Pro Glu Ser Trp Glu Pro Cys Val Glu Val

20 25 30

Val Pro Asn Ile Thr Tyr Gln Cys Met Glu Leu Asn Phe Tyr Lys Ile

35 40 45

Pro Asp Asn Leu Pro Phe Ser Thr Lys Asn Leu Asp Leu Ser Phe Asn

50 55 60

Pro Leu Arg His Leu Gly Ser Tyr Ser Phe Phe Ser Phe Pro Glu Leu

65 70 75 80

Gln Val Leu Asp Leu Ser Arg Cys Glu Ile Gln Thr Ile Glu Asp Gly

85 90 95

Ala Tyr Gln Ser Leu Ser His Leu Ser Thr Leu Ile Leu Thr Gly Asn

100 105 110

Pro Ile Gln Ser Leu Ala Leu Gly Ala Phe Ser Gly Leu Ser Ser Leu

115 120 125

Gln Lys Leu Val Ala Val Glu Thr Asn Leu Ala Ser Leu Glu Asn Phe

130 135 140

Pro Ile Gly His Leu Lys Thr Leu Lys Glu Leu Asn Val Ala His Asn

145 150 155 160

Leu Ile Gln Ser Phe Lys Leu Pro Glu Tyr Phe Ser Asn Leu Thr Asn

165 170 175

Leu Glu His Leu Asp Leu Ser Ser Asn Lys Ile Gln Ser Ile Tyr Cys

180 185 190

Thr Asp Leu Arg Val Leu His Gln Met Pro Leu Leu Asn Leu Ser Leu

195 200 205

Asp Leu Ser Leu Asn Pro Met Asn Phe Ile Gln Pro Gly Ala Phe Lys

210 215 220

Glu Ile Arg Leu His Lys Leu Thr Leu Arg Asn Asn Phe Asp Ser Leu

225 230 235 240

Asn Val Met Lys Thr Cys Ile Gln Gly Leu Ala Gly Leu Glu Val His

245 250 255

Arg Leu Val Leu Gly Glu Phe Arg Asn Glu Gly Asn Leu Glu Lys Phe

260 265 270

Asp Lys Ser Ala Leu Glu Gly Leu Cys Asn Leu Thr Ile Glu Glu Phe

275 280 285

Arg Leu Ala Tyr Leu Asp Tyr Tyr Leu Asp Asp Ile Ile Asp Leu Phe

290 295 300

Asn Cys Leu Thr Asn Val Ser Ser Phe Ser Leu Val Ser Val Thr Ile

305 310 315 320

Glu Arg Val Lys Asp Phe Ser Tyr Asn Phe Gly Trp Gln His Leu Glu

325 330 335

Leu Val Asn Cys Lys Phe Gly Gln Phe Pro Thr Leu Lys Leu Lys Ser

340 345 350

Leu Lys Arg Leu Thr Phe Thr Ser Asn Lys Gly Gly Asn Ala Phe Ser

355 360 365

Glu Val Asp Leu Pro Ser Leu Glu Phe Leu Asp Leu Ser Arg Asn Gly

370 375 380

Leu Ser Phe Lys Gly Cys Cys Ser Gln Ser Asp Phe Gly Thr Thr Ser

385 390 395 400

Leu Lys Tyr Leu Asp Leu Ser Phe Asn Gly Val Ile Thr Met Ser Ser

405 410 415

Asn Phe Leu Gly Leu Glu Gln Leu Glu His Leu Asp Phe Gln His Ser

420 425 430

Asn Leu Lys Gln Met Ser Glu Phe Ser Val Phe Leu Ser Leu Arg Asn

435 440 445

Leu Ile Tyr Leu Asp Ile Ser His Thr His Thr Arg Val Ala Phe Asn

450 455 460

Gly Ile Phe Asn Gly Leu Ser Ser Leu Glu Val Leu Lys Met Ala Gly

465 470 475 480

Asn Ser Phe Gln Glu Asn Phe Leu Pro Asp Ile Phe Thr Glu Leu Arg

485 490 495

Asn Leu Thr Phe Leu Asp Leu Ser Gln Cys Gln Leu Glu Gln Leu Ser

500 505 510

Pro Thr Ala Phe Asn Ser Leu Ser Ser Leu Gln Val Leu Asn Met Ser

515 520 525

His Asn Asn Phe Phe Ser Leu Asp Thr Phe Pro Tyr Lys Cys Leu Asn

530 535 540

Ser Leu Gln Val Leu Asp Tyr Ser Leu Asn His Ile Met Thr Ser Lys

545 550 555 560

Lys Gln Glu Leu Gln His Phe Pro Ser Ser Leu Ala Phe Leu Asn Leu

565 570 575

Thr Gln Asn Asp Phe Ala Cys Thr Cys Glu His Gln Ser Phe Leu Gln

580 585 590

Trp Ile Lys Asp Gln Arg Gln Leu Leu Val Glu Val Glu Arg Met Glu

595 600 605

Cys Ala Thr Pro Ser Asp Lys Gln Gly Met Pro Val Leu Ser Leu Asn

610 615 620

Ile Thr Cys Gln Met Asn Lys Thr Ile Ile Gly Val Ser Val Leu Ser

625 630 635 640

Val Leu Val Val Ser Val Val Ala Val Leu Val Tyr Lys Phe Tyr Phe

645 650 655

His Leu Met Leu Leu Ala Gly Cys Ile Lys Tyr Gly Arg Gly Glu Asn

660 665 670

Ile Tyr Asp Ala Phe Val Ile Tyr Ser Ser Gln Asp Glu Asp Trp Val

675 680 685

Arg Asn Glu Leu Val Lys Asn Leu Glu Glu Gly Val Pro Pro Phe Gln

690 695 700

Leu Cys Leu His Tyr Arg Asp Phe Ile Pro Gly Val Ala Ile Ala Ala

705 710 715 720

Asn Ile Ile His Glu Gly Phe His Lys Ser Arg Lys Val Ile Val Val

725 730 735

Val Ser Gln His Phe Ile Gln Ser Arg Trp Cys Ile Phe Glu Tyr Glu

740 745 750

Ile Ala Gln Thr Trp Gln Phe Leu Ser Ser Arg Ala Gly Ile Ile Phe

755 760 765

Ile Val Leu Gln Lys Val Glu Lys Thr Leu Leu Arg Gln Gln Val Glu

770 775 780

Leu Tyr Arg Leu Leu Ser Arg Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Glu Asp Ser

785 790 795 800

Val Leu Gly Arg His Ile Phe Trp Arg Arg Leu Arg Lys Ala Leu Leu

805 810 815

Asp Gly Lys Ser Trp Asn Pro Glu Gly Thr Val Gly Thr Gly Cys Asn

820 825 830

Trp Gln Glu Ala Thr Ser Ile

835

<210> 12

<211> 1404

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NI-0101重链

<400> 12

atgggatgga gctggatctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt acattgccag 60

gtgcagcttc aggagtccgg cccaggactg gtgaagcctt cggacaccct gtccctcacc 120

tgcgctgtct ctggttactc catcaccggt ggttatagct ggcactggat acggcagccc 180

ccagggaagg gactggagtg gatggggtat atccactaca gtggttacac tgacttcaac 240

ccctccctca agactcgaat caccatatca cgtgacacgt ccaagaacca gttctccctg 300

aagctgagct ctgtgaccgc tgtggacact gcagtgtatt actgtgcgag aaaagatccg 360

tccgacgcct ttccttactg gggccaaggg actctggtca ctgtctcttc cgcctccacc 420

aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 480

gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 540

ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 600

tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 660

aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt 720

gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 780

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 840

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 900

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 960

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaaa 1020

tgcaaggtct ccagtaaagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1080

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1140

aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1200

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1260

gacggctcct tcttcctcta tagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1320

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1380

ctctccctgt ctccgggtaa atag 1404

<210> 13

<211> 702

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> NI-0101轻链

<400> 13

atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggtgt ccactccgaa 60

attgtgttga cgcagtctcc agactttcag tctgtgactc caaaggaaaa agtcaccatc 120

acctgcaggg ccagtcagag tatcagcgac cacttacact ggtaccaaca gaaacctgat 180

cagtctccca agctcctcat caaatatgct tcccatgcca tttctggggt cccatcgagg 240

ttcagtggca gtgggtctgg gacagacttc actctcacca tcaatagcct agaggctgaa 300

gatgctgcaa cgtattactg tcagcagggt cacagttttc cgctcacttt cggcggaggg 360

accaaggtgg agatcaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 420

gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480

agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540

agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 600

agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 660

agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt ag 702

<210> 14

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1 Hu VH形式4-28

<220>

<221> misc_feature

<222> (30)..(30)

<223> Xaa可以是Thr或Ser

<220>

<221> misc_feature

<222> (49)..(49)

<223> Xaa可以是Ile或Met

<220>

<221> misc_feature

<222> (68)..(68)

<223> Xaa可以是Val或Ile

<220>

<221> misc_feature

<222> (70)..(70)

<223> Xaa可以是Met或Ile

<400> 14

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Xaa Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Xaa Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Xaa Thr Xaa Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Pro Ser Asp Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 15

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1 Hu VH形式3-66

<220>

<221> misc_feature

<222> (24)..(24)

<223> Xaa可以是Ala或Val

<220>

<221> misc_feature

<222> (49)..(49)

<223> Xaa可以是Val或Met

<220>

<221> misc_feature

<222> (79)..(79)

<223> Xaa可以是Leu或Phe

<400> 15

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Xaa Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Xaa Ser Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Xaa Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Pro Ser Asp Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 16

