CN115554370A - 一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物及其应用 - Google Patents
一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物及其应用,属于生物医药技术领域。该改善自身免疫性甲状腺炎的组合物以质量份数计,包括1~5份燕麦生物碱和1~3份羟基酪醇;所述燕麦生物碱为二氢燕麦生物碱、燕麦生物碱A、燕麦生物碱B和燕麦生物碱C中的一种或几种。通过性能验证实验发现,该组合物能够有效调节Th17和Treg的百分比,抑制过强的免疫反应,可降低自身免疫性甲状腺炎大鼠血清TGAb、TPOAb水平,减少甲状腺组织中TNF‑α和IL‑6的含量,说明该组合物可用于自身免疫性甲状腺炎的治疗中,提示该组合物可用于自身免疫性甲状腺炎导致的甲状腺激素水平异常及压迫症状的治疗中,可结合抗甲状腺药物或甲状腺激素类药物用于自身免疫性甲状腺炎的治疗中。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域,具体涉及一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物及其应用。
背景技术
甲状腺是人体最大的内分泌腺体,其分泌的甲状腺激素是调节机体物质代谢和能量代谢的主要激素之一。自身免疫性甲状腺炎是甲状腺疾病的一大类,其是在遗传或环境因素影响下,机体产生甲状腺自身抗体,攻击甲状腺,进而导致甲状腺炎症的产生。自身免疫性甲状腺炎可能导致甲状腺结节、甲状腺肿的产生,严重时可能压迫气管、食管或神经;部分自身免疫性甲状腺炎会导致机体甲状腺激素水平的变化进而影响全身代谢。目前临床医学上多针对自身免疫性甲状腺炎最终引起的压迫或代谢症状进行改善,并未对自身免疫性甲状腺炎产生的原因进行干预,即未对甲状腺过强的免疫反应及血清中过高的甲状腺抗体水平进行改善。
发明内容
为了克服上述现有技术的缺点,本发明的目的在于提供一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物及其应用,从自身免疫性甲状腺炎本身出发治疗甲状腺炎。
为了达到上述目的,本发明采用以下技术方案予以实现:
本发明公开了一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,以质量份数计,包括1~5份燕麦生物碱和1~3份羟基酪醇。
优选地,所述燕麦生物碱为二氢燕麦生物碱、燕麦生物碱A、燕麦生物碱B和燕麦生物碱C中的一种或几种。
优选地,所述组合物还包括药学上可接受的载体。
进一步优选地,所述药学上可接受的载体选自乳化剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、调味剂、着色剂和助溶剂。
优选地,所述组合物还含有其他抗甲状腺药物或甲状腺激素类药物。
优选地,所述组合物的剂型为固体剂型或液体剂型。
进一步优选地,所述固体剂型为颗粒剂、片剂或胶囊剂。
优选地,所述组合物的大鼠给药剂量为每天50mg/kg。
本发明还公开了上述一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物在制备治疗自身免疫性甲状腺炎药物中的应用。
优选地,所述自身免疫性甲状腺炎为桥本甲状腺炎、萎缩性甲状腺炎、无痛性甲状腺炎、产后甲状腺炎、放射性甲状腺炎或药物性甲状腺炎。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明提供的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,以燕麦生物碱和羟基酪醇作为主要成分,燕麦生物碱可以增加Treg细胞的百分比,抑制过强的免疫反应。羟基酪醇抑制NF-κB的活化,抑制炎症因子产生,阻断促炎因子对甲状腺的破坏,同时避免炎症因子再次激活免疫细胞,可进一步增强燕麦生物碱对过强免疫反应的抑制作用。两种成分组合,可以调节Treg和Th17的平衡,减少甲状腺过强的免疫反应,降低血清甲状腺抗体水平,减少甲状腺炎症因子对甲状腺的破坏,改善自身免疫性甲状腺炎效果显著。对该组合物进行效能实验验证,细胞实验发现燕麦生物碱和羟基酪醇可以调节Th17和Treg的百分比,抑制过强的免疫反应,改善自身免疫性甲状腺炎效果显著高于单一物质;动物实验发现该组合物可降低自身免疫性甲状腺炎大鼠血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)水平,减少甲状腺组织中TNF-α和IL-6的含量,说明该组合物可用于自身免疫性甲状腺炎的治疗中,提示该组合物可用于自身免疫性甲状腺炎导致的甲状腺激素水平异常及压迫症状的治疗中,可结合抗甲状腺药物或甲状腺激素类药物用于自身免疫性甲状腺炎的治疗中。
