CN115627241A - 一种固氮鱼腥藻的培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种固氮鱼腥藻的培养方法，包括培养基的制备和光照培养，将亮氨酸和精氨酸分别单独高温灭菌，加入到灭菌后的基础培养基中；玉米素经过膜过滤除菌后，也加入到灭菌后的基础培养基中，接入固氮鱼腥藻种子液，光照振荡培养7～9天，即获得微藻培养液，其藻细胞密度为3.12×107～5.35×107个/mL，本发明能够使得固氮鱼腥藻快速生长，提高藻细胞数量，缩短培养时间，降低生产成本，固氮鱼腥藻培养液可用作微生物肥料。

Description

一种固氮鱼腥藻的培养方法
技术领域
本发明涉及一种固氮鱼腥藻的培养方法，属于微藻生物技术领域。
背景技术
微藻是一类能进行光合作用的微生物，具有固碳、固氮能力强，产生胞外多糖和植物激素等活性成分，易于培养等特点。微藻培养液应用于农业生产，可改善土壤理化性质、增强土壤理化性质、增强土壤肥力、促进作物生长、提升作物抗逆能力及提高作物产量与品质。固氮鱼腥藻(Anabaena azotica)是蓝藻门的一种固氮微藻。由于鱼腥藻培养周期长、藻细胞生物量低、生产成本高，成为其在农业上应用的瓶颈。
专利CN106591138A公开了一种蛋白核小球藻培养基，其成分为：KNO3、KH2PO4、FeSO4、MnSO4、MgSO4、EDTA-2Na、VB1、VB12、植物生长调节剂GA3、甘氨酸和脯氨酸。专利文献CN107287125 B公开了一种蛋白核小球藻的培养方法，该方法在培养基中添加灭活的红细菌属(Rhodobacter sp.)和红假单胞菌属(Rhodopseudomonas sp.)细菌的发酵菌液，并在培养基中添加生长调节剂吲哚乙酸和维生素B2，该方法利于提高蛋白核小球藻生长速率、增大细胞密度，促进油脂积累，藻细胞密度达了10.11×107个/mL，但这个方法主要是针对藻细胞的油脂积累。专利文献CN111349565 A公开了一种低成本、高生物量和高蛋白量的蛋白核小球藻培养方法，该方法是将重组菌株进行秸秆糖化，以秸秆糖化液作为廉价优质碳源，采用兼养方式来培养蛋白核小球藻。这种方法涉及二种发酵过程，操作复杂、工艺流程长、设施设备投资大；此外，原料秸秆难于贮藏和全年供应。专利文献CN 112457994 A公开了一种利用挥发性脂肪酸促进蛋白核小球藻生长的方法。该方法是通过向培养基添加混合挥发性脂肪酸(乙酸、丙酸和丁酸)，促进微藻生长，从而实现提高微藻油脂产量。但这种方法所需的混合挥发性脂肪酸难于廉价、稳定地供应。关于以生产微生物肥料为目的的固氮鱼腥藻培养，尚未见报道。
发明内容
本发明为解决上述技术问题，提供一种固氮鱼腥藻的培养方法，能够促进固氮鱼腥藻生长，提高藻细胞生物量，缩短培养时间，降低生产成本。
微藻种类繁多，生长及营养特性各异。在微藻的培养中，藻种和环境因素都会对微藻的培养效果产生很大影响，其中受环境因素影响较大，例如，营养元素、光照、温度、pH、溶氧等。本发明提供一种能够促进固氮鱼腥藻生长、提高藻细胞生物量、缩短培养时间、降低生产成本的固氮鱼腥藻的培养方法，所采用的技术方案是：
一种固氮鱼腥藻的培养方法，包括微藻培养基的制备和光照培养；
所述微藻培养基的制备包括如下具体步骤：
a.准备基础培养基：基础培养基的组成包括酵母浸粉1.5g/L、硝酸钠1.5g/L、磷酸氢二钾0.06g/L、硫酸镁0.1g/L、硫酸亚铁0.05g/L、硫酸钙0.036g/L、柠檬酸铵0.006g/L、EDTA-2Na 0.001g/L、碳酸钠0.02g/L和微量元素溶液1mL/L；
b.高温灭菌：将基础培养基进行高温灭菌，然后，冷却至室温；
c.基础培养基中添加亮氨酸和精氨酸：在无菌条件下将亮氨酸溶液和精氨酸溶液分别加入到基础培养基得到氨基酸培养基，并使得氨基酸培养基中亮氨酸浓度为3.0～5.0mg/L、精氨酸浓度1.0～3.0mg/L；
