CN115484969A - 抗微生物溶液及其用于治疗或预防感染的方法 - Google Patents

Abstract

抗微生物组合物包括治疗有效量的印楝油、金丝桃属植物的提取物、多不饱和脂肪酸(PUFA)、卡拉胶和/或氯己定；和(任选地)与一种或多种药学上可接受的载体、添加剂和/或稀释剂组合。所述抗微生物组合物在治疗或预防上呼吸道感染，特别是由人类冠状病毒引起的上呼吸道感染方面有效，并且所述抗微生物组合物包括在治疗或预防微生物病原体感染人类上呼吸道的方法中。

Description

抗微生物溶液及其用于治疗或预防感染的方法

技术领域

本发明一般涉及抗微生物溶液。更具体地，本发明涉及治疗或预防微生物病原体感染的抗微生物溶液和方法。

背景技术

感染可由多种不同的微生物引起。病毒是最常见的人体致病微生物之一，导致人类疾病状态的病毒数量和种类具有巨大数量的多样性。大多数病毒性疾病是自限性的，不会造成宿主任何的长期发病，除了解热药和适当的流体摄入外，不需要特殊治疗。

病毒感染的特定治疗方法可用于一小部分病毒，包括单纯疱疹病毒和艾滋病病毒(HIV)，但大多数病毒感染只有对症治疗或服用抗病毒药物，目的在于减少患病天数，如用于流感的奥赛拉韦(Ozeltamavir)。

预防和/或治疗病毒感染的最常见和最有效的策略是免疫。然而，免疫只可用于少数几种病毒。这部分是由于许多致病性病毒不断演变的特点。许多病毒经历了某种形式的抗原漂移，使得难以识别和靶向用于免疫治疗的保守表位。

人类上呼吸道感染主要由病毒感染引起。常见的致病性病毒包括流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腺病毒、鼻病毒、人类偏肺病毒和肠道病毒，以及引起普通感冒的冠状病毒家族。例如，图1说明了普通感冒的复杂的病毒致病源。一些病毒，如冠状病毒家族，对人类具有进化趋向性的额外风险，从而转化为通常具有高度传染性的人类病原体，如中东呼吸综合征的病原体MERS-CoV、严重急性呼吸综合征病原体SARS-CoV-1和新冠肺炎(COVID-19)疫情的病原体SARS-CoV-2。

每年，新的或进化的致病性病毒株在全球范围内引起呼吸系统疾病的爆发，这是全球发病率和死亡率的主要原因。据估计，每年有5-10％的成年人和20-30％的儿童感染流感，导致全球300-500万例重症病例和约100万人死亡。异常病毒爆发，如由SARS-CoV1和SARS-CoV2冠状病毒引起的病毒爆发，有可能导致比流感高得多的发病率和死亡率。

除了流感和新型冠状病毒外，急性病毒性呼吸道感染(也称为普通感冒)是人类最常见的感染性疾病，儿童每年感染上呼吸道感染平均4至8次，成年人每年感染平均2至4次。在大多数情况下，普通感冒是由呼吸道病毒引起的，如鼻病毒、冠状病毒、副流感、流感、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肠道病毒和偏肺病毒。

虽然普通感冒被认为是一种“自限性疾病”，其症状包括流鼻涕、鼻塞、打喷嚏、咳嗽、喉咙痛、全身不适和发烧，然而这些症状令人痛苦和不舒服，每年有超过2000万人次就诊，4000万人无法上学和上班。这在没有有效治疗的情况下造成了巨大的全球经济和社会负担。

另一个问题是提供可有效对抗包膜病毒(包括通过膜融合进入宿主细胞的脂质双层膜的那些病毒，包括疱疹病毒、痘病毒、肝病毒、冠状病毒、逆转录病毒和其他病毒)和非包膜病毒(那些缺乏通过某种形式的膜穿孔进入宿主细胞的脂质双层膜的病毒，包括轮状病毒、脊髓灰质炎病毒和其他病毒)的抗病毒组合物的挑战。

不幸的是，目前许多病毒感染没有有效的解决方案来治疗或预防，例如包括由冠状病毒，特别是由SARS-CoV-1和/或SARS-CoV-2引起的上呼吸道感染、流感和普通感冒。因此，需要解决用于治疗或预防微生物感染的抗微生物组合物和方法中所存在的许多缺点。

发明内容

本公开的实施方案用抗微生物溶液解决了本领域中的一个或多个上述或其他问题。针对上呼吸道感染(例如由新型冠状病毒、流感和普通感冒引起的感染)的有效治疗必须考虑到人类会感染多种不同病毒的事实。本公开的实施方案有利地表现出了广泛的抗病毒能力，并且不会导致耐药性的形成。

特别地，一个或多个实施方案可以包括具有治疗有效量的印楝油和金丝桃属(Hypericum spp.)植物提取物的抗微生物溶液，且任选地与一种或多种药学上可接受的载体、添加剂和/或稀释剂组合的抗微生物溶液。在其他实施方案中，抗微生物溶液可具有治疗有效量的多不饱和脂肪酸(PUFA)、印楝油和金丝桃属植物提取物，任选地与一种或多种药学上可接受的载体、添加剂和/或稀释剂组合。在其他实施方案中，抗微生物溶液可包括具有治疗有效量的多不饱和脂肪酸(PUFA)，任选地与一种或多种药学上可接受的载体、添加剂和/或稀释剂组合。

所公开的抗微生物溶液能够有效地治疗或预防由细菌或病毒病原体引起的感染，优选由人类冠状病毒引起的上呼吸道感染，并且包括在本发明公开的治疗或预防微生物病原体引起的人类上呼吸道感染的方法中。

本发明内容中提供用于以简化的形式介绍一系列概念，这些概念将在下面的详细描述中进一步描述。本发明内容并不旨在识别所要求保护的主题的关键特征或基本特征，也不用于指示所要求保护主题的范围。

本公开的附加特征和优点将在下面的描述中阐述，并且部分地根据描述是显而易见的，或者可以通过本公开的实践知晓。本公开的特征和优点可以通过所附权利要求中特别指出的手段和组合来实现和获得。本公开的这些和其他特征将从以下描述和所附权利要求中变得更加明显，或者可以通过下文所述公开的实践知晓。

附图说明

为了描述可以获得上述以及本公开的其他优点和特征的方式，将通过参考在附图中所示的本公开的具体实施方案中来对上述简要描述的本公开进行更具体的描述。应当理解，这些附图仅描述了本公开的典型实施方案，因此不应被视为限制其范围。通过使用附图对本公开进行附加的具体性和描述性来描述和解释，其中：

图1显示了由特定病毒引起的感冒比例的饼状图。

图2显示了使用以下处理时的冠状病毒粒子浓度的柱状图：(i)单独的载体；(ii)印楝油和金丝桃属植物的提取物；和(iii)根据本公开的一个或多个实施方案，印楝油和金丝桃属植物的提取物，任选加上载体。

图3显示了使用以下处理时的冠状病毒粒子浓度的柱状图：(i)单独的载体；(ii)载体加上多不饱和脂肪酸(PUFA)、印楝油和金丝桃属植物提取物中的一种；(iii)载体加上多不饱和脂肪酸(PUFA)、印楝油和金丝桃属植物提取物中的两种；和(iv)根据本公开的一个或多个实施方案的抗微生物溶液，其包括载体加上治疗有效量的PUFA、印楝油和金丝桃属植物提取物。

图4显示了以下处理随着时间的推移对人类患者中的冠状病毒滴度影响的曲线图：(i)单独的载体；(ii)载体加上多不饱和脂肪酸(PUFA)、印楝油和金丝桃属植物提取物中的一种；(iii)载体加上多不饱和脂肪酸(PUFA)、印楝油和金丝桃属植物提取物中的两种；和(iv)根据本公开的一个或多个实施方案的抗微生物溶液，其包括载体加上治疗有效量的PUFA、印楝油和金丝桃属植物提取物。

图5显示了与上呼吸道病毒感染相关的症状的数量和/或严重性的曲线图，所述上呼吸道病毒感染未经治疗或用根据本公开的一个或多个实施方案的抗微生物溶液治疗，所述抗微生物溶液包括载体加上治疗有效量的PUFA、印楝油和金丝桃属植物提取物。虚线指示给予患者治疗的时间(即，在出现症状后)。

图6显示了使用以下处理时的冠状病毒粒子浓度的柱状图：(i)仅具有氧化稳定剂和载体的对照溶液；(ii)单独的多不饱和脂肪酸(PUFA)；(iii)PUFA加氧化稳定剂；和(iv)根据本公开的一个或多个实施方案的PUFA加上氧化稳定剂和载体。

