CN115667927A - 认知症诊断用生物标志物 - Google Patents

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川畑伊知郎
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Abstract

本发明公开了一种受试者的神经系统变性疾病检测方法，其特征在于该方法包括测定由受试者生物样本中的FABP3和FABP5所组成的2种生物标志物的水平。

Description

认知症诊断用生物标志物
【技术领域】
本发明涉及一种神经系统变性疾病用生物标志物，具体涉及一种将脂肪酸结合蛋白(FABP)家族作为指标使用的神经系统变性疾病检测方法。
【背景技术】
脂肪酸结合蛋白(FABP)与花生四稀酸、二十二碳六烯酸等多不饱和脂肪酸的细胞内转运有关。现已在脑内发现3种FABP(FABP3、FABP5、FABP7)。目前为止FABP在神经系统变性疾病中的功能并不清楚。
发明人最近发现，FABP3与形成胞浆内包涵体(帕金森病的病因)的α-突触核蛋白结合，且二者都在神经细胞上表达时会形成凝聚体(非专利文献1)。而且发明人还发现，即使将发现帕金森病的神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-Metyl-1,2/3,6-tetrahydropiridine，MPTP)给予FPBP3缺失小鼠，也不会出现帕金森病症状，并在帕金森病模型细胞和动物中确认其会抑制α-突触核蛋白细胞的表达和凝聚(非专利文献2)。
再者，有报告发现，阿尔茨海默病型认知症和帕金森病之类神经系统变性疾病患者血清中的FABP7浓度上升(非专利文献3)。
【现有技术文献】
【非专利文献】
非专利文献1：Shioda N,et al.J Biol Chem.2014Jul 4；289(27):18957-65
非专利文献2：上原纪念生命科学财团研究报告集，31(2017)
非专利文献3：Teunissen,C.E.,et al.European journal of neurology 18,865-871(2011)
【发明内容】
【发明要解决的技术问题】
上述现有技术文献显示，FABP3和FABP7有可能成为神经系统变性疾病的生物标志物，但是发明人在调查认知症患者生物样本中的FABP3浓度时发现，在各种神经系统变性疾病中，只有FABP3对比健康者有所增加，但是无法个别区分轻度认知功能障碍(MCI)、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)以及路易体痴呆(DLB)这4种神经疾病(MCI vs.AD N.S.,MCIvs.PD N.S.,AD vs.PD N.S.,PD vs.DLB N.S.,N.S.：无显著性差异)。
另一方面，FABP5与神经系统变性疾病的相关性并未涉及。
【用于解决课题的技术方案】
发明人潜心研究上述问题的解决方案，结果发现将FABP3与FABP5组合起来用作生物标志物，即可区分受试者是健康者还是很可能患有轻度认知功能障碍等神经系统变性疾病的患者，终于完成本发明。发明人进一步发现，除了FABP3和FABP5这两种生物标志物之外，使用所追加的1种或2种以上生物标志物，即可个别区分MCI、AD、PD及DLB这4种疾病。
本发明包含下列实施方式。
项1.一种受试者的神经系统变性疾病检测方法，其特征在于该方法包括测定由受试者生物样本中的FABP3和FABP5所组成的2种生物标志物的水平。
项2.如项1所述的方法，其特征在于：还包括将所述由FABP3和FABP5组成的2种生物标志物的水平适用于和/或转换为模型，生成检测神经系统变性疾病所需的指标(评估值)，以及通过对比受试者的评估值与基准值，确定所述受试者患有神经系统变性疾病的可能性是否大。
项3.如项2所述的方法，其特征在于：所述的确定，包括当所述受试者的评估值大于健康者的评估值时，会确定所述受试者患有神经系统变性疾病的可能性大。
项4.如项3所述的方法，其特征在于：当所述受试者被确定为患有轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病或路易体痴呆的可能性大时，所述方法进一步包括将所述受试者的评估值分别与轻度认知功能障碍患者的评估值(基准值)、阿尔茨海默病患者的评估值(基准值)、帕金森病患者的评估值(基准值)以及路易体痴呆患者的评估值(基准值)进行对比，以及将所述受试者的评估值与所述4种疾病的各个基准值之差最小的疾病确定为所述受试者很可能患有的疾病。
项5.如项2～4中任一项所述的方法，其特征在于：所述模型为
SCORE＝(a+ZFABP3)/(a+ZFABP5) (1)
(式中：
ZFABP3为(受试者生物样本中的FABP3浓度-健康者生物样本中的FABP3平均浓度)/(健康者生物样本中的FABP3浓度的标准偏差)，
ZFABP5为(受试者生物样本中的FABP5浓度-健康者生物样本中的FABP5平均浓度)/(健康者生物样本中的FABP5浓度的标准偏差)，
a为大于零的数)
所述SCORE使用所述评估值或基准值。
项6.如项1所述的方法，其特征在于：包括进一步测定从由受试者生物样本中的Tau、α-Synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L所构成的组中选择的至少一种生物标志物的水平。
项7.如项6所述的方法，其特征在于：除了所述的FABP3和FABP5这2种生物标志物之外，进一步包括将从由Tau、α-Synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L所构成的组中选择的至少一种生物标志物的水平适用于和/或转换为模型，生成检测神经系统变性疾病所需的指标(评估值)，以及通过将受试者的评估值与神经系统变性疾病患者的评估值(基准值)进行对比，确定受试者患有神经系统变性疾病的可能性是否大。
项8.如项7所述的方法，其特征在于：所述神经系统变性疾病是从由轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆所构成的组中选择的至少一种，
所述确定包括：
当所述受试者的评估值等于或大于轻度认知功能障碍患者的评估值(基准值)时，确定为所述受试者患有轻度认知功能障碍的可能性大；
当所述受试者的评估值等于或大于阿尔茨海默病患者的评估值(基准值)时，确定为所述受试者患有阿尔茨海默病的可能性大；
当所述受试者的评估值等于或大于帕金森病患者的评估值(基准值)时，确定为所述受试者患有帕金森病的可能性大，或
当所述受试者的评估值等于或大于路易体痴呆患者的评估值(基准值)时，确定为所述受试者患有路易体痴呆的可能性大。
项9.如项8所述的方法，其特征在于：所述受试者被确定为患有所述轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病或路易体痴呆的可能性大时，所述方法进一步包括将所述受试者的评估值分别与轻度认知功能障碍患者的评估值(基准值)、阿尔茨海默病患者的评估值(基准值)、帕金森病患者的评估值(基准值)及路易体痴呆患者的评估值(基准值)进行对比，以及将所述受试者的评估值与所述4种疾病的各个基准值之差最小的疾病确定为所述受试者很可能患有的疾病。
项10.如项7～9中任一项所述的方法，其特征在于：所述模型为
SCORE＝(a+ZFABP3)(a+ZTau)x(a+ZNF-L)y(a+ZGFAP)z/{(a+ZFABP5)×(a+Za-syn)m×(a+ZAβ-42)n}×a(m+n-x-y-z) (2)
(式中：
ZFABP3为(受试者生物样本中的FABP3浓度-健康者生物样本中的FABP3平均浓度)/(健康者生物样本中的FABP3浓度的标准偏差)，
ZTau为(受试者生物样本中的Tau浓度-健康者生物样本中的Tau平均浓度)/(健康者生物样本中的Tau浓度的标准偏差)，
ZNF-L为(受试者生物样本中的NF-L浓度-健康者生物样本中的NF-L平均浓度)/(健康者生物样本中的NF-L浓度的标准偏差)，
ZGFAP为(受试者生物样本中的GFAP浓度-健康者生物样本中的GFAP平均浓度)/(健康者生物样本中的GFAP浓度的标准偏差)，
ZFABP5为(受试者生物样本中的FABP5浓度-健康者生物样本中的FABP5平均浓度)/(健康者生物样本中的FABP5浓度的标准偏差)，
Za-syn为(受试者生物样本中的α-突触核蛋白浓度-健康者生物样本中的α-突触核蛋白平均浓度)/(健康者生物样本中的α-突触核蛋白浓度的标准偏差)，
ZAβ-42为(受试者生物样本中的Aβ-42浓度-健康者生物样本中的Aβ-42平均浓度)/(健康者生物样本中的Aβ-42浓度的标准偏差)，
