CN113234830B - 用于肺癌诊断的产品及用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了用于肺癌诊断的产品及用途。本发明的产品包括检测生物标志物MMP10、POU2AF1、SELE和/或RERGL的试剂。本发明同时提供了检测生物标志物MMP10、POU2AF1、SELE和/或RERGL的试剂在肺癌诊断中的应用。

Description

用于肺癌诊断的产品及用途
技术领域
本发明涉及疾病诊断领域，更具体地，本发明涉及与用于肺癌诊断的产品及用途。
背景技术
肺癌是全球范围最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率一直处于上升趋势。尽管目前治疗手段日新月异，肺癌的发病率和死亡率在世界范围内仍高居恶性肿瘤榜首，2018年GLOBOCAN的数据显示，全球统计的新发肺癌患者约209 万例，其中死亡176万例(Bray F,Ferlay J,Soerjomataram I,et al.Global cancer statistics 2018:GLOBOCANestimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185countries[J].CA:a cancer iournal for clinicians,2018,68(6): 394-424.)，发病率和死亡率均居所有恶性肿瘤第一位。美国在2017年因肺癌死亡人数为15050人(Miller K D,GodingSauer A,Ortiz AP,et al.Cancer Statistics for Hispanics/Latinos,2018[J].CA:acancer journal for clinicians,2018,68(6): 425-45.)。中国作为发展中国家，随着工业化的进程，环境的污染和老龄化人口的剧增，已成为世界上主要的肺癌大国，肺癌负担日趋加重。2015年肺癌新发与死亡患者分别约73.3万和61.0万(Chen W,Zheng R,Baade P D,et al.Cancer statistics in China,2015[J].CA:a cancer journal for clinicians,2016,66(2): 115-32.)，居所有恶性肿瘤首位。肺癌按组织学类型可分为小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC，在肺癌中NSCLC占80％之多，是肺癌防控的重中之重。
早期肺癌因缺乏特异临床表现，难以被早期发现。约70％的NSCLC患者确诊时即为晚期，基本没有手术治疗的机会。未经治疗的转移性非小细胞肺癌患者的中位生存期只有4到5个月，一年的生存率只有10％。在所有的肺癌患者中，早期NSCLC患者可以通过手术切除获得较好的治疗效果，因此肺癌的早发现早预防早治疗，防止疾病的发展是肺癌治疗的基本原则。
随着生物信息学分析的迅速发展和下一代测序技术在整个基因组和转录本中的应用，研究与疾病发生发展相关的基因成为疾病诊断和治疗的重要手段，同时也对揭示疾病的分子机制具有重要的意义。
发明内容
为了弥补现有技术的不足，本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了用于测定样品中生物标志物的试剂在制备诊断肺癌的产品中的应用，所述生物标志物选自MMP10、POU2AF1、SELE、RERGL中的至少一个、至少两个、至少三个或至少四个。
进一步，所述产品包括检测样本中MMP10、POU2AF1、SELE和/或RERGL 水平的试剂。
进一步，所述试剂检测生物标志物表达的存在、不存在和/或量。
进一步，所述检测样品中至少一种生物标志物或其功能片段的量的步骤包含以下的一种或组合：对样品进行数字成像；将样品暴露于已知量的标记抗体，所述标记抗体对生物标志物或其功能片段的表位具有特异性；将样品暴露于一种或多种染料，所述染料对生物标志物或其功能片段具有特异性；将样品暴露于至少一种标记探针，所述标记探针与所述生物标志物或其功能片段的序列互补；将样品暴露于色谱分析法；分离出样品的总RNA；以及将所述总RNA暴露于测序分析和/或将所述样品暴露于质谱分析法。
进一步，所述样品是组织样品。
进一步，所述组织样品包含来自受试者的血浆、血清或血液抽取物、刷洗物、活组织检查物或外科手术切除的组织或液体样品。
本发明提供了一种诊断肺腺癌的产品，所述产品包括检测生物标志物的试剂，所述生物标志物选自MMP10、POU2AF1、SELE和/或RERGL。
