CN115671179A - 一种诺丽酵素提取物的制备方法 - Google Patents
一种诺丽酵素提取物的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115671179A CN115671179A CN202110862581.XA CN202110862581A CN115671179A CN 115671179 A CN115671179 A CN 115671179A CN 202110862581 A CN202110862581 A CN 202110862581A CN 115671179 A CN115671179 A CN 115671179A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- noni
- eluent
- flow rate
- adsorption
- ykdh
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 235000017524 noni Nutrition 0.000 title claims abstract description 137
- 244000131360 Morinda citrifolia Species 0.000 title claims abstract description 136
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 57
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 49
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 49
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 89
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 61
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 57
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 57
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 35
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 29
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 claims abstract description 16
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 12
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 11
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 7
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 abstract description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 12
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 10
- 235000008898 Morinda citrifolia Nutrition 0.000 description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 6
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 3
- IFBHRQDFSNCLOZ-IIRVCBMXSA-N 4-nitrophenyl-α-d-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-IIRVCBMXSA-N 0.000 description 2
- 229940077274 Alpha glucosidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001107098 Rubiaceae Species 0.000 description 2
- 239000003888 alpha glucosidase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- XUFXOAAUWZOOIT-SXARVLRPSA-N (2R,3R,4R,5S,6R)-5-[[(2R,3R,4R,5S,6R)-5-[[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4-dihydroxy-6-methyl-5-[[(1S,4R,5S,6S)-4,5,6-trihydroxy-3-(hydroxymethyl)-1-cyclohex-2-enyl]amino]-2-oxanyl]oxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-2-oxanyl]oxy]-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4-triol Chemical compound