a为大于零的数，x,y,z,m,n相互独立，在式(2)中，此类乘数的底数，在计算彼此相关的生物标志物Tau、GFAP、α-Synuclein、Aβ-42及NF-L的评估值时为1，在不计算时为0)，所述SCORE被用于所述评估值或基准值。
项11.一种生物标志物的用途，用于检测从由轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆所构成的组中选择的至少一种神经系统变性疾病，其特征在于：所述生物标志物是由FABP3和FABP5所构成的2种组合，由FABP3、FABP5、Tau及NF-L所构成的4种组合，由FABP3、FABP5、α-Synuclein及Aβ-42所构成的4种组合，由FABP3、FABP5、α-Synuclein、Aβ-42及GFAP所构成的5种组合，或者由FABP3、FABP5、α-Synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L所构成的6种组合。
项12.一种试剂盒，用于检测从由轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆所构成的组中选择的至少一种神经系统变性疾病，其特征在于：该试剂盒包含分别针对由FABP3和FABP5所构成的2种蛋白质的抗体，由FABP3、FABP5、Tau及NF-L所构成的4种蛋白质的抗体，由FABP3、FABP5、α-Synuclein及Aβ-42所构成的4种蛋白质的抗体，由FABP3、FABP5、α-Synuclein、Aβ-42及GFAP所构成的5种蛋白质的抗体，或者由FABP3、FABP5、α-Synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L所构成的6种蛋白质的抗体。
【发明效果】
根据本发明，可以高精度检测受试者的神经系统变性疾病，特别是罹患轻度认知功能障碍的可能性。更进一步，除了两种生物标志物FABP3和FABP5之外，使用所追加的1种或2种以上生物标志物，还能对MCI、AD、PD及DLB进行个别检测或个别化诊断。
【附图说明】
【图1】将FABP3用作标志物时对照组与各神经系统变性疾病组的SCORE对比结果。CN:健康对照组、MCI:轻度认知功能障碍组、AD:阿尔茨海默病组、PD:帕金森病组，这4组中的任一组与CN相比均无显著性差异(Welch's t-test)。
【图2】(A)-(D)将FABP3用作标志物时各种2组的ROC曲线对比结果。纵轴:灵敏度，横轴:假阳性率(1-特异度)。CN:健康对照组、MCI:轻度认知功能障碍组、AD:阿尔茨海默病组、PD:帕金森病组、DLB：路易体痴呆组。
【图3】(A)-(D)将FABP3和FABP5用作标志物时对照组与各神经系统变性疾病组的SCORE对比结果。CN:健康对照组、MCI:轻度认知功能障碍组、AD:阿尔茨海默病组、PD:帕金森病组、DLB：路易体痴呆组。*p<0.05，****p<0.0001，均与CN相比(Welch's t-test)。
【图4】(A)-(F)将FABP3和FABP5用作标志物时各种2组的ROC曲线对比结果。纵轴:灵敏度，横轴:假阳性率(1-特异度)。CN:健康对照组、MCI:轻度认知功能障碍组、AD:阿尔茨海默病组、PD:帕金森病组、DLB：路易体痴呆组。
【图5】(A)-(D)将FABP3、FABP5、α-synuclein及Aβ-42用作标志物时对照组与各神经系统变性疾病组的SCORE对比结果。CN:健康对照组、MCI:轻度认知功能障碍组、AD:阿尔茨海默病组、PD:帕金森病组、DLB：路易体痴呆组。*p<0.05、****p<0.0001，均与CN相比(Welch’s t-test)。
【图6】(A)-(H)将FABP3、FABP5、α-synuclein及Aβ-42用作标志物时各种2组的ROC曲线对比结果。纵轴:灵敏度，横轴:假阳性率(1-特异度)。CN:健康对照组、MCI:轻度认知功能障碍组、AD:阿尔茨海默病组、PD:帕金森病组、DLB：路易体痴呆组。
【图7】(A)-(D)将FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42及GFAP用作标志物时对照组与各神经系统变性疾病组的SCORE对比结果。CN:健康对照组、MCI:轻度认知功能障碍组、AD:阿尔茨海默病组、PD:帕金森病组、DLB：路易体痴呆组。****p<0.0001，均与CN相比(Welch'st-test)。
【图8】(A)-(H))将FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42及GFAP用作标志物时各种2组的ROC曲线对比结果。纵轴:灵敏度，横轴:假阳性率(1-特异度)。CN:健康对照组、MCI:轻度认知功能障碍组、AD:阿尔茨海默病组、PD:帕金森病组、DLB：路易体痴呆组。
【图9】(A)-(D)将FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L用作标志物时对照组与各神经系统变性疾病组的SCORE对比结果。CN:健康对照组、MCI:轻度认知功能障碍组、AD:阿尔茨海默病组、PD:帕金森病组、DLB：路易体痴呆组。*p<0.05、****p<0.0001，均与CN相比Welch’s t-test)。
【图10】(A)-(H)将FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L用作标志物时各种2组的ROC曲线对比结果。纵轴:灵敏度，横轴:假阳性率(1-特异度)。CN:健康对照组、MCI:轻度认知功能障碍组、AD:阿尔茨海默病组、PD:帕金森病组、DLB：路易体痴呆组。
【具体实施方式】
在本说明书中，“受试者”为哺乳动物，可以列举人、小鼠、大鼠，进一步为牛和马等家畜、狗和猫等宠物，宜为人。
在本说明书中，受试者的“生物样本”并未特别限定为源于受试者的生物样本，宜为对受试者造成创伤较小的生物样本，可以列举血液、血浆、血清、唾液、尿液、泪液、汗液等很容易从生物体上采集的生物样本，髄液、骨髄液、胸腔积液、腹腔积液、关节积液、眼房水、玻璃体液、淋巴液等比较容易采集的生物样本，以及组织活检等组织样本。在几种实施方式中，生物样本由体液所构成，该体液从由血液(全血)、血浆、血清、唾液、尿液、髄液、骨髄液、胸腔积液、腹腔积液、关节积液、泪液、汗液、眼房水、玻璃体液及淋巴液所构成的组中选择。使用血液、血清时，按照常用方法采集受试者血样，未经预处理即可直接或分离液体成分后进行分析，调制试样。本发明的肽作为检测对象，必要时也能使用抗体柱、吸附剂柱或旋转柱等，预先分离去除高分子量的蛋白质组分等。
本说明书中的神经系统变性疾病，包括从由轻度认知功能障碍(MCI)、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)及路易体痴呆(DLB)所构成的组中选择的至少一种。在理想的实施方式中，神经系统变性疾病是从由轻度认知功能障碍(MCI)、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)及路易体痴呆(DLB)所构成的组中选择的至少一种。
在本说明书中，神经系统变性疾病的“检测”，包括神经系统变性疾病的判定、治疗药物奏效的神经系统变性疾病患者(反应者)的判定(伴随诊断法)、神经系统变性疾病预防效果的判定、神经系统变性疾病治疗效果的判定、诊断神经系统变性疾病(特别是早期诊断)所需的检测方法，以及治疗神经系统变性疾病(特别是早期治疗)所需的检测方法。神经系统变性疾病的“判定”，不仅包括判定是否患有神经系统变性疾病，还包括对罹患神经系统变性疾病的可能性做出预防性判定、预测治疗后神经系统变性疾病的预后，以及判定神经系统变性疾病治疗药物的治疗效果。物质的筛查方法，包括对神经系统变性疾病的“检测”、“判定”及“治疗”有效的物质的筛查方法。
在本说明书中，“罹患”包括“发病”。
在本说明书中，“治疗”意指治愈或改善疾病或症状，或者抑制症状，包括“预防”。“预防”意指预防疾病或症状的出现。
在本说明书中，FABP3指的是心型脂肪酸结合蛋白。以人为例，FABP3包括Uniprot登录号为P05413的蛋白质。以小鼠为例，FABP3包括Uniprot登录号为P11404的蛋白质。以大鼠为例，FABP3包括Uniprot登录号为P07483的蛋白质。
在本说明书中，FABP5指的是上皮型脂肪酸结合蛋白。以人为例，FABP5包括Uniprot登录号为Q01469的蛋白质。以小鼠为例，FABP5包括Uniprot登录号为Q05816的蛋白质。以大鼠为例，FABP5包括Uniprot登录号为P55053的蛋白质。
