CN115505641A - 生物标志物在制备胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估的试剂盒中的应用 - Google Patents

生物标志物在制备胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估的试剂盒中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了生物标志物在制备胰腺癌癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估的试剂盒中的应用，属于生物技术领域。所述生物标志物包括Sorcin和Serpin E1中的至少一种。本发明联合生物标志物Sorcin和Serpin E1，基于伴新发糖尿病及不伴新发糖尿病的胰腺癌患者样本，利用免疫酶联吸附法检测外周血中Serpin E1的定量表达水平，并利用免疫组化检测术中切除的组织中Sorcin的半定量表达水平，发现Serpin E1表达超过80nIU/ml，并且组织中Sorcin表达中阳性及以上(++/+++)，提示其可能为癌源性新发糖尿病。

Description

生物标志物在制备胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评 估的试剂盒中的应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及生物标志物在制备胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估的试剂盒中的应用。
背景技术
胰腺导管腺癌(PDAC)是世界上第四大癌症死亡原因，5年生存率低于10％。根据统计数据显示，相较于肺癌和肠癌等常见肿瘤在早筛和化疗领域取得的显著进展和治疗成果，胰腺癌早筛和化疗几乎没有任何重大突破，其死亡率在过去的几十年里并没有降低。造成这种高死亡率的因素包括：起病隐匿，症状不明确，缺乏足够敏感和特异的诊断测试生物标志物。这意味着，当患者确诊为胰腺癌时已有80％的肿瘤已处于局部晚期或转移阶段，这类患者的手术机会较少，即使可行根治性切除，其中80％的患者在手术后会出现局部或远程复发。因此，为了改善预后，有必要在早期诊断、治疗选择、疾病监测、治疗反应评估和预后评估等方面开发更有效的工具。
CT作为目前胰腺癌最重要的诊断手段，总体敏感度达74％，然而对小于1cm的早期胰腺癌敏感度降至33％，相比影像学检查，液体活检以其低成本、无创、可重复的优势，发展势头迅猛。液体活检是一种通过采集并分析非固体生物组织来诊断癌症的新方法，这些非固体生物组织主要来自血液，但也来部分自其他体液，如尿液、唾液和脑嵴液等。液体活检在肿瘤的早期诊断，治疗选择，疾病监测，预后评估等多方面有重要的辅助作用，这是一种微创、无风险的操纵。在肿瘤领域应用液体活检检测的肿瘤生物标志物主要是能远距离反应疾病情况的肿瘤特异性分泌蛋白、外泌体、游离核酸(cfDNA和cfRNAs)等。目前，在临床上应用于胰腺癌诊断的液体活检指标主要是CA-199，但是其用于筛选小于1cm的早期胰腺癌时预测值仅为0.9％，所以在胰腺癌的早期诊断上的意义不大。
