CN115508492A - 一种新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法及指纹图谱 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法及指纹图谱，包括：(1)取新复方芦荟胶囊粉末回流提取，然后加入甲醇超声，过滤，取续滤液，得供试品溶液；取芦荟苷、芦荟大黄素、靛玉红、色胺酮、芦荟苦素和β‑谷甾醇，分别溶于甲醇，得到各对照品溶液；(2)取供试品溶液和各对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，得到新复方芦荟胶囊的色谱图和各对照品溶液的色谱图；(3)根据新复方芦荟胶囊的色谱图、各对照品溶液的色谱图，标注新复方芦荟胶囊的色谱图上各峰的化学成分，得到新复方芦荟胶囊的指纹图谱。该检测方法可以客观、全面、准确的评价新复方芦荟胶囊的质量，对控制新复方芦荟胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。

Description

一种新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法及指纹图谱
技术领域
本发明属于中药检测领域，涉及一种新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法及指纹图谱。
背景技术
“新复方芦荟胶囊”为由芦荟、青黛和琥珀3味药材加工而成的复方制剂，具有清热润肠、调肝益肾、宁心安神等功效，临床多用于肝经实热、肠腑积滞引起的大便秘结，以及治疗习惯性便秘，大便燥结或者由于大便数日失常所致的腹胀、腹痛以及烦躁失眠等症状。
中药质量优劣直接关系到其发展。目前，中药因为其疗效可靠，副作用极小、毒性低和罕见的耐药性而在全世界范围内受到越来越多的关注，但中药由于其化学成分复杂并且成分之间相互影响，导致中药质量控制难度加大。目前，新复方芦荟胶囊的质量控制较为简单，且现行的新复方芦荟胶囊国家标准也只对其中的芦荟苷含量做了要求，不能反映新复方芦荟胶囊的整体成分信息、亦无法为其质量提供控制与评价依据。因此，现行的新复方芦荟胶囊质量标准具备进一步优化提升的空间。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法及指纹图谱，为方中芦荟、青黛和琥珀提供全面的指纹图谱检测方法，该检测方法可以客观、全面、准确的评价新复方芦荟胶囊的质量，对控制新复方芦荟胶囊的质量和保证临床疗效具有重要意义。
本发明通过以下技术方案实现：
一种新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法，包括：
(1)取新复方芦荟胶囊粉末回流提取，然后加入甲醇超声，过滤，取续滤液，得供试品溶液；取芦荟苷、芦荟大黄素、靛玉红、色胺酮、芦荟苦素和β- 谷甾醇，分别溶于甲醇，得到各对照品溶液；
(2)取供试品溶液和各对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，得到新复方芦荟胶囊的色谱图和各对照品溶液的色谱图；
(3)根据新复方芦荟胶囊的色谱图、各对照品溶液的色谱图，标注新复方芦荟胶囊的色谱图上各峰的化学成分，得到新复方芦荟胶囊的指纹图谱。
优选的，步骤(2)中，梯度洗脱采用的流动相：乙腈-0.08％磷酸水溶液。
进一步的，步骤(2)中，洗脱程序如下表：
Figure BDA0003898638070000021
优选的，步骤(2)中，采用300nm波长测得色谱图。
优选的，步骤(2)中，高效液相色谱仪采用的色谱柱为Hypersil ODS(C18)。
优选的，还包括：将供试品溶液进行质谱分析，得到质谱结果图；
步骤(3)中，根据新复方芦荟胶囊的色谱图、各对照品溶液的色谱图及质谱结果图，标注新复方芦荟胶囊的色谱图上各峰的化学成分，得到新复方芦荟胶囊的指纹图谱。
优选的，还包括：获取不同批次的新复方芦荟胶囊的色谱图并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，选择不同批次的新复方芦荟胶囊的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，生成对照指纹图谱，并根据各对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中共有峰的化学成分；将新复方芦荟胶囊的指纹图谱与对照指纹图谱进行相似度比较，确认指纹图谱的可靠性。