在本发明的一种实施方式中，提供一种受试者的神经系统变性疾病的检测方法，该方法包括测定由受试者生物样本中的FABP3和FABP5所组成的2种生物标志物的水平。
受试者包括疑似患有神经系统变性疾病的患者，“疑似患有神经系统变性疾病的患者”既可以是受试者本人主观上有疑问者(不仅限于有某些自觉症状者，也包括只是希望接受预防性体检者)，也可以是根据某些客观依据被判定或诊断为神经系统变性疾病者(例如医师根据以前公知的认知功能测试(例如简易精神状况检查(MMSE)、长谷川式简易智能量表(HDS-R))和/或诊察的结果，判定有罹患神经系统变性疾病的合理可能性者)。
“测定由受试者生物样本中的FABP3和FABP5所组成的2种生物标志物的水平”是指分别测定FABP3和FABP5的蛋白质的浓度、含量或信号强度。通过测定FABP3和FABP5的荧光信号或吸光度信号的强度，不仅可以进行定性测定，也能进行定量测定。
生物样本中的2种生物标志物蛋白质的检测方法，可以列举质量分析、蛋白质阵列技术(例如蛋白质芯片)、凝胶电泳以及使用分别针对2种生物标志物蛋白质的抗体的方法(例如免疫荧光、放射性标记、免疫组织化学、免疫沉淀、蛋白质印迹分析、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、荧光细胞分选(FACS、免疫印迹法、化学发光等)，但是不限于此。
分别针对FABP3和FABP5的抗体，作为表位(具有各种蛋白质中的抗原性或免疫原性的氨基酸片段(抗原决定基))，既可采用该技术领域公知的方法制备，也能使用市售的分别针对FABP3和FABP5的抗体。针对本发明的肽或其亲蛋白质的抗体(以下有时简称“本发明的抗体”)，使用多克隆抗体或单克隆抗体均可，也能采用公知的免疫学方法制备。而且，该抗体既包含完全抗体分子也包含其片段，可以列举Fab、F(ab')2、ScFv及minibody等。
在几种实施方式中，生物样本中的生物标志物的检测/定量化，采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)实现。ELISA可以根据比色、化学发光和/或荧光进行。适合在本发明的方法中使用的ELISA，可以使用含有抗体及其诱导体以及蛋白质配体等的任意合适的捕获试剂和检测试剂。
在几种实施方式中，生物样本中的生物标志物的检测/定量化，采用蛋白质免疫印迹法实现。蛋白质免疫印迹法在本行业众所周知。简而言之，就是可以使用对所给的生物标志物有结合亲和力的抗体，通过凝胶电泳，将分子量大小不同的蛋白质分离，在其混合物中量化生物标志物。例如，将用硝化纤维素或聚偏二氟乙烯(PVDF制作的膜配置到含有来自生物样本的蛋白质混合物的凝胶旁边，施加电流，使蛋白质从凝胶迁移到该膜上。然后让膜接触对目标生物标志物有特异性的抗体，可以使用第二抗体和/或检测试剂实现可视化。
在几种实施方式中，生物样本中的生物标志物的检测/定量化，使用蛋白质多重分析法(例如平面分析或基于微球分析)实现。市售的蛋白质多重分析类型非常多。
在其他的实施方式中，生物样本中的生物标志物的检测/定量化，利用对悬浮于流体中的靶向实体(例如细胞和蛋白质)进行计数、调查和分选所需的技术(流式细胞术)来实现。
在几种实施方式中，生物样本中的生物标志物的检测/定量化，使用对组织或细胞内的抗原有结合特异性的抗体或蛋白质结合剂，采用在组织切片或细胞中定位蛋白质的方法(免疫组织化学或免疫细胞化学)来实现。可以使用显色(例如辣根过氧化物酶及碱性磷酸酶)或发出荧光(例如生成异硫氰酸荧光素(FITC)或藻红蛋白(PE))的标记给抗体/药剂加上标签，实现可视化。
FABP3倾向于神经系统变性疾病患者多于健康者，而FABP5却倾向于神经系统变性疾病患者少于健康者，FABP3和FABP5分别单独用作生物标志物时，检测精度较低。
根据本发明的方法，可以使用由FABP3和FABP5所构成的2种生物标志物，将健康者与神经系统变性疾病患者区别开来。具体而言，根据这种方法，可以判定受试者患有轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病或路易体痴呆的可能性是否大。因此，可以简单地判定受试者是否可能患有轻度认知功能障碍。
在几种实施方式中，根据使用由FABP3和FABP5所构成的2种生物标志物计算出的评估值，也就是检测后述神经系统变性疾病所需的指标(评估值)，对比受试者的评估值与健康者的评估值(基准值)，受试者的评估值等于或低于健康者的评估值(基准值)时，可以断定该受试者患有神经系统变性疾病的可能性较小，因而患有轻度认知功能障碍的可能性也较小。
在另外一种实施方式中，根据使用由FABP3和FABP5所构成的2种生物标志物计算出的评估值，也就是检测后述神经系统变性疾病所需的指标，对比受试者的评估值与健康者的评估值(基准值)，受试者的评估值大于健康者的评估值(基准值)时，可以断定该受试者患有神经系统变性疾病(轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病、路易体痴呆或此类疾病的组合)的可能性大。
在另外一种实施方式中，对比受试者的评估值与神经系统变性疾病(轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病、路易体痴呆或此类疾病的组合)患者的评估值(基准值)，受试者的评估值等于或大于神经系统变性疾病患者的评估值(基准值)时，可以断定该受试者患有神经系统变性疾病的可能性大，因而可能患有轻度认知功能障碍。
在一种进一步的实施方式中，对比受试者的评估值与轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病或路易体痴呆患者的评估值(基准值)，等于或大于4种中的任一种神经系统变性疾病患者的评估值(基准值)时，可以断定该受试者患有该种神经系统变性疾病的可能性大。因而，也能个别判定患有轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆每种神经系统变性疾病的可能性。
在另外一种更进一步的实施方式中，确定受试者患有轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病或路易体痴呆的可能性大时，本发明的方法进一步包括分别对比受试者的评估值与轻度认知功能障碍患者的评估值(基准值)、阿尔茨海默病患者的评估值(基准值)、帕金森病患者的评估值(基准值)及路易体痴呆患者的评估值(基准值)，以及将受试者的评估值与所述4种疾病的各个基准值之差最小的疾病确定为受试者很可能患有的疾病。例如，受试者的评估值与4种疾病的基准值中的轻度认知功能障碍患者的评估值(基准值)之差最小时，可以断定该受试者患有轻度认知功能障碍的可能性大。
再者，在本说明书中，健康者的评估值并未特别限定，只要是证明属于健康者的指标值即可，可以是多位健康者的评估值的平均值、多位健康者的评估值的中央值等，宜为多位健康者的评估值的平均值。神经系统变性疾病(轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病或路易体痴呆)患者的评估值并未特别限定，只要是证明属于神经系统变性疾病患者的指标值即可，可以是多位神经系统变性疾病患者的评估值的平均值、多位神经系统变性疾病患者的评估值的中央值等，宜为多位神经系统变性疾病患者的评估值的平均值。例如，轻度认知功能障碍患者的评估值并未特别限定，只要是证明属于轻度认知功能障碍患者的指标值即可，可以是多位轻度认知功能障碍的评估值的平均值、多位轻度认知功能障碍的评估值的中央值等，也同样定义阿尔茨海默病患者的评估值、帕金森病患者的评估值及路易体痴呆患者的评估值。
在几种实施方式中，本发明的受试者的神经系统变性疾病检测方法，包括将FABP3和FABP5组成的2种生物标志物的水平适用于和/或转换为模型，生成检测神经系统变性疾病所需的指标(评估值)，以及通过与受试者的评估值和基准值进行对比，确定所述的受试者患有神经系统变性疾病的可能性是否大。
基准值可以是健康者的评估值、轻度认知功能障碍患者的评估值、阿尔茨海默病患者的评估值、帕金森病患者的评估值或路易体痴呆患者的评估值。判定方法如上所述。
模型指的是计算公式，宜为包含FABP3和FABP5中的一方与常数之和为分母，FABP3和FABP5中的另一方与所述常数之和为分子的分数的方程式。转换指的是生物标志物水平数值的转换，使用的函数可以列举指数函数、幂函数和/或根式函数。
举例来说，发明人为了将受试者区别开来，开发了以下式(1)表达的模型：
SCORE＝(a+ZFABP3)/(a+ZFABP5) (1)
式中：
