CN115624549A - 用血栓烷-a2受体拮抗剂治疗肌营养不良的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及通过给药治疗有效量的血栓烷A₂受体拮抗剂来治疗和/或改善肌营养不良和/或治疗肌营养不良患者中的心肌病的方法。

Description

用血栓烷-A2受体拮抗剂治疗肌营养不良的组合物和方法

本申请是申请日为2017年5月11日、发明名称为“用血栓烷-A2受体拮抗剂治疗肌营养不良的组合物和方法”的中国专利申请No.201780028907.0的分案申请。

发明领域

本发明涉及血栓烷A₂受体拮抗剂(例如，伊非曲班(Ifetroban))在治疗哺乳动物例如人中的肌营养不良(muscular dystrophy)的用途，以及用于所述用途的药物组合物，所述药物组合物包含有效量的治疗这些疾病的血栓烷A₂受体拮抗剂(例如，伊非曲班)。

发明背景

肌营养不良(MD)是由于肌营养蛋白(dystrophin)(一种形成健康肌肉所需的蛋白质)中的突变而导致进行性乏力和肌肉质量损失的一类30+疾病。杜氏(Duchenne)MD(DMD)占MD的一半；每3,500名男孩中影响一名并且1/3不具有家族病史。发病在2至3岁之间并且快速发展。贝克尔(Becker)MD(BMD)是第二常见的MD形式；30,000名男孩中有1名；与DMD相比，BMD更温和并且缓慢地发展；直到十几岁、20多岁中期或更晚才可能看到症状。肢带型MD(LGMD)可能影响多至14,500人中的1人，并且导致乏力和近端臂和腿中肌肉的消耗。

肌营养不良的并发症包括不能行走、呼吸问题、脊柱侧凸、心肌病和吞咽问题。其无法治愈。迄今为止的治疗是控制症状或延缓进展。

δ-肌聚糖(delta-sarcoglycan,DSG)是形成为复合物即肌营养蛋白结合性糖蛋白复合物(DGC)的跨膜糖蛋白。DGC通过连接细胞外基质(“ECM”；由细胞产生并且细胞嵌入在其中的含有胶原蛋白、弹性蛋白、蛋白聚糖、糖胺聚糖和液体的物质)和细胞骨架(细胞的内部结构元件或骨架。其由在整个细胞质内散布的微管和多种丝组成，提供结构支持和细胞内运输的手段)而在维持细胞膜的完整性中起核心作用。

在骨骼肌和心肌二者中，DGC由肌营养蛋白、互养蛋白(syntrophin)、a-和b-肌营养不良聚糖(dystroglycan，a-,b-DG)、肌聚糖(a-,b-,g-,d-SG)和肌长蛋白(sarcospan,SSPN)组成。

肌营养蛋白基因中的突变导致在DMD和BMD中的心肌病的高发病率。在DGC内的肌聚糖中的突变是肢带型MD的原因并且与心肌病有关。肌营养蛋白的主要功能是通过使ECM与细胞骨架交联而使肌纤维膜(sarcolemma)增强。utrophin和a7b1整联蛋白实现相同的功能。肌营养蛋白发挥功能以将肌纤维膜与细胞质肌动蛋白细胞骨架连接。功能障碍产生膜不稳定性，提高的[Ca2+]I和被破坏的NO信号传导。γ-和δ-SG形成将其他SG递送/保留到膜所需的核心。

具有在DSG中的突变的患者(例如，患有肌营养不良的患者)表现有心肌病。

在杜氏肌营养不良(DMD)中肌营养蛋白的缺失导致肌细胞的进行性分解。在心脏中，肌营养蛋白的丧失导致细胞内钙不正常增加、收缩蛋白降解、纤维化和心肌死亡。随着呼吸支持的进步，心肌病现在是DMD患者中的主要死亡原因。DMD患者发展有导致心力衰竭的心脏功能的潜在下降，并且也可以发展有心律不齐，具有心脏性猝死的可能，甚至具有根据身体症状或超声心动图的心脏功能的最小降低。因此，心脏磁共振(CMR)可用于检测DMD患者中的早期心脏损害(involvement)。在CMR中的增加的心肌纤维化和扩大的细胞外体积预示左心室(LV)功能障碍，并且与增加的心律不齐风险和因心力衰竭或心脏死亡而住院有关。

尽管与骨骼肌和心肌相比受影响较不严重，但是肠平滑肌功能也可以因萎缩和纤维化而改变。在DMD患者中，尤其是当坐轮椅时，这可能导致差的肠道运动性(gutmotility)、胃食管反流(gastroesophageal reflux)和慢性便秘(chronicconstipation)，其对患者的生活质量产生负面影响。更严重地，扩张(dilatation)、粪便嵌塞(fecal impaction)或假性肠梗阻(intestinal pseudo-obstruction)的可能的并发症可以是威胁生命的。

DMD的细胞损伤特征也与增加的反应性氧物质的形成或氧化应激有关。(Grosso等，Isoprostanes in dystrophinopathy:Evidence of increased oxidative stress(抗肌萎缩蛋白病中的异前列烷：增加的氧化应激的证据).Brain Dev.2008；30(6):391-5.doi:10.1016/j.braindev.2007.11.005.PubMed PMID:18180123)。这些自由基可以与膜磷脂反应以形成异前列烷，其在被磷脂酶释放之后自由流通，并且相对稳定的15-F2t-异前列烷(F2-IsoP)是体内氧化应激的主要生物标志物。(Montuschi等，Isoprostanes:markersand mediators of oxidative stress(异前列烷：氧化应激的标志物和介质).FASEBJ.2004；18(15):1791-800.doi:10.1096/fj.04-2330rev)。在DMD患者中血浆F2-IsoP水平增加(Grosso等，如上引用)，并且在心力衰竭患者中尿F2-IsoP水平增加，其中它们与疾病的严重程度相关(Cracowski等，Increased formation of F(2)-isoprostanes inpatients with severe heart failure(在患有严重心力衰竭的患者中的F(2)-异前列烷的增加的形成).Heart.2000；84(4):439-40.PubMed PMID:10995421；PMCID:PMC172944614)。除预示细胞应激以外，异前列烷也可以是经由血栓烷/前列腺素类受体(TPr)的活化的损伤的来源，并且经由TPr的F2-IsoP信号传导减少血管生成并且导致血管收缩(Bauer等，Pathophysiology of isoprostanes in the cardiovascular system:implications of isoprostane-mediated thromboxane A2receptor activation(心血管系统中异前列烷的病理生理学：异前列烷介导的血栓烷A2受体活化的含义).Brit JPharmacol.2014；171:3115-3115)和纤维化(Acquaviva等，Signaling pathways involvedin isoprostane-mediated fibrogenic effects in rat hepatic stellate cells(在大鼠肝星状细胞中的异前列烷介导的纤维生成效应中涉及的信号传导途径).Free RadicBiol Med.2013；65:201-7,doi:10.1016/j.freeradbiomed.2013.06.023.PubMed PMID:23792773；Comporti等，Isoprostanes and hepatic fibrosis(异前列烷和肝纤维化),MolAspects Med.2008；29(1-2):43-9.doi:10.1016/j.mam.2007.09.011.PubMed PMID:18061254)。