虽然新近发表在Nature、Gut等权威杂志的系列标志物(GPC1、5hmC、FGA等)诊断胰腺癌的准确度达到95％以上。但这些靶标的研究都是基于进展期胰腺癌患者与健康人血液标本作为参照来进行的差异分析结果，并非能反映早期胰腺癌的生物学特征。在普通人群中筛查10万分之8的胰腺癌，即使是99％特异性的标志物也可能产生1000个假阳性结果，因而对普通人群筛查会导致潜在医疗成本超过可能的获益，2019年JAMA 在总结16年胰腺早癌筛查获益研究中指出：只有在胰腺癌高危人群进行早筛才有较高的科学、社会及经济前景。2020年Lancet子刊在总结全球胰腺癌早筛进展时进一步明确：仅10％的胰腺癌为家族遗传性，而在90％的非遗传性胰腺癌中，伴3年内新发糖尿病，也叫做胰腺癌相关新发糖尿病(Pancreatic cancer associated new-onset diabetes，PCAND)是最常见的高危人群(约占80％)，应作为筛查早期无症状胰腺癌的第一重要人群，研究PCAND极有可能是提升胰腺癌早筛效率的关键突破点。
综上所述，现阶段的研究认为新发型糖尿病可能是胰腺癌的早期表现，但是根据2021年国际糖尿病联合会(IDF)的数据，2021年全球20-79 岁人群糖尿病患病率估计为10.5％(5.366亿人)，2045年将上升至12.2％ (7.832亿人)。对基数如此庞大的糖尿病人群进行胰腺癌筛查，从医疗和经济负担层面都难以开展。如果能区分癌源性新发糖尿病和其他类型的糖尿病，将有助于从基数庞大的糖尿病人群中筛选出有胰腺癌风险的人群。所以探究癌源性糖尿病发生的机制及其过程中可以辅助早期筛查的生物标志物，是当前胰腺癌研究的热点之一。目前已有部分研究基于胰腺癌源性的新发糖尿病，通过临床统计及生信分析等方法筛选出一些的有胰腺癌早筛潜能的生物标志物，包括胰腺癌细胞来源的肾上腺髓质素(AM)、血管非炎性蛋白1(VNN1)和基质金属蛋白酶9(MMP9)、编码缝隙连接蛋白connexin26、分泌蛋白Galectin-3和S100A9、骨保护素OPG、 S-100A8的N端肽段、脂肪酸结合蛋白FABP-1等，但遗憾的是这些研究一部分缺乏系统的实验研究验证其在胰腺癌源性新发糖尿病的发生机制中的作用，一部分缺乏临床研究验证其在早期筛选胰腺癌源性新发糖尿病的能力。所以，目前尚无有效的基于筛选胰腺癌源性新发糖尿病的生物标志物可以进行胰腺癌的早期诊断。
发明内容
鉴于上述，本发明目的是提供生物标志物在制备胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估的试剂盒中的应用，提供了一系列可以筛选胰腺癌源性新发糖尿病并进行胰腺癌早期诊断及胰腺癌预后评估的生物标志物，以解决胰腺癌早期诊断困难、从基数庞大的糖尿病人群中筛选胰腺癌源性新发糖尿病困难的问题，最终期望实现改善胰腺癌的预后。
为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了生物标志物在制备胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估的试剂盒中的应用，所述生物标志物包括可溶性耐药相关钙结合蛋白(Sorcin)和纤溶酶原激活物抑制因子-1(Serpin E1)中的至少一种。
本发明提供了检测生物标志物的试剂在制备胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估的试剂盒中的应用，所述生物标志物包括可溶性耐药相关钙结合蛋白和纤溶酶原激活物抑制因子-1中的至少一种。
所述试剂包括通过实时荧光定量PCR、荧光染料法、酶联免疫吸附法、共振光散射法、测序、检测芯片、生物质谱法或蛋白质印迹法检测样本中生物标志物表达水平的试剂。
所述样本包括组织样本、石蜡包埋样本、腹水及灌洗液样本、尿液样本、血液样本、细胞涂片样本、组织或细胞活检样本。
检测样本中可溶性耐药相关钙结合蛋白表达水平时，使用的样本为组织活检样本；检测样本中纤溶酶原激活物抑制因子-1蛋白表达水平时，使用的样本为血液样本。
所述检测样本中生物标志物表达水平包括检测样本中生物标志物的蛋白表达量和/或mRNA表达量。