图7显示了根据一个实施方案的抗微生物溶液的人体受试者测试结果的曲线图。

图8显示了不间断使用根据一个实施例的抗微生物溶液的人体受试者研究的示意图。

图9显示了图8中人体受试者不间断测试的初步结果的曲线图。

图10显示了计划使用根据一个实施例的抗微生物溶液的动物受试者研究的示意图。

图11显示了计划使用根据一个实施例的抗微生物溶液的人体受试者研究的示意图。

具体实施方式

结合附图阅读，可以从以下描述中更好地理解本公开的不同实施方案，在附图中，相似的附图标记表示相似的元件。

在详细描述本公开的各种实施方案之前，应当理解，本公开不限于特别例示性的系统、方法、装置、产品、工序和/或试剂盒的参数，这些参数当然可以变化。因此，虽然关于特定配置、参数、组件、元件等在本公开的某些实施方案进行了详细描述，但这些描述是说明性的，不应被解释为对所要求保护的发明范围的限制。此外，本发明中使用的术语是为了描述实施方案的目的，并不一定旨在限制所要求保护的发明的范围。

此外，应当理解，对于本发明所述的任何给定组分或实施方案，通常可以单独地或彼此组合地使用为该组分所列出的任何可能的候选物或代替物，除非有隐含地或明确地理解或另有说明。此外，应理解的是，此类候选物或代替物的任何列表仅是说明性的，而非限制性的，除非有隐含或明确理解或另有说明。

此外，除非另有说明，否则表示说明书和权利要求书中使用的数量、成分、距离或其他测量值的数字应理解为由术语“大约”限定，该术语在本发明中定义。因此，除非相反指示，否则说明书和所附权利要求书中所述的数值参数是近似值，其可根据本发明的所述主题所寻求获得的期望特性而变化。至少，并且不是试图将等同原则的应用限制在权利要求的范围内，每个数值参数至少应根据报告的有效数字的位数并通过应用普通舍入技术来解释。尽管阐述本发明所述主题的广泛范围的数值范围和参数类似，但是要尽可能精确地报告具体示例中阐述的数值。然而，任何数值固有地包含一定的误差，这些误差必然来自于各自测试测量中发现的标准偏差。

虽然本公开容易受到各种修改和替代性结构的影响，但在下面描述的附图中提供了某些说明性的实施方案。然而，应当理解，这并不意图将本公开限制于所公开的特定实施方案，相反，该意图涵盖落入本公开的精神和范围内的所有修改、替代性结构、组合和等效物。

本发明中使用的任何标题和副标题仅用于组织目的，不用于限制说明书或权利要求的范围。

应当理解，除非本申请中明确定义了具有所述含义的术语，否则无意将该术语的含义明确或间接限制在其明显或普通含义之外。

权利要求中未明确说明执行指定功能的“手段”或执行特定功能的“步骤”的任何要素，不得解释为《美国法典》第35卷第112条规定的“手段”或“步骤”条款。

多不饱和脂肪酸的抑制病毒和抗细菌性能

已知多不饱和脂肪酸，如Ω-3脂肪酸花生四烯酸(AA)、α-亚麻酸(ALA)、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)，具有较小的抑制细菌和抑制病毒特性。例如，已证明EPA对一些革兰氏阳性(如枯草芽孢杆菌、李斯特氏菌和金黄色葡萄球菌)和革兰氏阴性(如铜绿假单胞菌)细菌、多种分枝杆菌、各种真菌、蓝细菌、微藻、原生动物和可选的病毒具有抗微生物活性。

特别是，EPA已被证明能有效抑制重要食源性病原体的生长，包括三种革兰氏阳性物种(枯草芽孢杆菌、李斯特氏菌和金黄色葡萄球菌)和革兰氏阴性铜绿假单胞菌。EPA已被证明对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株有效，这是全世界健康护理机构内患者死亡的主要原因。此外，EPA显示出对消化性溃疡的病原体幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)具有效力，并在一定浓度下消除了该病原体的生长。EPA还显示出了对人类口腔病原体如变形链球菌(Streptococcus mutans)的有效抗细菌活性。

几种PUFA，包括AA、DHA和EPA，已显示出可抑制慢性丙型肝炎的生长，用PUFA孵育显示可以降低几种包膜病毒的感染性，包括粘液病毒、副粘病毒、虫媒病毒和疱疹病毒。然而，鉴于微生物的多样性，在证明PUFA作为广谱抗病毒/抗细菌化合物的有效性方面成败参半。

已证明向源自鱼皮(其本身保留了一部分天然存在的Ω-3脂肪酸)的商业伤口愈合支架提供的Ω-3多不饱和脂肪酸浓度增加，其作为细菌屏障的时间比未添加的产品长80％。

然而，虽然PUFA作为抗微生物化合物取得了一些成功，但尚未证明并且预计它们不会单独作为广谱抗微生物屏障发挥作用，特别是在口腔粘膜内。此外，许多多不饱和脂肪酸易于氧化，从而产生令人不适的味道和气味。这使得很难将它们包含在口腔或鼻腔组合物中，除非以稳定的状态。它还会缩短相关产品的保质期和可用性。

此外，虽然已证明PUFA对有限数量的病毒具有一定的抗病毒活性，但没有证据表明PUFA对冠状病毒有效，或者对症状性上呼吸道感染有明显效果。

印楝油的抑制病毒和抗细菌的性能

印楝油是通过印楝(Azadirachta indica)种子的冷榨获得的油。文献中充分证明印楝油具有一些有限的抗细菌和抗病毒活性。例如，印楝油已被证明是一种对创伤弧菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌和铜绿假单胞菌有效的抗细菌剂。就其抗病毒活性而言，印楝油已被证明对单纯疱疹病毒I型和登革热病毒包膜蛋白有效。

然而，尚未显示并预计印楝油不会单独起到抗细菌屏障的作用，特别是在口腔粘膜内，也没有迹象表明其与其他抗微生物化合物组合会提高它们的功效或允许此类应用。此外，没有迹象表明印楝油本身对冠状病毒有效，也没有迹象表明与其他抗微生物化合物组合会提高它们的功效或允许此类应用。

金丝桃油的抑制病毒和抗细菌的性能

金丝桃油是普通的圣约翰草(贯叶连翘，金丝桃属)的提取物，包括化合物金丝桃素，也可由蒽醌衍生物大黄素合成。金丝桃素作为贯叶连翘(Hypericum perforatum)的主要成分，在民间医学史上一直被使用。金丝桃素也已成为深入生化研究的主题，并被证明是药物和医药应用中的多功能药剂。最近的研究报道了金丝桃素的抗抑郁、抗肿瘤、抗癌和一些有限的抗病毒活性。例如，来自贯叶连翘的金丝桃素已被证明可显著降低支气管炎病毒的mRNA表达和病毒滴度，并且来自贯叶连翘的金丝桃素已被证实对慢性丙型肝炎感染患者具有抗病毒作用。地耳草提取物已显示出可抑制爱泼斯坦-巴尔病毒和卡波西肉瘤相关的疱疹病毒。

然而，与印楝油一样，还没有显示出并且预计金丝桃属植物的提取物也不会单独起到抗微生物屏障的作用，特别是在口腔粘膜内，也没有迹象表明与其他抗微生物化合物(如印楝油)组合会提高它们的功效或允许此类应用。

卡拉胶的抑制病毒的性能

卡拉胶属直链硫酸化多糖家族，其是红藻(属红藻纲类)细胞壁的主要成分并从红色海藻中提取，作为凝胶、增稠和稳定组合物的添加剂广泛用于如食品、美容和制药等行业中，这是因为根据美国食品和药物法规，特别是21C.F.R.182.7255，卡拉胶通常被认为是安全的。例如，卡拉胶被用作如冰淇淋、冻胶、牙膏等产品的乳化剂和粘合剂。卡拉胶是高分子量多聚糖，包括重复的半乳糖单元和通过糖苷键连接的3，6脱水半乳糖。卡拉胶占某些红色海藻物种(如角叉藻属(Chondrus)、杉藻属(Gigartina)、沙菜属(Hypnea)和麒麟菜属(Eucheuma))的藻干重的30％至75％。卡拉胶可根据结构特征来分类，包括硫酸化模式(分别包括一个、两个和三个硫酸盐基团的kappa型、iota型和lambda型变种)。

已经发现，卡拉胶会在鼻粘膜表面形成粘膜粘附层，并与许多不同的病毒颗粒相互作用。这被认为是在病毒颗粒表面形成一个屏蔽层，以防止粘膜和感染的宿主细胞之间的相互作用。这提供了针对一系列动物病毒的抗病毒活性，甚至作为杀精剂的成分用于预防性传播感染。体外和体内研究表明，卡拉胶是有效的病毒抑制剂，如乳头瘤病毒、鼻病毒、甲型流感、呼吸道合胞病毒和人肠道病毒71型。

然而，没有迹象表明卡拉胶与其他抗微生物化合物(如印楝油、PUFA或金丝桃属植物提取物)的组合将提高其功效或允许此类应用。

氯己定的抑制病毒和抗细菌的性能

1,6-双(4’-氯苯基双胍)己烷是一种二价阳离子双胍，通常称为氯己定。氯己定(以氯己定葡萄糖酸盐、氯已定二葡萄糖酸盐和氯己定醋酸盐的形式)是一种广谱性消毒剂和防腐剂，通常用于皮肤消毒、外科器械消毒、伤口清洁、预防牙菌斑和其他用途。尽管有副作用，但由于其对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌、厌氧菌、真菌和一些病毒的活性，因此广泛用于消毒剂、化妆品和制药产品。