进一步，所述产品包括制剂、核酸膜条、芯片或试剂盒。
进一步，所述试剂盒包括qPCR试剂盒、免疫印迹检测试剂盒、免疫层析检测试剂盒、流式细胞分析试剂盒、免疫组化检测试剂盒、ELISA试剂盒和电化学发光检测试剂盒。
进一步，所述试剂盒还包括评估受试者是否患有或易患肺癌的说明书。
进一步，所述产品还包括处理样品的试剂。
进一步，所述试剂选自：
识别MMP10、POU2AF1、SELE和/或RERGL的探针；或
扩增MMP10、POU2AF1、SELE和/或RERGL的引物；或
结合MMP10、POU2AF1、SELE和/或RERGL的蛋白的抗体。
本发明提供了一种诊断/预测肺癌的系统，所述系统包括：
处理器；
输入模块，用于输入生物样品中生物标志物的水平；
包含指令的计算机可读介质，所述指令在由所述处理器执行时在生物标志物的输入水平上执行算法；以及
输出模块，指示受试者是否患有肺癌或者存在患肺癌的风险。
进一步，所述生物标志物选自MMP10、POU2AF1、SELE和/或RERGL。
本发明提供了一种计算机可读存储介质，其上存储有计算机程序，所述计算机程序被处理器执行时实现前面所述的系统。
本发明提供了生物标志物在制备治疗肺癌的药物组合物中的应用，所述药物组合物包括生物标志物的促进剂和/或抑制剂，所述生物标志物选自MMP10、 POU2AF1、SELE和/或RERGL。
进一步，所述抑制剂抑制在肺癌中表达上调的生物标志物的水平；所述促进剂促进在肺癌中表达下调的生物标志物的水平。
进一步，所述抑制剂抑制MMP10或POU2AF1的表达水平。
进一步，所述促进剂促进SELE或RERGL的表达水平。
根据本申请，MMP10在NCBI数据库中的参考编号为4319；POU2AF1在 NCBI数据库中的参考编号为5450；SELE在NCBI数据库中的参考编号为6401； RERGL在NCBI数据库中的参考编号为79785。在本发明中，生物标志物包括基因及其编码的蛋白及其同源物，突变，和同等型。该术语涵盖全长，未加工的生物标志物，以及源自细胞中加工的任何形式的生物标志物。该术语涵盖生物标志物的天然发生变体(例如剪接变体或等位变体)。
附图说明
图1显示MMP10基因mRNA差异表达图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图2显示POU2AF1基因mRNA差异表达图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图3显示SELE基因mRNA差异表达图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图4显示RERGL基因mRNA差异表达图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图5显示MMP10基因诊断肺腺癌的ROC曲线图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图6显示POU2AF1基因诊断肺腺癌的ROC曲线图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图7显示SELE基因诊断肺腺癌的ROC曲线图，其中图A：TCGA；图B：GEO；
图8显示RERGL基因诊断肺腺癌的ROC曲线图，其中图A：TCGA；B：图GEO；
图9显示MMP10+POU2AF1+SELE+RERGL联合诊断肺腺癌的ROC曲线图，其中图A：TCGA；图B：GEO。
具体实施方式
本文所用的术语“样品”或“测试样品”指获自或衍生自目的个体的组合物，其包含有待例如基于物理、生物化学、化学和/或生理学特征表征和/或鉴定的细胞实体和/或其他分子实体。例如，短语“疾病样品”及其变化形式指获自的目的个体的任意样品，预期或已知其包含待表征的细胞实体和/或分子实体。样品可以获自目的个体的组织或获自该个体的外周血。例如，该样品可以获自血液和生物来源的其他流体样品及组织样品，如活检组织样品或从其衍生的组织培养物或细胞。组织样品的来源可以是实体组织，如来自新鲜、冷冻和/或保藏的器官或组织样品、活检组织或吸出物；血液或任意血液组分；体液；来自个体妊娠或发育的任何时间的细胞；或血浆。术语“样品”或“测试样品”包括在其获得后以任意方式操作过的生物样品，如通过试剂处理、稳定化、或针对某些成分(如蛋白质或多核苷酸)富集、或包埋在用于切片目的的半固体或固体基质中。为了本文的目的，组织样品的“切片”意指组织样品的单个部分或片，例如，从组织样品切割的组织或细胞的薄片。样品包括但不限于全血、血液来源的细胞、血清、血浆、淋巴液、滑膜液、细胞提取物及其组合。
