CN115666535A - 含有脂质纳米颗粒的颗粒及其生产方法 - Google Patents

Abstract

提供了颗粒的生产方法，该方法包括造粒和干燥步骤以在气体介质中造粒和干燥：包含至少一种基质和脂质纳米颗粒的颗粒；粉末吸入剂；和含有所述基质和所述脂质纳米颗粒的悬浮液，其中脂质纳米颗粒分散在基质中，并且是选自脂质体、脂质乳液和固体脂质纳米颗粒的至少一种，并且含有生理活性物质。

Description

含有脂质纳米颗粒的颗粒及其生产方法

技术领域

本发明涉及含有脂质纳米颗粒的颗粒和生产该颗粒的方法。对2020年5月20日提交的日本专利申请2020-088154要求优先权，该申请的内容通过引用并入本文。

背景技术

近年来，作为药物递送系统(DDS)的载体，脂质体、脂质乳液、固体脂质纳米颗粒等(以下统称为脂质纳米颗粒)已受到关注并得到积极地研究。

脂质纳米颗粒是主要由脂质(诸如磷脂、脂肪酸和类固醇)组成的纳米载体，并且允许药物被包封到颗粒中，并且因此可以控制包封药物的释放，最小化由于水解/酶降解等引起的降解，并允许有效药物递送到病变部位。

脂质纳米颗粒具有约100nm的非常小的粒径，但是它们通过使用脂质的静电排斥、颗粒表面上的官能团之间的相互作用等稳定地存在于溶液中。由于这些原因，目前正在积极调查将脂质纳米颗粒应用至可注射制剂，特别是作为细胞递送的载体的应用(例如，参考专利文件1)。

此外，脂质纳米颗粒也已被证实是改善难溶性药物的溶解度的有效组分，这是由于根据其小粒径的大表面积。此外，可以通过适当地选择脂质的类型和颗粒结构来控制药物的释放。

除可注射制剂外，这些特点在口服制剂、吸入制剂等中的高效口服吸收和局部药物递送也是有效的。例如，专利文件2描述了通过使含有由生理活性物质和磷脂组成的纳米颗粒的水溶液气雾化进行吸入的方法。此外，专利文件3描述了通过冷冻干燥使脂质体凝固的方法，在该脂质体中加入了环状低聚菊糖和多羟基醇。

发明内容

技术问题

然而，考虑到储存稳定性，将脂质纳米颗粒储存在溶液中不是优选的。此外，考虑到处理时间和干燥之后纳米颗粒的分散稳定性，通过冷冻干燥固化脂质纳米颗粒并不是生产步骤的优选方法。

通过喷雾干燥法只干燥和粉碎脂质纳米颗粒的方法也是可想到的，但很明显的是由于特定于脂质纳米颗粒的高附着力和高内聚性而导致的处理特性差将是问题。因此，对脂质纳米颗粒和生产该颗粒的方法存在需求，通过该方法可以解决上述问题，同时保持脂质纳米颗粒的特性。这里，本发明的目的是提供含有适合于药用的脂质材料等的药用颗粒和制剂。

问题的解决方法

根据本发明的颗粒是包括至少一种或多种基质和脂质纳米颗粒的颗粒，其中脂质纳米颗粒分散在基质中，并且其中脂质纳米颗粒是选自脂质体、脂质乳液和固体脂质纳米颗粒的一种或多种，并且含有生理活性物质。

根据本发明的生产颗粒的方法包括造粒和干燥步骤，其中含有基质和脂质纳米颗粒的悬浮液在气体介质中被造粒和干燥。

发明的有利效果

根据本发明，可以在不损害脂质纳米颗粒的特性的情况下提供具有优良粉末特性的颗粒。

附图说明

图1是显示了液柱共振液滴排出单元的实例的示意性横截面图。

图2是显示了颗粒生产装置的实例的示意图。

图3是显示了用于颗粒生产装置的液滴排出单元的实例的示意性横截面图。

图4是显示了用于颗粒生产装置的液滴排出单元的另一个实例的示意性横截面图。

图5A显示了脂质纳米颗粒的实例。

图5B显示了脂质纳米颗粒的实例。

图5C显示了脂质纳米颗粒的实例。

图6是显示了当实施例1的含脂质纳米颗粒的微粒重新悬浮在水中时，脂质纳米颗粒的粒径分布的图。

图7是显示了试验实施例2中含脂质纳米颗粒的微粒的药物洗脱行为的图。

图8A显示了实施例1的含脂质纳米颗粒的微粒的电子显微镜图像。

图8B显示了实施例2的含脂质纳米颗粒微粒子的电子显微镜图像。

图9是显示了试验实施例3中实施例1的颗粒的吸入特征的评估结果的图。

图10是显示了试验实施例3中实施例2的颗粒的吸入特征的评估结果的图。

图11是显示了试验实施例4中环孢霉素在血液中浓度变化的图。

图12是显示了试验实施例4中环孢霉素在肺组织中的浓度的图。

具体实施方式

(颗粒)

本发明的颗粒是含有至少一种或多种基质和脂质纳米颗粒的颗粒，脂质纳米颗粒分散在基质中，并且脂质纳米颗粒是选自脂质体、脂质乳液和固体脂质纳米颗粒的一种或多种，并含有生理活性物质。生理活性物质被包封在脂质纳米颗粒中。此外，必要时颗粒含有其它材料。任何生理活性物质都可以使用，只要它在体内具有一些生理活性。

在本说明书中，除非另有说明，否则“颗粒”指的是含有基质和生理活性物质的一组微粒组合物。本发明的颗粒通常是表现出期望功能的功能性颗粒。本发明的颗粒可以通过适当地选择要包括的基质而被设计成为具有期望功能的功能性颗粒。作为功能性颗粒，例如，为了表现出期望的生理作用，将生理活性物质递送到靶位点的颗粒，即用于药物递送系统的颗粒(DDS颗粒)；在长时间内连续释放药物的持续释放颗粒；以及用于使难溶性生理活性物质增溶的增溶颗粒是示例性实例。

在本说明书中，“基质”是包含在颗粒中的组分，并且是构成每个颗粒的基材。

在本说明书中，“生理活性物质”是用于在活体中表现出生理作用的活性组分，并且其实例包括低分子量化合物，其包括药用化合物、食品化合物和化妆品化合物；以及高分子量化合物，其包括生物聚合物诸如蛋白质(诸如抗体和酶)和核酸(诸如DNA和RNA)。此外，“生理作用”是当生理活性物质在靶位点处表现出生理活性时获得的作用，并引起在例如活体、组织、细胞、蛋白质、DNA和RNA中的定量和/或定性改变或影响。此外，“生理活性”意味着生理活性物质作用于、改变和影响靶位点(例如，靶组织等)。靶位点优选的是，例如，存在于细胞表面或细胞内部的受体。在这种情况下，根据生理活性物质与特异性受体结合的生理活性而向细胞传递信号，并且因此表现出生理效应。生理活性物质可以是在体内用酶转化为成熟形式然后与特异性受体结合并表现出生理作用的物质。在这种情况下，在本说明书中，生理活性物质还包括被转化为成熟形式之前的物质。这里，生理活性物质可以是由有机体(人类或非人类有机体)产生的物质，或者可以是人工合成的物质。

在本说明书中，“改变生理活性的特性”包括，例如，提高或降低生理活性程度的特性、提高或降低生理活性效率的特性和改变生理活性类型的特性。降低生理活性程度的特性或降低生理活性效率的特性是优选的，并且降低生理活性程度的特性是更优选的。此外，生理活性的改变的实例包括可逆改变和不可逆改变，并且不可逆地改变生理活性的特性是优选的。

在本说明书中，“加热”和“冷却”通常意味着将热能施加至含有生理活性物质的液体和将热能从该液体中除去。当“被加热”或“被冷却”时，由于生理活性物质的分子结构或三维结构的改变，生理活性可以改变。具体而言，例如，当生理活性物质是蛋白质时，蛋白质的热变性、蛋白质的低温变性等是示例性实例。此外，当生理活性物质是核酸时，核酸的降解等是示例性实例。如上所述，“生理活性物质的生理活性发生改变的温度”根据所选择的生理活性物质的类型而改变，但阅读本说明书的本领域普通技术人员可以容易地认识到这将是什么温度。

在本说明书中，“外部应力”通常是从外部被施加至含有生理活性物质的液体的力。此类外部应力的实例包括震动、搅拌、剪切应力等。当施加此类外部应力时，由于生理活性物质的分子结构和三维结构的改变，生理活性可以改变。具体而言，例如，当生理活性物质是蛋白质时，由于其高阶结构的变化而导致的蛋白质失活是示例性实例。容易被外部应力去活化的蛋白质的实例包括形成多聚体的蛋白质，并且其具体实例包括酶和抗体。这里，用于产生外部应力的处理的实例包括震动处理、搅拌处理、粉碎处理、超声波处理、均质器处理和喷雾处理。根据此类处理产生的外部应力是否对应于“改变生理活性物质的生理活性的外部应力”根据所选择的生理活性物质的类型而改变，并且阅读本说明书的本领域普通技术人员可以容易认识到这将是什么外部应力。

接下来，将描述颗粒的形式。通常，含有基质和生理活性物质的DDS颗粒的形式的实例包括胶囊颗粒形式，其中生理活性物质被包封在基质中；载体颗粒，其中生理活性物质被负载于基质的表面上；以及其它颗粒形式。本发明的颗粒对应于胶囊颗粒，并且特别是分散包封的颗粒，并且包封在脂质纳米颗粒中的生理活性物质被包封在颗粒中。

本发明中分散包封的组分颗粒的形式没有特别地限制，只要将包封在脂质纳米颗粒中的生理活性物质分散并包封在基质中，并且生理活性物质在基质中的分散程度可以不均匀。此外，当颗粒含有多种类型的基质并且这些基质中的一种不均衡地包含在颗粒中的预定位置时，分散程度可以根据基质的类型在生理活性物质被包封的位置不同。对应于分散包封组分颗粒的颗粒的实例包括脂质体、使用乳液溶剂扩散法(ESD法)生产的颗粒和使用喷雾干燥法生产的颗粒。

