CN115669802A

CN115669802A - 一种提高抗应激能力的中药组合物、饲料添加剂及其制备方法和应用

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Publication number: CN115669802A
Application number: CN202211011664.9A
Authority: CN
Inventors: 马忠乐; 李建涛; 张宇宏; 王涛; 韩淑敏
Original assignee: Liaoning Jiuzhou Biotechnology Co ltd
Current assignee: Liaoning Jiuzhou Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-08-23
Filing date: 2022-08-23
Publication date: 2023-02-03
Anticipated expiration: 2042-08-23
Also published as: CN115669802B

Abstract

本发明涉及动物养殖领域，特别是涉及一种提高抗应激能力的中药组合物、饲料添加剂及其制备方法和应用。本发明提供了一种提高抗应激能力的中药组合物，所述中药组合物包括以下质量百分含量的原料：10～20％茯苓、35～45％松针、10～20％黄芪、10～20％当归和10～20％甘草。本发明所述中药组合物其利用率高，且能够提高动物的抗应激能力，促进动物的生长发育。

Description

一种提高抗应激能力的中药组合物、饲料添加剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及动物养殖领域，特别是涉及一种提高抗应激能力的中药组合物、饲料添加剂及其制备方法和应用。

背景技术

在畜牧养殖和饲料加工行业，长期使用抗生素容易产生耐药性，并且会在畜产品中残留，造成的危害有时比动物自身患病更为严重，比如动物产品中药物残留、耐药菌株出现、激素超标致使儿童早熟、生态环境恶化等一系列问题。我国己经采取措施，禁用抗生素、激素等物质，但要从根本上解决问题就必须从长远出发，另辟蹊径。中药具有与食物同源、同体、同用的特点，兼有营养与药物的双重作用，其免疫活性物质能增强机体免疫机能、提高动物抗应激、抗疾病能力、改善动物生产性能，同时还有毒副作用小、无耐药性、不易残留等优点。唯一会有影响的就是有效成分利用率的问题。在经过初步研究和查阅相关文献后发现，中草药之所以难利用的原因是因为其植物细胞中富含较多的纤维素，传统的处理方法如粉碎和炮煎炙煨等不能很好的分解掉纤维素，使包裹在其内的有效成分难以释放，从而导致其抗应激的能力效果不好，因此，在此研究中加入了针对增强中草药中有效成分利用率的相关预处理方法的研究。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种提高抗应激能力的中药组合物及其制备方法和应用。本发明所述中药组合物其利用率高，且能够提高动物的抗应激能力。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种提高抗应激能力的中药组合物，所述中药组合物包括以下质量百分含量的原料：10～20％茯苓、35～45％松针、10～20％黄芪、10～20％当归和10～20％甘草。

本发明提供了上述技术方案所述中药组合物的制备方法，包括以下步骤：

将茯苓、松针、黄芪、当归和甘草混合，得中药组合物；

优选的，所述黄芪为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的黄芪；

所述甘草为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的甘草；

所述当归为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的当归；

所述茯苓为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的茯苓；

所述松针为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的松针。

优选的，所述酶解处理时，采用的复合酶制剂包括木聚糖酶、纤维素酶和漆酶；所述以每g复合酶制剂计，木聚糖酶的活力为8000u/g，纤维素酶的活力为 30u/g，漆酶的活力为4000u/g；

所述微生物发酵处理时，采用的菌剂包括地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和黑曲霉；

所述菌酶协同发酵处理时，采用的复合酶制剂包括木聚糖酶、纤维素酶和漆酶；以每g复合酶制剂计，木聚糖酶的活力为8000u/g，纤维素酶的活力为30u/g，漆酶的活力为4000u/g；所述菌酶协同发酵时，采用的菌剂包括地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和黑曲霉。

优选的，所述酶解处理的时间为6～12h，温度为50～60℃；所述微生物发酵的时间3～7d，温度为30～40℃；所述菌酶协同发酵的时间为3～5d，温度为 30～40℃。

本发明提供了一种提高抗应激的饲料添加剂，所述饲料添加剂的有效成分包括上述技术方案所述中药组合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的中药组合物。

优选的，所述饲料添加剂还包括载体、葡萄糖、枯草芽孢杆菌、酵母培养物、微量元素、复合维生素、维生素C和抗氧化剂。

优选的，所述饲料添加剂包括以下质量百分含量的组分：35～45％上述技术方案所述中药组合物、葡萄糖9～10％、枯草芽孢杆菌1～2％、酵母培养物35～45％、载体7～9％、微量元素0.6～0.8％、复合维生素0.3～0.4％、维生素C 0.5～1％和抗氧化剂0.03～0.2％。

本发明提供了一种提高抗应激的饲料，所述饲料包括日粮和有效成分；所述有效成分包括上述技术方案所述中药组合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的中药组合物或上述技术方案所述的饲料添加剂。

本发明提供了上述技术方案所述中药组合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的中药组合物或上述技术方案所述的饲料添加剂或上述技术方案所述饲料在提高抗应激中的应用。