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1 Hu VL形式L6

<220>

<221> misc_feature

<222> (49)..(49)

<223> Xaa可以是Lys或Tyr

<400> 16

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Xaa Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 17

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1 Hu VL形式L6 CDR3

<400> 17

Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 18

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1 Hu VL形式A26

<400> 18

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 19

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 18H10 Hu VH形式1-69

<220>

<221> misc_feature

<222> (48)..(48)

<223> Xaa可以是Met或Ile

<220>

<221> misc_feature

<222> (74)..(74)

<223> Xaa可以是Lys或Thr

<220>

<221> misc_feature

<222> (81)..(81)

<223> Xaa可以是Met或Leu

<400> 19

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Ser

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Xaa

35 40 45

Gly Trp Thr Asp Pro Glu Asn Val Asn Ser Ile Tyr Asp Pro Arg Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Xaa Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Xaa Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Tyr Asn Gly Val Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 20

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 18H10 Hu VH形式1-69 CDR1

<400> 20

Asp Ser Tyr Ile His

1 5

<210> 21

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 18H10 Hu VH形式1-69 CDR2

<400> 21

Trp Thr Asp Pro Glu Asn Val Asn Ser Ile Tyr Asp Pro Arg Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 22

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 18H10 Hu VH形式1-69 CDR3

<400> 22

Gly Tyr Asn Gly Val Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 23

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 18H10 Hu VL形式L6

<220>

<221> misc_feature

<222> (70)..(70)

<223> Xaa可以是Phe或Tyr

<400> 23

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ile Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Arg Thr Tyr Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Trp Ser Ser Phe Pro Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 24

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 18H10 Hu VL形式L6 CDR1

<400> 24

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ile Tyr Met His

1 5 10

<210> 25

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 18H10 Hu VL形式L6 CDR2

<400> 25

Arg Thr Tyr Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 26

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 18H10 Hu VL形式L6 CDR3

<400> 26

His Gln Trp Ser Ser Phe Pro Tyr Thr

1 5

<210> 27

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7E3 Hu VH形式2-70

<220>

<221> misc_feature

<222> (30)..(30)

<223> Xaa可以是Ser或Thr

<220>

<221> misc_feature

<222> (71)..(71)

<223> Xaa可以是Ile或Phe

<220>

<221> misc_feature

<222> (98)..(98)

<223> Xaa可以是Ile或Ala

<400> 27

Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Xaa Thr Tyr

20 25 30

Asn Ile Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asn Asp Asn Ile Tyr Tyr Asn Thr Val

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Xaa Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val

65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Xaa Arg Met Ala Glu Gly Arg Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 28

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7E3 Hu VH形式2-70 CDR1

<400> 28

Thr Tyr Asn Ile Gly Val Gly

1 5

<210> 29

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7E3 Hu VH形式2-70 CDR2

<400> 29

His Ile Trp Trp Asn Asp Asn Ile Tyr Tyr Asn Thr Val Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 30

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7E3 Hu VH形式2-70 CDR3

<400> 30

Met Ala Glu Gly Arg Tyr Asp Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 31

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7E3 Hu VH形式3-66

<220>

<221> misc_feature

<222> (24)..(24)

<223> Xaa可以是Phe或Ala

<220>

<221> misc_feature

<222> (50)..(50)

<223> Xaa可以是Val或Leu

<220>

<221> misc_feature

<222> (71)..(71)

<223> Xaa可以是Ile或Phe

<220>

<221> misc_feature

<222> (73)..(73)

<223> Xaa可以是Lys或Arg

<220>

<221> misc_feature

<222> (80)..(80)

<223> Xaa可以是Leu或Val

<220>

<221> misc_feature

<222> (98)..(98)

<223> Xaa可以是Ile或Ala

<400> 31

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Xaa Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr

20 25 30

Asn Ile Gly Val Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Xaa Ser His Ile Trp Trp Asn Asp Asn Ile Tyr Tyr Asn Thr Val

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Xaa Ser Xaa Asp Asn Ser Lys Asn Thr Xaa

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Xaa Arg Met Ala Glu Gly Arg Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 32

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7E3 Hu VL形式L19

<220>

<221> misc_feature

<222> (71)..(71)

<223> Xaa可以是Phe或Tyr

<220>

<221> misc_feature

<222> (87)..(87)

<223> Xaa可以是Tyr或Phe

<400> 32

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Xaa Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Xaa Cys Gln Gln Gly Asn Thr Phe Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 33

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7E3 Hu VL形式L19 CDR1

<400> 33

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 34

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7E3 Hu VL形式L19 CDR2

<400> 34

Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser

1 5

<210> 35

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 7E3 Hu VL形式L19 CDR3

<400> 35

Gln Gln Gly Asn Thr Phe Pro Trp Thr

1 5

<210> 36

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1人源化VH突变体1

<400> 36

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Pro Ser Asp Ala Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 37

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1人源化VH突变体1

<400> 37

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

ccgtccgacg cctttcctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 38

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1人源化VH突变体2

<400> 38

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Pro Ser Glu Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 39

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1人源化VH突变体2

<400> 39

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

ccgtccgagg gatttcctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 40

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1人源化VL突变体1

<400> 40

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Ser His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 41

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1人源化VL突变体1

<400> 41

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagaat agtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 42

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1人源化VL突变体2

<400> 42

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 43

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1人源化VL突变体2

<400> 43

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 44

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1人源化VL突变体3

<400> 44

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Ser Ser Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 45

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1人源化VL突变体3

<400> 45

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagaat agtagtagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 46

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1人源化VL突变体4

<400> 46

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 47

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 15C1人源化VL突变体4

<400> 47

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag agtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 48

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

1

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa可以是Phe或Tyr

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可以是Arg、Gly或Trp

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可以是Tyr、Phe或Gly

<400> 48

Gly Xaa Pro Ile Xaa Xaa Gly Tyr Ser

1 5

<210> 49

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

1

<400> 49

Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly Tyr Ser

1 5

<210> 50

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

1

<400> 50

Gly Phe Pro Ile Arg Tyr Gly Tyr Ser

1 5

<210> 51

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

1

<400> 51

Gly Tyr Pro Ile Arg Phe Gly Tyr Ser

1 5

<210> 52

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

1

<400> 52

Gly Tyr Pro Ile Arg His Gly Tyr Ser

1 5

<210> 53

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

1

<400> 53

Gly Phe Pro Ile Gly Gln Gly Tyr Ser

1 5

<210> 54

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

1

<400> 54

Gly Tyr Pro Ile Trp Gly Gly Tyr Ser

1 5

<210> 55

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

1

<400> 55

Gly Tyr Pro Ile Gly Gly Gly Tyr Ser

1 5

<210> 56

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

2

<400> 56

Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr

1 5

<210> 57

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

3

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> Xaa可以是Asn、Gln、Asp或Glu

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(9)