纤维化是在修复性或反应性过程中在器官或组织中形成过量的纤维结缔组织。这可以是反应性的、良性的或病理状态，并且在生理学上发挥沉积结缔组织的作用，这可以消除在下面的器官或组织的结构和功能。纤维化可以用于描述纤维组织的过度沉积的病理状态，以及在愈合中结缔组织沉积的过程。尽管纤维组织的形成是正常的，并且纤维组织是体内器官或组织的正常成分，但是由纤维化状态导致的瘢痕化可能会消除在下面的器官或组织的结构。

迄今为止，不存在有效治疗或预防纤维化疾病的可商购的疗法。常规治疗通常包括皮质类固醇如强的松(prednisone)，和/或帮助提高肌肉强度和延迟某些类型的肌营养不良的发展的其他药物。此外，如果肌营养不良损害心脏，则可以向肌营养不良患者给药心脏药物，如血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或β阻断剂。

发明概述

本发明的一个目的是提供治疗哺乳动物(例如人)中的肌营养不良的新方法。

根据以上目的，本发明提供了通过向需要其的患者给药治疗有效量的血栓烷A₂受体拮抗剂来治疗肌营养不良的方法。

根据以上目的和其他目的，本发明部分涉及治疗或改善需要其治疗的受试者中的肌营养不良的方法，所述方法包括向患者给药治疗有效量的血栓烷A2受体拮抗剂。肌营养不良是选自由下列各项组成的组的纤维化：杜氏MD(DMD)、贝克尔MD和肢带型MD。可以将血栓烷A2受体拮抗剂口服给药、鼻内给药、直肠给药、阴道给药、舌下给药、颊部给药、肠胃外给药或透皮给药。在某些优选的实施方案中，所述方法还包括向患者长期给药血栓烷A2拮抗剂。在某些实施方案中，血栓烷A₂受体拮抗剂包括治疗有效量的[1S-(1α,2α,3α,4α)]-2-[[3-[4-[(戊基氨基)羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]甲基]-苯丙酸(伊非曲班)及其药用盐。在某些实施方案中，血栓烷A₂受体拮抗剂包括治疗有效量的[1S-(1α,2α,3α,4α)]-2-[[3-[4-[(戊基氨基)羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]甲基]-苯丙酸单钠盐(伊非曲班钠)。在某些优选的实施方案中，维持或改善患者的心脏功能。本发明的某些实施方案涉及这样的方法，其中预防性地给药血栓烷A2受体拮抗剂以预防患者中的心肌病，和/或预防性地给药血栓烷A2受体拮抗剂以预防患者中的胃肠功能障碍。在某些优选的实施方案中，治疗有效量是约50mg/天至约500mg/天。在某些优选的实施方案中，血栓烷A2受体拮抗剂是伊非曲班并且治疗有效量是约150mg/天至约350mg/天。在某些实施方案中，将伊非曲班口服给药。在某些实施方案中，本发明涉及治疗和/或改善需要其的患者中的肌营养不良的方法，所述方法包括向需要其的患者给药治疗有效量的血栓烷A₂受体拮抗剂以提供约0.1ng/ml至约10,000ng/ml的血栓烷A₂受体拮抗剂的期望血浆浓度。

本发明还涉及通过给药如本文所述的血栓烷A₂受体拮抗剂为一个或多个患有肌营养不良的人类患者提供心脏保护效果的方法。

本发明进一步涉及通过给药如本文所述的血栓烷A₂受体拮抗剂来改善一个或多个患有肌营养不良的人类患者中右心对负荷应激的适应的方法。

本发明进一步涉及治疗患有肌营养不良的人类患者中的心脏和/或胃肠功能障碍的方法，所述方法包括向所述人类患者长期给药治疗有效量的血栓烷A2受体拮抗剂。在某些优选的实施方案中，血栓烷A2受体拮抗剂是[1S-(1α,2α,3α,4α)]-2-[[3-[4-[(戊基氨基)羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]甲基]-苯丙酸(伊非曲班)及其药用盐，并且在某些最优选的实施方案中，血栓烷A2受体拮抗剂是[1S-(1α,2α,3α,4α)]-2-[[3-[4-[(戊基氨基)羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]甲基]-苯丙酸单钠盐(伊非曲班钠)。治疗有效量可以是例如约100mg至约500mg。可以例如以约50或100mg/天至约500mg/天的量给药血栓烷A2受体拮抗剂。在某些实施方案中，血栓烷A2受体拮抗剂是伊非曲班或其药用盐，并且日剂量是约150mg/天至约350mg/天。在某些实施方案中，将伊非曲班口服给药。在某些实施方案中，胃肠功能障碍是平滑肌功能障碍。在某些实施方案中，治疗有效量的伊非曲班为患者的心脏提供改善的心室功能。

本发明还涉及用于治疗需要其治疗的一个或多个哺乳动物或人中的肌营养不良的方法和组合物，所述方法包括向需要其的一个或多个受试者或患者给药治疗有效量的血栓烷A₂受体拮抗剂。优选地，治疗方法包括给药组合物，所述组合物包括以有效改善心脏功能的量向需要其的肌营养不良患者给药治疗有效量的血栓烷A₂受体拮抗剂。还提供了预防需要这样的治疗的一个或多个受试者或患者中的纤维化或硬化的方法，所述方法包括以有效减少在缺少这样的治疗时会发生的纤维化或硬化组织的形成的量给药包含血栓烷A₂受体拮抗剂的组合物。