图5A至5C是显示了脂质纳米颗粒的实例的示意性横截面图。在图5A和5B的实例中，脂质纳米颗粒具有不均衡分布于最外表面上的单层或多层的脂质。例如，脂质体具有脂质双层，并且脂质乳液具有脂质单层。图5C是固体脂质纳米颗粒的实例，其中固体脂质用作分散介质并且其中含有生理活性物质。生理活性物质被包封到脂质纳米颗粒中。生理活性物质可以分散在固体或液体分散介质中，并且脂质纳米颗粒的内部可以仅由生理活性物质组成。

在本发明的颗粒中，当包封生理活性物质的脂质纳米颗粒分散并包含在至少一种类型的基质中，并且纳米级脂质颗粒(脂质纳米颗粒)分散在基质中用于颗粒形式时，可以解决背景中描述的处理特性的问题。此外，包含在本发明的颗粒中的脂质纳米颗粒的再分散性非常好，其优点在于不需要添加分散助剂等，这些分散剂已在冷冻干燥法中进行了不同地检查。

本发明的颗粒含有包含分散在至少一种类型的基质中的生理活性物质的脂质纳米颗粒。当纳米级脂质颗粒是分散在基质中的颗粒时，可以解决由于特定于脂质纳米颗粒的高附着力和高内聚性而导致的处理特性差的问题。

(基质)

基质是构成颗粒的基材。因此，在室温下优选的是固体。基质没有特别地限制，只要其是不会对与其一起含有的生理活性物质产生不利影响的物质，并且可以是低分子量物质或高分子量物质，并且因为本发明的颗粒优选的是施加至活体的颗粒，基质优选的是对活体无毒的物质。低分子量物质优选的是具有小于15,000的重均分子量的化合物。高分子量物质优选的是具有15,000或更大的重均分子量的化合物。如上所述，基质的数量可以是一种或两种或更多，并且下面描述的任何基质都可以组合使用。

基质优选地含有水溶性材料。因为基质是水溶性的，脂质纳米颗粒可以稳定地悬浮在其中基质完全溶解的水溶液中。当这种悬浮液在下面要描述的颗粒生产步骤中形成为颗粒时，容易制备在基质中含有脂质纳米颗粒的颗粒。

-低分子量物质-

低分子量物质没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括脂质、糖类、环糊精、氨基酸和有机酸。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--脂质--

脂质没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括中链或长链甘油单酯，中链或长链甘油二酯，中链或长链甘油三酯，磷脂，植物油(例如大豆油、鳄梨油、角鲨烯油、芝麻油、橄榄油、玉米油、菜籽油、红花油、葵花籽油等)，鱼油，调味油，水不溶性维生素，脂肪酸，其混合物及其衍生物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--糖类--

糖类没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括单糖(诸如葡萄糖、甘露糖、艾杜糖、半乳糖、岩藻糖、核糖、木糖)，乳糖，蔗糖，麦芽糖，海藻糖，松二糖，棉子糖，麦芽三糖，阿卡波糖，环糊精，直链淀粉(淀粉)，和纤维素，二糖，多糖，糖醇(多元醇)(诸如甘油、山梨糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、甘露糖醇、木糖醇和赤藓糖醇)及其衍生物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--环糊精--

环糊精没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括羟丙基-β-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、α-环糊精和环糊精衍生物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--氨基酸--

氨基酸没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括缬氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苯丙氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、甘氨酸、丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、组氨酸、半胱氨酸、色氨酸及其衍生物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--有机酸--

有机酸没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括己二酸、抗坏血酸、柠檬酸、富马酸、没食子酸、戊二酸、乳酸、苹果酸、马来酸、琥珀酸、酒石酸及其衍生物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

-高分子量物质-

高分子量物质没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括水溶性纤维素、聚亚烷基二醇、聚(甲基)丙烯酰胺、聚(甲基)丙烯酸、聚(甲基)丙烯酸酯、聚烯丙胺、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚醋酸乙烯酯、可生物降解聚酯、聚乙醇酸、聚氨基酸、蛋白质诸如明胶和纤维蛋白、多糖及其衍生物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。这里，(甲基)丙烯酰胺指的是丙烯酰胺或甲基丙烯酰胺，并且(甲基)丙烯酸指的是丙烯酸或甲基丙烯酸。

--水溶性纤维素--

水溶性纤维素没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括烷基纤维素，诸如甲基纤维素和乙基纤维素；羟烷基纤维素，诸如羟乙基纤维素和羟丙基纤维素；和羟烷基烷基纤维素，诸如羟乙基甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。其中，羟丙基纤维素或羟丙基甲基纤维素是优选的，并且羟丙基纤维素是更优选的，因为其在用于生产颗粒的溶剂中具有高生物相容性和高溶解度。

---羟丙基纤维素---

具有不同粘度的各种羟丙基纤维素产品是商业上可从各种公司获得的，并且其中任何一种都可用于本发明的基质。含有2质量％的羟丙基纤维素的水溶液(20℃)的粘度没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，并且优选的为2.0mPa·s(厘泊，cps)或更高且4,000mPa·s(厘泊，cps)或更低。

此外，认为的是羟丙基纤维素的粘度取决于羟丙基纤维素的重均分子量、取代度和分子量。羟丙基纤维素的重均分子量没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其优选的为15,000或更高且400,000或更低。这里，可以使用例如凝胶渗透色谱(GPC)来测量重均分子量。

羟丙基纤维素的商业产品没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括具有15,000或更高且30,000或更低的分子量和2.0mPa·s或更高且2.9mPa·s或更低的粘度的HPC-SSL等，具有30,000或更高且50,000或更低的分子量和3.0mPa·s或更高且5.9mPa·s或更低的粘度的HPC-SL等，具有55,000或更高且70,000或更低的分子量和6.0mPa·s或更高且10.0mPa·s或更低的粘度的HPC-L等，具有110,000或更高且150,000或更低的分子量和150mPa·s或更高且400mPa·s或更低的粘度的HPC-M等，和具有250,000或更高且400,000或更低的分子量和1,000mPa·s或更高且4,000mPa·s或更低的粘度的HPC-H等(全部可从Nippon Soda Co.,Ltd.获得)。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。其中，具有15,000或更高且30,000或更低的分子量和2.0mPa·s或更高且2.9mPa·s或更低的粘度的HPC-SSL是优选的。这里，在上述商业产品中，使用凝胶渗透色谱(GPC)测量分子量，并使用2质量％的水溶液(20℃)测量粘度。

羟丙基纤维素的含量没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，并且相对于基质的质量其优选的为50质量％或更高，更优选地50质量％或更高且99质量％或更低，仍更优选地75质量％或更高且99质量％或更低，以及特别优选地80质量％或更高且99质量％或更低。

--聚亚烷基二醇--

聚亚烷基二醇没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚丁二醇及其共聚物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--聚(甲基)丙烯酰胺--

聚(甲基)丙烯酰胺没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括以下单体的聚合物，诸如N-甲基(甲基)丙烯酰胺、N-乙基(甲基)丙烯酰胺、N-丙基(甲基)丙烯酰胺、N-丁基(甲基)丙烯酰胺、N-苄基(甲基)丙烯酰胺、N-羟乙基(甲基)丙烯酰胺、N-苯基(甲基)丙烯酰胺、N-甲苯基(甲基)丙烯酰胺、N-(羟苯基)(甲基)丙烯酰胺、N-(氨磺酰基苯基)(甲基)丙烯酰胺、N-(苯磺酰基)(甲基)丙烯酰胺、N-(甲苯磺酰基)(甲基)丙烯酰胺、N,N-二甲基(甲基)丙烯酰胺、N-甲基-N-苯基(甲基)丙烯酰胺和N-羟乙基-N-甲基(甲基)丙烯酰胺。这些单体可以单独聚合或者其两个或多个可以组合聚合。此外，这些聚合物可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--聚(甲基)丙烯酸--

聚(甲基)丙烯酸没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括均聚物，诸如聚丙烯酸和聚甲基丙烯酸；和共聚物，诸如丙烯酸-甲基丙烯酸共聚物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--聚(甲基)丙烯酸酯--

聚(甲基)丙烯酸酯没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括以下单体的聚合物，诸如乙二醇二(甲基)丙烯酸酯、二甘醇二(甲基)丙烯酸酯、丙二醇二(甲基)丙烯酸酯、甘油聚(甲基)丙烯酸酯、聚乙二醇(甲基)丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三(甲基)丙烯酸酯、季戊四醇四(甲基)丙烯酸酯、和1,3-丁二醇二(甲基)丙烯酸酯。这些单体可以单独聚合或者其两个或多个可以组合聚合。此外，这些聚合物可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--聚烯丙胺--

聚烯丙胺没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括二烯丙胺和三烯丙胺。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--聚乙烯吡咯烷酮--

商业产品可用作聚乙烯吡咯烷酮。聚乙烯吡咯烷酮的商业产品没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括Plasdone C-15(商业上可从ISP TECHNOLOGIES获得)，Kollidon VA64、Kollidon K-30和Kollidon CL-M(全部商业上可从KAWARLAL获得)，和Kollicoat IR(商业上可从BASF获得)。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--聚乙烯醇--

聚乙烯醇没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括硅醇改性聚乙烯醇、羧基改性聚乙烯醇和乙酰乙酰基改性聚乙烯醇，这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--聚醋酸乙烯酯--

聚醋酸乙烯酯没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括醋酸乙烯酯-巴豆酸共聚物和醋酸乙烯酯-衣康酸共聚物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--可生物降解聚酯--

可生物降解聚酯没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括聚乳酸；聚-ε-己内酯；琥珀酸酯聚合物，诸如聚乙烯琥珀酸酯、聚丁烯琥珀酸酯和聚丁烯琥珀酸酯己二酸酯；聚羟基链烷酸酯，诸如聚羟基丙酸酯、聚羟基丁酸酯和聚羟基帕酸酯(polyhydroxyparate)以及聚乙醇酸。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。其中，聚乳酸是优选的，因为它具有高生物相容性并且允许所含的生理活性物质以持续释放方式被洗脱。