ZFABP3为(受试者生物样本中的FABP3浓度-健康者生物样本中的FABP3平均浓度)/(健康者生物样本中的FABP3浓度的标准偏差)，
ZFABP5为(受试者生物样本中的FABP5浓度-健康者生物样本中的FABP5平均浓度)/(健康者生物样本中的FABP5浓度的标准偏差)，
a为大于零的数，即为正数，a宜为正整数或正小数，a更宜为1～10范围内的数值。例如，a可以是1～10的任一整数)。
上述SCORE被用作检测神经系统变性疾病所需的指标(评估值或基准值)。
在式(1)中，健康者的SCORE值为1，而轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆患者组的SCORE平均值均大于1。将FABP3和FABP5这2种生物标志物的水平代入到式(1)中时，关于SCORE值，健康者组的平均值与轻度认知功能障碍患者组的平均值之间、健康者组的平均值与阿尔茨海默病患者组的平均值之间、健康者组的平均值与帕金森病患者组的平均值之间、健康者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间、轻度认知功能障碍患者组的平均值与阿尔茨海默病患者组的平均值之间、轻度认知功能障碍患者组的平均值与帕金森病患者组的平均值之间、轻度认知功能障碍患者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间、阿尔茨海默病患者组的平均值与帕金森病患者组的平均值之间、帕金森病患者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间均有显著性差异，后者比前者更显著。
因此，能够以式(1)所得的SCORE值为指标，确定受试者是否患有此类神经系统变性疾病中的某一种。
例如，对比式(1)的受试者的SCORE值与健康者的SCORE值的平均值(基准值)，也就是1，受试者的SCORE值等于或低于1时，该受试者患有神经系统变性疾病的可能性较小，因而可以断定其患有轻度认知功能障碍的可能性也较小。
对比式(1)的受试者的SCORE值与神经系统变性疾病(轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病、路易体痴呆或此类疾病的组合)患者的SCORE值的平均值(基准值)，受试者的SCORE值等于或大于神经系统变性疾病患者的SCORE值的平均值(基准值)时，可以断定该受试者患有神经系统变性疾病的可能性大，因而其可能患有轻度认知功能障碍。
在几种实施方式中，对比式(1)的受试者的SCORE值与轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病或路易体痴呆患者的SCORE值的平均值(基准值)，也能个别判定患有轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆每种神经系统变性疾病的可能性。例如，受试者的SCORE值等于或大于轻度认知功能障碍患者的SCORE值(基准值)时,可以断定该受试者患有轻度认知功能障碍的可能性大。受试者的SCORE值等于或大于阿尔茨海默病患者的SCORE值(基准值)时,可以断定该受试者患有阿尔茨海默病的可能性大。受试者的SCORE值等于或大于帕金森病患者的SCORE值(基准值)时,可以断定该受试者患有帕金森病的可能性大。受试者的SCORE值等于或大于路易体痴呆患者的SCORE值(基准值)时,可以断定该受试者患有路易体痴呆的可能性大。
在另外一种更进一步的实施方式中，确定受试者患有轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病或路易体痴呆的可能性大时，本发明的方法进一步包括：分别对比式(1)的受试者的SCORE值与轻度认知功能障碍患者的SCORE值(基准值)、阿尔茨海默病患者的SCORE值(基准值)、帕金森病患者的SCORE值(基准值)及路易体痴呆患者的SCORE值(基准值)，以及将受试者的评估值与4种疾病的各个基准值之差最小的疾病确定为所述受试者很可能患有的疾病.
本申请在建立以生物标志物蛋白质的式(1)、后述式(2)以及后述式(3)表达的多变量模型时发现，可以进行接受者操作特征曲线(ROC)分析的曲线下面积(AUC)较大(超过0.8)、可靠性极高的神经系统变性疾病的检测或判定。ROC分析是非限定性分析案例，可以包括对比基于适当的参照物质标准的真实分类与各受试患者的分类。采用这种方法对多位患者进行分类，可以导出灵敏度和特异性的测定。一般来说，灵敏度是被正确分类的患者在所有真阳性样本中所占的比率，特异性是被正确分类的病例在所有真阴性样本中所占的比率。一般来说，根据为了确定阳性分类而选择的阈值，在灵敏度与特异性之间可以存在折中选择。阈值低，通常灵敏度就高，可以有较低的特异性。反之，阈值高，通常灵敏度就低，可以有较高的特异性。可以通过水平翻转灵敏度-特异性曲线来绘制ROC曲线。所得到的翻转横轴为假阳性组分，等于1减去特异性。ROC曲线下面积(AUC)可以解释为有可能性的特异性的全域平均灵敏度，或者有可能性的灵敏度的全域平均特异性。AUC表示总体的精度尺度，也表示涵盖所有可能解释的阈值的精度尺度。
如果增加生物标志物蛋白质的数量，AUC就会升至0.9以上，可以更接近1。即使一种生物标志物的AUC为0.8以下，只要将多种生物标志物蛋白质组合起来，可以用于检测或判定AUC超过0.8，最好超过0.9的神经系统变性疾病，作为检测或判定神经系统变性疾病的生物标志物就是有效的。
本发明的受试者的神经系统变性疾病检测方法，除了FABP3和FABP5之外，还可以使用1种或2种以上的生物标志物。一般来说，使用的生物标志物数量越多，就能更加提高灵敏度(真阳性率)和特异度(真阴性率)，检测精度就会提高。
在几种实施方式中，本发明的受试者的神经系统变性疾病检测方法，除了FABP3和FABP5这2种生物标志物之外，进一步包括将从由Tau、NF-L、α-Synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L所构成的组中选择的至少一种生物标志物的水平适用于和/或转换为模型，生成检测神经系统变性疾病所需的指标(评估值)，以及通过对比受试者的评估值与基准值，确定受试者患有神经系统变性疾病的可能性是否大。
基准值可以是健康者的评估值、轻度认知功能障碍患者的评估值、阿尔茨海默病患者的评估值、帕金森病患者的评估值或路易体痴呆患者的评估值。判定方法如上所述。Microtubule-associated protein tau(Tau,Uniprot登录号:P10636)、Alpha-synuclein(α-Synuclein,Uniprot登录号:P37840)、Amyloid beta protein(Aβ-42,Uniprot登录号:Q9BYY9)、Glial fibrillary acidic protein(GFAP,Uniprot登录号:P14136)以及Neurofilament light polypeptide(NF-L,Uniprot登录号:P07196)，分别单独用作生物标志物时，检测精度较低，Tau、NF-L、GFAP倾向于神经系统变性疾病患者多于健康者，而α-Synuclein、Aβ-42却倾向于神经系统变性疾病患者少于健康者。
举例来说，区别受试者与神经系统变性疾病患者，或者神经系统变性疾病患者彼此区别所需的模型，以下式(2)表达：
SCORE＝(a+ZFABP3)(a+ZTau)x(a+ZNF-L)y(a+ZGFAP)z/{(a+ZFABP5)×(a+Za-syn)m×(a+ZAβ-42)n}×a(m+n-x-y-z) (2)
(式中：
ZFABP3为(受试者生物样本中的FABP3浓度-健康者生物样本中的FABP3平均浓度)/(健康者生物样本中的FABP3浓度的标准偏差)，
ZTau为(受试者生物样本中的Tau浓度-健康者生物样本中的Tau平均浓度)/(健康者生物样本中的Tau浓度的标准偏差)，
ZNF-L为(受试者生物样本中的NF-L浓度-健康者生物样本中的NF-L平均浓度)/(健康者生物样本中的NF-L浓度的标准偏差)，
ZGFAP为(受试者生物样本中的GFAP浓度-健康者生物样本中的GFAP平均浓度)/(健康者生物样本中的GFAP浓度的标准偏差)，
ZFABP5为(受试者生物样本中的FABP5浓度-健康者生物样本中的FABP5平均浓度)/(健康者生物样本中的FABP5浓度的标准偏差)，
Za-syn为(受试者生物样本中的α-突触核蛋白浓度-健康者生物样本中的α-突触核蛋白平均浓度)/(健康者生物样本中的α-突触核蛋白浓度的标准偏差)，