优选的，新复方芦荟胶囊的指纹图谱有6个特征峰，包括4号峰、5号峰、 6号峰、8号峰、14号峰、15号峰，分别为：色胺酮、芦荟苦素、芦荟苷、β- 谷甾醇、芦荟大黄素、靛玉红。
采用所述的构建方法得到的新复方芦荟胶囊的指纹图谱。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
本发明采用高效液相色谱法建立新复方芦荟胶囊指纹图谱，通过对提取方式进行筛选，建立了指纹图谱测定方法，得到的色谱图峰形、分离度等出峰状况均良好，且步骤简单、成本低廉，符合建立指纹图谱的要求，本发明方法操作简单，稳定可靠，精密度高，分离度好，得到的指纹图谱的稳定性和重现性较好。指纹图谱作为新复方芦荟胶囊的质量控制手段，避免了因只测定一、两个化学成分而判定制剂整体质量的片面性，能更加全面、科学的评价新复方芦荟胶囊的质量，从而使产品的质量和疗效得到保证，对新复方芦荟胶囊的成分鉴别、质量评价以及质量标准的制定具有重要的意义。
进一步的，本发明采用乙腈-0.08％磷酸水溶液系统，采用梯度洗脱的方法建立新复方芦荟胶囊的指纹图谱，本发明的洗脱程序出峰情况较佳，且分离度良好。
进一步的，由于指纹图谱不是为了测定某个成分的精确含量，而是要充分反映化学成分的信息，因此，本发明选择在300nm波长处进行测定，其出峰较多，反映的信息更为完全，各个峰吸收值良好，基线平稳。
进一步的，对供试品溶液进行质谱分析，能补充指纹图谱中更多的化学成分，分析更全面。
进一步的，通过对多个批次的样品进行系统分析，能更加全面、科学的评价新复方芦荟胶囊的质量，从而使产品的质量和疗效得到保证。
附图说明
图1为本发明中提取方法A、洗脱程序C所得的色谱图。
图2为本发明中提取方法B、洗脱程序C所得的色谱图。
图3为本发明中提取方法C、洗脱程序C所得的色谱图。
图4为本发明中提取方法D、洗脱程序A所得的色谱图。
图5为本发明中提取方法D、洗脱程序B所得的色谱图。
图6为本发明中提取方法D、洗脱程序C所得的色谱图。
图7为本发明芦荟苷对照品的色谱图。
图8为本发明芦荟大黄素对照品的色谱图。
图9为本发明靛玉红对照品的色谱图。
图10为本发明色胺酮的质谱图。
图11为本发明芦荟苦素的质谱图。
图12为本发明β-谷甾醇的质谱图。
图13为本发明新复方芦荟胶囊中芦荟、青黛和琥珀药材的12批次供试品指纹图谱。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
1.一种新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：精密称定不同批次的新复方芦荟胶囊粉末回流提取，放冷至室温后用超纯水补足减失重量，后加入甲醇超声过滤，取续滤液，即得。
(2)对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素、靛玉红、色胺酮、芦荟苦素和β-谷甾醇，置于容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，分别制得各对照品溶液，4℃保存。
(3)分别精密量取供试品溶液和各对照品溶液，过0.45μm微孔滤膜，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，得到新复方芦荟胶囊的色谱图及各对照品溶液的色谱图。
(4)为确定及补充指纹图谱中更多的化学成分，将上述供试品溶液进行质谱分析，得到总离子流图以及6个化学成分的质谱结果图，将检测数据导入 Xcalibur软件，进入Qual Browser界面，根据化学成分出峰情况进行数据分析。
(5)根据新复方芦荟胶囊的色谱图、质谱结果图、各对照品溶液的色谱图标注新复方芦荟胶囊的色谱图上各峰的化学成分，得到新复方芦荟胶囊的指纹图谱。
(6)将新复方芦荟胶囊供试品溶液的色谱图导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版本)，选择色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，生成对照指纹图谱，并根据单一对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中共有峰的化学成分。
(7)将新复方芦荟胶囊的指纹图谱与对照指纹图谱进行相似度比较，确认指纹图谱的可靠性。
上述步骤(1)中，所述的供试品溶液的制备方法优选如下：精密称定12 批的新复方芦荟胶囊粉末1.0g置于具塞锥形瓶，加入30mL超纯水溶解，称定重量，115℃回流提取30min后放冷至室温，再称定重量，用超纯水补足减失重量，后加入20mL甲醇，超声30min，过滤，取续滤液，即得。
