CN115590038B - 一种烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂，按质量百分比计包括以下组分：烟草花叶病毒核酸干扰素：5‑40％；分散剂：3‑10％；乳化剂：10‑15％；抑菌剂：0.1‑1％；稳定剂：1‑2.5％；结构稳定剂：1‑10％；余量为分散介质；其中：所述烟草花叶病毒核酸干扰素为抗烟草花叶病毒的核酸农药TMV‑cp(I)‑dsRNA，是可分散油悬浮剂的活性成分。本发明还公开了其制备方法和应用，以及用于所述可分散油悬浮剂的稳定剂。本发明将烟草花叶病毒核酸干扰素制成可分散油悬浮剂的形式，借助特异性的稳定剂，有效地解决了烟草花叶病毒核酸干扰素易分解、稳定性差的问题，并且，本发明的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂对于防治烟草花叶病毒具有很好的效果，防治效果为80％以上。

Description

一种烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂及其应用
技术领域
本发明属于生物农药制剂技术领域，具体涉及一种烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂及其应用。
背景技术
农药发展使用至今，目前尚无更有效的方法取代化学农药来防治多达数千种以上的农药病、虫、草害。尤其是暴发性的病虫害给农作物的产量带来的损失是惊人的。生产中使用的许多广谱性的农药，因其广谱性会伤及有益生物，如昆虫天敌、蜜蜂等。
烟草花叶病毒(TMV)是一种单链RNA病毒，对植物具有极强的侵染性和致病力。烟草花叶病毒病广泛分布于我国各烟区，是烟草主要病毒病害。目前，烟草花叶病毒病的防治主要采用化学农药和转基因育种方法。但化学农药导致病毒的抗药性日益明显且造成了高量的农药残留；同样，虽然转基因技术可以高效的控制病毒病的发生和发展，但其生物安全性却引起了高度重视。
烟草花叶病毒核酸干扰素，其只针对烟草花叶病毒病具有优异的防治效果，具有较强的选择性，对蚯蚓、蜜蜂等有益生物和土壤中光合菌、固氮菌等有益微生物不产生作用。因此，开发此类新型生物农药制剂是实现农产品安全的必然趋势。
本案申请人在CN113717984A中公开了一种抗烟草花叶病毒的核酸农药 TMV-cp(I)-dsRNA，该核酸农药对环境无毒无害，在成本控制及应用方面均获得了良好的效果，有望成为优秀的生物农药。
油悬浮剂具有优异的润湿、展布、黏附和渗透性，是水基化制剂和颗粒制剂的重要补充。以天然植物油或甲酯化植物油、矿物油等环保溶剂作为分散介质，对环境有良好的兼容性。且生产和使用过程中无粉尘产生，对使用者更具安全性。是当今农药剂型的主要发展趋势及热点。
发明内容
基于现有技术存在的实际情况，本案发明人在CN113717984A中公开的抗烟草花叶病毒的核酸农药TMV-cp(I)-dsRNA的基础上，进一步将其制成了可分散油悬浮剂的形式。然而，实际应用中发现，烟草花叶病毒核酸干扰素原药以及制剂并不稳定，在喷洒到田间后受环境影响会快速降解，从而影响药效的发挥。因此，本发明进一步对可分散油悬浮剂的稳定剂进行了优化，以提升可分散油悬浮剂的稳定性，进而提升其对于烟草花叶病毒的防治效果。
因此，本发明的第一个方面，提供了一种烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂，按质量百分比计包括以下组分：
烟草花叶病毒核酸干扰素：5-40％；
分散剂：3-10％；
乳化剂：10-15％；
抑菌剂：0.1-1％；
稳定剂：1-2.5％；
结构稳定剂：1-10％；
余量为分散介质；
其中：所述烟草花叶病毒核酸干扰素为抗烟草花叶病毒的核酸农药TMV-cp(I)-dsRNA，是可分散油悬浮剂的活性成分。
根据本发明，所述分散剂为木质素磺酸盐、腰果酚聚氧乙烯醚磷酸酯、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸盐、羧酸酯高聚物、烷基苯醚磺酸盐、烷基萘磺酸盐、二胺嵌段共聚物、以及琥珀酸二异辛脂磺酸钠中的一种或多种。
根据本发明，所述乳化剂为十二烷基苯磺酸钙、蓖麻油聚氧乙烯醚、苯乙基苯酚聚氧乙烯醚、酚醛树脂聚氧乙烯醚、腰果酚聚氧乙烯醚、蓖麻油环氧乙烷加成物、以及羟基聚环氧乙烷嵌段共聚物中的一种或多种。
根据本发明，所述抑菌剂为1,2-苯并异噻唑啉-3-酮。
根据本发明，所述稳定剂为环氧大豆油、植酸、没食子酸丙酯的组合物。
根据本发明的优选实施例，所述环氧大豆油、植酸、没食子酸丙酯的组合的质量比范围为(3-5):0.5:(1-3)。
根据本发明，所述结构稳定剂为中空介孔二氧化硅。