氯己定被认为是在生理pH下解离并释放带正电荷的氯己定阳离子来使用的，该阳离子与带负电荷的细菌细胞壁结合并影响细菌的渗透平衡，导致抑制细菌的作用或细胞死亡。也就是说，氯己定分子的双胍基与细胞壁上的阴离子位点结合，在相邻的酸性磷脂头基团之间形成桥(由于氯己定的尺寸相对较小——六个碳的长度)，取代通常稳定细胞膜的二价阳离子(即Mg²⁺和Ca²⁺)，导致细胞泄漏钾离子和质子。然而，已知氯己定在存在有机物质如血清时效果较差。还已知氯己定对非包膜病毒无效。

然而，没有迹象表明氯己定与其他抗微生物化合物(如印楝油、PUFA、金丝桃属植物提取物或卡拉胶)的组合会增加氯己定的功效或允许此类应用。

抗微生物组合物概述

病毒通常通过感染者咳嗽或打喷嚏时产生的呼吸道飞沫传播。然后，这些飞沫可以被未感染者吸入。预防或最小化呼吸道病毒传播的一种策略是在进入点(例如口腔粘膜)处提供屏障。

为了有效，应用于口腔粘膜的阻隔膜需要是非水溶性的，以防止其立即分散在口腔粘膜的水性环境中。口腔喷雾剂通常以甘油为基础，因为甘油具有较小的抗微生物和抗病毒特性，并广泛用于FDA批准的伤口和烧伤治疗。屏障最好能有效地屏蔽革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌，以及包膜和非包膜病毒。

本公开的实施方案包括治疗有效浓度的印楝油和金丝桃提取物作为洗剂、水凝胶、口腔喷雾剂或鼻喷雾剂施用，以产生协同有益的抗微生物屏障，特别是当应用于口腔粘膜时。

本公开的其他实施方案包括治疗有效浓度的PUFA、印楝油和金丝桃提取物作为洗剂、水凝胶、口腔喷雾剂或鼻喷雾剂施用，以产生协同有益的抗微生物屏障，特别是当应用于口腔粘膜时。本公开的其他实施方案包括治疗有效浓度的PUFA作为洗剂、水凝胶、口腔喷雾剂或鼻喷雾剂施用，以产生有益的抗微生物屏障，特别是当施用于口腔粘膜时。

本公开的其他实施方案包括治疗有效浓度的PUFA、印楝油和金丝桃属植物提取物中的一种或多种，以及与卡拉胶和氯己定中的一种或多种的结合。

本公开的其他实施方案包括治疗有效浓度的PUFA和卡拉胶作为洗剂、水凝胶、口腔喷雾剂或鼻喷雾剂施用，以产生有益的抗微生物屏障，特别是当应用于口腔粘膜时。本公开的其他实施方案包括治疗有效浓度的PUFA和一种或多种酶(如下文将进行更详细描述)，该组合物作为洗剂、水凝胶、口腔喷雾剂或鼻喷雾剂施用，以产生有益的抗微生物屏障，特别是当施用于口腔粘膜时。

在一些情况下，本公开的抗微生物溶液可以降低病毒病原体的滴度，并且由抗微生物组合物提供的协同有益效果可以扩展到实现对微生物病原体的化合物无法单独实现的屏障功能。

例如，虽然所公开的抗微生物组合物的组分可能不能单独提供对冠状病毒的屏障功能，但该组合意外且有益地提供了屏障功能。在一些实施例中，虽然单独的PUFA(如ALA、EPA和DHA)可能无法单独提供对冠状病毒的屏障功能，但与PUFA(优选Ω-3脂肪酸)组合意外且有益地提供了屏障功能。

尤其出乎意料的是，食品和药物管理局将PUFA、印楝油、金丝桃油和卡拉胶视为食品添加剂，因此不认为它们本身具有药理作用或有毒。然而，它们的组合提供了转化效果，使得它们能够作为微生物屏障应用，特别是在口腔粘膜内。此外，在一些实施方案中，所公开的组合的转化效果能够使上呼吸道感染的症状缓解，特别是由病毒引起的上呼吸道感染。这可以包括减少例如流鼻涕、打喷嚏、咳嗽、喉咙痛和/或疲劳的症状。

在一些情况下，根据各种实施方案所公开的印楝油、金丝桃提取物、PUFA、卡拉胶和/或氯己定的协同组合减少了感染期间的炎症。这可有利于使气道内的肿胀减轻，以促进较不费力的呼吸和/或减少充血感。

在一些实施方案中，抗微生物组合物被配置为产生并维持相对于脂肪酸游离的脂肪酸。已经发现，通过提供其中脂肪酸(例如来自PUFA的那些和/或金丝桃提取物中天然存在的脂肪酸)氧化成游离脂肪酸的组合物，改善了组合物的抗病毒效果。这被认为是由于游离脂肪酸(比脂肪酸小得多)能够在病毒表面的刺突蛋白之间适应，并与病毒膜相互作用，在此过程中破碎或溶解膜并使病毒失活。大得多的脂肪酸受到刺突蛋白的阻碍，不能提供这种抑制病毒/杀病毒的特性。

除了在感染/疾病过程中的症状缓解之外，本公开的实施方案可以减少个体出现症状性感染的总天数(例如，如图5所示)。

如本发明提供的实施例中更详细地描述的那样，本公开的实施方案可以额外地或替代性地减少病毒载量，或减少感染个体内病毒粒子的检出。

当以喷雾形式提供时，所公开的抗微生物(优选抗病毒)组合物或至少其活性组分可使用本领域已知的惰性推进剂施用。这可有利于使所公开的组合物通过使用者和/或周围个体以可安全吸入的无毒推进剂的方式经口施用。

或者，所公开的抗微生物(优选抗病毒)组合物可以作为雾化喷雾剂而不是使用推进剂来递送。在这样的实施方案中，可能需要通过添加甘油和/或水来调节组合物的粘度，以获得期望的粘度，该粘度能够在改性组合物内递送临床有效量的活性组分，从而具有所公开的益处和有益健康的效果。

治疗或预防人类上呼吸道感染的方法可包括向口腔粘膜施用本发明公开的抗微生物化合物。这可以例如通过使用喉部或鼻喷雾剂来完成。本领域已知和使用的喷雾装置可用于这种用途。此类装置在每次致动时通常释放30-200μL，抗微生物组合物可根据功效和适口性进行配制。

作为非限制性实施例，所公开的喷雾制剂可通过喷雾到受影响个体的鼻和口中而施用到鼻粘膜和口咽粘膜中的一种，或优选地两者。在一些实施方案中，每次致动口腔喷雾剂和/或鼻喷雾剂时，所递送的抗微生物溶液的剂量为50μL–200μL。虽然已经描述了每次致动50μL–200μL剂量，但应理解，每次致动的任何合适体积可根据特定组合物、其中的成分和使用者的需求而进行适当递送。抗微生物溶液可提供在合适的容器/分配器(如喷雾瓶)中，该容器/分配器被配置为每次致动递送预定的量，如50μL-200μL，在一些实施方案中，容器/分配器可针对鼻腔和口腔的应用而独立地进行配置。

在一些实施方案中，抗氧化剂可以添加到抗微生物组合物中，以防止一种或多种组分(例如印楝油或金丝桃提取物)的氧化，从而能够随着时间的推移增加组合物的保质期和性能。

在一个实施方案中，所公开的抗微生物组合物可用于预防和/或治疗由冠状病毒例如SARS-CoV-1和SARS-CoV-2(或其变体)引起的感染。所公开的抗微生物组合物的施用(例如，通过向受影响个体的鼻部和口腔中喷施到鼻和口咽粘膜)与缩短个体遭受致病性冠状病毒感染的持续时间相关。在某些情况下，这种给药还与降低疾病的严重性相关，这可以有益地降低气道中的病毒载量，并降低传播给他人的风险或可能性。

因此，本公开的实施方案可以减少疾病病原体的传播和接触传染性。此外，如果给药减缓或减少症状性感染，就可以降低医疗保健系统的负担，包括使用紧急医疗服务和/或医疗设备(如呼吸机)。一般来说，这在使医疗保健系统不负担过重或导致可用性资源降低的情况下能够可有益地降低社区的发病率和死亡率。

各种Ω-3脂肪酸可以包括在所公开的组合物中。在一些实施方案中，Ω-3脂肪酸包括Ω-3脂肪酸的组合，例如ALA、EPA和DHA的组合。这些可以以冷水鱼皮中发现的平均浓度，优选大西洋鳕鱼皮中的平均浓度包括在Ω-3脂肪酸混合物中。