上述步骤(2)中，精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素、靛玉红、色胺酮、芦荟苦素和β-谷甾醇5mg。
上述步骤(3)中，高效液相色谱分离条件为：
色谱柱：Hypersil ODS(C18)
柱温：30℃
测定波长：300nm
流速：0.8mL/min
进样量：20μL
流动相：乙腈(A相)、0.08％磷酸水溶液(B相)
洗脱程序如下表3。
上述步骤(5)中使用的仪器为：DIONEX UltiMate 3000超高效液相色谱 -Orbitrap质谱仪，测试条件为电喷雾电离(Electrospray Ionization,ESI)，喷雾电压3500V，鞘气流速40arb，辅助气流速10arb，辅助气温度300℃，毛细管温度300℃，扫描模式为全扫描模式，质荷比扫描范围m/z为100-1300。
2.提取方法的优化
本发明步骤(1)中，分别进行了如下四种提取方法的考察：
提取方法A：精密称定新复方芦荟胶囊粉末1.0g置于具塞锥形瓶，加入 25mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解，超声提取1h，冷却至室温，过滤，取续滤液10mL，加入5倍量的超纯水稀释，再用20mL乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，即得。
提取方法B：精密称定新复方芦荟胶囊粉末1.0g置于具塞锥形瓶，加入 25mL甲醇溶解，超声提取1h，冷却至室温，过滤，取续滤液10mL，加入5 倍量的超纯水稀释，再用20mL乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，即得。
提取方法C：精密称定新复方芦荟胶囊粉末1.0g置于具塞锥形瓶，加入 25mL超纯水溶解，超声提取1h，冷却至室温，过滤，取续滤液10mL，加入 5倍量的超纯水稀释，再用20mL乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，即得。
提取方法D：精密称定新复方芦荟胶囊粉末1.0g置于具塞锥形瓶，加入 30mL超纯水溶解，称定重量，115℃回流提取30min后，放冷至室温，再称定重量，用超纯水补足减失重量，后加入20mL甲醇，超声30min，过滤，取续滤液，即得。
结果显示，提取方法A的出峰效果不佳，峰的数量较少，且相邻峰之间的分离度低，因此不能满足指纹图谱要求。提取方法B相对于方法A，出峰的数量有所增加，且主要集中在35-56min，分离度相对较好，但是在10-35min之前存在未出峰的情况。提取方法C和提取方法D，相对于前两种提取方法，峰形、分离度等出峰状况均良好。相比较而言，方法D的提取方法和步骤比方法 C简单且成本低廉。因此指纹图谱最终确定方法D为最终提取条件，即精密称定新复方芦荟胶囊粉末1.0g置于具塞锥形瓶，加入30mL超纯水溶解，称定重量，115℃回流提取30min后，放冷至室温，再称定重量，用超纯水补足减失重量，后加入20mL甲醇，超声30min，过滤，取续滤液，即得。
3.流动相洗脱程序的优化
本发明步骤(3)中，分别进行了如下三种流动相洗脱程序的考察：
表1洗脱程序A：
Figure BDA0003898638070000071
Figure BDA0003898638070000081
表2洗脱程序B：
Figure BDA0003898638070000082
表3洗脱程序C：
Figure BDA0003898638070000083
结果显示，洗脱程序A虽然在32-55min之间有出峰情况，但整体出峰数量较少，存在分离度不佳的情况，且在0-30min存在没有出峰的情况。洗脱程序B在减少有机相后，相对于实施例4中的色谱图，在20-40min之间峰间距稍有改善，但出峰数量仍然较少，且仍有一定程度的分离不佳。洗脱程序C与洗脱程序A、洗脱程序B相比，出峰情况较佳，且分离度良好。因此，选择洗脱程序C为指纹图谱的最终的流动相洗脱程序。
下面结合附图1-13对本发明做进一步详细描述：
1.本发明所用仪器如下表4：
表4本发明所用仪器
Figure BDA0003898638070000091
2.本发明所用材料与试剂如下表5：
表5本发明所用材料与试剂
Figure BDA0003898638070000092
Figure BDA0003898638070000101
实施例1
