CN115634176A - 一种甘松根提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种甘松根提取物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115634176A CN115634176A CN202210827647.6A CN202210827647A CN115634176A CN 115634176 A CN115634176 A CN 115634176A CN 202210827647 A CN202210827647 A CN 202210827647A CN 115634176 A CN115634176 A CN 115634176A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- root extract
- nardostachys chinensis
- nardostachys
- water
- culture medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 58
- 241000790228 Nardostachys jatamansi Species 0.000 title claims abstract description 53
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title abstract description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 39
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 241000612118 Samolus valerandi Species 0.000 claims abstract description 26
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 claims abstract description 11
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 claims abstract description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 16
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 15
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 11
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 9
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 6
- 230000008099 melanin synthesis Effects 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 26
- 241000606266 Nardostachys Species 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 11
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 11
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 8
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical group CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 3
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 3
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010051246 Photodermatosis Diseases 0.000 description 2
- 208000012641 Pigmentation disease Diseases 0.000 description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 241000792902 Valerianaceae Species 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 2
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000004177 elastic tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 238000002552 multiple reaction monitoring Methods 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 230000008845 photoaging Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHMIDUVKSGCHAU-UHFFFAOYSA-N Dopaquinone Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC(=O)C(=O)C=C1 AHMIDUVKSGCHAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710145505 Fiber protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- AHMIDUVKSGCHAU-LURJTMIESA-N L-dopaquinone Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC(=O)C(=O)C=C1 AHMIDUVKSGCHAU-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241001579180 Matthiola longipetala Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010051403 Mitochondrial DNA deletion Diseases 0.000 description 1
- 229920000459 Nitrile rubber Polymers 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010033425 Pain in extremity Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N formic acid;hydrate Chemical compound O.OC=O HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- WABPQHHGFIMREM-UHFFFAOYSA-N lead(0) Chemical compound [Pb] WABPQHHGFIMREM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002780 melanosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 oxygen free radical Chemical class 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008832 photodamage Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000011506 response to oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 210000003660 reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 208000004371 toothache Diseases 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种甘松根提取物及其制备方法和应用。该甘松根提取的应用为植物组织培养法结合水提取得到的甘松根提取物在制备皮肤外用剂中的应用，所述的皮肤外用剂的作用为促进人永生化表皮细胞和人原代成纤维细胞的增殖、保护紫外损伤的人原代成纤维细胞、促进人原代成纤维细胞分泌I型胶原蛋白、保护氧化损伤的人永生化表皮细胞、抑制酪氨酸酶和抑制黑色素生成。本发明发现甘松根提取物兼具多种优异的功效，同时制备工艺简单环保。
Description
技术领域
本发明涉及一种甘松根提取物及其制备方法和应用。
背景技术
甘松(Nardostachys jatamansi DC.)是败酱科(Valerianaceae)甘松属(Nardostachys)多年生草本植物，生长在海拔2500-5000米的高山草地、灌丛或石砾地上，分布于中国甘肃、青海、四川、西藏以及云南等地区，印度、尼泊尔、不丹也有分布，是喜马拉雅典型芳香植物。甘松不仅是西藏著名的香料植物，也是中药、藏药和印度草药的重要的药源植物，以其根及根茎入药，其性温，味辛、甘，具有理气止痛、开郁醒脾的功能，可用于治疗脘腹胀痛、呕吐、食欲不振、牙痛、脚痛等疾病。甘松属植物主要用根茎或种子繁殖，大多为野生，印度和中国偶有栽培。甘松由于具有很大的药用价值，人们过度开发使其资源受到了严重的破坏，已被列入世界濒危植物名录。
中国专利文献CN110652475A公开了一种甘松根提取物的应用，以甘松全草为待提取的植物，且采用70％乙醇提取，得到了一种甘松全草提取物，该提取物采用常规的土地培养得到，不同产地、海拔、气候得到的甘松根全草提取物的成分不一，因此，所得的甘松提取物的效果性能也不稳定。而且，该甘松全草采用70％乙醇提取，得到的提取物中可能含有乙醇残留，不适合作为皮肤外用剂，另外该甘松全草提取物还需要添加美白活性成分才能够达到美白的效果。另一方面，根据景临林等公开的甘松不同溶剂提取物的抗氧化活性研究(化学研究与应用，2014年10月)中的记载，土地培养的甘松水提取物的萃取物得到的有效活性成分较低。
如何能够制备得到无有机溶剂残留的前提下，还能够的兼具多种功效的甘松提取物是目前还未解决的技术问题。
发明内容