在一些实施例中，可调节PUFA的相对浓度，直到达到期望的益处。

附加实施方案

应用于口腔的蛋白水解酶可降低普通感冒的严重程度和持续时间。在一项随机研究中，发现含有蛋白水解酶的口服喷雾剂可有效降低普通感冒的严重程度和持续时间。该试验涉及267名自然发生普通感冒的参与者，他们被随机分配每天使用喷雾剂6次或不接受治疗。所述喷雾剂有多种上市品牌，包括

和CortaGrip，并含有来自冰岛Zymetech公司的源自鳕鱼的胰蛋白酶。

研究人员发现，治疗组前七天内杰克逊感冒分级的总体症状评分较低(曲线下面积：39.6vs.46.2)。对喉咙痛、鼻塞和头痛的个体症状有显著影响。治疗组所有方面的生活质量评分均得到改善，疾病持续时间缩短。

所述喷雾剂是一种含有甘油和胰蛋白酶的屏障溶液，所述胰蛋白酶从大西洋鳕鱼中获得。此前的体外研究表明，它可以钝化99％的导致普通感冒的病毒，包括流感和鼻病毒。然而，问题是对于这些产品来说，这些化合物的成本和适口性是已知的。

在一些实施方案中，本发明公开的抗微生物组合物可另外包括一种或多种酶，例如蛋白水解酶，优选源自海洋的蛋白酶或胶原酶，以维持或增加其作为抗微生物屏障的有效性。因为抗微生物组合物已经起到抗微生物屏障的作用(例如，在口腔粘膜中)，所以可以使用比以往更低的浓度来添加这种额外的蛋白酶，浓度大概是以蛋白酶本身作为抗微生物剂不再有效。这可有利地减少在商业产品中使用这种化合物的成本负担，并且还可以增加适口性。任选添加的口味增强添加剂，如薄荷醇，也可增加组合物的适口性。

在一些实施方案中，一种或多种酶，如蛋白酶和/或胶原酶，可将抗微生物组合物的有效性扩展到非包膜病毒和包膜病毒。虽然已经描述了蛋白酶或胶原酶，但应当理解，可以以任何合适的量来添加任何合适的酶或酶的组合。在一些实施方案中，酶或酶的组合包括木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶、胃蛋白酶、凝乳酶、组织蛋白酶、胰蛋白酶或任何其他合适的酶中的一种或多种。所添加的一种或多种酶为来源于动物的组分有利地提供了广谱功效。

在一些实施方案中，根据实施方案的抗微生物组合物可包含抗坏血酸(又称维生素C)，抗坏血酸可有利地降低抗微生物组合物的pH。已经发现，一些实施方案中包括的稳定剂在低pH下能起到更好的作用。在一些实施方案中，组合物的pH约保持在6以与鼻子的pH一致。为了将游离脂肪酸保持在特定pH水平(如上所述)，一些实施方案可包括柠檬酸三钠和/或柠檬酸。

虽然已经描述了抗微生物组合物的抗冠状病毒和预防冠状病毒的应用，但是应当理解，所述组合物可用于任何合适的微生物疾病，并且决不限于用于鼻和口的喷雾剂。本公开的抗微生物组合物可有利地配置为对包膜病毒(如RSV、眼睛感染、包括唇疱疹在内的口腔感染)和常规的非包膜病毒有效，并用于抗所述包膜病毒和非包膜病毒。

结论

除非另有定义，本发明中使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。

本公开的各个方面，包括设备、系统和方法，可以参考本质上是示例性的一个或多个实施方案或实施例来说明。如本发明所使用的，术语“示例性”意味着“用作示例、实例或说明”，并且不一定被解释为优于本发明所公开的其他实施方案。此外，对本公开或发明的“实施例”的引用包括对其一个或多个实施方案的具体引用，反之亦然，并且旨在提供不限制本发明范围的说明性示例，这由所附权利要求而不是以下描述来确定。

本公开可以在不脱离其精神或基本特征的情况下以其他特定形式体现。所描述的实施方案在所有方面被认为是仅用于说明而非限制。因此，本发明的范围由所附权利要求而不是前面的描述来确定。虽然出于说明本公开的实施方案的目的，某些实施例和细节已经包括在本发明和所附的公开中，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，在不脱离本公开或本发明的范围的情况下，可以对本发明公开的方法、产品、装置和设备进行各种改变。因此，虽然本发明中公开了各种方面和实施方案，但是可以预期其他方面和实施方案。在权利要求的等同含义和范围内的所有变化均包含在其范围内。

实施例

如本发明所述的以下示例仅用于说明性目的，并不旨在以任何方式限制本公开的范围。

实施例1-5

如图2所示，本公开的抗微生物溶液在包括印楝油和金丝桃属植物的提取物(优选金丝桃素)时可具有协同作用。在一些情况下，协同作用可使抗微生物活性的增加，优选增加杀病毒的活性，但其可额外地或替代性地包括将抗微生物的活性扩展到一种或多种基本上不受抗微生物溶液的单独组分影响的微生物。

例如，当单独用印楝油或金丝桃属植物的提取物治疗时，冠状病毒或由此引起的疾病可能并不会受到实质性影响(例如，被中和，或者变得不具传染性，或症状性感染的时间或发病率降低)。然而，当用包括印楝油和金丝桃属植物提取物(优选金丝桃素)组合的本公开的抗微生物溶液处理时，冠状病毒或由此引起的疾病能够受到影响。

这些数据证明了本公开的抗微生物溶液具有预料不到的协同作用。所述协同作用通过降低病毒滴度的数量或浓度和/或通过扩展对冠状病毒的有效性来观察到，如图2所示(例如，“印楝+金丝桃”和“印楝+金丝桃+载体”的结果)。

制备与图2所示结果相关的抗微生物溶液，并可包括下表1中提供的一种或多种溶液(每种抗微生物溶液分别对应于实施例1-5)。表1中公开的所有百分比均为相对于抗微生物溶液最终体积的体积比例。

表1

实施例1-5的抗微生物组合物与图2所示的数据在范围上相当(例如，“印楝+金丝桃”的结果)。

如表1和下面其他表格中所提供的，术语“载体”意指包括一种或多种药学上可接受的载体、添加剂和/或稀释剂，优选至少包括甘油，在一些实施方案中包括风味增强添加剂，如薄荷醇。术语“稳定剂”旨在包括抗氧化剂，优选包括油基抗氧化剂，其适于防止溶液中PUFA的氧化。

实施例6-10

下表2包括抗微生物组合物，所述抗微生物组合物含有不同浓度的载体以及印楝油和金丝桃属植物提取物的混合物。在实施例6-10的每个实施例中，印楝油和金丝桃属植物的提取物的相对浓度彼此保持成比例。每种制剂分别作为实施例6-10进行说明，并且与图2所示结果在范围上相当(例如，“印楝+金丝桃+载体”的结果)。

表2

	实施例6	实施例7	实施例8	实施例9	实施例10
						载体	10％	20％	33％	50％	80％
印楝油	45％	40％	33％	25％	10％
						金丝桃属植物的油	45％	40％	33％	25％	10％

实施例11-20

下表3包括具有不同浓度的载体、印楝油和金丝桃属植物的提取物的抗微生物组合物，其中以不同的相对浓度提供印楝油和金丝桃属植物的提取物。每种制剂分别如实施例11-20所示。实施例11-20与图2所示的数据在范围上相当(例如，“印楝+金丝桃+载体”的结果)。

表3

	实施例11	实施例12	实施例13	实施例14	实施例15
						载体	50％	60％	60％	60％	80％
印楝油	25％	20％	30％	10％	10％
						金丝桃属植物的油	25％	20％	10％	30％	10％
	实施例16	实施例17	实施例18	实施例19	实施例20
						载体	80％	80％	90％	90％	90％
印楝油	15％	5％	5％	9％	1％
						金丝桃属植物的油	5％	15％	5％	1％	9％

实施例21-25

如图3所示，本公开的抗微生物溶液在包括PUFA(优选Ω-3脂肪酸)、印楝油和金丝桃属植物的提取物(优选金丝桃素)中的每一种时可具有协同作用。在一些情况下，协同作用可使抗微生物的活性增加，优选增加杀病毒的活性，但其可额外地或替代性地包括将抗微生物的活性扩展到一种或多种基本上不受抗微生物溶液的单独组分影响的微生物。

例如，当单独用PUFA、印楝油或金丝桃属植物的提取物治疗时，冠状病毒或由此引起的疾病可能不会受到实质性影响(例如，被中和，或者变得不具传染性，或症状性感染的时间或发病率降低)。然而，当用包括PUFA(优选Ω-3脂肪酸)、印楝油和金丝桃属植物提取物(优选金丝桃素)组合的本公开的抗微生物溶液处理时，冠状病毒或由此引起的疾病能够受到影响。

这些数据证明了本公开的抗微生物溶液具有预料不到的协同作用。所述协同作用通过降低病毒滴度的数量或浓度和/或通过扩展对冠状病毒的有效性来观察到，如图4和5中的曲线所示(例如“载体+3”的结果)。