d.向含亮氨酸、精氨酸的基础培养基中添加玉米素：在无菌条件下将玉米素溶液加入到含亮氨酸和精氨酸的基础培养基中，并使得培养基中玉米素浓度为0.02～0.05mg/L，得到微藻培养基；
所述光照培养的步骤为：将鱼腥藻种子液以10％接种量接种到微藻培养基中，在光照强度7200Lux条件下光照培养箱中振荡培养7～9天，即获得固氮鱼腥藻培养液；
其中，固氮鱼腥藻种子液的制备方法为：将2～3环固氮鱼腥藻斜面培养物接入灭菌后的基础培养基中，在光照强度2400Lux的条件下光照培养箱中振荡培养3天，即得固氮鱼腥藻种子液。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤a中微量元素溶液的配方包括：硼酸1.4g/L、氯化锰1.5g/L、硫酸锌0.15g/L、钼酸钠0.25g/L、硫酸铜0.05g/L、氯化钴0.03g/L，pH＝7。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤b中高温灭菌的温度为121℃，灭菌时间为20～30min。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤c中亮氨酸溶液和精氨酸溶液的加入浓度均为5.0g/L，且分别在121℃高温下灭菌15～20min，冷却至室温后分别加入基础培养基中。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤d中玉米素溶液的加入浓度为1.0mg/L，加入前使用0.22μm有机膜过滤除菌。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述固氮鱼腥藻培养液和固氮鱼腥藻种子液的制备过程中，光照培养箱中的温度均为28℃，转速160r/min。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述固氮鱼腥藻培养液中的藻细胞密度为3.12×107～5.35×107个/mL。
由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是：
本发明的培养方法使得固氮鱼腥藻快速生长，常规条件下，固氮鱼腥藻培养时间为12～15天，藻细胞密度为1.12×107～2.51×107个/mL，而本发明的固氮鱼腥藻培养时间为7～8天，藻细胞密度为3.12×107～5.35×107个/mL，显著提高藻细胞数量，缩短培养时间，降低生产成本。
本发明亮氨酸、精氨酸对固氮鱼腥藻具有非常明显的促进生长的作用，且具有协同作用；玉米素对固氮鱼腥藻的生长也具有良好的促进作用，并且亮氨酸、精氨酸与玉米素共用时，对固氮鱼腥藻的生长具有协同作用，促生效果更好。
附图说明
图1是本发明氯吡脲浓度对鱼腥藻生长的影响图；
图2是本发明玉米素浓度对鱼腥藻生长的影响图；
图3是本发明赤霉素浓度对鱼腥藻生长的影响图；
图4是本发明胺鲜酯浓度对鱼腥藻生长的影响图；
图5是本发明5-硝基愈创木酚钠浓度对鱼腥藻生长的影响图；
图6是本发明IAA浓度对鱼腥藻生长的影响图；
图7是本发明NAA浓度对鱼腥藻生长的影响图；
图8是本发明同时添加氨基酸和玉米素对鱼腥藻生长的影响图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细说明：
(1)准备工作：
藻种：
本发明培养的微藻为固氮鱼腥藻(Anabaena azotica)FACHB-119，购买于中国科学院淡水藻种库。
基础培养基：
基础培养基的组成包括酵母浸粉1.5g/L、硝酸钠1.5g/L、磷酸氢二钾0.06g/L、硫酸镁0.1g/L、硫酸亚铁0.05g/L、硫酸钙0.036g/L、柠檬酸铵0.006g/L、EDTA-2Na 0.001g/L、碳酸钠0.02g/L和微量元素溶液1mL/L；