(1)供试品溶液的制备：按照提取方法A进行制备，即精密称定12批的新复方芦荟胶囊粉末1.0g置于具塞锥形瓶，加入25mL N,N-二甲基甲酰胺 (DMF)溶解，超声提取1h，冷却至室温，过滤，取续滤液10mL，加入5 倍量的超纯水稀释，再用20mL乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，即得。
(2)对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素、靛玉红、色胺酮、芦荟苦素和β-谷甾醇5mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，分别制得标准品储备溶液，4℃保存。
(3)指纹图谱的建立：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，过0.45μm 微孔滤膜，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
高效液相色谱分离条件为：
色谱柱：Hypersil ODS(C18)
柱温：30℃
测定波长：300nm
流速：0.8mL/min
进样量：20μL
流动相：乙腈(A相)、0.08％磷酸水溶液(B相)
洗脱程序：按照洗脱程序C进行。
最终获得色谱图见图1，由色谱图可以看出，本实施例中提取方法A的出峰效果不佳，峰的数量较少，且相邻峰之间的分离度低，不能满足指纹图谱要求。
实施例2
(1)供试品溶液的制备：按照提取方法B进行制备，即精密称定12批的新复方芦荟胶囊粉末1.0g置于具塞锥形瓶，加入25mL甲醇溶解，超声提取1 h，冷却至室温，过滤，取续滤液10mL，加入5倍量的超纯水稀释，再用20mL 乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，即得。
(2)对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素、靛玉红、色胺酮、芦荟苦素和β-谷甾醇5mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，分别制得标准品储备溶液，4℃保存。
(3)指纹图谱的建立：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，过0.45μm 微孔滤膜，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
高效液相色谱分离条件为：
色谱柱：Hypersil ODS(C18)
柱温：30℃
测定波长：300nm
流速：0.8mL/min
进样量：20μL
流动相：乙腈(A相)、0.08％磷酸水溶液(B相)
洗脱程序：按照洗脱程序C进行。
最终获得色谱图见图2，由色谱图可以看出，本实施例中提取方法B相较于实施例1中的提取方法B，出峰的数量有所增加，且主要集中在35-56min，分离度相对较好，但是在10-35min之前存在未出峰的情况。
实施例3
(1)供试品溶液的制备：按照提取方法C进行制备，即精密称定12批的新复方芦荟胶囊粉末1.0g置于具塞锥形瓶，加入25mL超纯水溶解，超声提取1h，冷却至室温，过滤，取续滤液10mL，加入5倍量的超纯水稀释，再用 20mL乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液，即得。
(2)对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素、靛玉红、色胺酮、芦荟苦素和β-谷甾醇5mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，分别制得标准品储备溶液，4℃保存。
(3)指纹图谱的建立：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，过0.45μm 微孔滤膜，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
高效液相色谱分离条件为：
色谱柱：Hypersil ODS(C18)
柱温：30℃
测定波长：300nm
流速：0.8mL/min
进样量：20μL
流动相：乙腈(A相)、0.08％磷酸水溶液(B相)
洗脱程序：按照洗脱程序C进行。
最终获得色谱图见图3，由色谱图可以看出，本实施例中提取方法C相较于实施例1、2中的提取方法B、C，出峰状况较佳、峰形较好、分离度良好。
实施例4
(1)供试品溶液的制备：按照提取方法D行制备，即精密称定12批的新复方芦荟胶囊粉末1.0g置于具塞锥形瓶，加入30mL超纯水溶解，称定重量， 115℃回流提取30min后放冷至室温，再称定重量，用超纯水补足减失重量，后加入20mL甲醇，超声30min，过滤，取续滤液，即得。