有益效果：

本发明提供了一种提高抗应激能力的中药组合物，所述中药组合物包括以下质量百分含量的原料：10～20％茯苓、35～45％松针、10～20％黄芪、10～20％当归和10～20％甘草。本发明所述中药组合物中黄芪为君药，补中益气，增强机体免疫功能、提高抗病力、抑制细菌或病毒性疾病；当归和茯苓为臣药，当归发挥补血活血，促进机体造血功能，可辅助增强免疫，保护肝脏的作用，茯苓发挥健脾宁心，护肝作用，对胃肠道也有一定的保护作用，茯苓多糖可增强免疫的作用；松针和甘草作为佐药，松针发挥健脾理气，祛风燥湿，起到镇静、解热、抗炎的作用，同时还有抑菌作用和抗氧化作用，甘草起补脾益气、和中缓急、缓解毒性的作用；同时甘草为使药，可以调和诸药的药性。同时，本发明所述组合物属于药食同源、同体、同用，兼有营养与饲料添加剂双重作用，相比西药更加注重整体恢复，作用温和，副作用小。本发明通过5种中药的协同增效能够降低动物的应激反应，提高动物的生长发育。本发明具体实施例结果证明：该中药组合物能很明显的增加白羽肉鸡在各阶段的采食量并提高日增重，减少料肉比，还能增强机体免疫能力和各种应急的抵抗能力，促进白羽肉鸡的生长性能。

本发明还提供了上述中药组合物的制备方法，该制备方法能够使中药中大分子有效成分降解为小分子有效成分，有利于动物吸收，且制作方法简单。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为多糖的标准曲线图；

图2为黄酮的标准曲线图；

图3为没食子酸标准曲线图；

图4为应用例1的技术路线图；

图5为0％对照组和0.5％低剂量组十二指肠U形部组织切片染色示意图，其中0.5％低组为0.5％低剂量组；

图6为1％中剂量组和1.5％高剂量组十二指肠U形部组织切片染色示意图，其中1％中组为1％中剂量组，1.5％高组为1.5％高剂量组。

具体实施方式

如无特殊要求，本发明所述原料均为本领域技术人员常规购买所得即可。

本发明提供了一种提高抗应激能力的中药组合物，所述中药组合物包括以下质量百分含量的原料：10～20％茯苓、35～45％松针、10～20％黄芪、10～20％当归和10～20％甘草，优选包括：12～18％茯苓、36～42％松针、13～19％黄芪、11～17％当归和14～19％甘草，更优选包括：15％茯苓、40％松针、15％黄芪、15％当归和 15％甘草。

本发明所述中药组合物中原料的用量均符合《中国兽药典》中的规定。在本发明中，所述动物优选包括养殖动物，更优选包括反刍动物、猪或家禽；所述反刍动物包括牛和羊等反刍动物，所述家禽包括肉鸡、蛋鸡和鸭等家禽；所述肉鸡优选包括白羽肉鸭。

本发明所述黄芪优选为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的黄芪，更优选为酶解处理；所述甘草优选为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的甘草，更优选为酶解处理；所述当归优选为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的当归，更优选为菌酶协同发酵处理；所述茯苓优选为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的茯苓，更优选为酶解处理；所述松针优选为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的松针，更优选为酶解处理。

本发明所述中药组合物中黄芪为君药，补中益气，增强机体免疫功能、提高抗病力、抑制细菌或病毒性疾病；当归和茯苓为臣药，当归发挥补血活血，促进机体造血功能，可辅助增强免疫，保护肝脏的作用，茯苓发挥健脾宁心，护肝作用，对胃肠道也有一定的保护作用，茯苓多糖可增强免疫的作用；松针和甘草作为佐药，松针发挥健脾理气，祛风燥湿，起到镇静、解热、抗炎的作用，同时还有抑菌作用和抗氧化作用，甘草起补脾益气、和中缓急、缓解毒性的作用；同时甘草为使药，可以调和诸药的药性。本发明通过5种中药的协同增效能够降低动物的应激反应，提高动物的生长发育。

将茯苓、松针、黄芪、当归和甘草混合，得中药组合物。

本发明将茯苓、松针、黄芪和甘草混合，得中药组合物。本发明所述黄芪优选为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的黄芪，更优选为酶解处理；所述甘草优选为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的甘草，更优选为酶解处理；述当归优选为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的当归，更优选为菌酶协同发酵处理；所述茯苓优选为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的茯苓，更优选为酶解处理；所述松针优选为经酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的松针，更优选为酶解处理。本发明对不同中药原料进行酶解处理时，酶解处理条件可选择条件范围优选一样；对不同中药原料进行微生物发酵处理时，微生物发酵处理方式可选择条件范围优选一样；对不同中药原料进行菌酶协同发酵处理时，菌酶协同发酵处理方式可选择条件范围优选一样。

以黄芪为例，本发明所述酶解处理时，优选采用复合酶制剂；所述复合酶制剂优选包括木聚糖酶、纤维素酶和漆酶；以每g复合酶制剂计，木聚糖酶的活力优选为8000u/g，纤维素酶的活力优选为30u/g，漆酶的活力优选为4000u/g；所述酶解处理的时间优选为6～12h，进一步优选为6～10h，更优选为6～8h，最优选为6h；所述酶解处理的温度优选为50～60℃，更优选为52～68℃，最优选为55℃；以初始水分黄芪干物质的质量计，所述复合酶制剂的添加量优选为3～5kg/t，更优选为5kg/t；以初始水分黄芪的干物质质量计，所述复合酶制剂的添加量优选为黄芪的干物质质量的3‰～5‰，更优选为5‰。在本发明中，所述酶解处理时，黄芪的含水量优选为45～55wt.％，更优选为50～55wt.％，最优选为50wt.％。本发明对所述复合酶制剂的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员常规购买所得即可；在本发明具体实施例中，所述复合酶制剂优选购自赤峰圣龙生物科技有限公司。本发明在特殊的酶解条件下能够得到中药的有效成分的最高含量。本发明所述初始水分黄芪的质量优选指的是购买中药时黄芪的质量。