在某个实施方案中，纤维化与选自由下列各项组成的组的纤维增生性疾病有关：心纤维化、肾纤维化、肝纤维化、肺纤维化和系统性硬化。

附图简述

以下附图说明了本发明的实施方案并且并非意在限制权利要求所包括的本发明的范围。

图1A是在10周时的赋形剂治疗的DKO(双基因敲除)小鼠的照片；

图1B是在10周时的伊非曲班治疗的DKO小鼠的照片；

图2是示出在3个月时在dSG KO雄性中的血浆cTNI的图表(赋形剂治疗的相对于伊非曲班治疗的)；

图3是示出在小鼠(WT(野生型)、dSG-赋形剂和dSG-伊非曲班治疗的)中的3个月时超声数据的图表；

图4是提供在3个月时的雄性小鼠的心输出数据的图表(WT、dSG KO-赋形剂和dSGKO-伊非曲班治疗的)；

图5是提供6月龄雄性(WT、dSG-赋形剂和dSG-伊非曲班治疗的)的自发运动数据的图表；

图6是示出在6个月时的雄性小鼠中的平均线悬挂时间(average wire hangtime)的图表(WT、dSG-赋形剂和dSG-伊非曲班治疗的)；

图7是示出在6个月时的线悬挂实验的结果(平均悬挂时间)的图表(WT，dSG；赋形剂相对于伊非曲班治疗的；借助双因素ANOVA，对于基因型来说，P＝0.0056)；

图8是示出所测试的雄性小鼠的6个月时线悬挂时间(最长时间)的图表(WT、dSG-赋形剂、dSG-伊非曲班治疗的)；

图9是示出dSG KO雄性(赋形剂和伊非曲班治疗的)中心脏组织学的心脏组织的横截面；

图10是示出dSG KO雄性(使用Masson三色法(trichrome)，2x；赋形剂和伊非曲班治疗的)中心脏组织学的心脏组织的横截面；

图11是示出dSG KO雄性(使用Masson三色法，10x；赋形剂和伊非曲班治疗的)中心脏组织学的心脏组织的横截面；

图12是示出WT和dSG KO雄性中骨骼肌组织学的心脏组织的横截面(胫骨肌横截面,使用Masson三色法；赋形剂和伊非曲班治疗的)；

图13是肠组织的横截面，其示出了伊非曲班治疗的dSG KO小鼠具有比赋形剂治疗的dSG KO小鼠少的纤维化(H&E，10x)；

图14是示出用伊非曲班或赋形剂治疗的dSG KO雄性和雌性的存活百分比的图表；

图15是示出在10周时的WT和DKO雄性中的线悬挂的图表(伊非曲班治疗的(“ife”)相对于赋形剂)；

图16是示出9-10周测量的WT和DKO小鼠中的自发跑动的图表(DKO-赋形剂和DKO-伊非曲班治疗的)；和

图17是示出所有DKO小鼠(赋形剂和伊非曲班治疗的)的存活的图表。

发明详述

根据以上所述的目的，据信，向需要其的一个或多个受试者或患者给药治疗有效量的血栓烷A₂受体拮抗剂可以治疗与肌营养不良有关的心肌病。

短语“治疗有效量”是指以可适用于任何治疗的合理收益/风险比产生一些期望的局部或全身效果的物质的量。这样的物质的有效量将根据被治疗的受试者和疾病病症、受试者的重量和年龄、疾病病症的严重性、给药方式等而变化，其可以由本领域普通技术人员容易地确定。

TPr是位于血小板、免疫细胞、平滑肌和心肌细胞中的G蛋白偶联受体，并且其活化在心脏中具有有害后果。我们最近示出(在我们的美国专利申请公开号2015/0328190中)，在肺动脉高压的压力超负荷模型中用拮抗剂伊非曲班阻断TPr明显降低了右心室纤维化并且改善了心脏功能。尽管TPr具有包括F2-IsoP、血栓烷A2、前列腺素H2和20-HETE的多种内源性配体，但是在我们的压力超负荷模型中利用奥扎格雷(ozagrel)或前列腺素的血栓烷合酶的阻断/利用阿司匹林的血栓烷合成对纤维化或心脏功能没有影响。因此，F2-IsoP是作为应激的心脏中的TPr的活化配体的优异候选物。除了右心室以外，在系统性高血压和Gh过表达的小鼠模型中TPr活化还导致LV肥大和心力衰竭。另外，TPr活化导致细胞内钙增加、心律不齐和心室心肌细胞中的细胞死亡以及肠道中蠕动降低。尽管TPr在MD中的作用是未知的，但是这些行为将受体定位为对DMD中最迫切的关注点中的一些具有影响。

申请人研究了TPr活性可能导致肌营养不良中的病理状态的可能性。在初步研究中，在肢带型肌营养不良(LGMD)的δ-肌聚糖敲除(dSG KO)小鼠模型中阻断TPr活性的效果。我们发现，在使升高的血浆心肌肌钙蛋白I(针对心脏损伤的临床使用的生物标志物)水平正常化的同时，用在饮用水中提供的拮抗剂伊非曲班治疗限制了心脏纤维化的形成并且预防心脏功能的下降。LV心外膜纤维化的抑制可能对DMD患者具有特别的适用性，其中心脏纤维化通常在左心室(LV)游离壁的下心外膜(sub-epicardium)中开始并且发展为包括其余LV游离壁和隔膜。伊非曲班治疗还显著地提高了dSG KO小鼠中的存活，并且在utrophin/肌营养蛋白双基因敲除(DKO)小鼠(一种严重DMD的模型)中，利用伊非曲班的TPr拮抗作用将10周存活从56％提高至100％。因此，据信TPr活性导致肌营养不良中的病理状态。

根据本发明，据信，经由TPr的异前列烷信号传导增加导致DMD中的心肌病和平滑肌功能障碍，并且因此在哺乳动物中利用伊非曲班(口服活性TPr拮抗剂)的治疗将改善心脏和肠道功能并且降低自然死亡率(如在DMD的临床前小鼠模型中证实的)。还据信，利用血栓烷A₂受体拮抗剂(伊非曲班)的治疗可以通过增加心脏的再生能力而有助于心脏保护，并且因此可以提供心脏的功能改善(例如，改善的心室功能)。因此，本发明部分涉及TPr拮抗剂作为用于DMD中的心脏和/或胃肠功能障碍的治疗的用途。本发明还部分涉及TPR拮抗剂用于通过增加心脏的再生能力而提供心脏保护和/或提供肌营养不良(人)患者的心脏的功能改善的用途。