(2)对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素、靛玉红、色胺酮、芦荟苦素和β-谷甾醇5mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，分别制得标准品储备溶液，4℃保存。
(3)指纹图谱的建立：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，过0.45μm 微孔滤膜，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
高效液相色谱分离条件为：
色谱柱：Hypersil ODS(C18)
柱温：30℃
测定波长：300nm
流速：0.8mL/min
进样量：20μL
流动相：乙腈(A相)、0.08％磷酸水溶液(B相)
洗脱程序：按照洗脱程序A。
最终获得色谱图见图4，由色谱图可以看出，本实施例中洗脱程序A，虽然在32-55min之间有出峰情况，但整体出峰数量较少，存在分离度不佳的情况，且在0-30min存在没有出峰的情况。
实施例5
(1)供试品溶液的制备：按照提取方法D行制备，即精密称定12批的新复方芦荟胶囊粉末1.0g置于具塞锥形瓶，加入30mL超纯水溶解，称定重量， 115℃回流提取30min后放冷至室温，再称定重量，用超纯水补足减失重量，后加入20mL甲醇，超声30min，过滤，取续滤液，即得。
(2)对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素、靛玉红、色胺酮、芦荟苦素和β-谷甾醇5mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，分别制得标准品储备溶液，4℃保存。
(3)指纹图谱的建立：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，过0.45μm 微孔滤膜，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
高效液相色谱分离条件为：
色谱柱：Hypersil ODS(C18)
柱温：30℃
测定波长：300nm
流速：0.8mL/min
进样量：20μL
流动相：乙腈(A相)、0.08％磷酸水溶液(B相)
洗脱程序：按照洗脱程序B进行。
最终获得色谱图见图5，由色谱图可以看出，本实施例中洗脱程序B在减少有机相后，相对于实施例4中的色谱图，在20-40min之间峰间距稍有改善，但出峰数量仍然较少，且仍有一定程度的分离不佳。
实施例6
(1)供试品溶液的制备：按照提取方法D行制备，即精密称定12批的新复方芦荟胶囊粉末1.0g置于具塞锥形瓶，加入30mL超纯水溶解，称定重量， 115℃回流提取30min后放冷至室温，再称定重量，用超纯水补足减失重量，后加入20mL甲醇，超声30min，过滤，取续滤液，即得。
(2)对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的芦荟苷、芦荟大黄素、靛玉红、色胺酮、芦荟苦素和β-谷甾醇5mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，分别制得标准品储备溶液，4℃保存。
(3)指纹图谱的建立：分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，过0.45μm 微孔滤膜，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
高效液相色谱分离条件为：
色谱柱：Hypersil ODS(C18)
柱温：30℃
测定波长：300nm
流速：0.8mL/min
进样量：20μL
流动相：乙腈(A相)、0.08％磷酸水溶液(B相)
洗脱程序按照洗脱程序C进行。
最终获得色谱图见图6，该实施例中的提取方法D和洗脱程序C所获得的色谱图出峰情况较佳，且分离度良好，符合建立指纹图谱的要求，且提取方法 D较提取方法C更为简单且成本低廉。故最终选用该方法作为新复方芦荟胶囊建立指纹图谱的方法，并进行后续的峰的指认、相似度分析和方法学考察。