<223> Xaa可以是任何疏水性氨基酸

<400> 57

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Xaa Xaa Xaa Pro Tyr

1 5 10

<210> 58

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

3

<400> 58

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr

1 5 10

<210> 59

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

3

<400> 59

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Arg Leu Leu Pro Tyr

1 5 10

<210> 60

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

3

<400> 60

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Lys Trp Leu Pro Tyr

1 5 10

<210> 61

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

3

<400> 61

Ala Arg Lys Asp Ser Gly His Leu Met Pro Tyr

1 5 10

<210> 62

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

3

<400> 62

Ala Arg Lys Asp Ser Gly His Asn Tyr Pro Tyr

1 5 10

<210> 63

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

3

<400> 63

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Lys Asn Phe Pro Tyr

1 5 10

<210> 64

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

3

<400> 64

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Gln Leu Phe Pro Tyr

1 5 10

<210> 65

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

3

<400> 65

Ala Arg Lys Asp Ser Gly His Asn Leu Pro Tyr

1 5 10

<210> 66

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

3

<400> 66

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asp Tyr Phe Pro Tyr

1 5 10

<210> 67

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变重链互补决定区

3

<400> 67

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Arg Tyr Trp Pro Tyr

1 5 10

<210> 68

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变轻链互补决定区

1

<400> 68

Gln Ser Ile Ser Asp His

1 5

<210> 69

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变轻链互补决定区

2

<400> 69

Tyr Ala Ser

1

<210> 70

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变轻链互补决定区

3

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa可以是Tyr或Asn

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> Xaa可以是Asp或Glu

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa可以是Phe或Tyr

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa可以是任何疏水性氨基酸

<400> 70

Gln Gln Gly Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr

1 5

<210> 71

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变轻链互补决定区

3

<400> 71

Gln Gln Gly Asn Asp Phe Pro Val Thr

1 5

<210> 72

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变轻链互补决定区

3

<400> 72

Gln Gln Gly Tyr Asp Glu Pro Phe Thr

1 5

<210> 73

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变轻链互补决定区

3

<400> 73

Gln Gln Gly Tyr Asp Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 74

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变轻链互补决定区

3

<400> 74

Gln Gln Gly Tyr Asp Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 75

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TLR4可变轻链互补决定区

3

<400> 75

Gln Gln Gly Tyr Glu Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 76

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 改变的人IgG1 γ重链恒定区

<400> 76

Ser Lys Ala Phe

1

<210> 77

<211> 826

<212> PRT

<213> 猕猴属物种

<400> 77

Met Thr Ser Ala Leu Arg Leu Ala Gly Thr Leu Ile Pro Ala Met Ala

1 5 10 15

Phe Leu Ser Cys Val Arg Pro Glu Ser Trp Glu Pro Cys Val Glu Val

20 25 30

Val Pro Asn Ile Thr Tyr Gln Cys Met Glu Leu Lys Phe Tyr Lys Ile

35 40 45

Pro Asp Asn Ile Pro Phe Ser Thr Lys Asn Leu Asp Leu Ser Phe Asn

50 55 60

Pro Leu Arg His Leu Gly Ser Tyr Ser Phe Leu Arg Phe Pro Glu Leu

65 70 75 80

Gln Val Leu Asp Leu Ser Arg Cys Glu Ile Gln Thr Ile Glu Asp Gly

85 90 95

Ala Tyr Gln Ser Leu Ser His Leu Ser Thr Leu Ile Leu Thr Gly Asn

100 105 110

Pro Ile Gln Ser Leu Ala Leu Gly Ala Phe Ser Gly Leu Ser Ser Leu

115 120 125

Gln Lys Leu Val Ala Val Glu Thr Asn Leu Ala Ser Leu Glu Asn Phe

130 135 140

Pro Ile Gly His Leu Lys Thr Leu Lys Glu Leu Asn Val Ala His Asn

145 150 155 160

Leu Ile Gln Ser Phe Lys Leu Pro Glu Tyr Phe Ser Asn Leu Thr Asn

165 170 175

Leu Glu His Leu Asp Leu Ser Ser Asn Lys Ile Gln Asn Ile Tyr Cys

180 185 190

Lys Asp Leu Gln Val Leu His Gln Met Pro Leu Ser Asn Leu Ser Leu

195 200 205

Asp Leu Ser Leu Asn Pro Ile Asn Phe Ile Gln Pro Gly Ala Phe Lys

210 215 220

Glu Ile Arg Leu His Lys Leu Thr Leu Arg Ser Asn Phe Asp Asp Leu

225 230 235 240

Asn Val Met Lys Thr Cys Ile Gln Gly Leu Ala Gly Leu Glu Val His

245 250 255

Arg Leu Val Leu Gly Glu Phe Arg Asn Glu Arg Asn Leu Glu Glu Phe

260 265 270

Asp Lys Ser Ser Leu Glu Gly Leu Cys Asn Leu Thr Ile Glu Glu Phe

275 280 285

Arg Leu Thr Tyr Leu Asp Cys Tyr Leu Asp Asn Ile Ile Asp Leu Phe

290 295 300

Asn Cys Leu Ala Asn Val Ser Ser Phe Ser Leu Val Ser Val Asn Ile

305 310 315 320

Lys Arg Val Glu Asp Phe Ser Tyr Asn Phe Arg Trp Gln His Leu Glu

325 330 335

Leu Val Asn Cys Lys Phe Glu Gln Phe Pro Thr Leu Glu Leu Lys Ser

340 345 350

Leu Lys Arg Leu Thr Phe Thr Ala Asn Lys Gly Gly Asn Ala Phe Ser

355 360 365

Glu Val Asp Leu Pro Ser Leu Glu Phe Leu Asp Leu Ser Arg Asn Gly

370 375 380

Leu Ser Phe Lys Gly Cys Cys Ser Gln Ser Asp Phe Gly Thr Thr Ser

385 390 395 400

Leu Lys Tyr Leu Asp Leu Ser Phe Asn Asp Val Ile Thr Met Ser Ser

405 410 415

Asn Phe Leu Gly Leu Glu Gln Leu Glu His Leu Asp Phe Gln His Ser

420 425 430

Asn Leu Lys Gln Met Ser Gln Phe Ser Val Phe Leu Ser Leu Arg Asn

435 440 445

Leu Ile Tyr Leu Asp Ile Ser His Thr His Thr Arg Val Ala Phe Asn

450 455 460

Gly Ile Phe Asp Gly Leu Leu Ser Leu Lys Val Leu Lys Met Ala Gly

465 470 475 480

Asn Ser Phe Gln Glu Asn Phe Leu Pro Asp Ile Phe Thr Asp Leu Lys

485 490 495

Asn Leu Thr Phe Leu Asp Leu Ser Gln Cys Gln Leu Glu Gln Leu Ser

500 505 510

Pro Thr Ala Phe Asp Thr Leu Asn Lys Leu Gln Val Leu Asn Met Ser

515 520 525

His Asn Asn Phe Phe Ser Leu Asp Thr Phe Pro Tyr Lys Cys Leu Pro

530 535 540

Ser Leu Gln Val Leu Asp Tyr Ser Leu Asn His Ile Met Thr Ser Asn

545 550 555 560

Asn Gln Glu Leu Gln His Phe Pro Ser Ser Leu Ala Phe Leu Asn Leu

565 570 575

Thr Gln Asn Asp Phe Ala Cys Thr Cys Glu His Gln Ser Phe Leu Gln

580 585 590

Trp Ile Lys Asp Gln Arg Gln Leu Leu Val Glu Ala Glu Arg Met Glu

595 600 605

Cys Ala Thr Pro Ser Asp Lys Gln Gly Met Pro Val Leu Ser Leu Asn

610 615 620

Ile Thr Cys Gln Met Asn Lys Thr Ile Ile Gly Val Ser Val Phe Ser

625 630 635 640

Val Leu Val Val Ser Val Val Ala Val Leu Val Tyr Lys Phe Tyr Phe

645 650 655

His Leu Met Leu Leu Ala Gly Cys Ile Lys Tyr Gly Arg Gly Glu Asn

660 665 670

Ile Tyr Asp Ala Phe Val Ile Tyr Ser Ser Gln Asp Glu Asp Trp Val

675 680 685

Arg Asn Glu Leu Val Lys Asn Leu Glu Glu Gly Val Pro Pro Phe Gln

690 695 700

Leu Cys Leu His Tyr Arg Asp Phe Ile Pro Gly Val Ala Ile Ala Ala

705 710 715 720

Asn Ile Ile His Glu Gly Phe His Lys Ser Arg Lys Val Ile Val Val

725 730 735

Val Ser Gln His Phe Ile Gln Ser Arg Trp Cys Ile Phe Glu Tyr Glu

740 745 750

Ile Ala Gln Thr Trp Gln Phe Leu Ser Ser Arg Ala Gly Ile Ile Phe

755 760 765

Ile Val Leu Gln Lys Val Glu Lys Thr Leu Leu Arg Gln Gln Val Glu

770 775 780

Leu Tyr Arg Leu Leu Ser Arg Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Glu Asp Ser

785 790 795 800

Val Leu Gly Gln His Ile Phe Trp Arg Arg Leu Arg Lys Ala Leu Leu

805 810 815

Asp Gly Lys Ser Trp Asn Pro Glu Glu Gln

820 825

<210> 78

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11抗TLR4可变重链

<400> 78

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tcgggcaact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 79

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11抗TLR4可变重链

<400> 79

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 80

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11抗TLR4可变轻链

<400> 80

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 81

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11抗TLR4可变轻链

<400> 81

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 82

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A1抗TLR4可变重链

<400> 82

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tccggccgcc tcctccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 83

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A1抗TLR4可变重链

<400> 83

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

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20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Arg Leu Leu Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 84

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A1抗TLR4可变轻链

<400> 84

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 85

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A1抗TLR4可变轻链

<400> 85

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 86

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A6抗TLR4可变重链

<400> 86

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

agcggcaagt ggttgcctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 87

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A6抗TLR4可变重链

<400> 87

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Lys Trp Leu Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 88

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A6抗TLR4可变轻链

<400> 88

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 89

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1A6抗TLR4可变轻链

<400> 89

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 90

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1B12抗TLR4可变重链

<400> 90

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

agcgggcacc tcatgcctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 91

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1B12抗TLR4可变重链

<400> 91

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly His Leu Met Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 92

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1B12抗TLR4可变轻链

<400> 92

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 93

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1B12抗TLR4可变轻链

<400> 93

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 94

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1C7抗TLR4可变重链

<400> 94

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tccgggcaca actaccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 95

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1C7抗TLR4可变重链

<400> 95

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly His Asn Tyr Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 96

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1C7抗TLR4可变轻链

<400> 96

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 97

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1C7抗TLR4可变轻链

<400> 97

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

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Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

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Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 98

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1C10抗TLR4可变重链

<400> 98

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

agcggcaaga acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 99

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1C10抗TLR4可变重链

<400> 99

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Lys Asn Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 100

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1C10抗TLR4可变轻链

<400> 100

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 101

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1C10抗TLR4可变轻链

<400> 101

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 102

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1C12抗TLR4可变重链

<400> 102

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

agcggccagt tgttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 103

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1C12抗TLR4可变重链

<400> 103

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Gln Leu Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 104

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1C12抗TLR4可变轻链

<400> 104

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 105

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1C12抗TLR4可变轻链

<400> 105

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 106

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1D10抗TLR4可变重链

<400> 106

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

agcggccaca acttgcctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 107

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1D10抗TLR4可变重链

<400> 107

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly His Asn Leu Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 108

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1D10抗TLR4可变轻链

<400> 108

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 109

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1D10抗TLR4可变轻链

<400> 109

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 110

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11 N103D抗TLR4可变重链

<400> 110

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tcgggcgact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 111

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11 N103D抗TLR4可变重链

<400> 111

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asp Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 112

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11 N103D抗TLR4可变轻链

<400> 112

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 113

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11 N103D抗TLR4可变轻链

<400> 113

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 114

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1G12抗TLR4可变重链

<400> 114

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc ggtggttata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

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<210> 115

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1G12抗TLR4可变重链

<400> 115

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Arg Tyr Trp Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 116

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1G12抗TLR4可变轻链

<400> 116

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 117

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1G12抗TLR4可变轻链

<400> 117

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 118

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C1抗TLR4可变重链

<400> 118

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggttt cccgatccgc tacgggtata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tcgggcaact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 119