---聚乳酸---

聚乳酸的重均分子量没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，并且其优选的为5,000或更高且100,000或更低，更优选地10,000或更高且70,000或更低，仍更优选地10,000或更高且50,000或更低，以及特别优选地10,000或更高且30,000或更低。

聚乳酸的含量没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，并且相对于基质的质量其优选的为50质量％或更高，更优选地50质量％或更高且99质量％或更低，仍更优选地75质量％或更高且99质量％或更低，以及特别优选地80质量％或更高且99质量％或更低。

---聚乙醇酸---

聚乙醇酸没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括乳酸/乙醇酸共聚物，其是具有来源于乳酸的结构单元和来源于乙醇酸的结构单元的共聚物；乙醇酸/己内酯共聚物，其是具有来源于乙醇酸的结构单元和来源于己内酯的结构单元的共聚物；和乙醇酸/三亚甲基碳酸酯共聚物，其是具有来源于乙醇酸的结构单元和来源于三亚甲基碳酸酯的结构单元的共聚物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。其中，乳酸/乙醇酸共聚物是优选的，因为其具有高生物相容性，允许所含的生理活性物质以持续释放方式被洗脱，并允许所含的生理活性物质被长时间储存。

乳酸/乙醇酸共聚物的重均分子量没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，并且其优选的为2,000至250,000，更优选地2,000至100,000，仍更优选地3,000至50,000，以及特别优选地5,000至10,000。

在乳酸/乙醇酸共聚物中，来源于乳酸的结构单元(L)和来源于乙醇酸的结构单元(G)之间的摩尔比(L：G)没有特别限制，并且可以根据目的适当地选择，并且其优选的为1：99至99：1，更优选地25：75至99：1，仍更优选地30：70至90：10，以及特别优选地50：50至85：15。

乳酸/乙醇酸共聚物的含量没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，并且相对于基质的质量其优选的为50质量％或更高，更优选地50质量％或更高且99质量％或更低，仍更优选地75质量％或更高且99质量％或更低，以及特别优选地80质量％或更高且99质量％或更低。

--聚氨基酸--

聚氨基酸没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择。聚氨基酸可以是通过任意组合上面描述的氨基酸章节中示例的氨基酸而获得的聚合物，并且优选的是单个氨基酸的聚合物。优选的聚氨基酸的实例包括氨基酸均聚物，诸如聚-α-谷氨酸、聚-γ-谷氨酸、聚天冬氨酸、聚赖氨酸、聚精氨酸、聚鸟氨酸和聚丝氨酸及其共聚物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--明胶--

明胶没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括石灰处理的明胶、酸处理的明胶、明胶水解产物、明胶酶分散体、及其衍生物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

用于明胶衍生物的天然分散剂聚合物没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括蛋白质、多糖和核酸。这些包括由天然分散剂聚合物或合成分散剂聚合物组成的共聚物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

明胶衍生物指的是通过将疏水基团共价键合于明胶分子而衍生的明胶。疏水基团没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括聚酯，诸如聚乳酸、聚乙醇酸和聚-ε-己内酯；脂质，诸如胆固醇和磷脂酰乙醇胺；烷基，和含有苯环的芳基；杂芳基或其混合物。

只要不影响生理活性物质的生理活性，蛋白质没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括胶原蛋白、纤维蛋白和白蛋白。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

多糖没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括甲壳素、壳聚糖、透明质酸、藻酸、淀粉和果胶。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

(生理活性物质)

生理活性物质是用于在活体中表现出生理作用的活性组分。生理活性物质的实例包括药用组合物中含有的生理活性物质，功能性食品中含有的生理活性物质，和功能性化妆品中含有的生理活性物质。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

-药用组合物中含有的生理活性物质-

药用组合物中含有的生理活性物质没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括核酸、含有蛋白质的多肽、碳水化合物、脂质和低分子量化合物。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--核酸--

核酸通常包括DNA、RNA、其组合等，并且这些序列的部分或全部可以用已被化学改性的化学改性核酸取代。此外，核酸还包括化学合成的核酸类似物，诸如肽核酸(PNA)和吗啉反义寡核酸。例如，当目标是增强靶基因表达时，作为核酸，例如是靶基因的转录产物的mRNA是示例性实例；并且当目标是最小化靶基因表达时，作为核酸，例如靶基因或其部分的转录产物的反义核酸、具有特异性裂解靶基因的转录产物的核糖酶活性的核酸、具有通过RNAi效应抑制靶基因表达的功能的短链核酸以及由microRNA(miRNA)、适配体和寡核苷酸改性的锁定核酸是示例性实例。

--多肽--

多肽是由多个氨基酸组成的聚合物，并且其中，具有高阶结构并表现出来源于此类高阶结构的功能的多肽被特称为蛋白质。多肽包括未由其天然发生状态改性的那些多肽和被改性的那些多肽两者。改性的实例包括乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价键合、血红素部分的共价键合、核苷酸或核苷酸衍生物的共价键合、脂质或脂质衍生物的共价键合、磷脂酰肌醇的共价键合、交联、环化、二硫键的形成、去甲基化、共价交联的形成、胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲酰化、γ-羧化、糖基化、GPI锚定物形成、羟基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、蛋白质降解处理、磷酸化、异戊烯化、外消旋化、硒化、硫酸化、转移RNA介导的将氨基酸添加到蛋白质(诸如精氨酸化)、以及泛素化。当目的是抑制或最小化靶蛋白的功能时，蛋白质的实例包括相对于靶蛋白具有显性阴性特性的靶蛋白突变体和与靶蛋白结合的抗体。抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体，只要它们与靶蛋白结合，并且可以是具有多重特异性的抗体，诸如双特异性抗体或三特异性抗体。抗体可以来源于任何动物物种，只要表现出生理作用，并且优选地为人源抗体、人嵌合抗体或人源化抗体。在本发明中，“抗体”通常是免疫球蛋白分子，诸如IgG、IgE、IgM、IgA和IgD，并且还包括具有抗原结合区的其抗体片段(例如，F(ab’)2片段、Fab’片段、Fab片段、Fv片段、rIgG片段、单链抗体等)和改性的抗体(标记抗体等)，只要它们可与特异性抗原结合。这里，其它形式的蛋白质可以包括，例如酶。酶的实例包括水解酶、磷酸化酶、去磷酸化酶、转移酶、氧化还原酶、裂解酶、异构酶和合酶。

--碳水化合物--

碳水化合物的实例包括单糖、二糖、寡糖和多糖。此外，碳水化合物还包括复合碳水化合物，其中这些碳水化合物与蛋白质、脂质等共价键合；以及糖苷，其中糖苷配基(诸如醇、酚、皂苷和色素)与糖类的还原基团键合。

--脂质--

脂质的实例包括简单脂质、复合脂质和衍生脂质。

--低分子量化合物--

低分子量化合物通常包括具有几百至几千的分子量的天然或人造物质。此外，低分子量化合物包括对应于上述水溶性差物质的物质、对应于上述水溶性物质的物质等。这里，低分子量化合物可以是任何形式的，诸如盐或水合物，只要其起生理活性物质的作用。

水溶性差物质没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括灰黄霉素、伊曲康唑、诺氟沙星、他莫昔芬、环孢霉素、格列本脲、曲格列酮、硝苯地平、非那西丁、苯妥英、洋地黄毒苷、尼伐地平、地西泮、氯霉素、吲哚美辛、尼莫地平、二氢麦角碱、可的松、地塞米松、萘普生、妥布特罗、丙酸倍氯米松、丙酸氟替卡松、普仑司特、曲尼司特、氯雷他定、他克莫司、安普那韦、贝沙罗汀、骨化三醇、氯法齐明、地高辛、度骨化醇、屈大麻酚、依托泊苷、异维甲酸、洛匹那韦、利托那韦、孕酮、沙奎那韦、西罗莫司、维甲酸、两性霉素、非诺多泮、美法仑、帕立骨化醇、丙泊酚、伏立康唑、齐拉西酮、多西他赛、氟哌啶醇、劳拉西泮、替尼泊苷、睾酮、戊柔比星、吉非替尼、厄洛替尼、奥希替尼、博舒替尼、凡德他尼、艾乐替尼、劳拉替尼、阿贝西利、酪氨酸激酶抑制剂AG494、索拉非尼、达沙替尼、拉帕替尼、伊马替尼、莫特沙尼、来他替尼、坦度替尼、多索吗啡、阿昔替尼和4-苄基-2-甲基-1,2,4-噻二唑烷-3,5-二酮。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

水溶性物质没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括阿巴卡韦、对乙酰氨基酚、阿昔洛韦、阿米洛利、阿米替林、安替比林、阿托品、丁螺环酮、咖啡因、卡托普利、氯喹、氯苯那敏、环磷酰胺、双氯芬酸、地昔帕明、地西泮、地尔硫卓、苯海拉明、丙吡胺、多辛、多西环素、依那普利、麻黄碱、乙胺丁醇、炔雌醇、氟西汀、丙咪嗪、葡萄糖、酮醇、酮洛芬、拉贝洛尔、左旋多巴、左氧氟沙星、美托洛尔、甲硝唑、咪达唑仑、米诺环素、米索前列醇、二甲双胍、硝苯地平、苯巴比妥、泼尼松龙、丙嗪、普萘洛尔、奎尼丁、罗格列酮、水杨酸、茶碱、丙戊酸、维拉帕米和齐多夫定。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

-功能性食品中含有的生理活性物质-

功能性食品中含有的生理活性物质没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括维生素A、维生素D、维生素E、叶黄素、玉米黄素、硫辛酸、类黄酮和脂肪酸。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