其中，微量元素溶液的配方包括：硼酸1.4g/L、氯化锰1.5g/L、硫酸锌0.15g/L、钼酸钠0.25g/L、硫酸铜0.05g/L、氯化钴0.03g/L，pH＝7。
固氮鱼腥藻种子液的制备：
将2～3环固氮鱼腥藻斜面培养物接入灭菌后的基础培养基中，在温度28℃、转速160r/min、光照强度2400Lux的条件下光照培养箱中振荡培养3天，即得固氮鱼腥藻种子液。
(2)分析方法：
固氮鱼腥藻的生长测定采用比浊法，在680nm下测定OD值(OD680)；
藻细胞数量：采用显微镜观察计数法。
(3)实验方法：
实验一：氨基酸种类及灭菌方法的影响
将六种氨基酸：精氨酸、酪氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、谷氨酸分别配成浓度为500mg/L的氨基酸母液，并将上述氨基酸母液分别添加于基础培养基中；将氨基酸母液添加到基础培养基时有两种灭菌方式，一种是分别灭菌，即将六种氨基酸母液和基础培养基分别高温灭菌(121℃20min)，灭菌后将六种氨基酸母液分别加入到基础培养基中，得到氨基酸培养基。另一种是混合灭菌，即先将六种氨基酸母液分别加入到基础培养基中，然后进行高温灭菌(121℃20min)，得到氨基酸培养基，其中，上述六种氨基酸培养基中精氨酸、酪氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、谷氨酸的浓度均为5.0mg/L。不加氨基酸的基础培养基作为对照组。
将鱼腥藻种子液以10％接种量接种到上述氨基酸培养基中，在光照强度7200Lux条件下光照培养箱中振荡培养7天，结果见表1。
表1氨基酸种类及灭菌方式对生长的影响(OD680)
对照组 Arg Gly Glu Pro Leu Tyr
分别灭菌 1.36 1.75 1.45 1.43 1.50 1.96 1.52
混合灭菌 1.36 0.59 0.70 1.44 1.57 1.40 1.58
从表1中可以看出，光照培养7天后，与对照组相比，分别灭菌的六种氨基酸除了亮氨酸、精氨酸的促进生长效果好外，其他氨基酸的促进作用不明显，与对照组相比，亮氨酸、精氨酸的生物量分别增加了44.1％、28.7％。而混合灭菌的氨基酸促进作用不明显，甚至精氨酸和甘氨酸反而有抑制作用。
实验二：精氨酸与亮氨酸的协同作用研究
将基础培养基、亮氨酸母液、精氨酸母液分别高温灭菌(121℃20min)，然后，在无菌条件下，向基础培养基中分别添加亮氨酸母液、精氨酸母液以及同时按顺序添加亮氨酸母液和精氨酸母液，得到含5.0mg/L亮氨酸培养基(Leu)、5.0mg/L精氨酸培养基(Arg)、3.0mg/L亮氨酸+2.0mg/L精氨酸培养基(Leu+Arg)。不加氨基酸的基础培养基作为对照。
将鱼腥藻种子液以10％接种量接种到上述氨基酸培养基中，在光照强度7200Lux条件下光照培养箱中振荡培养7天结果见表2。
表2精氨酸与亮氨酸对生长的影响(OD680)
对照组 Leu Arg Leu+Arg
单独灭菌 1.42 2.01 1.81 2.32
从表2中可以发现，当基础培养基中同时添加亮氨酸和精氨酸时，鱼腥藻生长好于单独添加精氨酸或亮氨酸，这表明二者具有协同作用。同时添加亮氨酸、精氨酸时，与对照相比，鱼腥藻生物量增加了57％。
实验三：物生长调节剂对鱼腥藻生长的影响
分别配制七种植物生长调节剂母液；植物生长调节剂母液使用0.22μm有机膜，过滤除菌；不加植物生长调节剂的作为对照，每种植物生长调节剂设高、中、低三个浓度；
(1)氯吡脲