如本文中所使用的术语“血栓烷A2受体拮抗剂”是指在标准生物测定中或在体内或当以治疗有效剂量使用时，将血栓烷受体的表达或活性抑制至少或至少约30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的化合物。在某些实施方案中，血栓烷A2受体拮抗剂抑制血栓烷A₂与受体的结合。血栓烷A2受体拮抗剂包括竞争性拮抗剂(即与激动剂竞争受体的拮抗剂)和非竞争性拮抗剂。血栓烷A2受体拮抗剂包括针对受体的抗体。所述抗体可以是单克隆的。它们可以是人抗体或人源化抗体。血栓烷A2受体拮抗剂还包括血栓烷合酶抑制剂，以及具有血栓烷A2受体拮抗剂活性和血栓烷合酶抑制剂活性两者的化合物。

血栓烷A₂受体拮抗剂

大约30年来，血栓烷A₂受体拮抗剂的发现和开发已经成为许多制药公司的目标(参见Dogne J-M等人,Exp.Opin.Ther.Patents 11:1663-1675(2001))。这些公司鉴定的某些单个化合物(具有或不具有伴随的血栓烷A₂合酶抑制活性)包括伊非曲班(BMS)、利多格雷(Janssen)、特波格雷(BI)、UK-147535(Pfizer)、GR32191(Glaxo)和S-18886(Servier)。临床前药理学已经确定，这类化合物具有通过抑制血栓烷途径获得的有效抗血栓形成活性。这些化合物还防止由血栓烷A₂和作用于血管床内的血栓烷A₂受体的其他前列腺素类诱导的血管收缩，并且因而可以有益地用于预防和/或治疗肝肾综合征和/或肝性脑病。

适合在本发明中使用的血栓烷A2受体拮抗剂可以包括例如但不限于：小分子诸如伊非曲班(BMS；[1S-(1α,2α,3α,4α)]-2-[[3-[4-[(戊基氨基)羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2基]甲基]苯丙酸)，以及在美国专利申请公开号2009/0012115(其公开内容通过引用整体结合于此)中描述的其他拮抗剂。

适合在本文中使用的其他血栓烷A2受体拮抗剂还在美国专利号4,839,384(Ogletree)；5,066,480(Ogletree等人)；5,100,889(Misra等人)；5,312,818(Rubin等人)；5,399,725(Poss等人)；和6,509,348(Ogletree)中描述，它们的公开内容通过引用整体结合于此。这些可以包括但不限于如美国专利号5,100,889中公开的间亚苯基(interphenylene)7-氧杂二环-庚基取代的杂环酰胺前列腺素类似物，包括：

[1S-(1α,2α,3α,4α)]-2-[[3-[4-[[(4-环己基丁基)氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]-庚-2-基]甲基]苯丙酸(SQ 33,961)，或者其酯或盐；

[1S-(1α,2α,3α,4α)]-2-[[3-[4-[[[(4-氯苯基)-丁基]氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]甲基]苯丙酸，或者其酯或盐；

[1S-(1α,2α,3α,4α)]-3-[[3-[4-[[(4-环己基丁基)-氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环]2.2.1]庚-2-基]苯乙酸，或者其酯或盐；

[1S-(1α,2α,3α,4α)]-[2-[[3-[4-[[(4-环己基-丁基)氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]甲基]苯氧基]乙酸，或者其酯或盐；

[1S-(1α,2α,3α,4α]-2-[[3-[4-[[(7,7-二甲基辛基)-氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-甲基]苯丙酸，或者其酯或盐。

如在1992年3月31日授权的美国专利号5,100,889中公开的7-氧杂二环庚基取代的杂环酰胺前列腺素类似物，包括[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]-6-[3-[4-[[(4-环己基丁基)氨基]-羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[[(4-环己基-丁基)氨基]羰基]-2-噻唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[[(4-环己基-丁基)甲基氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环-[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[(1-吡咯烷基)-羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[(环己基氨基)-羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[[(2-环己基-乙基)氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[[[2-(4-氯苯基)乙基]氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环-[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]-6-[3-[4-[[(4-氯苯基)-氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[[[4-(4-氯苯基)丁基]氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环-[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[11α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4.α.-[[-(6-环己基-己基)氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[[(6-环己基-己基)氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α]]-6-[3-[4-[(丙基氨基)-羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[[(4-丁基苯基)-氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[(2,3-二氢-1H-吲哚-1-基)羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环(2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[[(4-环己基-丁基)氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-N-(苯磺酰基)-4-己烯酰胺；

[1S-[11α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[[(4-环己基-丁基)氨基]羰基]-2-

唑基]-N-(甲基磺酰基)-7-氧杂二环[2-.2.1]庚-2-基]-4-己烯酰胺；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-7-[3-[4-[[(4-环己基-丁基)氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环(2.2.1]庚-2-基]-5-庚烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[[(4-环己基-丁基)氨基]羰基]-1H-咪唑-2-基]-7-氧杂二环-[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α,3α,4α)]-6-[3-[4-[[(7,7-二甲基辛基)-氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

[1S-[1α,2α(E),3α,4α)]]-6-[3-[4-[[(4-环己基-丁基)氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸；

[1S-[1α,2α,3α,4α)]-3-[4-[[(4-(环己基丁基)-氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚烷-2-己酸，或者其酯或盐，

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[4-[[(4-环己基-丁基)氨基]羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环-[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸，或者其酯或盐；

如在Snitman等人的美国专利号4,537,981(其公开内容通过引用整体结合于此)中公开的7-氧杂二环庚烷和7-氧杂二环庚烯化合物，诸如[1S-(1α,2α(Z),3α(1E,3S*,4R*),4α)]]-7-[3-(3-羟基-4-苯基-1-戊烯基)-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-5-庚烯酸(SQ 29,548)；如在Nakane等人的美国专利号4,416,896(其公开内容通过引用整体结合于此)中公开的7-氧杂二环庚烷取代的氨基前列腺素类似物，诸如[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-7-[3-[[2-(苯基氨基)羰基]-肼基]甲基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-5-庚烯酸；如在Nakane等人的美国专利号4,663,336(其公开内容通过引用整体结合于此)中公开的7-氧杂二环庚烷取代的二酰胺前列腺素类似物，诸如[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-7-[3-[[[[(1-氧代庚基)氨基]-乙酰基]氨基]甲基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-5-庚烯酸和相应的四唑，以及[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-7-[3-[[[[(4-环己基-1-氧代丁基)-氨基]乙酰基]氨基]甲基]-7-氧杂二环]2.2.1]庚-2-基]-5-庚烯酸；