脂肪酸的实例包括ω-3脂肪酸和ω-6脂肪酸。

-功能性化妆品中含有的生理活性物质-

功能性化妆品中含有的生理活性物质没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括醇、脂肪醇、和多元醇、醛、烷醇胺、烷氧基化醇(例如，聚乙二醇衍生物诸如醇和脂肪醇)、烷氧基化酰胺、烷氧基化胺、烷氧基化羧酸、含盐的酰胺(例如，神经酰胺等)、胺、含盐的氨基酸和烷基取代的衍生物、酯、烷基取代的和酰基衍生物、聚丙烯酸、丙烯酰胺共聚物、己二酸共聚物、氨基硅油、生物聚合物及其衍生物、丁烯共聚物、碳水化合物(例如多糖、壳聚糖、其衍生物等)、羧酸、卡波姆、酯、醚、和聚合物醚(例如PEG衍生物、PPG衍生物等)、甘油酯及其衍生物、卤素化合物、含盐的杂环化合物、亲水胶体和含盐的衍生物及橡胶(例如，纤维素衍生物、明胶、黄原胶、天然橡胶等)、咪唑啉、无机物(粘土、TiO₂、ZnO等)、酮(例如，樟脑等)、羟乙基磺酸、羊毛脂及其衍生物、有机盐、含盐的苯酚(例如对羟基苯甲酸酯等)、磷化合物(例如磷酸衍生物等)、聚丙烯酸酯和丙烯酸酯共聚物、蛋白质和酶衍生物(例如胶原蛋白等)、含盐的合成聚合物、硅氧烷和硅烷、山梨聚糖衍生物、甾醇、磺酸及其衍生物以及蜡。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

如上所述，生理活性物质优选地具有根据加热、冷却或外部应力而改变生理活性的特性。当本发明的颗粒中含有此类生理活性物质时，在所生产的颗粒中生理活性程度的降低被最小化。因此，基于可进一步最小化生理活性程度的降低的观点，当其生理活性容易根据加热、冷却或外部应力而改变的生理活性物质被用作本发明的颗粒中含有的生理活性物质时，本发明的作用被显著的表现出。具体而言，生理活性物质优选地是药用组合物中含有的生理活性物质，更优选地至少一种选自蛋白质和核酸之一，以及仍更优选地至少一种选自抗体和酶之一。

(脂质)

脂质不均衡地分布于纳米颗粒的最外层表面上的单层或多层中。脂质的类型可以根据期望的特性适当地改变。其具体实例包括磷脂、饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸等，但本发明不限于此，只要它们形成纳米颗粒。

更具体而言，例如，磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、花生酸、亚油酸、二十二碳六烯酸、油酸及其衍生物是示例性实例。

(颗粒的物理特性)

本发明的颗粒的独特物理特性包括，例如，生理活性率、粒径分布和粒径。

-生理活性率-

在本说明书中，“生理活性率”指的是由材料生产的颗粒中的生理活性程度与用于颗粒生产的材料中的生理活性程度的比率({颗粒生产之后的生理活性程度/颗粒生产之前的生理活性程度}×100)。此外，“生理活性程度”代表在对生理活性物质的生理活性进行定量测量时获得的测量值。这里，“定量测量”并不限于定量测量生理活性程度本身的直接方法，并且例如，可以使用通过将其与预定的参照物进行比较来测量生理活性程度的相对定量测量方法。

-粒径分布-

本发明的颗粒优选地具有窄粒径分布的特性。表明此类粒径分布的狭窄的指数的具体实例包括相对跨度系数(R.S.F)和体积平均粒径(Dv)/数量平均粒径(Dn)，并且例如，R.S.F优选地为0<(R.S.F)≤1.2，以及体积平均粒径(Dv)/数量平均粒径(Dn)优选地为1.00或更高并且1.50或更低。当粒径分布在上述范围内时，当从期望的粒径视角看，对应于粗颗粒的颗粒的比例下降。因此，即使当在使用之前应当通过过滤对颗粒进行灭菌，诸如当颗粒被包含在药用组合物中时，也可以简单而有效地执行过滤灭菌法，而不会堵塞过滤灭菌过滤器。此外，当粒径均匀时，每个颗粒中的生理活性物质和基质的含量以及每个颗粒的表面积都变得均匀。因此，从每个颗粒中洗脱的生理活性物质的量变得均匀，并且可以提供允许生理活性物质以高度可控的方式持续释放的颗粒。此外，当粒径均匀时，可以最小化由不包括在基质中的单一生理活性物质组成的具有小粒径的颗粒的产生，并且可以提供具有持续释放特性与最小化的初始爆发的颗粒。

--相对跨度系数(R.S.F)--

在本说明书中，“相对跨度系数(R.S.F)”被定义为(D90-D10)/D50。D90代表从累积粒径分布的小颗粒一侧90体积％的累积，D50代表从累积粒径分布的小颗粒一侧50体积％的累积，D10代表从累积粒径分布的小颗粒一侧10体积％的累积。(R.S.F)优选地为0<(R.S.F)≤1.2，更优选地为0<(R.S.F)≤1.0，以及仍更优选地为0<(R.S.F)≤0.6。

测量(R.S.F)的方法包括，例如，根据动态光散射，使用浓缩系统分析仪(“FPAR-1000”，商业上可从Otsuka Electronics Co.,Ltd.获得)的测量方法。

--体积平均粒径(Dv)/数量平均粒径(Dn)--

体积平均粒径(Dv)/数量平均粒径(Dn)是由体积平均粒径(Dv)除以数量平均粒径(Dn)而获得的值。体积平均粒径(Dv)/数量平均粒径(Dn)优选地为1.00或更高且1.50或更低，更优选地为1.00或更高且1.20或更低。

测量体积平均粒径(Dv)和数量平均粒径(Dn)的方法包括，例如，使用激光衍射/散射型粒径分布测量装置(装置名称：Microtrac MT3000II，商业上可从MicrotracBel Corp.获得)的测量方法。

-粒径-

关于颗粒的体积平均粒径(Dv)，只要其是颗粒可以在其中含有脂质纳米颗粒的尺寸，就可以根据目的等适当地选择最佳值。脂质纳米颗粒通常具有约10至300nm的体积平均粒径。因此，本发明的颗粒的体积平均粒径的下限值可以大于上述值，其实例包括0.5μm、1μm、2μm、3μm、4μm和5μm。此外，只要可以被生产为颗粒，体积平均粒径的上限值没有特别地限制，并且可以根据生产效率、目的等适当地选择，并考虑到颗粒的处理特性，并且例如，300μm、250μm、200μm、150μm和100μm是示例性实例。因此，本说明书中颗粒的体积平均粒径的范围是，例如，0.5μm或更大且100μm或更小。上述下限值和上限值可以任意组合。

当体积平均粒径(Dv)为0.5μm或更大且100μm或更小时，可以保留足够量的生理活性物质，并且例如，可以生产允许生理活性物质在长时间内持续释放的颗粒。这里，体积平均粒径(Dv)更优选地为1μm或更大且50μm或更小，仍更优选地1μm或更大且25μm或更小，以及特别优选地1μm或更大且10μm或更小。

测量颗粒的体积平均粒径(Dv)的方法包括，例如，使用浓缩系统分析仪(“FPAR-1000”，商业上可从Otsuka Electronics Co.,Ltd.获得)根据动态光散射的测量方法和使用激光衍射/散射型粒径分布测量装置(装置名称：Microtrac MT3000II，商业上可从MicrotracBel Corp.获得)的测量方法。

本发明的颗粒通过根据需要结合其它组分(诸如分散剂和添加剂)可用于，例如，药用组合物、功能性食品和功能性化妆品。此外，根据不同的目的，颗粒可以是功能性颗粒。功能性细颗粒没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括立即释放颗粒、持续释放颗粒、pH依赖性释放颗粒、pH不依赖性释放颗粒、肠包衣颗粒、释放控制包衣颗粒和含纳米晶体的颗粒。

-药用组合物-

药用组合物含有本发明的颗粒，并根据需要含有用于制剂等的添加剂物质。添加剂物质没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择。添加剂物质的实例包括赋形剂、增味剂、崩解剂、流化剂、吸附剂、润滑剂、增味剂、表面活性剂、香料、着色剂、抗氧化剂、掩蔽剂、抗静电剂和润湿剂。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--赋形剂--

赋形剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括乳糖、蔗糖、甘露醇、葡萄糖、果糖、麦芽糖、赤藓糖醇、麦芽糖醇、木糖醇、帕拉金糖、海藻糖、山梨糖醇、结晶纤维素、滑石粉、无水硅酸、无水磷酸钙、沉淀碳酸钙和硅酸钙。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--增味剂--

增味剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括L-薄荷醇、白砂糖、D-山梨醇、木糖醇、柠檬酸、抗坏血酸、酒石酸、苹果酸、阿斯巴甜、乙酰磺胺酸钾、索马甜、糖精钠、甘草甜素二钾、谷氨酸钠、5’-肌苷酸钠和5’-鸟苷酸钠。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--崩解剂--

崩解剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、羟丙基淀粉和玉米淀粉。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--流化剂--

流化剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括轻质无水硅酸、水合二氧化硅和滑石粉。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

商业产品可用作轻质无水硅酸。轻质无水硅酸的商业产品没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括Adsolider 101(商业上可从Freund Corp.获得：平均孔径：21nm)。

--吸附剂--

商业产品可用作吸附剂。吸附剂的商业产品没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括产品名称：Carplex(注册商标，组分名称：合成二氧化硅，商业上可从DSL.Japan Co.,Ltd.获得)，产品名称：Aerosil(注册商标，商业上可从Nippon AerosilCo.,Ltd.获得)200(组分名称：亲水性气相二氧化硅)，产品名称：SYLYSIA(注册商标，组分名称：无定形二氧化硅，商业上可从Fuji Silysia Chemical Ltd.获得)，和产品名称：ALCAMACR(注册商标，组分名称：合成水滑石，商业上可从Kyowa Chemical Industry Co.,Ltd.获得)。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--润滑剂--

润滑剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、蔗糖脂肪酸酯、硬脂富马酸钠、硬脂酸、聚乙二醇和滑石粉。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--增味剂--

增味剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括海藻糖、苹果酸、麦芽糖、葡萄糖酸钾、茴香精油、香草精油和豆蔻精油。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--表面活性剂--

表面活性剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括卵磷脂和聚山梨醇酯诸如聚山梨醇酯80；聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚物；和十二烷基硫酸钠。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--香料--

香料没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括柠檬油、橙油和薄荷油。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--着色剂--

着色剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括氧化钛、食品黄5号、食品蓝2号、三氧化二铁和黄色三氧化二铁。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--抗氧化剂--

