CN115487117B - 大叶冬青提取物及其在制备抗氧化组合物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于植物制品领域，提供了大叶冬青提取物及其在制备抗氧化组合物中的用途，抗氧化组合物，包括组分植物混合发酵物、植物油脂、维生素E；植物混合发酵物包括：大叶冬青叶、玉竹、香叶天竺葵叶；本发明基于大叶冬青的开发前景，针对其抗氧化的效果开发出了一种大叶冬青为主的抗氧化组合物。通过大叶冬青、玉竹、香叶天竺葵的复配配合特定的植物油脂；对常见的自由基有良好的清除效果，同时油脂具有极佳的保湿功能；使得本发明的抗氧化组合物特别适用于添加在驻留类化妆品内。

Description

大叶冬青提取物及其在制备抗氧化组合物中的用途
技术领域
本发明属于植物制品领域，具体涉及大叶冬青提取物及其在制备抗氧化组合物中的用途。
背景技术
大叶冬青(Ilex latifolia Thunb)为冬青科乔本植物，为分布在我国境内的原生植物；是中国南部居民喜欢饮用的苦丁茶(Ku ding cha)的主要原料。传统医学中苦丁茶用于头痛、高血压等的治疗剂，尤其，大叶冬青用于缺血性心脏疾病以及心肌梗塞的治疗剂。
该植物成分复杂，已报道的就有皂苷、三萜、甾醇、黄酮、挥发油、脂肪酸、氨基酸、微量元素、维生素等多种类别。但是大叶冬青的苦丁茶氰苷在高剂量下对肝肾等脏器具有明显的毒性，限制了大叶冬青的开发。
对于大叶冬青的开发大多为植物养殖方面，如扦插、育苗。用于医药、保健品、护肤品等方面的开发，目前有如CN201110232268.4大叶冬青提取物为有效成分的药物组合物所公开的作为缺血性疾病或退行性脑疾患的预防或治疗用药物成分使用；如CN201110171481.9一种大叶冬青提取物公开了作为制造防治心脑血管疾病、高脂血症、病毒性肝炎的药品或保健品的成分使用；如CN201910757481.3一种具有降血糖功效的组合物及其制备方法和应用公开了作为降血糖功效的成分使用；但总体而言对于大叶冬青的开发还有很大的空间。
发明内容
针对现有对大叶冬青的不足，本发明提出了大叶冬青提取物及其在制备抗氧化组合物中的用途。
本发明的第一个目的在于提供一种抗氧化组合物，以质量份计算包括以下组分：
植物混合发酵物 10
植物油脂 40-60
维生素E 0.6-1.2；
所述植物混合发酵物质量份计算包括：
大叶冬青叶 60
玉竹 20-30
香叶天竺葵叶 10-20；
所述植物混合发酵物的制备方法为：将大叶冬青叶、玉竹、香叶天竺葵作为发酵原料，加入菌种进行发酵所得。
特别地，所述植物油脂为以下中的至少一种；
薄荷叶油、霍巴巴油、山茶籽油、葡萄籽油、薄荷叶油、小麦胚芽油、玫瑰花油、茉莉花油。
特别地，所述植物混合发酵物的制备方法包括以下步骤：
(1)将大叶冬青叶、香叶天竺葵叶、玉竹洗净后粉碎至≤2mm，得发酵原料；
(2)将发酵原料、pda培养基以4-6:1的质量比混合，调节ph为4.5；
(3)接种啤酒酵母菌，发酵至少72h；发酵温度为22-40℃；
(4)发酵完成后过滤，取脂溶性成分，得植物混合发酵物。
特别地，步骤(3)中，0-24h内发酵温度为25±3℃；24h后发酵温度为35±5℃。
本发明的第二个目的在于提供前述抗氧化组合物在驻留类化妆品中的应用。
本发明的有益效果：
本发明基于大叶冬青的开发前景，针对其抗氧化的效果开发出了一种大叶冬青为主的抗氧化组合物。通过大叶冬青、玉竹、香叶天竺葵的复配配合特定的植物油脂；对常见的自由基有良好的清除效果，同时油脂具有极佳的保湿功能；使得本发明的抗氧化组合物特别适用于添加在驻留类化妆品内。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明中，大叶冬青叶为冬青科冬青属大叶冬青Ilex latifolia Thunb.的成熟叶片。
玉竹为百合科黄精属玉竹Polygonatum odoratum(Mill.)Druce的根茎。
香叶天竺葵叶为牻牛儿苗科天竺葵属香叶天竺葵Pelargonium Graveolens L'Hér.的的成熟叶片。