(4)将步骤(3)中获得的12批新复方芦荟胶囊供试品溶液的色谱谱(图 13)导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版本)，选择色谱谱中均存在的色谱峰作为共有峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，生成对照指纹图谱，根据步骤(2)中获得的单一对照品的色谱图(图7～图9) 的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。为确定及补充指纹图谱中更多的化学成分，将上述供试品溶液进行质谱分析，利用DIONEX UltiMate 3000超高效液相色谱-Orbitrap质谱仪，测试条件为电喷雾电离(Electrospray Ionization, ESI)，喷雾电压3500V，鞘气流速40arb，辅助气流速10arb，辅助气温度300℃，毛细管温度300℃，扫描模式为全扫描模式，质荷比扫描范围m/z为100-1300。得到总离子流图以及6个化学成分的质谱结果图(如图10-12)，将检测数据导入Xcalibur软件，进入Qual Browser界面，根据化学成分出峰情况进行数据分析。经比对，共指认主要成分6个，为4号峰、5号峰、6号峰、8号峰、14 号峰、15号峰，分别为：色胺酮、芦荟苦素、芦荟苷、β-谷甾醇、芦荟大黄素、靛玉红，得到新复方芦荟胶囊指纹图谱。
(5)相似度分析：
取12批新复方芦荟胶囊，制备供试品溶液，按上述建立的指纹图谱测定方法进行检测，并将所得指纹图谱和新复方芦荟胶囊对照指纹图谱进行全图谱匹配，3点校正，计算各批号样品指纹图谱与对照图谱的相似度。12批新复方芦荟胶囊相似度均大于等于0.85(表6)，结果表明不同批次的新复方芦荟胶囊相似度较高，说明该方法稳定、可靠、适应性强，能够很好的检测和评价新复方芦荟胶囊的质量。
表6：相似度分析结果
Figure BDA0003898638070000161
(6)方法学考察
①精密度研究
按步骤(1)制备供试品溶液，取同一供试品溶液，连续进样6次，按步骤 (3)中的色谱条件进行测定，选择第1个共有峰芦荟苷为标准峰(S)分别进行保留时间和相对峰面积比较，结果(见表7，8)表明各共有峰相对保留时间 RSD≤0.20％，各共有峰相对峰面积RSD≤0.50％，表明在该色谱条件下所出的图谱精密度良好。
表7精密度实验结果(保留时间)
Figure BDA0003898638070000171
表8精密度实验结果(峰面积A)
Figure BDA0003898638070000172
②重复性实验
取同一批新复方芦荟胶囊，按步骤(1)制备6份供试品溶液，按步骤(3) 中的色谱条件进行测定，并依次进行保留时间和相对峰面积比较，结果(见表 9，10)表明各共有峰相对保留时间RSD≤0.10％，各共有峰相对峰面积 RSD≤1.00％。表明该色谱条件重复性较好。
表9重复性实验结果(保留时间)
Figure BDA0003898638070000173
Figure BDA0003898638070000181
表10重复性实验结果(峰面积A)
Figure BDA0003898638070000182
③稳定性实验
按步骤(1)制备供试品溶液，取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8， 16，24h按所定标准色谱条件进样分析，分别进行保留时间和相对峰面积比较，结果(见表11，12)表明各共有峰相对保留时间RSD≤0.16％，各共有峰相对峰面积RSD≤0.85％。表明供试品溶液在24h内体系稳定性良好。
表11稳定性实验结果(保留时间)
Figure BDA0003898638070000183
表12稳定性实验结果(峰面积A)
Figure BDA0003898638070000184
Figure BDA0003898638070000191
以上实验结果表明，本发明提供的新复方芦荟胶囊的指纹图谱检测方法，均具有稳定性好，精密度高，重复性好的特点，能全面客观评价新复方芦荟胶囊的质量，为临床疗效提供质量保证。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，本发明的保护范围由权利要求书限定。对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法，其特征在于，包括：
(1)取新复方芦荟胶囊粉末回流提取，然后加入甲醇超声，过滤，取续滤液，得供试品溶液；取芦荟苷、芦荟大黄素、靛玉红、色胺酮、芦荟苦素和β-谷甾醇，分别溶于甲醇，得到各对照品溶液；
(2)取供试品溶液和各对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，梯度洗脱，得到新复方芦荟胶囊的色谱图和各对照品溶液的色谱图；