ZAβ-42为(受试者生物样本中的Aβ-42浓度-健康者生物样本中的Aβ-42平均浓度)/(健康者生物样本中的Aβ-42浓度的标准偏差)，
a为大于零的数，即为正数，a宜为正整数或正小数，a更宜为1～10范围内的数值。例如，a可以是1～10的任一整数)。
x,y,z,m,n相互独立，在式(2)中，此类乘数的底数，在计算彼此相关的生物标志物Tau、NF-L、GFAP、α-Synuclein及Aβ-42的评估值时为1，在不计算时为0。)
上述SCORE被用于检测神经系统变性疾病的指标(评估值或基准值)。
在式(2)中，健康者的SCORE值为1，而轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆患者的SCORE的平均值均大于1。
在几种实施方式中，本发明的受试者的神经系统变性疾病检测方法，测定受试者生物样本中的4种生物标志物(FABP3、FABP5、α-synuclein及Aβ-42)的水平。将4种生物标志物(FABP3、FABP5、α-synuclein及Aβ-42)的水平代入到式(2)中时，关于SCORE值，健康者组的平均值与轻度认知功能障碍患者组的平均值之间、健康者组的平均值与阿尔茨海默病患者组的平均值之间、健康者组的平均值与帕金森病患者组的平均值之间、健康者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间、轻度认知功能障碍患者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间、阿尔茨海默病患者组的平均值与帕金森病患者组的平均值之间、阿尔茨海默病患者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间、帕金森病患者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间均有显著性差异，后者比前者更显著。
在几种实施方式中，本发明的受试者的神经系统变性疾病检测方法，测定受试者生物样本中的5种生物标志物(FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42及GFAP)的水平。将5种生物标志物(FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42及GFAP)的水平代入到式(2)中时，关于SCORE值，健康者组的平均值与轻度认知功能障碍患者组的平均值之间、健康者组的平均值与阿尔茨海默病患者组的平均值之间、健康者组的平均值与帕金森病患者组的平均值之间、健康者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间、轻度认知功能障碍患者组的平均值与阿尔茨海默病患者组的平均值之间、轻度认知功能障碍患者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间、阿尔茨海默病患者组的平均值与帕金森病患者组的平均值之间、帕金森病患者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间均有显著性差异，后者比前者更显著。
在几种实施方式中，本发明的受试者的神经系统变性疾病检测方法，测定受试者生物样本中的6种生物标志物(FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L)的水平。将6种生物标志物(FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L)的水平代入到式(2)中时，关于SCORE值，健康者组的平均值与轻度认知功能障碍患者组的平均值之间、健康者组的平均值与阿尔茨海默病患者组的平均值之间、健康者组的平均值与帕金森病患者组的平均值之间、健康者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间、轻度认知功能障碍患者组的平均值与阿尔茨海默病患者组的平均值之间、轻度认知功能障碍患者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间、阿尔茨海默病患者组的平均值与帕金森病患者组的平均值之间、帕金森病患者组的平均值与路易体痴呆患者组的平均值之间均有显著性差异，后者比前者更显著。
总之，进一步将生物标志物Tau、GFAP、α-Synuclein、Aβ-42及NF-L中的1种或2种以上与FABP3、FABP5组合起来，可以个别区分神经系统变性疾病的轻度认知功能障碍(MCI)、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)及路易体痴呆(DLB)这4种类型。
因此，本发明的检测方法，首先在第1阶段，使用FABP3和FABP5检测或判定罹患包括轻度认知功能障碍在内的神经系统变性疾病的可能性，第1阶段的结果为阳性时，除了FABP3和FABP5之外，还检测所追加的生物标志物Tau、GFAP、α-Synuclein、Aβ-42及NF-L中的1种或2种以上生物标志物的水平，可以个别区分轻度认知功能障碍(MCI)、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)及路易体痴呆(DLB)这4种类型，并检测或判定从轻度认知功能障碍(MCI)发展为阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)或路易体痴呆(DLB)的可能性。
本发明的检测方法，可以适用于取代传统的神经系统变性疾病诊断方法，或者与传统的神经系统变性疾病诊断方法相结合，检测或诊断神经系统变性疾病，或者辅助神经系统变性疾病的检测或诊断。
本发明的检测方法，也能通过按照时间顺序采集患者的生物样本，检测本发明的肽在各样本中表达的时程性变化来进行。生物样本的采集间隔并未特别限定，宜在不影响患者生活质量(QOL)的范围内尽可能频繁采样，以将血浆或血清用作样本为例，宜在约1日～约1年期间采血。
进一步，上述按照时间顺序采样的神经系统变性疾病检测方法，在上次采样与本次采样之间，对受试患者施行了该疾病的治疗措施时，可将该措施的治疗效果用于评估。也就是说，对于在治疗前后采集的样本，对比治疗后状态与治疗前状态后，断定发现FABP3和FABP5以及任意选择的其他生物标志物蛋白质下降或上升(病情改善)时，可以评估为该治疗有效。反之，对比治疗后状态与治疗前状态后，断定未发现FABP3和FABP5以及任意选择的其他生物标志物蛋白质下降或上升(病情改善)，或者更加恶化时，则可以评估为该治疗无效。
进一步，上述按照时间顺序采样的神经系统变性疾病检测方法，可以用于评估施行降低神经系统变性疾病罹患风险措施后的预防效果，这些措施包括摄取健康食品等、禁烟、运动疗法、与有害环境隔离等。也就是说，对于在施行降低罹患风险措施前后采集的样本，对比施行后状态与施行前状态后，断定发现FABP3和FABP5以及任意选择的其他生物标志物蛋白质下降或上升(病情的发作或恶化)时，可以评估为施行该措施有效。反之，对比治疗后状态与治疗前状态后，断定未发现FABP3和FABP5以及任意选择的其他生物标志物蛋白质下降或上升(病情改善)，或者更加恶化时，则可以评估为施行该措施无效。
因此，本发明的FABP3和FABP5以及任意选择的其他生物标志物蛋白质和方法，不仅可以成为诊断或检测神经系统变性疾病的标志物，也能成为预测神经系统变性疾病预后的标志物以及判定治疗效果的标志物。也就是说，本发明的FABP3和FABP5以及任意选择的其他生物标志物蛋白质和方法，可以用于筛查治疗神经系统变性疾病的药物研发靶向分子，和/或用作分选患者(反应者)或调节治疗药物的给药剂量(用量)所需的伴随诊断药物。
特别值得一提的是，如后述实施例中所示，根据本发明，可在给予治疗药物后的极早时期选择治疗药物和反应者，而现有认知功能测试却做不到这一点。
再者，本发明的FABP3和FABP5以及任意选择的其他生物标志物蛋白质和方法，可以用于物质的筛查方法。此时的物质，包括在未病阶段防止神经系统变性疾病的健康食品和特定保健用食品等食品类、诊断或检测神经系统变性疾病的标志物类，以及治疗罹患后的神经系统变性疾病的治疗药物等医药品类。
本发明包括使用针对FABP3蛋白质和FABP5蛋白质的抗体的神经系统变性疾病的检测或判定方法。这种方法的特点在于，只要建立优化免疫分析系统，并将其制成试剂盒，无需使用上述质量分析装置之类的特殊装置，即可高灵敏度且高精度地检测生物标志物蛋白质，这一点特别有效。具体而言，通过使用FABP3和FABP5检测，可以明确MCI、AD、PD、DLB的可能性，并推测假定疾病。然后，使用生物标志物FABP3、FABP5、Tau、GFAP、α-Synuclein、Aβ-42及NF-L中的1种或2种以上检测，有望试着识别疾病。