制备与图3和图4中所示结果相关的抗微生物溶液，并可包括下表4中提供的一种或多种溶液(每种抗微生物溶液分别对应于实施例21-25)。表4中公开的所有百分比均为相对于抗微生物溶液的最终体积的体积比例。

表4

实施例21-25的抗微生物组合物与图2和3所示的数据在范围上相当。例如“载体+3”的结果)。

实施例26-30

下表5包括抗微生物组合物，所述抗微生物组合物含有不同浓度的载体以及PUFA、印楝油和金丝桃属植物提取物的混合物。在实施例26-30的每个实施例中，PUFA、印楝油和金丝桃属植物的提取物的相对浓度彼此保持成比例。每种制剂分别以实施例26-30进行说明，并且在范围上与图2和3所示的结果相当(例如“载体+3”的结果)。

表5

	实施例26	实施例27	实施例28	实施例29	实施例30
						载体	0％	25％	40％	70％	85％
PUFA	33％	25％	20％	10％	5％
						印楝油	33％	25％	20％	10％	5％
金丝桃属植物的油	33％	25％	20％	10％	5％

实施例31-35

下表6包括具有不同浓度的载体、印楝油和金丝桃属植物提取物的抗微生物组合物，其中组合物中明显不含PUFA。每种制剂分别如实施例31-35所示。

表6

	实施例31	实施例32	实施例33	实施例34	实施例35
						载体	33％	50％	60％	80％	90％
PUFA	0％	0％	0％	0％	0％
						印楝油	33％	25％	20％	10％	5％
金丝桃属植物的油	33％	25％	20％	10％	5％

实施例36-40

下表7包括具有不同浓度的载体、PUFA和金丝桃属植物提取物的抗微生物组合物，其中组合物中明显不含印楝油。每种制剂分别如实施例36-40所示。

表7

	实施例36	实施例37	实施例38	实施例39	实施例40
						载体	33％	50％	60％	80％	90％
PUFA	33％	25％	20％	10％	5％
						印楝油	0％	0％	0％	0％	0％
金丝桃属植物的油	33％	25％	20％	10％	5％

实施例41-45

下表8包括具有不同浓度的载体、PUFA和印楝油的抗微生物组合物，其中组合物中明显不含金丝桃属植物的提取物。每种配方分别如实施例41-45所示。

表8

	实施例41	实施例42	实施例43	实施例44	实施例45
						载体	33％	50％	60％	80％	90％
PUFA	33％	25％	20％	10％	5％
						印楝油	33％	25％	20％	10％	5％
金丝桃属植物的油	0％	0％	0％	0％	0％

虽然在某些情况下与实施例31-45相关的组合物可影响微生物的致病性，但预计这些组合物不会以实施例21-30相关的组合物相同的程度影响冠状病毒或其他上呼吸道病原体。相反，与实施例31-45相关的组合物预计会对冠状病毒(或其他上呼吸道病原体)的滴度和/或致病性产生组合效果(如果有的话)，但没有如在实施例21-30中公开的组合物所见的协同作用。

对应于表6-8的实施例31-45在范围上与图3所示的数据相当(例如，“载波+2”的结果)。

实施例26

测试本公开的抗微生物组合物的气味和适口性。根据以下配方制备10个样品：

14毫升甘油

1.5毫升印楝油+金丝桃提取物制剂

1.5毫升Ω-3PUFA库存制剂

3毫升水

<1mL浓缩调味剂(对照中不添加调味剂)

根据添加的香料标记每个配方。五名志愿者对混合物进行了品尝和闻嗅，并对每种混合物按0-10的等级进行评分(0为最差味道/气味，10为最佳味道/气味)。在每次品尝和闻嗅测试之间，参与者会在两个样品之间闻嗅咖啡和品尝橘子，以中和之前任何愉快/不愉快的味道和/或气味，从而避免对后续品尝和闻嗅测试产生偏见。

下表9示出了结果，每列中从左到右的数字在前的表示闻嗅得分，在后的表示品尝得分。

表9

表9(续)

如上表9所示，最优选的调味剂包括平均得分为7.2的焦糖、平均得分为5.8的柠檬和平均得分均为5.4的杏仁或香草。

实施例27

使用下面的配方制备能够雾化的组合物，发现其在混合后稳定且至少30分钟不分离：

16毫升甘油(85％v/v)

1.5-2毫升印楝油+金丝桃提取物制剂(5％-10％v/v)

0.5-1毫升Ω-3PUFA库存(5％v/v)

3.0–3.5毫升水，以获得恰当的粘度

<1ml调味剂(例如，实施例26中列出的那些、尤加利或薄荷醇)。

在上述实施例配方中提供的印楝油+金丝桃提取物本身可以包括高含量的饱和脂肪酸及多不饱和脂肪酸。例如，印楝油+金丝桃提取物库存制剂可以包括下表10中列出的脂肪酸的浓度。

表10

脂肪酸	说明	含量(％)
			棕榈酸	饱和	13.5–14.1
硬脂肪酸	饱和	8.3–11.4
			油酸	Ω-9多不饱和	57.8–61.4
亚油酸	Ω-6多不饱和	10.3–12.6
			亚麻酸	Ω-3多不饱和	0.7–1.0

实施例28

在一项临床研究中，用本发明公开的喷雾组合物对70多名出现上呼吸道感染早期症状(例如，流鼻涕和喉咙痛)的患者进行了治疗，该喷雾组合物包括Ω-3PUFA、印楝油和金丝桃提取物。主治医生向每位患者的鼻腔和口咽腔施用喷雾剂，以减轻COVID-19(或其他致病病毒)对粘膜的影响。给药后，70名患者的症状有所减轻或完全消退。

本研究中患者所经历的症状缓解的示例如图5所示，其中在症状出现后(由感染后2天的垂直虚线所示)，向患者施用重复剂量的本发明公开的喷雾组合物，所述喷雾组合物包括Ω-3PUFA、印楝油和金丝桃提取物。如图所示，与未治疗的个体相比，症状的数量和/或严重性在程度和时间上显著减少了。

实施例29-33

如图6所示，当喷雾组合物中包含PUFA(优选Ω-3脂肪酸)时，本发明的抗微生物溶液可具有微生物屏障效应。在一些情况下，该效应可使抗微生物的活性增加，优选增加杀病毒的活性，但其可额外地或替代性地包括将抗微生物的活性扩展到一种或多种基本上不受抗微生物溶液的单独组分影响的微生物。

例如，当单独用PUFA治疗时，冠状病毒或由此引起的疾病可能不会受到实质性影响(例如，被中和，或者变得不具传染性，或症状性感染的时间或发病率降低)。然而，当用包括PUFA的组合、优选Ω-3脂肪酸的组合的本公开的抗微生物溶液处理时，冠状病毒或由此引起的疾病能够受到影响。

这些数据证明了本公开的抗微生物溶液取得了预料不到的效果。所述效果通过降低病毒滴度的数量或浓度和/或通过扩展对冠状病毒的有效性来观察到，如图6所示。

制备与图6所示结果相关的对照溶液，并可包括下面表11中提供的一种或多种溶液(每种抗微生物溶液分别对应于实施例29-33)。表11中公开的所有百分比均是相对于抗微生物溶液的最终体积的体积比例。

表11

	实施例29	实施例30	实施例31	实施例32	实施例33
						载体	0％	100％	50％	25％	75％
稳定剂	100％	0％	50％	75％	25％
						PUFA	0％	0％	0％	0％	0％

实施例29-33的对照溶液与图6所示的数据在范围上相当(例如，“仅稳定剂+载体”的结果)。

实施例34-38

下表12包括具有各种浓度的各种不同PUFA的抗微生物组合物。在实施例34中，PUFA的相对浓度彼此保持成比例。相对比例可以是等效比例(例如，每种原料含有100μg/mL的PUFA)，也可以是在设置环境中观察到的相对比例(例如大西洋鳕鱼鱼皮中每种PUFA的相对丰度)。在实施例35-39中，PUFA的相对浓度不同。每种制剂分别如实施例34-38所示，并且与图6所示的结果在范围上相当(例如，“仅PUFA”的结果)。

表12

	实施例34	实施例35	实施例36	实施例37	实施例38
						ALA	33％	25％	25％	50％	15％
EPA	33％	25％	50％	25％	15％
						DHA	33％	50％	25％	25％	70％

实施例39-43

下表13包括抗微生物组合物，所述抗微生物组合物除了含有氧化稳定剂，还含有的实施例6-10的每种PUFA具有不同的浓度。每种制剂分别如实施例39-43所示。对应于表13的实施例39-43与图6所示的数据在范围上相当(例如，“PUFA+稳定剂”的结果)。

表13

	实施例39	实施例40	实施例41	实施例42	实施例43
						PUFA	50％	75％	80％	90％	95％
稳定剂	50％	25％	20％	10％	5％

实施例44-53

下表14包括抗微生物组合物，所述抗微生物组合物除了含有氧化稳定剂和载体，还含有不同浓度的实施例34-38的每种PUFA。每种制剂分别如实施例44-53表示，并且与图6所示的数据在范围上相当(例如，“PUFA+稳定剂+载体”的结果)。