附图说明
图1为本发明的不同添加物对CD4+T细胞培养液中Th17和Treg细胞的影响图;其中,**表示与Con组相比,P<0.01;##表示与Mix组相比,P<0.01,#表示与Mix组相比,P<0.05;
图2为本发明的各组大鼠血清TGAb、TPOAb的水平图;其中,**表示与Con组相比,P<0.01;△△表示与Mod组相比,P<0.01;
图3为本发明的各组大鼠甲状腺组织中炎症因子的水平图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案,下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都应当属于本发明保护的范围。
需要说明的是,本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象,而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换,以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外,术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形,意图在于覆盖不排他的包含,例如,包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元,而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
下面结合附图对本发明作进一步详细描述:
本发明提供的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,以质量份数计,包括1~5份燕麦生物碱和1~3份羟基酪醇;所述燕麦生物碱为二氢燕麦生物碱、燕麦生物碱A、燕麦生物碱B和燕麦生物碱C中的一种或几种。该组合物可用于自身免疫性甲状腺炎的治疗中。进一步,该组合物可用于自身免疫性甲状腺炎导致的甲状腺激素水平异常及压迫症状的治疗中,可结合抗甲状腺药物或甲状腺激素类药物用于自身免疫性甲状腺炎的治疗中。
实施例1
本发明提供的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,以质量份数计,包括1份二氢燕麦生物碱和1份羟基酪醇。
对上述组合物进行性能验证,实验过程如下:
1.细胞实验
1.1药品与试剂
二氢燕麦生物碱(质量分数98%,湖北恒景瑞化工有限公司);羟基酪醇(质量分数98%,湖北恒景瑞化工有限公司),其他未特别标注的试剂均为常规试剂。
1.2细胞分离
经患者同意后,用肝素真空采血管采集桥本甲状腺炎患者10mL新鲜外周静脉血。按说明书方法操作利用Rosette-Sep干细胞技术分离CD4+T细胞。采用流式细胞术检测CD4+T细胞的纯度,细胞表面标志物CD4高表达(>85%)。
1.3培养和刺激CD4+T细胞
于96孔培养皿每孔注入1×104个CD4+T细胞,用含L-谷氨酰胺和10%胎牛血清(Gibco),同时补充100μg/mL链霉素、100U/mL青霉素和5μg/mL抗CD28的完整RPMI培养基培养(R&D systems)。通过加入10ng/mL的IL-6、10μg/mL的抗IFN-γ和10μg/mL的抗IL-4刺激CD4+T细胞形成Th17细胞。之后将其分为4组,分别将1μg/mL生理盐水(Con组)、1μg/mL的二氢燕麦生物碱(DA组)、1μg/mL的羟基酪醇(HT组)、0.5μg/mL的二氢燕麦生物碱+0.5μg/mL的羟基酪醇(Mix组)添加到细胞培养液中,在37℃,5% CO2的条件下中孵育72h。
1.4流式细胞术测定Th17和Treg细胞的百分比
用流式细胞术对收集的CD4+T细胞进行Th17细胞和Treg细胞百分比的计数。加入PerCP-Cyanine5.5抗人CD4抗体(Thermo Fisher,CN,货号45-0049-42)、PE抗人IL-17抗体(Thermo Fisher,CN,货号12-7179-42),4℃孵育后上机检测,CD4+IL-17A+用于确定Th17;加入FITC抗人CD4抗体(Thermo Fisher,CN,货号11-0049-42)、APC抗人CD25抗体(ThermoFisher,CN,货号17-0259-42)、PE-Cyanine5抗人FoxP3抗体(Thermo Fisher,CN,货号15-4776-42),4℃孵育后上机检测,CD4+CD25+FoxP3+用于确定Treg。