所述酶解处理前，本发明优选将黄芪进行粉碎；本发明对所述粉碎的方式没有任何要求，采用本领域技将人员所熟知的方式即可；所述粉碎后所得黄芪的粒径优选过120目筛。

所述酶解处理后，本发明还优选包括对黄芪酶解所得产物进行粉碎和烘干；所述烘干的温度优选为40～60℃，最优选为55℃；所述烘干的结束标准优选为烘干后所得的烘干产物含水量达到初始水分；本发明所述初始水分含量详见表1。本发明对所述粉碎的方式没有任何要求，采用本领域技将人员所熟知的方式即可；所述粉碎后所得黄芪的粒径优选过120目筛。

本发明所述茯苓、松针粉和甘草的酶解处理过程和粉碎烘干的条件参数同黄芪。

以黄芪为例，本发明所述微生物发酵处理时，采用的菌剂优选包括地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和黑曲霉；以黄芪干物质的质量计，所述微生物发酵时，菌剂的添加量优选为5×10⁶CFU/g～5×10⁹CFU/g，进一步优选为 6×10⁶CFU/g～3×10⁹CFU/g，更优选为8×10⁶CFU/g～6×10⁸CFU/g，最优选为 5×10⁷CFU/g；所述菌剂中地衣芽孢杆菌菌活优选为1000亿CFU/g，所述凝结芽孢杆菌的菌活优选为100亿CFU/g，所述黑曲霉的菌活优选为1000亿CFU/g。在本发明中，所述菌剂的剂型优选为粉剂；所述地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和黑曲霉优选以菌粉的形式存在；所述菌剂中地衣芽孢杆菌菌粉、凝结芽孢杆菌菌粉和黑曲霉菌粉的质量比优选为1:10:1；所述菌剂中地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和黑曲霉的菌活比优选为1:1:1。本发明所述微生物发酵处理的时间优选3～7d，更优选为4～6d，最优选为5d；所述微生物发酵处理的温度优选为30～40℃，更优选为32～37℃，最优选为35℃。在本发明中，所述微生物发酵处理时，黄芪的含水量优选为40～50wt.％，更优选为43～48wt.％，最优选为45wt.％。本发明提供的三个菌之间具有协同作用，而且在本发明在特殊的生物发酵条件条件下能够得到最好的中药有效成分。

所述微生物发酵处理前，本发明优选将黄芪进行粉碎；本发明对所述粉碎的方式没有任何要求，采用本领域技将人员所熟知的方式即可；所述粉碎后所得黄芪的粒径优选过120目筛。

所述微生物发酵处理后，本发明还优选包括对黄芪微生物发酵所得产物进行粉碎和烘干；所述烘干的温度优选为30～40℃，最优选为35℃；所述烘干的结束标准优选为烘干后所得的烘干产物含水量达到初始水分；本发明所述初始水分含量详见表1。本发明对所述粉碎的方式没有任何要求，采用本领域技将人员所熟知的方式即可；所述粉碎后所得黄芪的粒径优选过120目筛。

本发明所述本发明所述茯苓、松针粉和甘草的微生物发酵过程和粉碎烘干的条件参数同黄芪。

以黄芪为例，本发明所述菌酶协同发酵处理时，采用的菌剂优选包括地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和黑曲霉；以黄芪干物质的质量计，所述微生物发酵时，菌剂的添加量优选为5×10⁶CFU/g～5×10⁹CFU/g，进一步优选为6×10⁶CFU/g～3×10⁹CFU/g，更优选为8×10⁶CFU/g～6×10⁸CFU/g，最优选为 5×10⁷CFU/g；所述菌剂中地衣芽孢杆菌菌活优选为1000亿CFU/g，所述凝结芽孢杆菌的菌活优选为100亿CFU/g，所述黑曲霉的菌活优选为1000亿CFU/g；在本发明中，所述菌剂的剂型优选为粉剂；所述地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和黑曲霉优选以菌粉的形式存在；所述菌剂中地衣芽孢杆菌菌粉、凝结芽孢杆菌菌粉和黑曲霉菌粉的质量比优选为1:10:1；所述菌剂中地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和黑曲霉的菌活比优选为1:1:1。本发明优选采用复合酶制剂；所述复合酶制剂优选包括木聚糖酶、纤维素酶和漆酶；以每g复合酶制剂计，木聚糖酶的活力优选为8000u/g，纤维素酶的活力优选为30u/g，漆酶的活力优选为4000u/g；以黄芪干物质的质量计，所述复合酶制剂的添加量优选为3～5kg/t，更优选为5kg/t。本发明所述菌酶协同发酵处理的时间优选3～7d，更优选为4～6d，最优选为5d；所述菌酶协同发酵处理的温度优选为30～40℃，更优选为32～37℃，最优选为 35℃。在本发明中，所述菌酶协同发酵处理时，黄芪的含水量优选为40～50wt.％，更优选为43～48wt.％，最优选为45wt.％。本发明在特殊的菌酶协同发酵处理条件下能够得到最好的中药有效成分。

所述菌酶协同发酵处理前，本发明优选将黄芪进行粉碎；本发明对所述粉碎的方式没有任何要求，采用本领域技将人员所熟知的方式即可；所述粉碎后所得黄芪的粒径优选过120目筛。

所述菌酶协同发酵处理后，本发明还优选包括对黄芪菌酶协同发酵所得产物进行粉碎和烘干；所述烘干的温度优选为30～40℃，最优选为35℃；所述烘干的结束标准优选为烘干后所得的烘干产物含水量达到初始水分；本发明所述初始水分含量详见表1。本发明对所述粉碎的方式没有任何要求，采用本领域技将人员所熟知的方式即可；所述粉碎后所得黄芪的粒径优选过120目筛。

