CN115500261A - 一种橡胶树次生体胚高效发生方法及其应用 - Google Patents

一种橡胶树次生体胚高效发生方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种橡胶树次生体胚高效发生方法及其应用，属于植物细胞工程技术领域。本发明将体细胞胚子叶切成长×宽为2～4mm×2～4mm的胚块，先将胚块远轴面贴愈伤组织诱导培养基接种，再将出现胚性愈伤组织的胚块近轴面贴体胚分化培养基接种。本发明发现限定胚块远轴面贴愈伤组织诱导培养基培养出现的胚性愈伤组织的胚块数量具有显著性提高，限定胚块近轴面贴体胚分化培养基分化形成次生体胚的胚块数量和次生体胚数量具有显著性提高，使用本发明所述方法可实现橡胶树次生体胚高效发生，为橡胶树组培苗工厂化生产以及遗传转化体系提供了新的途径。

Description

一种橡胶树次生体胚高效发生方法及其应用
技术领域
本发明属于植物细胞工程技术领域，尤其涉及一种橡胶树次生体胚高效发生方法及其应用。
背景技术
橡胶树(学名：Hevea brasiliensis(Willd.exA.Juss.)Muell.Arg.)是大戟科、橡胶树属植物。橡胶树是一个比较典型的热带雨林树种，是热带雨林上层的多年生热带高大乔木，经济寿命高达30～40年，所分泌的胶乳是重要的工业原料，世界上使用的天然橡胶，绝大部分由橡胶树生产。并且橡胶树的木材质轻，花纹美观，加工性能好，经化学处理后可制作高级家具、纤维板、胶合板、纸浆等，在国民经济中占有举足轻重的地位。
目前，橡胶树自根无性系的生产能力，还只能提供小规模的实验应用，规模化生产受到了橡胶树低效的胚胎发生、低效的植株再生和低效的自根无性系微繁三个方面的限制。在橡胶树次生体胚发生接种过程中，现有技术通常将橡胶树体细胞胚子叶切成2～4mm见方的胚块，然后随机将其近轴面或远轴面贴培养基接种至愈伤组织诱导培养基，经过一段时间培养、诱导出现胚性愈伤组织后，再将其按原来的贴培养基面接种至体胚分化培养基，分化形成次生体胚。然而该方法存在次生体胚发生效率低、次生体胚发生效率不稳定的问题，无法满足生产上低成本、高效率繁育橡胶树体胚苗的需要。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种橡胶树次生体胚高效发生方法，可以显著提高诱导出现胚性愈伤组织的胚块数量、分化形成次生体胚的胚块数量和次生体胚数量。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种橡胶树次生体胚高效发生方法，所述方法包括：体细胞胚子叶切块，将胚块远轴面贴愈伤组织诱导培养基接种，再将出现胚性愈伤组织的胚块近轴面贴体胚分化培养基接种。
优选的，所述胚块长×宽为2～4mm×2～4mm。
优选的，用酒精性马克笔区分胚块近轴面和远轴面。
优选的，所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，添加2～4mM CaCl2，6～8μMKT，8～8.2μM NAA，6.5～7μM 2,4-D，204～205mM蔗糖和2～2.4g/L植物凝胶；pH为5.6～6.0。
优选的，诱导培养条件为：黑暗条件，培养温度为22～25℃，培养过程中的相对湿度为65～75％。
优选的，所述分化培养基以MS培养基为基本培养基，调整大量元素至原来的4/5，添加2～2.5μM 6-BA，13～15μM KT，1.2～1.6μM GA3，0.05～0.15μM NAA，3.5～4μMABA，204～205mM蔗糖和2～2.4g/L植物凝胶；pH为5.6～6.0。
优选的，分化培养条件为：黑暗条件，培养温度为24～28℃，培养过程中的相对湿度为65～75％。
本发明还提供了上述方法在橡胶树离体繁殖中的应用。
相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：
本发明通过将胚块远轴面贴愈伤组织诱导培养基接种，诱导出现胚性愈伤组织的胚块数量显著性高于胚块近轴面贴愈伤组织诱导培养基接种；然后本发明又通过将出现胚性愈伤组织的胚块近轴面贴体胚分化培养基接种，分化形成次生体胚的胚块数量和次生体胚数量显著性高于胚块远轴面贴分化培养基接种。
本发明所述接种方式相对于现有技术中的随机接种方式而言，显著性的提高了次生体胚发生效率。
附图说明
图1：体胚远轴面和近轴面示图；
图2：体胚和胚块上色后示图；
图3：次生体胚发生示图。
具体实施方式
本发明提供了一种橡胶树次生体胚高效发生方法，所述方法包括：体细胞胚子叶切块，将胚块远轴面贴愈伤组织诱导培养基接种，再将出现胚性愈伤组织的胚块近轴面贴体胚分化培养基接种。
