CN115463093A - 一种奥沙利铂制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种奥沙利铂制剂及其制备方法，更具体的为一种含有奥沙利铂脂质体、制备方法及其制剂。本发明利用咪唑类化合物修饰的磷脂、三萜皂苷溶于有机溶剂，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，再加入溶有奥沙利铂的缓冲溶液，旋转蒸发，振摇，超声，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。通过筛选咪唑类化合物修饰磷脂、三萜皂苷作为脂质体膜材料，优选制备方法，提高了奥沙利铂脂质体的载药量和物理稳定性，降低渗漏率。
Description
技术领域
本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种奥沙利铂制剂及其制备方法，更具体的涉及一种奥沙利铂脂质体、制备方法及其制剂。
背景技术
结肠直肠癌属于胃肠道中常见的恶性肿瘤，早期症状不明显，随着癌肿的增大而表现排便习惯改变、便血、腹泻、腹泻与便秘交替、局部腹痛等症状，晚期则表现贫血、体重减轻等全身症状。其发病率和病死率在消化系统恶性肿瘤中仅次于胃癌、食管癌和原发性肝癌。奥沙利铂是继顺铂、卡铂之后的第3代铂族金属抗肿瘤药物，是对结直肠癌具有显著活性的络铂类药物。目前属于临床治疗结直肠癌的一线推荐化疗药，奥沙利铂能够与DNA发生结合，阻断DNA的复制和转录，发挥抗肿瘤活性的作用。
脂质体作为一种新型的药物载体，经表面修饰后其具有靶向性、缓释性、提高药物的稳定性、降低药物毒性等特点。
中国专利CN103181898公开了一种奥沙利铂脂质体及其应用，包括奥沙利铂、磷脂、胆固酸、泊洛沙姆F68，磷脂与胆固醇的质量比为3～8：1，奥沙利铂与磷脂的质量比为1：30～60，泊洛沙姆F68与磷脂的质量比为1：5～15。但是发明中缺少对脂质包封率的实验数据，难以确定是否会发生渗漏情况。
中国专利CN113876712公开了一种奥沙利铂脂质体注射剂，由奥沙利铂、氨基酸修饰的磷脂、海藻糖、缓冲液制备而成。
发明内容
克服现有技术的不足，本发明提供了一种奥沙利铂脂质体，解决了奥沙利铂脂质体载药量低的问题，通过优选载体材料和制备工艺提高奥沙利铂脂质体的载药量和稳定性。
具体而言，本发明的技术方案如下：
本发明提供了一种奥沙利铂脂质体的制备方法：
将咪唑类化合物修饰的磷脂、三萜皂苷溶于有机溶剂，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；加入溶有奥沙利铂的缓冲溶液，旋转蒸发，振摇，超声，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
其中，所述咪唑类化合物修饰的磷脂的制备方法为：咪唑类化合物与磷脂按摩尔比1-3:1-3的比例溶于有机溶剂，超声，30-40℃水浴加热回流，放置避光通风处，结晶，过滤，得到咪唑类化合物修饰的磷脂。
进一步的，所述咪唑类化合物为咪唑或5-甲基咪唑，优选为5-甲基咪唑。
进一步的，所述磷脂选自磷脂酰胆碱、二棕榈酰胆碱、二硬脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺中的一种，优选为二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱。
进一步的，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、三氯甲烷、异丙醇中的一种或多种，优选为甲醇。
进一步的，所述咪唑类化合物修饰的磷脂和三萜皂苷的摩尔比为3-8：0.5-1，优选为，咪唑类化合物修饰的磷脂和三萜皂苷的摩尔比为5：0.8。
进一步的，所述咪唑类化合物修饰的磷脂、三萜皂苷、奥沙利铂的摩尔比为3-8：0.5-1：1，优选为，咪唑类化合物修饰的磷脂、三萜皂苷、奥沙利铂的摩尔比为5：0.8：1。
进一步的，所述缓冲溶液为葡萄糖-柠檬酸缓冲液，所述缓冲液pH＝6.0-7.0，优选为缓冲液的pH＝6.4。
本发明的第二个目的在于提供一种奥沙利铂脂质体，由权利要求1所述方法制备而成。
本发明的第三个目的在于提供一种奥沙利铂制剂，所述制剂包含权利要求9所述的奥沙利铂脂质体和药学上可以接受的辅料，所述制剂包括但不限于注射剂。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)本发明利用咪唑类化合物修饰磷脂作为脂质体膜材料，提高了脂质体的载药量，且各批脂质体载药量稳定，能够进一步明确制剂中药物的百分含量，对奥沙利铂脂质体工业化生产具有实用价值。此外，载药量的提高，直接影响药物的临床应用剂量，易满足临床需要。
(2)本发明在脂质体膜材料中添加一定量的三萜皂苷，显著提高了奥沙利铂脂质体的物理稳定性，降低渗漏率。