如在美国专利号4,977,174(其公开内容通过引用整体结合于此)中公开的7-氧杂二环庚烷咪唑前列腺素类似物，诸如[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[[4-(4-环己基-1-羟基丁基)-1H-咪唑-1-基]甲基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸或其甲酯；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[[4-(3-环己基-丙基)-1H-咪唑-1-基]甲基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸或其甲酯；

[1S-[1α.,2α(X(Z),3α,4α)]]-6-[3-[[4-(4-环己基-1-氧代丁基)-1H-咪唑-1-基]甲基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸或其甲酯；

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α]]-6-[3-(1H-咪唑-1-基甲基)-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-己烯酸或其甲酯；或者

[1S-[1α,2α(Z),3α,4α)]]-6-[3-[[4-[[(4-环己基-丁基)氨基]羰基]-1H-咪唑-1-基]甲基-7-氧杂二环-[2.2.1]-庚-2-基]-4-己烯酸或其甲酯；

在Witte等人的美国专利号4,258,058(其公开内容通过引用整体结合于此)中公开的苯氧基烷基羧酸，包括4-[2-(苯磺酰氨基)乙基]苯氧基-乙酸(BM 13,177-BoehringerMannheim)；在Witte等人的美国专利号4,443,477(其公开内容通过引用整体结合于此)中公开的磺酰氨基苯基羧酸，包括4-[2-(4-氯苯磺酰氨基)乙基]-苯乙酸(BM 13,505,Boehringer Mannheim)；在美国专利号4,752,616(其公开内容通过引用整体结合于此)中公开的芳硫基烷基苯基羧酸，包括4-(3-((4-氯苯基)磺酰基)丙基)苯乙酸。

适合在本文中使用的血栓烷A₂受体拮抗剂的其他实例包括但不限于伐哌前列素(vapiprost)(其为优选实例)、(E)-5-[[[(吡啶基)]3-(三氟甲基)苯基]亚甲基]氨基]-氧基]戊酸(也称为R68,070-Janssen Research Laboratories)、3-[1-(4-氯苯基甲基)-5-氟-3-甲基吲哚-2-基]-2,2-二甲基丙酸[(L-655240Merck-Frosst)Eur.J.Pharmacol.135(2):193,3月17日,87]、5(Z)-7-([2,4,5-顺式]-4-(2-羟基苯基)-2-三氟甲基-1,3-二氧杂环己烷-5-基)庚烯酸(ICI185282,Brit.J.Pharmacol.90(Proc.Suppl):228P-Abs,87年3月)、5(Z)-7-[2,2-二甲基-4-苯基-1,3-二氧杂环己烷-顺式-5-基]庚烯酸(ICI 159995,Brit.J.Pharmacol.86(Proc.Suppl):808P-Abs.,85年12月)、N,N’-双[7-(3-氯苯氨基-磺酰基)-1,2,3,4-四氢-异喹啉基]二磺酰基亚胺(SKF 88046,Pharmacologist 25(3):116Abs.,117Abs,83年8月)、(1.α.(Z)-2.β.,5.α.]-(+)-7-[5-[[(1,1’-联苯)-4-基]-甲氧基]-2-(4-吗啉基)-3-氧代环戊基]-4-庚烯酸(AH 23848-Glaxo,Circulation 72(6):1208,85年12月、左洛啡烷烯丙基溴(CM 32,191Sanofi,Life Sci.31(20-21):2261,82年11月15日)、(Z,2-内-3-氧代)-7-(3-乙酰基-2-二环[2.2.1]庚基-5-庚-3Z-烯酸、4-苯基-缩氨基硫脲(EP092-Univ.Edinburgh,Brit.J.Pharmacol.84(3):595,85年3月)；GR32,191(伐哌前列素)-[1R-[1.α.(Z),2.β.,3.β.,5.α.]]-(+)-7-[5-([1,1’-联苯]-4-基甲氧基)-3-羟基-2-(1-哌啶基)环戊基]-4-庚烯酸；ICI 192,605-4(Z)-6-[(2,4,5-顺式)2-(2-氯苯基)-4-(2-羟基苯基)-1,3-二氧杂环己烷-5-基]己烯酸；BAY u3405(雷马曲班)-3-[[(4-氟苯基)-磺酰基]氨基]-1,2,3,4-四氢-9H-咔唑-9-丙酸；或ONO 3708-7-[2.α.,4.α.-(二甲基桥亚甲基)-6.β.-(2-环戊基-2.β.-羟基乙酰氨基)-1.α.-环己基]-5(Z)-庚烯酸；(.+-.)(5Z)-7-[3-内-((苯磺酰基)氨基]-二环[2.2.1]庚-2-外-基]-庚烯酸(S-1452,Shionogidomitroban,

.)；(-)6,8-二氟-9-对甲基磺酰基苄基-1,2,3,4-四氢咔唑-1-基-乙酸(L670596,Merck)和(3-[l-(4-氯苄基)-5-氟-3-甲基-吲哚-2-基]-2,2-二甲基丙酸(L655240,Merck)。

本发明的优选的血栓烷A2受体拮抗剂是伊非曲班或其任意药用盐。

在某些优选的实施方案中，优选的血栓烷A2受体拮抗剂是伊非曲班钠(化学上称作[1S-(1α,2α,3α,4α)]-2-[[3-[4-[(戊基氨基)羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]甲基]-苯丙酸单钠盐。

治疗方法

在本发明的某些实施方案中，提供通过向需要其的一个或多个患者给药治疗有效量的血栓烷A₂受体拮抗剂来治疗和/或改善患者或患者群体中的心肌病的方法。

治疗有效量的血栓烷A₂受体拮抗剂的给药可以通过任意治疗上有用的给药途径实现，其包括但不限于口服给药、鼻内给药、直肠给药、阴道给药、舌下给药、颊部给药、肠胃外给药或透皮给药。在某些优选的实施方案中，将血栓烷A₂受体拮抗剂肠胃外给药。在某些另外的实施方案中，将血栓烷A₂受体拮抗剂通过关节内注射给药。在某些另外的实施方案中，将血栓烷A₂受体拮抗剂直接给药至受影响的解剖学部位。在另一个实施方案中，将血栓烷A₂受体拮抗剂通过肝动脉给药。