本发明主要是为了克服现有技术中存在的如何能够制备得到无有机溶剂残留的前提下，还能够的兼具多种功效的甘松提取物的缺陷，而提供了一种甘松根提取物及其制备方法和应用。本发明发现了水提取结合植物组织培养法获得的甘松根提取物能够促进人永生化表皮细胞的增殖、促进人原代成纤维细胞的增殖、保护紫外损伤的人原代成纤维细胞、促进人原代成纤维细胞分泌I型胶原蛋白、保护氧化损伤的人永生化表皮细胞、抑制酪氨酸酶和黑色素生成。
本发明是通过以下技术方案解决以上技术问题的。
本发明提供了一种甘松根提取物的制备方法，其包括以下步骤：采用水提取由植物组织培养法得到的甘松根；
其中，所述植物组织培养法中，培养液包括：培养基、吲哚丁酸、蔗糖和水，所述培养基为WPM培养基或B5培养基。
本发明中，所述水提取的工艺可为本领域常规，一般包括以下步骤：将所述甘松根与水的混合物依次经超声提取和分离后取上清液，再冷冻干燥即得；所述甘松根与水的体积比为1：(4～6)，例如1：5。
其中，所述甘松根较佳地为粉末形式。所述粉末可为本领域常规理解的含义，一般是指尺寸在1mm以下的离散颗粒的集合体。
其中，所述水可为本领域常规，一般采用去离子水。
其中，所述超声提取的功率较佳地为450～550W，例如500W。
其中，所述超声提取的总时间较佳地为50～70min，例如60min。
其中，所述超声提取的次数较佳地为2次。其中，每次所述超声提取的时间较佳地为25～35min，例如30min。
其中，所述分离可为本领域常规，能够获得所述的上清液即可。所述的分离较佳地为离心分离。所述离心分离的转速较佳地为8000～12000rpm，例如10000rpm。所述离心分离的时间较佳地为25～35min，例如30min。
本发明中，所述植物组织培养中，所述甘松根的组织来源为西藏地区产出的甘松植物的茎或叶。
本发明中，所述培养液中，所述蔗糖的浓度较佳地为20～50g/L，例如 30～40g/L。
本发明中，所述培养液中，所述吲哚丁酸的浓度较佳地为0.5～1.5mg/L，例如1mg/L。
本发明中，所述培养液的pH值较佳地为5.5～6，例如5.8。
本发明采用了特定的水提取工艺结合特定的植物组织培养法，制备得到了一种新的甘松根提取物，将其应用在皮肤外用剂中可同时具备多种优异的功效，且所述的甘松根提取物中未添加有机溶剂，无有机溶剂残留，作用于皮肤时温和、无刺激。
本发明还提供了一种甘松根提取物，其采用上述的制备方法制得。
本发明还提供了一种甘松根提取物在制备皮肤外用剂中的应用，所述的皮肤外用剂的作用为促进人永生化表皮细胞增殖、促进人原代成纤维细胞增殖、保护紫外损伤的人原代成纤维细胞、促进人原代成纤维细胞分泌I型胶原蛋白、保护氧化损伤的人永生化表皮细胞、抑制酪氨酸酶和抑制黑色素生成中的一种或多种。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明发现了采用水提取工艺结合植物组织培养法得到的甘松根提取物能够促进人永生化表皮细胞的增殖、促进人原代成纤维细胞的增殖、保护紫外损伤的人原代成纤维细胞、促进人原代成纤维细胞分泌I型胶原蛋白、保护氧化损伤的人永生化表皮细胞、抑制酪氨酸酶和黑色素生成。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1
1、甘松根的植物组织培养
取试剂WPM或B5培养基，吲哚丁酸(IBA)，蔗糖，水，按照配方WPM/B5+IBA 1.0mg/L+蔗糖30-40g/L配制成培养液后，调节pH 5.8左右，在灭菌锅内121℃灭菌20min备用。在150mL的培养瓶中加入50mL培养液，接种2-3g无菌的根组织，再转速110r/min，温度25℃的摇床中培养， 35天后收获甘松根。无菌的根组织由西藏地区产出的甘松植物的茎或叶进行消毒后诱导得到。
2、甘松根提取物的制备
称取10g植物组织培养得到的甘松根，破碎为粉末后加入5倍体积的去离子水，浸没搅拌，500W超声提取2次(即第一次超声提取后离心取上清液，滤渣再加5倍体积去离子水，超声提取后再取上清液，两次的上清液过滤后合并)，每次30min，10000rpm离心分离30min，取上清过滤，滤液合并，冷冻干燥，得到甘松根提取物的冻干固体粉末后，称重，计算产率。
效果实施例1
1、甘松根提取物的冻干固体粉末的成分表征
采用广靶代谢组学实验分析检测实施例1中得到的甘松根提取物的冻干固体粉末。
检测过程中所用的实验试剂如下表1.1所示。
表1.1实验试剂
检测过程中所用的实验仪器如下表1.2所示。
表1.2实验仪器
具体检测过程中的实验方法如下：取10mg的样品(甘松根粉末)到离心管中，加入提取液(甲醇水，体积比3:1，含内标)1ml，涡旋30s，加2 小钢珠，35Hz研磨处理4min，冰水浴超声15min，在混匀仪上4℃过夜。然后将样品4℃，12000rpm离心15min，小心地取上清经0.22微孔滤膜过滤，用提取液稀释上清液10倍，涡旋30s，取100ul混合液，-80℃储存直到上机检测。
使用EXION LC System(SCIEX)超高效液相色谱仪，通过Waters UPLC 液相色谱柱对目标化合物进行色谱分离。液相色谱A相为含0.1％甲酸水溶液，B相为乙腈。柱温箱温度为40℃，自动进样器温度为4℃，进样体积为 2μL。LC色谱柱条件和液相色谱流动相的条件分别如下表1.3和表1.4所示。
表1.3 LC色谱柱条件
表1.4液相色谱流动相条件
Sciex QTrap 6500质谱仪器参数设置
本实验使用装备IonDrive Turbo V ESI离子源的SCIEX 6500QTRAP+ 三重四极杆质谱仪，以多反应监测(MRM)模式进行质谱分析。离子源参数如下：IonSpray Voltage:+5500/-4500V,Curtain Gas:35psi,Temperature:400℃, Ion Source Gas 1:60psi,IonSource Gas 2:60psi,DP:±100V.