抗氧化剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括抗坏血酸钠、L-半胱氨酸、亚硫酸钠和维生素E。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--掩蔽剂--

掩蔽剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括氧化钛。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--抗静电剂--

抗静电剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括滑石粉和氧化钛。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

--润湿剂--

润湿剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括聚山梨醇酯80、十二烷基硫酸钠、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇和羟丙基纤维素(HPC)。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

药用组合物制剂没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括大肠递送制剂、脂质微球制剂、干乳制剂、自乳化制剂、干糖浆、鼻腔施用粉末制剂、肺部施用粉末制剂(粉末吸入剂)、蜡基体制剂、水凝胶制剂、聚合物胶束制剂、粘膜粘合剂制剂、胃漂浮制剂、脂质体制剂和固体分散制剂。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。

药用组合物的剂型的实例包括片剂、胶囊、栓剂和其它固体剂型；用于鼻内或肺部施用的气溶胶；和液体剂，诸如注射剂、眼内剂、耳内剂和口服剂。当制备为液体剂时，它可以在使用前作为粉末被提供并溶解在溶剂诸如水中，并仅在使用前制备。

药用组合物的施用途径没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括口服施用、鼻腔施用、直肠施用、阴道施用、皮下施用、静脉内施用和肺部施用。其中，静脉内施用和肺部施用是优选的。

-功能性食品-

功能性食品含有本发明的颗粒和食品，并根据需要含有其它添加剂物质。

食品没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括冷冻甜点、面条、糖果、水产品、渔业和畜牧加工食品、乳制品、油脂、油脂加工食品、调味料、蒸煮袋食品、保健食品和膳食补充剂。

-功能性化妆品-

功能性化妆品含有本发明的颗粒和化妆品，并根据需要含有其它添加剂物质。

化妆品没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括护肤化妆品、化妆化妆品、护发化妆品、身体护理化妆品和香水化妆品。

(颗粒生产方法和生产装置)

生产本发明的颗粒的方法包括造粒和干燥步骤，其中通过将溶剂从包含基质、含有生理活性物质的脂质纳米颗粒和溶剂的悬浮液(以下被称为“颗粒组成液”)中除去来对颗粒进行造粒，并且根据需要包括其它步骤。

生产脂质纳米颗粒的方法根据要生产的脂质纳米颗粒的类型变化。例如，脂质乳液可以通过混合乳化或挤压法生产，并且固体脂质纳米颗粒可以通过溶剂扩散法等生产，但本发明不限于此。

生产本发明的颗粒的装置包括液滴排出单元，其被配置为作为液滴排出包含基质、含有生理活性物质的脂质纳米颗粒和溶剂的悬浮液，以及造粒单元，其配置为通过将溶剂从液滴中除去来对颗粒进行造粒，并且根据需要包括其它单元。

在本说明书中，“除去”意味着将液相中含有的溶剂从液相中除去，但不限于其中液相中含有的溶剂被完全除去的情况，而是包括其中只要可以对颗粒进行造粒就可以保留液相中含有的溶剂的情况。此外，在本说明书中，只要将液相中含有的溶剂从液相中除去，“除去”就没有特别地限制，并且包括，例如其中液相被带进与另一个液相接触，并且液相中含有的溶剂在其它液相中扩散的情况(以下被称为“在液体中干燥”)，以及其中在气体或真空中，液相中含有的溶剂从液相中蒸发的情况(以下被称为“在空气中干燥”)。

在下文中，将更详细地描述颗粒生产方法和生产装置，但颗粒生产方法和生产装置不限于下列实施方式。

在实施方式(在空气中干燥)中生产颗粒的方法包括液滴排出步骤，其中包含基质、含有具有生理活性物质的脂质纳米颗粒和溶剂的液滴被排出到气体介质中；以及造粒和干燥步骤，其中溶剂从液滴中蒸发、除去液滴中含有的溶剂、和对颗粒进行造粒，并且根据需要包括其它步骤。

如在实施方式中，多种方法通常被已知是用于在气体介质中对颗粒进行造粒的干法造粒法。

例如，空气中粉碎方法，诸如通过冷却通过熔融捏合和均匀分散微粒材料获得的熔融捏合产品，然后使用粉碎机执行粉碎来获得具有小粒径的粉碎颗粒的方法，以及通过冷冻干燥含有微粒材料的液体然后使用粉碎机执行粉碎来获得具有小粒径的粉碎颗粒的方法是示例性实例。

此外，喷雾干燥法，诸如通过将含有微粒材料的液体喷射到气体介质中并使其干燥来获得具有小粒径的喷雾颗粒的方法是示例性实例。在这里，喷雾方法的实例包括加压液体并使其从喷嘴喷射的加压喷嘴型方法以及将液体发送到以高速旋转的圆盘并用离心力执行散射的圆盘式方法。

其中，喷雾干燥法是优选的，因为含有脂质纳米颗粒的颗粒是有效生产的。当应用喷雾干燥法时，可以同时执行干燥和造粒过程。只要是喷雾干燥法，喷雾方法就没有特别地限制，但是考虑到颗粒均匀性以及脂质纳米颗粒和生理活性物质的外部应力和热能，使用下面描述的压电式驱动力通过振动的排出方法是特别优选的。

-液滴排出步骤-

实施方式中的液滴排出步骤是将包含基质、含有具有生理活性的生理活性物质的脂质纳米颗粒和溶剂的液滴排出到气体介质中的步骤。

作为实施方式中液滴排出步骤的实例，通过振动排出包含基质、含有生理活性物质的脂质纳米颗粒和溶剂的液体(悬浮液)作为液滴的方法将再次描述。可以使用排出液滴的方法而没有特别的限制，其实例包括使用雾化器、喷雾嘴、压电式等作为驱动力通过振动的排出方法。其中，特别地，使用压电式驱动力通过振动的排出方法优选地被使用，因为获得具有均匀粒径的颗粒。通过施加振动执行排出的方法没有特别地限制，并且例如，下列方法是示例性实例。在下文中将描述各个方法。

(a)使用体积改变单元的方法，该单元配置为使用振动改变液体容纳单元的体积。

(b)使用收缩发生单元的方法，该单元配置为从液体容纳单元中配备的多个排出孔释放液体，同时对液体容纳单元施加振动，并通过收缩状态使液体从柱状变成液滴。

(c)使用喷嘴振动单元的方法，该单元配置为振动在其上形成喷嘴的薄膜。

体积改变单元没有特别地限制，只要它可以改变液体容纳单元的体积，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括压电元件(有时被称为“压电式元件”)，该元件在施加电压时膨胀和收缩。

收缩发生单元的实例包括使用日本未经审查专利申请，首次公开2007-199463中描述的技术的单元。日本未经审查专利申请，首次公开2007-199463描述了这样的单元，其配置为从液体容纳单元中配备的多个喷嘴孔释放液体，同时使用与液体容纳单元的一部分接触的压电元件通过振动单元向液体容纳单元施加振动，并通过收缩状态使液体从柱状变成液滴。

喷嘴振动单元的实例包括使用日本未经审查专利申请，首次公开2008-292976中描述的技术的单元。日本未经审查专利申请，首次公开2008-292976描述了这样的单元，其配置为从多个喷嘴孔中释放液体并使其成为液滴，该单元使用由液体容纳单元中配备的多个喷嘴形成的薄膜和设置在该薄膜的可变形区域内部的周围并使该薄膜发生振动的压电元件。

压电元件通常被用作配置为产生振动的单元。压电元件没有特别地限制，并且形状、尺寸和材料可以适当地选择，例如，可以适宜的使用传统喷墨排出系统中使用的压电元件。

压电元件的形状和尺寸没有特别地限制，并且可以根据排出孔的形状等适当地选择。

压电元件的材料没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括压电陶瓷，诸如锆钛酸铅(PZT)；压电聚合物，诸如聚偏二氟乙烯(PVDF)；以及单晶，诸如晶体、LiNbO₃、LiTaO₃和KNbO₃。

排出孔没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括在喷嘴板中配备的开口等。

排出孔的横截面形状和尺寸可以适当地选择。排出孔的截面形状没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括(1)：开口直径从内部(液体容纳单元的一侧)到外部(液体从中排出的一侧)变小的锥形形状，(2)：其中开口直径从内部(液体容纳单元的一侧)到外部(液体从中排出的一侧)变窄，同时保持圆形的形状，(3)：其中开口直径从内部(液体容纳单元的内部)到外部(液体从中排出的一侧)变窄，同时保持一定的喷嘴角度的形状，以及(4)：(1)的形状和(2)的形状的组合。其中，(3)的形状是优选的，因为施加于排出孔中的液体的压力是最大化的。

(3)的形状中喷嘴角度没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其优选地为60°或更大并且90°或更小。当喷嘴角度为60°或更大并且90°或更小时，液滴排出可以稳定。

排出孔的尺寸没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，例如，直径优选地为小于1,000μm，更优选地1.0μm或更大且小于1,000μm，仍更优选地1.0μm或更大且500μm或更小，以及特别优选地1.0μm或更大且50μm或更小。这里，当排出孔的形状不是正圆时，使用具有与排出孔的面积相同的面积的正圆。

颗粒组成液包含基质、含有具有生理活性的生理活性物质的脂质纳米颗粒和溶剂，但对于液体(悬浮液)中包含的基质和含有生理活性物质的脂质纳米颗粒，可以使用与颗粒中包含的基质、脂质和生理活性物质类似的各种材料，因此将省略其描述并且将仅描述溶剂。

--溶剂--

溶剂是基质溶解在其中的液体。溶剂的实例包括水、脂肪族卤代烃(例如，二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿等)、醇(例如，甲醇、乙醇、丙醇等)、酮(例如，丙酮、甲乙酮等)、醚(例如，二乙醚、二丁醚、1,4-二氧六环等)、脂肪烃(例如，正己烷、环己烷、正庚烷等)、芳香烃(例如，苯、甲苯、二甲苯等)、有机酸(例如，乙酸、丙酸等)、酯(例如，乙酸乙酯等)、酰胺(例如，二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺等)及其混合溶剂。这些可以单独使用或者其两个或多个可以组合使用。其中，优选的是使用水，以获得稳定的脂质纳米颗粒悬浮液。