(3)根据新复方芦荟胶囊的色谱图、各对照品溶液的色谱图，标注新复方芦荟胶囊的色谱图上各峰的化学成分，得到新复方芦荟胶囊的指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法，其特征在于，步骤(2)中，梯度洗脱采用的流动相：乙腈-0.08％磷酸水溶液。
3.根据权利要求2所述的新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法，其特征在于，步骤(2)中，洗脱程序如下表：
Figure FDA0003898638060000011
4.根据权利要求1所述的新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法，其特征在于，步骤(2)中，采用300nm波长测得色谱图。
5.根据权利要求1所述的新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法，其特征在于，步骤(2)中，高效液相色谱仪采用的色谱柱为Hypersil ODS(C18)。
6.根据权利要求1所述的新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法，其特征在于，还包括：将供试品溶液进行质谱分析，得到质谱结果图；
步骤(3)中，根据新复方芦荟胶囊的色谱图、各对照品溶液的色谱图及质谱结果图，标注新复方芦荟胶囊的色谱图上各峰的化学成分，得到新复方芦荟胶囊的指纹图谱。
7.根据权利要求1所述的新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法，其特征在于，还包括：获取不同批次的新复方芦荟胶囊的色谱图并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，选择不同批次的新复方芦荟胶囊的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，生成对照指纹图谱，并根据各对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中共有峰的化学成分；将新复方芦荟胶囊的指纹图谱与对照指纹图谱进行相似度比较，确认指纹图谱的可靠性。
8.根据权利要求1所述的新复方芦荟胶囊的指纹图谱构建方法，其特征在于，新复方芦荟胶囊的指纹图谱有6个特征峰，包括4号峰、5号峰、6号峰、8号峰、14号峰、15号峰，分别为：色胺酮、芦荟苦素、芦荟苷、β-谷甾醇、芦荟大黄素、靛玉红。
9.采用权利要求1-8任一项所述的构建方法得到的新复方芦荟胶囊的指纹图谱。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108535372A (zh) * 2018-03-21 2018-09-14 江西国药有限责任公司 发酵虫草菌粉及制剂甾醇类hplc指纹图谱的构建方法及其指纹图谱
CN111905107A (zh) * 2020-08-19 2020-11-10 福建医科大学 一种能保护芦荟活性成分且可作为药物载体的芦荟外泌体样囊泡
CN113759035A (zh) * 2021-07-22 2021-12-07 广东一方制药有限公司 小承气汤指纹图谱的构建方法
CN114965748A (zh) * 2022-04-28 2022-08-30 陕西科技大学 一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108535372A (zh) * 2018-03-21 2018-09-14 江西国药有限责任公司 发酵虫草菌粉及制剂甾醇类hplc指纹图谱的构建方法及其指纹图谱
CN111905107A (zh) * 2020-08-19 2020-11-10 福建医科大学 一种能保护芦荟活性成分且可作为药物载体的芦荟外泌体样囊泡
CN113759035A (zh) * 2021-07-22 2021-12-07 广东一方制药有限公司 小承气汤指纹图谱的构建方法
CN114965748A (zh) * 2022-04-28 2022-08-30 陕西科技大学 一种同时检测新复方芦荟胶囊中芦荟苷、芦荟大黄素以及靛玉红的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
聂姗姗: "青黛药材评价抽验质量分析", 《药事管理》, vol. 16, no. 104, pages 278 - 279 *

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