啤酒酵母菌为Saccharomyces cerevisiae。
薄荷叶油来自MENTHA ARVENSIS。
霍霍巴油来自SIMMONDSIA CHINENSIS(JOJOBA)。
山茶籽油来自CAMELLIA JAPONICA
葡萄籽油来自Vitis vinifera L.的成熟果实种子。
薄荷叶油来自MENTHA ARVENSIS。
小麦胚芽油来自Triticum aestivum L.的胚芽。
玫瑰花油来自ROSA RUGOSA。
茉莉花油来自JASMINUM SAMBAC。
pda培养基的内容物如下：
马铃薯200克
葡萄糖20克
琼脂20克
蒸馏水1000毫升
自然pH。
植物混合发酵物的制备方法包括以下步骤：
(1)将大叶冬青叶、香叶天竺葵叶、玉竹洗净后粉碎至≤2mm；大叶冬青叶浸泡ph为8.0的12h碳酸氢钠水溶液备用；将大叶冬青叶、香叶天竺葵、玉竹混合得发酵原料；
(2)将发酵原料、pda培养基混合，调节ph为4.5；
(3)接种啤酒酵母菌，发酵72h；0-24h内发酵温度为25±3℃；24h后发酵温度为35±5℃。
(4)发酵完成后过滤，取脂溶性成分，得植物混合发酵物。
各步骤的技术参数与原料比例如下表1(单位质量份)所示。
表1
安全性测试
将获得的三组植物混合发酵物参照《2022化妆品安全技术规范》中的人体皮肤斑贴试验。皮肤封闭型斑贴试验的方法为：选择年龄为18-60周岁的人员30名，选用面积不超过50mm2、深度约1mm的合格斑试器材，取用0.020mL上述实施例和对比例制备的修复紧致组合物放入斑试器小室内，对照孔为空白对照(不置任何物质)，将加有修复紧致组合物的斑试器用低致敏胶带贴敷于受试者的前臂曲侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。分别于去除植物混合发酵物后30min(待压痕消失后)、24h和48h按表2标准观察皮肤反应，并记录观察结果，见表3。
表2皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准
表3人体安全性测试结果
编号 30min 24h 48h
植物混合发酵物1 0级，30人 0级，30人 0级，28人；1级，2人；
植物混合发酵物2 0级，30人 0级，30人 0级，30人
植物混合发酵物3 0级，30人 0级，30人 0级，29人；1级，1人；
抗氧化组合物的制备，包括以下步骤：
(1)将植物混合发酵物与维生素E混合；
(2)取植物油脂，在搅拌状态下不间断地植物混合发酵物与维生素E的混合物，在20-30min内加入完毕；加入完毕后继续搅拌30min；搅拌速率为30rpm。
原料比例如下表4(单位质量份)所示。
表4
序号 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5 实施例6
植物混合发酵物序号 1 1 2 2 3 3
植物混合发酵物添加量 10 10 10 10 10 10
维生素E添加量 1.2 0.6 1.2 0.6 1.2 0.6
薄荷叶油添加量 / 5 5 / / /
霍霍巴油添加量 40 40 40 40 40 40
山茶籽油添加量 / 5 / / / /
葡萄籽油添加量 / / 5 / / /
薄荷叶油添加量 / / / / / 20
小麦胚芽油添加量 / / 10 / / /
玫瑰花油添加量 / / / / / /
茉莉花油添加量 / / / 10 / /
安全性测试
将获得的六组抗氧化组合物参照《化妆品安全技术规范》中的人体皮肤斑贴试验。皮肤封闭型斑贴试验的方法为：选择年龄为18-60周岁的人员30名，选用面积不超过50mm2、深度约1mm的合格斑试器材，取用0.020mL上述实施例和对比例制备的修复紧致组合物放入斑试器小室内，对照孔为空白对照(不置任何物质)，将加有修复紧致组合物的斑试器用低致敏胶带贴敷于受试者的前臂曲侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。分别于去除植物混合发酵物后30min(待压痕消失后)、24h和48h按表2标准观察皮肤反应，并记录观察结果；抗氧化组合物的斑贴测试结果见表5。