O([C@H]1O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O)[C@H]1O)N[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)C(CO)=C1)O)C)[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O XUFXOAAUWZOOIT-SXARVLRPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000157491 Morinda Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 229960002632 acarbose Drugs 0.000 description 1
- XUFXOAAUWZOOIT-UHFFFAOYSA-N acarviostatin I01 Natural products OC1C(O)C(NC2C(C(O)C(O)C(CO)=C2)O)C(C)OC1OC(C(C1O)O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(O)C(O)C1O XUFXOAAUWZOOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 235000019614 sour taste Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供一种诺丽酵素提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)吸附：将诺丽酵素以0.5～1.5ml/min的吸附流速加入YKDH‑2大孔吸附树脂柱中吸附；(2)一次洗脱：采用纯水作为洗脱剂A，以4～6ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅰ；(3)二次洗脱：采用50～80％乙醇‑水混合溶剂作为洗脱剂B，以3～6ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ；(4)合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ，减压浓缩，干燥，即得到诺丽酵素提取物，本发明提出的诺丽酵素提取物的制备方法，其工艺简单，成本低廉，所获得的诺丽酵素提取物不仅充分去除诺丽刺激性气味，而且对α‑葡萄糖苷酶具有高抑制活性，可有效应用于降血糖药物中。
Description
技术领域
本发明涉及植物药用成分的提取技术领域，特别涉及一种诺丽酵素提取物的制备方法。
背景技术
诺丽(Morinda Citrifolia Linn)又名海巴戟天、海巴戟，别名Noni，为茜草科(Rubiaceae)海巴戟天属(Morinda)植物。自2010年我国卫生部批准诺丽果成为新资源食品，经研究表明，诺丽果实具有较高的抗氧化活性，但其果实具有刺激气味且带苦味让人难以下咽，近年来逐渐出现了多种诺丽加工产品，如诺丽果浆、诺丽果粉、诺丽酵素等。
诺丽酵素是由成熟的诺丽果发酵而成，经研究结果表明，诺丽酵素具有降血糖保健的功能，但目前对于诺丽酵素化学成分的研究报道较少，尤其是诺丽酵素的提取工艺研究则相对薄弱，诺丽酵素提取物的不同部位的有效成分活性则大大不同，对于诺丽酵素提取物的降血糖能力也将差异悬殊，而且现有的诺丽酵素难以有效去除诺丽果本身的刺激性气味，未能很好的改善其口感问题，从而极大限制了诺丽酵素提取物在降血糖方面的应用，因此，亟需寻找一种简便且高活性的诺丽酵素提取物的制备工艺，以促进诺丽酵素在降血糖保健领域的研究与开发应用。
发明内容
鉴以此，本发明提出一种诺丽酵素提取物的制备方法，其工艺简单，成本低廉，所获得的诺丽酵素提取物不仅充分去除诺丽刺激性气味，而且对α-葡萄糖苷酶具有高抑制活性，可有效应用于降血糖药物中。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种诺丽酵素提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)吸附：将诺丽酵素以0.5～1.5ml/min的吸附流速加入YKDH-2大孔吸附树脂柱中吸附；
(2)一次洗脱：采用纯水作为洗脱剂A，以4～6ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅰ；
(3)二次洗脱：采用50～80％乙醇-水混合溶剂作为洗脱剂B，以3～6ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ；
(4)合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ，减压浓缩，干燥，即得到诺丽酵素提取物。
进一步说明，所述YKDH-2大孔吸附树脂柱的径高比为：1∶8。
进一步说明，所述诺丽酵素与洗脱剂A、洗脱剂B的洗脱体积比为1:10:10。
进一步说明，步骤(1)中，还包括YKDH-2大孔吸附树脂的活化处理，在树脂吸附前，将YKDH-2大孔吸附树脂采用2倍柱体积的2～3％HCl溶液，以3～5倍柱体积/h流速通过树脂柱，并浸泡5～6h后，用水以同样流速洗至出水pH呈中性；再采用2倍柱体积的1～2％NaOH溶液，以3～5倍柱体积/h的流速通过树脂柱，并浸泡5～6h后，用水以同样流速洗至出水pH呈中性，即得到活化YKDH-2大孔吸附树脂柱。
进一步说明，步骤(1)中，还包括对诺丽酵素的真空减压浓缩，在进行树脂吸附前，将诺丽酵素于0.06～0.07Mpa真空度，35～45℃水浴温度的条件下，进行减压浓缩至0.5～0.7倍体积诺丽酵素，并以1.0ml/min的吸附流速加入YKDH-2大孔吸附树脂柱中吸附。