在几种实施方式中，提供一种含有分别针对FABP3、FABP5、α-synuclein及Aβ-42的抗体的检测或判定剂套件，用来区别受试者属于下列(1)～(8)中哪一组的2个选项：(1)健康者与轻度认知功能障碍患者、(2)健康者与阿尔茨海默病患者、(3)健康者与帕金森病患者、(4)健康者与路易体痴呆患者、(5)轻度认知功能障碍患者与路易体痴呆患者、(6)阿尔茨海默病患者与帕金森病患者、(7)阿尔茨海默病患者与路易体痴呆患者或(8)帕金森病患者与路易体痴呆患者。使用该检测或判定剂套件的检测或判定，可以使用受试者的生物样本，根据诸如使用式(2)的上述神经系统变性疾病检测方法进行。
在几种实施方式中，提供一种含有分别针对FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42及GFAP的抗体的检测或判定剂套件，用来区别受试者属于下列(1)～(8)中哪一组的2个选项：(1)健康者与轻度认知功能障碍患者、(2)健康者与阿尔茨海默病患者、(3)健康者与帕金森病患者、(4)健康者与路易体痴呆患者、(5)轻度认知功能障碍患者与阿尔茨海默病患者、(6)轻度认知功能障碍患者与路易体痴呆患者、(7)阿尔茨海默病患者与帕金森病患者、(8)帕金森病患者与路易体痴呆患者。使用该检测或判定剂套件的检测或判定，可以使用受试者的生物样本，根据诸如使用式(2)的上述神经系统变性疾病检测方法进行。
在几种实施方式中，提供一种含有分别针对FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L的抗体的检测或判定剂套件，用来区别受试者属于下列(1)～(8)中哪一组的2个选项：(1)健康者与轻度认知功能障碍患者、(2)健康者与阿尔茨海默病患者、(3)健康者与帕金森病患者、(4)健康者与路易体痴呆患者、(5)轻度认知功能障碍患者与阿尔茨海默病患者、(6)轻度认知功能障碍患者与路易体痴呆患者、(7)阿尔茨海默病患者与帕金森病患者、(8)帕金森病患者与路易体痴呆患者。使用该检测或判定剂套件的检测或判定，可以使用受试者的生物样本，根据诸如使用式(2)的上述神经系统变性疾病检测方法进行。
在几种实施方式中，提供一种含有分别针对FABP3、FABP5、α-synuclein及Aβ-42的抗体的检测或判定剂套件，用来区别受试者属于下列(1)～(8)中哪一组的2个选项：(1)健康者与轻度认知功能障碍患者、(2)健康者与阿尔茨海默病患者、(3)健康者与帕金森病患者、(4)健康者与路易体痴呆患者、(5)轻度认知功能障碍患者与路易体痴呆患者、(6)阿尔茨海默病患者与帕金森病患者、(7)阿尔茨海默病患者与路易体痴呆患者、(8)帕金森病患者与路易体痴呆患者、使用该检测或判定剂套件的检测或判定，可以使用受试者的生物样本，根据诸如使用式(2)的上述神经系统变性疾病检测方法进行。
在几种实施方式中，提供一种含有分别针对FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42及GFAP的抗体的检测或判定剂套件，用来区别受试者属于下列(1)～(8)中哪一组的2个选项：(1)健康者与轻度认知功能障碍患者、(2)健康者与阿尔茨海默病患者、(3)健康者与帕金森病患者、(4)健康者与路易体痴呆患者、(5)轻度认知功能障碍患者与阿尔茨海默病患者、(6)轻度认知功能障碍患者与路易体痴呆患者、(7)阿尔茨海默病患者与帕金森病患者、(8)帕金森病患者与路易体痴呆患者。使用该检测或判定剂套件的检测或判定，可以使用受试者的生物样本，根据诸如使用式(2)的上述神经系统变性疾病检测方法进行。
在几种实施方式中，提供一种含有分别针对FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L的抗体的检测或判定剂套件，用来区别受试者属于下列(1)～(8)中哪一组的2个选项：(1)健康者与轻度认知功能障碍患者、(2)健康者与阿尔茨海默病患者、(3)健康者与帕金森病患者、(4)健康者与路易体痴呆患者、(5)轻度认知功能障碍患者与阿尔茨海默病患者、(6)轻度认知功能障碍患者与路易体痴呆患者、(7)阿尔茨海默病患者与帕金森病患者、(8)帕金森病患者与路易体痴呆患者。使用该检测或判定剂套件的检测或判定，可以使用受试者的生物样本，根据诸如使用式(2)的上述神经系统变性疾病检测方法进行。
在本说明书中引用的所有专利申请和文献，其公开内容通过引用整体并入本说明书。
下面列举实施例更加具体地说明本发明，但本发明的实施方式不限于此。
【实施例】
1.受试者与血液采集
在国立医院机构仙台西多贺医院，采集了30名健康者、110名MCI患者、146名AD患者、85名PD患者、46名DLB患者的3mL血液。将所采集的血液静置0.5～1.0hr后，在室温下以3,000rpm离心分离10分钟，得到血清。使用上清之前，在-80℃下分开保存。
MCI的诊断标准采用National Institute on Aging-Alzheimer’s Association(NIA/AA)。AD的诊断标准采用The National Institute of Neurologic,CommunicativeDisorders and Stroke AD and Related Disorders Association(NINCDS-ADRDA)。PD的诊断标准采用Movement Disorders Society，ALS患者的诊断标准采用El Escorial标准。DLB的诊断标准采用Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders,FifthEdition(DSM-5)标准。
2.使用抗体的分析
测定血浆中的各种生物标志物，使用超高灵敏度自动ELISA Simoa HD-X系统(Quanterix公司)。首先将捕获抗体包被在Simoa磁珠表面，使一方的检测用抗体生物素化。然后使用此类捕获抗体和检测抗体，并使用各种标准蛋白质绘制标准曲线，计算出血浆中的生物标志物浓度。而且血浆样本经过旋转后，将以14,000xg离心过的上清稀释至5倍～20倍，进行测定。
3.统计分析
统计分析使用Prism软件。为了评估所建模型的诊断性能，进行了ROC分析。使用R的软件包“Epi Package”(A package for statistical analysis in epidemiology、Version 1.149、http//cran.r-project.org/web/packages/Epi/index.html)。根据ROC曲线计算AUC。根据Cancer1950；3:32-5的Youden’s index决定诊断所需的最佳CUT-OFF值。
4.生物标志物蛋白质的鉴定
测定血浆中的各种生物标志物，使用超高灵敏度自动ELISA Simoa HD-X系统(Quanterix公司。
5.各种神经系统变性疾病的生物标志物蛋白质诊断性能
使用Prism软件绘制神经系统变性疾病患者和健康者的ROC曲线并计算出AUC值。
6.结果
首先，只测定血浆中的一种生物标志物蛋白质FABP3的浓度，进行统计分析。
其结果，如图1(A)-(D)所示，在健康对照组与轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆各组之间，血浆FABP3浓度并无显著性差异。
根据图2(A)-(D)和表1，未能将健康者分别与轻度认知功能障碍患者组、阿尔茨海默病患者组、帕金森病患者组及路易体痴呆患者组区别开来。
【表1】
表1.采用FABP3诊断的性能
标准误差 P值 显著性差异
CN vs MCI -2.726 0.1870 无
CN vs AD -2.039 0.5029 无
CN vs PD -2.907 0.1815 无
CN vs DLB -3.450 0.1249 无
MCI vs AD 0.6872 0.9052 无
MCI vs PD -0.1811 0.9995 无
MCI vs DLB -0.7236 0.9578 无
AD vs PD -0.8683 0.8693 无
AD vs DLB -1.411 0.6895 无
PD vs DLB -0.5425 0.9892 无
*Turkey’s multiple comparisons test
进一步，使用针对2种生物标志物蛋白质FABP3和FABP5的抗体，并使用以式(1)表达的模型进行统计分析。