表5人体安全性测试结果
编号 30min 24h 48h
实施例1 0级，30人 0级，30人 0级，30人
实施例2 0级，30人 0级，30人 0级，30人
实施例3 0级，30人 0级，30人 0级，30人
实施例4 0级，30人 0级，30人 0级，30人
实施例5 0级，30人 0级，30人 0级，30人
实施例6 0级，30人 0级，30人 0级，30人
抗氧化测试
将上述各实施例制备而成抗氧化组合物，进行DPPH自由基清除率的抗氧化测试，选用化学合成抗氧化剂BHT和BHA作为对照。具体方法如下：
实验步骤：
(1)取部分抗氧化组合物，加入抗氧化组合物体积8.85倍的水；加入抗氧化组合物体积0.15倍的月桂醇聚醚-23；将抗氧化组合物稀释10倍，并标记备用。
(2)取等体积(2mL)的待测液与2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A1)；
(3)取等体积的无水乙醇(待测物溶剂)与2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A2)；
(4)取等体积的无水乙醇与待测液混匀(A3)；
(5)反应40min后，在517nm下测A1、A2、A3管吸光度值。
清除率计算公式为：清除率(％)＝[1－(A1－A3)/A2]×100％
表6抗氧化测结果
编号 IC50(mg/ml)
实施例1 3.681
实施例2 3.982
实施例3 3.719
实施例4 3.816
实施例5 3.702
实施例6 3.866
BHT 9.612
BHA 10.087
实施例1(稀释10倍) 7.812
实施例2(稀释10倍) 8.436
实施例3(稀释10倍) 7.884
实施例4(稀释10倍) 8.078
实施例5(稀释10倍) 7.848
实施例6(稀释10倍) 8.159
测试结果如表6所示，提取物的DPPH清除率越高，提取物的抗氧化性能越强。试验结果用IC50表示，IC50值指DPPH清除一半时的样品浓度，IC50值越低抗氧化性越好。
油脂氧化稳定性测试
将上述各实施例制备而成抗氧化组合物，进行油脂氧化稳定性测试，测试方法参照《GB/T21121-2007动植物油脂氧化稳定性的测定(加速氧化测试)》，
同时为了更直观的观察含山茶的抗氧化组合物在油脂应用中的抗氧化能力，常见的化学合成抗氧化剂BHT，BHA作对比，添加量与实施例以及对比例中的山茶抗氧化组合物的添加量一致，选用空白植物油(无抗氧化剂添加)做对照，采用892型油脂氧化稳定性测试仪进行测试。
表7油脂氧化稳定性结果
测试结果如表7，氧化诱导时间越长，则油脂的氧化稳定性越好。

Claims (3)

1.抗氧化组合物，其特征在于，以质量份计算包括以下组分：
植物混合发酵物10
植物油脂40-60
维生素E 0.6-1.2；
所述植物混合发酵物质量份计算包括：
大叶冬青叶60
玉竹20-30
香叶天竺葵叶10-20；
所述植物油脂为以下中的至少一种；
薄荷叶油、霍霍巴油、山茶籽油、葡萄籽油、薄荷叶油、小麦胚芽油、玫瑰花油、茉莉花油；
所述植物混合发酵物的制备方法包括以下步骤：
(1)将大叶冬青叶、香叶天竺葵叶、玉竹洗净后粉碎至≤2 mm，得发酵原料；
(2)将发酵原料、PDA培养基以4-6:1的质量比混合，调节pH为4.5；
(3)接种啤酒酵母菌，发酵至少72 h；发酵温度为22-40℃；
(4)发酵完成后过滤，取脂溶性成分，得植物混合发酵物。
2.根据权利要求1所述的抗氧化组合物，其特征在于，步骤(3)中，0-24 h内发酵温度为25±3℃；24 h后发酵温度为35±5℃。
3.权利要求1或2所述的抗氧化组合物在驻留类化妆品中的应用。
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