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C1抗TLR4可变重链

<400> 119

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Phe Pro Ile Arg Tyr Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 120

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C1抗TLR4可变轻链

<400> 120

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 121

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C1抗TLR4可变轻链

<400> 121

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 122

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2抗TLR4可变重链

<400> 122

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta cccgatccgg ttcggctata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tcgggcaact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 123

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2抗TLR4可变重链

<400> 123

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Pro Ile Arg Phe Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 124

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2抗TLR4可变轻链

<400> 124

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 125

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2抗TLR4可变轻链

<400> 125

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 126

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C3抗TLR4可变重链

<400> 126

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta ccccatccgg cacgggtaca gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tcgggcaact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 127

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C3抗TLR4可变重链

<400> 127

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Pro Ile Arg His Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 128

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C3抗TLR4可变轻链

<400> 128

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 129

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C3抗TLR4可变轻链

<400> 129

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 130

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C4抗TLR4可变重链

<400> 130

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggttt cccgatcggc caggggtata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tcgggcaact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 131

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C4抗TLR4可变重链

<400> 131

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Phe Pro Ile Gly Gln Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 132

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C4抗TLR4可变轻链

<400> 132

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 133

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C4抗TLR4可变轻链

<400> 133

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 134

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C5抗TLR4可变重链

<400> 134

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta cccgatctgg gggggctata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tcgggcaact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttccgcctcc 360

acc 363

<210> 135

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C5抗TLR4可变重链

<400> 135

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Pro Ile Trp Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 136

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C5抗TLR4可变轻链

<400> 136

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 137

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C5抗TLR4可变轻链

<400> 137

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

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<213> 人工序列

<220>

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<213> 人工序列

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<223> 1E11.E1抗TLR4可变轻链

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<210> 147

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.E2抗TLR4可变重链

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<210> 148

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.E2抗TLR4可变轻链

<400> 148

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<210> 149

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.E2抗TLR4可变轻链

<400> 149

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<212> DNA

<213> 人工序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.E3抗TLR4可变重链

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<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.E3抗TLR4可变轻链

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aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggctacgact tcccgttgac tttcggcgga 300

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<220>

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Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

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Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

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Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Asp Phe Pro Leu

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<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.E4抗TLR4可变重链

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aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

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<212> DNA

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<220>

<223> 1E11.E4抗TLR4可变轻链

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.E5抗TLR4可变重链

<400> 158

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<223> 1E11.E5抗TLR4可变重链

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gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

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<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.E5抗TLR4可变轻链

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<212> DNA

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E1抗TLR4可变轻链

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gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

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<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E1抗TLR4可变轻链

<400> 165

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cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tcgggcaact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 167

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E3抗TLR4可变重链

<400> 167

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Pro Ile Arg Phe Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 168

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E3抗TLR4可变轻链

<400> 168

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggctacgact tcccgttgac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 169

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E3抗TLR4可变轻链

<400> 169

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Asp Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 170

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E4抗TLR4可变重链

<400> 170

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta cccgatccgg ttcggctata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tcgggcaact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 171

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E4抗TLR4可变重链

<400> 171

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Pro Ile Arg Phe Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 172

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E4抗TLR4可变轻链

<400> 172

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggctacgact acccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 173

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E4抗TLR4可变轻链

<400> 173

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Asp Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 174

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E5抗TLR4可变重链

<400> 174

caggtgcagc ttcaggagtc cggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60

acctgcgctg tctctggtta cccgatccgg ttcggctata gctggcactg gatacggcag 120

cccccaggga agggactgga gtggatgggg tatatccact acagtggtta cactgacttc 180

aacccctccc tcaagactcg aatcaccata tcacgtgaca cgtccaagaa ccagttctcc 240

ctgaagctga gctctgtgac cgctgtggac actgcagtgt attactgtgc gagaaaagat 300

tcgggcaact acttccctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttcc 354

<210> 175

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E5抗TLR4可变重链

<400> 175

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Pro Ile Arg Phe Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 176

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E5抗TLR4可变轻链

<400> 176

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 60

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 120

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 240

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggctacgagt tcccgttgac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 177

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C2E5抗TLR4可变轻链

<400> 177

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Glu Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 178

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11 IgG1格式化的抗TLR4重链

<400> 178

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly

20 25 30

Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

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Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

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Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 179

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11 IgG1格式化的抗TLR4轻链

<400> 179

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 180

<211> 705

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11 IgG1格式化的抗TLR4轻链

<400> 180

atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt 60

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 120

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 180

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 240

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 300

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 360

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480

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ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttaa 705

<210> 181

<211> 1398

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11 IgG1格式化的抗TLR4重链

<400> 181

atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggtgt ccaccaggtg 60

cagcttcagg agtccggccc aggactggtg aagccttcgg acaccctgtc cctcacctgc 120

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ctgagctctg tgaccgctgt ggacactgca gtgtattact gtgcgagaaa agatccgtcc 360

gacgcctttc cttactgggg ccaagggact ctggtcactg tctcttccgc ctccaccaag 420

ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 480

ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cagtctcgtg gaactcagga 540

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ctcagcagcg tggtgactgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 660

gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagagag ttgagcccaa atcttgtgac 720

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cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatctc gggaggagat gaccaagaac 1140

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tccctgtctc cgggttaa 1398

<210> 182

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C1 IgG1格式化的抗TLR4轻链

<400> 182

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp His

20 25 30

Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 183

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C1 IgG1格式化的抗TLR4重链

<400> 183

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Phe Pro Ile Arg Tyr Gly

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35 40 45

Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn Pro Leu Lys

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Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Lys Asp Ser Gly Asn Tyr Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 184

<211> 705

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C1 IgG1格式化的抗TLR4轻链

<400> 184

atgagtgtgc ccactcaggt cctggggttg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt 60

gaaattgtgt tgacgcagtc tccagacttt cagtctgtga ctccaaagga aaaagtcacc 120

atcacctgca gggccagtca gagtatcagc gaccacttac actggtacca acagaaacct 180

gatcagtctc ccaagctcct catcaaatat gcttcccatg ccatttctgg ggtcccatcg 240

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcaatag cctagaggct 300

gaagatgctg caacgtatta ctgtcagcag ggtcacagtt ttccgctcac tttcggcgga 360

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttaa 705

<210> 185

<211> 1398

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 1E11.C1 IgG1格式化的抗TLR4重链

<400> 185

atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtcagtaa ctacaggtgt ccaccaggtg 60

cagcttcagg agtccggccc aggactggtg aagccttcgg acaccctgtc cctcacctgc 120

gctgtctctg gtttcccgat ccgctacggg tatagctggc actggatacg gcagccccca 180

gggaagggac tggagtggat ggggtatatc cactacagtg gttacactga cttcaacccc 240

tccctcaaga ctcgaatcac catatcacgt gacacgtcca agaaccagtt ctccctgaag 300

ctgagctctg tgaccgctgt ggacactgca gtgtattact gtgcgagaaa agattcgggc 360

aactacttcc cttactgggg ccaagggact ctggtcactg tctcttccgc ctccaccaag 420

ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 480

ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cagtctcgtg gaactcagga 540

gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 600

ctcagcagcg tggtgactgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 660

gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagagag ttgagcccaa atcttgtgac 720

aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 780

ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 840

gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 900

gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 960

gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 1020

aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1080

cagccccgag aaccacaggt gtataccctg cccccatctc gggaggagat gaccaagaac 1140

caggtcagcc tgacttgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1200

gagagcaacg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1260

ggctccttct tcctctatag caagctcacc gtggacaagt ccaggtggca gcaggggaac 1320

gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1380

tccctgtctc cgggttaa 1398

<210> 186

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 186

Lys Asp Pro Ser Asp Ala Phe Pro Tyr

1 5

<210> 187

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 187

Lys Asp Pro Ser Glu Gly Phe Pro Tyr

1 5

<210> 188

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 188

Gln Asn Ser His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 189

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 189

Gln Gln Gly His Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 190

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 190

Gln Asn Ser Ser Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 191

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 191

Gln Gln Ser His Ser Phe Pro Leu

1 5

<210> 192

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> N 325 S; K 326 A

<400> 192

Ser Ala Ala Phe

1

<210> 193

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> N 325 S; L 328 F

<400> 193

Ser Lys Ala Phe

1

<210> 194

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> K 326 A; L 328 F

<400> 194

Asn Ala Ala Phe

1

<210> 195

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> L 328 F

<400> 195

Asn Lys Ala Phe

1

<210> 196

<211> 4

<212> PRT

<213> 智人

<400> 196

Asn Lys Ala Leu

1

<210> 197

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 197

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactctggca tacactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg gactggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa caaatactac 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca actccaagaa cactctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtct attattgtgc aagattgagg 300

gataatgcgg agtatactga ttactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagt 357

<210> 198

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 198

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Arg Asp Asn Ala Glu Tyr Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 199

<211> 334

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 199

aattttatgc tgactcagcc ccactctgtg tcggagtctc cggggaagac ggtaaccatc 60

tcctgcaccg gcagcggtgg cagcattgcc agcaactatg tgcagtggta ccaacagcgc 120

ccgggcagtt cccccaccac tgtcatctat gaggataacc agagaccctc tggggtccct 180

gatcggttct ctggctccat cgacagctcc tccaattctg cctccctcac catctctggg 240

ctgaagactg aggacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgatccgct tccggtgtgg 300

gttttcggcg gagggaccaa gctgaccgtc ctag 334

<210> 200

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 200

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Gly Gly Ser Ile Ala Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ser Pro Thr Thr Val