在基础培养基中添加氯吡脲母液，将其浓度分别调整为0.0mg/L(对照)、2.0mg/L(低浓度)、5.0mg/L(中浓度)、10mg/L(高浓度)，将鱼腥藻种子液以10％接种量接种到上述氯吡脲培养基中，在光照强度7200Lux条件下光照培养箱中振荡培养7天，结果见图1和表3。
表3氯吡脲及其浓度对鱼腥藻生长的影响(OD680)
对照 低浓度 中浓度 高浓度
氯吡脲 1.54 1.72 1.23 0.89
图1及表3显示了不同氯吡脲浓度对鱼腥藻生物量的影响，当氯吡脲浓度为2mg/L时，鱼腥藻的生物量要比对照高，说明氯吡脲在此浓度下可以促进鱼腥藻的生长；生物量提高了11.7％。当氯吡脲浓度为5mg/L、10mg/L时，鱼腥藻的生物量要比对照低，说明氯吡脲在此浓度下对鱼腥藻的生长产生了抑制。
(2)玉米素
在基础培养基中添加玉米素，将其浓度分别调整为0.0mg/L(对照)、0.05mg/L(低浓度)、0.2mg/L(中浓度)、2.0mg/L(高浓度)，将鱼腥藻种子液以10％接种量接种到上述玉米素培养基中，在光照强度7200Lux条件下光照培养箱中振荡培养7天，结果见图2和表4。
表4玉米素及其浓度对鱼腥藻生长的影响(OD680)
对照组 低浓度 中浓度 高浓度
玉米素 1.54 2.36 0.15 0.13
图2和表4显示了不同玉米素浓度对鱼腥藻生物量的影响，当玉米素浓度为0.05mg/L时，鱼腥藻的生物量要比对照高，说明玉米素在此浓度下可以促进鱼腥藻的生长；生物量提高了53.2％。当玉米素浓度为0.2mg/L、2.0mg/L时，鱼腥藻的生物量明显要比对照低，说明玉米素在此浓度下对鱼腥藻的生长产生了抑制。
(3)赤霉素
在基础培养基中添加赤霉素，将其浓度分别调整为0.0mg/L(对照)、0.05mg/L(低浓度)、0.5mg/L(中浓度)、5.0mg/L(高浓度)，将鱼腥藻种子液以10％接种量接种到上述赤霉素培养基中，在光照强度7200Lux条件下光照培养箱中振荡培养7天，结果见图3和表5。
表5赤霉素浓度对鱼腥藻生长的影响(OD680)
对照 低浓度 中浓度 高浓度
赤霉素 1.54 1.93 1.93 1.61
图3和表5显示了不同赤霉素浓度对鱼腥藻生物量的影响，当赤霉素浓度为0.05mg/L、0.5mg/L、5.0mg/L时，鱼腥藻的生物量均比对照高，说明赤霉素在此浓度下可以促进鱼腥藻的生长；生物量分别提高了25.1％、25％、4.7％。
(4)胺鲜酯
在基础培养基中添加植物激素胺鲜酯，将其浓度分别调整为0.0mg/L(对照)、10.0mg/L(低浓度)、30.0mg/L(中浓度)、50.0mg/L(高浓度)，将鱼腥藻种子液以10％接种量接种到上述胺鲜酯培养基中，在光照强度7200Lux条件下光照培养箱中振荡培养7天，结果见图4和表6。
表6胺鲜酯浓度对鱼腥藻生长的影响(OD680)
对照 低浓度 中浓度 高浓度
胺鲜酯 1.54 1.72 1.58 1.35
图4和表6显示了不同胺鲜酯浓度对鱼腥藻生物量的影响，当胺鲜酯浓度为10mg/L、30mg/L时，鱼腥藻的生物量要比对照高，说明胺鲜酯在此浓度下可以促进鱼腥藻的生长；生物量分别提高了11.8％、2.5％。当胺鲜酯浓度为50mg/L时，鱼腥藻的生物量要比对照低，说明胺鲜酯在此浓度下对鱼腥藻的生长产生了抑制。
(5)5-硝基愈创木酚钠
在基础培养基中添加植物激素5-硝基愈创木酚钠，将其浓度分别调整为0.0mg/L(对照)、0.5mg/L(低浓度)、2.0mg/L(中浓度)、5.0mg/L(高浓度)，将鱼腥藻种子液以10％接种量接种到上述5-硝基愈创木酚钠培养基中，在光照强度7200Lux条件下光照培养箱中振荡培养7天，结果见图5和表7。
表7 5-硝基愈创木酚钠对鱼腥藻生长的影响(OD680)
对照 低浓度 中浓度 高浓度
5-硝基愈创木酚钠 1.54 1.75 1.96 2.01