溶剂相对于颗粒组成液的质量的含量优选地为70质量％或更高且99.5质量％或更低，更优选地90质量％或更高且99质量％或更低。当含量为70质量％或更高且99.5质量％或更低时，在微粒材料的溶解度和液体粘度方面，生产稳定性得到改善。

颗粒组成液的粘度没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其优选地为0.5mPa·s或更高且15.0mPa·s或更低，更优选地0.5mPa·s或更高且10.0mPa·s或更低。这里，可以使用例如粘弹性测量装置(装置名称：MCR流变仪，商业上可从AntonPaar获得)在25℃的条件和10s^-1的剪切速率下测量粘度。液体的粘度优选地为0.5mPa·s或更高且15.0mPa·s或更低，因为可以在上述单元中执行合适的排出用于排出液滴。

颗粒组成液的表面张力没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其优选地为10mN/m或更高且60mN/m或更低，更优选地20mN/m或更高且50mN/m或更低。这里，可以使用例如便携式表面张力计(装置名称：PocketDyne，商业上可从KRUSS获得)根据最大发泡压力法在25℃的条件和1,000ms的寿命下测量表面张力。液体的表面张力优选地为0.5mPa·s或更高且15.0mPa·s或更低，因为在上述单元中可以执行合适的排出用于排出液滴。

-造粒和干燥步骤-

实施方式中的造粒和干燥步骤是这样的步骤，其中将溶剂从液滴中蒸发，除去液滴中含有的溶剂，并对颗粒进行造粒。这里，造粒和干燥步骤在气体介质中执行，并且具体而言，优选地在液滴排出步骤中排出到气体介质中的液滴在气体介质中飘动时执行。根据该步骤中的造粒，颗粒的形式可以是固体分散体，并且具体而言，可以生产以其中含有生理活性物质的脂质纳米颗粒分散在基质中的形式的颗粒。

和传统的喷雾干燥法不同，没有必要通过加热或冷却来干燥由该方法生产的颗粒，并且特别地，有利于形成含有其生理活性容易通过加热或冷却改变的生理活性物质的颗粒。此外，可以在执行控制以便液滴不聚结的同时排出具有大约均匀的尺寸的液滴，并且通过从此类液滴中蒸发溶剂来执行造粒，并且如图6所示，可以生产大量具有均匀尺寸的颗粒，并缩窄粒径分布。

图6是显示了在实施方式中造粒和干燥步骤中生产的颗粒的粒径分布的实例的示意图。在图6中，粒径分布中仅出现一个窄峰，并且没有出现指示粗颗粒的峰。此外，当用于形成液滴等的排出单元的排出孔的尺寸得到适当地调节时，可以调节颗粒的粒径。此外，作为用于减小颗粒的粒径的装置，不使用产生大外部应力的粉碎装置或施加高剪切力的喷雾装置，而是通过使用配置为通过振动等形成液滴的排出单元，即使颗粒材料含有具有由于外部应力而改变生理活性的特性的生理活性物质，可以最小化生理活性物质的生理活性的改变，并且因此，可以最小化生理活性程度的降低。

此外，在该步骤中，在造粒期间，由于与溶剂(诸如水)接触是不必要的，因此可以通过颗粒生产步骤生产具有高比例生理活性物质保留在颗粒中的颗粒(生理活性物质保留率)。根据该步骤，与其他方法相比，可以提高颗粒的生理活性率，例如，生理活性率可以是50％或更高。

这里，在造粒和干燥步骤中，液滴被排出到输送气流中，溶剂从液滴中蒸发，因此颗粒可以被造粒。使用输送气流从液滴中蒸发溶剂的方法没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，并且例如，使输送气流的输送方向呈基本上垂直于其中液滴被排出的方向的方向的方法是优选的。此外，优选的为适当地调节输送气流的温度、蒸气压、气体类型等。这里，可以配备加热单元以调节输送气流的温度，但是如上所述，在造粒步骤中，液滴被排出，同时液滴之间的聚结被最小化。因此，加热单元可以最小化热的程度，具体而言，加热可以执行到使得生理活性物质的生理活动不改变的程度。

此外，只要收集的颗粒保持固体状态，溶剂就不必完全蒸发，并且在收集之后可额外增加单独的干燥步骤。此外，可以使用通过应用温度改变、化学改变等使溶剂将液滴中蒸发的方法。

-其他步骤-

其他步骤没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括颗粒收集步骤。

颗粒收集步骤是其中收集生产的颗粒的步骤，并且可以适宜地由颗粒收集单元来执行。颗粒收集单元没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括旋风收集器和后置过滤器。

在实施方式中的颗粒生产装置(在空气中干燥)包括液滴排出单元，其配置为将包含基质、含有具有生理活性的生理活性物质的脂质纳米颗粒和溶剂的液滴排出到气体中；以及造粒单元，其配置为将溶剂从液滴中蒸发，除去液滴中含有的溶剂，并对颗粒进行造粒，并且根据需要包括其他单元。

-液体容纳容器-

液体容纳容器是容纳包含基质、含有生理活性物质的脂质纳米颗粒和溶剂的液体的容器。

液体容纳容器可以是柔性的，或者可以不是柔性的。液体容纳容器的材料没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，例如，其可以由树脂或金属制成。液体容纳容器的结构没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，例如，其可以是封闭结构或非封闭结构。

-液滴排出单元-

液滴排出单元是这样的单元，其配置为将包含基质、含有生理活性物质的脂质纳米颗粒和溶剂的液体(悬浮液)排出到气体介质中并形成液滴。此类液滴形成单元如上述实施方式的颗粒生产装置中使用的液滴排出单元的描述中详细描述的。在优选的实施方式中，液滴排出单元通过振动排出颗粒组成液并形成液滴。

液滴排出单元与液体容纳容器连接。用于连接液滴排出单元和液体容纳容器的单元没有特别地限制，只要液体可以从液体容纳容器供应到液滴排出单元，并且可以根据目的适当地选择，其实例包括管道(管道、管子等)。

液滴排出单元优选地具有振动赋予构件，该构件通过将振动赋予至液体来排出液滴。振动没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，并且例如，频率优选地为1kHz或更高，更优选地150kHz或更高，以及仍更优选地300kHz或更高且500kHz或更低。当振动为1kHz或更高时，从排出孔喷出的液柱可以形成为具有良好再现性的液滴，并且当振动为150kHz或更高时，可以提高生产效率。

作为具有振动赋予构件的液滴排出单元，例如喷墨喷嘴是示例性实例。对于喷墨喷嘴的排出机构，例如可以使用液柱共振法、膜振动法、液体振动法、瑞利分裂法等。

-造粒单元-

造粒单元是用于从液滴中蒸发溶剂、除去液滴中含有的溶剂并且对颗粒进行造粒的单元。作为造粒单元，例如，用于形成从液滴中蒸发溶剂的空间的构件是示例性实例。造粒单元优选地具有用于形成输送气流的输送气流形成单元。

接下来，将基于使用液柱共振液滴排出单元作为液滴排出单元的方面描述实施方式的具体方面。这里，本领域普通技术人员应当自然地理解的是液滴排出单元不限于液柱共振液滴排出单元，以及可以使用另一种液滴排出单元(例如，使用膜振动法的排出单元、使用瑞利分裂法的排出单元、使用液体振动法的排出单元等)。

首先，将详细地描述液柱共振液滴排出单元，其是构成颗粒生产装置的一个单元。

图1是显示了液柱共振液滴排出单元的实例的示意性横截面图。液柱共振液滴排出单元11具有液体公用供应路径17和液柱共振液室18。液柱共振液室18在纵向上与配备在两端壁面的一个壁面上的液体公用供应路径17连通。此外，液柱共振液室18包括用于排出液滴21的排出孔19，其在与两端壁面相连的壁面的一个壁面上；和振动发生单元20，其配备在面对排出孔19的壁面上，并配置为产生高频振动以形成液柱共振驻波。这里，高频电源与振动发生单元20连接。此外，可以配备气流通道，通过该通道供应用于输送从液柱共振排出单元11排出的液滴21的气流。

包含基质、含有生理活性物质的脂质纳米颗粒和溶剂的液体14(悬浮液)通过液体循环泵穿过液体供应管道流入液体柱共振液滴排出单元11的液体公用供应路径17，并供应给液柱共振液室18。然后，在充满液体14的液柱共振液室18中，形成压力分布，液柱共振驻波由振动发生单元20产生。然后，液滴21从布置在驻波的波腹区域的排出孔19排出，驻波是液柱共振驻波的一部分，其振幅大并且压力波动大。根据该液柱共振的驻波的波腹区域是除了驻波的节点之外的区域，并且具有足够程度的振幅以排出液体的驻波压力波动的区域是优选的，并且从压力驻波的振幅被最大化的位置(速度驻波的节点)朝向振幅被最小化的位置的±1/4波长的区域是更优选的。

在驻波的波腹区域，即使打开多个排出孔，也可以从中形成基本上均匀的液滴，并且此外，液滴可以有效地被排出，并且不太可能发生排出孔的堵塞。这里，已经通过液体公用供应路径17的液体14通过液体回流管道循环。当液柱共振液室18中液体的量由于液滴21的排出而减少时，由于液柱共振液室18中的液柱共振驻波的作用而吸取力起作用，并且从液体公用供应路径17供应的液体14的流速增加。然后，液柱共振液室18重新充满液体14。然后，当液柱共振液室18重新充满液体14时，通过液体公用供应路径17的液体14的流速恢复到原始速率。

液柱共振液滴排出单元11中的液柱共振液室18通过结合各自由材料(诸如金属、陶瓷、硅胶)形成的框架形成，其具有不影响液体在驱动频率下的共振频率的高刚性。此外，如图1所示，液柱共振液室18的两端壁面之间在纵向上的长度L是基于液柱共振的原理确定的。此外，优选的是布置用于一个液滴形成单元的多个液柱共振液室18，以明显地提高生产率。液柱共振液室18的数目没有特别地限制，优选地为1个或更多且2000个或更少。此外，对于每个液柱共振液室，用于液体供应的流动路径与液体公用供应路径17连通并连接，并且液体公用供应路径17与多个液柱共振液室18连通。