表14

	实施例44	实施例45	实施例46	实施例47	实施例48
						PUFA	50％	60％	60％	60％	80％
稳定剂	25％	20％	30％	10％	10％
						载体	25％	20％	10％	30％	10％
							实施例49	实施例50	实施例51	实施例52	实施例53
PUFA	80％	80％	90％	90％	90％
						稳定剂	15％	5％	5％	9％	1％
载体	5％	15％	5％	1％	9％

根据本公开的一个实施方案，对抗微生物喷雾剂在口腔和鼻腔中的保留进行了调查。使用UV光确认了在禁食期间抗微生物溶液的实施方案在口咽粘膜和鼻腔上至少可见两小时。这一发现是通过使用两个不同的带涂棒的药瓶将抗微生物溶液自给药到鼻子和喉咙来确定的。两次喷雾应用于喉咙的后部，每个鼻孔一次，共计四次喷雾。

在第一次测试中，对单人试验受试者，通过在暗房中用紫外光可视化喷雾来观察抗微生物溶液的存在，在两小时内总共观察四次，在此期间避免可能会破坏抗微生物溶液屏障功能的进食、饮水、锻炼、淋浴、刷牙和其他活动。该可视化能够检测到鼻子和喉咙中的喷雾剂荧光。用于这些可视化的紫外光源是9LED EFL41UV手电筒，其紫外波长为395-400nm，可从比利时哈纲雷的Velleman nv公司获得。

可见的喷雾模式和液滴都能够在喉咙和鼻孔中检测到。每15-30分钟检查一次亮度，亮度随时间降低，但在施用抗微生物溶液后一小时以上仍可见。施用后约90-120分钟，液滴变暗，有可见的喷雾线从鼻腔流下。液滴和喷雾线在施用后保持高达140分钟可见。结果如下表15所示。

表15

日期	嘴泵	鼻孔泵(每个)	实验的持续时间(分钟)
				2020.10.10	1	1	90
2020.10.11	1	1	105
				2020.10.12	1	1	140
2020.10.15	1	1	135

表15的四个测试结果表明，根据本公开的抗微生物溶液的实施方案具有在施用后持续一段时间内附着并保持在口咽粘膜和鼻腔上的能力，并具有可见的可检测程度。

通过施用基线抗微生物喷雾剂，然后在紫外光下可视化抗微生物溶液的存在来对七名人体试验受试者进行第二次测试。发射光的强度与口咽粘膜中存在的抗微生物溶液的量恰好成正比。要求人体试验受试者在两小时内避免任何食物或饮料，并每30分钟检查一次抗微生物喷雾剂的强度。对每个人体试验受试者中可见的抗微生物喷雾剂的量进行分级，评分为：0＝不可见；0.5＝非常微弱，低覆盖率；1＝微弱，但可见，低覆盖率；1.5＝明亮，可见，有限覆盖率；2＝有一定覆盖率的可见；2.5＝明亮和清晰可见的喷雾滴，覆盖率降低；3＝明亮和清晰可见的喷雾模式，且覆盖率良好。第二次试验的结果如下表16所示。

表16

受试者	嘴泵	鼻孔泵(每个)	0min	30min	60min	90min	120min
								A	2	1	3	NA	2	2	1
B	2	1	3	2	1.5	1.5	0
								C	2	1	3	3	2.5	3	2
D	2	1	3	3	2	2	2
								E	2	1	2	2	2	1.5	1
F	2	1	3	1	0	0	0
								G	2	1	3	2	2	1	1

在上述测试中，受试者A错过了30分钟的预约时间，受试者C报告从60分钟时的2.5增加到90分钟时的3(可能是由于从鼻储液器中释放了喷雾剂)，受试者E在120分钟时喝了少量饮料，但由于该可见影响可忽略，因此未排除这一数据点。受试者B在120分钟时给出“0”级，但仍能检测到口腔和鼻腔中抗微生物溶液的味道，15分钟后该味道再次出现，从鼻中喷出一股喷雾剂，将数量评级为“1”。

表16的数据如图7所示，其中几乎所有试验受试者的等级(即保留程度)和可见度(即口咽粘膜发出的光的强度)都很高，施用后立即中值为3(“明亮且清晰可见并有良好覆盖率的喷雾模式”)，并随时间下降。对于所有受试者，保留程度和可见度随时间稳步下降，大多数受试者(7人中有5人)在施用120分钟后仍可检测到，120分钟时的总体中值为1(“微弱，但可见，低覆盖率”)。即使许多报告喉咙粘膜评分为“0”的受试者仍然报告说有抗微生物溶液的味道，这表明鼻腔中至少存在残留量的喷雾剂。

表16和图7的数据表明，根据实施方案的抗微生物溶液保留在口咽粘膜中的能力能持续一段时间。此外，数据表明，例如分别对口和鼻施用的口腔喷雾剂和鼻喷雾剂的组合是合适的，其中口腔喷雾剂在喉咙后部能即时提供防护功能，鼻喷雾剂由于液滴从鼻腔落下而能提供长期保护。在一些实施方案中，根据本公开的施用抗微生物溶液的方法包括施用口腔喷雾剂，例如在一天的开始或轮班的开始，然后在一天或当班中的一个或多个时段施用鼻喷雾剂。

这些数据为如下提供了强有力的证据：所公开的抗微生物溶液可以通过保留在口咽粘膜上或口咽粘膜中并对任何遇到的病毒颗粒或微生物提供协同抗微生物和抗病毒作用而有益于治疗症状性上呼吸道感染。这有利地防止了感染，因为防止了感染宿主的组织，并且微生物和病毒颗粒在粘膜中被中和。

所公开的抗微生物溶液的观察到的益处包括减少或缓解症状，并且被认为能减少上呼吸道内的炎症。此外，这些数据表明，施用所公开的抗微生物喷雾剂后能降低病毒滴度。

实施例54

下表17包括抗微生物组合物，所述抗微生物组合物除了包括氧化稳定剂、载体和其他组分，还包括与印楝油组合的具有特定浓度的金丝桃油。

表17

在上述实施例54中，抗微生物组合物包含金丝桃属植物的提取物的组合，在实施例54中，对于其他用途，金丝桃油(如贯叶连翘油)、印楝油、Ω3PUFA，以及用于促进金丝桃油、印楝油和PUFA的组合使用的组分用作鼻和/或口喷雾剂。例如，抗微生物组合物包括抗坏血酸(又称维生素C)，以将抗微生物组合物的pH调节到合适的水平。在一个非限制性实例中，抗坏血酸可在0.05-0.20％w/v的范围内提供。抗微生物组合物可进一步包含卡拉胶(例如5-20％w/v)和/或氯己定(例如0.05-0.2％w/w，即0.05mg/L-0.2mg/L)。在一些实施方案中，包含卡拉胶和/或氯己定。

如2019年5月21日授权的美国专利No.10293011(其通过引用全部并入本发明中)所述，印楝油具有愈合、驱避、防腐和抗炎特性，而金丝桃的油提取物具有愈合、缓解疼痛和防腐或抗生素特性。印楝油可被视为皮肤病的最佳愈合剂和消毒剂之一。印楝油也可以用作关节和肌肉疼痛的抗炎药，而金丝桃可以治疗许多疾病，包括割伤、擦伤、淤伤、轻微烧伤、坐骨神经痛、受伤的神经、炎症、溃疡、有毒爬行动物的咬伤、肾脏和肺部疾病、过敏反应、焦虑和抑郁。

印楝油可通过冷/热辅助压制或通过溶剂提取从印楝树(Azadirachta indica(A.Juss))的成熟种子获得。可以监测所获得的油是否存在真菌毒素(黄曲霉毒素)。

圣约翰草(Hypericum perforatum)的油提取物可通过将圣约翰草花冠在阳光下在透明玻璃容器中的植物油中浸渍至少三至六周的过程获得。花冠可在最大程度成熟时收集。浸渍过程完成后，油提取物呈现典型的红宝石色。随后将油提取物过滤并储存在深色玻璃容器中，以避免由于暴露于自然光或紫外线而导致的氧化降解过程。这种制备金丝桃油提取物的特殊程序保证了其功效。

如以下实验结果所示，所述抗微生物组合物的组合显示多种有益性质，包括在一些实施方案中的愈合效果、驱避效果、抗炎效果、缓解疼痛效果和防腐效果。由于协同效应，与单一植物组分相比，每种组分的性能都得到了提高。也就是说，一些实施方案中的抗微生物组合物可以显示出消毒、抗炎、抗微生物、缓解疼痛、镇痛和/或其他性质，并且可以提供广谱保护，包括抗细菌，而不使用局部抗生素。

在一些实施方案中，金丝桃油包含萘并二蒽酮-金丝桃素-任选的间苯三酚-贯叶连翘素。特别是，金丝桃素可提供针对各种革兰氏阳性细菌的抗细菌效果和针对病毒(特别是包膜病毒)的抑制病毒或杀病毒效果，以及如上所述的其他益处。金丝桃素被认为有利地抑制了病毒与细胞膜融合的能力。