(3)利用本发明制备的奥沙利铂脂质体进一步制备成注射剂，通过加速试验考察奥沙利铂注射剂的稳定性，并与参比制剂进行对比，显示本发明提供的奥沙利铂脂质体注射剂稳定性更高，有关物质含量少。
附图说明
图1：实施例4的5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的产物外观图
图2：实施例6-10、对比实施例2制备的奥沙利铂脂质体对的包封率与载药量
图3：对比实施例3-7制备的奥沙利铂脂质体对的包封率与载药量
图4：实施例6-10、对比实施例2-7奥沙利铂脂质体的泄漏率
图5：奥沙利铂的有关物质(杂质Ι、杂质ΙΙ、杂质Ⅲ)
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明做进一步的说明，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例，实施例仅用于解释本发明。本领域技术人员应该理解的是，凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
一、咪唑类化合物修饰的磷脂
实施例1咪唑修饰磷脂酰胆碱的制备
咪唑与磷脂酰胆碱按摩尔比1:2(咪唑5g，磷脂酰胆碱10.72g)的比例溶于100ml甲醇，超声，35℃水浴加热回流，放置避光通风处，5-7天结晶，过滤，得到咪唑修饰的磷脂酰胆碱。
实施例2 5-甲基咪唑修饰二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的制备
5-甲基咪唑与二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱按摩尔比1:1(5-甲基咪唑5.00g，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱25.45g)的比例溶于150ml甲醇，超声，35℃水浴加热回流，放置避光通风处，5-7天结晶，过滤，得到5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱。
实施例3 5-甲基咪唑修饰二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的制备
5-甲基咪唑与二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱按摩尔比1:3(5-甲基咪唑1.00g，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱15.27g)的比例溶于100ml乙醇，超声，35℃水浴加热回流，放置避光通风处，6-10天结晶，过滤，得到5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱。
实施例4 5-甲基咪唑修饰二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的制备
5-甲基咪唑与二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱按摩尔比1:2(5-甲基咪唑5.00g，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱10.18g)的比例溶于100ml甲醇，超声，35℃水浴加热回流，放置避光通风处，5-7天结晶，过滤，得到5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱。
实施例5 5-甲基咪唑修饰二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的制备
5-甲基咪唑与二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱按摩尔比1:3(5-甲基咪唑1.00g，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱15.27g)的比例溶于100ml甲醇，超声，35℃水浴加热回流，放置避光通风处，6-10天结晶，过滤，得到5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱。
对比实施例1 5-甲基咪唑修饰磷脂酰甘油的制备
5-甲基咪唑与磷脂酰甘油按摩尔比1:2(5-甲基咪唑2.50g，磷脂酰甘油14.67g)的比例溶于100ml甲醇，超声，35℃水浴加热回流，放置避光通风处，5-7天结晶，过滤，得到5-甲基咪唑修饰的磷脂酰甘油。
参比修饰磷脂
苏氨酸与二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱按摩尔比1:2(苏氨酸3.00g，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱17.06g)的比例溶于100ml甲醇，超声，35℃水浴加热回流，放置避光通风处，5-7天结晶，过滤，得到苏氨酸修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱。
二、咪唑类化合物修饰磷脂的表征
1.结晶产物外观性状
合成结晶后，对结晶产物的外观进行观察对比，实施例1、实施例2、实施例4、实施例5、对比实施例1制备得到的结晶产物外观呈大小基本均一的透明清晰条状晶体，基本无杂质，实施例3、参比修饰磷脂的结晶产物呈透明针状晶体，略微细碎，均一度相对较差，图1为实施例4的结晶产物外观图。
2.结晶产物的结合率测定
方法如下：取已知含量的磷脂溶液和咪唑类化合物修饰磷脂的溶液各0.15ml、0.17ml、0.19ml、0.21ml、0.23ml，补加磷酸缓冲液和0.08％的TNBS液1.0ml，反应2-3h，利用紫外分光光度法测定含量，计算结合率。(参比修饰磷脂的结合率测定方法原理相同)
表1咪唑类化合物修饰磷脂的结合率
需要说明的是，在此仅列举了部分制备咪唑类化合物修饰的磷脂的实施例，以二棕榈酰胆碱、二硬脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺作为磷脂，以咪唑或5-甲基咪唑作为修饰物，以甲醇、乙醇、三氯甲烷、异丙醇作为溶剂合成制备的咪唑类化合物修饰磷脂均已做过实验。因此，优选出咪唑类化合物修饰的磷脂的制备方法为：
咪唑类化合物与磷脂按摩尔比1-3:1-3的比例溶于有机溶剂，超声，30-40℃水浴加热回流，放置避光通风处，结晶，过滤，得到咪唑类化合物修饰的磷脂。
所述磷脂选自磷脂酰胆碱、二棕榈酰胆碱、二硬脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺中的一种，优选为二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱。
所述咪唑类化合物为咪唑或5-甲基咪唑，优选为5-甲基咪唑。
所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、三氯甲烷、异丙醇中的一种或多种，优选为甲醇。
三、奥沙利铂脂质体的制备
实施例6奥沙利铂脂质体的制备方法
(1)实施例4获得的5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱59.40g、三萜皂苷9.54g溶于甲醇，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；
(2)向步骤(1)薄膜中加入溶有5.00g奥沙利铂的葡萄糖-柠檬酸缓冲液(pH＝6.4)，旋转蒸发，振摇，超声，0.1μm聚碳脂膜，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
实施例7奥沙利铂脂质体的制备方法
(1)实施例4获得的5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱35.64g、三萜皂苷11.95g溶于甲醇，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；
(2)向步骤(1)薄膜中加入溶有5.00g奥沙利铂的葡萄糖-柠檬酸缓冲液(pH＝6.0)，旋转蒸发，振摇，超声，0.1μm聚碳脂膜，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
实施例8奥沙利铂脂质体的制备方法
(1)实施例4获得的5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱95.04g、三萜皂苷5.96g溶于甲醇，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；
(2)向步骤(1)薄膜中加入溶有5.00g奥沙利铂的葡萄糖-柠檬酸缓冲液(pH＝7.0)，旋转蒸发，振摇，超声，0.1μm聚碳脂膜，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
实施例9奥沙利铂脂质体的制备方法
(1)实施例1获得的咪唑修饰的磷脂酰胆碱88.24g、三萜皂苷17.71g溶于三氯甲烷，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；
(2)向步骤(1)薄膜中加入溶有5.00g奥沙利铂的葡萄糖-柠檬酸缓冲液(pH＝6.4)，旋转蒸发，振摇，超声，0.1μm聚碳脂膜，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
实施例10奥沙利铂脂质体的制备方法
(1)实施例2获得的5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱50.97g、三萜皂苷9.54g溶于乙醇，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；
(2)向步骤(1)薄膜中加入溶有5.00g奥沙利铂的葡萄糖-柠檬酸缓冲液(pH＝6.4)，旋转蒸发，振摇，超声，0.1μm聚碳脂膜，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
对比实施例2奥沙利铂脂质体的制备方法
(1)对比实施例1获得的5-甲基咪唑修饰磷脂酰甘油57.60g、三萜皂苷9.54g溶于甲醇，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；
(2)向步骤(1)薄膜中加入溶有5.00g奥沙利铂的葡萄糖-柠檬酸缓冲液(pH＝6.4)，旋转蒸发，振摇，超声，0.1μm聚碳脂膜，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
对比实施例3奥沙利铂脂质体的制备方法
(1)实施例4获得的5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱118.8g、三萜皂苷1.2g溶于甲醇，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；
(2)向步骤(1)薄膜中加入溶有5.00g奥沙利铂的葡萄糖-柠檬酸缓冲液(pH＝6.4)，旋转蒸发，振摇，超声，0.1μm聚碳脂膜，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
对比实施例4奥沙利铂脂质体的制备方法
(1)取二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱42.06g、三萜皂苷23.84g溶于甲醇，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；
(2)向步骤(1)薄膜中加入溶有5.00g奥沙利铂的葡萄糖-柠檬酸缓冲液(pH＝6.4)，旋转蒸发，振摇，超声，0.1μm聚碳脂膜，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
对比实施例5奥沙利铂脂质体的制备方法
(1)实施例4获得的5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱59.40g、三萜皂苷9.54g溶于甲醇，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；
(2)向步骤(1)薄膜中加入溶有5.00g奥沙利铂的葡萄糖-磷酸缓冲液(pH＝5.5)，旋转蒸发，振摇，超声，0.1μm聚碳脂膜，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
对比实施例6奥沙利铂脂质体的制备方法
(1)实施例4获得的5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱59.40g溶于甲醇，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；
(2)向步骤(1)薄膜中加入溶有5.00g奥沙利铂的葡萄糖-柠檬酸缓冲液(pH＝6.4)，旋转蒸发，振摇，超声，0.1μm聚碳脂膜，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
对比实施例7奥沙利铂脂质体的制备方法
(1)实施例4获得的5-甲基咪唑修饰的二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱59.40g、胆固醇9.54g溶于甲醇，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；
(2)向步骤(1)薄膜中加入溶有5.00g奥沙利铂的葡萄糖-柠檬酸缓冲液(pH＝6.4)，旋转蒸发，振摇，超声，0.1μm聚碳脂膜，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
四、奥沙利铂脂质体的表征
1.奥沙利铂脂质体的包封率和载药量
利用超滤离心法对奥沙利铂脂质体的包封率和载药量进行测定，测得3批样品计算平均包封率和载药量。
结果如图2-3所示，本发明奥沙利铂脂质体的载药量和包封率高。
2.奥沙利铂脂质体的稳定性
将奥沙利铂脂质体置于30℃下储存，在0d、180d时分别测定其粒径、包封率，计算脂质体的平均粒径和脂质体的泄漏率。
表2奥沙利铂脂质体粒径大小
综上表2和图4结果显示，本发明制备的奥沙利铂脂质体物理性质稳定，在30℃下储存180d时，粒径依然保持均一，且奥沙利铂的泄漏率低，脂质体稳定性高。
五、奥沙利铂脂质体注射剂的制备
实施例11奥沙利铂脂质体注射剂制备(25支，规格20ml：40mg)
取3.17g实施例6所得奥沙利铂脂质体复溶于注射用水中，葡萄糖溶液调节渗透压，缓冲剂调节pH，定量至500ml，0.20μm滤膜过滤，经灭菌、超声处理，微孔滤膜过滤，灌装，即得奥沙利铂脂质体注射剂。
实施例12奥沙利铂脂质体注射剂制备(25支，规格20ml：40mg)
取3.37g实施例7所得奥沙利铂脂质体复溶于注射用水中，葡萄糖溶液调节渗透压，缓冲剂调节pH，定量至500ml，0.20μm滤膜过滤，经灭菌、超声处理，微孔滤膜过滤，灌装，即得奥沙利铂脂质体注射剂。
实施例13奥沙利铂脂质体注射剂制备(25支，规格20ml：40mg)
取3.36g实施例8所得奥沙利铂脂质体复溶于注射用水中，葡萄糖溶液调节渗透压，缓冲剂调节pH，定量至500ml，0.20μm滤膜过滤，经灭菌、超声处理，微孔滤膜过滤，灌装，即得奥沙利铂脂质体注射剂。
实施例14奥沙利铂脂质体注射剂制备(25支，规格20ml：40mg)
取4.01g实施例6所得奥沙利铂脂质体复溶于注射用水中，葡萄糖溶液调节渗透压，缓冲剂调节pH，定量至500ml，0.20μm滤膜过滤，经灭菌、超声处理，微孔滤膜过滤，灌装，即得奥沙利铂脂质体注射剂。
实施例15奥沙利铂脂质体注射剂制备(25支，规格20ml：40mg)
取3.71g实施例6所得奥沙利铂脂质体复溶于注射用水中，葡萄糖溶液调节渗透压，缓冲剂调节pH，定量至500ml，0.20μm滤膜过滤，经灭菌、超声处理，微孔滤膜过滤，灌装，即得奥沙利铂脂质体注射剂。
六、奥沙利铂脂质体注射剂的稳定性考察
加速试验条件：置于高温(40℃)、高湿(相对湿度75±5％)的恒温恒湿箱内进行加速试验，在第0个月、第6个月取样，进行含量、有关物质(杂质Ι、杂质ΙΙ、杂质Ⅲ)、酸度、溶液的澄清度与颜色考察，照《中国药典2020版》第二部奥沙利铂项下方法检查。
参比制剂市售奥沙利铂注射剂(艾*)
表3奥沙利铂脂质体注射剂稳定性考察
通过加速试验考察奥沙利铂注射剂的稳定性，本发明奥沙利铂注射剂符合药典(奥沙利铂、注射用奥沙利铂)项下的各项规定，并与参比制剂进行对比，显示本发明提供的奥沙利铂脂质体注射剂稳定性更高，有关物质低于参比制剂。
Claims (10)
1.一种奥沙利铂脂质体的制备方法，其特征在于，步骤为：
将咪唑类化合物修饰的磷脂、三萜皂苷溶于有机溶剂，减压旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜；加入溶有奥沙利铂的缓冲溶液，旋转蒸发，振摇，超声，过膜挤压，得到奥沙利铂脂质体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述咪唑类化合物修饰的磷脂的制备方法为：咪唑类化合物与磷脂按摩尔比1-3:1-3的比例溶于有机溶剂，超声，30-40℃水浴加热回流，放置避光通风处，结晶，过滤，得到咪唑类化合物修饰的磷脂。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述咪唑类化合物为咪唑或5-甲基咪唑，优选为5-甲基咪唑。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述磷脂选自磷脂酰胆碱、二棕榈酰胆碱、二硬脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺中的一种，优选为二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、三氯甲烷、异丙醇中的一种或多种，优选为甲醇。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述咪唑类化合物修饰的磷脂、三萜皂苷、奥沙利铂的摩尔比为3-8：0.5-1：1，优选为，咪唑类化合物修饰的磷脂、三萜皂苷、奥沙利铂的摩尔比为5：0.8：1。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为葡萄糖-柠檬酸缓冲液，所述缓冲液pH＝6.0-7.0，优选为缓冲液的pH＝6.4。
8.一种奥沙利铂脂质体，其特征在于，所述奥沙利铂脂质体由权利要求1所述方法制备而成。
9.一种奥沙利铂制剂，其特征在于，所述奥沙利铂制剂包含权利要求8所述的奥沙利铂脂质体和药学上可以接受的辅料。
10.根据权利要求9所述的制剂，其特征在于，所述制剂包括但不限于注射剂。
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