纤溶酶原激活物抑制因子-1的表达水平高于80nIU/ml为高表达，可溶性耐药相关钙结合蛋白表达中阳性及以上(++/+++)为高表达；纤溶酶原激活物抑制因子-1高表达和/或可溶性耐药相关钙结合蛋白高表达的，具有高胰腺癌源性新发糖尿病概率，其中，中阳性及以上为评分高于4分，评分标准如下：
阳性着色强度评分：
(1)细胞不着色记为0分，(2)浅黄色记为1分，(3)细胞中黄色/ 棕色且背景不着色，或细胞深棕色且背景浅棕色记为2分，(4)细胞棕色 /深棕色且背景不着色记为3分；
阳性细胞百分比评分：
(1)阳性细胞＝0％记为0分，(2)0％＜阳性细胞≤25％记为1分，(3) 25％＜阳性细胞≤50％记为2分，(3)50％＜阳性细胞≤75％记为3分，(4) 阳性细胞＞75％记为4分；
将阳性着色强度评分和阳性细胞百分比评分相加，0分为阴性、1-3 分为弱阳性、4-6分为中阳性和6-8分为强阳性。
本发明还提供了一种用于胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估的试剂盒，所述试剂盒包括检测生物标志物的试剂，所述生物标志物包括可溶性耐药相关钙结合蛋白和纤溶酶原激活物抑制因子-1中的至少一种。
优选的，所述试剂包括与所述生物分子标志物基因特异性结合的引物或探针；与所述生物分子标志物蛋白特异性结合的抗体、肽、适配体或化合物。
本发明还提供了所述的试剂盒在胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估中的应用。
本发明提出了一系列可以从多层面检测，从而筛选胰腺并进行胰腺癌早期诊断及胰腺癌预后评估的生物标志物，以解决胰腺癌早期诊断困难、从基数庞大的糖尿病人群中筛选胰腺癌源性新发糖尿病困难的问题，最终期望实现改善胰腺癌的预后。
本发明的有益效果：
本发明采用免疫组化、蛋白质印记法、实时定量PCR、临床数据库统计分析等技术分析了生物标志物Sorcin在伴/不伴新发糖尿病的胰腺癌患者组织中的特异性表达模式，并对患者的生存数据进行统计，发现胰腺癌中的生物标志物Sorcin无论在mRNA还是蛋白层面，其表达水平都是显著高于正常的胰腺导管细胞/正常的癌旁组织的，并且其高表达水平提示了不良的预后及不佳的生存率，说明Soricn具有胰腺癌预后预测的能力。
本发明采用免疫酶联吸附法、胰腺癌患者液体活检、临床数据库统计分析等技术分析了生物标志物Serpin E1在伴有新发糖尿病的胰腺癌患者及单纯2型糖尿病患者外周血中的表达情况，发现来自伴有新发糖尿病的胰腺癌患者外周血中的Serpin E1的表达水平显著高于单纯的2型糖尿病患者，说明Serpin E1具有胰腺癌早期诊断的能力。
同时本发明联合生物标志物Sorcin和Serpin E1，基于伴新发糖尿病及不伴新发糖尿病的胰腺癌患者样本，利用免疫酶联吸附法检测外周血中 Serpin E1的定量表达水平，并利用免疫组化检测术中切除的组织中Sorcin 的半定量表达水平，发现Serpin E1表达超过80nIU/ml，并且组织中Sorcin 表达中阳性及以上(++/+++)，提示其可能为癌源性新发糖尿病。
附图说明
图1是基于生物标志物Sorcin及Serpin E1进行胰腺癌早期诊断方案的流程图。
图2是基于胰腺癌术中切除组织的Sorcin表达水平，及患者外周血中 Serpin E1表达水平进行预后预测的模式示意图。
图3是实施例提供的生物标志物Sorcin在胰腺癌中表达情况图；其中， A表示胰腺癌细胞Sri mRNA水平检测图；B表示胰腺癌细胞Sorcin蛋白水平检测图；C表示胰腺癌患者肿瘤细胞Sorcin免疫组化图；***p＜0.001， ****p＜0.0001。
图4是实施例提供的生物标志物Sorcin的转录组Sri mRNA在胰腺癌中表达水平比较图；*p＜0.05。
图5是实施例提供的生物标志物Serpin E1在伴有新发糖尿病的胰腺癌患者外周血中的表达情况图；*p＜0.05。