在某些优选的实施方案中，血栓烷A₂受体拮抗剂的血浆浓度在约0.1ng/ml至约10,000ng/ml的范围内。优选地，血栓烷A₂受体拮抗剂的血浆浓度在约1ng/ml至约1,000ng/ml的范围内。

当血栓烷A₂受体拮抗剂是伊非曲班时，在某些实施方案中用于治疗肌营养不良中的心肌病的期望血浆浓度应大于约10ng/mL(伊非曲班游离酸)。在大于约1ng/mL的浓度下可以看到血栓烷A₂受体拮抗剂(例如伊非曲班)的一些治疗效果。

给药的剂量应当根据患者的年龄、重量和病况，以及给药途径、剂型和方案以及期望的结果进行调节。

为了获得血栓烷A₂受体拮抗剂的期望血浆浓度以用于治疗肌营养不良患者中的心肌病，血栓烷A₂受体拮抗剂的日剂量优选在约0.1mg至约5000mg的范围内。在某些优选的实施方案中，将血栓烷A₂受体拮抗剂长期给药。日剂量可以在以下范围内：约1mg/天至约1000mg/天；约10mg/天至约1000mg/天；约50mg/天至约500mg/天；约100mg/天至约500mg/天；约200mg/天至约500mg/天；约300mg/天至约500mg/天；或约400mg/天至约500mg/天。在其中哺乳动物是人类患者的某些优选的实施方案中，治疗有效量是约100mg/天至约2000mg/天，或约10mg/天或约100mg/天至约1000mg/天，并且在某些实施方案中，更优选约50至约500mg/天，或约100mg/天至约500mg/天。日剂量可以以分开的剂量给药或者以一个单次剂量或单位剂量给药或者以并行给药的多个剂量给药。就这方面而言，可以将伊非曲班口服给药、鼻内给药、直肠给药、阴道给药、舌下给药、颊部给药、肠胃外给药或透皮给药。在某些优选的实施方案中，上述药物组合物，治疗有效量是约10mg/天至约1000mg/天的伊非曲班(或其药用盐)。在某些优选的实施方案中，治疗有效量是约100至约500mg/天，并且在某些实施方案中，约150mg/天至约350mg/天将产生治疗有效血浆水平的伊非曲班游离酸以用于治疗肌营养不良。在某些优选的实施方案中，约10mg至约250mg(伊非曲班游离酸量)的伊非曲班钠的日剂量将产生治疗有效血浆水平的伊非曲班游离酸以用于治疗肌营养不良。

优选地，血栓烷A₂受体拮抗剂的治疗有效血浆浓度在约1ng/ml至约1,000ng/ml的范围内以用于治疗肌营养不良。

当血栓烷A₂受体拮抗剂是伊非曲班时，用于提供A₂/前列腺素内过氧化物受体(TPr)活化的抑制效果并由此减少脑微血管活化的期望血浆浓度应大于约10ng/mL(伊非曲班游离酸)。在大于约1ng/mL的浓度下可以看到血栓烷A₂受体拮抗剂(例如伊非曲班)的一些抑制效果。

给药的剂量必须根据患者的年龄、重量和病况，以及给药途径、剂型和方案以及期望的结果小心地进行调节。

然而，为了获得血栓烷A₂受体拮抗剂的期望血浆浓度，应给药在约0.1mg至约5000mg的范围内的血栓烷A₂受体拮抗剂的日剂量。优选地，血栓烷A₂受体拮抗剂的日剂量在以下范围内：约1mg/天至约1000mg/天；约10mg/天至约1000mg/天；约50mg/天至约500mg/天；约100mg/天至约500mg/天；约200mg/天至约500mg/天；约300mg/天至约500mg/天；和约400mg/天至约500mg/天。

在某些优选的实施方案中，约10mg至约250mg(伊非曲班游离酸量)的伊非曲班钠的日剂量将产生有效血浆水平的伊非曲班游离酸。

药物组合物

可以将本发明的血栓烷A₂受体拮抗剂通过任意药学上有效的途径给药。例如，可以以使得可以将它们口服给药、鼻内给药、直肠给药、阴道给药、舌下给药、颊部给药、肠胃外给药或透皮给药的方式配制血栓烷A₂受体拮抗剂，从而相应地进行配制。

在某些实施方案中，可以将血栓烷A₂受体拮抗剂配制成药用口服剂型。口服剂型可以包括但不限于口服固体剂型和口服液体剂型。

口服固体剂型可以包括但不限于片剂、胶囊、囊片、散剂、丸剂、多颗粒剂、珠、球及其任意组合。可以将这些口服固体剂型配制为立即释放制剂、控释制剂、持续(延长)释放制剂或修饰释放制剂。

本发明的口服固体剂型还可以含有药用赋形剂，诸如填充剂、稀释剂、润滑剂、表面活性剂、助流剂、粘合剂、分散剂、悬浮剂、崩解剂、增粘剂、成膜剂、制粒助剂、矫味剂、甜味剂、包衣剂、增溶剂及其组合。

根据期望的释放特性，本发明的口服固体剂型可以含有合适量的控释剂、延长释放剂、修饰释放剂。

口服液体剂型包括但不限于溶液剂、乳剂、混悬剂和糖浆剂。这些口服液体剂型可以用本领域技术人员已知用于制备液体剂型的任何药用赋形剂配制。例如，水、甘油、单糖浆、醇及其组合。

在本发明的某些实施方案中，可以将血栓烷A₂受体拮抗剂配制成适合用于肠胃外使用的剂型。例如，所述剂型可以是冻干粉、溶液剂、混悬剂(例如，储库型混悬剂)。

在其他实施方案中，可以将血栓烷A₂受体拮抗剂配制成局部剂型，诸如但不限于贴剂、凝胶、糊剂、乳膏、乳剂、搽剂、香膏、洗剂和软膏。

优选实施方案详述

以下实施例不意为限制性的，并且代表本发明的某些实施方案。

实施例1

在该实施例中，用表1中列出的以下成分制备伊非曲班钠片剂：

表1

成分	重量百分比
		伊非曲班的钠盐	35
甘露醇	50
		微晶纤维素	8
交聚维酮	3.0
		氧化镁	2.0
硬脂酸镁	1.5
		胶体二氧化硅	0.3

采用合适的混合器，将伊非曲班的钠盐、氧化镁、甘露醇、微晶纤维素和交聚维酮一起混合约2至约10分钟。使得到的混合物通过#12至#40筛目尺寸筛。此后，加入硬脂酸镁和胶体二氧化硅，并且继续混合约1至约3分钟。