1.5结果及分析
辅助性T细胞17(Th17)是一种能够分泌IL-17的T细胞亚群,在自身免疫性疾病和机体防御反应中具有重要的意义,自身免疫性甲状腺炎患者Th17值明显高于健康人群;调节性T细胞(Treg)是一类控制体内自身免疫反应性的T细胞亚群,它与自身免疫性疾病的发生关系密切,其异常表达可导致自身免疫性疾病,自身免疫性甲状腺炎患者Treg值明显低于健康人群。由图1中A可知,与Con组相比,DA、HT和Mix组Th17百分比明显降低,且与Con组有显著性差异,说明DA、HT和Mix组都能降低Th17的百分比;DA与Mix组、HT与Mix组之间也有显著性差异,且Mix组的Th17百分比明显低于DA和HT组,说明二氢燕麦生物碱与羟基酪醇的组合物比单独的二氢燕麦生物碱或羟基酪醇降低Th17百分比的效果要好。由图1中B可知,与Con组相比,DA和Mix组Treg百分比明显升高,与Con组有显著性差异,而HT组与Con组之间没有显著性差异,说明二氢燕麦生物碱及组合物(二氢燕麦生物碱+羟基酪醇)能明显提高Treg的百分比,而羟基酪醇的该作用不明显;DA与Mix组之间有显著性差异,说明二氢燕麦生物碱与羟基酪醇的组合物比单独的二氢燕麦生物碱提高Treg水平的效果要好。综合以上,二氢燕麦生物碱与羟基酪醇的组合物降低Th17百分比、增加Treg百分比的效果明显好于单一组分。
2.动物实验
2.1药品与试剂
二氢燕麦生物碱(质量分数98%,湖北恒景瑞化工有限公司);羟基酪醇(质量分数98%,湖北恒景瑞化工有限公司);PTg、完全弗氏佐剂、不完全弗氏佐剂、碘化钠(Sigma公司);甲状腺球蛋白抗体(TGAb)酶联免疫检测试剂盒、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)酶联免疫检测试剂盒(江苏酶免实业有限公司);TNF-α、IL-6ELISA检测试剂盒(江苏酶免实业有限公司)。
2.2方法
2.2.1大鼠自身免疫性甲状腺炎模型(EAT模型)构建
将PTg与完全弗氏佐剂按体积比1∶1制成油包水乳剂,制备质量浓度为0.25mg/mL的溶液。按100μg/只的剂量对大鼠背部皮下多点注射,连续给药2周,1次/周。从第3周开始注射由不完全弗氏佐剂乳化的PTg抗原(浓度为0.25mg/mL),给药部位、剂量和频次同上,给药周期为5周。造模期间,大鼠每日正常自由饮用含0.64g/L碘化钠的饮用水。
2.2.2分组与给药
将24只SPF级雌性6~8周龄体质量为160~180g的Sprague-Dawley大鼠(空军军医大学实验动物中心)适应性喂养一周后,随机分为3组:空白对照组、模型组和实验组,每组8只。除空白对照组不作处理,其余各组均进行造模处理。
造模后灌胃给药,其中实验组给药二氢燕麦生物碱及羟基酪醇的组合物(1:1),剂量为50mg/(kg·d),空白对照组和模型组给予等量0.9% NaCl溶液,1次/d,共30d。
2.3检测指标
取给药结束次日空腹10h的大鼠的尾静脉血,3000r/min 4℃冷冻离心10min,小心分离血清并-20℃保存备用。根据TPOAb和TGAb的试剂盒说明书分别检测TPOAb和TGAb水平。
尾静脉取血后,深度麻醉大鼠并处死,每只大鼠取0.1g甲状腺组织,用1mL无菌生理盐水匀浆后,收集匀浆液并按照试剂盒说明书步骤,用ELISA法检测甲状腺组织中TNF-α和IL-6的含量。
2.4实验结果
TPOAb作为主要的甲状腺组织自身抗体之一,可作为甲状腺组织损伤的重要标志抗体,TGAb是自身免疫性甲状腺疾病患者血清中的一种常见自身抗体,由于TGAb的敏感度高于TPOAb,而TPOAb的特异度高于TGAb,通常联合检测这两个指标以降低甲状腺类疾病的漏诊及误诊率。由图2中A可知,Mod组与Con组相比,Mod组TGAb水平明显升高,且有显著性差异,说明大鼠EAT模型造模成功。Mix组与Mod组相比,能明显降低大鼠血清TGAb水平,且有显著性差异,说明二氢燕麦生物碱和羟基酪醇的组合物能降低自身免疫性甲状腺炎大鼠血清中TGAb的水平。由图2中B可知,Mod组与Con组相比,Mod组TPOAb水平明显升高,且有显著性差异,说明大鼠EAT模型造模成功。Mix组与Mod组相比,能明显降低大鼠血清TPOAb水平,且有显著性差异,说明二氢燕麦生物碱和羟基酪醇的组合物能降低自身免疫性甲状腺炎大鼠血清中TPOAb的水平。