一种根据诺丽酵素提取物的制备方法制得的诺丽酵素提取物在抑制用于α-葡萄糖苷酶活性的应用。
一种根据上述诺丽酵素提取物的制备方法制得的诺丽酵素提取物在制备降血糖药物中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明通过采用YKDH-2大孔吸附树脂进行对诺丽酵素进行吸附提纯，并由纯水和50～80％乙醇-水混合溶剂为流动相进行洗脱，得到两部位的高活性的诺丽酵素提取物，其对α-葡萄糖苷酶抑制活性IC50值最高可达2.86mg/mL和4.06mg/mL，并且无诺丽酵素原液的特殊味道，味道偏酸，该诺丽酵素提取物可作为α-葡萄糖苷酶抑制剂，应用降血糖药物中，本发明诺丽酵素提取物的制备工艺简单，成本低廉，原料来源广泛。
本发明工艺简单，成本低廉，所获得的诺丽酵素提取物不仅充分去除诺丽刺激性气味，而且对α-葡萄糖苷酶具有高抑制活性，可有效应用于降血糖药物中。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明使用的诺丽酵素可通过以下制备方法制得：
(1)预处理：将成熟诺丽果的表皮洗净干净，将诺丽果取出，沥干水份后切片，得诺丽果片；
(2)发酵：将诺丽果片、糖和水，按诺丽果片、糖和水的质量比为(3～5):1:(10～14)放入发酵容器中，体积占发酵容器体积的80～85％。密封放置于阴凉处发酵，在发酵的第25～30天，加入糖化酶和乳酸菌，继续密封发酵；密封发酵为在温度15～20℃、相对湿度50～70％的荫蔽环境中进行密封发酵；
(3)发酵管理：在发酵的30天内，每天搅拌1～2次，在发酵的第30～35天，加入醋，搅拌均匀；
(4)待发酵结束后，过滤，收集滤液，得诺丽酵素。
实施例1
诺丽酵素提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)吸附：将100ml诺丽酵素以1.0ml/min的吸附流速加入YKDH-2大孔吸附树脂柱中吸附，YKDH-2大孔吸附树脂柱的径高比为：1∶8；
(2)一次洗脱：采用纯水作为洗脱剂A，以5ml/min的流速进行洗脱，洗脱体积为1000ml，得到洗脱液Ⅰ；
(3)二次洗脱：采用1000ml的65％乙醇-水混合溶剂作为洗脱剂B，以5ml/min的流速进行洗脱，洗脱体积为1000ml，得到洗脱液Ⅱ；
(4)合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ，减压浓缩，干燥，即得到诺丽酵素提取物。其中，洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ均无本来诺丽酵素味道。
实施例2
诺丽酵素提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)YKDH-2大孔吸附树脂的活化处理：将YKDH-2大孔吸附树脂采用2倍柱体积的2.5％HCl溶液，以4倍柱体积/h流速通过树脂柱，并浸泡5.5h后，用水以同样流速洗至出水pH呈中性；再采用2倍柱体积的1.5％NaOH溶液，以4倍柱体积/h的流速通过树脂柱，并浸泡5.5h后，用水以同样流速洗至出水pH呈中性，即得到活化YKDH-2大孔吸附树脂柱；
(2)吸附：将诺丽酵素以1.0ml/min的吸附流速加入活化处理后的YKDH-2大孔吸附树脂柱中进行吸附处理；
(3)一次洗脱：采用纯水作为洗脱剂A，以5.0ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅰ；
(4)二次洗脱：采用65％乙醇-水混合溶剂作为洗脱剂B，以5.0ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ；
(5)合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ，减压浓缩，干燥，即得到诺丽酵素提取物。其中，洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ均无本来诺丽酵素味道。
实施例3
诺丽酵素提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)YKDH-2大孔吸附树脂的活化处理：将YKDH-2大孔吸附树脂采用2倍柱体积的2.5％HCl溶液，以4倍柱体积/h流速通过树脂柱，并浸泡5.5h后，用水以同样流速洗至出水pH呈中性；再采用2倍柱体积的1.5％NaOH溶液，以4倍柱体积/h的流速通过树脂柱，并浸泡5.5h后，用水以同样流速洗至出水pH呈中性，即得到活化YKDH-2大孔吸附树脂柱；
(2)诺丽酵素的真空减压浓缩：将诺丽酵素于0.065Mpa真空度，40℃水浴温度的条件下，进行减压浓缩至0.6倍体积诺丽酵素；
(3)吸附：将步骤(2)获得的诺丽酵素以1.0ml/min的吸附流速加入YKDH-2大孔吸附树脂柱中吸附；
(4)一次洗脱：采用纯水作为洗脱剂A，以5.0ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅰ；
(5)二次洗脱：采用65％乙醇-水混合溶剂作为洗脱剂B，以5.0ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ；
(6)合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ，减压浓缩，干燥，即得到诺丽酵素提取物。其中，洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ均无本来诺丽酵素味道。
实施例4