图6是实施例提供的生物标志物Sorcin和Serpin E1具有预后预测能力的结果图；A表示Sorcin表达水平与胰腺癌预后的相关性图；B为Serpin E1表达水平与胰腺癌预后的相关性图。
图7是实施例提供的Sorcin及下游的Serpin E1导致胰岛β细胞功能损伤的结果图；A表示胰腺癌中Sorcin的沉默可部分恢复胰岛素分泌功能； B为胰腺癌中沉默了Sorcin之后的上清液的抗体芯片结果；C表示不同浓度的Serpin E1重组蛋白对胰岛素分泌功能的损伤结果；*p＜0.05，** p＜0.01。
图8是实施例提供的生物标志物Serpin E1及Sorcin具有联合预测癌源性糖尿病能力的结果图；图A是伴/不伴新发糖尿病的胰腺癌患者外周血中Serpin E1表达水平检测；图B是相应的免疫组化结果的半定量标准； *p＜0.05。
具体实施方式
基于生物标志物Sorcin及Serpin E1进行胰腺癌早期诊断方案的流程图如图1所示，包括以下步骤：
基于研究基础期望提出创新的胰腺癌早筛模式：
1)在普通人群中筛选新发糖尿病群体；
2)在新发糖尿病人群中进行外周血中的Serpin E1水平检测，限定潜在的胰腺癌源性的新发糖尿病患者；
3)对于有胰腺影像学异常的患者，必要时进行组织活检，检测胰腺组织中Sorcin的表达水平；
4)结合患者信息制定个性化的高精度薄层CT的扫描计划，提高胰腺微小癌的检出率。
在实施例中，将三年内发生的糖尿病或糖耐量异常定义为新发糖尿病，对于因新发糖尿病就诊的患者，建议其进行外周血的胰腺癌源性新发糖尿病的生物标志物SerpinE1水平检测，在本实施例中外周血的Serpin E1水平检测采用的是酶联免疫吸附法，异常的检测水平见图5。对于液体活检显示外周血中Serpin E1表达高于80nIU/ml的患者，建议其进行影像筛查。若影像显示异常，在必要情况下建议其进行穿刺组织活检，对于病理为暂未显示癌变的患者，检测其胰腺组织中的Sorcin表达情况以评估其为极早期胰腺癌的可能性，在实施例中组织的Sorcin表达水平检测采用的是Sorcin抗体的免疫组化。免疫组化结果通过在光学显微镜下对组织切片分别按阳性着色强度和阳性细胞百分比进行综合评估，评估方法如下： 10×20倍显微镜下随机选择5个不同视野，(1)细胞不着色记为0分，(2) 浅黄色记为1分，(3)细胞中黄色/棕色且背景不着色，或细胞深棕色且背景浅棕色记为2分，(4)细胞棕色/深棕色且背景不着色记为3分，取5 个视野的积分算数平均值作为阳性着色强度的最终积分；10×4倍显微镜下随机选择5个不同视野，(1)阳性细胞＝0％记为0分，(2)0％＜阳性细胞≤25％记为1分，(3)25％＜阳性细胞≤50％记为2分，(3)50％＜阳性细胞≤75％记为3分，(4)阳性细胞＞75％记为4分，取5个视野的积分算数平均值作为阳性细胞百分比的最终积分。将阳性着色强度和阳性细胞百分比的积分相加，半定量为：0分阴性(-)、1-3分弱阳性(+)、4-6分中阳性(++)和6-8分强阳性(+++)，比较两组患者免疫组化，结果如图8B 所示，提示免疫组化中Soricn表达中阳性以上(++/+++)具有区分伴/不伴新发糖尿病的胰腺癌的能力。并且将Soricn表达低于中阳性(-/+)定义为低表达，中阳性以上(++/+++)定义为高表达。通过检测患者外周血中的Serpin E1表达水平或/及活检组织中的Sorcin表达水平，评估该患者存在极早期胰腺癌风险性及其后期有胰腺癌变的可能性，对这类患者设计个性化的影像检查方案及随访频次。
如图2所示，基于胰腺癌术中切除组织的Sorcin表达水平，及患者外周血中SerpinE1表达水平进行预后预测的模式示意图，包括以下步骤：
基于发现的生物标志物Sorcin及Serpin E1与胰腺癌患者生存率的相关性提出以下的预后评估模式：