其结果，如图3(A)-(D)所示，健康对照组的SCORE值(SCORE＝1)与轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆各组的SCORE值(SCORE>1)有显著性差异，可以区别健康对照组与4种神经系统变性疾病组。
此外根据图4(A)-(I)和表2，可以分别区分(1)健康者组与轻度认知功能障碍患者组、(2)健康者组与阿尔茨海默病患者组、(3)健康者组与帕金森病患者组、(4)健康者组与路易体痴呆患者组、(5)轻度认知功能障碍患者组与阿尔茨海默病患者组、(6)轻度认知功能障碍患者组与帕金森病患者组、(7)轻度认知功能障碍患者组与路易体痴呆患者组、(8)阿尔茨海默病患者组与帕金森病患者组以及(9)帕金森病患者组与路易体痴呆患者组。
【表2】
表2.采用FABP和FABP诊断的性能
曲线下面积 标准误差 P值 诊断
CN vs MCI 0.8255 0.04137 <0.0001 excellent
CN vs AD 0.8849 0.03377 <0.0001 excellent
CN vs PD 0.6843 0.05110 0.0028 good
CN vs DLB 0.8738 0.04117 <0.0001 excellent
MCI vs AD 0.5872 0.03611 0.0167 possible
MCI vs PD 0.6030 0.04178 0.0136 possible
MCI vs DLB 0.6136 0.05051 0.0242 possible
AD vs PD 0.6780 0.03834 <0.0001 excellent
PD vs DLB 0.6954 0.04685 0.0002 good
p<0.0001excellent；p<0.001,p<0.01good；p<0.05possible(Wilson-Brown)
进一步，使用分别针对4种生物标志物FABP3、FABP5、α-synuclein及Aβ-42的抗体，并使用以式(2)表达的模型进行统计分析。
其结果，如图5(A)-(D)所示，健康对照组的SCORE值(SCORE＝1)与轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆各组的SCORE值(SCORE>1)有显著性差异，可以区别健康对照组与4种神经系统变性疾病组。
此外根据图6(A)-(I)和表3，可以分别区分(1)健康者组与轻度认知功能障碍患者组、(2)健康者组与阿尔茨海默病患者组、(3)健康者组与帕金森病患者组、(4)健康者组与路易体痴呆患者组、(5)轻度认知功能障碍患者组与路易体痴呆患者组、(6)阿尔茨海默病患者组与帕金森病患者组、(7)阿尔茨海默病患者组与路易体痴呆患者组以及(8)帕金森病患者组与路易体痴呆患者组。
【表3】
表3.采用FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42诊断的性能
曲线下面积 标准误差 P值 诊断
CN vs MCI 0.8752 0.03104 <0.0001 excellent
CN vs AD 0.9310 0.02348 <0.0001 excellent
CN vs PD 0.8102 0.04006 <0.0001 excellent
CN vs DLB 0.9433 0.03041 <0.0001 excellent
MCI vs DLB 0.7457 0.04541 <0.0001 excellent
AD vs PD 0.6315 0.04133 0.0020 good
AD vs DLB 0.7011 0.04908 <0.0001 excellent
PD vs DLB 0.7702 0.04405 <0.0001 excellent
p<0.0001excellent；p<0.001,p<0.01good；p<0.05possible(Wilson-Brown)
进一步，使用针对5种生物标志物蛋白质FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42、GFAP的抗体，并使用以式(2)表达的模型进行统计分析。
其结果，如图7(A)-(D)所示，健康对照组的SCORE值(SCORE＝1)与轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆各组的SCORE值(SCORE>1)有显著性差异，可以区别健康对照组与4种神经系统变性疾病组。
此外根据图8(A)-(I)和表4，可以分别区分(1)健康者组与轻度认知功能障碍患者组、(2)健康者组与阿尔茨海默病患者组、(3)健康者组与帕金森病患者组、(4)健康者组与路易体痴呆患者组、(5)轻度认知功能障碍患者组与阿尔茨海默病患者组、(6)轻度认知功能障碍患者组与路易体痴呆患者组、(7)阿尔茨海默病患者组与帕金森病患者组以及(8)帕金森病患者组与路易体痴呆患者组。
【表4】
表4.采用FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42、GFAP诊断的性能
曲线下面积 标准误差 P值 诊断
CN vs MCI 0.8887 0.03190 <0.0001 excellent
CN vs AD 0.9892 0.007927 <0.0001 excellent
CN vs PD 0.8416 0.03932 <0.0001 excellent
CN vs DLB 0.9511 0.02902 <0.0001 excellent
MCI vs AD 0.8028 0.03030 <0.0001 excellent
MCI vs DLB 0.7732 0.04169 <0.0001 excellent
AD vs PD 0.8569 0.02728 <0.0001 excellent
PD vs DLB 0.8280 0.03933 <0.0001 excellent
p<0.0001excellent；p<0.001,p<0.01good；p<0.05possible(Wilson-Brown)
进一步，使用针对6种生物标志物蛋白质FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42、GFAP、NF-L的抗体，并使用以式(2)表达的模型进行统计分析。
其结果，如图9(A)-(D)所示，健康对照组的SCORE值(SCORE＝1)与轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆各组的SCORE值(SCORE>1)有显著性差异，可以区别健康对照组与4种神经系统变性疾病组。
此外根据图10(A)-(I)和表5，可以分别区分(1)健康者组与轻度认知功能障碍患者组、(2)健康者组与阿尔茨海默病患者组、(3)健康者组与帕金森病患者组、(4)健康者组与路易体痴呆患者组、(5)轻度认知功能障碍患者组与阿尔茨海默病患者组、(6)轻度认知功能障碍患者组与路易体痴呆患者组、(7)阿尔茨海默病患者组与帕金森病患者组以及(8)帕金森病患者组与路易体痴呆患者组。
【表5】
表5.采用FABP3、FABP5、α-synuclein、Aβ-42、GFAP、NF-L诊断的性能
曲线下面积 标准误差 P值 诊断
CN vs MCI 0.8928 0.03008 <0.0001 excellent
CN vs AD 0.9918 0.005123 <0.0001 excellent
CN vs PD 0.9012 0.02937 <0.0001 excellent
CN vs DLB 0.9865 0.009664 <0.0001 excellent
MCI vs AD 0.7958 0.03065 <0.0001 excellent
MCI vs DLB 0.8145 0.03676 <0.0001 excellent
AD vs PD 0.7903 0.03336 <0.0001 excellent
PD vs DLB 0.8098 0.03958 <0.0001 excellent
p<0.0001excellent；p<0.001,p<0.01good；p<0.05possible
以上结果显示，根据此类生物标志物的血中浓度，使用多变量回归分析模型所得出的预测值，对判定或早期诊断神经系统变性疾病的检测方法有效。

Claims (12)