根据本发明，所述分散介质为矿物油、大豆油甲酯、椰子油甲酯、腰果壳油、蓖麻油、橄榄油、葡萄籽油、松脂基植物油中的一种或多种。
本发明的第二个方面，提供了上述的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的制备方法，包括以下步骤：
S1、烟草花叶病毒核酸干扰素、结构稳定剂和稳定剂，按比例充分混合均匀，使用行星式球磨机进行超微粉碎，得到800～1000目的烟草花叶病毒核酸干扰素粉；
S2、将S1中得到的800～1000目的烟草花叶病毒核酸干扰素粉，与分散剂、乳化剂、防腐剂和分散介质，剪切均质，得到烟草花叶病毒核酸干扰素悬浮液；
S3、将S2中得到的烟草花叶病毒核酸干扰素悬浮液，进行湿法研磨，研磨至粒径≤800nm，得到烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
本发明的第三个方面，提供了上述的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂用于防治烟草花叶病毒的应用。
本发明的第四个方面，提供了一种用于烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的稳定剂，所述稳定剂为环氧大豆油、植酸、没食子酸丙酯的组合物，组合的质量比范围为(3-5):0.5:(1-3)。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明将烟草花叶病毒核酸干扰素制成可分散油悬浮剂的形式，借助特异性的稳定剂，有效地解决了烟草花叶病毒核酸干扰素易分解、稳定性差的问题。
2、本发明的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂对于防治烟草花叶病毒具有很好的效果，防治效果为80％以上。
3、本发明的可分散油悬浮剂以烟草花叶病毒核酸干扰素为活性成分，其只针对烟草花叶病毒具有防治效果，具有选择性，对有益生物不产生作用。
4、本发明的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的制备工艺简单，生产过程中不使用低闪点有机溶剂，生产中避免了易燃、易爆和中毒问题，使用过程中也避免了粉尘飞扬的问题，对操作者和使用者安全，对环境友好。
附图说明
图1为烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂电泳图，其中，1-3分别代表对比例 1-3所制备的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂，4-7分别代表实施例1-4所制备的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
注：电泳检测时，烟草花叶病毒核酸干扰素上样量一致。
具体实施方式
下面结合附图，以具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。应理解，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的范围。
本发明在CN113717984A中公开的抗烟草花叶病毒的核酸农药TMV-cp(I)-dsRNA的基础上，为提升其对烟草花叶病毒的防治效果，进一步将其制成了可分散油悬浮剂的形式，具体配方如下：
上述组分中，所述烟草花叶病毒核酸干扰素为CN113717984A中公开的抗烟草花叶病毒的核酸农药TMV-cp(I)-dsRNA，为可分散油悬浮剂的活性成分。
所述分散剂为木质素磺酸盐、腰果酚聚氧乙烯醚磷酸酯、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸盐、羧酸酯高聚物、烷基苯醚磺酸盐、烷基萘磺酸盐、二胺嵌段共聚物、琥珀酸二异辛脂磺酸钠中的一种或多种。
所述乳化剂为十二烷基苯磺酸钙、蓖麻油聚氧乙烯醚、苯乙基苯酚聚氧乙烯醚、酚醛树脂聚氧乙烯醚、腰果酚聚氧乙烯醚、蓖麻油环氧乙烷加成物、羟基聚环氧乙烷嵌段共聚物中的一种或多种。
所述抑菌剂为1,2-苯并异噻唑啉-3-酮。
所述稳定剂为环氧大豆油、植酸、没食子酸丙酯的组合物，其优选的组合质量比为(3-5):0.5:(1-3)。
所述结构稳定剂为中空介孔二氧化硅。
所述分散介质为矿物油、大豆油甲酯、椰子油甲酯、腰果壳油、蓖麻油、橄榄油、葡萄籽油、松脂基植物油中的一种或多种。
实施例1