数据处理
本实验中，所有质谱数据采集及目标化合物定量分析工作，均通过 SCIEXAnalyst Work Station Software(Version 1.6.3)来完成。使用MSconventer 软件将质谱原始转成TXT格式。再使用自撰写R程序包结合自建数据库完成提峰、注释等工作。
实验结果如下：本实验所采用分析方法，所有目标化合物均呈现出对称的色谱峰；很好地实现了各个目标化合物的色谱分离。
甘松根提取物的冻干固体粉末中各成分的百分含量如下表1.5所示。
表1.5(百分含量＞0.01％)
2、实施例1中制得的甘松根提取物的产率计算，如下表2所示。
表2
| 样品 | 产率(mg/g甘松根) |
| 批次1 | 64.9 |
| 批次2 | 60.2 |
| 批次3 | 59.8 |
注：批次2和批次3为重复批次1的实验方案。
3、实施例1中甘松根提取物的功效测试
(1)甘松根提取物对皮肤细胞增殖的影响
角质细胞是表皮层中最主要的细胞，参与形成皮肤的物理屏障，防止物理、化学性及微生物等不良因素的侵袭，对皮肤起保护作用。皮肤衰老后的一个主要特征就是表皮变薄，伤口愈合速度变慢，这主要是由于表皮层中角质细胞的再生能力下降，角质细胞体系的增殖能力降低所导致。人皮肤成纤维细胞是皮肤真皮网织层中最重要的细胞，是皮肤衰老和细胞受损后的主要修复细胞之一。它不但能够促进表皮细胞的迁移、增殖和分化，还能分泌大量的胶原蛋白、弹性纤维蛋白及多种细胞修复因子，具有强大的自我更新能力，从而修复老化的皮肤。
将实施例1中制得的甘松根提取物用去离子水或者DMSO配制成溶液，加入到人永生化表皮HaCat细胞或者人原代成纤维细胞(FB)培养液中，以不含实施例1样品的溶剂为空白对照。培养48小时后，用MTT法对细胞染色后，用酶标仪测定550nm处吸光度，空白对照的增殖率为100％，参比空白对照，评估对HaCat或者FB细胞增殖的影响。测试结果如下表3所示。
表3
| 样品 | 测试浓度(mg/mL) | Hacat细胞增殖率(％) | FB细胞增殖率(％) |
| 阳性对照(小牛血清) | 50 | 120 | 160 |
| 批次1 | 0.5 | 113 | 139 |
| 批次2 | 0.5 | 113 | 139 |
| 批次3 | 0.5 | 111 | 134 |
由表3可知，甘松根提取物对人永生化表皮细胞或者人原代成纤维细胞都有增殖促进作用。
(2)甘松根提取物的紫外损伤保护
皮肤的衰老分为内源性老化和外源性老化，日光尤其是紫外线 (ultravioletUV)照射是外源性老化形成的主要因素，所以外源性老化又称为光老化。与皮肤光老化有关的主要是UVA(320-400nm)和少量的UVB(280- 320nm)。许多资料表明紫外线可诱导成纤维细胞发生凋亡，线粒体DNA缺失性改变及细胞内活性氧自由基增多。因此，我们用UVA/UVB照射人成纤维细胞建立皮肤的光损伤模型，利用该模型评估甘松根提取物B对皮肤紫外损伤的保护作用。
人原代成纤维细胞，以4000个/孔种于96孔板中，37℃的5％CO2细胞培养箱中培养72h。待测样品处理前(即添加实施例1的甘松根提取物前) 细胞换成不含血清的饥饿培养基培养6h，之后细胞在含有样品的培养基中培养24h。将培养基换成PBS后，UVB辐照，剂量分别为40mJ/cm2。再加入含有待测样品的培养基，继续培养24h，用MTT法检测细胞活力。用未加样品的UVB辐照组作为空白对照组。用Vc作为阳性对照。测试结果如下表4 所示。
表4
| 样品 | 测试浓度(mg/mL) | 细胞活力(％) |
| 空白对照(UVB处理) | - | 100 |
| 阳性对照Vc | 0.5 | 123 |
| 批次1 | 0.5 | 111 |
| 批次2 | 0.5 | 110 |
| 批次3 | 0.5 | 115 |
由表4结果可知，甘松根提取物对UVB造成的细胞损伤有明显的保护作用。
(3)甘松根提取物促进成纤维细胞分泌I型胶原蛋白的作用
胶原蛋白是一类蛋白质家族，根据它们在体内的分布和功能特点，可以将胶原分成间质胶原、基底膜胶原和细胞外周胶原。间质型胶原蛋白分子占整个机体胶原的绝大部分，包括Ⅰ、Ⅱ、III型胶原蛋白分子。Ⅰ型胶原蛋白主要分布于皮肤、肌腱等组织。胶原蛋白不仅是肌肤真皮层中支撑皮肤构架的主要“黏合剂”，与弹力纤维一起合力构成网状的支撑体，仿佛撑起皮肤组织的钢筋架构一样。即足够的胶原蛋白可以使皮肤细胞变得丰满，从而使肌肤水分充盈，呈现弹性与润泽，且可维持皮肤细腻光滑，并使细纹、皱纹得以舒展，有效防止肌肤老化。因此，我们检测人原代成纤维细胞分泌的I型胶原蛋白，利用该模型评估甘松根提取物对皮肤的抗衰老作用。
人原代成纤维细胞(FB)以6000个/孔种于96孔板中，37℃的5％CO2细胞培养箱中培养24h。待测样品处理前细胞换成无血清培养基饥饿培养4h，之后细胞在含有待测样品的无血清培养基中培养48h。取上清液用Elisa试剂盒的方法测试I型胶原蛋白的浓度。用不加样品处理组作为空白对照组 (NT)，使其胶原蛋白含量为100％，Vc作为阳性对照，参比空白对照，评估甘松根提取物对人人原代成纤维细胞分泌I型胶原蛋白的影响。测试结果如下表5所示。
表5
| 样品 | 测试浓度(mg/mL) | 胶原蛋白含量(％) |
| 空白对照(NT) | - | 100 |
| 阳性对照Vc | 0.5 | 121 |
| 批次1 | 0.5 | 177 |
| 批次2 | 0.5 | 186 |