然后将得到的均匀混合物压制为各自含有35mg伊非曲班钠盐的片剂。

实施例II

在该实施例中，由表2中列出的以下成分制备1000个片剂，每片含有400mg伊非曲班钠：

表2

成分	量
		伊非曲班的钠盐	400gm
玉米淀粉	50g
		明胶	7.5g
微晶纤维素(Avicel)	25g
		硬脂酸镁	2.5g

实施例III

用表3中列出的以下成分制备用于静脉内使用的可注射的伊非曲班钠溶液剂：

表3

成分	量
		伊非曲班钠	2500mg
对羟基苯甲酸甲酯	5mg
		对羟基苯甲酸丙酯	1mg
氯化钠	25,000mg
		适量注射用水	5升

将伊非曲班的钠盐、防腐剂和氯化钠溶解于3升注射用水中，然后将体积调至5升。将溶液过滤通过无菌过滤器，并且无菌地填充到预灭菌的小瓶中，然后将所述小瓶用预灭菌的橡胶塞封闭。各小瓶含有75mg活性成分/150ml溶液的浓度。

实施例IV

针对其心脏表型而选择的dSG KO小鼠是LGMD的模型，但是在大约1:3500雄性出生(1)中出现的DMD是远比LGMD更常见的疾病。DMD的mdx小鼠模型较差地重复在DMD患者中看到的缩短的寿命预期、心脏纤维化和心肌病。utrophin/肌营养蛋白DKO模型在10周时具有显著的死亡率，而使用TPr拮抗剂伊非曲班的治疗在该预定时间点得到100％存活。尽管TPr拮抗作用可以预防DMD中的自然死亡，但是由于严重的脊柱后凸和虚弱，我们不能利用DMD的DKO模型获得大量可用的心脏数据。

实施例4使用West/Carrier肌营养不良动物模型(δ-肌聚糖敲除小鼠(sgcd-/-))。在生命的前3个月内，没有DSG的小鼠发展为具有如坏死、肌肉再生、炎症和纤维化的进行性疾病的病症的心肌病和MD。对于靶向突变来说纯合的小鼠是存活的、可繁殖的并且大小正常。在骨骼肌微粒体制备中并未免疫检测到基因产物(蛋白质)。在8周龄时存在猝死的发病，在28周时具有50％存活率。升高的肌酸激酶血清水平指示横纹肌变性。骨骼肌组织的组织病理学揭示了肌纤维的变性和再生、炎性浸润、血管周围纤维化和钙化。在12周龄时，心肌组织也开始显示出变性、炎性浸润和血管周围纤维化。如通过吸收到肌纤维细胞质中的伊文思蓝(Evans blue)染料而评估的，肌纤维膜具有透过性缺陷。突变小鼠的骨骼肌对机械诱导的肌纤维膜损伤具有提高的灵敏度。不同于患有DMD的人减少75％，肌营养蛋白缺陷小鼠具有寿命仅减少25％的最低临床症状，这可能归因于在小鼠中上调的代偿性机制。肌营养蛋白的主要功能是通过使ECM与细胞骨架交联而使肌纤维膜增强。utrophin和a7b1整联蛋白实现相同的功能并且在mdx小鼠中上调。它们发挥功能以将肌纤维膜与细胞质肌动蛋白细胞骨架连接。功能障碍产生膜不稳定性、升高的[Ca2+]I和被破坏的NO信号传导。γ-和δ-SG形成将其他SG递送/保留到膜所需的核心。

尽管DSG KO(sgcd-/-)小鼠缺乏功能性δ-肌聚糖，但是MD表型比人类疾病温和。因为utrophin(一种肌营养蛋白相关蛋白)能够补偿肌营养蛋白的丧失，所以utrophin和肌营养蛋白(DKO)的丧失引起更严重的表型。DKO明显更小并且显示出更严重的肌肉疾病(与患有MD的人相比相似或更差)。小鼠难以生育和养护，并且通常过早死亡。在3周时，在断奶时开始伊非曲班治疗。

在实施例IV中，仔细照顾赋形剂治疗的小鼠以使它们达到10周的寿命(例如，在使小鼠获得一些营养而他们不需要大量移动的尝试中，持续检查小鼠并且将粉碎食物和水的浅盘放置于紧邻小鼠在笼子中蜷缩的位置)。

图1是赋形剂治疗的DKO小鼠与伊非曲班治疗的DKO小鼠相比的照片。图1A是在10周时的赋形剂治疗的DKO小鼠的照片。图1B是在10周时的伊非曲班治疗的DKO小鼠的照片。将尾部缠绕在线周围的能力取决于肌肉功能。DKO小鼠在线悬挂中真正难以评价的原因是，它们具有严重的脊柱侧凸以致于它们的后爪与它们的前爪非常接近，因此在不考虑它们的痛苦的情况下抬高它们的后爪以实现四肢抓握并不困难。

图2示出了在3个月时在dSG KO雄性中的血浆cTNI。术语“cTNI”意指心肌肌钙蛋白I。术语“KO”意指敲除。术语“dSG”意指δ肌聚糖。术语“WT”意指野生型。血浆心肌肌钙蛋白I(cTNI)对心肌组织具有高度特异性和敏感性，并且可以被快速测量。其是心脏损伤的可靠生物标志物。在图2中，可以看到，与在WT小鼠中相比，在dSG KO小鼠中的血浆cTNI水平高得多。

图3提供了3个月时的超声数据。在其中所示的结果表明，在3个月时，dSG KO雄性显示出心脏功能障碍并且伊非曲班预防心脏功能障碍。

图4提供了在3个月时的雄性dSG KO小鼠的心输出数据。图4显示，与赋形剂相比，用伊非曲班治疗的dSG KO小鼠具有改善的心脏功能障碍。与WT水平相似地改善了心脏功能。