35 40 45

Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Pro

85 90 95

Leu Pro Val Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 201

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 201

Asn Ser Gly Ile His

1 5

<210> 202

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 202

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 203

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 203

Leu Arg Asp Asn Ala Glu Tyr Thr Asp Tyr

1 5 10

<210> 204

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 204

Thr Gly Ser Gly Gly Ser Ile Ala Ser Asn Tyr Val Gln

1 5 10

<210> 205

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 205

Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 206

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 206

Gln Ser Tyr Asp Pro Leu Pro Val Trp Val

1 5 10

<210> 207

<211> 358

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 207

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactctggca tacactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg gactggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa caaattctac 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca actccaagaa cactctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtct attattgtgc aaaattgagg 300

gataatgcgg agtatactga ttactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagtg 358

<210> 208

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 208

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Leu Arg Asp Asn Ala Glu Tyr Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 209

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 209

aattttatgc tgactcagcc ccactctgtg tcggagtctc cggggaagac ggtgaccatc 60

tcctgcaccg gcagcggtgg cagcattgac agaaactatg tgcagtggta ccagcagcgc 120

ccgggcagtt cccccaccac tgtgatctat gaggataacc aaagaccctc tggggtcccg 180

gatcgattct ctggctccat cgacagctcc tccaactctg cctccctcac catctctgga 240

ctaaaaactg aagacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgatccgct tccggtgtgg 300

gttttcggcg gagggaccaa gctcaccgtc cta 333

<210> 210

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 210

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Gly Gly Ser Ile Asp Arg Asn

20 25 30

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ser Pro Thr Thr Val

35 40 45

Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Pro

85 90 95

Leu Pro Val Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 211

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 211

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 212

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 212

Thr Gly Ser Gly Gly Ser Ile Asp Arg Asn Tyr Val Gln

1 5 10

<210> 213

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 213

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactctggca tacactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg gactggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa caaattctac 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca actccaagaa cactctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtct attattgtgc aaaattgagg 300

gataatggtg agtacttaga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgagt 357

<210> 214

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 214

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Leu Arg Asp Asn Gly Glu Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 215

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 215

aattttatgc tgactcagcc ccactctgtg tcggagtctc cggggaagac ggtgaccatc 60

tcctgcaccg gcagcggtgg cagcattgac agaaactatg tgcagtggta ccagcagcgc 120

ccgggcagtt cccccaccac tgtgatctat gaggataacc aaagaccctc tggggtcccg 180

gatcgattct ctggctccat cgacagctcc tccaactctg cctccctcac catctctgga 240

ctaaaaactg aagacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgatccgct tccggtgtgg 300

gttttcggcg gagggaccaa gctcaccgtc cta 333

<210> 216

<211> 98

<212> PRT

<213> 智人

<400> 216

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 217

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 217

Leu Arg Asp Asn Gly Glu Tyr Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 218

<211> 334

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 218

aattttatgc tgactcagcc ccactctgtg tcggagtctc cggggaagac ggtgaccatc 60

tcctgcaccg gcagcggtgg cagcattgac agaaactatg tgcagtggta ccagcagcgc 120

ccgggcagtt cccccaccac tgtgatctat gaggataacc aaagaccctc tggggtcccg 180

gatcgattct ctggctccat cgacagctcc tccaactctg cctccctcac catctctgga 240

ctaaaaactg aagacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgtggagac gcctgagtgg 300

gttttcggcg gagggaccaa gctcaccgtc ctag 334

<210> 219

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 219

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Gly Gly Ser Ile Asp Arg Asn

20 25 30

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ser Pro Thr Thr Val

35 40 45

Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Val Glu

85 90 95

Thr Pro Glu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 220

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 220

Gln Ser Tyr Val Glu Thr Pro Glu Trp Val

1 5 10

<210> 221

<211> 357

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 221

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc ccacacactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cgccttcaaa aactctggca tacactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg gactggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa caaattctac 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca actcccagaa cactgtatat 240

ctgcaaatga ctgacctgag acctgacgac acggctgtct attattgtgc aagagatggg 300

agtgagagcg agtacttaga ctactggggc aagggaaccc tggtcaccgt ctcgagt 357

<210> 222

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 222

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser His Thr Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Lys Asn Ser

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Asp Leu Arg Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Ser Glu Ser Glu Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Lys Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 223

<211> 335

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 223

aattttatgc tgactcagcc ccactctgtg tcggagtctc cggggaagac ggtgaccatc 60

tcctgcaccg gcagcggtgg cagcattgac agaaactatg tgcagtggta ccagcagcgc 120

ccgggcagtg cccccatcac tgtgatctat gaggataacc aaagaccctc tggggtcccg 180

gatcgattct ctggctccat cgacagctcc tccaactctg cctccctcac catctctgga 240

ctacggactg acgacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgatagcat caatctttgg 300

gttttcggcg gagggaccaa ggtcaccgtc ctagg 335

<210> 224

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 224

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Gly Gly Ser Ile Asp Arg Asn

20 25 30

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Ile Thr Val

35 40 45

Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Arg Thr Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser

85 90 95

Ile Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 225

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 225

Gln Ser Tyr Asp Ser Ile Asn Leu Trp Val

1 5 10

<210> 226

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 226

caggtgcagc tggtgcagtt tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cttgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtat taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaaa atgccaagaa ctccgtgtat 240

ctgcaaatgg acagcctgag agtcggggac acggctgtgt attactgtac aagagccggg 300

tatagtactg actggcatcc cgactactgg ggccagggga caatggtcac cgtctcgagt 360

<210> 227

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 227

Gln Val Gln Leu Val Gln Phe Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Val Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Ala Gly Tyr Ser Thr Asp Trp His Pro Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 228

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 228

tcttctgagc tgactcagga ccctgctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcaggatc 60

acatgccaag gagacagcct cagaagctat tatgcaagct ggtaccagca gaagccagga 120

caggcccctg tacttgccat ctatggtaaa aacaaccggc cctcagggat cccagaccga 180

ttctctggct ccagctcagg aaacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240

gatgaggctg actattactg taactcccgg gacagcagtg gtaaccatgt ggtattcggc 300

ggagggacca agctgaccgt ccta 324

<210> 229

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 229

Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln

1 5 10 15

Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala

20 25 30

Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Ala Ile Tyr

35 40 45

Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His

85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 230

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 230

Ser Tyr Gly Met His

1 5

<210> 231

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 231

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 232

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 232

Ala Gly Tyr Ser Thr Asp Trp His Pro Asp Tyr

1 5 10

<210> 233

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 233

Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser

1 5 10

<210> 234

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 234

Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 235

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 235

Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val

1 5 10

<210> 236

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 236

caggtcacct tgagggagtc tggtcctgcg ctggtgaaac ccacacagac cctcacactg 60

acctgcacct tctctggatt ctcactcacc actagtggaa tgtctgtgat ttggatccgt 120

cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacgcattg attcggatga cgagaaacac 180

tacaacacat ctctgaagac caggctcgcc atctccaagg acacctccaa aaaccaggtg 240

gtccttacaa tgaccaacat ggaccctgtg gacacaggca cctattactg tgcacggctt 300

cgggctggtt caggtccata tgtttttgac tcctgggggc aagggaccac ggtcaccgtc 360

tcgagt 366

<210> 237

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 237

Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Ser

20 25 30

Gly Met Ser Val Ile Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala Arg Ile Asp Ser Asp Asp Glu Lys His Tyr Asn Thr Ser

50 55 60

Leu Lys Thr Arg Leu Ala Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val

65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Leu Arg Ala Gly Ser Gly Pro Tyr Val Phe Asp Ser Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 238

<211> 331

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 238

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcggg agtaacactg taaactggta ccagcgactc 120

ccaggagcgg ccccccaact cctcatctac aataatgacc agcggccctc agggatccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcaggctccc tggtcatcag tgggctccag 240

tctgaagacg aggctgatta ctactgtgcg tcatgggatg acagtctgaa tggtcgggtg 300

ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta g 331

<210> 239

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 239

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Arg Leu Pro Gly Ala Ala Pro Gln Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Val Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 240

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 240

Thr Ser Gly Met Ser Val Ile

1 5

<210> 241

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 241

Arg Ile Asp Ser Asp Asp Glu Lys His Tyr Asn Thr Ser Leu Lys Thr

1 5 10 15

<210> 242

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 242

Leu Arg Ala Gly Ser Gly Pro Tyr Val Phe Asp Ser

1 5 10

<210> 243

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 243

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn

1 5 10

<210> 244

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 244

Asn Asn Asp Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 245

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 245

Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Arg Val

1 5 10

<210> 246

<211> 369

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 246

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccggc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtat taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggccattt attactgtgc gagagtgatg 300

gggacggatc cccactccta ctactacatg gacgtctggg ggaaggggac cctggtcacc 360

gtctcgagt 369

<210> 247

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 247

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Met Gly Thr Asp Pro His Ser Tyr Tyr Tyr Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 248

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 248

Val Met Gly Thr Asp Pro His Ser Tyr Tyr Tyr Met Asp Val

1 5 10

<210> 249

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 249

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtat taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac gcggctgtgt attactgtgc gagagcacca 300

gatggccacc aacttgacta ctggggcagg ggcaccctgg tcaccgtctc gagt 354

<210> 250

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 250

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Pro Asp Gly His Gln Leu Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 251

<211> 330

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 251

aattttatgc tgactcagcc ccactctgtg tcggagtctc cggggaagac ggtaaccatc 60

tcctgcaccg gcagcagtgg cagcattgcc agcaactatg tgcagtggta ccagcagcgc 120

ccgggcagtg cccccaccac tgtgatctat gaagatgacc aaagaccctc tgacgtccct 180

gatcgcttct ctggctccat cgacagctcc tccaactctg cctccctcac catctctgga 240

ctgaggactg aggacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgttagcag caagtgggtg 300

ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330

<210> 252

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 252

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val

35 40 45

Ile Tyr Glu Asp Asp Gln Arg Pro Ser Asp Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Arg Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Val Ser

85 90 95

Ser Lys Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 253

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 253

Ala Pro Asp Gly His Gln Leu Asp Tyr

1 5

<210> 254

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 254

Glu Asp Asp Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 255

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 255

Gln Ser Tyr Val Ser Ser Lys Trp Val

1 5

<210> 256

<211> 402

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 256

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgacggtc 60

tcctgcaagg cctctggagg caccttcagc agcttttcta tcacctggct gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggagag atcaccccta tgtttggtat agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggtag ggtcacgatt agcgcggacg agtccacgag cacagcctac 240

atggagttga gtggcctgac atctgaagac acggccatgt attattgtgc gagagatggt 300

cggtttgatg tttccgatct tttgactgac aaacccaaag taacgataaa ctacaacggg 360

atggacgtct ggggccaagg caccctggtc accgtctcga gt 402

<210> 257

<211> 134

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 257

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Phe

20 25 30

Ser Ile Thr Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Thr Pro Met Phe Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Arg Phe Asp Val Ser Asp Leu Leu Thr Asp Lys Pro

100 105 110

Lys Val Thr Ile Asn Tyr Asn Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr

115 120 125

Leu Val Thr Val Ser Ser

130

<210> 258

<211> 330

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 258

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcggg agtaacactg taaactggta ccagcgactc 120

ccaggagcgg ccccccaact cctcatctac aataatgacc agcggccctc agggatccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcaggctccc tggtcatcag tgggctccag 240

tctgaagatg aggctgatta ctactgtgcg tcatgggatg acagtctgaa tggtcgggtg 300

ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330

<210> 259

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 259

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Arg Leu Pro Gly Ala Ala Pro Gln Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Val Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 260

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 260

Ser Phe Ser Ile Thr

1 5

<210> 261

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 261

Glu Ile Thr Pro Met Phe Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 262

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 262

Asp Gly Arg Phe Asp Val Ser Asp Leu Leu Thr Asp Lys Pro Lys Val

1 5 10 15

Thr Ile Asn Tyr Asn Gly Met Asp Val

20 25

<210> 263

<211> 378

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 263

cagctggtgg agtctggagg aggcttgatc cagcctgggg ggtccctgag actttcctgt 60

gcagcctctg gattcagcgt cagtgacacc tacatgaact gggtccgcca ggctccaggg 120

aagggcctgg agtgggtgtc aagtatttat agcgatgata gcacatacta cgcagactcc 180

gtgaagggca gattcaccat ctccagagac aattccaaga acacgctgtt tcttcaaata 240

aacagtttga gagccgagga cacggctgtc tattactgtg cgagagataa ggagtatgta 300

acatcaactg ggggcgccta ctactacttc tactacatgg acgtctgggg ccagggcacc 360

ctggtcaccg tctcgagt 378

<210> 264

<211> 126

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 264

Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly Ser Leu

1 5 10 15

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Val Ser Asp Thr Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser

35 40 45

Ile Tyr Ser Asp Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg

50 55 60

Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln Ile

65 70 75 80

Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp

85 90 95

Lys Glu Tyr Val Thr Ser Thr Gly Gly Ala Tyr Tyr Tyr Phe Tyr Tyr

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 265

<211> 330

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 265

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag agtctccatc 60

tcctgttctg gaagcagctc caacatcgga agtgatactg tgaactggta ccagcacctc 120

ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aataataatc agcggccctc aggggtccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240

tctgaggatg aggctgatta ttactgtgcc gcatgggatg acagcctgaa tggtctggta 300

ttcggcggag ggaccaaggt caccgtccta 330

<210> 266

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 266

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Ser Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asp

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asn Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 267

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 267

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asp Thr Val Asn

1 5 10

<210> 268

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 268

Asn Asn Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 269

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 269

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Leu Val

1 5 10

<210> 270

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 270

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaagacgag 300

tttgatgctt ttgatatctg gggccgaggg acaatggtca ccgtctcgag t 351

<210> 271

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 271

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Glu Phe Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Arg Gly Thr Met

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 272

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 272

tcctatgtgc tgactcagcc cccctcagtg tcggtggccc caggaacgac ggccaggatt 60

acctgtgggg gaaacaatat cggaagtagg agtgtgcatt ggtaccagca gaagccaggc 120

caggcccctc tactggtcat ctattatgat agtgaccggc cctcagggat ccctctgcga 180

ttctctggct ccaactctgg aaacacggcc accctgacca tcagtagggt cgaagccggg 240

gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatactagta gtggtcatta tgtcttcgga 300

actgggacca aggtcaccgt ccta 324

<210> 273

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 273

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Thr

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Arg Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Leu Leu Val Ile Tyr

35 40 45

Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Leu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Thr Ser Ser Gly His

85 90 95

Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105

<210> 274

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 274

Asp Glu Phe Asp Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 275

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 275

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Arg Ser Val His

1 5 10

<210> 276

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 276

Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser

1 5

<210> 277

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 277

Gln Val Trp Asp Thr Ser Ser Gly His Tyr Val

1 5 10

<210> 278

<211> 354

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 278

cagctggtgg agtctggggg aggcgtggtc cagcctggga ggtccctgag actctcctgt 60

gcagcctctg gattcacctt cagtacctat ggcatgcact gggtccgcca ggctccaggc 120

aaggggctgg agtgggtggc agttatatca tatgatggag gtactaaata ctatgcagac 180

tccgtgaagg gccgattcac catctccaga gacaattcca tgaaaacgct ctatctgcaa 240

atgaacagcc tgagaactga ggacacggct gtgtattact gtgcgaaaga tctgggggac 300

ctacccccgg gccttgacta ctggggccag gggacaatgg tcaccgtctc gagt 354

<210> 279

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 279

Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu

1 5 10 15

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met

20 25 30

His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val

35 40 45

Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Thr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Met Lys Thr Leu Tyr Leu Gln

65 70 75 80

Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys

85 90 95

Asp Leu Gly Asp Leu Pro Pro Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 280

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 280

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta ccagcagctc 120

ccaggagcgg cccccaaact cctcatctat actaataatc agcggccctc aggggtccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240

tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtaatgtg 300

gtattcggcg gagggaccaa ggtcaccgtc cta 333

<210> 281

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 281

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Asn Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 282

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 282

Thr Tyr Gly Met His

1 5

<210> 283

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 283

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Thr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 284

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 284

Asp Leu Gly Asp Leu Pro Pro Gly Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 285

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 285

Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 286

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 286

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Asn Val Val

1 5 10

<210> 287

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 287

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggctcagt ctgggaagtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg gctggcagtc atatcatatg atggaagtaa cagatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaacaa cacactgaat 240

ctgcaaatga gcagcctgag agctgaggac acggctctat attactgtgc gaaagatgcc 300

ggggggccgc ttgattactg gggcaagggc accctggtca ccgtctcgag t 351

<210> 288

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 288

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Ala Gln Ser Gly Lys

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Asn Thr Leu Asn

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Ala Gly Gly Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 289

<211> 337

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 289

cagtctgtgc tgactcagct gactcagcca ccctcggtgt cactggcccc aggacagacg 60

gccaccatta cttgtggggg agacaacatt ggacgtaaaa gtgtgcactg gtaccagcag 120

aagccaggcc aggcccctgt gttggtcgtc tatgatgaca ccgaccggcc ctcagggatc 180

cctgagcgat tctctggctc caactctggg aacacggcca ccctaaccat cagcagggtc 240

gaagccgggg atgaggccga ctattactgt caggtgtggg atagtagtat tgatcattct 300

tgggtgttcg gcggagggac caagctgacc gtcctag 337

<210> 290

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 290

Gln Ser Val Leu Thr Gln Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Leu Ala

1 5 10 15

Pro Gly Gln Thr Ala Thr Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Arg

20 25 30

Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu

35 40 45

Val Val Tyr Asp Asp Thr Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val

65 70 75 80

Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser

85 90 95

Ile Asp His Ser Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 291

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 291

Asn Tyr Gly Met His

1 5

<210> 292

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 292

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 293

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 293

Asp Ala Gly Gly Pro Leu Asp Tyr

1 5

<210> 294

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 294

Gly Gly Asp Asn Ile Gly Arg Lys Ser Val His

1 5 10

<210> 295

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 295

Asp Asp Thr Asp Arg Pro Ser

1 5

<210> 296

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 296

Gln Val Trp Asp Ser Ser Ile Asp His Ser Trp Val

1 5 10

<210> 297

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 297

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtat taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaggaa cacgctgtat 240

ctgcagatga acagcctgag acctgaggac acggctgttt attactgtgc gaaagattgg 300

ggatttagcg gctccctaac atttgattat tggggccaag ggacaatggt caccgtctcg 360

agt 363

<210> 298

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 298

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Trp Gly Phe Ser Gly Ser Leu Thr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 299

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 299

tcctatgtgc tgactcagcc accctcagtg tcagtggccc caggaaagac ggccaggatt 60

acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120

caggcccctg tgctggtcat ctattatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180

ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240

gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatgt ggtattcggc 300

ggagggacca aggtcaccgt ccta 324

<210> 300

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 300

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr

35 40 45

Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His

85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105

<210> 301

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 301

Asp Trp Gly Phe Ser Gly Ser Leu Thr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 302