| 批次3 | 0.5 | 160 |
由表5结果可知，实施例1中的甘松根提取物对人原代成纤维细胞分泌 I型胶原有促进作用。
(4)甘松根提取物对皮肤细胞氧化损伤的保护作用
自由基可以从细胞水平、分子水平乃至组织器官水平上对机体造成各种不可逆性的氧化性损伤，加速生物体细胞乃至整个机体的衰老进程，诱发各种与衰老相关的疾病。过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)是细胞内一种重要的氧自由基，对人体皮肤细胞能造成直接的氧化应激反应和氧化应激所致的氧化性损伤。在体外利用H2O2能够诱导并加速细胞因氧化应激所致的衰老进程，模拟体内氧化损伤的病理过程。
HaCat细胞，以12000个/孔种于96孔板中，37℃的5％CO2细胞培养箱中培养24h。待测样品处理前24h，然后换成含有1mM H2O2的饥饿培养基处理1h，再换成含有待测样品的培养基，继续培养24h，用MTT法检测细胞活力。用没有H2O2处理的作为对照组(-)。测试结果如下表6所示。
表6
由表6结果可知，甘松根提取物对双氧水造成的细胞氧化损伤有明显的保护作用。
(5)甘松根提取物的美白作用
近年的研究证明色素沉着是由紫外线激活表皮中的黑色素细胞内的黑色素生成酶，产生色素所引起的。人表皮中位于基底层的黑色素细胞与周围的角质形成细胞接触并发生联系，构成“表皮黑素单元”，其中黑素是一种含氮的复合物,在黑素小体中进行合成。一般来讲，黑色素数量和质量在皮肤黑色素是决定皮肤颜色的重要因素。黑色素生成过程中，酪氨酸酶将酪氨酸转化成多巴，多巴醌，经非酶氧化而聚合生成大分子的黑色素。因此通过抑制酪氨酸酶的活性可以限制黑色素生成，改善皮肤的色素沉着。
皮肤的颜色来自于角质形成细胞内存储的黑色素。一般来讲，存储黑色素多的人肤色更深，也更受到保护，远离阳光辐射。黑色素数量和质量在皮肤黑色素是决定皮肤颜色的重要因素。酪氨酸酶是结构复杂的含铜氧化还原酶，广泛存在于微生物、动植物及人体中。在人体中酪氨酸酶是皮肤合成黑色素的关键酶。
采用L-Dopa氧化法测定样品对酪氨酸酶的抑制作用。小鼠黑色素瘤B16 细胞以1×105密度培养在96孔板中，经24h后，将实施例1中甘松根提取物的粉末用PBS溶解后过滤除菌，加入到细胞中培养48h，去掉培养液，每孔加入含1％TritonX-100的PBS缓冲液100μL，然后加入50μL 0.2mg/mL的 L-DOPA，37℃处理3h后再测定490nm的吸光值。按如下公式计算酶活力：酪氨酸酶抑制率＝[1-(实验组OD值/对照组OD值]×100％。同时用MTT法测定样品对B16细胞的活力影响。
采用NaOH裂解法测定细胞内黑色素的含量。小鼠黑色素瘤B16细胞以1×105密度培养在12孔板中，经24h后，将实施例中甘松根提取物的粉末用PBS溶解后过滤除菌，加入到细胞中，培养48h弃去上清液，胰酶消化后离心收集细胞到离心管，加入150μL的1mol/L的NaOH溶液(含10％ DMSO)，在80℃条件下充分裂解细胞1h，测定405nm的吸光值。B16细胞的蛋白浓度以BCA法测定，用于吸光值的校正。数据统计以对照组的百分比表示。测试结果如下表7所示。
表7
由表7结果可知，实施例1中制得的甘松根提取物对B16细胞活力没有影响，但是能够抑制B16细胞的酪氨酸酶活性和黑色素生成。
Claims (10)
1.一种甘松根提取物的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：采用水提取由植物组织培养法得到的甘松根；
所述植物组织培养法中，培养液包括：培养基、吲哚丁酸、蔗糖和水，所述培养基为WPM培养基或B5培养基。
2.如权利要求1所述的甘松根提取物的制备方法，其特征在于，所述水提取包括以下步骤：将所述甘松根与水的混合物依次经超声提取和分离后取上清液，再冷冻干燥即得，所述甘松根与水的体积比为1：(4～6)；其中，所述甘松根较佳地为粉末形式。
3.如权利要求2所述的甘松根提取物的制备方法，其特征在于，所述甘松根与水的体积比为1：5。
4.如权利要求2所述的甘松根提取物的制备方法，其特征在于，所述超声提取的功率为450～550W；
所述超声提取的时间为50～70min；
所述超声提取的次数为2次。
5.如权利要求4所述的甘松根提取物的制备方法，其特征在于，所述超声提取的功率为500W；
所述超声提取的时间为60min；
每次所述超声提取的时间为25～35min，例如30min。
6.如权利要求2所述的甘松根提取物的制备方法，其特征在于，所述分离为离心分离。
7.如权利要求6所述的甘松根提取物的制备方法，其特征在于，所述离心分离的转速为8000～12000rpm，例如10000rpm；所述离心分离的时间为25～35min，例如30min。
8.如权利要求1～7中任一项所述的甘松根提取物的制备方法，其特征在于，所述培养液中，所述蔗糖的浓度为20～50g/L，例如30～40g/L；
所述培养液中，所述吲哚丁酸的浓度为0.5～1.5mg/L，例如1mg/L；
所述培养液的pH值为5.5～6，例如5.8。
9.一种甘松根提取物，其特征在于，其采用如权利要求1～8任一项所述的甘松根提取物的制备方法制得。
10.一种如权利要求9所述的甘松根提取物在制备皮肤外用剂中的应用，其特征在于，所述皮肤外用剂的作用为促进人永生化表皮细胞增殖、促进人原代成纤维细胞增殖、保护紫外损伤的人原代成纤维细胞、促进人原代成纤维细胞分泌I型胶原蛋白、保护氧化损伤的人永生化表皮细胞、抑制酪氨酸酶和抑制黑色素生成中的一种或多种。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2021108155087 | 2021-07-19 | ||