本发明对所述地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和黑曲霉的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员常规购买所得即可；在本发明具体实施例中，所述地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌优选购自青岛根源生物技术集体有限公司，所述黑曲霉优选购自康源生物科技有限公司。

本发明所述本发明所述茯苓、松针粉和甘草的菌酶协同发酵过程和粉碎烘干的条件参数同黄芪。

根据上述中药组合物的特性，本发明提供了一种提高抗应激能力的饲料添加剂，所述饲料添加剂的有效成分包括上述技术方案所述中药组合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的中药组合物；所述饲料添加剂优选还包括载体、葡萄糖、枯草芽孢杆菌、酵母培养物、微量元素、复合维生素、维生素C和抗氧化剂；所述载体优选包括蒙脱石，起到稀释的作用。本发明所述饲料添加剂优选为混合型饲料添加剂。

本发明所述饲料添加剂优选包括以下质量百分含量的组分：35～45％所述中药组合物、葡萄糖9～10％、枯草芽孢杆菌0.05～2％、酵母培养物35～45％、载体 7～9％、微量元素0.6～0.8％、复合维生素0.3～0.4％、维生素C 0.5～1％和抗氧化剂 0.05～0.2％，即茯苓、松针粉、黄芪、当归和甘草总共的质量优选占饲料添加剂质量的35～45％，葡萄糖、枯草芽孢杆菌、酵母培养物、载体、微量元素、复合维生素、维生素C和抗氧化剂总共的质量优选占饲料添加剂质量的55～65％。

以质量百分含量计，本发明所述饲料添加剂包括35～45％所述中药组合物，优选包括37～42％，更优选包括40％。

本发明所述饲料添加剂包括9～10％葡萄糖，优选包括9.2～9.8％，更优选包括9.4％。本发明所述葡萄糖能够为微生物提供能量，增加饲料添加剂甜味，提高口感。

本发明所述饲料添加剂包括0.05～2％枯草芽孢杆菌，优选包括0.05～1.5％，更优选包括0.5％。在本发明中，所述枯草芽孢杆菌的菌活为1000亿CFU/g。枯草芽孢杆菌为微生态制剂，提高动物采食，增加养殖端经济效益；酵母培养物可以增加动物营养，提高采食量，增强动物机体免疫力。

本发明所述饲料添加剂包括35～45％酵母培养物，优选包括36～42％，更优选包括40％。

本发明所述饲料添加剂包括7～9％载体，优选包括7.3～8.8％，更优选包括8％。在本发明中，所述载体优选包括蒙脱石散。蒙脱石能够增加产品的流动性，同时蒙脱石具有吸附霉菌毒素的作用。

本发明所述饲料添加剂包括0.6～0.8％微量元素，优选包括0.64～0.75％，更优选包括0.7％。

本发明所述饲料添加剂包括0.3～0.4％复合维生素，优选为0.35～0.4％，更优选为0.4％。微量元素和复合维生素为动物机体补充微量元素和维生素。

本发明所述饲料添加剂包括0.5～1％维生素C，优选包括0.8～1％，更优选包括0.97％。维生素C能够防止动物在应激条件下缺少维生素C。

本发明所述饲料添加剂包括0.03～0.2％抗氧化剂，优选包括0.03～0.1％，更优选包括0.03％。抗氧化剂可以防止产品氧化。本发明对所述抗氧化剂的品种没有特殊限定，采用本领域技术人员常规购买所得即可。

在本发明中，每头牛每天优选饲喂150g本发明所述饲料添加剂，羊每只每天优选饲喂50g本发明所述饲料添加剂，猪每天每头优选饲喂30g本发明所述饲料添加剂。

根据上述中药组合物的特性，本发明还提供了一种提高抗应激能力的饲料，所述饲料包括日粮和有效成分；所述有效成分包括上述技术方案所述中药组合物或上述技术方案所述制备方法制备得到的中药组合物或上述技术方案所述的饲料添加剂；所述有效成分的质量优选占日粮质量的0.5～1.5％，更优选为0.8～1.3％，最优选为1.0％。本发明对所述日粮没有特殊限定，采用本领域技术人员常规购买所得即可；在本发明具体实施例中，所述日粮优选购自辽宁九州生物科技有限公司。在本发明中，所述动物优选包括养殖动物，更优选包括反刍动物、猪或家禽；所述反刍动物包括牛和羊等反刍动物，所述家禽包括白羽肉鸡等家禽。

本发明所述中药组合物能很明显的增加动物在各阶段的采食量并提高日增重，减少料肉比，还能增强机体免疫能力和各种应急的抵抗能力，促进的生长性能。因此，本发明所述中药组合物能够用于促进动物生长和提高抗应激中的应用。

根据上述中药组合物的优势，本发明提供了上述技术方案所述中药组合物或上述技术方案所述饲料添加剂或上述技术方案所述饲料在提高抗应激中的应用。

为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种提高抗应激能力的中药组合物及其制备方法和应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

准备例

将所购买的五味中草组分，全部粉碎，过120目筛，该五味中药组分为黄芪、甘草、当归、茯苓和松针，其中各个中药的初始水分含量如表1所示。

后续实施例均采用准备例粉碎过筛后的中药组分。

本发明采用的设备均来自九州大地股份辽宁公司。

表1不同药材的水分含量

实施例1

称取30g黄芪，用微生物发酵的方法进行处理，其中生物发酵的具体条件参数为：

以初始水分的黄芪的质量计，即30g，菌剂的添加量为5×10⁷CFU/g(地衣芽孢杆菌菌粉、凝结芽孢杆菌菌粉、黑曲霉菌菌粉的质量比为1:10:1，即地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌菌活比例1:1:1)，发酵时间为5天，发酵温度为35℃；生物发酵时，黄芪的含水量为45wt.％；