诺丽酵素提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)YKDH-2大孔吸附树脂的活化处理：将YKDH-2大孔吸附树脂采用2倍柱体积的2％HCl溶液，以3倍柱体积/h流速通过树脂柱，并浸泡5h后，用水以同样流速洗至出水pH呈中性；再采用2倍柱体积的1％NaOH溶液，以3倍柱体积/h的流速通过树脂柱，并浸泡5h后，用水以同样流速洗至出水pH呈中性，即得到活化YKDH-2大孔吸附树脂柱；
(2)诺丽酵素的真空减压浓缩：将诺丽酵素于0.06Mpa真空度，35℃水浴温度的条件下，进行减压浓缩至0.5倍体积诺丽酵素；
(3)吸附：将步骤(2)获得的诺丽酵素以0.5ml/min的吸附流速加入YKDH-2大孔吸附树脂柱中吸附；
(4)一次洗脱：采用纯水作为洗脱剂A，以4.5ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅰ；
(5)二次洗脱：采用50％乙醇-水混合溶剂作为洗脱剂B，以4.5ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ；
(6)合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ，减压浓缩，干燥，即得到诺丽酵素提取物。其中，洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ均无本来诺丽酵素味道。
实施例5
诺丽酵素提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)YKDH-2大孔吸附树脂的活化处理：将YKDH-2大孔吸附树脂采用2倍柱体积的3％HCl溶液，以5倍柱体积/h流速通过树脂柱，并浸泡6h后，用水以同样流速洗至出水pH呈中性；再采用2倍柱体积的2％NaOH溶液，以5倍柱体积/h的流速通过树脂柱，并浸泡6h后，用水以同样流速洗至出水pH呈中性，即得到活化YKDH-2大孔吸附树脂柱；
(2)诺丽酵素的真空减压浓缩：将诺丽酵素于0.07Mpa真空度，45℃水浴温度的条件下，进行减压浓缩至0.7倍体积诺丽酵素；
(3)吸附：将步骤(2)获得的诺丽酵素以1.5ml/min的吸附流速加入YKDH-2大孔吸附树脂柱中吸附；
(4)一次洗脱：采用纯水作为洗脱剂A，以5.5ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅰ；
(5)二次洗脱：采用80％乙醇-水混合溶剂作为洗脱剂B，以5.5ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ；
(6)合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ，减压浓缩，干燥，即得到诺丽酵素提取物。其中，洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ均无本来诺丽酵素味道。
对比例1
根据实施例1的诺丽酵素提取物的制备方法，区别在于，步骤(4)和(5)中，采用以纯水和40％的乙醇-水混合溶剂作为洗脱剂，进行分别洗脱，分别得到洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ；其中，洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ均无本来诺丽酵素味道。合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ，减压浓缩，干燥，得到诺丽酵素提取物。
对比例2
根据实施例1的诺丽酵素提取物的制备方法，区别在于，步骤(4)和(5)中，采用以纯水和100％的乙醇溶剂作为洗脱剂，进行分别洗脱，分别得到洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ；其中，洗脱液Ⅰ无本来诺丽酵素味道，洗脱液Ⅱ有本来诺丽酵素味道。合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ，减压浓缩，干燥，得到诺丽酵素提取物。
对比例3
根据实施例1的诺丽酵素提取物的制备方法，区别在于，采用D201大孔树脂替代YKDH-2大孔吸附树脂，层析洗脱条件为：以纯水和65％的乙醇-水混合溶剂为洗脱剂，进行分别洗脱，分别得到洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ；其中，洗脱液Ⅰ无本来诺丽酵素味道，洗脱液Ⅱ有本来诺丽酵素味道，并且对色素不进行吸附。合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ，减压浓缩，干燥，得到诺丽酵素提取物。
对比例4
根据实施例1的诺丽酵素提取物的制备方法，区别在于，采用D201大孔树脂替代YKDH-2大孔吸附树脂，层析洗脱条件为：以40％的乙醇-水混合溶剂和100％的乙醇-水混合溶剂为洗脱剂，进行分别洗脱，分别得到洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ；其中，洗脱液Ⅰ无本来诺丽酵素味道，洗脱液Ⅱ有本来诺丽酵素味道，并且对色素不进行吸附。合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ，减压浓缩，干燥，得到诺丽酵素提取物。
根据上述实施例和对比例的诺丽酵素提取物的制备方法，分别对诺丽果酵素提取物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性测试。
测试方法：