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 302

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His

1 5 10

<210> 303

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 303

Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Val Val

1 5 10

<210> 304

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 304

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggctcact ctgggaagtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg gctggcagtc atatcatatg atgggagtaa tagatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaacaa cacgctgaat 240

ctgcaaatga gcagcctgag agctgaggac acggctctgt attactgtgc gaaagatgcc 300

ggggggccgc ttgattactg gggccggggc accctggtca ccgtctcgag t 351

<210> 305

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 305

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Ala His Ser Gly Lys

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn Asn Thr Leu Asn

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Ala Gly Gly Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 306

<211> 330

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 306

tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagat ggccagaatt 60

acctgtgggg gaaacaacat tggagataaa agtgtgcaat ggtaccagca gaggccaggc 120

caggcccctc tactggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcgc 180

ttctctggct cctactctag gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240

gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatcc ggaggtggtt 300

ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330

<210> 307

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 307

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Met Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Asp Lys Ser Val

20 25 30

Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Leu Leu Val Val Tyr

35 40 45

Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Tyr Ser Arg Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His

85 90 95

Pro Glu Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 308

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 308

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Asp Lys Ser Val Gln

1 5 10

<210> 309

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 309

Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser

1 5

<210> 310

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 310

Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Pro Glu Val Val

1 5 10

<210> 311

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 311

caggtccagc tggtgcagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaggtac taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccatgaa aacgctctat 240

ctgcaaatga acagcctgag aactgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaagatctg 300

ggggacctac ccccgggcct tgactactgg ggccgaggga caatggtcac cgtctcgagt 360

<210> 312

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 312

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Thr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Met Lys Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Leu Gly Asp Leu Pro Pro Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Arg

100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 313

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 313

tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tcagtggccc tgggacagac ggccacgatt 60

acctgtgggg ggagcagtat tgagagtaaa agtgtacact ggtaccagga gaagccaggc 120

caggcccctg tcctggtcat ctataaagat tccaaccggc cctctgtgat ccctgagcga 180

ttctctggct ccaactcggg gaacacggcc accctgacca tcggcagagc ccaagccggg 240

gatgaggctg actattactg tcaggtgtgg gacagcagta ctggtgtggt attcggcgga 300

gggaccaagc tgaccgtcct a 321

<210> 314

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 314

Cys His Glu Met Ile Cys Ala Leu Leu Tyr Ser Tyr Asn Thr His Glu

1 5 10 15

Ser Ile Glx Glu Asp Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser

20 25 30

Val Ala Leu Gly Gln Thr Ala Thr Ile Thr Cys Gly Gly Ser Ser Ile

35 40 45

Glu Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro

50 55 60

Val Leu Val Ile Tyr Lys Asp Ser Asn Arg Pro Ser Val Ile Pro Glu

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Gly

85 90 95

Arg Ala Gln Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp

100 105 110

Ser Ser Thr Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

115 120 125

<210> 315

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 315

Gly Gly Ser Ser Ile Glu Ser Lys Ser Val His

1 5 10

<210> 316

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 316

Lys Asp Ser Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 317

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 317

Gln Val Trp Asp Ser Ser Thr Gly Val Val

1 5 10

<210> 318

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 318

caggtccagt tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaggtac taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccatgaa aacgctctat 240

ctgcaaatga acagcctgag aactgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaagatctg 300

ggggacctac ccccgggcct tgactactgg ggccagggga caatggtcac cgtctcgagt 360

<210> 319

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 319

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Thr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Met Lys Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Leu Gly Asp Leu Pro Pro Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 320

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 320

cagtctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60

tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta ccagcagctc 120

ccaggagcgg cccccaaact cctcatctat actaataatc agcggccctc aggggtcccc 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240

tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagctcgga gcctcgtgtg 300

gtattcggcg gagggaccaa ggtcaccgtc cta 333

<210> 321

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 321

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Ser

85 90 95

Glu Pro Arg Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110

<210> 322

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 322

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Ser Glu Pro Arg Val Val

1 5 10

<210> 323

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 323

Asp Thr Tyr Met Asn

1 5

<210> 324

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 324

Ser Ile Tyr Ser Asp Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

1 5 10 15

<210> 325

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 325

Asp Lys Glu Tyr Val Thr Ser Thr Gly Gly Ala Tyr Tyr Tyr Phe Tyr

1 5 10 15

Tyr Met Asp Val

20

<210> 326

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 326

Asp Gly Ser Glu Ser Glu Tyr Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 327

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 327

Thr Gly Ser Ser Gly Ser Ile Ala Ser Asn Tyr Val Gln

1 5 10

<210> 328

<211> 217

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 328

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1 5 10 15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Gly Gly Ser Ile Ala Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ser Pro Thr Thr Val

35 40 45

Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly

65 70 75 80

Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Pro

85 90 95

Leu Pro Val Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu

115 120 125

Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe

130 135 140

Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val

145 150 155 160

Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys

165 170 175

Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser

180 185 190

His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu

195 200 205

Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

<210> 329

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 329

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Leu Arg Asp Asn Ala Glu Tyr Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 330

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 330

gaggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaagacggt 300

ggctggtacg actggtactt cgatctctgg ggcaggggaa ccctggtcac cgtctcgagt 360

<210> 331

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 331

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Gly Gly Trp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 332

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 332

tcttctgagc tgactcagga ccctgatgtg tccgtggcct tgggacagac agtcaggatc 60

acatgccaag gagacagcct caccagctat tatgcaagct ggtaccagca gaagccagga 120

caggcccctg tacttgtcat ctctggtaat gacaaccggc cctcagggat cccagaccga 180

ttctctggct ccaactcagg aaacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240

gatgcggctg actattactg tggctcccgg gacagcagcg gttaccaagt ggtgttcggc 300

gcagggacca agctgaccgt ccta 324

<210> 333

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 333

Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Asp Val Ser Val Ala Leu Gly Gln

1 5 10 15

Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Thr Ser Tyr Tyr Ala

20 25 30

Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Ser

35 40 45

Gly Asn Asp Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Arg Asp Ser Ser Gly Tyr Gln

85 90 95

Val Val Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 334

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 334

Asp Gly Gly Trp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Leu

1 5 10

<210> 335

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 335

Gln Gly Asp Ser Leu Thr Ser Tyr Tyr Ala Ser

1 5 10

<210> 336

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 336

Gly Asn Asp Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 337

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 337

Gly Ser Arg Asp Ser Ser Gly Tyr Gln Val Val

1 5 10

<210> 338

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 338

tcttctgagc tgactcagga ccctgctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcaggatc 60

acatgccaag gagacagcct cagaagctat tatgcaagct ggtaccagcg gaagccagga 120

caggcccctg tacttgtcat ctatggtaaa aacaaccggc cctcagggat cccagaccga 180

ttctctggct ccagctcagg aaacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240

gatgaggctg actattactg taactcccgg gacagcagtg gtaaccatgt gcttttcggc 300

ggagggacca agctgaccgt ccta 324

<210> 339

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 化学合成的

<400> 339

Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln

1 5 10 15

Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala

20 25 30

Ser Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr

35 40 45

Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His

85 90 95

Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 340

<211> 450

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E3重链氨基酸序列

<400> 340

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Val Met Tyr Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Lys Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Glu Ala Ser Ala Ser Thr Ala Asn

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Thr Arg Gly Asn Tyr Pro Gly Leu Arg Val Met Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val

115 120 125

Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser

180 185 190

Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala

195 200 205

Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile

210 215 220

Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile

245 250 255

Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp

260 265 270

Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His

275 280 285

Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg

290 295 300

Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys

305 310 315 320

Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu

355 360 365

Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp

370 375 380

Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu

405 410 415

Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His

420 425 430

Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 341

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E3 VH氨基酸序列

<400> 341

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Val Met Tyr Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Lys Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Glu Ala Ser Ala Ser Thr Ala Asn

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Thr Arg Gly Asn Tyr Pro Gly Leu Arg Val Met Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 342

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E3轻链氨基酸序列

<400> 342

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Tyr

20 25 30

Val Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Arg Arg Leu Ile

35 40 45

Phe Arg Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gly Ser

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Gly Tyr His Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala

100 105 110

Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly

115 120 125

Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile

130 135 140

Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu

145 150 155 160

Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr

180 185 190

Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Asn Glu Cys

210

<210> 343

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E3 VL氨基酸序列

<400> 343

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Tyr

20 25 30

Val Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Arg Arg Leu Ile

35 40 45

Phe Arg Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gly Ser

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Gly Tyr His Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 344

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E3 CDRH1氨基酸序列

<400> 344

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Val

1 5

<210> 345

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E3 CDRH2氨基酸序列

<400> 345

Ile Asn Thr Asn Thr Gly Lys Pro

1 5

<210> 346

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E3 CDRH3氨基酸序列

<400> 346

Thr Arg Gly Asn Tyr Pro Gly Leu Arg Val Met Asp Ala

1 5 10

<210> 347

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E3 CDRL1氨基酸序列

<400> 347

Gln Asp Val Gly Ile Tyr

1 5

<210> 348

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E3 CDRL2氨基酸序列

<400> 348

Arg Ala Thr

1

<210> 349

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5E3 CDRL3氨基酸序列

<400> 349

Leu Gln Tyr Asp Glu Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 350

<211> 137

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> NI-0101 VH氨基酸序列

<400> 350

Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Cys Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys

20 25 30

Pro Ser Asp Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile

35 40 45

Thr Gly Gly Tyr Ser Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly

50 55 60

Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile His Tyr Ser Gly Tyr Thr Asp Phe Asn

65 70 75 80

Pro Ser Leu Lys Thr Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn

85 90 95

Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Lys Asp Pro Ser Asp Ala Phe Pro Tyr Trp Gly

115 120 125

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135

<210> 351

<211> 126

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> NI-0101 VL氨基酸序列

<400> 351

Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly

1 5 10 15

Val His Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val

20 25 30

Thr Pro Lys Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile

35 40 45

Ser Asp His Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys

50 55 60

Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser His Ala Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg

65 70 75 80

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser

85 90 95

Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly His Ser

100 105 110

Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

115 120 125

Claims

1.一种治疗、预防或减轻有此需要的受试者中的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的症状的方法，其包括向所述受试者施用包含特异性结合Toll样受体4 (TLR4)的抗体和MD-2复合物的组合物。

2.权利要求1的方法，其中所述抗体包括：

a) 重链可变区，其包含：

包含SEQ ID NO: 1、20或28的氨基酸序列的互补决定区1 (CDRH1)；

包含SEQ ID NO: 2、21或29的氨基酸序列的互补决定区2 (CDRH2)；和

包含SEQ ID NO: 3、22、30、186或187的氨基酸序列的互补决定区3 (CDRH3)；和

b) 轻链可变区，其包含：

包含SEQ ID NO: 4、24、33的氨基酸序列的互补决定区1 (CDRL1)；

包含SEQ ID NO: 5、25或34的氨基酸序列的互补决定区2 (CDRL2)；和

包含SEQ ID NO: 6、17、26、35、188、189、190或191的氨基酸序列的互补决定区3(CDRL3)。

3.权利要求2的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的CDRH1区；包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的CDRH2区，包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的CDRH3区；包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的CDRL1区；包含SEQ ID NO: 5的氨基酸序列的CDRL2区；以及包含SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的CDRL3区。

4.权利要求2的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的CDRH1区；包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的CDRH2区，包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的CDRH3区；包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的CDRL1区；包含SEQ ID NO: 5的氨基酸序列的CDRL2区；以及包含SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的CDRL3区。

5.权利要求2的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 20的氨基酸序列的CDRH1区；包含SEQ ID NO: 21的氨基酸序列的CDRH2区，包含SEQ ID NO: 22的氨基酸序列的CDRH3区；包含SEQ ID NO: 24的氨基酸序列的CDRL1区；包含SEQ ID NO: 25的氨基酸序列的CDRL2区；以及包含SEQ ID NO: 26的氨基酸序列的CDRL3区。

6.权利要求2的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 28的氨基酸序列的CDRH1区；包含SEQ ID NO: 29的氨基酸序列的CDRH2区，包含SEQ ID NO: 30的氨基酸序列的CDRH3区；包含SEQ ID NO: 33的氨基酸序列的CDRL1区；包含SEQ ID NO: 34的氨基酸序列的CDRL2区；以及包含SEQ ID NO: 35的氨基酸序列的CDRL3区。

7.权利要求1的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 350、14、15、19、27、31、36或38的氨基酸序列的重链可变区，以及包含SEQ ID NO: 351、16、18、23、32、40、42、44或46的氨基酸序列的轻链可变区。

8.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 350的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 351的氨基酸序列的轻链可变区。

9.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的轻链可变区。

10.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的轻链可变区。

11.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 16的氨基酸序列的轻链可变区。

12.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 15的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 18的氨基酸序列的轻链可变区。

13.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 19的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 23的氨基酸序列的轻链可变区。

14.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 27的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 32的氨基酸序列的轻链可变区。

15.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 31的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 32的氨基酸序列的轻链可变区。

16.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 36的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 40的氨基酸序列的轻链可变区。

17.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 36的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 42的氨基酸序列的轻链可变区。

18.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 36的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 44的氨基酸序列的轻链可变区。

19.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 36的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 46的氨基酸序列的轻链可变区。

20.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 40的氨基酸序列的轻链可变区。

21.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 42的氨基酸序列的轻链可变区。

22.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 44的氨基酸序列的轻链可变区。

23.权利要求7的方法，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 38的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 46的氨基酸序列的轻链可变区。

24.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。

25.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗体是人源化抗体。

26.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗体是IgG同种型。

27.权利要求26的方法，其中所述抗体是IgG1同种型。

28.权利要求27的方法，其中在IgG1的CH2结构域的EU位置325-328处的氨基酸残基由SKAF (SEQ ID NO: 193)的氨基酸基序组成。

29.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗体通过吸入、经鼻、静脉内、皮下、肌内或其任何组合进行施用。

30.权利要求29的方法，其中所述抗体进行静脉内施用。

31.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗体以如下述剂量进行施用：约5 mg/kg、约6 mg/kg、约7 mg/kg、约8 mg/kg、约9 mg/kg、约10 mg/kg、约11 mg/kg、约12 mg/kg、约13mg/kg、约14 mg/kg、约15 mg/kg、约16 mg/kg、约17 mg/kg、约18 mg/kg、约19 mg/kg、约20mg/kg、约21 mg/kg、约22 mg/kg、约23 mg/kg、约24 mg/kg或约25 mg/kg。

32.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗体施用至少1次、至少2次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次、至少9次或至少10次。

33.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗体以约15 mg/kg的剂量静脉内施用一次。

34.前述权利要求中任一项的方法，其中ARDS的症状是双侧肺泡浸润的急性发作、低氧血症、急性低氧血症、肺叶萎陷、肺萎陷、痰咳、疲劳、发烧、胸痛、呼吸急促、呼吸费力、心率增加、低血压、意识模糊、极度疲倦、呼吸衰竭、肺血管渗漏、肺水肿、肺泡上皮细胞损伤、肺泡内皮细胞损伤、肺泡毛细血管膜屏障破坏或其任何组合。

35.前述权利要求中任一项的方法，其中所述受试者患有冠状病毒感染、病毒感染、流感感染、败血病、吸入性肺炎、感染性肺炎、严重外伤、骨折、肺挫伤、吸入性损伤、输血相关性损伤、HSCT、胰腺炎、来自癌症治疗剂的细胞因子风暴、胶原血管疾病、来自摄入物的药物效应、来自吸入剂的药物效应、休克、急性嗜酸性粒细胞性肺炎、免疫介导的肺出血和血管炎、放射性肺炎或其任何组合。

36.权利要求1-34中任一项的方法，其中所述受试者患有冠状病毒感染。

37.权利要求1-34中任一项的方法，其中所述受试者疑似患有冠状病毒感染。

38.权利要求1-34中任一项的方法，其中所述受试者已暴露于冠状病毒或其中所述受试者疑似已暴露于冠状病毒；并且所述受试者并未发展冠状病毒感染的症状。

39.权利要求36-38中任一项的方法，其中所述冠状病毒是229E α冠状病毒、NL63 α冠状病毒、OC43 β冠状病毒、HKU1 β冠状病毒、中东呼吸综合征β冠状病毒(MERS-CoV或MERS)、严重急性呼吸综合征β冠状病毒(SARS-CoV或SARS)、SARS-CoV的B1.1.7变体、SARS-CoV的B.1.351变体、SARS-CoV的P.1变体、SARS-CoV的B.1.427变体、SARS-CoV的B.1.4变体、或引起2019冠状病毒病的新型冠状病毒(SARS-CoV-2或COVID-19)。

40.权利要求36-39中任一项的方法，其中所述冠状病毒感染的症状是呼吸急促、呼吸困难、干咳、发烧、流鼻涕、鼻充血、嗅觉缺失、嗅觉丧失、肌肉酸痛、肌肉痛、疲劳、呼吸生痰、头痛、呕吐、咯血、咽喉痛、肌痛、腹泻或其任何组合。

41.根据前述权利要求中任一项的方法，其进一步包括施用抗病毒药物、ACE抑制剂、免疫增强药物、或皮质类固醇或其任何组合。

42.权利要求41的方法，其中所述抗病毒药物是瑞德西韦、巴尼韦单抗、埃特司韦单抗、卡西瑞单抗、伊德维单抗或靶向病毒的单克隆抗体。

43.权利要求41的方法，其中所述ACE抑制剂是羟氯喹或可溶性重组ACE2。

44.权利要求41的方法，其中所述免疫增强药物是抗IL6抗体、抗IP-10抗体、抗IL-1抗体或抗TNF抗体。

45.权利要求44的方法，其中所述IL6抗体是托珠单抗或沙利姆单抗。

46.权利要求41的方法，其中所述免疫增强药物是阿托伐他汀或普伐他汀。

47.权利要求41的方法，其中所述皮质类固醇是地塞米松。

48.一种可注射的药物制剂，其包含约10 mg/mL的特异性结合TLR4的抗体、约1.88 mg/mL的L-组氨酸、约2.70 mg/mL的L-组氨酸单盐酸盐一水合物、约68.46 mg/mL的蔗糖和约0.05 mg/mL的聚山梨醇酯80。

49.权利要求48的可注射药物制剂，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的CDRH1区；包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的CDRH2区，包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的CDRH3区；包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的CDRL1区；包含SEQ ID NO: 5的氨基酸序列的CDRL2区，以及包含SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的CDRL3区。

50.权利要求48的可注射药物制剂，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 350的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 351的氨基酸序列的轻链可变区。

51.一种可注射的药物制剂，其包含约150 mg/mL的特异性结合TLR4的抗体、约5.24mg/mL的L-组氨酸单盐酸盐、约40.15 mg/mL的L-精氨酸单盐酸盐、约1.65 mg/mL的L-精氨酸和约0.20 mg/mL的聚山梨醇酯80。

52.权利要求51的可注射药物制剂，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的CDRH1区；包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的CDRH2区，包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的CDRH3区；包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的CDRL1区；包含SEQ ID NO: 5的氨基酸序列的CDRL2区，以及包含SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的CDRL3区。

53.权利要求51的可注射药物制剂，其中所述抗体包括：包含SEQ ID NO: 350的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO: 351的氨基酸序列的轻链可变区。