此外，液柱共振液滴排出单元11中的振动发生单元20没有特别地限制，只要其能以预定的频率被驱动，并且其中压电部件附接于弹性板9的形式是优选的。

此外，优选的是使用其中在液柱共振液室18在沿宽度方向上配备排出孔19的配置，因为这可以配备用于排出孔19的大量的开口，并且生产效率得到提高。此外，由于液柱共振频率根据用于排出孔19的开口的布置而变化，因此期望的是通过确认液滴的排出来适当地确定液柱共振频率。

接下来，将参考图2至4描述实施方式的具体实例。图2是显示了颗粒生产装置的实例的示意图。图3是显示了颗粒生产装置中使用的液滴排出单元的实例的示意性横截面图。图4是显示了颗粒生产装置中使用的液滴排出单元的另一个实例的示意性横截面图。

图2所示的颗粒生产装置300包括液滴排出单元302、干燥收集单元360、输送气流出口365、和颗粒储存单元363。容纳液体314的液体容器313以及液体循环泵315与液滴排出单元302相连，并且液体314可以在任何时候供应给液滴排出单元302，所述液体循环泵将容纳在液体容器313中的液体314通过液体供应管道316供应给液滴排出单元302，并且额外地在液体供应管道316中压送液体314，以通过液体回流管道322将其返回到液体容器313。

在液体供应管道316处配备压力测量仪表P1，在干燥收集单元处配备压力测量仪表P2，朝向液滴排出单元302的进液压力和干燥收集单元中的压力由压力表P1和P2管理。在这种情况下，当P1处的压力测量值大于P2处的压力测量值时，存在液体314从排出孔流出的风险，当P1处的压力测量值小于P2处的压力测量值时，存在气体进入液滴排出单元302并停止排出的风险，所以优选的是P1处的压力测量值和P2处的压力测量值基本上相同。

在腔室361中，形成了由输送气流入口364形成的下行气流(输送气流)301。从液滴排出单元302排出的液滴321不仅在重力作用下向下输送，而且通过输送气流301向下输送，通过输送气流出口365，并由颗粒收集单元362收集，储存在颗粒储存单元363中。

这里，在液滴排出步骤中，当排出的液滴在干燥之前彼此接触时，液滴可能聚结。为了获得具有窄粒径分布的颗粒，优选的是保持排出的液滴之间的距离。然而，尽管排出的液滴具有一定的初始速度，但由于空气阻力，它们最终失去速度。即使当后来排出的液滴追上停滞的液滴，并且液滴没有充分地干燥，液滴可能聚结。为了防止聚结，优选的是用输送气流301输送液滴并在最小化聚结的同时对其进行干燥，以便液滴的速度的下降被最小化，并且液滴不会彼此接触。因此，输送气流301优选地布置在液滴排出单元302的附近，其方向与液滴排出方向相同。这里，即使液滴彼此接触，因为如果它们在接触之前被充分干燥，它们将不聚结，在此类情况下，可以不使用输送气流301。

图3是图2中颗粒生产装置的液滴排出单元的实例的放大视图。如图3所示，液滴排出单元302包括体积改变单元320、弹性板309和液体容纳单元319。液滴排出单元302在向体积改变单元320施加电压时变形，并且减小液体容纳单元319的体积，以便使储存在液体容纳单元319中的液体从排出孔作为液滴321被排出。

图4是显示了颗粒生产装置的液滴排出单元的另一方面的示意图。如图4所示，在气流通道312中，输送气流301可以在基本上与排出方向垂直的方向上。这里，输送气流301可以具有角度，并且优选地具有其中使液滴与液滴排出单元302隔开的角度。如图4，当体积改变单元320经由弹性板309改变液体容纳单元319的体积时，液滴321被排出，并在基本上与排出的液滴321垂直的方向上施加用于防止聚结的输送气流301，优选的是布置排出孔以便当液滴321通过用于防止聚结的输送气流301从排出孔输送时，液滴通过的轨迹不重叠。此外，在通过输送气流301防止聚结之后，颗粒可以通过另一个气流输送到颗粒收集单元。

输送气流的速度优选地等于或快于液滴排出速度。当输送气流的速度快于液滴排出速度时，可以最小化液滴之间的聚结。此外，促进液滴干燥的化学物质可以混合到输送气流中。输送气流的状态不受限制并且可以是层流、涡流或湍流。构成输送气流的气体的类型没有特别地限制，并且可以根据目的适当地选择，可以使用空气或不易燃气体(诸如氮气)。此外，可以适当地调节输送气流的温度，但是其是其中液滴中包含的生理活性物质的生理活性不会根据气流温度而改变的温度。

当通过图2所示的颗粒收集单元362获得的颗粒中含有的残留溶剂的量大时，为了减少该量，根据需要，优选的是执行二次干燥。作为二次干燥，可以使用一般已知的干燥方法，诸如流化床干燥和真空干燥。

实施例

在下文中，将描述颗粒的生产实施例，但本发明不限于这些生产方法。

[生产实施例1]

(含有生理活性物质的脂质纳米颗粒的悬浮液的制备)

<<乙醇溶液的制备>>

将按质量计0.8份的作为生理活性物质的环孢霉素A(商业上可从Tokyo ChemicalIndustry Co.,Ltd.获得)，按质量计0.3份的作为脂质的硬脂酸(商业上可从TokyoChemical Industry Co.,Ltd.获得)加入到按质量计相对于100份的作为溶剂1的乙醇中，并将混合物用涡旋搅拌30分钟以获得乙醇溶液。

<<水溶液的制备>>

将按质量计0.03份的作为添加剂的大豆卵磷脂(商业上可从Tokyo ChemicalIndustry Co.,Ltd.获得)，和按质量计78份的作为基质的甘露醇(商业上可从TokyoChemical Industry Co.,Ltd.获得)加入按质量计相对于2,400份的作为溶剂2的水中，并使用搅拌器以600rpm搅拌混合物1小时以获得水溶液。

<<脂质纳米颗粒的制备>>

在以600rpm搅拌水溶液的同时，用注射器将乙醇溶液逐滴加入到水溶液中，因此获得含有环孢霉素A的脂质纳米颗粒的悬浮液(以下被称为“生产实施例1的悬浮液”)。

<<脂质纳米颗粒的粒径的测量>>

使用FPAR-1000(商业上可从Otsuka Electronics Co.,Ltd.获得)测量生产实施例1的悬浮液中脂质纳米颗粒的粒径。获得的脂质纳米颗粒的平均粒径为190nm。

[生产实施例2]

(含有生理活性物质的脂质纳米颗粒的悬浮液的制备)

生产实施例2的悬浮液以与生产实施例1中相同的方式制备，除了在生产实施例1中的水溶液制备步骤中未添加大豆卵磷脂之外。

[生产实施例3]

生产实施例3的悬浮液以与生产实施例1中相同的方式制备，除了在生产实施例1中的水溶液制备步骤中未添加甘露醇之外。

[实施例1]

(含脂质纳米颗粒的微粒的制备)

<<实施例1的颗粒的生产(液柱共振法)>>

在图1所示的液柱共振液滴排出单元中，使用每个液柱共振室具有用于排出孔的一个开口的液滴排出单元，将生产实施例1的悬浮液从排出孔排出并形成为液滴，使用图2所示的颗粒生产装置从液滴中除去溶剂，因此获得实施例1的颗粒。颗粒生产条件如下。

-颗粒生产条件-

排出孔的形状：正圆

排出孔的直径：8μm

干气流速率：干氮气50L/min

干气流温度：50℃

(颗粒的评估)

<<微粒的粒径的测量>>

使用Microtrac MT3000II(商业上可从MicrotracBel Corp.获得)测量实施例1的颗粒的粒径分布。结果如下表2所示。

<<流动性的确认>>

为了简单地评估实施例1的颗粒的流动性，将1g的实施例1的颗粒引入30mm玻璃漏斗(商业上可从As One Corporation获得)，并评估直到样品从漏斗流出的时间。确定标准如下。这里，确定标准A和B的颗粒具有流动性，在实际处理中不会引起问题。结果如表1所示。

-确定标准-

A：小于15秒

B：15秒或更多至小于30秒

C：30秒或更多

[实施例2]

(含脂质纳米颗粒的微粒的制备)

<<实施例2的颗粒的生产(4-流体喷雾嘴)>>

生产实施例2的悬浮液使用喷雾干燥单元(4-流体喷嘴，商业上可从FujisakiElectric Co.,Ltd.获得)排出以获得实施例2的颗粒。颗粒生产条件如下。随后，以与实施例1的颗粒相同的方式评估实施例2的颗粒。实施例2的颗粒的组成和评估结果如下表2所示。

-颗粒生产条件-

生产实施例2的悬浮液送到喷嘴的量：10m L/min

孔口压力：1.3kPa

干气流速率：干氮气：30L/min

干气流温度：65℃

[实施例3]

(含脂质纳米颗粒的微粒的制备)

<<实施例3的颗粒的生产(瑞利裂变)>>

生产实施例1的悬浮液使用瑞利裂变液滴排出单元排出以获得实施例3的颗粒。颗粒生产条件如下。随后，以与实施例1的颗粒相同的方式评估实施例3的颗粒。实施例3的颗粒的组成和评估结果如下表2所示。

-颗粒生产条件-

排出孔的形状：正圆

排出孔的直径：20μm

规定的液体挤出压力：0.20MPa

激发频率：70kHz

激发电压：5V

[对比实施例1]

(干燥脂质纳米颗粒的制备)

将生产实施例3的悬浮液在下表1的条件下冷冻干燥以获得对比实施例1的干燥脂质纳米颗粒(颗粒)。随后，以与实施例1的颗粒相同的方式评估对比实施例1的颗粒。对比实施例1的颗粒的组成和评估结果如下表2所示。

[表1]

干燥组分生产条件

	初步冷冻	减压步骤	初步干燥	二次干燥
					搁板温度[℃]	-40	-40	-10	20
保留时间[min]	180	60	120	1080
					目标范围[℃]	5	5	3	3

[表2]