本文所用的“参考样品”指用于比较目的的任意样品、标准或水平。在一个实施方案中，参考样品获自同一个体或患者的身体的健康和/或未患病的部分 (例如，组织或细胞)。在另一实施方案中，参考样品获自同一个体或患者的身体的未处理的组织和/或细胞。还在另一实施方案中，参考样品获自不是该个体或患者的个体的身体的健康和/或未患病的部分(例如，组织或细胞)。甚至在另一实施方案中，参考样品获自不是该个体或患者的个体的未处理的组织和/或细胞部分。
本文所用的术语“生物标志”指患者表型(例如病理学状态或对治疗剂的可能的反应性)的指示物，其可以在该患者的生物样品中检测到。生物标志包括但不限于DNA、RNA、蛋白质、糖类或基于糖脂的分子标志。
生物标志的“量”或“水平”可以用本领域已知和本文中公开的任何方法测定，包括检测或定量核酸的方法；检测或定量蛋白或肽的方法。
“生物标志的量或水平的变化”是与该生物标志的参考/比较量相比。在某些实施方案中，作为参考或比较量的值的函数，该改变大于约10％、或大于约 30％、或大于约50％、或大于约100％、或大于约300％。例如，参考或比较量可以是治疗之前生物标志的量，更具体而言，可以是基线的量。
“提高的表达”或“提高的水平”是指，相对于对照或参考水平，或相对于预先确定的阈值或截止值，或相对于患者和/或个体的群体的中位数，患者中mRNA或蛋白质的表达增加。
本文所用的术语“比较”或“相比”指将来自个体或患者的样品中生物标志的水平与本描述中其他地方指定的生物标志的参考水平相比较。应理解，本文所用的比较通常指相应参数或值的比较，例如，将绝对量与绝对参考量相比较，而将浓度与参考浓度相比较，或将从样品中的生物标志获得的强度信号与从参考样品获得的相同类型的强度信号相比较。该比较可以手动进行或计算机辅助进行。因此，该比较可以通过计算装置(例如，本文公开的系统)进行。在来自个体或患者的样品中测量到或检测到的生物标志水平和参考水平的值可以例如相互比较，且该比较可以由执行比较算法的计算机程序自动进行。进行该评价的计算机程序将以适宜的输出格式提供希望得到的评估。对于计算机辅助比较，可以通过计算机程序将测定量的值与存储在数据库中的对应于适宜的参考的值相比较。计算机程序可以进一步评价比较的结果，即以适宜的输出格式自动提供希望得到的评估。对于计算机辅助比较，可以通过计算机程序将测定量的值与存储在数据库中的对应于适宜的参考的值相比较。计算机程序可以进一步评价比较的结果，即以适宜的输出格式自动提供希望得到的评估。
“低表达”或“低表达水平”或“降低的表达”是指，相对于对照或参考水平，或相对于预先确定的阈值或截止值，或相对于患者和/或个体的群体的中位数，患者中mRNA或蛋白质的表达减少。
术语“表达的水平”或“表达水平”一般可互换使用，通常指生物样品中多核苷酸或氨基酸产物或蛋白质的量。“表达”通常指基因编码的信息转化为在细胞中存在和运转的结构的过程。因此，本文所用的基因的“表达”指转录为多核苷酸、翻译为蛋白质、或甚至蛋白质的翻译后修饰。转录的多核苷酸、翻译的蛋白质或翻译后修饰的蛋白质的片段也视为表达的，无论它们是源自通过选择性剪接产生的转录物或降解的转录物，还是源自蛋白质的翻译后加工(例如，通过蛋白水解)。“表达的基因”包括转录为多核苷酸(如mRNA)然后翻译为蛋白质的那些，以及转录为RNA但不翻译为蛋白质的那些(例如，转运RNA 和核糖体RNA)。
基因表达水平的检测
本文所述任意方法的核酸可以是从基因组DNA转录的RNA或从RNA或 mRNA产生的cDNA。核酸可以源自脊椎动物，例如哺乳动物。如果核酸直接从特定来源获得，或者如果核酸是见于该来源的核酸的拷贝，则称它“源自”该来源。
核酸包括核酸的拷贝，例如产生自扩增的拷贝。在某些情况下可以希望进行扩增，例如，以获得所希望的量的材料用于检测变异。然后可以对扩增子进行变异检测方法(如下文所述的那些)，以测定某些基因的表达。
mRNA的水平可以通过本领域技术人员公知的多种方法(包括市售试剂盒和试剂的使用)来测量和定量。一个这种方法是聚合酶链反应(PCR)。另一种用于定量用途的方法是实时定量PCR或qPCR。
微阵列是通常用成千上万个核酸探针的阵列系列来在高严格性条件下与例如cDNA或cRNA样品杂交的多重技术。通常通过检测荧光团、银或化学发光标记的靶标来检测和定量探针-靶标杂交，以测定靶标中核酸序列的相对丰度。在典型的微阵列中，通过与化学基质的共价键(经环氧-硅烷、氨基-硅烷、赖氨酸、聚丙烯酰胺或其他)将探针附着至固体表面。固体表面是例如玻璃、硅芯片或微球。多种微阵列可购得，包括例如由Affymetrix,Inc.和Illumina,Inc.制造的那些。
蛋白的水平可以通过本领域技术人员公知的多种方法来测量和定量。例如蛋白免疫技术，蛋白免疫技术包括夹心免疫测定，例如夹心ELISA，其中使用识别生物标志物上不同表位的两种抗体进行该生物标志物的检测；放射免疫测定 (RIA)、直接、间接或对比酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶免疫测定(EIA)、荧光免疫测定(FIA)、蛋白质印迹法、免疫沉淀法和基于任何颗粒的免疫测定(如使用金颗粒、银颗粒或乳胶颗粒、磁性颗粒或量子点)。可例如在微量滴定板或条的形式中实施免疫法。
术语“抗体”在本文中以最广泛的含义使用，且包括单克隆抗体(例如，全长或完整的单克隆抗体)、多克隆抗体、多价抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体，只要它们显示希望的生物学活性)，且也可以包括某些抗体片段 (如本文更详细地描述)。抗体可以是人、人源化和/或亲和力成熟的抗体。
“抗体片段”仅包含完整抗体的部分，其中该部分优选保留与该部分存在于完整抗体中时通常相关的功能的至少一种，优选多数或全部。在一个实施方案中，抗体片段包含完整抗体的抗原结合部位，从而保持结合抗原的能力。在另一实施方案中，抗体片段(例如包含Fc区的抗体片段)保留通常与该Fc区存在于完整抗体中时相关的生物学功能的至少一种，如FcRn结合、ADCC功能和补体结合。在一个实施方案中，抗体片段是单价抗体，其具有基本上类似于完整抗体的体内半衰期。例如，这种抗体片段可以包含与能够赋予该片段体内稳定性的 Fc序列连接的抗原结合臂。
本文所用的术语“单克隆抗体”指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即除了可以少量存在的可能的天然存在的突变外，包含该群体的单种抗体是相同的。单克隆抗体高度特异，针对单一抗原。此外，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。
本文的单克隆抗体特别包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或隶属于特定抗体种类或亚类的抗体中对应的序列相同或同源，一条或多条链的其余部分与衍生自另一物种或隶属于另一抗体种类或亚类的抗体中对应的序列相同或同源，以及这类抗体的片段，只要它们显示希望的生物学活性。
术语“双抗体”指具有两个抗原结合部位的小的抗体片段，该片段包含在同一条多肽链中与可变轻链结构域(VL)连接的可变重链结构域(VH)(VH-VL)。通过使用太短而不允许同一条链上的两个结构域之间配对的接头，迫使结构域与另一条链上的互补结构域配对，并产生两个抗原结合部位。
“亲和力成熟的”抗体是在其一个或多个高变区中具有一个或多个改变的抗体，与不具有那些改变的亲本抗体相比，该改变导致抗体对抗原的亲和力的改善。在某些实施方案中，亲和力成熟的抗体将对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。
本文用术语“诊断”来指分子或病理学状态、疾病或病症的鉴定或分类。例如，“诊断”可以指，通过所累及的组织/器官(例如，肺腺癌)，或通过分子特征(例如，表征为特定基因或该基因所编码的蛋白质之一或其组合的表达)，鉴定患肺腺癌的风险。
“辅助诊断”来指辅助就症状或病症的具体类型的存在或性质作出临床决定的方法。例如，辅助诊断IBD的方法可以包括测量某些基因在来自个体的生物样品中的表达。
“试剂盒”是包含至用于特异性检测本发明的生物标志基因或蛋白质的探针的制成品(例如，包装或容器)。在某些实施方案中，该制成品作为用于进行本发明的方法的单位推销、分销或销售。
这类试剂盒可以包含区室化来紧密限制地容纳一个或多个容器手段(如小瓶、管等)的载体手段，每个容器手段包含将要在方法中使用的分开的组成部分之一。例如，容器手段之一可以包含进行可检测标或可以进行可检测标记的探针。这种探针可以是对包含基因表达特征的一个或多个基因的多核苷酸特异的多核苷酸。在试剂盒利用核酸杂交来检测靶核酸时，试剂盒还可以具有包含用于扩增靶核酸序列的一种或多种核酸的容器和/或包含报道手段的容器，如生物素结合蛋白，如抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白，结合于报道分子，如酶、荧光或放射性同位素标记。
试剂盒通常将包含上述容器和一个或多个其他容器，该其他容器包含商业和用户角度希望的物质，包括缓冲液、稀释液、滤器、针头、注射器和含有使用说明的包装说明书。容器上可以存在标签来指示该组合物用于具体的治疗或非治疗性应用，且还可以指示体内或体外使用的方向，如上文所述的那些。试剂盒中的其他可选成分包括一种或多种缓冲液(例如封闭缓冲液、洗涤缓冲液、底物缓冲液等)、其他试剂(如通过酶标记发生化学改变的底物)、表位修复溶液、对照样品(阳性和/或阴性对照)、对照切片等。
以下结合附图对本申请的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本申请，并不用于限制本申请。
实施例 与肺癌诊断相关的基因标志物
1、数据下载
用基因表达综合数据库GEO(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)和癌症基因组图谱数据库TCGA(https://cancergenome.nih.gov/)，检索数据库中的肺腺癌的表达谱数据。排除临床信息缺失的样本，纳入有匹配癌和癌旁的样本，TCGA纳入了59例癌旁样本，500例肺腺癌样本；GEO纳入了20例癌旁组织样本和226例的肺腺癌样本。
2、数据处理与分析
对于TCGA中的数据集，基因表达的RNA测序数据(FPKM值)和临床信息从UCSC Xena(https：//gdc.xenahubs.net)下载，将FPKM值转化为每千碱基百万(TPM)值的转录本。
对于GEO数据库下载GSE31210的原始“CEL”文件，在affy软件包中使用 RMA算法进行背景调整和分位数归一化。并利用注释文件对其注释，多个探针对应同一个基因的取平均值作为其表达量，然后获得基因表达矩阵文件。
TCGA数据集作为发现队列，GEO数据集作为验证队列。
3、差异表达分析
使用R软件中的“limma”包，对标准化后的基因表达数据，通过加权或广义最小二乘法对每个基因拟合线性模型，并通过经验贝叶斯计算出适度的t统计值、F统计值和差异表达值，最后获得差异基因分析结果，筛选标准为：adj.Pvalue 的最大阈值为0.05；log2FC最小绝对阈值为1。
4、诊断效能分析
使用R包“pROC”绘制受试者工作曲线(ROC)，分析差异表达基因作为检测变量的AUC值、敏感性和特异性，判断指标单独或者联合的诊断效能。
在判断单独指标的诊断效能时，直接使用基因的表达量(log2表达量)进行分析，选择约登指数(敏感性+特异性-1)最大的一点对应的水平作为其cutoff值 /截断值/阈值。
在判断指标联合的诊断效能时，首先是使用glmnet对基因进行logistics回归，利用建立的Logistic回归模型，对数据进行预测，绘制预测结果的ROC曲线，计算曲线下面积，分析敏感性、特异性。
5、结果
1)基因差异表达
MMP10、POU2AF1、SELE、RERGL在TCGA和GEO数据库中差异表达情况见图1-图4，其中MMP10、POU2AF1在肺癌患者中表达上调，SELE、RERGL在肺癌患者中表达下调，差异具有统计学意义。
2)ROC曲线分析
MMP10、POU2AF1、SELE、RERGL及其组合的诊断效能数据参见表1、表 2和图5-图9。
表1 TCGA诊断效能分析
指标 AUC 特异性 敏感性
MMP10 0.770 0.814 0.662
POU2AF1 0.768 0.678 0.772
SELE 0.772 0.695 0.738
RERGL 0.787 0.864 0.642
MMP10+POU2AF1 0.833 0.763 0.814
MMP10+SELE 0.858 0.78 0.828
MMP10+RERGL 0.848 0.814 0.766
POU2AF1+SELE 0.865 0.814 0.802
POU2AF1+RERGL 0.851 0.898 0.702
SELE+RERGL 0.840 0.814 0.746
MMP10+POU2AF1+SELE 0.908 0.864 0.834
MMP10+POU2AF1+RERGL 0.888 0.864 0.782
MMP10+SELE+RERGL 0.898 0.814 0.834
POU2AF1+SELE+RERGL 0.911 0.864 0.846
MMP10+POU2AF1+SELE+RERGL 0.938 0.864 0.884
表2 GEO诊断效能分析
指标 AUC 特异性 敏感性
MMP10 0.7336283 0.65 0.77
POU2AF1 0.7752212 1 0.531
SELE 0.7727876 0.9 0.566
RERGL 0.7986726 0.95 0.549
MMP10+POU2AF1 0.7997788 0.8 0.748
MMP10+SELE 0.8174779 0.7 0.805
MMP10+RERGL 0.8577434 0.85 0.748
POU2AF1+SELE 0.8626106 0.8 0.819
POU2AF1+RERGL 0.870354 0.9 0.757
SELE+RERGL 0.8252212 0.65 0.889
MMP10+POU2AF1+SELE 0.8736726 0.75 0.845
MMP10+POU2AF1+RERGL 0.8940265 0.9 0.801
MMP10+SELE+RERGL 0.875 0.9 0.752
POU2AF1+SELE+RERGL 0.8873894 0.8 0.885
MMP10+POU2AF1+SELE+RERGL 0.9123894 0.8 0.889
以上结合附图详细描述了本申请的优选实施方式，但是，本申请并不限于上述实施方式中的具体细节，在本申请的技术构思范围内，可以对本申请的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本申请的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本申请对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本申请的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本申请的思想，其同样应当视为本申请所公开的内容。

Claims (14)

1.用于测定样品中生物标志物组合的试剂在制备诊断肺癌的产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物组合由MMP10、POU2AF1、SELE和RERGL组成。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括检测样品中MMP10、POU2AF1、SELE和RERGL水平的试剂。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂检测样品中生物标志物表达的存在、不存在和/或量。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测样品中生物标志物的量的步骤包含以下的一种或组合：对样品进行数字成像；将样品暴露于已知量的标记抗体，所述标记抗体对生物标志物或其功能片段的表位具有特异性；将样品暴露于一种或多种染料，所述染料对生物标志物或其功能片段具有特异性；将样品暴露于至少一种标记探针，所述标记探针与所述生物标志物或其功能片段的序列互补；将样品暴露于色谱分析法；分离出样品的总RNA；以及将所述总RNA暴露于测序分析和/或将所述样品暴露于质谱分析法。
5.根据权利要求1-4任一项所述应用，其特征在于，所述样品是组织样品。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述组织样品包含来自受试者的血浆、血清或血液抽取物、刷洗物、活组织检查物或外科手术切除的组织或液体样品。
7.一种诊断肺腺癌的产品，其特征在于，所述产品包括检测生物标志物组合的试剂，所述生物标志物组合由MMP10、POU2AF1、SELE和RERGL组成。
8.根据权利要求7所述的产品，其特征在于，所述产品包括制剂、核酸膜条、芯片或试剂盒。
9.根据权利要求8所述的产品，其特征在于，所述试剂盒包括qPCR试剂盒、免疫印迹检测试剂盒、免疫层析检测试剂盒、流式细胞分析试剂盒、免疫组化检测试剂盒、ELISA试剂盒和电化学发光检测试剂盒。
10.根据权利要求9所述的产品，其特征在于，所述试剂盒还包括评估受试者是否患有或易患肺癌的说明书。
11.根据权利要求7-10任一项所述的产品，其特征在于，所述产品还包括处理样品的试剂。
12.根据权利要求7所述的产品，其特征在于，所述试剂选自：
识别MMP10、POU2AF1、SELE和RERGL的探针；或
扩增MMP10、POU2AF1、SELE和RERGL的引物；或
结合MMP10、POU2AF1、SELE和RERGL的蛋白的抗体。
13.一种诊断/预测肺癌的系统，其特征在于，所述系统包括：
处理器；
输入模块，用于输入生物样品中生物标志物的水平，所述生物标志物由MMP10、POU2AF1、SELE和 RERGL组成；
包含指令的计算机可读介质，所述指令在由所述处理器执行时在生物标志物的输入水平上执行算法；以及
输出模块，指示受试者是否患有肺癌或者存在患肺癌的风险。
14.一种计算机可读存储介质，其特征在于，其上存储有计算机程序，所述计算机程序被处理器执行时实现权利要求13所述的系统。
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