卡拉胶有利地提供了基于植物的组分，以防止病毒与使用者的粘膜和/或细胞相互作用，并且放大并协同增加金丝桃油和印楝油以及Ω3PUFA的抗病毒和抗细菌效果。氯己定有利地为抗微生物组合物提供了抗细菌效果，并协同扩大组合物的抗微生物效果。此外，氯己定有利地扩展了对非包膜或非包封病毒的保护。有利地是，卡拉胶和氯己定与金丝桃油和印楝油以及Ω3PUFA协同配合以提供广谱保护，同时最小化和减轻对使用者的刺激。

抗微生物组合物可包含一种或多种稀释剂，例如水、海水、植物油、石蜡、其组合或其他。

令人惊讶地发现，抗坏血酸、乳化剂(如可从丹麦尤尔斯明讷的Palsgaard A/S公司获得的

磷脂酸铵(AMP)4455)与抗微生物组合物的金丝桃油和印楝油和Ω-3PUFA的组合可有利地保持针对鼻子和/或口腔均适用的pH值，同时还能保持油基和水基组分的适当乳化，特别是考虑到脂肪酸和金丝桃油和印楝油柔和的性质。虽然已经描述了AMP4455，但应当理解，也可以使用其他乳化剂，例如聚氧乙烯(20)山梨醇酐单油酸酯(也称为“聚山梨酸酯80”)或其他乳化剂。在一些实施方案中，当使用聚山梨酸酯80以维持抗微生物组合物的所期望的pH时，例如可以调节抗坏血酸的量。例如，当提供聚山梨酸酯80作为乳化剂时，考虑到聚山梨酸酯80的较低pH，相对于使用AMP 4455的实施方案，抗坏血酸的量可相应减少。

实施例54的抗微生物组合物中的抗坏血酸含量有利地提供为使得抗微生物组合物的pH保持在期望水平。在一些实施方案中，组合物的pH约为6，例如以减少或减轻对敏感鼻腔的刺激。在一些实施方案中，组合物的pH约为5。已经发现，pH为5可有利地平衡游离脂肪酸(来自从金丝桃油和/或Ω3PUFA的溶液)的量，所述游离脂肪酸能提供抗微生物效果，同时最小化对使用者的鼻腔和/或口腔的刺激。在其他实施方案中，组合物的pH约为4.5。

虽然已经描述了上述pH水平，但应当理解，可以使用任何合适的pH，并且可以以合适的量包括任何pH调节组分。例如，可以使用柠檬酸三钠来调节组合物的pH至所需水平。在一些实施方案中，可以提供不同的鼻喷雾剂和口腔喷雾剂，考虑到鼻腔相对于口腔的敏感性，鼻喷雾剂可具有比口腔喷雾剂更高的pH。例如，口腔喷雾剂可具有约4.5的pH(低至例如4.0的低值，高至例如6.0的高值)，而鼻喷雾剂可以具有约5的pH值(低至例如4.6的低值和高至例如6.0)。在其他实施方案中，将相同的喷雾剂和组合物应用于鼻腔和口腔。

实施例54的抗微生物组合物含有抗氧化剂是有利的。实施例54的抗氧化剂是α-生育酚(又称维生素E)，但应理解，在其他实施方案和实施例中也可考虑任何合适的抗氧化剂。例如，可提供其他合适的维生素E生育酚，如β-生育酚、Γ-生育酚、δ-生育酚、维生素E生育三烯酚(例如α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、Γ-生育三烯酚和δ-生育三烯酚)，或其他合适的抗氧化剂。在储存期间，抗氧化剂可有利地稳定金丝桃油和印楝油和Ω3多不饱和脂肪酸，延长抗微生物组合物的保质期。

可以添加一种或多种组分来掩盖金丝桃油和印楝油的味道。在实施例54中，提供了尤加利油和甜叶菊的提取物或组分。在一些实施方案中，甜叶菊提取物是莱苞迪苷A(Reb-A)。在其他实施方式中，甜叶菊提取物是甜菊苷。已经令人惊讶地发现，风味相关组分有利地使抗微生物组合物对使用者适口，特别是用于鼻和/或口腔应用，而不会破坏活性成分(金丝桃油和印楝油和Ω3PUFA，它们的难闻气味出乎意料地难以掩盖)的抗微生物性能。虽然已经描述了尤加利油和甜叶菊的提取物或组分，但应当理解，可以使用任何合适的组分来增强抗微生物组合物的风味和/或气味。例如，可以使用其他甜味剂，如赤藓糖醇、木糖醇、人工甜味剂或任何其他合适的化合物。

例如，如琼脂油、阿加旺油、当归根油、大茴香油、阿魏油、秘鲁香脂油、侧柏油、丁香罗勒油、佛手柑油、黑胡椒油、黑云杉油、蓝艾菊(Blue Tansy)油、布楚油、桦树油、樟脑油、大麻花油、卡拉莫丁(Calamodin)油、藏茴香籽油、小豆蔻油、胡萝卜籽油、桂皮油、雪松油、芹菜籽油、香菜叶油、香叶油、肉桂树皮(Cinnamon Bark)油、岩蔷薇油、香茅油、快乐鼠尾草油、椰子油、丁香油、咖啡油、苦配巴油、芫荽油、艾菊(Costmary)油、闭鞘姜油、蔓越莓籽油、荜澄茄油、小茴香籽油、柏树油、香附子油、咖喱叶油、印蒿油、莳萝油、道格拉斯冷杉油、土木香油、榄香脂油、乳香油、茉莉油、薰衣草油、木兰油、橙花油、牛至油、胡椒薄荷油、玫瑰油、茶树油、茴香油、胡芦巴油、冷杉油、高良姜油、白松香油、大蒜油、天竺葵油、姜油、秋麒麟草油、葡萄柚油、青蜜桔油、蜡菊油、指甲花油、山核桃仁油、辣根油、牛膝草油、杜松浆果油、月桂油、薰衣草油、柠檬油、柠檬草油、酸橙油、山苍子油、沉香油、马郁兰油、蜂花油、亚洲薄荷油、辣木油、没药油、山香油、艾蒿油、芥末油、桃金娘油、橙花油、肉豆蔻油、橙油、鸢尾油、圣檀木油、欧芹油、广藿香油、紫苏油、胡薄荷油、橙叶油、松油、粉红胡椒油、桉油樟油油、红雪松油、罗马洋甘菊油、玫瑰果油、迷迭香油、紫檀木油、鼠尾草油、檀香油、檫树油、香旱芹油、五味子油、西伯利亚冷杉油、留兰香油、甘松油、云杉油、八角茴香油、柑橘油、龙蒿油、百里香油、铁杉油、姜黄油、缬草油、瓦里奥纳(Wariona)油、香根草油、西部红雪松油、野橙油、冬青油、西洋蓍草(Yarrow/Pom)油、依兰油或其他的一种或多种油可用作抗氧化剂，防腐剂和/或芳香剂。

在其中提供喷雾形式的不同的抗微生物组合物以分别应用于鼻腔和口腔的一些实施方案中，鼻喷雾剂可包括作为增香剂的尤加利油，而口腔喷雾剂可包括作为增味剂的薄荷油。应当理解，考虑到刺激的风险，风味和气味的优点，和/或喷雾剂根据需求在相应腔体中保持的能力，可以提供适合不同的鼻腔和口腔喷雾剂的不同的组分或组分组合。

抗微生物组合物可包含一种或多种防腐剂，如山梨酸钾。虽然已经描述了山梨酸钾，但应当理解，可以使用其他防腐剂或其组合，包括苯扎氯铵、丙二醇、抗微生物肽或其他。活性成分，即金丝桃油和印楝油和Ω3PUFA也能协同地提供防腐保护。

令人惊讶地发现，活性成分的组合，即金丝桃由和印楝油和Ω-3PUFA，对温度敏感，并且即使温度波动，以至少60％的v/v比例提供金丝桃油和印楝油仍能保持抗微生物组合物的功效。进一步令人惊讶地发现，提供金丝桃油和印楝油以及Ω3PUFA的抗微生物组合物，其中提供的印楝油比金丝桃油的比例小得多，例如，金丝桃：印楝的体积比大于或等于10:1，在一些实施方案中大于或等于100:1，在一些实施方案中大于或等于500:1，在一些实施方案中大于或等于1000:1，在一些实施方案中大于或等于1200:1，抗微生物组合物的广谱功效以及温度稳定性得以保持。

现在转向图8，其示出了正在进行的人体受试者研究的示意图。人体受试者研究包括招募受试者以确定合格性。这例如可包括COVID-19检测，以确定潜在受试者当前是否感染了COVID，或是否有表明最近感染了COVID-19的抗体。在基线筛查步骤后，确认合格性，并且合格受试者登记并获得知情同意，排除不合格受试者，例如，如果受试者已经感染或以前感染过COVID-19。正在进行的研究包括142名受试者，随机分为对照组(71名受试者)和研究组(71受试者)。