将进行生物发酵处理得到的黄芪进行粉碎和烘干，其中粉碎后所得黄芪的粒径过120目筛，烘干的温度为33～37℃；烘干结束的标准为烘干后所得的烘干产物含水量达到初始水分详见表1。

实施例2

称取30g黄芪，用酶解的方法进行处理，其中酶解的具体条件参数为：

以初始水分的黄芪的质量计，复合酶制剂(以每g复合酶制剂计，木聚糖酶的活力优选为8000u/g，纤维素酶的活力优选为30u/g，漆酶的活力优选为 4000u/g)的添加量为5kg/t，酶解时间为7h，酶解的温度为55℃；酶解时，黄芪的含水量为45wt.％；

将进行酶解处理得到的黄芪进行粉碎和烘干，其中粉碎后所得黄芪的粒径过 120目筛，烘干的温度为55～60℃；烘干结束的标准为烘干后所得的烘干产物含水量达到初始水分详见表1。

实施例3

称取30g黄芪，用菌酶协同发酵的方法进行处理，其中菌酶协同发酵的具体条件参数为：

以初始水分的黄芪的质量计，菌剂的添加量为5×10⁷CFU/g(地衣芽孢杆菌菌粉、凝结芽孢杆菌菌粉、黑曲霉菌菌粉的质量比为1:10:1，即地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、黑曲霉菌菌活比例1:1:1)，以初始水分的黄芪的质量计，复合酶制剂(以每g复合酶制剂计，木聚糖酶的活力优选为8000u/g，纤维素酶的活力优选为30u/g，漆酶的活力优选为4000u/g)的添加量为5kg/t，菌酶协同发酵的时间为5天，菌酶协同发酵的温度为35℃，菌酶协同发酵时，黄芪的含水量为45wt.％；

将进行菌酶协同发酵处理得到的黄芪进行粉碎和烘干，其中粉碎后所得黄芪的粒径过120目筛，烘干的温度为33～37℃；烘干结束的标准为烘干后所得的烘干产物含水量达到初始水分详见表1。

对比例1

称取30g黄芪不进行任何处理。

实施例4

与实施例1步骤相同，唯一区别的地方为组分为当归。

实施例5

与实施例2步骤相同，唯一区别的地方为组分为当归。

实施例6

与实施例3步骤相同，唯一区别的地方为组分为当归。

对比例2

称取30g当归不进行任何处理。

实施例7

与实施例1步骤相同，唯一区别的地方为组分为甘草。

实施例8

与实施例2步骤相同，唯一区别的地方为组分为甘草。

实施例9

与实施例3步骤相同，唯一区别的地方为组分为甘草。

对比例3

称取30g甘草不进行任何处理。

实施例10

与实施例1步骤相同，唯一区别的地方为组分为茯苓。

实施例11

与实施例2步骤相同，唯一区别的地方为组分为茯苓。

实施例12

与实施例3步骤相同，唯一区别的地方为组分为茯苓。

对比例4

称取30g茯苓不进行任何处理。

实施例13

与实施例1步骤相同，唯一区别的地方为组分为松针。

实施例14

与实施例2步骤相同，唯一区别的地方为组分为松针。

实施例15

与实施例3步骤相同，唯一区别的地方为组分为松针。

对比例5

称取30g当归不进行任何处理。

通过测定不同的指标来选择最优的处理方法：当归测定黄酮含量；黄芪、甘草、茯苓测定多糖的含量；松针测定松多酚(没食子酸)的含量。

中草药的提取及测定方法

多糖的提取及测定方法：

多糖的提取方法：准确称取5g的单一中药，置于250mL的锥形瓶中，加入 40ml的蒸馏水(料液比1:8)，放到水浴锅中，90℃的条件下，水浴加热2.5h，得到处理后的中药。

将处理后的中药用纱布过滤，在3500r/min的条件下，离心10min，取上清液，放到旋转蒸发浓缩仪中，将溶液体积浓缩至10mL，加入4～6倍体积的体积百分含量为95％乙醇，摇晃后静置，片刻后会有沉淀析出，将溶液放到离心管中， 3500r/min离心10min弃上清液取沉淀。将沉淀放到65℃干燥箱中干燥1.5h，即可得到粗多糖。

多糖标准曲线的制备：

①苯酚溶液的配制：准确称取苯酚50g，加适量的水溶解，定容到100mL 的容量瓶中，即可得到质量百分含量为50％的苯酚溶液(此溶液可长期保存)，吸取5mL质量百分含量为50％的苯酚溶液，定容到50mL的容量瓶中，得到质量百分含量为5％的苯酚溶液(此溶液现配现用)；

②葡萄糖标准品溶液的配制：准确称取200mg的葡萄糖，定容到100mL的容量瓶，配得浓度为2mg/mL的溶液；取2mL浓度为2mg/mL的溶液，加蒸馏水定容到50mL的容量瓶中，即得到0.08mg/mL的葡萄糖标准品溶液；