本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂，以烟草花叶病毒核酸干扰素为活性成分，配以分散剂、乳化剂、抑菌剂、稳定剂、结构稳定剂、以及分散介质，形成烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
按质量百分数计，本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的配方如下：
本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的制备方法：
按比例称量5g烟草花叶病毒核酸干扰素原药、1g稳定剂和10g结构稳定剂，充分混合后，经气流粉碎后得到800-1000目的烟草花叶病毒核酸干扰素粉；按比例称量3g分散剂、10g乳化剂、0.1g抑菌剂和70.9g分散介质，与烟草花叶病毒核酸干扰素粉混合，形成烟草花叶病毒核酸干扰素悬浮液；进行湿法研磨，至粒径≤800nm，出料，得到5％烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
实施例2
本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂，以烟草花叶病毒核酸干扰素为有效成分，配以分散剂、乳化剂、抑菌剂、稳定剂、结构稳定剂、以及分散介质，形成烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
按质量百分数计，本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的配方如下：
本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的制备方法：
按比例称量10g烟草花叶病毒核酸干扰素原药、1.5g稳定剂和8.5g结构稳定剂，充分混合后，经气流粉碎后得到800-1000目的烟草花叶病毒核酸干扰素粉；按比例称量5g 分散剂、12g乳化剂、0.3g抑菌剂和62.7g分散介质，与烟草花叶病毒核酸干扰素粉混合，形成烟草花叶病毒核酸干扰素悬浮液；进行湿法研磨，至粒径≤800nm，出料，得到10％烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
实施例3
本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂，以烟草花叶病毒核酸干扰素为有效成分，配以分散剂、乳化剂、抑菌剂、稳定剂、结构稳定剂、以及分散介质，形成烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
按质量百分数计，本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的配方如下：
本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的制备方法：
按比例称量25g烟草花叶病毒核酸干扰素原药、2g稳定剂和3g结构稳定剂，充分混合后，经气流粉碎后得到800-1000目的烟草花叶病毒核酸干扰素粉；按比例称量8g分散剂、15g乳化剂、0.5g抑菌剂和46.5g分散介质，与烟草花叶病毒核酸干扰素粉混合，形成烟草花叶病毒核酸干扰素悬浮液；进行湿法研磨，至粒径≤800nm，出料，得到25％烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
实施例4
本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂，以烟草花叶病毒核酸干扰素为有效成分，配以分散剂、乳化剂、增稠剂、稳定剂、功能性助剂、以及分散介质，形成烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
按质量百分数计，本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的配方如下：
组分 质量百分比(％)
核酸农药TMV-cp(I)-dsRNA 40
木质素磺酸盐 10
腰果酚聚氧乙烯醚 17
1,2-苯并异噻唑啉-3-酮 1
环氧大豆油、植酸和没食子酸丙酯的组合(质量比3:0.5:2) 2.5
中空介孔二氧化硅 1
松脂基植物油 余量
本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的制备方法：
按比例称量40g烟草花叶病毒核酸干扰素原药、2.5g稳定剂和1g结构稳定剂，充分混合后，经气流粉碎后得到800-1000目的烟草花叶病毒核酸干扰素粉；按比例称量10g 分散剂、17g乳化剂、1g抑菌剂和28.5g分散介质，与烟草花叶病毒核酸干扰素粉混合，形成烟草花叶病毒核酸干扰素悬浮液；进行湿法研磨，至粒径≤800nm，出料，得到40％烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