图5提供了6月龄雄性的自发运动数据。该运动是自主跑轮运动(voluntary wheelrunning)—在4.5M的治疗之后自由进入轮中10天。雄性证实了在6M时的骨骼功能缺陷，其在伊非曲班治疗的DSG KO小鼠中看到的程度较低。在不考虑基因型的情况下，在与雄性相比跑动更多的雌性中并未看到差异。

图6示出了在6个月时在dSG小鼠中的线悬挂。在用伊非曲班治疗的dSG小鼠中增加的线悬挂时间是明显的。*p<0.05，来自WT，借助单因素ANOVA，之后进行Dunnett多重比较后检验。赋形剂(Veh)和伊非曲班(ife)治疗组针对彼此进行NS测试。N在括号中。“ife”＝伊非曲班。

图7示出了在6个月时的线悬挂实验的结果，其中针对dSG和WT小鼠将平均悬挂时间作图。

图8描绘了针对所测试的小鼠的线悬挂时间。与雌性相比，雄性小鼠不能长时间悬挂。如果存在的话，难以测量由伊非曲班导致的任何差异。

图9示出了在dSG KO雄性中的心脏组织学。在伊非曲班治疗的RV中看到了较少的纤维化。示出的是针对总体组织学(gross histology)在4x下的Masson三色法。所有裂痕/折叠/红色热点均来自切片制备并且不是病理状态。一些RV还可能受到切片(箭头)的影响。

图10示出了在dSG KO雄性中的心脏组织学(使用Masson三色法，2x)。可以看出，在伊非曲班治疗的RV中存在较少的纤维化。RV＝右心室。

图11示出了在dSG KO雄性中的心脏组织学(使用Masson三色法，10x)。LV＝左心室；RV＝右心室。在伊非曲班治疗的KO小鼠中看到了较少的纤维化。

图12示出了在WT和dSG KO雄性中的骨骼肌组织学(胫骨肌横截面，使用Masson三色法)。一些纤维化可能归因于肌肉的特定部分。

图13是肠组织的横截面，其示出了伊非曲班可以防止在大肠肌层中肠平滑肌的损失。DSG KO小鼠缺少平滑肌(尤其是缺少纵向平滑肌)，而伊非曲班治疗的小鼠具有与WT平滑肌相似的部分。“H&E”＝苏木精&曙红。图13示出了伊非曲班治疗的dSG KO小鼠具有比赋形剂治疗的dSG KO小鼠少的纤维化。

图14是示出用伊非曲班或赋形剂治疗的dSG KO雄性和雌性的存活百分比的图表。

图15是示出在10周时的DKO雄性中的线悬挂的图表(伊非曲班治疗的(“ife”)相对于赋形剂)。结果显示，与用赋形剂治疗的小鼠相比，伊非曲班治疗的小鼠具有明显更长的平均悬挂时间。

图16示出了在DKO小鼠中的自发跑动：9-10周测量。

图17示出了所有DKO小鼠的存活。伊非曲班治疗的小鼠存活超过70天，而赋形剂治疗的小鼠(雄性和雌性二者)存活不超过70天。

结论

在上述说明书中，已经参考具体示例性实施方案及其实施例描述了本发明。但是，明显的是可以在不脱离所附权利要求书中阐述的本发明的更宽泛的实质和范围下，对其做出多种修改和改变。因此，本说明书和附图应当以示例性的方式而不是限制性的含义来对待。

Claims (19)

1.一种治疗或改善需要其治疗的受试者中的肌营养不良的方法，所述方法包括向所述患者给药治疗有效量的血栓烷A₂受体拮抗剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述肌营养不良选自由下列各项组成的组：杜氏MD(DMD)、贝克尔MD、和肢带型MD。

3.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括向所述患者长期给药所述血栓烷A₂拮抗剂。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中维持或改善所述患者的心脏功能。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述血栓烷A₂受体拮抗剂是[1S-(1α,2α,3α,4α)]-2-[[3-[4-[(戊基氨基)羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]甲基]-苯丙酸(伊非曲班)及其药用盐。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述血栓烷A₂受体拮抗剂是[1S-(1α,2α,3α,4α)]-2-[[3-[4-[(戊基氨基)羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]甲基]-苯丙酸单钠盐(伊非曲班钠)。

7.根据权利要求1所述的方法，其中将所述血栓烷A₂受体拮抗剂口服给药、鼻内给药、直肠给药、阴道给药、舌下给药、颊部给药、肠胃外给药或透皮给药。

8.根据权利要求1所述的方法，其中将所述血栓烷A₂受体拮抗剂肠胃外给药。

9.根据权利要求1所述的方法，其中将所述血栓烷A₂受体拮抗剂口服给药。

10.根据权利要求2所述的方法，其中预防性地给药所述血栓烷A₂受体拮抗剂以预防所述患者中的心肌病。

11.根据权利要求2所述的方法，其中预防性地给药所述血栓烷A₂受体拮抗剂以预防所述患者中的胃肠功能障碍。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述治疗有效量为约50mg/天至约500mg/天，优选约150mg/天至约350mg/天，并且将所述伊非曲班口服给药。

13.一种治疗患有肌营养不良的人类患者中的心脏和/或胃肠功能障碍的方法，所述方法包括向所述人类患者长期给药治疗有效量的血栓烷A₂受体拮抗剂。

14.根据权利要求14所述的方法，其中所述治疗有效量为约100mg/天至约500mg/天，优选约150mg/天至约350mg/天，并且将所述伊非曲班口服给药。

15.根据权利要求13-14中任一项所述的方法，其中所述血栓烷A₂受体拮抗剂是[1S-(1α,2α,3α,4α)]-2-[[3-[4-[(戊基氨基)羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]甲基]-苯丙酸(伊非曲班)及其药用盐。

16.根据权利要求13-14中任一项所述的方法，其中所述血栓烷A₂受体拮抗剂是[1S-(1α,2α,3α,4α)]-2-[[3-[4-[(戊基氨基)羰基]-2-

唑基]-7-氧杂二环[2.2.1]庚-2-基]甲基]-苯丙酸单钠盐(伊非曲班钠)。

17.根据权利要求13-14中任一项所述的方法，其中所述肌营养不良是DMD。

18.根据权利要求13所述的方法，其中所述胃肠功能障碍是平滑肌功能障碍。

19.根据权利要求13所述的方法，其中所述治疗有效量的血栓烷A₂受体拮抗剂为所述患者的心脏提供改善的心室功能。

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