对照组和研究组的受试者均接受14天的每日给药和症状随访，并在第3天和第5天进行病毒拭子的聚合酶链式反应(PCR)检测以确定病毒载量。该研究还包括对出现较长并发症的患者进行1、3和6个月的长期随访。

图9显示了来自正在进行的人体受试者研究的四名受试者的初步数据。标号100示出了根据一个实施例的第一名受试者102和第二名受试者104使用抗微生物溶液，第三名受试者106和第四名受试者108使用对照溶液，循环阈值(Ct)值绘制在y轴上，样本时间绘制在x轴上，具体地说，其中1对应于第0天，2对应于第3天，3对应于第5天。较高的Ct值表示病毒载量的降低。如图所示，与第三名和第四名对照受试者106、108相比，第一名和第二名受试者102、104经历了病毒载量的减少。

图10显示了计划动物受试者研究的示意图。如图所示，动物受试者研究涉及三组不同的受试者：第一组涉及暴露于根据一个实施方案的抗微生物溶液，第二组包括阴性对照，第三组涉及暴露在可从瑞典隆德Enzymatica AB获得的

口腔喷雾剂。动物受试者可以是雪貂、小鼠、猴子、叙利亚仓鼠或其他动物。对于抗微生物溶液和

组，溶液在口中喷雾一次，以及每个鼻孔喷雾一次。然后，所有三组都接种了SARS-CoV-2。

接种后30分钟，抗微生物溶液和

组在口中接受另一次喷雾，以及在每个鼻孔中喷雾一次。接种后再过60分钟，抗微生物溶液和

组在口中接受另一次喷雾，以及在每个鼻孔中喷雾一次。然后，所有三组(接种后90分钟)接受鼻洗以测定病毒载量。24小时后，进行另一次用于病毒测定的鼻洗。虽然描述了SARS-CoV-2的暴露，但试验同样可能包括包膜病毒(例如冠状病毒、RSV、流感)、非包膜病毒(鼻病毒)或其他微生物。在该测试或与所公开的一些实施方案的抗微生物组合物相关的其他测试中，抗微生物组合物被评估为能够预防一种或多种微生物，如特定病毒。

图11示出了计划人体受试者研究的示意图。计划中的人体受试者研究包括招募82名健康志愿者进行筛选，并缩小到42名健康志愿者。选定的志愿者将被分为试验组(接受根据一个实施例的抗微生物溶液)和对照组，每组有21名参与者。在研究的第1天，试验组接受抗微生物溶液，两组都接种了SARS-CoV-2。在第3-10天的每一天，受试者都用拭子通过PCR测试确定病毒载量。

因为所公开的抗微生物喷雾剂的活性组分在所提供的浓度下对于摄入通常是安全的，并且被FDA和其他国际食品安全组织所批准，所以所公开的制剂可以有利地以非处方方式提供用于预防和/或症状性使用。因此，所公开的治疗组合物可以容易且广泛地配发。这可以有利地减少社区内传染性上呼吸道病毒病原体的传播，并有助于抗击流行病和/或大流行疫情，如COVID-19或类似疫情。

通过提供根据所公开的一些实施方案的抗微生物溶液，有利地解决了不适于预防和解决诸如新型冠状病毒的微生物和病毒的现有治疗的问题。本公开的解决实施方案提供了一种抗微生物溶液，其对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌、包膜和非包膜病毒以及其他微生物具有广谱的有效性。

在不脱离权利要求所定义的本发明的精神和范围的情况下，可以对所示实施例进行本发明所示的发明特征进行各种改变和/或修改，以及本发明所示原理的附加应用，所述改变和/或修改以及附加应用是相关领域的技术人员和拥有本公开的人所能够想到的，并且被认为在本公开的范围内。因此，虽然本发明中公开了各种方面和实施方案，但是可以考虑其他方面和实施方案。虽然与本发明所述的方法和组分类似或等效的许多方法和组分可用于实践本公开的实施方案，但本发明仅描述了某些组分和方法。

还将理解，根据本公开的某些实施方案的系统、设备、产品、试剂盒、方法和/或工序可以包括、合并或以其他方式包括本发明公开和/或描述的其他实施例中描述的属性、特征(例如，组件、构件、元件、部件和/或部分)。因此，某些实施方案的各种特征可以与本公开的其他实施例兼容、组合、包括在其中和/或并入其中。因此，相对于本公开的特定实施例的某些特征的公开不应被解释为将所述特征的应用或包含所述特征限制于特定实施例。相反，应当理解，其他实施方案也可以包括所述特征、构件、元件、部件和/或部分，而不必脱离本公开的范围。

此外，除非一个特征被描述为需要另一特征与其组合，否则本发明中的任何特征可以与本发明中公开的相同或不同实施方案的任何其他特征组合。此外，为了避免示例性实施方案的模糊方面，本发明不特别详细地描述说明性系统、方法、装置等的各种公知方面。然而，本发明也考虑了这些方面。

应当理解，在本公开的一个实施方案下，不一定可以实现所有目的或优点。本领域技术人员将认识到，外骨骼和用于制造外骨骼的方法可以以实现或优化本发明所教导的一个优点或一组优点而不实现本发明所教导或揭示的其他目的或优点的方式来体现或实施。

本领域技术人员将认识到各种公开特征的可互换性。除了本发明所描述的变型之外，本领域普通技术人员可以混合和匹配每个特征的其他已知等效物，以根据本公开的原理提供抗微生物溶液。本领域技术人员将理解，本发明所描述的特征可适用于其他类型的溶液。

尽管本公开描述了抗微生物溶液的某些示例性实施方案和示例，但本领域技术人员将理解，本公开超出了具体公开的抗微生物溶液实施方案，并扩展到本公开的其他替代实施方案和/或用途及其明显的修改和等价物。本公开不应受上述公开实施方案的限制，并且可以扩展到可以采用本发明所描述的特征的其他应用。

Claims (20)

1.一种抗微生物溶液，包括治疗有效量的：

金丝桃属植物的提取物；

任选地与一种或多种药学上可接受的载体、添加剂和/或稀释剂组合。

2.根据权利要求1所述的抗微生物溶液，进一步包含印楝油。

3.根据权利要求2所述的抗微生物溶液，其中所述印楝油包括亚油酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸、α-亚油酸或棕榈油酸中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的抗微生物溶液，其中所述印楝油包括6-16％的亚油酸、25-54％的油酸、16-33％的棕榈酸和9-24％的硬脂酸。

5.根据权利要求1所述的抗微生物溶液，其中所述金丝桃属植物的提取物包括来自贯叶连翘(Hypericum perforatum)的提取物。

6.根据权利要求1所述的抗微生物溶液，其中所述金丝桃属植物的提取物包括作为主要活性成分的金丝桃素。

7.根据权利要求2所述的抗微生物溶液，其中所述印楝油和所述金丝桃属植物的提取物在所述抗微生物溶液中以相等比例(v/v)存在。

8.根据权利要求2所述的抗微生物溶液，其中所述印楝油占所述抗微生物溶液的至多10％(v/v)。

9.根据权利要求2所述的抗微生物溶液，其中所述金丝桃属植物的提取物和所述印楝油以大于100:1的比例提供。

10.根据权利要求1所述的抗微生物溶液，其中所述金丝桃属植物的提取物占所述抗微生物溶液的至多5％(v/v)。

11.根据权利要求1所述的抗微生物溶液，其中所述金丝桃属植物的提取物占所述抗微生物溶液的至多10％(v/v)。

12.根据权利要求1所述的抗微生物溶液，进一步包含卡拉胶。

13.根据权利要求1所述的抗微生物溶液，其进一步包含氯己定。

14.根据权利要求1所述的抗微生物溶液，其中所述药学上可接受的载体包括甘油。

15.根据权利要求1所述的抗微生物溶液，其中所述一种或多种药学上可接受的添加剂包括风味增强添加剂，优选薄荷醇。

16.根据权利要求1所述的抗微生物溶液，其中所述一种或多种药学上可接受的载体、添加剂和/或稀释剂占所述抗微生物溶液的至少10％(v/v)。

17.根据权利要求1所述的抗微生物溶液，其中所述一种或多种药学上可接受的载体、添加剂和/或稀释剂占所述抗微生物溶液的至少33％(v/v)。

18.根据权利要求1所述的抗微生物溶液，其中所述抗微生物溶液以洗剂、水凝胶、口腔喷雾剂和/或鼻喷雾剂的形式递送。

19.根据权利要求18所述的抗微生物溶液，其中所述抗微生物溶液以每次致动所述口腔喷雾剂和/或鼻喷雾剂50μL-200μL的剂量递送。

20.一种治疗或预防微生物病原体感染人类上呼吸道的方法，包括向使用者的口和/或鼻施用抗微生物溶液，所述抗微生物溶液包括：

印楝油，和

金丝桃属植物的提取物；

任选地与一种或多种药学上可接受的载体、添加剂和/或稀释剂组合。

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