在表2中，“体积平均直径”与“体积平均粒径”同义，并且“跨度系数”与“相对跨度系数(R.S.F)”同义。

[试验实施例1]

(确认脂质纳米颗粒的再分散性)

评估了脂质纳米颗粒在微粒中的再分散性。具体而言，将实施例1的制备的颗粒再次分散在水中，并且测量脂质纳米颗粒的粒径。FPAR-1000(商业上可从OtsukaElectronics Co.,Ltd.获得)用于测量。结果，纳米颗粒直径为160nm，其与生产实施例1的悬浮液的测量结果相同。

[试验实施例2]

(洗脱试验)

对实施例1的含脂质纳米颗粒的微粒执行洗脱试验，并对药物洗脱行为进行评估。模拟肺液(SLF)被用作用于洗脱试验的试验溶液。SLF是通过在100mL的水中溶解0.169g氯化镁、5.016g氯化钠、0.249g氯化钾、0.059g无水硫酸钠、0.306g脱水氯化钙、0.794g三水醋酸钠、2.170g碳酸氢钠，0.080g柠檬酸钠二水合物，0.118g磷酸氢二钠和0.167g二棕榈酰磷脂酰胆碱，然后填充到1L的水制备的。

在50mL处于37℃的SLF中，分散1mg环孢霉素散装粉末或脂质纳米颗粒制剂(作为环孢霉素的量)，并且使用洗脱试验装置(NTR-6100A，商业上可从Toyama Sangyo Co.,Ltd.获得)根据桨叶法(搅拌速度为50rpm)执行洗脱试验。

在试验开始之后0.25、0.5、1、2、4小时，收集100μL洗脱液。随后，将收集的样品在10,000×g下离心，然后收集上清液，执行用甲醇稀释，使用单四极杆质谱仪(装置名称为“AQUITY SQD”，商业上可从Waters获得)作为检测器，使样品经受超高性能液相色谱(商业上可从Waters获得)，并对环孢霉素的量进行量化。

图7是显示了药物洗脱行为的图。如图7所示，因为环孢霉素散装粉末是水溶性差的化合物，即使在试验开始之后4小时，洗脱量也非常低。另一方面，脂质纳米颗粒制剂表现出比环孢霉素散装粉末更高的洗脱率，但洗脱速度缓慢。造成这种洗脱是由于药物被包封在脂质纳米颗粒中，并且因此由于纳米颗粒化，溶解度得到了改善，并且赋予了来源于脂质基体结构的持续释放特性。

[试验实施例3]

(吸入特征)

为了调查实施例1和实施例2的含脂质纳米颗粒的微粒作为肺部粉末吸入剂的适用性，使用下型级联撞击器评估吸入特征。根据USP 2000“物理试验和测定/气溶胶”和“多级级联撞击器仪器”中描述的方法，在下列测量条件下执行测量。

-测量条件-

装置：Andersen采样器(AN-200，商业上可从Sibata Scientific TechnologyLtd.获得)

泵流速：28.3L/min

使用的装置：Jethaler(注册商标)(商业上可从Hitachi Automotive Systems,Ltd.获得)

将约30mg制备的粉末制剂填充到日本药典2号HPMC胶囊中，并且在28.3L/min的气流速率下进行评估。

图8A显示了实施例1的颗粒的电子显微镜图像。图8B显示了实施例2的颗粒的电子显微镜图像。此外，图9是显示了实施例1的颗粒的吸入特征的评估结果的图。图10是显示了实施例2的颗粒的吸入特征的评估结果的图。在图9和10中，分布在阶段2至阶段7的颗粒显示了人类从呼吸道到达肺的理论吸入量，并定义为细颗粒分数(FPF)值。基于图9的结果，计算出实施例1的颗粒的FPF值为48.4％。此外，基于图10的结果，计算出实施例2的颗粒的FPF值为19.9％。

认为，实施例1的颗粒具有比实施例2的颗粒更均匀的粒径分布，并且不含具有优异附着力性能的细颗粒，因此表现出优异的分散性能。此外，当根据这些结果计算空气动力学粒径时，实施例1的颗粒的空气动力学粒径为3.5μm，并且实施例2的颗粒的空气动力学粒径为4.7μm。

[试验实施例4]

(动物试验)

在气管内施用实施例1的含脂质纳米颗粒的微粒之后执行药代动力学评估。具体而言，首先，将实施例1的颗粒和通过沉淀法制备的环孢霉素A散装粉末纳米颗粒在气管内施用至SD雄性大鼠(6至8周龄，商业上可从Japan SLC.,Inc.获得)，并随时间测量药物在血液中的浓度。使用干粉吹药器(DP-4，商业上可从Penn-Century Inc.获得)施用100μg(作为环孢霉素A的量)的每种粉末。作为对照组，使用这样的组，对其强制口服施用10mg/kg的Neoral(商业上可从Novartis International AG获得)作为环孢霉素A的当前口服制剂。

在药物施用之后，随时间从尾静脉收集血液，转移到用肝素处理的微型试管中，并立即冰冷却。在冰冷却之后，血液被快速离心以获得血浆。此外，在施用每种制剂之后3小时，从大鼠中切除肺，切碎，然后用乙酸乙酯提取肺组织中含有的药物。

使用单四极杆质谱仪(装置名称：AQUITY SQD，商业上可从Waters获得)作为检测器，使获得的血浆和肺组织提取物样品经受超高性能液相色谱(商业上可从Waters获得)，并对药物含量进行定量。

图11是显示了各组的血液中药物浓度的变化的图。此外，图12是显示了各组的肺组织中浓度的测量结果的图。此外，下表3显示了各组的C_max、T_1/2和AUC_0-∞。在表3中，C_max表示最大血液浓度(血液浓度曲线的峰值处的浓度)。此外，T_1/2表示血液中药物的浓度的半衰期。此外，AUC_0-∞表示从开始施用到药物消失的血浓度曲线下区域。

因此，清楚地理解的是，在气管内施用实施例1的颗粒和环孢霉素纳米颗粒之后，与在当前制剂Neoral被口服施用时(10mg/kg)相比全身性暴露显著降低。另一方面，实施例1的颗粒的肺组织中每单位剂量的药物浓度最高，并且在Neoral口服施用之后的肺组织浓度显著低。因此，发现可以以低剂量局部施用至肺的粉末吸入剂能够有效药物递送到施用部位，同时减少全身性暴露，并且作为用于呼吸系统的炎症性疾病等的剂型，对安全和有效的治疗是有用的。

此外，实施例1的颗粒表现出比简单环孢霉素纳米颗粒更高的肺组织浓度趋势。基于这些结果，推测脂质纳米颗粒的药物持续释放特性有助于延长药物在肺中暴露。

[表3]

本发明包括以下方面。

[1]一种颗粒，其包括至少一种或多种基质和脂质纳米颗粒，

其中脂质纳米颗粒分散在基质中，并且

其中脂质纳米颗粒是选自脂质体、脂质乳液和固体脂质纳米颗粒的一种或多种，并含有生理活性物质。

[2]根据[1]的颗粒，

其中一种或多种基质含有水溶性材料。

[3]根据[1]或[2]的颗粒，

其中基质包括一种或多种选自单糖、二糖、多糖、糖醇及其衍生物的糖类。

[4]根据[1]至[3]中任一项的颗粒，

其中基质包括一种或多种选自乳糖和甘露醇的糖类。

[5]根据[1]至[4]中任一项的颗粒，

其中体积平均粒径为0.5μm或更大且100μm或更小。

[6]根据[5]的颗粒，

其中体积平均粒径为1μm或更大且25μm或更小。

[7]一种粉末吸入剂，其包括根据[1]至[6]中任一项的颗粒作为活性组分。

[8]根据[1]至[6]中任一项的颗粒的生产方法，其包括造粒和干燥步骤，其中含有基质和脂质纳米颗粒的悬浮液在气体介质中被造粒和干燥。

[9]根据[8]的生产方法，

其中造粒和干燥步骤包括

液滴排出步骤，其中将振动赋予至容纳在液柱共振液室中的含有基质和脂质纳米颗粒的悬浮液，以由于液柱共振而形成驻波，并且悬浮液作为液滴从在驻波的波腹区域中在驻波的振幅方向上形成的排出孔排出，和

颗粒形成步骤，其中排出的悬浮液被干燥以形成颗粒。

文献列表

[专利文件]

[专利文件1]

日本专利4228230

[专利文件2]

日本专利5932993

[专利文件3]

日本未审查专利申请，首次公开H08-133986。

Claims (9)

1.一种颗粒，其包括至少一种或多种基质和脂质纳米颗粒，

其中所述脂质纳米颗粒分散在所述基质中，并且

其中所述脂质纳米颗粒是选自脂质体、脂质乳液和固体脂质纳米颗粒的一种或多种，并且含有生理活性物质。

2.根据权利要求1所述的颗粒，

其中一种或多种所述基质含有水溶性材料。

3.根据权利要求1或2所述的颗粒，

其中所述基质包括选自单糖、二糖、多糖、糖醇及其衍生物的一种或多种糖类。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的颗粒，

其中所述基质包括选自乳糖和甘露醇的一种或多种糖类。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的颗粒，

其中体积平均粒径为0.5μm或更大且100μm或更小。

6.根据权利要求5所述的颗粒，

其中体积平均粒径为1μm或更大且25μm或更小。

7.一种粉末吸入剂，其包括根据权利要求1至6中任一项所述的颗粒作为活性组分。

8.一种根据权利要求1至6中任一项所述的颗粒的生产方法，其包括造粒和干燥步骤，其中含有所述基质和所述脂质纳米颗粒的悬浮液在气体介质中被造粒和干燥。

9.根据权利要求8所述的生产方法，

其中所述造粒和干燥步骤包括

液滴排出步骤，其中将振动赋予至容纳在液柱共振液室中的含有所述基质和所述脂质纳米颗粒的悬浮液，以由于液柱共振而形成驻波，并且所述悬浮液作为液滴从在所述驻波的波腹区域中在所述驻波的振幅方向上形成的排出孔排出，和

颗粒形成步骤，其中排出的悬浮液被干燥以形成颗粒。

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