图5和表7显示了不同5-硝基愈创木酚钠浓度对鱼腥藻生物量的影响，当5-硝基愈创木酚钠浓度为0.5mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L时，鱼腥藻的生物量均比对照高，说明5-硝基愈创木酚钠在这三个浓度下均可以促进鱼腥藻的生长；其中当浓度为5.0mg/L时生物量最高，与对照相比提高了30.7％。
(6)IAA(吲哚乙酸)
为研究IAA对鱼腥藻生长的影响，在优化后的培养基中的添加植物激素IAA，将其浓度分别调整为0.0mg/L(对照)、0.05mg/L(低浓度)、0.5mg/L(中浓度)、5.0mg/L(高浓度)，将鱼腥藻种子液以10％接种量接种到上述IAA培养基中，在光照强度7200Lux条件下光照培养箱中振荡培养7天，结果见图6和表8。
表8 IAA浓度对鱼腥藻生长的影响(OD680)
对照 低浓度 中浓度 高浓度
IAA 1.54 1.34 1.81 1.39
图6和表8显示了不同IAA浓度对鱼腥藻生物量的影响，当IAA浓度为0.5mg/L时，鱼腥藻的生物量要比对照高，说明IAA在此浓度下可以促进鱼腥藻的生长；生物量提高了17.5％。当IAA浓度为0.05mg/L、5.0mg/L时，鱼腥藻的生物量要比对照低，说明IAA在此浓度下对鱼腥藻的生长产生了抑制。
(7)NAA(奈乙酸)
为研究NAA对鱼腥藻生长的影响，在优化后的培养基中的添加植物激素NAA，将其浓度分别调整为0.0mg/L(对照)、0.1mg/L(低浓度)、0.5mg/L(中浓度)、2.0mg/L(高浓度)，将鱼腥藻种子液以10％接种量接种到上述NAA培养基中，在光照强度7200Lux条件下光照培养箱中振荡培养7天，结果见图7和表9。
表9 NAA浓度对鱼腥藻生长的影响(OD680)
对照组 低浓度 中浓度 高浓度
NAA 1.54 1.83 1.59 2.19
图7和表9显示了不同NAA钠浓度对鱼腥藻生物量的影响，NAA浓度为0.1mg/L、0.5mg/L、2.0mg/L时，鱼腥藻的生物量均比对照高，说明NAA在这三个浓度下均可以促进鱼腥藻的生长；其中当浓度为2.0mg/L时生物量最高，与对照相比提高了42.3％。
综上，光照培养7天后，不同的植物激素在不同的浓度下对鱼腥藻的生长产生不同的影响。其中对鱼腥藻的生长均有促进作用，并且促进效果顺序为:玉米素(0.05mg/L)>萘乙酸(2.0mg/L)>5-硝基愈创木酚钠(5.0mg/L)>赤霉素(0.05mg/L)>吲哚乙酸(0.5mg/L)>胺鲜酯(10mg/L)>氯吡脲(2mg/L)；其中促进效果最好的是玉米素(0.05mg/L)，与对照组相比增加了53％。萘乙酸(2.0mg/L)与对照组相比增加了42％。
实验四：氨基酸与玉米素的协同作用研究
将基础培养基和精氨酸母液(500mg/L)、亮氨酸母液(500mg/L)分别高温灭菌(121℃20min)后冷却至室温，然后向基础培养基中分别添加亮氨酸母液和精氨酸母液，得到含3.0mg/L亮氨酸+2.0mg/L精氨酸培养基，然后向上述培养基中添加1.0mg/L玉米素(加入前使用0.22μm有机膜过滤除菌)，使得玉米素浓度为0.03mg/L，得到亮氨酸+精氨酸+玉米素培养基；将鱼腥藻种子液以10％接种量接种到微藻培养基中，在光照强度7200Lux条件下光照培养箱中振荡培养，定时取样，试验结果见图8。
将基础培养基和精氨酸母液(500mg/L)、亮氨酸母液(500mg/L)分别高温灭菌(121℃20min)后冷却至室温，然后向基础培养基中分别添加亮氨酸母液和精氨酸母液，得到含3.0mg/L亮氨酸+2.0mg/L精氨酸培养基；将鱼腥藻种子液以10％接种量接种到微藻培养基中，在光照强度7200Lux条件下光照培养箱中振荡培养，定时取样，试验结果见图8。
不添加精氨酸、亮氨酸和玉米素的培养基作为对照。定时取样，试验结果见图8。