| CN202110815508 | 2021-07-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115634176A true CN115634176A (zh) | 2023-01-24 |
Family
ID=84939518
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210827647.6A Pending CN115634176A (zh) | 2021-07-19 | 2022-07-13 | 一种甘松根提取物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115634176A (zh) |
-
2022
- 2022-07-13 CN CN202210827647.6A patent/CN115634176A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107929127B (zh) | 一种太子参提取液的制备方法及其在抗皱化妆品中的应用 | |
| CN111202777B (zh) | 一种细梗蔷薇愈伤细胞提取物及其在制备皮肤外用剂中的应用 | |
| KR101990387B1 (ko) | 황련 추출물을 포함하는 한방 화장료 조성물 | |
| CN113559024A (zh) | 莲花花瓣提取物发酵产品的制备方法及其用途 | |
| CN115252496A (zh) | 一种余甘子提取物的制备方法及其在防治紫外线损伤中的应用 | |
| CN115634176A (zh) | 一种甘松根提取物及其制备方法和应用 | |
| KR20120092229A (ko) | 조직 배양한 유채와 석류, 산삼의 발효 추출물을 유효성분으로 하는 화장료 조성물 | |
| KR102247966B1 (ko) | 녹두씨, 만주자작나무수액 및 소리쟁이뿌리의 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물 | |
| CN113384510B (zh) | 一种具有抗光老化、舒缓清凉功效的发酵组合物及其制备方法和应用 | |
| KR102308756B1 (ko) | 귤껍질 및 칼메그의 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 | |
| CN114191358A (zh) | 一种具有美白功效的植物组合物及其在化妆品中的应用 | |
| CN115634188A (zh) | 甘松愈伤组织细胞提取物的应用 | |
| US20210353701A1 (en) | Ultraviolet light-induced inflammation suppressing agent comprising alternative autophagy inducing agent | |
| KR100416400B1 (ko) | 천화분 추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 피부 미백용외용제 조성물 | |
| CN115715750B (zh) | 一种桂花提取物及其制备方法和护肤应用 | |
| CN114303944B (zh) | 细梗蔷薇愈伤组织培养基及提取物、制备方法和应用 | |
| CN117883337A (zh) | 一种植物护肤组合物及其制备方法和植物护肤品 | |
| CN114437242B (zh) | 松萝多糖及其制备方法、应用 | |
| KR102446610B1 (ko) | 스코폴린, 스코폴레틴 및 진세노사이드가 증진된 인체세정용 조성물 및 이의 이용 | |
| CN116035975B (zh) | 一种牡丹花水在护肤品中的应用 | |
| CN117085079B (zh) | 植物乳杆菌sf-l38的发酵制品及其制备方法和应用 | |
| CN117797055B (zh) | 一种改善皮肤老化的复方精油和含有其的护肤品组合物 | |
| CN114848566B (zh) | 一种抗皮肤光老化的铁皮石斛提取物的制备方法及其应用 | |
| CN115969759B (zh) | 光保护植物提取组合物及其应用 | |
| KR20180006770A (ko) | 방사선 방호용 한방 조성물 및 그 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Country or region after: China Address after: 201403 Shanghai City, Fengxian District Lifenglu No. 12 Applicant after: Shanghai Natural Hall Group Co.,Ltd. Address before: 201403 Shanghai City, Fengxian District Lifenglu No. 12 Applicant before: JALA Group Co. Country or region before: China |
|
| CB02 | Change of applicant information | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |