CN115452996A - 一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法 - Google Patents
一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115452996A CN115452996A CN202211170446.XA CN202211170446A CN115452996A CN 115452996 A CN115452996 A CN 115452996A CN 202211170446 A CN202211170446 A CN 202211170446A CN 115452996 A CN115452996 A CN 115452996A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acid
- chinese medicine
- traditional chinese
- methanol
- fingerprint
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 59
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 54
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 37
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 title claims description 16
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 title claims description 16
- 208000020029 respiratory tract infectious disease Diseases 0.000 title claims description 16
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 title claims description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 36
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims abstract description 13
- 206010047482 Viral upper respiratory tract infection Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 138
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 claims description 25
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 claims description 23
- 239000001685 glycyrrhizic acid Substances 0.000 claims description 23
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 claims description 23
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 claims description 22
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims description 22
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 claims description 22
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 claims description 22
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 claims description 22
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims description 22
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- VTAJIXDZFCRWBR-UHFFFAOYSA-N Licoricesaponin B2 Natural products C1C(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)CC1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O VTAJIXDZFCRWBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 claims description 20
- DTOUWTJYUCZJQD-UJERWXFOSA-N Forsythiaside Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](OC(=O)\C=C\C=2C=C(O)C(O)=CC=2)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OCCC=2C=C(O)C(O)=CC=2)O1 DTOUWTJYUCZJQD-UJERWXFOSA-N 0.000 claims description 18
- QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N trans-caffeic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 17
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- IQPNAANSBPBGFQ-UHFFFAOYSA-N luteolin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 IQPNAANSBPBGFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- LRDGATPGVJTWLJ-UHFFFAOYSA-N luteolin Natural products OC1=CC(O)=CC(C=2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C=2)=C1 LRDGATPGVJTWLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 235000009498 luteolin Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 16
- QURCVMIEKCOAJU-UHFFFAOYSA-N trans-isoferulic acid Natural products COC1=CC=C(C=CC(O)=O)C=C1O QURCVMIEKCOAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 15
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 13
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 13
- DTOUWTJYUCZJQD-QJDQKFITSA-N Forsythiaside Natural products C[C@@H]1O[C@H](OC[C@H]2O[C@@H](OCCc3ccc(O)c(O)c3)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]2OC(=O)C=Cc4ccc(O)c(O)c4)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O DTOUWTJYUCZJQD-QJDQKFITSA-N 0.000 claims description 12
- 229940074360 caffeic acid Drugs 0.000 claims description 12
- 229940114124 ferulic acid Drugs 0.000 claims description 11
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 claims description 11
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 claims description 11
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims description 10
- ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N (E)-3,4,5-trihydroxycinnamic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 235000004883 caffeic acid Nutrition 0.000 claims description 9
- QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N cis-caffeic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 9
- QBLFZIBJXUQVRF-UHFFFAOYSA-N (4-bromophenyl)boronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=C(Br)C=C1 QBLFZIBJXUQVRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-M (E)-Ferulic acid Natural products COC1=CC(\C=C\C([O-])=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-M 0.000 claims description 8
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- KFFCKOBAHMGTMW-LGQRSHAYSA-N Forsythin Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1[C@H]1[C@@H](CO[C@@H]2C=3C=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)=CC=3)[C@@H]2CO1 KFFCKOBAHMGTMW-LGQRSHAYSA-N 0.000 claims description 8
- QURCVMIEKCOAJU-HWKANZROSA-N Isoferulic acid Natural products COC1=CC=C(\C=C\C(O)=O)C=C1O QURCVMIEKCOAJU-HWKANZROSA-N 0.000 claims description 8
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N eriodictyol 7-O-rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(O)=C(O3)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=O)=C(O)C=2)O1 IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N ferulic acid Chemical compound COC1=CC(\C=C\C(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N 0.000 claims description 8
- 235000001785 ferulic acid Nutrition 0.000 claims description 8
- KSEBMYQBYZTDHS-UHFFFAOYSA-N ferulic acid Natural products COC1=CC(C=CC(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 claims description 8
- FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N quercetin rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000005493 rutin Nutrition 0.000 claims description 8
- IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N rutin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N 0.000 claims description 8
- ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N rutin Natural products CC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5 ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 7
- CWVRJTMFETXNAD-NXLLHMKUSA-N trans-5-O-caffeoyl-D-quinic acid Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)C[C@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-NXLLHMKUSA-N 0.000 claims description 7
- JJVGFDTWFVSBIM-UHFFFAOYSA-N Phillyrin Natural products COc1ccc(cc1OC)C2OCC3C2COC3c4ccc(OC)c(OC5OC(CO)C(O)C(O)C5O)c4 JJVGFDTWFVSBIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KRZBCHWVBQOTNZ-UHFFFAOYSA-N (-) 3,5-dicaffeoyl-muco-quinic acid Natural products OC1C(OC(=O)C=CC=2C=C(O)C(O)=CC=2)CC(O)(C(O)=O)CC1OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 KRZBCHWVBQOTNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- KRZBCHWVBQOTNZ-RDJMKVHDSA-M (-)-3,5-Dicaffeoyl quinic acid Natural products O([C@@H]1CC(O)(C[C@H](C1O)OC(=O)\C=C\C=1C=C(O)C(O)=CC=1)C([O-])=O)C(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 KRZBCHWVBQOTNZ-RDJMKVHDSA-M 0.000 claims description 5
- KRZBCHWVBQOTNZ-PSEXTPKNSA-N 3,5-di-O-caffeoyl quinic acid Chemical compound O([C@@H]1C[C@](O)(C[C@H]([C@@H]1O)OC(=O)\C=C\C=1C=C(O)C(O)=CC=1)C(O)=O)C(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 KRZBCHWVBQOTNZ-PSEXTPKNSA-N 0.000 claims description 5
- KSDSYIXRWHRPMN-UHFFFAOYSA-N 4'-O-beta-D-Galactopyranoside-6''-p-Coumaroylprunin-4',5,7-Trihydroxyflavanone Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)C=C1 KSDSYIXRWHRPMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- DEMKZLAVQYISIA-ONJCETCRSA-N Liquiritin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)c1ccc([C@@H]2Oc3c(C(=O)C2)ccc(O)c3)cc1 DEMKZLAVQYISIA-ONJCETCRSA-N 0.000 claims description 5
- DEMKZLAVQYISIA-UHFFFAOYSA-N Liquirtin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(C2OC3=CC(O)=CC=C3C(=O)C2)C=C1 DEMKZLAVQYISIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- AMBQHHVBBHTQBF-UHFFFAOYSA-N Loganin Natural products C12C(C)C(O)CC2C(C(=O)OC)=COC1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O AMBQHHVBBHTQBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 5
- -1 glucoroniside Chemical compound 0.000 claims description 5
- DEMKZLAVQYISIA-ZRWXNEIDSA-N liquiritin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C([C@H]2OC3=CC(O)=CC=C3C(=O)C2)C=C1 DEMKZLAVQYISIA-ZRWXNEIDSA-N 0.000 claims description 5
- AMBQHHVBBHTQBF-UOUCRYGSSA-N loganin Chemical compound O([C@@H]1OC=C([C@H]2C[C@H](O)[C@H](C)[C@H]21)C(=O)OC)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AMBQHHVBBHTQBF-UOUCRYGSSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 5
- GWTUHAXUUFROTF-UHFFFAOYSA-N pseudochlorogenic acid Natural products C1C(O)C(O)C(O)CC1(C(O)=O)OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 GWTUHAXUUFROTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- GSZUGBAEBARHAW-UHFFFAOYSA-N sophoraflavone B Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(C=2OC3=CC(O)=CC=C3C(=O)C=2)C=C1 GSZUGBAEBARHAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 4
- 241000205585 Aquilegia canadensis Species 0.000 claims description 3
- 241000196131 Dryopteris filix-mas Species 0.000 claims description 3
- 244000303040 Glycyrrhiza glabra Species 0.000 claims description 3
- 235000006200 Glycyrrhiza glabra Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000334160 Isatis Species 0.000 claims description 3
- 235000006679 Mentha X verticillata Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000002899 Mentha suaveolens Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000001636 Mentha x rotundifolia Nutrition 0.000 claims description 3
- 244000274050 Platycodon grandiflorum Species 0.000 claims description 3
- 235000006753 Platycodon grandiflorum Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000014258 Polygonum bistorta Nutrition 0.000 claims description 3
- 244000233952 Polygonum bistorta Species 0.000 claims description 3
- 235000011477 liquorice Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 3
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 claims description 2
- 241000112528 Ligusticum striatum Species 0.000 claims description 2
- 235000003893 Prunus dulcis var amara Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000951473 Schizonepeta Species 0.000 claims description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 claims description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 2
- QIMGUQIHCNDUKU-UHFFFAOYSA-N 2-[[6-[2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethoxy]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]methoxy]-6-methyloxane-3,4,5-triol Chemical compound OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OCCC=2C=C(O)C(O)=CC=2)O1 QIMGUQIHCNDUKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims 1
- 229930189432 forsythoside Natural products 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 20
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 abstract description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 abstract 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 7
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- CWVRJTMFETXNAD-GMZLATJGSA-N 5-Caffeoyl quinic acid Natural products O[C@H]1C[C@](O)(C[C@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-GMZLATJGSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229960005475 antiinfective agent Drugs 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 2
- 241000906579 Actaea cimicifuga Species 0.000 description 1
- 206010003757 Atypical pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 1
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 1
- 208000032376 Lung infection Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 229920002302 Nylon 6,6 Polymers 0.000 description 1
- 244000018633 Prunus armeniaca Species 0.000 description 1
- 235000009827 Prunus armeniaca Nutrition 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 229960000200 ulipristal Drugs 0.000 description 1
- OOLLAFOLCSJHRE-ZHAKMVSLSA-N ulipristal acetate Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C@@H]1C2=C3CCC(=O)C=C3CC[C@H]2[C@H](CC[C@]2(OC(C)=O)C(C)=O)[C@]2(C)C1 OOLLAFOLCSJHRE-ZHAKMVSLSA-N 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/14—Preparation by elimination of some components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N2030/042—Standards
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/14—Preparation by elimination of some components
- G01N2030/146—Preparation by elimination of some components using membranes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,该方法包括指纹图谱检测方法和含量测定方法;指纹图谱检测方法包括:步骤1、供试品溶液的制备;步骤2、混合对照品溶液的制备;步骤3、分别精密吸取供试品与对照品溶液注入液相色谱图仪,记录色谱图;步骤4、将抗感合剂的指纹图谱仪器导出,并导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版”软件中,建立指纹图谱,并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注指纹图谱中峰的化学成分。本发明建立的抗感合剂指纹图谱,能全面、客观地评价中药复方制剂的质量。并且该方法具有稳定性好、准确度高、重复性好、精密度高等优点。
Description
技术领域
本发明属于中药检测技术领域,具体地说,涉及一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法。
背景技术
病毒性上呼吸道感染是内科常见病、多发病,诱发的病毒多种多样,最被国人们所熟知的便是2003年的SARS和目前仍在蔓延的新型冠状病毒(COVID-19),其具有着患病率高、流行广泛、传播迅速的特点。从上世纪起,全球暴发的大流感疫症已致数百万人被其引发的肺部感染等并发症夺去了生命,现已成为人类面临的主要公共健康问题之一。
中医治疗病毒感染性发热主要采用辛凉解表、辛温解表、清暑除湿解表、清肺解热和清气凉营(血)等方法拟定系列方药辨证论治。
抗感合剂为江苏省中医院的院内制剂,本中药复方制剂为2003年非典时期由江苏省中医院国医大师徐景藩教授及多位名老中医针对病毒疫情特点共同拟方开发而成,全方由金银花、连翘、薄荷、桔梗、苦杏仁、拳参、板蓝根、绵马贯众、升麻、荆芥、川芎、甘草十二味中药组成,方中轻清宣透药与清热解毒药相配伍,而非仅用辛凉解表之品,体现了邪袭肺卫证当早用重用清气法之意。该中药复方制剂2004年完成药学、药理、毒理研究,制定江苏省食品药品医疗机构制剂质量标准;2006年获江苏省食品药品监督管理局注册批准。在临床应用10年,特别在是非典、禽流感、甲型H1N1流感、普通流感暴发季节,作为我院病房及江苏省发热门诊的一线用药,在退热、改善流感和感冒症状,治疗病毒性上呼吸道感染等方面,取得了较好的临床疗效。
目前关于抗感合剂的质量检测方法还未建立,本发明建立该中药制剂的HPLC指纹图谱检测方法和含量测定方法,指认主要成分,可以为全面评价和控制抗感合剂质量及临床应用提供参考依据。
发明内容
发明目的:本发明的目的是为了克服现有技术的不足,开发一种关于治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法(简称抗感合剂),通过本发明的方法可以客观、正确、有效的控制抗感合剂的质量,对确保其安全性与有效性,保证临床质量具有重要的指导意义。
技术方案:为实现以上目的,本发明采用的技术方案为:
一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,它包括以下步骤:
步骤1:供试品溶液的制备
取不同批次的中药复方制剂,置容量瓶中,加入适量50%甲醇,超声,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,摇匀,过0.22μm滤膜,即得;
步骤2:混合对照品溶液的制备
分别取绿原酸、芦丁、槲皮素、升麻素苷、异阿魏酸、甘草酸、木犀草素、阿魏酸、连翘苷、木犀草苷、甘草苷、连翘酯苷A、新绿原酸、异绿原酸A、咖啡酸和马钱苷对照品适量,置容量瓶中,加入适量50%甲醇,超声,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,摇匀,制备成混合对照品溶液,0.22μm滤膜滤过,即得;
步骤3、色谱图测定
分别吸取步骤1的供试品溶液和步骤2的混合对照品溶液,注入HPLC得到供试品溶液的色谱图和混合对照品溶液的色谱图;
步骤4、指纹图谱的建立
将步骤3中获得的供试品溶液的指纹图谱导出,并导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版”软件中,设置S1为参照图谱,采用平均数法,时间窗宽度为0.1,经过多点校正后自动匹配,生成对照图谱R,该图谱作为本中药复方制剂的标准指纹图谱,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积;并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。
作为优选方案,以上所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,还包括含量测定方法,具体包括以下步骤:
步骤1:取不同批次的中药复方制剂,置容量瓶中,加入适量50%甲醇,超声,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,摇匀,过0.22μm滤膜,即得;
步骤2:混合对照品溶液的制备
分别取绿原酸、连翘酯苷A和甘草酸对照品适量,置容量瓶中,加入50%甲醇,超声溶解,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,制成绿原酸、连翘酯苷A和甘草酸的混合对照品溶液,0.22μm滤膜滤过,即得;
步骤3:标准曲线的建立
取步骤2混合对照品溶液,加50%甲醇依次稀释得到5个不同浓度的混合对照品溶液,然后注入HPLC,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标建立标准曲线方程;
步骤4:取步骤1的供试品溶液注入HPLC,将色谱图的峰面积代入步骤3的标准曲线方程,计算供试品中对应的有效成分含量。
作为优选方案,以上所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,步骤1、供试品溶液的制备方法为:中药复方制剂的制备:按重量份数取金银花150g、连翘150g、薄荷50g、桔梗30g、苦杏仁60g、拳参150g、板蓝根150g、绵马贯众60g、升麻60g、荆芥50g、川芎30g和甘草30g,加适量水浸泡后,煎煮提取1~3次,合并提取液,减压浓缩,即得。
作为优选方案,以上所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,步骤2混合对照品溶液的制备方法为:分别取绿原酸、芦丁、槲皮素、升麻素苷、异阿魏酸、甘草酸、木犀草素、阿魏酸、连翘苷、木犀草苷、甘草苷、连翘酯苷A、新绿原酸、异绿原酸A、咖啡酸和马钱苷对照品适量,置容量瓶中,加入适量50%甲醇,超声,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,摇匀后分别取1mL置25mL容量瓶中,50%甲醇定容至刻度,制成每1mL含绿原酸35.64μg、芦丁91.76μg、槲皮素92.12μg、升麻素苷51.56μg、异阿魏酸72.32μg、甘草酸17.6μg、木犀草素44.96μg、阿魏酸66.40μg、连翘苷70.40μg、木犀草苷59.72μg、甘草苷62.76μg、连翘酯苷A52.32μg、新绿原酸46.08μg、异绿原酸A 47.48μg、咖啡酸45.24μg、马钱苷56.19μg的混合对照品溶液,0.22μm滤膜滤过,即得。
作为优选方案,以上所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,步骤2:混合对照品溶液的制备方法为:分别取绿原酸、连翘酯苷A和甘草酸对照品适量,置10mL容量瓶中,加入50%甲醇,超声20min,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,分别制成每1mL含绿原酸0.891mg、连翘酯苷A1.308mg和甘草酸0.44mg的对照品溶液,0.22μm滤膜滤过,即得。
作为优选方案,以上所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,HPLC测定时的色谱条件为:色谱柱:Agilent Proshell 120SB-aq色谱柱,规格为4.6mm×100mm,2.7μm;流动相:0.2%磷酸水溶液为A相,乙腈为B相,梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0mL·min-1,检测波长:245nm;进样体积:10μL。
作为优选方案,以上所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,梯度洗脱条件为:
时间/min | 流动相A/% | 流动相B/% |
0 | 94 | 6 |
8 | 94 | 6 |
10 | 92 | 8 |
30 | 92 | 8 |
45 | 85 | 15 |
90 | 75 | 25 |
110 | 60 | 40 |
120 | 94 | 6 |
130 | 94 | 6 |
。
作为优选方案,以上所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,步骤4的标准指纹图谱共有28个共有峰,确认16个成分,分别为2-新绿原酸,6-咖啡酸,8-绿原酸,9-马钱苷,11-阿魏酸,12-异阿魏酸,13-升麻素苷,15-甘草苷,16-芦丁,18-连翘脂苷A,19-木犀草苷,22-异绿原酸A,24-连翘苷,25-槲皮素,26-木犀草素,28-甘草酸。
作为优选方案,以上所述的治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,标准曲线方程为:绿原酸y=14.494x-9.0439,r=0.9999;连翘酯苷A y=8.0476x-1.7831,r=1;甘草酸y=7.1019x-1.9441,r=1。
指纹图谱检测很含量测定方法的条件优化
1、在供试品制备方面进行优化:
本发明分别考察了30%、50%、70%、90%、100%甲醇作为供试品溶剂,结果显示:30%、50%、70%的甲醇相较90%、100%甲醇作为溶剂,图谱信息更加完整;50%甲醇相比70%甲醇各峰分离度更好,相比30%甲醇几个强峰的峰面积略高。因此最终选择50%甲醇作为供试品的溶剂。
本发明分别考察了供试品溶液经加热回流1h提取和超声30min提取,结果显示:加热回流1h和超声30min提取结果近似,考虑到实际应用中的操作便捷性,故选择超声的方式进行提取。
并且,本发明分别考察了供试品溶液超声10、20、30min,结果显示:超声时间在10、20、30min对各色谱峰的影响较小,选择20min作为供试品溶液超声时间。
本发明分别考察了津腾尼龙66(Nylon)0.22μm滤头和Agilent ValueLab fltrPTFE-Q 0.2μm滤头,结果显示:两种滤头对色谱图信息无影响。
2、色谱条件方面优化:
本发明采用紫外检测器对检测波长进行考察,对样品溶液进行190-400nm全波长扫描,考虑图谱中的色谱峰数量和基线稳定,选择245nm为测定波长;
本发明前期选择0.1%的甲酸水溶液作为流动相,各峰分离度尚可,但保留时间不稳定。随后考察了乙腈为B相,A相为0.1%-0.4%的甲酸水溶液,6.5mmol·L-1乙酸铵水溶液,6.5mmol·L-1乙酸铵+0.1%-0.4%的甲酸水溶液,0.1%磷酸水溶液。结果0.1%磷酸水溶液各峰分离度良好,保留时间稳定。进一步对0.1%、0.2%、0.3%磷酸水溶液进行考察。结果表明:随着酸度增加,色谱峰保留时间前移;0.1%磷酸与0.3%色谱图中出现色谱峰叠加现象,因此选择分离效果最好的0.2%磷酸水溶液作为流动相A相。
本发明分别考察依利特Hypersil ODS-5μm 4.6*250mm;GL-Sience AQ-C185μm4.6*250mm;Agilent ZORBAX SB-aq 5μm 4.6*250mm;Agilent Proshell 120SB-aq 2.7μm4.6*100mm;Agilent Proshell 120EC-C182.7μm 4.6*100mm共5根色谱柱,记录色谱图。结果表明:高效色谱柱(100mm)相比普通色谱柱(250mm)有更好的分离效果,想要达到近似的效果,普通色谱柱要延长分析至200min以上,降低了效率,也易造成体系的不稳定。AgilentProshell 120的EC-C18柱分离的色谱峰保留时间相对比较短,峰较为集中;SB-aq则各峰分散较为平均,综合考虑,选择Agilent Proshell 120SB-aq 2.7μm 4.6*100mm为指纹图谱试验所使用的色谱柱;
本发明分别考察0.8、1.0、1.2mL·min-1的流动相流速。结果表明:随着流速的升高,各色谱峰前移;0.8mL·min-1流速的图谱中出现峰叠加现象,1.0和1.2mL·min-1流速则表现出一定的耐用性,故选择此流速。
本发明分别考察25、30、35℃的色谱柱柱温,记录色谱图。结果表明:25和35℃柱温的色谱图中均出现峰叠加现象,因此选择30℃作为本实验的色谱柱柱温。
最终优选得到的色谱条件为:色谱柱:Agilent Proshell 120SB-aq色谱柱,规格为2.7μm,4.6*100mm;流动相:0.2%磷酸水溶液为A相,乙腈为B相,柱温:30℃;流速:1.0mL·min-1,检测波长:245nm;进样体积:10μL。
在优选出最佳的流动相组成后,由于中药复方含有绿原酸、连翘酯苷A和甘草酸等多类成分,等度洗脱方式不能很好的实现各成分的分离,因此本发明进一步筛选了梯度洗脱方式。根据不同梯度条件,优选得到的最佳的梯度洗脱程序为:
时间/min | 流动相A/% | 流动相B(乙腈)/% |
0 | 94 | 6 |
8 | 94 | 6 |
10 | 92 | 8 |
30 | 92 | 8 |
45 | 85 | 15 |
90 | 75 | 25 |
110 | 60 | 40 |
120 | 94 | 6 |
130 | 94 | 6 |
。
本发明的有益效果是:
(1)本发明通过大量实验筛选出最佳的供试品制备方法与对照品的制备方法和最佳的色谱分析条件,建立的抗感合剂指纹图谱和含量测定方法,不但能有效地表征抗感合剂的质量,有利于全面监控抗感合剂药物的质量。
(2)本发明方法具有稳定性好、精密度高、准确度高、重现性好等的优点。可以全面、客观准确的评价和控制抗感合剂的质量。
附图说明
图1为混合对照品溶液的HPLC的色谱图。
图2为抗感合剂的对照指纹图谱。
图3为15批抗感合剂的HPLC叠加指纹图谱。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
以下实施例药品及试剂:
抗感合剂(江苏省中医院,批号:1902008、1903012、1904016、2001001、2001002、2001005、2001007、2001010、2001011、2001013、2002015、2002017、2007022、2009023、2010026,编号为S1~S15)均来自于江苏省中医院院内制剂。
甲醇、乙腈、磷酸为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为超纯水。
实施例1
1、一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,它包括以下步骤:
步骤1:供试品溶液配的制备
取以上S1~S15共15批次的抗感合剂各1mL,分别置50mL容量瓶中,加入适量50%甲醇,超声20min,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,摇匀,过0.22μm滤膜,即得。
步骤2:混合对照品溶液的制备
分别取绿原酸、芦丁、槲皮素、升麻素苷、异阿魏酸、甘草酸、木犀草素、阿魏酸、连翘苷、木犀草苷、甘草苷、连翘酯苷A、新绿原酸、异绿原酸A、咖啡酸和马钱苷对照品适量,置容量瓶中,加入适量50%甲醇,超声,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,摇匀后分别取1mL置25mL容量瓶中,50%甲醇定容至刻度,制成每1mL含绿原酸35.64μg、芦丁91.76μg、槲皮素92.12μg、升麻素苷51.56μg、异阿魏酸72.32μg、甘草酸17.6μg、木犀草素44.96μg、阿魏酸66.40μg、连翘苷70.40μg、木犀草苷59.72μg、甘草苷62.76μg、连翘酯苷A52.32μg、新绿原酸46.08μg、异绿原酸A 47.48μg、咖啡酸45.24μg、马钱苷56.19μg的混合对照品溶液,0.22μm滤膜滤过,即得。
步骤3、分别吸取步骤1的供试品溶液和步骤2的混合对照品溶液,注入HPLC得到供试品溶液的色谱图和混合对照品溶液的色谱图;
本发明的HPLC的色谱条件为:色谱柱:Agilent Proshell 120SB-aq色谱柱,规格为4.6mm×100mm,2.7μm;流动相:0.2%磷酸水溶液为A相,乙腈为B相,梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0mL·min-1,检测波长:245nm;进样体积:10μL。梯度洗脱条件为如下表1:
表1梯度洗脱条件
步骤4、将步骤3中获得的供试品溶液的指纹图谱导出,并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A;选择不同批次供试品溶液的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰;用平均值计算法生成供试品溶液的对照指纹图谱,图谱中共确定28个共有峰。并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。见图1~图3。
其中各峰2-新绿原酸,6-咖啡酸,8-绿原酸,9-马钱苷,11-阿魏酸,12-异阿魏酸,13-升麻素苷,15-甘草苷,16-芦丁,18-连翘脂苷A,19-木犀草苷,22-异绿原酸A,24-连翘苷,25-槲皮素,26-木犀草素,28-甘草酸。
步骤5:相似度评价
将15批次的供试品溶液按进样,记录色谱图,导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A版)进行分析,结果表明15批抗感合剂样品相似度均>0.96,如表2相似度良好。
表2 15批制剂相似度表
2、指纹图谱方法学考察:
(1)精密度试验
取抗感合剂样品(编号S3),按以上步骤1方法制备供试品溶液,再按以上色谱条件连续进样测定6次,以8号色谱峰为参照,计算得各共有峰相对保留时间的RSD均小于3.04%(n=6),相对峰面积的RSD均小于4.97%(n=6),表明该方法精密度良好。
(2)稳定性试验
取抗感合剂样品(编号S3),按以上步骤1方法制备供试品溶液,分别在室温下放置0、2、4、8、12、24h,按以上色谱条件进样测定,以8号色谱峰为参照,计算得各共有峰相对保留时间的RSD均小于3.10%(n=6),相对峰面积的RSD均小于4.96%(n=6),表明供试品溶液在室温下24h内稳定性良好。
(3)重复性试验
取抗感合剂样品(编号S3),按以上步骤1方法制备供试品溶液,再按以上色谱条件进样测定,以8号色谱峰为参照,计算得各共有峰相对保留时间的RSD均小于3.47%(n=6),相对峰面积的RSD均小于4.82%(n=6),表明该方法重复性良好。
实施例2
1、一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法的含量测定方法,具体包括以下步骤:
步骤1:供试品溶液配的制备
取以上S1~S15共15批次的抗感合剂各1mL,分别置50mL容量瓶中,加入适量50%甲醇,超声20min,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,摇匀,过0.22μm滤膜,即得。
步骤2:混合对照品溶液的制备
混合对照品溶液的制备方法为:分别取绿原酸、连翘酯苷A和甘草酸对照品适量,置10mL容量瓶中,加入50%甲醇,超声20min,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,分别制成每1mL含绿原酸0.891mg、连翘酯苷A1.308mg和甘草酸0.44mg的对照品溶液,0.22μm滤膜滤过,即得。
步骤3:标准曲线的建立
取步骤2混合对照品溶液,加50%甲醇依次稀释得到5个不同浓度的混合对照品溶液,按实施例1相同的色谱条件注入HPLC分析,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标建立标准曲线方程;绿原酸y=14.494x-9.0439(r=0.9999),在4.46-89.1μg·mL-1浓度范围下线性关系良好;连翘酯苷A y=8.0476x-1.7831(r=1),在6.54-130.8μg·mL-1浓度范围下线性关系良好;甘草酸y=7.1019x-1.9441(r=1),在2.2-44μg·mL-1浓度范围下线性关系良好;
步骤4:取步骤1的供试品溶液按实施例1相同的色谱条件注入HPLC,将色谱图的峰面积代入步骤3的标准曲线方程,计算供试品中对应的有效成分含量,结果如表3。
表3不同批次含量测定结果表
由以上实验结果表明,本发明建立的抗感合剂指纹图谱检测方法和含量测定方法,能有效地表征抗感合剂的质量,有利于全面监控其质量。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理,而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下,对上述实施例进行修饰或改变。因此,举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变,仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (9)
1.一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,其特征在于,它包括以下步骤:
步骤1:供试品溶液的制备
取不同批次的中药复方制剂,置容量瓶中,加入适量50%甲醇,超声,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,摇匀,过0.22μm滤膜,即得;
步骤2:混合对照品溶液的制备
分别取绿原酸、芦丁、槲皮素、升麻素苷、异阿魏酸、甘草酸、木犀草素、阿魏酸、连翘苷、木犀草苷、甘草苷、连翘酯苷A、新绿原酸、异绿原酸A、咖啡酸和马钱苷对照品适量,置容量瓶中,加入适量50%甲醇,超声,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,摇匀,制备成混合对照品溶液,0.22μm滤膜滤过,即得;
步骤3、色谱图测定
分别吸取步骤1的供试品溶液和步骤2的混合对照品溶液,注入HPLC得到供试品溶液的色谱图和混合对照品溶液的色谱图;
步骤4、指纹图谱的建立
将步骤3中获得的供试品溶液的指纹图谱导出,并导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版”软件中,设置S1为参照图谱,采用平均数法,时间窗宽度为0.1,经过多点校正后自动匹配,生成对照图谱R,该图谱作为本中药复方制剂的标准指纹图谱,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积;并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。
2.根据权利要求1所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,其特征在于,还包括含量测定方法,具体包括以下步骤:
步骤1:取不同批次的中药复方制剂,置容量瓶中,加入适量50%甲醇,超声,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,摇匀,过0.22μm滤膜,即得;
步骤2:混合对照品溶液的制备
分别取绿原酸、连翘酯苷A和甘草酸对照品适量,置容量瓶中,加入50%甲醇,超声溶解,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,制成绿原酸、连翘酯苷A和甘草酸的混合对照品溶液,0.22μm滤膜滤过,即得;
步骤3:标准曲线的建立
取步骤2混合对照品溶液,加50%甲醇依次稀释得到5个不同浓度的混合对照品溶液,然后注入HPLC,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标建立标准曲线方程;
步骤4:取步骤1的供试品溶液注入HPLC,将色谱图的峰面积代入步骤3的标准曲线方程,计算供试品中对应的有效成分含量。
3.根据权利要求1或2所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,其特征在于,
步骤1、供试品溶液的中药复方制剂的制备方法为:按重量份数取金银花150g、连翘150g、薄荷50g、桔梗30g、苦杏仁60g、拳参150g、板蓝根150g、绵马贯众60g、升麻60g、荆芥50g、川芎30g和甘草30g,加适量水浸泡后,煎煮提取1~3次,合并提取液,减压浓缩,即得。
4.根据权利要求1所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,其特征在于,步骤2混合对照品溶液的制备方法为:分别取绿原酸、芦丁、槲皮素、升麻素苷、异阿魏酸、甘草酸、木犀草素、阿魏酸、连翘苷、木犀草苷、甘草苷、连翘酯苷A、新绿原酸、异绿原酸A、咖啡酸和马钱苷对照品适量,置容量瓶中,加入适量50%甲醇,超声,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,摇匀后分别取1mL置25mL容量瓶中,加50%甲醇定容至刻度,制成每1mL含绿原酸35.64μg、芦丁91.76μg、槲皮素92.12μg、升麻素苷51.56μg、异阿魏酸72.32μg、甘草酸17.6μg、木犀草素44.96μg、阿魏酸66.40μg、连翘苷70.40μg、木犀草苷59.72μg、甘草苷62.76μg、连翘酯苷A 52.32μg、新绿原酸46.08μg、异绿原酸A 47.48μg、咖啡酸45.24μg、马钱苷56.19μg的混合对照品溶液,0.22μm滤膜滤过,即得。
5.根据权利要求2所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,其特征在于,步骤2:混合对照品溶液的制备方法为:分别取绿原酸、连翘酯苷A和甘草酸对照品适量,置10mL容量瓶中,加入50%甲醇,超声20min,放至室温后用50%甲醇定容至刻度,分别制成每1mL含绿原酸0.891mg、连翘酯苷A1.308mg和甘草酸0.44mg的对照品溶液,0.22μm滤膜滤过,即得。
6.根据权利要求1或2所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,其特征在于,HPLC测定时的色谱条件为:色谱柱:Agilent Proshell 120 SB-aq色谱柱,规格为4.6mm×100mm,2.7μm;流动相:0.2%磷酸水溶液为A相,乙腈为B相,梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0mL·min-1,检测波长:245nm;进样体积:10μL。
8.根据权利要求1所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,其特征在于,步骤4的标准指纹图谱共有28个共有峰,确认16个成分,分别为2-新绿原酸,6-咖啡酸,8-绿原酸,9-马钱苷,11-阿魏酸,12-异阿魏酸,13-升麻素苷,15-甘草苷,16-芦丁,18-连翘脂苷A,19-木犀草苷,22-异绿原酸A,24-连翘苷,25-槲皮素,26-木犀草素,28-甘草酸。
9.根据权利要求2所述的治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法,其特征在于,标准曲线方程为:绿原酸y=14.494x-9.0439,r=0.9999;连翘酯苷Ay=8.0476x-1.7831,r=1;甘草酸y=7.1019x-1.9441,r=1。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211170446.XA CN115452996B (zh) | 2022-09-23 | 2022-09-23 | 一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211170446.XA CN115452996B (zh) | 2022-09-23 | 2022-09-23 | 一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115452996A true CN115452996A (zh) | 2022-12-09 |
CN115452996B CN115452996B (zh) | 2024-02-02 |
Family
ID=84307084