对比例1
本对比例按照实施例3的配方，不同的是稳定剂的比例，即环氧大豆油、植酸和没食子酸丙酯的组合比例为1:1:1，具体如下：
本对比例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的制备方法：
按比例称量25g烟草花叶病毒核酸干扰素原药、2g稳定剂和3g结构稳定剂，充分混合后，经气流粉碎后得到800-1000目的烟草花叶病毒核酸干扰素粉；按比例称量8g分散剂、15g乳化剂、0.5g抑菌剂和46.5g分散介质，与烟草花叶病毒核酸干扰素粉混合，形成烟草花叶病毒核酸干扰素悬浮液；进行湿法研磨，至粒径≤800nm，出料，得到25％烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
对比例2
本对比例按照实施例3的配方，不同的是无稳定剂，具体如下：
本对比例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的制备方法：
按比例称量25g烟草花叶病毒核酸干扰素原药和3g结构稳定剂，充分混合后，经气流粉碎后得到800-1000目的烟草花叶病毒核酸干扰素粉；按比例称量8g分散剂、15g乳化剂、0.5g抑菌剂和48.5g分散介质，与烟草花叶病毒核酸干扰素粉混合，形成烟草花叶病毒核酸干扰素悬浮液；进行湿法研磨，至粒径≤800nm，出料，得到25％烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
对比例3
本对比例按照实施例3的配方，不同的是选用常规稳定剂BHT，具体如下：
本实施例的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的制备方法：
按比例称量25g烟草花叶病毒核酸干扰素原药、2g稳定剂和3g结构稳定剂，充分混合后，经气流粉碎后得到800-1000目的烟草花叶病毒核酸干扰素粉；按比例称量8g分散剂、15g乳化剂、0.5g抑菌剂和46.5g分散介质，与烟草花叶病毒核酸干扰素粉混合，形成烟草花叶病毒核酸干扰素悬浮液；进行湿法研磨，至粒径≤800nm，出料，得到25％烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
稳定性实验
本发明所使用的烟草花叶病毒核酸干扰素分子中含有羟基、双键等官能团，日常环境中的氧气、水分、紫外线、温度等均容易造成其分解。由于其原药容易分解的特性，其制剂的稳定性也欠佳，因此本实施例对以烟草花叶病毒核酸干扰素为活性成分制备的可分散油悬浮剂的稳定性进行了考察。
将实施例1～4与对比例1～3制得的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂进行热贮稳定性测试，热贮稳定性测试依据GB/T19136-2003中的“液体制剂”进行，测试结果见以下表1。
表1、热贮稳定性测试
由表1的结果可知，实施例1-4制备的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂在热贮14天后，分解率均低于4％，而对比例1-3制备的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的14天分解率均超过20％，最高达53.91％。
将实施例1～4与对比例1～3制得的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂分别按照如下应用实施例兑水稀释，取10mL稀释后的制剂密封于安瓿瓶中，置于恒温箱中54℃热贮14天。
采用琼脂糖凝胶电泳检测有效成分，本实施例所用琼脂糖浓度为2.0％，分别取热贮后的核酸干扰素10μL电泳(电泳电压150V、20min)，结束后于琼脂糖凝胶电泳成像仪成像。结果如图1所示，可知实施例1～4的条带亮度明显高于对比例1～3，正好与表1的结果相互印证。
应用实施例
本试验在江西省宜春市上高县锦江镇进行，该地烟草花叶病毒病发生较重。
试验设8个处理：实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、对比例1、对比例2和对比例3所制备的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂、香茹多糖(已获农药登记注册产品)、清水对照，重复3次。