③标准曲线的制备：分别吸取0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、 1.2mL的标准品溶液，加蒸馏水至2mL并摇匀；之后加入1mL质量百分含量为 5％的苯酚溶液并摇匀，加5mL的浓硫酸并摇匀，在温室内静置10min，沸水浴 15min，再冰浴冷却至室温。用紫外分光光度计在490nm的波长下测定吸光度，以多糖浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，得到的线性回归方程为y＝9.95x+0.0161，R2＝0.998，具有良好的线性关系，如图1所示。

测定多糖含量：将得到的样品碾碎，用蒸馏水溶解，定容到50mL的容量瓶中，抽取5mL溶液，用蒸馏水定容至100mL的容量瓶中，吸取0.8mL，按步骤③操作，测定吸光值，通过公式M＝(CV/m)*100％计算即得，其中C：测定样品浓度，V：测定样品体积，m：待测样品质量。

黄酮的提取及测定方法：准确称取5g药品置于圆底烧瓶中，加入75mL(料液比1:15)的乙醇，乙醇浓度为70％(v/v)，在70℃的条件下，水浴加热100min。将加热后的溶液过滤，并用相同浓度的乙醇定容至100mL的容量瓶中待测。

标准曲线的制备：①标准品溶液的制备：取芦丁对照品25mg，置于50mL 的容量瓶中，加入少量体积百分含量为95％的乙醇溶解并定容至50mL刻度，摇匀，即得芦丁对照品溶液(0.5mg/mL)；②标准曲线的制备：分别精密吸取芦丁对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，置于10mL的具塞试管中，各加水至5.0mL，之后加入5％的亚硝酸钠溶液0.6mL，摇匀，放6min，再加入的硝酸铝溶液0.6mL，摇匀后放6min，然后加入质量百分含量4％的氢氧化钠溶液 3.0mL，加水至10mL，摇匀后放置15min，用紫外分光光度计在506nm的波长下测定吸光度；以标准品的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，得到的线性回归方程为y＝9.6929x+0.0168，R²＝0.9804，具有良好的线性关系，如图2所示。

松多酚(没食子酸)的提取及测定方法：

松多酚的提取：将松针粉和石油醚按料液比1g:40mL进行浸泡24h，即称取10g松针粉放入广口瓶内，加入400mL石油醚，脱去油脂后，将浸提液过滤掉，剩下的松针粉浸提液将石油醚挥发，精确取脱脂松针粉10g，以体积百分含量为60％的乙醇为溶剂，样品与溶剂料液比为1g:30mL，温度为60℃条件下回流提取4h，回流完毕，过滤得提取液，将滤渣反复提取2次后，收集提取液，真空旋转蒸发后浓缩得到松针多酚提取液。

没食子酸标准曲线的制作：精密称取没食子酸标准品25mg，用蒸馏水溶解并定容至25ml，得1mg/mL的没食子酸标准液。准确吸取1.0、2.0、3.0、4.0、 5.0、6.0mL标准液定容至100mL，得浓度分别为10、20、30、40、50、60μg/mL 没食子酸工作液；分别移取没食子酸工作液1.0mL于10mL棕色容量瓶中，加入 5.0mL体积百分含量为10％的福林酚试剂，摇匀，反应5min后加入4.0mL的质量百分含量为7.5％的Na₂CO₃溶液，摇匀。室温下放置1h后，于765nm波长条件下测定吸光值，用1mL蒸馏水作为空白样取代反应液，在相同的条件下进行操作，测定空白吸光值。以没食子酸含量(μg)为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，标准曲线如图3所示，其中没食子酸标准品10、20、30、40、50、 60μg的吸光度分别：0.128、0.269、0.370、0.484、0.583、0.724，线性回归方程为y＝0.0118x+0.01680.0122，R²＝0.99978。

样品多酚含量的测定：移取松针多酚提取液1.0mL于10mL棕色瓶子里，加入5.0mL的10％福林酚试剂，摇匀；反应5min后加入4.0mL质量百分含量为 7.5％的Na₂CO₃溶液，摇匀。室温下反应60min后，于765nm波下测定吸光值，进行3次平行试验。计算得到样品中多酚总量，多酚含量以每克样品中没食子酸当量计；多酚总量计算公式如下所示：

多酚总量计算公式：

式中：M为样品中总多酚含量mg/g，X 为校准曲线总多酚的浓度μg/mL，N为样品稀释倍数mL，V----样品溶液的体积；， m为样品质量。

数据分析

试验数据经Excel整理后，采用SPSS17.0软件中的one-wayANOVA进行单因素方差分析。分析前对数据进行方差齐性检验(Levene’s)。采用Duncan法进行多重比较。如(P＞0.05)表示差异不显著，(P<0.05)表示差异显著，(P<0.01) 表示差异极显著。数据结果用“平均值±标准差”表示。

不同处理的中药组分中活性成分的影响，见表2。

表2不同处理对中药组分的活性成分的影响

	未处理	酶解	微生物发酵	菌酶协同发酵
					黄芪	24.47<sup>c</sup>±0.57	43.97<sup>a</sup>±0.44	28.12<sup>bc</sup>±0.34	26.37<sup>bc</sup>±0.09
甘草	10.77<sup>b</sup>±0.24	15.08<sup>a</sup>±0.68	11.17<sup>b</sup>±0.58	14.21<sup>a</sup>±0.43
					当归	12.38<sup>d</sup>±0.32	21.86<sup>c</sup>±0.24	53.80<sup>b</sup>±0.44	58.43<sup>a</sup>±1.29
茯苓	22.39<sup>c</sup>±1.97	39.90<sup>a</sup>±1.00	30.89<sup>b</sup>±2.14	41.62<sup>a</sup>±1.38
					松针	22.97<sup>c</sup>±0.35	68.62<sup>a</sup>±0.21	36.53<sup>b</sup>±0.33	38.91<sup>b</sup>±0.43

注：表中同列数值肩标字母相同表示差异不显著(P>0.05)，肩标字母不同表示差异显著(P<0.05)，下同。

由表2记载的可知，采用酶解处理、微生物发酵处理和菌酶协同发酵处理得到的中药组分其有效成分的含量均有不同程度的提升。考虑到成本问题时，这五种中药中黄芪、甘草、茯苓和松针采取酶解方式预处理效果最佳，当归采取菌酶协同发酵效果最佳。

实施例16

称取60g茯苓、120g松针、60g黄芪、60g当归和60g甘草。

其中茯苓采用实施例2的方法进行处理，松针采用实施例2的方法进行处理，黄芪采用实施例2的方法进行处理，当归采用实施例3的方法进行处理，甘草采用实施例2的方法进行处理；因干物质损耗较少，因此忽略不计；

将上述处理得到的中药组分混合，得中药组合物；

将中药组合物与葡萄糖94g、枯草芽孢杆菌5g、酵母培养物400g、蒙脱石 80g、微量元素7g、复合维生素4g、维生素C 9.7g和抗氧化剂0.3g混合，得到饲料添加剂。

实施例16-2

按照实施例16的方式制备中药组合物，区别在于，黄芪进行发酵处理。

实施例16-3

按照实施例16的方式制备中药组合物，区别在于，黄芪进行菌酶协同发酵处理。

实施例16-4

按照实施例16的方式制备中药组合物，区别在于，甘草进行菌酶协同发酵处理。

实施例16-5

按照实施例16的方式制备中药组合物，区别在于，甘草进行发酵处理处理。

应用例1

本试验拟采用单因子试验设计初步探讨在肉鸡日粮中添加不同比例的预处理后的实施例16制备得到的饲料添加剂对白羽肉鸡的生长性能和抗应激能力的影响，同时通过试验确定实施例16制备得到的饲料添加剂用作添加剂时在白羽肉鸡日粮中的适宜添加量；具体方法如下(图4)：

将100只3日龄白羽肉仔鸡分为四组，第一组为肉鸡日粮+肉鸡日粮质量 0.5％的中药组合物，记为0.5％低剂量组，第二组为肉鸡日粮+肉鸡日粮质量1％的饲料添加剂，记为1％中剂量组，第三组为肉鸡日粮+肉鸡日粮质量1.5％的饲料添加剂，记为1.5％高剂量组，第一组为肉鸡日粮+肉鸡质量0％的饲料添加剂，记为0％对照组组，每组重复5次，共20组，每个重复5只；饲喂方法为一天饲喂两次，早晨7点一次，下午17点一次，自由采食，其中0～21d的肉鸡日粮的具体组分如表3所示，22～42d的肉鸡日粮如表4所示。

表3 10～21d的肉鸡日粮

表4 22～42d的肉鸡日粮

饲养42天后，对白羽肉仔鸡的生长性能指标(均重、日均采食量、日增重和料肉比)、免疫指标(免疫器官指数、IgA、Ig G和Ig M)、抗应激指标(总蛋白、白蛋白、球蛋白、新城疫抗体含量)、抗氧化指标(SOD、CAT、GSH-Px、MDA)、激素指标(生长激素、促生长激素释放激素、T3、T4、IGF-1)和十二指肠U形部进行调查，其中免疫指标、抗应激指标、抗氧化指标和激素指标采用试剂盒进行检测，试剂盒分别为ELISA试剂盒，购自南京草木源生物科技有限公司，具体的试剂盒为：鸡丙二醛(MDA)ELISA试剂盒、鸡超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒、鸡过氧化氢酶(CAT)ELISA试剂盒、鸡总抗氧化能力(TAOC)ELISA试剂盒、鸡白蛋白(ALB)ELISA试剂盒、鸡促肾上腺皮激素(ACTH)ELISA试剂盒、鸡谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)ELISA试剂盒、鸡去甲肾上腺素(NE)ELISA试剂盒、鸡总蛋白(TP)ELISA试剂盒、鸡皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒、鸡免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒、鸡免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒、鸡免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒、鸡促甲状腺激素(TSH)ELISA试剂盒、鸡促甲状腺素释放激素(TRH)ELISA试剂盒、鸡新城疫病毒抗体ELISA试剂盒和鸡糖皮质激素ELISA试剂盒，十二指肠U形部的调查方法为饲养试验结束后，每个重复取一只鸡，静脉放血处死后，采集十二指肠U形部处约1～2cm，置于液氮中保存，用于制作组织切片，染色后用显微成像系统对组织切片样品拍照，具体步骤为：

(1)取材与固定：将采集的十二指肠U形部用生理盐水将表面污渍冲洗干净，将其放入体积百分含量为10％的甲醛溶液中固定24h；

(2)组织包埋及切片：组织固定完成后用纱布将其包好，用流水冲洗以充分去除组织中的体积百分含量为10％的甲醛溶液，冲洗2h后取出组织，沥干水分，放置于自动脱水机中，按如下流程依次浸泡组织：

然后将组织平整放置于包埋模具内，滴加石蜡包埋成蜡块，自然冷却后保存备用。然后进行切片，将切片置于43℃水浴锅中进行展片，并使用干净的粘附载玻片进行捞片，捞片时确保组织上不产生气泡。然后将玻片置于64℃鼓风干燥箱中烘烤4h后，取出置于玻片盒中备用；