1)对行胰腺肿瘤切除术的患者，在术前及术后抽取外周血，检测其外周血中的Serpin E1表达水平，监测其变化；
2)收集胰腺肿瘤切除术中多余的肿瘤组织，检测其组织中的Sorcin 表达水平；
3)筛选外周血Serpin E1表达水平高于80nIU/ml或/及组织中Sorcin 高表达的患者作为复发高风险群体；
4)对复发高风险群体设计个性化的随访频次及检查。
在实施例中，可以发现胰腺癌中的Sorcin及Serpin E1的表达水平与胰腺癌的分期及预后存在较为显著的相关性。高Sorcin表达水平的胰腺癌患者，其总生存率和无病生存率都要显著低于低Soricn表达水平的胰腺癌患者。同样，高Serpin E1表达水平的胰腺癌患者，其总生存率和无病生存率都要显著低于低Serpin E1表达水平的胰腺癌患者，具体结果见图6。所以利用胰腺癌患者的术中切除组织中的Sorcin水平，术前/术后的外周血中Serpin E1水平进行预后预测，并在术后随访时进行外周血的Serpin E1水平检测，动态评估胰腺癌患者术后复发的可能性。
实施例1
基于MSigDB数据库的基因集，从中检索并发现了213个与胰岛素分泌相关的基因。然后在基于癌症基因组图谱数据库(TCGA)的基因表达谱交互分析(GEPIA)网站上匹配这213个基因的表达模式和预后表现。最终在线检索工具仅识别出一个基因Sri(编码的蛋白为Sorcin)，其即是胰岛素分泌相关的基因，又在胰腺癌组织中表达显著升高，并且与胰腺癌病理TNM分期呈正相关，其高表达也与不良预后相关。
从多层面证明胰腺癌中存在Sorcin的高表达，包括以下步骤：
在实施例中，培养了多株胰腺癌细胞系(PANC-1、CFPAC-1、BxPC-3、 Mia Paca-2、AsPC-1)及正常的胰腺导管细胞系HPDE6，通过提取细胞的 mRNA及蛋白质，分别检测其中Sri mRNA及Sorcin蛋白质的表达情况。结果如图3A和3B所示，结果显示无论mRNA还是蛋白层面，胰腺癌细胞中的Sorcin表达水平都是显著高于正常的胰腺导管细胞HPDE6，尤其是PANC-1、AsPC-1和CFPAC-1。根据ATCC(美国典型菌株保藏中心) 网站中的信息，这些显著高表达Sorcin细胞均来自转移性胰头癌。然后随机选取胰腺导管腺癌患者在胰腺肿瘤切除手术中多余的肿瘤组织进行免疫组化，评估了Sorcin的表达量，结果如图3C所示，在胰腺癌组织中的 Sorcin显示强阳性，明显高于癌旁正常的胰腺组织。综合这些实验证据， Sorcin在胰腺癌中确实存在异常的高表达，并且与胰腺癌的分期、预后都存在一定的相关性。除此之外，收集TCGA数据库中胰腺癌肿瘤及GTEx 数据库中正常胰腺组织的转录组数据，比较SrimRNA的水平，结果如图 4所示，Sri mRNA在胰腺癌中的水平显著高于正常胰腺组织。
通过体外功能学实验探明Sorcin在胰腺癌诱导胰岛损伤中的作用。在 3株显著高表达Sorcin的胰腺癌细胞系中(ASPC1，CFPAC-1和PANC-1) 使用siRNA敲减Sorcin的表达量。收集敲减Sorcin后的胰腺癌细胞上清作为条件培养基处理胰岛β细胞MIN6后，结果如图7A所示，MIN6细胞由葡萄糖刺激产生的胰岛素分泌量上调，说明其胰岛素分泌功能部分恢复。
由于Sorcin并非分泌蛋白，将其作为生物标志物，使用组织活检或术中切除的肿瘤组织，探究其下游调控的分泌因子，找到既能诱导胰腺癌源性糖尿病发生，又能起到生物标志物作用的关键因子。收集Sorcin敲减及正常水平的胰腺癌细胞PANC-1的细胞上清进行蛋白组抗体芯片分析，结果如图7B所示，上清中一个炎性因子Serpin E1在Sorcin敲减之后显著下降，后续利用RT-PCR检测证实了Serpin E1的mRNA水平在Sorcin敲减之后会被下降。