(1)将诺丽酵素提取物采用PBS(磷酸盐缓冲液)配制成0.6、0.3、0.15mg/mL储备液；配制浓度为2U的酶溶液以及2.5mmol/L的底物PNPG待用；
(2)取96孔板一块，依次加入缓冲液；加入稀释后诺丽酵素提取物(3组平行1组对照，共4组)，平行组加入10μl配制好的酶溶液，对照组加入同体积0.01M PBS缓冲液，混匀后均加入20μl底物PNPG，另设置空白对照，只加缓冲液，其余操作同上。混匀后放置在37℃恒温培养箱中15min，采用酶标仪测定其吸光度，以阿卡波糖作为标准对照。
以α-葡萄糖苷酶抑制率判断诺丽酵素对α-葡萄糖苷酶的影响，根据下面公式计算抑制率(Inhibitory rate)＝(诺丽酵素提取物OD值-对照组OD值/对照组OD值)×100％，通过抑制率计算IC50值。
(3)同上述的α-葡萄糖苷酶抑制活性测试方法，分别取各实施例中制备得的洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ进行α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定，实验结果见表1。
表1诺丽酵素两个部分α-葡萄糖苷酶抑制活性IC50值
(注：-为不具有活性)
由上表可以看出，本发明采用YKDH-2大孔吸附树脂进行对诺丽酵素进行吸附提纯，并由纯水和50～80％乙醇-水混合溶剂为流动相进行洗脱，得到的诺丽酵素提取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性具有显著的抑制活性，其分别由纯水和50～80％乙醇-水混合溶剂洗脱获得的两部位的洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ均具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，并且均无本来诺丽酵素味道，其在实施例3中对α-葡萄糖苷酶抑制活性IC50值最高可达2.86mg/mL和4.06mg/mL，表明本发明制得的诺丽酵素提取物可作为α-葡萄糖苷酶抑制剂，应用降血糖药物中，活性高，并且去除诺丽刺激性气味。
同时，由对比例1和2中，洗脱液Ⅱ的α-葡萄糖苷酶抑制活性明显降低，而对比例3和4中制备得到的诺丽酵素提取物对α-葡萄糖苷酶无抑制活性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种诺丽酵素提取物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)吸附：将诺丽酵素以0.5～1.5ml/min的吸附流速加入YKDH-2大孔吸附树脂柱中吸附；
(2)一次洗脱：采用纯水作为洗脱剂A，以4～6ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅰ；
(3)二次洗脱：采用50～80％乙醇-水混合溶剂作为洗脱剂B，以3～6ml/min的流速进行洗脱，得到洗脱液Ⅱ；
(4)合并洗脱液Ⅰ和洗脱液Ⅱ，减压浓缩，干燥，即得到诺丽酵素提取物。
2.如权利要求1所述的一种诺丽酵素提取物的制备方法，其特征在于：所述YKDH-2大孔吸附树脂柱的径高比为：1∶8。
3.如权利要求1所述的一种诺丽酵素提取物的制备方法，其特征在于：所述诺丽酵素与洗脱剂A、洗脱剂B的洗脱体积比为1:10:10。
4.如权利要求1所述的一种诺丽酵素提取物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，还包括YKDH-2大孔吸附树脂的活化处理，在树脂吸附前，将YKDH-2大孔吸附树脂采用2倍柱体积的2～3％HCl溶液，以3～5倍柱体积/h流速通过树脂柱，并浸泡5～6h后，用水以同样流速洗至出水pH呈中性；再采用2倍柱体积的1～2％NaOH溶液，以3～5倍柱体积/h的流速通过树脂柱，并浸泡5～6h后，用水以同样流速洗至出水pH呈中性，即得到活化YKDH-2大孔吸附树脂柱。
5.如权利要求1所述的一种诺丽酵素提取物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，还包括对诺丽酵素的真空减压浓缩，在进行树脂吸附前，将诺丽酵素于0.06～0.07Mpa真空度，35～45℃水浴温度的条件下，进行减压浓缩至0.5～0.7倍体积诺丽酵素，并以1.0ml/min的吸附流速加入YKDH-2大孔吸附树脂柱中吸附。
6.一种如权利要求1所述的诺丽酵素提取物的制备方法制得的诺丽酵素提取物的应用，其特征在于，诺丽酵素提取物在抑制用于α-葡萄糖苷酶活性的应用。
7.一种如权利要求1所述的诺丽酵素提取物的制备方法制得的诺丽酵素提取物在制备降血糖药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110862581.XA CN115671179A (zh) | 2021-07-29 | 2021-07-29 | 一种诺丽酵素提取物的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110862581.XA CN115671179A (zh) | 2021-07-29 | 2021-07-29 | 一种诺丽酵素提取物的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115671179A true CN115671179A (zh) | 2023-02-03 |
Family
ID=85059354