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211170446.XA Active CN115452996B (zh) | 2022-09-23 | 2022-09-23 | 一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115452996B (zh) |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105675739A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-06-15 | 吉林修正药业新药开发有限公司 | 一种治疗风热感冒中药的hplc特征图谱的构建方法 |
WO2017148426A1 (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-08 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 |
CN107356691A (zh) * | 2017-07-12 | 2017-11-17 | 南京海昌中药集团有限公司 | 建曲指纹图谱的检测方法 |
CN110031570A (zh) * | 2019-05-22 | 2019-07-19 | 南京海昌中药集团有限公司 | 抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法 |
CN111830170A (zh) * | 2020-07-24 | 2020-10-27 | 陕西康城药业股份有限公司 | 一种四季抗病毒合剂成分含量测定方法 |
CN113049700A (zh) * | 2021-03-18 | 2021-06-29 | 江苏弘典中药产业研究院有限公司 | 五味消毒饮的指纹图谱检测方法 |
CN113075303A (zh) * | 2020-01-06 | 2021-07-06 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 一种中药口服制剂指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 |
CN114942291A (zh) * | 2022-06-20 | 2022-08-26 | 江苏省中医院 | 潜阳育阴颗粒的质量检测方法 |
-
2022
- 2022-09-23 CN CN202211170446.XA patent/CN115452996B/zh active Active
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105675739A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-06-15 | 吉林修正药业新药开发有限公司 | 一种治疗风热感冒中药的hplc特征图谱的构建方法 |
WO2017148426A1 (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-08 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 |
CN107356691A (zh) * | 2017-07-12 | 2017-11-17 | 南京海昌中药集团有限公司 | 建曲指纹图谱的检测方法 |
CN110031570A (zh) * | 2019-05-22 | 2019-07-19 | 南京海昌中药集团有限公司 | 抗感冒颗粒的指纹图谱检测方法 |
CN113075303A (zh) * | 2020-01-06 | 2021-07-06 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 一种中药口服制剂指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 |
CN111830170A (zh) * | 2020-07-24 | 2020-10-27 | 陕西康城药业股份有限公司 | 一种四季抗病毒合剂成分含量测定方法 |
CN113049700A (zh) * | 2021-03-18 | 2021-06-29 | 江苏弘典中药产业研究院有限公司 | 五味消毒饮的指纹图谱检测方法 |
CN114942291A (zh) * | 2022-06-20 | 2022-08-26 | 江苏省中医院 | 潜阳育阴颗粒的质量检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
肖会敏;何悦;陈飞;赵荣;杨倩;王四旺;: "四季抗病毒合剂的超快速液相色谱法指纹图谱研究及4个成分的含量测定", 中国医院药学杂志, no. 03 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115452996B (zh) | 2024-02-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20210109068A1 (en) | Fingerprint detection method for antidepressant drug | |
CN108279278B (zh) | 一种分离黄酮类成分的方法及其应用 | |
CN112924586B (zh) | 小柴胡颗粒的检测方法 | |
CN105147800A (zh) | 一种麻杏石甘汤配方颗粒的制备方法及其质量控制方法 | |
CN109342631A (zh) | 中药组合物的hplc指纹图谱的构建方法及中药组合物的质量检测方法 | |
CN114280209B (zh) | 一种小儿清热止咳口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
CN115452996A (zh) | 一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法 | |
CN113917064B (zh) | 清热解毒口服液hplc指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
CN104101657A (zh) | 中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法 | |
CN101904884B (zh) | 一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法 | |
CN109765320A (zh) | 一种用于筋骨伤喷雾剂的含量测定方法 | |
CN110487942B (zh) | 一种抗抑郁药物的指纹图谱检测方法 | |
CN113514576A (zh) | 柴胡药材、提取物及单味制剂的指纹图谱的建立方法 | |
CN112946118A (zh) | 一种药物指纹图谱的测定方法及其指纹图谱 | |
CN101647997A (zh) | 感冒疏风胶囊及其制备方法和质量控制方法 | |
CN110531021A (zh) | 一种复方木芙蓉涂鼻软膏的检测方法 | |
CN109061028A (zh) | 中药贞莲增免口服液质量检测方法 | |
CN115267007B (zh) | 小儿感冒退热糖浆指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
CN115754059B (zh) | 荆防制剂hplc指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱 | |
CN113820404B (zh) | 一种异丙托溴铵气雾剂的uplc分析方法 | |
CN117686605A (zh) | 一种板蓝根注射液中多种成分含量、特征图谱检测方法 | |
CN115097031B (zh) | 一种补中益气口服液的hplc特征图谱的建立方法 | |
CN104391065B (zh) | 通关藤药材及制剂指纹图谱的建立方法及应用 | |
CN115097030B (zh) | 一种测定兰科药材中多种活性成分的方法 | |
CN111089913A (zh) | 一种南柴胡注射液的质量控制方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |