CN115466778A - 一种微生物检测方法及冰箱 - Google Patents

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Abstract

本申请提供一种微生物检测方法及冰箱，通过选用密度比水小，防止培养基解冻后溶解于水中的载体片，在冷冻环境的杀菌培养基表面增加载体片承载微生物进行杀菌，杀菌结束后将表面可能带有的载体片平移或者倒扣到新的培养基表面进行培养，防止微生物溶解在培养基解冻后的液体中无法计数。本申请通过载体片承载微生物，在杀菌过程和培养过程分别用两个培养基，载体片由杀菌过程的培养基平移或者倒扣到新的培养基进行培养，避免杀菌培养基在冷冻过程中冷冻且培养过程中解冻后，微生物溶解在液体中无法计数的问题。

Description

一种微生物检测方法及冰箱
技术领域
本申请涉及微生物检测技术领域，尤其涉及一种微生物检测方法及冰箱。
背景技术
微生物测定法是指在规定条件下选用适当微生物测定某物质含量的方法。被测定的物质可以是某些生物生长所必需的维生素、氨基酸等，也可以是抑制某些微生物生长的抗生素、农药等。
常见的检测方法有:生长量测定法、微生物计数法、生理指标法和快速微生物检测等。微生物生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。
通常杀菌、除菌、抗菌等效果需要通过对细菌培养计数，通常的方法包括：根据对样品污染状况的估计，选择适宜稀释度的样品匀液，每个稀释梯度分别吸取样品匀液至一次性无菌培养皿中，及时向培养皿中倾注，并转动平皿使其混合均匀，置于水平台面待其完全凝固；对于细菌培养基，先将培养基倾注至无菌培养皿中，置于水平台面待其完全凝固，凝固后吸取样品匀液至培养基上，使用经过高压蒸汽灭菌的涂布器将样品均匀涂布至培养基表面，直至培养基表面干燥。对培养皿微生物培养后进行计数，然后与对照组对比，确定杀菌、除菌和抗菌等效果。
上述方法适用于0℃以上环境的微生物含量检测，低于0℃以下时用于承载微生物的培养基冻结，在37℃或者28℃温度条件下培养后，培养基解冻表面析出水分，微生物溶解在水里导致无法计数。
发明内容
本申请提供了一种微生物检测方法及冰箱，以解决目前低于0℃以下环境中微生物检测、培养困难的问题。
第一方面，本申请提供一种微生物检测方法，方法包括：
配置营养琼脂固体培养基,灭菌以及冷却后制备固体培养基；
裁剪培养皿大小的载体片于50℃以上灭菌处理；
将灭菌后的载体片放在所述固体培养基表面；
制备预设稀释度的目标菌的菌液，吸取液体菌液均匀涂布在所述载体片上；
把涂布菌液的培养皿放置在0℃以下的杀菌区进行杀菌，同时设置相同环境条件下未经过杀菌的对照组；
将杀菌后的培养皿和对照培养皿从0℃以下低温环境取出，在室温下放置待培养基解冻；
取出上表面含有微生物的载体片，将载体片平移至新配置的相同培养基表面，或者倒扣在新配置的固体培养基表面，在预设温度下培养24-48小时后计算对照组和杀菌组载体片的菌落数。
通过微生物检测方法解决目前低于0℃以下环境中微生物检测、培养困难的问题。
结合第一方面，在第一方面一种可能的实现方式中，所述载体片的密度小于水的密度。
结合第一方面，在第一方面一种可能的实现方式中，所述载体片具有吸水性。
结合第一方面，在第一方面一种可能的实现方式中，所述载体片的厚度小于1mm。
结合第一方面，在第一方面一种可能的实现方式中，当载体片倒扣在新配置的固体培养基表面时，新的固体培养基厚度小于1mm。
结合第一方面，在第一方面一种可能的实现方式中，把涂布菌液的培养皿放置在0℃以下的杀菌区进行杀菌之前，向所述培养皿添加丙烯酸和/或甲基丙烯酸。
结合第一方面，在第一方面一种可能的实现方式中，所述目标菌为大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌、枯草杆菌、白色念球菌等中的至少一种。
结合第一方面，在第一方面一种可能的实现方式中，所述固体培养基还包含其他碳源、氮源、无机盐和微量元素。
第二方面，本申请提供一种用于微生物检测的冰箱,所述冰箱包括杀菌系统和控制器；所述杀菌系统包括紫外光照射装置、光催化装置、臭氧装置、负离子装置和纳米雾化装置中的至少一种,所述杀菌系统与所述控制器电连接，所述控制器被配置为响应于杀菌指令，启动所述杀菌系统，以对杀菌区执行杀菌操作。
结合第二方面，在第二方面一种可能的实现方式中，还包括控温系统；
所述控温系统的专区可调温区为-30℃～0℃；所述专区空气温度为±2℃以内；所述控温系统﹐用于对间室的温度进行控制；当检测到间室温度为0～-5℃时﹐专区空气温度到达设定温度5℃时,停止化霜,当专区空气温度小于等于设定温度时再次启动化霜,如此反复直到化霜完全；当检测到间室温度为-6℃以下时，专区空气温度到达设定温度20℃时,停止化霜﹐当专区空气温度小于等于设定温度时再次启动化霜,如此反复直到化霜完全。
由以上技术方案可知，本申请提供一种微生物检测方法及冰箱，通过选用密度比水小，防止培养基解冻后溶解于水中的载体片，在冷冻环境的杀菌培养基表面增加载体片承载微生物进行杀菌，杀菌结束后将表面可能带有的载体片平移或者倒扣到新的培养基表面进行培养，防止微生物溶解在培养基解冻后的液体中无法计数。本申请通过载体片承载微生物，在杀菌过程和培养过程分别用两个培养基，载体片由杀菌过程的培养基平移或者倒扣到新的培养基进行培养，避免杀菌培养基在冷冻过程中冷冻且培养过程中解冻后，微生物溶解在液体中无法计数的问题。
附图说明
为了更清楚地说明本申请的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为一种微生物检测方法的流程图；
图2为本申请一种实施例的一种微生物检测方法的示意图。
具体实施方式
下面将详细地对实施例进行说明，其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时，除非另有表示，不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下实施例中描述的实施方式并不代表与本申请相一致的所有实施方式。仅是与权利要求书中所详述的、本申请的一些方面相一致的系统和方法的示例。
微生物测定法是指在规定条件下选用适当微生物测定某物质含量的方法。被测定的物质可以是某些生物生长所必需的维生素、氨基酸等，也可以是抑制某些微生物生长的抗生素、农药等。
在一些实施例中，微生物检测方法包括:生长量测定法、微生物计数法、生理指标法和快速微生物检测等。微生物生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。
在杀菌、除菌、抗菌等效果需要通过对细菌培养计数，即根据对样品污染状况的估计，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，每个稀释梯度分别吸取1mL样品匀液至一次性无菌培养皿中，及时向培养皿中倾注20mL左右冷却至46℃左右的YPD培养基或孟加拉红培养基，并转动平皿使其混合均匀，置于水平台面待其完全凝固；对于细菌培养基，先将20mL左右冷却至46℃左右的LB培养基倾注至无菌培养皿中，置于水平台面待其完全凝固，凝固后吸取500μL样品匀液至LB培养基上，使用经过高压蒸汽灭菌的涂布器将样品均匀涂布至培养基表面，直至培养基表面干燥。细菌于37℃培养24-48h；酵母菌和霉菌于28℃培养48-72h。对培养皿微生物培养后进行计数，然后与对照组对比，确定杀菌、除菌和抗菌等效果。
上述方法适用于0℃以上环境的微生物含量检测，低于0℃以下时用于承载微生物的培养基冻结，在37℃或者28℃温度条件下培养后，培养基解冻表面析出水分，微生物溶解在水里导致无法计数。
为了解决以上问题，本申请提供一种微生物检测方法，以避免杀菌培养基在冷冻过程中冷冻且培养过程中解冻后，微生物溶解在液体中无法计数的问题。
冰箱可以用于微生物检测方法的程序步骤，以下实施例中由冰箱所执行的步骤，均由控制器与冰箱中其他组件协同完成。下面首先对冰箱的结构和功能等方面进行详细说明。本申请实施例提供的冰箱包括压缩机、制冷风机、冷凝风机、门体(箱门)、箱体以及显示屏；所述门体设置于所述箱体外侧；所述压缩机、制冷风机与冷凝风机设置于所述箱体内，所述控制器设置于所述箱体上、箱体内，所述控制器与所述压缩机、所述制冷风机、所述冷凝风机电连接。
为实现微生物检测方法，所述冰箱包括杀菌系统；所述杀菌系统包括紫外光照射装置、光催化装置、臭氧装置、负离子装置和纳米雾化装置中的至少一种,所述杀菌系统与冰箱中的控制器电连接，所述控制器被配置为响应于杀菌指令，启动所述杀菌系统，以对杀菌区执行杀菌操作。具体微生物检测方法的步骤如下，图1所示：
S101：配置营养琼脂固体培养基,灭菌,冷却后制备固体培养基平板。
平板培养基是将溶解后的培养基分注15-20mL到无菌平皿里，使之凝固。
TCBS琼脂培养基、DHL琼脂培养基:加温溶解后，分注、凝固、干燥表面。为了防止沉淀的发生，加温溶解后要充分混匀。
EMB琼脂培养基：高压灭菌后，分注、凝固、干燥表面。卵黄甘露醇高盐琼脂培养基:将鸡蛋放在95％酒精中浸泡1小时左右，用酒精棉纱布擦拭蛋壳表面，打开鸡蛋取出卵黄。加入经高压灭菌后冷却到55～60°℃培养基里(6％卵黄)搅拌摇匀凝固后干燥表面。若培养基温度过高，卵黄凝固，过低则培养基分注时开始结块，所以操作要迅速。分往后将平皿盖打开置于无菌工作台/恒温培养箱内使培养基表面干燥。干燥时间基准如下：无菌超净台：15分钟37C恒温箱内倒置：20-30分钟。
在本申请的部分实施例中，所述固体培养基还包含其他碳源、氮源、无机盐和微量元素。所述碳源为废糖蜜、甘蔗汁、玉米粉、蔗糖、果糖、葡萄糖、可溶性淀粉、二氧化碳或其至少2种的混合物。所述氮源为有机氮化合物、无机氮化合物或其混合物。所述无机盐为钠盐、镁盐、钾盐、铁盐、钙盐、硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、乙酸盐或其至少2种的混合物。所述微量元素为维生素B1、维生素B6、维生素B12、维生素H、6-苄氨基腺嘌呤或其至少2种的混合物。所述有机氮化合物为酵母提取物、酵母膏、玉米浆、蛋白胨、氨基酸、谷氨酸钠或其至少2种的混合物；和/或，所述无机氮化合物为尿素、亚硝酸盐、硝酸盐、无机铵盐或其至少2种的混合物。
S102：裁剪培养皿大小的载体片,高温灭菌。
其中，所述载体片的密度小于水的密度，所述载体片具有吸水性，所述载体片的厚度小于1mm。微生物载体片的材料选择：密度比水小，防止培养基解冻后溶解于水中；且载体片能够吸收水分，为了继续给载体片表面的微生物提供营养。
S103：将一块灭菌的载体片放在固体培养基表面,抹平。
S104：制备适宜稀释度的目标菌菌液，吸取适量的液体菌液均匀涂布在培养皿固体培养基表面的载体片表面。
所述目标菌为大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌、枯草杆菌、白色念球菌等中的至少一种。
S105：把涂布菌液的培养皿放置在0℃以下的低温环境进行杀菌，同时设置相同环境条件下未经过杀菌的对照组。
把涂布菌液的培养皿放置在0℃以下的杀菌区进行杀菌之前，向所述培养皿添加丙烯酸和/或甲基丙烯酸。在活菌数试验的培养基中添加丙烯酸和/或甲基丙烯酸作为吸附剂，培养基也不着色而维持透明性，因此可准确地识别在培养后形成的菌落。进而，若将丙烯酸和/或甲基丙烯酸吸附剂从试样液分离除去后添加到培养基中，进行培养，则可以更准确地进行菌落的识別，因此，例如在琼脂平板混释法等中，可准确、迅速地进行菌落的测量。
将菌悬液小心滴在平板培养基表面中央位置，拿无菌涂布棒平放在平板培养基表面，将菌悬液先沿一条直线轻轻来回推动，使之分布均匀，然后改变方向沿另一条垂直线来回推动，平板内边缘处可改变方向用涂布棒再涂布几次，使菌液均匀吸收。室温下静置5～l0min，使菌液渗透于培养基。
S106：把杀菌后的培养皿和对照培养皿从0℃以下低温环境取出，在常温下放置待培养基缓慢解冻。
S107：用灭菌的镊子取出上表面可能含有微生物的载体片，将载体片平移至新配置的相同培养基表面，或者倒扣在新配置的固体培养基表面，适宜温度下培养24-48小时后计算对照组和杀菌组载体片的菌落数，评价杀菌效果。其中，当载体片倒扣在新配置的固体培养基表面时，新的固体培养基厚度小于1mm。
在冷冻环境的杀菌培养基表面增加载体片承载微生物进行杀菌，杀菌结束后将表面可能带有的载体片平移或者倒扣到新的培养基表面进行培养，防止微生物溶解在培养基解冻后的液体中无法计数。
下面结合具体实施例进行详细说明，如图2所示：根据培养基形状裁剪蚕丝薄片，灭菌后平铺于经过灭菌的培养基表面，将该培养皿放入冰箱冷冻室进行杀菌处理。杀菌完成后盖上培养皿盖子，取出培养皿放置无菌的常温环境进行解冻，待解冻完成，在无菌环境用无菌的镊子平移取出培养皿的蚕丝薄片，析干流动水分后平移至新的无菌培养皿的培养基表面，或者倒扣无菌培养皿的培养基表面进行培养，计数。
本申请部分实施例还提供一种用于微生物检测的冰箱,其中，冰箱中用于微生物检测的专区在一些实施例中可以称为杀菌区，所述杀菌区包括杀菌系统；所述杀菌系统包括紫外光照射装置、光催化装置、臭氧装置、负离子装置和纳米雾化装置中的至少一种,所述杀菌系统与冰箱中的控制器电连接，所述控制器被配置为响应于杀菌指令，控制所述杀菌系统启动，以对杀菌区执行杀菌操作。
冰箱可以获取用户所发出的杀菌指令。所述杀菌指令可以是由用户直接发送给所述冰箱，也可以由用户通过其他设备发送冰箱。
在一些实施例中，用户可以通过控制装置向冰箱发送杀菌指令，其中，控制装置可以为遥控器、手机、平板电脑等装置。
在一些实施例中，用户也可以直接向冰箱发送杀菌指令。例如直接向冰箱发送语音指令、触控指令等。
冰箱中的控制器在接收到所述杀菌指令后，控制所述杀菌系统启动，以使冰箱对杀菌区执行杀菌操作；在所述杀菌系统启动的同时，冰箱中的控制器启动计时操作，在计时时长达到预设时长时，控制所述杀菌系统关闭。
在本申请的部分实施例中，所述杀菌系统可以为紫外光照射装置，所述紫外光照射装置的波长在400nm～430nm的范围﹐光照强度在14lx/m2.s～20lx/m2.s的范围。
用于微生物检测的冰箱所述还包括控温系统；所述控温系统可调温区为-30℃～0℃；所述专区空气温度为±2℃以内；所述控温系统﹐用于对间室的温度进行控制；当检测到间室温度为0～-5℃时﹐专区空气温度到达设定温度+5℃时,停止化霜,当专区空气温度小于等于设定温度时再次启动化霜,如此反复直到化霜完全；当检测到间室温度为-6℃以下时，专区空气温度到达设定温度+20℃时,停止化霜﹐当专区空气温度小于等于设定温度时再次启动化霜,如此反复直到化霜完全。
由以上技术方案可知，本申请提供一种微生物检测方法及冰箱，通过选用密度比水小，防止培养基解冻后溶解于水中的载体片，在冷冻环境的杀菌培养基表面增加载体片承载微生物进行杀菌，杀菌结束后将表面可能带有的载体片平移或者倒扣到新的培养基表面进行培养，防止微生物溶解在培养基解冻后的液体中无法计数。本申请通过载体片承载微生物，在杀菌过程和培养过程分别用两个培养基，载体片由杀菌过程的培养基平移或者倒扣到新的培养基进行培养，避免杀菌培养基在冷冻过程中冷冻且培养过程中解冻后，微生物溶解在液体中无法计数的问题。
本申请提供的实施例之间的相似部分相互参见即可，以上提供的具体实施方式只是本申请总的构思下的几个示例，并不构成本申请保护范围的限定。对于本领域的技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下依据本申请方案所扩展出的任何其他实施方式都属于本申请的保护范围。

Claims (10)

1.一种微生物检测方法，其特征在于，方法包括：
配置营养琼脂固体培养基,灭菌以及冷却后制备固体培养基；
裁剪培养皿大小的载体片于50℃以上灭菌处理；
将灭菌后的载体片放在所述固体培养基表面；
制备预设稀释度的目标菌的菌液，吸取液体菌液均匀涂布在所述载体片上；
把涂布菌液的培养皿放置在0℃以下的杀菌区进行杀菌，同时设置相同环境条件下未经过杀菌的对照组；
将杀菌后的培养皿和对照培养皿从0℃以下低温环境取出，在室温下放置待培养基解冻；
取出上表面含有微生物的载体片，将载体片平移至新配置的相同培养基表面，或者倒扣在新配置的固体培养基表面，在预设温度下培养24-48小时后计算对照组和杀菌组载体片的菌落数。
2.根据权利要求1所述的微生物检测方法，其特征在于，所述载体片的密度小于水的密度。
3.根据权利要求1所述的微生物检测方法，其特征在于，所述载体片具有吸水性。
4.根据权利要求1所述的微生物检测方法，其特征在于，所述载体片的厚度小于1mm。
5.根据权利要求1所述的微生物检测方法，其特征在于，当载体片倒扣在新配置的固体培养基表面时，新的固体培养基厚度小于1mm。
6.根据权利要求1所述的微生物检测方法，其特征在于，把涂布菌液的培养皿放置在0℃以下的杀菌区进行杀菌之前，向所述培养皿添加丙烯酸和/或甲基丙烯酸。
7.根据权利要求1所述的微生物检测方法，其特征在于，所述目标菌为大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌、枯草杆菌、白色念球菌等中的至少一种。
8.根据权利要求1所述的微生物检测方法，其特征在于，所述固体培养基还包含其他碳源、氮源、无机盐和微量元素。
9.一种用于微生物检测的冰箱,其特征在于,用于实施权利要求1-8任一项所述的微生物检测方法；所述冰箱包括杀菌系统和控制器；所述杀菌系统包括紫外光照射装置、光催化装置、臭氧装置、负离子装置和纳米雾化装置中的至少一种,所述杀菌系统与所述控制器电连接，所述控制器被配置为响应于杀菌指令，启动所述杀菌系统，以对杀菌区执行杀菌操作。
10.根据权利要求9所述的冰箱，其特征在于，还包括控温系统；
所述控温系统的专区可调温区为-30℃～0℃；所述专区空气温度为±2℃以内；所述控温系统﹐用于对间室的温度进行控制；当检测到间室温度为0～-5℃时﹐专区空气温度到达设定温度5℃时,停止化霜,当专区空气温度小于等于设定温度时再次启动化霜,如此反复直到化霜完全；当检测到间室温度为-6℃以下时，专区空气温度到达设定温度20℃时,停止化霜﹐当专区空气温度小于等于设定温度时再次启动化霜,如此反复直到化霜完全。
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