上述证实了胰腺癌中Serpin E1是受Sorcin正向调控的炎性因子，后续探究Serpin E1是否能直接介导胰岛β细胞的功能损伤。利用Serpin E1 的重组蛋白(北京义翘神州科技股份有限公司，Cat：10296-H08H)，以0、 25、50、100ng/μL的浓度梯度加入到MIN6细胞的培养基中，结果如图 7C所示，在受Serpin E1作用下的MIN6细胞的由葡萄糖刺激产生的胰岛素分泌量显著下降，证实了Serpin E1能直接诱导胰岛β细胞的损伤。
实施例2
生物标志物Serpin E1伴有新发糖尿病的胰腺癌患者外周血中的表达情况，包括以下步骤：
在实施例中，收集来自伴有新发糖尿病的胰腺癌患者及单纯的2型糖尿病患者的外周血，加入抗凝剂后3000rpm离心10分钟，收集上层清液为血浆，分装后放置于-80℃冰箱中保存，避免反复冻融。复融后检测血浆中的Serpin E1的表达水平。本实施例中采用的方法是Serpin E1特异性的酶联免疫吸附法。结果如图5所示，来自伴有新发糖尿病的胰腺癌患者血浆中的Serpin E1的表达水平显著高于单纯的2型糖尿病患者。实施例中的结果明显提示外周血中的Serpin E1具有胰腺癌源性新发糖尿病早期筛选的潜力。
实施例3
生物标志物Sorcin和Serpin E1分别具有预后预测能力的结果，包括以下步骤：
收集TCGA数据库中胰腺癌患者的转录组测序数据，以患者的Sorcin (基因Sri)转录组水平的均值为划分线，定义为低Sri组和高Sri组，结合患者的生存数据进行统计，结果显示，高Sri组表达水平的胰腺癌患者，其总生存率和无病生存率都要显著低于低Sri组表达水平的胰腺癌患者。同样，用相同的方法将数据库中的胰腺癌患者划分为高Serpin E1组和低 Serpin E1组，结果如图6A和6B所示，高Serpin E1表达水平的胰腺癌患者的总生存率和无病生存率都要显著低于低Serpin E1表达水平的胰腺癌患者。上述实施例的结果从转录组层面提示生物标志物Sorcin及Serpin E1 的表达水平具有胰腺癌预后预测的能力。
实施例4
生物标志物Sorcin和Serpin E1具有联合筛选癌源性糖尿病能力的结果，包括以下步骤：
在实施例中，考虑到单纯的2型糖尿病患者中无法取到胰腺组织，于是将不伴糖尿病的胰腺癌患者作为对照，收集来自伴有新发糖尿病的胰腺癌患者及不伴糖尿病的胰腺癌患者术前的外周血及术中收集的胰腺癌组织。外周血处理方式如实施例2中所述，结果如图8A所示，来自伴有新发糖尿病的胰腺癌患者血浆中的Serpin E1的表达水平显著高于不伴有糖尿病的胰腺癌患者，综合实施例2中的结果，将划分线定为80nIU/ml。将术中收集的胰腺癌组织进行蜡块包埋，对其进行抗Sorcin的免疫组化，通过在光学显微镜下对组织切片分别按阳性着色强度和阳性细胞百分比进行综合评估，评估方法如下：10×20倍显微镜下随机选择5个不同视野， (1)细胞不着色记为0分，(2)浅黄色记为1分，(3)细胞中黄色/棕色且背景不着色，或细胞深棕色且背景浅棕色记为2分，(4)细胞棕色/深棕色且背景不着色记为3分，取5个视野的积分算数平均值作为阳性着色强度的最终积分；10×4倍显微镜下随机选择5个不同视野，(1)阳性细胞＝0％记为0分，(2)0％＜阳性细胞≤25％记为1分，(3)25％＜阳性细胞≤50％记为2分，(3)50％＜阳性细胞≤75％记为3分，(4)阳性细胞＞75％记为4分，取5个视野的积分算数平均值作为阳性细胞百分比的最终积分。将阳性着色强度和阳性细胞百分比的积分相加，半定量为：0分阴性(-)、1-3 分弱阳性(+)、4-6分中阳性(++)和6-8分强阳性(+++)，比较两组患者免疫组化，结果如图8B所示，提示免疫组化中Soricn表达中阳性以上 (++/+++)具有区分伴/不伴新发糖尿病的胰腺癌的能力。结合临床实际，对于因新发糖尿病就诊的患者，先通过液体活检进行外周血Serpin E1表达水平的检测，若表达水平高于80nIU/ml，在临床评估可行的前提下可考虑进行组织活检，若其组织的Soricn表达中阳性以上(++/+++)，则提示该患者极有可能是癌源性糖尿病，处于胰腺癌的极早期阶段。实施例中的结果提示外周血中的Serpin E1联合组织活检的Sorcin具有胰腺癌源性新发糖尿病早期筛选的潜力。