全生育期共施药3次，即烟草移栽前2天对土壤喷雾、移栽定植后采用整株喷雾连续施药两次，施药间隔期7天；施药方式为兑水喷雾，亩用水量45千克。于第3次药后10 天调查结果，每小区随机选有代表性的五点取样，每点调查10株，共调查50株，不足50 株时全部调查，以株为单位分级调查；记载调查总株数、各级病株数，计算病情指数和防治效果。
分级标准：
0级：全株无病。
1级：心叶脉明或轻微花叶，病株无明显矮化；
3级：1/3叶片花叶但不变形，或植株矮化为正常株高的3/4以上；
5级：1/3～1/2叶片花叶，或少数叶片变形，或主脉变黑，或植株矮化为正常株高的2/3～3/4；
7级：1/2～2/3叶片花叶，或变形或者主侧脉坏死，或病株矮化为正常株高的1/2～2/3；
9级：全株叶片花叶、严重变形或坏死，或病株矮化为正常株高的1/2以上。
药效计算方法：
对防治烟草花叶病毒病的田间试验结果，如表1所示：
表1：对烟草花叶病毒病的田间药效试验结果
*:清水对照的病情指数(％)
从表1的试验结果可知，实施例1、实施例2、实施例3和实施例4烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂对烟草花叶病毒病防治效果均在80％以上，显著优于对比例1、对比例2、对比例3和市售常规药剂，没有药害产生，防治效果显著。因此，本发明的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂值得在农业生产中大面积使用推广。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (7)

1.一种烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂，其特征在于，按质量百分比计包括以下组分：
烟草花叶病毒核酸干扰素：5-40%；
分散剂：3-10%；
乳化剂：10-15%；
抑菌剂：0.1-1%；
稳定剂：1-2.5%；
结构稳定剂：1-10%；
余量为分散介质；
其中：所述烟草花叶病毒核酸干扰素为抗烟草花叶病毒的核酸农药TMV-cp(I)-dsRNA，是可分散油悬浮剂的活性成分；
所述稳定剂为环氧大豆油、植酸、没食子酸丙酯的组合物，其组合的质量比范围为（3-5）:0.5:（1-3）；
所述结构稳定剂为中空介孔二氧化硅；
所述分散介质为矿物油、大豆油甲酯、椰子油甲酯、腰果壳油、蓖麻油、橄榄油、葡萄籽油、松脂基植物油中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂，其特征在于，所述分散剂为木质素磺酸盐、腰果酚聚氧乙烯醚磷酸酯、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸盐、羧酸酯高聚物、烷基苯醚磺酸盐、烷基萘磺酸盐、二胺嵌段共聚物、以及琥珀酸二异辛脂磺酸钠中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂，其特征在于，所述乳化剂为十二烷基苯磺酸钙、蓖麻油聚氧乙烯醚、苯乙基苯酚聚氧乙烯醚、酚醛树脂聚氧乙烯醚、腰果酚聚氧乙烯醚、蓖麻油环氧乙烷加成物、以及羟基聚环氧乙烷嵌段共聚物中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂，其特征在于，所述抑菌剂为1,2-苯并异噻唑啉-3-酮。
5.权利要求1-4中任一项所述的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
S1、烟草花叶病毒核酸干扰素、结构稳定剂和稳定剂，按比例充分混合均匀，使用行星式球磨机进行超微粉碎，得到800～1000目的烟草花叶病毒核酸干扰素粉；
S2、将S1中得到的800～1000目的烟草花叶病毒核酸干扰素粉，与分散剂、乳化剂、抑菌剂和分散介质，剪切均质，得到烟草花叶病毒核酸干扰素悬浮液；
S3、将S2中得到的烟草花叶病毒核酸干扰素悬浮液，进行湿法研磨，研磨至粒径≤800nm，得到烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂。
6.权利要求1-4中任一项所述的烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的应用，其特征在于，用于防治烟草花叶病毒。
7.一种稳定剂用于制备烟草花叶病毒核酸干扰素可分散油悬浮剂的应用，其特征在于，所述稳定剂为环氧大豆油、植酸、没食子酸丙酯的组合物，组合的质量比范围为（3-5）:0.5:（1-3）。
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