本发明发现，橡胶树胚性愈伤组织和次生体胚只形成于胚块的近轴面，随机将胚块近轴面或远轴面贴培养基接种至愈伤组织诱导培养基存在次生体胚发生效率低、次生体胚发生效率不稳定的问题。因此针对于接种面的具体限定提出了一种橡胶树次生体胚高效发生方法，显著性的提高了次生体胚发生效率。本发明通过将胚块远轴面贴愈伤组织诱导培养基接种，诱导出现胚性愈伤组织的胚块数量显著性高于胚块近轴面贴愈伤组织诱导培养基接种；然后通过将出现胚性愈伤组织的胚块近轴面贴体胚分化培养基接种，分化形成次生体胚的胚块数量和次生体胚数量显著性高于胚块远轴面贴分化培养基接种。
本发明所述体细胞胚子叶远轴面和体细胞胚子叶近轴面如图1所示。
本发明所述橡胶树包括但不限于巴西橡胶树。
本发明对橡胶树体细胞胚子叶的获得方法不做限定。本发明选取的橡胶树体细胞胚子叶(体胚)为无菌体胚。
本发明将无菌体胚切成2～4mm见方的胚块用于后续培养。作为一种可选的实施方式，本发明在超净工作台中选取合适的无菌体胚，用解剖刀和镊子将体胚切成长×宽2～4mm×2～4mm的胚块，备用。
本发明采用酒精性马克笔区分胚块近轴面和远轴面。橡胶树体胚子叶的近轴面和远轴面外观非常相似，当将一片子叶切成多个2～4mm的小胚块时，即使在体视显微镜下都难以区分其近轴面和远轴面。
本发明优选为先用酒精性马克笔给体胚子叶表面无菌上色，再将其切成胚块。作为一种可选的实施方式，本发明在超净工作台中选取合适的无菌体胚，先用酒精性马克笔给体胚子叶表面无菌涂色，接着用解剖刀和镊子将体胚切成长×宽约2～4mm×2～4mm的胚块，然后根据胚块表面的涂色，判断其近轴面和远轴面，用于后续接种培养。
本发明将胚块远轴面贴诱导培养基接种，诱导胚性愈伤组织形成。优选的，本申请所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，添加2～4mM CaCl2，6～8μM KT，8～8.2μM NAA，6.5～7μM 2,4-D，204～205mM蔗糖和2～2.4g/L植物凝胶；pH为5.6～6.0。
更优选的，本申请所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，添加3mM CaCl2，7μMKT，8.1μM NAA，6.8μM 2,4-D，204.5mM蔗糖和2.2g/L植物凝胶；pH为5.8。
本发明将胚块远轴面贴诱导培养基接种进行诱导培养，诱导培养条件为：黑暗条件，培养温度为22～25℃，培养过程中的相对湿度为65～75％。所述培养温度优选为23～24℃，所述培养相对湿度优选为68～72％。本发明诱导培养20～25d可形成胚性愈伤组织。
本发明将出现胚性愈伤组织的胚块近轴面贴体胚分化培养基接种，分化培养得到次生体胚。优选的，本申请所述分化培养基以MS培养基为基本培养基，调整大量元素至原来的4/5，添加2～2.5μM 6-BA，13～15μM KT，1.2～1.6μM GA3，0.05～0.15μM NAA，3.5～4μMABA，204～205mM蔗糖和2～2.4g/L植物凝胶；pH为5.6～6.0。
更优选的，本发明所述分化培养基以MS培养基为基本培养基，调整大量元素至原来的4/5，添加2.2μM 6-BA，14μM KT，1.4μM GA3，0.1μM NAA，3.8μMABA，204.5mM蔗糖和2.2g/L植物凝胶；pH为5.8。
本发明将出现胚性愈伤组织的胚块近轴面贴体胚分化培养基接种进行分化培养，分化培养条件为：黑暗条件，培养温度为24～28℃，培养过程中的相对湿度为65～75％。所述培养温度优选为26～27℃，所述培养相对湿度优选为68～72％。本发明诱导培养30天即可获得次生体胚，培养40～60d可获得成熟的次生体胚。
本发明还提供了上述方法在橡胶树离体繁殖中的应用。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
在具体实施例中，本发明中所使用的MS培养基、CaCl2、激动素(KT)、1-萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧基乙酸(2,4-D)、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)，、赤霉素3(GA3)、(S)-(+)-脱落酸(ABA)、蔗糖(sucrose)和植物凝胶(Phytagel)均为常规市售产品。
下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
一种橡胶树次生体胚发生方法，包括以下步骤：
(1)材料选择
选择子叶厚实的无菌正常子叶形初生体细胞胚或次生体细胞胚。
(2)胚块获得
在超净工作台中选取合适的无菌体细胞胚子叶，先用酒精性马克笔给体细胞胚子叶表面无菌涂色，接着用解剖刀和镊子将体胚切成长×宽约2～4mm×2～4mm的胚块(见图2所示)，然后根据胚块表面的涂色，判断其近轴面和远轴面。
(3)胚性愈伤组织诱导培养
将胚块远轴面贴诱导培养基接种。诱导培养基以MS培养基为基本培养基，添加3mMCaCl2，7μM KT，8.1μMNAA，6.8μM 2,4-D，204.5mM蔗糖和2.2g/L植物凝胶；pH为5.8。
黑暗条件下进行诱导培养，培养温度为23℃，培养过程中的相对湿度为70％。培养20d后，胚块近轴面开始出现大量黄色胚性愈伤组织。
(4)次生体胚分化培养
取步骤(3)中培养第22d得到的胚性愈伤组织胚块近轴面贴体胚分化培养基接种。分化培养基以MS培养基为基本培养基，调整大量元素至原来的4/5，添加2.2μM 6-BA，14μMKT，1.4μM GA3，0.1μM NAA，3.8μMABA，204.5mM蔗糖和2.2g/L植物凝胶；pH为5.8。
黑暗条件下进行分化培养，培养温度为25℃，培养过程中的相对湿度为70％。橡胶树的胚性愈伤组织在分化培养基上培养30d后，可观察到双子叶形次生体胚，培养50天后得到成熟的橡胶树次生体胚(见图3所示)。
实施例2
本实施例与实施例1的区别仅在于：步骤(3)中诱导培养基为：以MS培养基为基本培养基，添加2.8mM CaCl2，7.2μM KT，8.2μM NAA，6.7μM2,4-D，204mM蔗糖和2g/L植物凝胶；pH为5.8。
实施例3
本实施例与实施例1的区别仅在于：步骤(4)中分化培养基为：以MS培养基为基本培养基，调整大量元素至原来的4/5，添加2.3μM 6-BA，13μM KT，1.2μM GA3，0.15μM NAA，4μMABA，204mM蔗糖和2g/L植物凝胶；pH为5.8。
实施例4
本实施例与实施例1的区别仅在于：步骤(3)中诱导培养条件为：黑暗条件，培养温度为25℃，培养过程中的相对湿度为75％。
实施例5
本实施例与实施例1的区别仅在于：步骤(4)中分化培养条件为：黑暗条件，培养温度为27℃，培养过程中的相对湿度为65％。
实施例6
对比不同接种方式对分化次生体胚数量的影响。
本实施例与实施例1的区别在于，步骤(3)、步骤(4)中的接种方式不同，实验组5不采用酒精马克笔给体胚子叶远轴面涂色，其它条件与实施例1均相同。具体接种方式如表1所示。
表1不同实验操作中的接种方式
Figure BDA0003853368300000061
Figure BDA0003853368300000071
在次生体胚培养分化42d后对胚块平均分化次生体胚数进行统计分析，其中，胚块平均分化体胚数＝分化形成次生体胚总数/接种胚块总数；均值和标准差是指三次实验重复的胚块平均分化体胚数的均值和标准差；实验结果采用SPSS的Ducan法进行差异性分析。具体结果如表2所示。
表2不同接种方式的分化次生体胚数
Figure BDA0003853368300000072
由表2可知，本发明所述接种方式可显著提高橡胶树分化形成次生体胚的数量，较其他接种方式或随机接种方式而言具有显著性差异。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种橡胶树次生体胚高效发生方法，其特征在于，所述方法包括：体细胞胚子叶切块，将胚块远轴面贴愈伤组织诱导培养基接种，再将出现胚性愈伤组织的胚块近轴面贴体胚分化培养基接种。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胚块长×宽为2～4mm×2～4mm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用酒精性马克笔区分胚块近轴面和远轴面。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，添加2～4mM CaCl2，6～8μM KT，8～8.2μM NAA，6.5～7μM 2,4-D，204～205mM蔗糖和2～2.4g/L植物凝胶；pH为5.6～6.0。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，诱导培养条件为：黑暗条件，培养温度为22～25℃，培养过程中的相对湿度为65～75％。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分化培养基以MS培养基为基本培养基，调整大量元素至原来的4/5，添加2～2.5μM 6-BA，13～15μM KT，1.2～1.6μM GA3，0.05～0.15μM NAA，3.5～4μM ABA，204～205mM蔗糖和2～2.4g/L植物凝胶；pH为5.6～6.0。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，分化培养条件为：黑暗条件，培养温度为24～28℃，培养过程中的相对湿度为65～75％。
8.权利要求1～7任意一项所述的方法在橡胶树离体繁殖中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117178897A (zh) * 2023-10-26 2023-12-08 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种橡胶树成熟体细胞胚的复幼及植株再生方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005130813A (ja) * 2003-10-31 2005-05-26 Bridgestone Corp 組織培養によるラテックスの産出方法
CN101707981A (zh) * 2009-11-13 2010-05-19 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 橡胶树子叶胚高效胚性愈伤诱导及再生方法
CN101775408A (zh) * 2010-01-21 2010-07-14 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 橡胶树子叶胚胚性愈伤高效遗传转化方法
CN111109085A (zh) * 2020-02-11 2020-05-08 内蒙古自治区农牧业科学院 油葵自交系离体培养的方法
CN112841037A (zh) * 2021-03-31 2021-05-28 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种用于橡胶树的胚性愈伤组织诱导培养基、诱导橡胶树体细胞胚发生的方法和应用
CN113331057A (zh) * 2021-07-12 2021-09-03 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种用橡胶树花萼诱导体细胞胚发生的方法
CN114717175A (zh) * 2022-04-11 2022-07-08 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种建立具有高体胚发生能力橡胶树胚性细胞纯系以及维持其胚性形态的方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005130813A (ja) * 2003-10-31 2005-05-26 Bridgestone Corp 組織培養によるラテックスの産出方法
CN101707981A (zh) * 2009-11-13 2010-05-19 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 橡胶树子叶胚高效胚性愈伤诱导及再生方法
CN101775408A (zh) * 2010-01-21 2010-07-14 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 橡胶树子叶胚胚性愈伤高效遗传转化方法
CN111109085A (zh) * 2020-02-11 2020-05-08 内蒙古自治区农牧业科学院 油葵自交系离体培养的方法
CN112841037A (zh) * 2021-03-31 2021-05-28 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种用于橡胶树的胚性愈伤组织诱导培养基、诱导橡胶树体细胞胚发生的方法和应用
CN113331057A (zh) * 2021-07-12 2021-09-03 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种用橡胶树花萼诱导体细胞胚发生的方法
CN114717175A (zh) * 2022-04-11 2022-07-08 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种建立具有高体胚发生能力橡胶树胚性细胞纯系以及维持其胚性形态的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
周爱琴等: ""鲁加5号"柱型苹果胚状体再生体系优化", 《北方园艺》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117178897A (zh) * 2023-10-26 2023-12-08 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种橡胶树成熟体细胞胚的复幼及植株再生方法
CN117178897B (zh) * 2023-10-26 2024-05-07 中国热带农业科学院橡胶研究所 一种橡胶树成熟体细胞胚的复幼及植株再生方法

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