之后将组织平整放置于包埋模具内，滴加石蜡包埋成蜡块，自然冷却后保存备用。然后进行切片，将切片置于43℃水浴锅中进行展片，并使用干净的粘附载玻片进行捞片，捞片时确保组织上不产生气泡。然后将玻片置于64℃鼓风干燥箱中烘烤4h后，取出置于玻片盒中备用；

切片脱蜡至水：将石蜡切片置于鼓风干燥箱中烤片30min，取出切片按流程图再次浸泡：

(4)苏木素染色：将切片置于苏木素染色液中，染色1min。然后放入蒸馏中，将表面残留的染色液洗净；

(5)依次进行分化及反蓝、伊红染色、脱水、透明以及封片。

白羽肉仔鸡的生长性能指标、免疫指标、抗应激指标、抗氧化指标、激素指标和十二指肠U形部的调查结果见表5～表8、图5～图6。

表5中药组合物对白羽肉鸡生长性能指标影响结果

由表5记载的可知，本发明所述中药组合物能很明显的增加白羽肉鸡在各阶段的采食量并提高日增重，减少料肉比，其原因是本发明采用的中药组合物中含有糖类、皂苷类、生物碱、挥发性物质和有机酸等多种生物活性成分，在畜禽生产中应用不仅可以预防和治疗疾病、增强机体免疫力和抗病力，还可以补充动物所需营养物质、提高食欲、促进畜禽生长。

表6中药组合物对白羽肉鸡三种免疫球蛋白及新城疫抗体指标影响结果

由表6记载的数据可知，采用本发明提供的中药组合物对白羽肉鸡的免疫性能有很好的效果。胸腺、脾脏、法氏囊是鸡重要的免疫器官，其器官发育状态可在一定程度上反映机体免疫功能的强弱，免疫器官相对质量的增加，说明机体细胞的免疫功能增强。

表7中药组合物对白羽肉鸡血清激素指标影响结果

由表7记载的数据可知，与对照组相比，饲料中添加本发明提供的中药组合物可以显著提高白羽肉鸡血液中IgG和IgM含量，这表明本发明提供的中药组合物具有增强机体免疫能力的功效。

表8中药组合物对白羽肉鸡十二指肠U形部指标影响结果

组别	绒毛高度μm	隐窝深度μm	绒隐比
				0％对照组	712.28<sup>c</sup>±25.32	100.27<sup>a</sup>±4.62	7.10<sup>c</sup>±1.02
0.5％低剂量组	758.95<sup>b</sup>±18.65	95.14<sup>ab</sup>±2.68	7.98<sup>b</sup>±0.59
				1％中剂量组	795.61<sup>a</sup>±21.20	86.32<sup>b</sup>±5.61	9.22<sup>a</sup>±0.86
1.5％高剂量组	767.83<sup>a</sup>b±18.26	98.56<sup>a</sup>±3.28	7.79<sup>b</sup>±0.67

肠绒毛高度越高或隐窝越浅说明小肠对营养物质的吸收能力得到提高，肠道养分的吸收随着绒隐比的增加而增加，比值越大，肠道结构具有更好的吸收和水解潜能，同时对维持肠道所需的营养也更少。十二指肠肠道切片(图5和图6) 可以看出试验组肠绒毛高度和深度明显优于对照组，组织结构完整损伤小，由数据可以看出其中1％中剂量组绒毛最长，绒隐比值最大。可见，本发明所述中药组合物能够使小肠对营养物质的吸收能力得到提高，肠道养分的吸收随着绒隐比的增加而增加，同时肠道结构具有更好的吸收和水解潜能，对维持肠道所需的营养也更少。

虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims

1.一种提高抗应激能力的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物包括以下质量百分含量的原料：10～20％茯苓、35～45％松针、10～20％黄芪、10～20％当归和10～20％甘草。

2.权利要求1所述中药组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将茯苓、松针、黄芪、当归和甘草混合，得中药组合物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述黄芪为经酶解处理、发酵处理和菌酶协同发酵处理中的任一种方法处理得到的黄芪；

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述酶解处理时，采用的复合酶制剂包括木聚糖酶、纤维素酶和漆酶；所述以每g复合酶制剂计，木聚糖酶的活力为8000u/g，纤维素酶的活力为30u/g，漆酶的活力为4000u/g；

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述酶解处理的时间为6～12h，温度为50～60℃；所述微生物发酵的时间3～5d，温度为30～40℃；所述菌酶协同发酵的时间为3～7d，温度为30～40℃。

6.一种提高抗应激的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂的有效成分包括权利要求1所述的中药组合物或权利要求2～5任一项所述制备方法制备得到的中药组合物。

7.根据权利要求6所述的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂还包括载体、葡萄糖、枯草芽孢杆菌、酵母培养物、微量元素、复合维生素、维生素C和抗氧化剂。

8.根据权利要求6或7所述的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂包括以下质量百分含量的组分：35～45％所述中药组合物、葡萄糖9～10％、枯草芽孢杆菌0.05～2％、酵母培养物35～45％、载体7～9％、微量元素0.6～0.8％、复合维生素0.3～0.4％、维生素C0.5～1％和抗氧化剂0.03～0.2％。

9.一种提高抗应激的饲料，其特征在于，所述饲料包括日粮和有效成分；所述有效成分包括权利要求1所述中药组合物或权利要求2～5任一项所述制备方法制备得到的中药组合物或权利要求6～8任一项所述的饲料添加剂。

10.权利要求1所述中药组合物或权利要求2～5任一项所述制备方法制备得到的中药组合物或权利要求6～8所述的饲料添加剂或权利要求9所述饲料在或提高抗应激中的应用。