Claims (10)

1.生物标志物在制备胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估的试剂盒中的应用，所述生物标志物包括可溶性耐药相关钙结合蛋白和纤溶酶原激活物抑制因子-1中的至少一种。
2.检测生物标志物的试剂在制备胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估的试剂盒中的应用，所述生物标志物包括可溶性耐药相关钙结合蛋白和纤溶酶原激活物抑制因子-1中的至少一种。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂为通过实时荧光定量PCR、荧光染料法、酶联免疫吸附法、共振光散射法、测序、检测芯片、生物质谱法或蛋白质印迹法检测样本中生物标志物表达水平的试剂。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述样本为组织样本、石蜡包埋样本、腹水及灌洗液样本、尿液样本、血液样本、细胞涂片样本、组织或细胞活检样本。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，检测样本中可溶性耐药相关钙结合蛋白表达水平时，使用的样本为组织活检样本；检测样本中纤溶酶原激活物抑制因子-1蛋白表达水平时，使用的样本为血液样本。
6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，检测样本中生物标志物表达水平为检测样本中生物标志物的蛋白表达量和/或mRNA表达量。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，纤溶酶原激活物抑制因子-1的表达水平高于80nIU/ml为高表达，可溶性耐药相关钙结合蛋白表达中阳性及以上为高表达；纤溶酶原激活物抑制因子-1高表达和/或可溶性耐药相关钙结合蛋白高表达的，具有高胰腺癌源性新发糖尿病概率，其中，中阳性及以上为评分高于4分，评分标准如下：
阳性着色强度评分：
(1)细胞不着色记为0分，(2)浅黄色记为1分，(3)细胞中黄色/棕色且背景不着色，或细胞深棕色且背景浅棕色记为2分，(4)细胞棕色/深棕色且背景不着色记为3分；
阳性细胞百分比评分：
(1)阳性细胞＝0％记为0分，(2)0％＜阳性细胞≤25％记为1分，(3)25％＜阳性细胞≤50％记为2分，(3)50％＜阳性细胞≤75％记为3分，(4)阳性细胞＞75％记为4分；
将阳性着色强度评分和阳性细胞百分比评分相加，0分为阴性、1-3分为弱阳性、4-6分为中阳性和6-8分为强阳性。
8.一种用于胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测生物标志物的试剂，所述生物标志物包括可溶性耐药相关钙结合蛋白和纤溶酶原激活物抑制因子-1中的至少一种。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括与所述生物分子标志物基因特异性结合的引物或探针；与所述生物分子标志物蛋白特异性结合的抗体、肽、适配体或化合物。
10.如权利要求8或9所述的试剂盒在胰腺癌源性新发糖尿病预测和/或预后评估中的应用。
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