α-肿瘤坏死因子(TNF-α)是一种主要由巨噬细胞和单核细胞产生的促炎细胞因子,参与正常炎症反应和免疫反应,自身免疫性甲状腺炎患者TNF-α值明显高于健康人群;白细胞介素-6(IL-6)在传递信息,激活与调节免疫细胞,介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用,自身免疫性甲状腺炎患者IL-6值明显高于健康人群。由图3中A可知,Mod组与Con组相比,Mod组TNF-α含量明显升高,且有显著性差异。Mix组与Mod组相比,Mix组大鼠甲状腺组织TNF-α含量显著低于Mod组。由图3中B可知,Mod组与Con组相比,Mod组IL-6含量明显升高,且有显著性差异。Mix组与Mod组相比,Mix组大鼠甲状腺组织IL-6含量显著低于Mod组。说明二氢燕麦生物碱和羟基酪醇的组合物能降低自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺组织中炎症因子TNF-α和IL-6的水平。
本实验先通过不同添加物对CD4+T细胞培养液中Th17和Treg细胞的影响研究发现,二氢燕麦生物碱和羟基酪醇的组合物能显著降低Th17的百分比,显著增加Treg的百分比。再通过皮下注射佐剂乳化的pTG联合过量碘摄入建立EAT大鼠模型,证明了二氢燕麦生物碱和羟基酪醇的组合物能降低EAT大鼠甲状腺组织中TNF-α和IL-6含量,并降低血清中的TgAb和TPOAb水平,说明二氢燕麦生物碱和羟基酪醇的组合物有潜在治疗自身免疫性甲状腺炎的作用。
实施例2
本发明提供的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,以质量份数计,包括3份燕麦生物碱B和1份羟基酪醇。
实施例3
本发明提供的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,以质量份数计,包括2份燕麦生物碱A、3份燕麦生物碱B和3份羟基酪醇。
实施例4
本发明提供的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,以质量份数计,包括3份燕麦生物碱C和2份羟基酪醇。
实施例5
本发明提供的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,以质量份数计,包括1份二氢燕麦生物碱、1燕麦生物碱C和1份羟基酪醇。
以上内容仅为说明本发明的技术思想,不能以此限定本发明的保护范围,凡是按照本发明提出的技术思想,在技术方案基础上所做的任何改动,均落入本发明权利要求书的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,其特征在于,以质量份数计,包括1~5份燕麦生物碱和1~3份羟基酪醇。
2.根据权利要求1所述的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,其特征在于,所述燕麦生物碱为二氢燕麦生物碱、燕麦生物碱A、燕麦生物碱B和燕麦生物碱C中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,其特征在于,所述组合物还包括药学上可接受的载体。
4.根据权利要求3所述的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,其特征在于,所述药学上可接受的载体选自乳化剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、调味剂、着色剂和助溶剂。
5.根据权利要求1所述的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,其特征在于,所述组合物还含有其他抗甲状腺药物或甲状腺激素类药物。
6.根据权利要求1所述的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,其特征在于,所述组合物的剂型为固体剂型或液体剂型。
7.根据权利要求6所述的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,其特征在于,所述固体剂型为颗粒剂、片剂或胶囊剂。
8.根据权利要求1所述的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物,其特征在于,所述组合物的大鼠给药剂量为每天50mg/kg。
9.权利要求1~8任意一项所述的一种改善自身免疫性甲状腺炎的组合物在制备治疗自身免疫性甲状腺炎药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述自身免疫性甲状腺炎为桥本甲状腺炎、萎缩性甲状腺炎、无痛性甲状腺炎、产后甲状腺炎、放射性甲状腺炎或药物性甲状腺炎。
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