1.一种受试者的神经系统变性疾病检测方法，其特征在于：该方法包括测定由受试者生物样本中的FABP3和FABP5所组成的2种生物标志物的水平。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：还包括将所述由FABP3和FABP5组成的2种生物标志物的水平适用于和/或转换为模型，生成检测神经系统变性疾病所需的指标(评估值)，以及通过对比受试者的评估值与基准值，确定所述受试者患有神经系统变性疾病的可能性是否大。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述确定包括当所述受试者的评估值大于健康者的评估值时，会确定所述受试者患有神经系统变性疾病的可能性大。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：当所述受试者被确定为患有轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病或路易体痴呆的可能性大时，所述方法进一步包括将所述受试者的评估值分别与轻度认知功能障碍患者的评估值(基准值)、阿尔茨海默病患者的评估值(基准值)、帕金森病患者的评估值(基准值)以及路易体痴呆患者的评估值(基准值)进行对比，以及将所述受试者的评估值与所述4种疾病的各个基准值之差最小的疾病确定为所述受试者很可能患有的疾病。
5.如权利要求2～4中任一项所述的方法，其特征在于：所述模型为
SCORE＝(a+ZFABP3) / (a+ZFABP5) (1)
式中：
ZFABP3为(受试者生物样本中的FABP3浓度-健康者生物样本中的FABP3平均浓度)/(健康者生物样本中的FABP3浓度的标准偏差)，
ZFABP5为(受试者生物样本中的FABP5浓度-健康者生物样本中的FABP5平均浓度)/(健康者生物样本中的FABP5浓度的标准偏差)，
a为大于零的数，
所述SCORE使用所述评估值或基准值。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：包括进一步测定从由受试者生物样本中的Tau、α-Synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L所构成的组中选择的至少一种生物标志物的水平。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：除了所述的FABP3和FABP5这2种生物标志物之外，进一步包括将从由Tau、α-Synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L所构成的组中选择的至少一种生物标志物的水平适用于和/或转换为模型，生成检测神经系统变性疾病所需的指标(评估值)，以及通过将受试者的评估值与神经系统变性疾病患者的评估值(基准值)进行对比，确定受试者患有神经系统变性疾病的可能性是否大。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述神经系统变性疾病是从由轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆所构成的组中选择的至少一种，
所述确定包括：
当所述受试者的评估值等于或大于轻度认知功能障碍患者的评估值(基准值)时，确定为所述受试者患有轻度认知功能障碍的可能性大；
当所述受试者的评估值等于或大于阿尔茨海默病患者的评估值(基准值)时，确定为所述受试者患有阿尔茨海默病的可能性大；
当所述受试者的评估值等于或大于帕金森病患者的评估值(基准值)时，确定为所述受试者患有帕金森病的可能性大，或
当所述受试者的评估值等于或大于路易体痴呆患者的评估值(基准值)时，确定为所述受试者患有路易体痴呆的可能性大。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于：所述受试者被确定为患有所述轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病或路易体痴呆的可能性大时，所述方法进一步包括将所述受试者的评估值分别与轻度认知功能障碍患者的评估值(基准值)、阿尔茨海默病患者的评估值(基准值)、帕金森病患者的评估值(基准值)及路易体痴呆患者的评估值(基准值)进行对比，以及
将所述受试者的评估值与所述4种疾病的各个基准值之差最小的疾病确定为所述受试者很可能患有的疾病。
10.如权利要求7～9中任一项所述的方法，其特征在于：所述模型为
SCORE＝(a+ZFABP3)(a+ZTau)x(a+ZNF-L)y(a+ZGFAP)z/{(a+ZFABP5)×(
a+Za-syn)m×(a+ZAβ-42)n}×a(m+n-x-y-z)(2)
式中：
ZFABP3为(受试者生物样本中的FABP3浓度-健康者生物样本中的FABP3平均浓度)/(健康者生物样本中的FABP3浓度的标准偏差)，
ZTau为(受试者生物样本中的Tau浓度-健康者生物样本中的Tau平均浓度)/(健康者生物样本中的Tau浓度的标准偏差)，
ZNF-L为(受试者生物样本中的NF-L浓度-健康者生物样本中的NF-L平均浓度)/(健康者生物样本中的NF-L浓度的标准偏差)，
ZGFAP为(受试者生物样本中的GFAP浓度-健康者生物样本中的GFAP平均浓度)/(健康者生物样本中的GFAP浓度的标准偏差)，
ZFABP5为(受试者生物样本中的FABP5浓度-健康者生物样本中的FABP5平均浓度)/(健康者生物样本中的FABP5浓度的标准偏差)，
Za-syn为(受试者生物样本中的α-突触核蛋白浓度-健康者生物样本中的α-突触核蛋白平均浓度)/(健康者生物样本中的α-突触核蛋白浓度的标准偏差)，
ZAβ-42为(受试者生物样本中的Aβ-42浓度-健康者生物样本中的Aβ-42平均浓度)/(健康者生物样本中的Aβ-42浓度的标准偏差)，
a为大于零的数，x,y,z,m,n相互独立，在式(2)中，此类乘数的底数，在计算彼此相关的生物标志物Tau、GFAP、α-Synuclein、Aβ-42及NF-L的评估值时为1，在不计算时为0，所述SCORE被用于所述评估值或基准值。
11.一种生物标志物的用途，用于检测从由轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆所构成的组中选择的至少一种神经系统变性疾病，其特征在于：所述生物标志物是由FABP3和FABP5所构成的2种组合，由FABP3、FABP5、Tau及NF-L所构成的4种组合，由FABP3、FABP5、α-Synuclein及Aβ-42所构成的种组合，由FABP3、FABP5、α-Synuclein、Aβ-42及GFAP所构成的5种组合，或者由FABP3、FABP5、α-Synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L所构成的6种组合。
12.一种试剂盒，用于检测从由轻度认知功能障碍、阿尔茨海默病、帕金森病及路易体痴呆所构成的组中选择的至少一种神经系统变性疾病，其特征在于：该试剂盒包含分别针对由FABP3和FABP5所构成的2种蛋白质的抗体，由FABP3、FABP5、Tau及NF-L所构成的4种蛋白质的抗体，由FABP3、FABP5、α-Synuclein及Aβ-42所构成的4种蛋白质的抗体，由FABP3、FABP5、α-Synuclein、Aβ-42及GFAP所构成的5种蛋白质的抗体，或者由FABP3、FABP5、α-Synuclein、Aβ-42、GFAP及NF-L所构成的6种蛋白质的抗体。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1664795B1 (en) * 2003-09-20 2017-11-08 Electrophoretics Limited Diagnostic method for brain damage-related disorders
GB2428240A (en) * 2005-07-14 2007-01-24 Univ Gen Ve Diagnostic method for brain damage-related disorders
JP2014071016A (ja) * 2012-09-28 2014-04-21 Mitsubishi Chemical Medience Corp 神経系の変性疾患の検出方法
WO2014065323A1 (ja) * 2012-10-23 2014-05-01 独立行政法人理化学研究所 精神関連疾患の検査方法および検査キット
TWM474138U (zh) * 2013-06-18 2014-03-11 磁量生技股份有限公司 一種檢測阿茲海默症的系統
WO2017171053A1 (ja) * 2016-03-31 2017-10-05 国立大学法人東北大学 シヌクレイノパチー治療薬

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