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110862581.XA Pending CN115671179A (zh) | 2021-07-29 | 2021-07-29 | 一种诺丽酵素提取物的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115671179A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107232588A (zh) * | 2017-05-22 | 2017-10-10 | 海南师范大学 | 一种诺丽果酵素的加工方法 |
| CN109053530A (zh) * | 2018-08-17 | 2018-12-21 | 海南师范大学 | 一种诺丽酵素中吡咯衍生物类化合物及其制备方法与应用 |
| CN112645950A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-04-13 | 海南师范大学 | 诺丽酵素中吲哚生物碱类化合物及其制备方法与应用 |
-
2021
- 2021-07-29 CN CN202110862581.XA patent/CN115671179A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107232588A (zh) * | 2017-05-22 | 2017-10-10 | 海南师范大学 | 一种诺丽果酵素的加工方法 |
| CN109053530A (zh) * | 2018-08-17 | 2018-12-21 | 海南师范大学 | 一种诺丽酵素中吡咯衍生物类化合物及其制备方法与应用 |
| CN112645950A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-04-13 | 海南师范大学 | 诺丽酵素中吲哚生物碱类化合物及其制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| LEE S.Y,ET AL: "Antidiabetic Effect of Morinda citrifolia (Noni) Fermented by Cheonggukjang in KK-Ay Diabetic Mice", EVIDENCE-BASED COMPLEMENTRAY AND ALTERNATIVE MEDICINE, pages 1 * |
| 杨焱,等: "诺丽果粉对四氧嘧啶致糖尿病小鼠的降血糖作用", 热带农业科技, vol. 40, no. 04, pages 31 - 34 * |
| 梁寒峭,等: "诺丽发酵果汁中抗氧化物质的研究", 天然产物研究与开发, vol. 28, no. 09, pages 1479 - 1483 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112156119A (zh) | 木棉花醇提物的应用及抑制痤疮丙酸杆菌的药剂 | |
| CN114645069B (zh) | 一种多甲氧基黄酮及其全水相制备方法与应用 | |
| CN113355372A (zh) | 对黄浆水纯化并提取大豆异黄酮苷元的工艺 | |
| CN115671179A (zh) | 一种诺丽酵素提取物的制备方法 | |
| CN106138130B (zh) | 一种芒果核黄酮提取物及其制备方法 | |
| CN104450822A (zh) | 一种以茶多酚生产废水为原料生产茶黄素的方法 | |
| CN104592336A (zh) | 一种蛹虫草中虫草素的提取方法 | |
| CN110144015B (zh) | 一种灵芝多糖、灵芝三萜酸及氨基酸的同步提取纯化方法 | |
| CN113861253B (zh) | 一种京尼平苷酸单体的制备方法及应用 | |
| CN107988280B (zh) | 从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法 | |
| CN115990213A (zh) | 一种具有降尿酸作用的黑莓叶提取物及其制备方法和应用 | |
| CN112402519B (zh) | 一种缬草总生物碱提取物及其制备方法 | |
| WO2022142561A1 (zh) | 一种诺丽酵素中季铵盐生物碱类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN112493484B (zh) | 一种富含梅素的青梅精及高纯度青梅梅素的制备方法 | |
| CN106563043B (zh) | 一种从废弃的剑麻渣中提取抗氧化活性物质的方法 | |
| CN108276467A (zh) | 一种茶皂素及其提取工艺和应用 | |
| CN114573646A (zh) | 一种从木贼麻黄中提取的三个新化合物及其制备方法和应用 | |
| CN114404460A (zh) | 杨叶肖槿内生真菌发酵提取物及其制备方法与应用 | |
| CN109876021B (zh) | 富含聚炔类化合物的荷叶离褶伞提取物的制备方法及其降糖用途 | |
| CN101824059A (zh) | 一种低糖链高活性的新茶皂甙及其生物转化方法 | |
| CN112410142B (zh) | 一种利用发酵啤酒花制备高含量多酚化合物功能食品的方法 | |
| CN105646627B (zh) | 一种从蛹虫草培养液中提取纯化虫草素的方法 | |
| CN109280092A (zh) | 一种粗品肝素钠的提纯方法 | |
| CN109180699A (zh) | 一种榛子叶活性成分制备技术 | |
| CN114568564B (zh) | 高茶多酚高咖啡因冷溶型茶粉的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20230203 |