从图8可以发现，与对照相比，培养基中添加精氨酸、亮氨酸和玉米素对鱼腥藻具有极大的促进作用。对照达到最大生物量的时间为14天，OD680为2.56(藻细胞数1.23×107个/mL)；生长于精氨酸+亮氨酸培养基的鱼腥藻达到最大生物量的时间为10天，OD680为2.97(藻细胞数2.63×107个/mL)，而精氨酸+亮氨酸+玉米素培养基，其达到最大生物量的时间为8天，OD680为3.25(藻细胞数3.12×107个/mL)。试验结果表明，添加精氨酸、亮氨酸和玉米素促进了藻细胞生长，大幅度缩短了培养时间，降低了生产成本。

Claims (7)

1.一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：包括微藻培养基的制备和光照培养；
所述微藻培养基的制备包括如下具体步骤：
a. 准备基础培养基：基础培养基的组成包括酵母浸粉1.5 g/L、硝酸钠1.5 g/L、磷酸氢二钾0.06 g/L、硫酸镁0.1 g/L、硫酸亚铁0.05 g/L、硫酸钙0.036 g/L、柠檬酸铵0.006g/L、EDTA-2Na 0.001 g/L、碳酸钠 0.02 g/L和微量元素溶液 1 mL/L；
b. 高温灭菌：将基础培养基进行高温灭菌，然后，冷却至室温；
c. 基础培养基中添加亮氨酸和精氨酸：在无菌条件下将亮氨酸溶液和精氨酸溶液分别加入到基础培养基得到氨基酸培养基，并使得氨基酸培养基中亮氨酸浓度为3.0～5.0mg/L、精氨酸浓度为1.0～3.0 mg/L；
d. 向含亮氨酸、精氨酸的基础培养基中添加玉米素：在无菌条件下将玉米素溶液加入到含亮氨酸和精氨酸的培养基中，并使得培养基中玉米素浓度为0.02～0.05 mg/L，得到微藻培养基；
所述光照培养的步骤为：将鱼腥藻种子液以10%接种量接种到微藻培养基中，在光照强度7200 Lux条件下光照培养箱中振荡培养7～9天，即获得固氮鱼腥藻培养液；
其中，固氮鱼腥藻种子液的制备方法为：将2～3 环固氮鱼腥藻斜面培养物接入灭菌后的基础培养基中，在光照强度2400 Lux的条件下光照培养箱中振荡培养3天，即得固氮鱼腥藻种子液。
2.根据权利要求1所述的一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：所述步骤a中微量元素溶液的配方包括：硼酸1.4 g/L、氯化锰1.5 g/L、硫酸锌0.15 g/L、钼酸钠0.25 g/L、硫酸铜0.05 g/L、氯化钴0.03 g/L，pH=7。
3.根据权利要求1所述的一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：所述步骤b中高温灭菌的温度为121℃，灭菌时间为20～30 min。
4.根据权利要求1所述的一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：所述步骤c中亮氨酸溶液和精氨酸溶液的加入浓度均为500mg/L，且分别在121℃高温下灭菌15～20 min，冷却至室温后分别加入基础培养基中。
5.根据权利要求1所述的一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：所述步骤d中玉米素溶液的加入浓度为1.0 mg/L，加入前使用0.22μm有机膜过滤除菌。
6.根据权利要求1所述的一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：所述固氮鱼腥藻培养液和固氮鱼腥藻种子液的制备过程中，光照培养箱中的温度均为28℃，转速160 r/min。
7.根据权利要求1所述的一种固氮鱼腥藻的培养方法，其特征在于：所述固氮鱼腥藻培养液中的藻细胞密度为3.12×107～5.35×107个/mL。
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