CN101904884B - 一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法。利用软电离质谱技术得到的中药复方板蓝根颗粒的电喷雾指纹图谱中特征指纹峰的个数及强度，对中药复方板蓝根颗粒的质量进行初步评价；以尿苷作为标准对照品，通过高效液相色谱测定，得到中药复方板蓝根颗粒中尿苷的含量为0.19-0.22mg/g；利用紫外-可见分光光度法，采用芦丁作为标准对照品，硝酸铝与黄酮类化合物形成配合物的显色原理进行测定，得到中药复方板蓝根颗粒中总黄酮的含量以芦丁计为1.27-1.30mg/g。本发明提供的一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法，既定性又定量，保证了中药复方板蓝根颗粒质量检测方法的科学性和先进性。
Description
技术领域
本发明属于天然药物化学领域，具体涉及一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法，
背景技术
复方板蓝根颗粒是中华人民共和国卫生部药品标准所收载的中药成方制剂，具有清热解毒、凉血之功效，用于治疗温病发热、出斑、风热感冒、咽喉肿烂、流行性乙型脑炎、肝炎和腮腺炎等[1]。现代药效学研究表明，复方板蓝根颗粒具有解热、抗炎以及治疗病毒性心肌炎的作用[2，3]。目前，对复方板蓝根颗粒的质量控制方法主要是基于靛蓝、靛玉红等成分的定量分析[4，5]，不足以从整体上控制复方板蓝根颗粒的质量。作为临床常用制剂，其真伪优劣受其药材来源、生产过程等诸多因素的影响，因此，有必要建立一种科学的质量检测方法对复方板蓝根颗粒的质量进行评价。(参考文献：[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准[M].第十二册.[2]贾德武.复方板蓝根颗粒解热抗炎作用的实验研究[J].中医药临床杂志，2008，20(4)：358-359.[3]马维勇，陆仁英，许帆.复方板蓝根颗粒治疗病毒性心肌炎的疗效观察[J].实用心脑肺血管病杂志，2003，11(3)：135-138.[4]李向阳，屠万倩，李振国.HPLC法测定复方板蓝根颗粒中靛玉红的含量[J].中医研究，2005，18(7)：18-19.[5]孙立新，佟立今，毕开顺.复方板蓝根颗粒定量方法的研究[J].中国现代应用药学杂志，2002，19(2)：138-140.)
发明内容
本发明的目的是提供一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法。该方法利用中药复方板蓝根颗粒的电喷雾质谱做指纹图谱，利用高效液相色谱法测定了中药复方板蓝根颗粒中尿苷的含量，并利用紫外-可见分光光度法测定了中药复方板蓝根颗粒中总黄酮的含量，保证了中药复方板蓝根颗粒质量检测方法的科学性和质量检测的先进性。
本发明利用软电离质谱技术对中药复方板蓝根颗粒进行检测，根据得到的中药复方板蓝根颗粒的电喷雾指纹图谱中特征指纹峰的个数及强度，对中药复方板蓝根颗粒的质量进行初步评价；考虑到中药复方板蓝根颗粒中含有多种核苷类成分，并且以尿苷为主，因此本发明以尿苷作为标准对照品，通过高效液相色谱测定，得到尿苷标准对照品对应色谱峰的峰面积，根据标准曲线测定供试样品中尿苷的含量；本发明还考虑到中药复方板蓝根颗粒中含有多种黄酮类成分，因此本发明利用紫外-可见分光光度法，采用芦丁作为标准对照品，硝酸铝与黄酮类化合物形成配合物的显色原理进行测定黄酮类成分，完成一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法。
实施本发明的技术方案如下：
(1)中药复方板蓝根颗粒电喷雾指纹图谱测定
①中药复方板蓝根颗粒供试样品溶液的制备
称取中药复方板蓝根颗粒2-10g，加10-50mL水溶解，干燥后置于10mL容量瓶中，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，过滤，即为供试品溶液；
②中药复方板蓝根颗粒供试样品的电喷雾指纹图谱
取5-10μL供试品溶液，用甲醇稀释至100-500μL，做电喷雾质谱分析，电喷雾质谱实验条件如下：电喷雾电离源，正离子电离方式，喷雾电压为4.0-5.0kV，毛细管温度180-250℃，流动注入泵进样流速3-8μL/min，扫描范围质荷比(m/z)50-1000，在m/z100-350范围内，存在m/z104、m/z116、m/z133、m/z175、m/z182、m/z185、m/z203、m/z210、m/z287和m/z337离子。
(2)中药复方板蓝根颗粒中尿苷的含量测定
①高效液相色谱实验条件：C18色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；柱温：20-35℃；流动相：水和甲醇；水与甲醇体积比为90∶10-95∶5；洗脱时间：15-30min；紫外检测器检测波长：230-280nm；样品进样量：5-20μL；
②尿苷标准对照品溶液的配制：取1mg的尿苷标准对照品，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，配成尿苷标准对照品溶液；
③尿苷线性关系的考察：将尿苷标准对照品溶液以4、8、12、16、20μL进样，测得尿苷标准对照品的高效液相色谱峰面积；以所得尿苷标准对照品峰面积为纵坐标，对应尿苷标准对照品的进样质量为横坐标，计算得线性回归方程；
④中药复方板蓝根颗粒供试品溶液的高效液相色谱测定：按照步骤①高效液相色谱实验条件，将中药复方板蓝根颗粒供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到尿苷色谱峰的峰面积，根据尿苷标准对照品的线性回归方程，计算得供试品溶液中尿苷的质量，并结合供试品的质量与中药复方板蓝根颗粒的质量的比例，得到中药复方板蓝根颗粒中尿苷的含量为0.19-0.22mg/g。
(3)中药复方板蓝根颗粒总黄酮含量测定
①芦丁标准对照品溶液的制备
称量20mg芦丁对照品，置于25mL容量瓶中，用60％(V/V)乙醇溶解并定容至25mL，摇匀，即为芦丁标准对照品溶液，备用；
②芦丁线性关系的考察
用移液枪精密移取芦丁对照品溶液0、40、80、120、160、200μL，分别置6个25mL容量瓶中，分别加入0.05g/mL亚硝酸钠水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.10g/mL硝酸铝水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.04g/mL氢氧化钠水溶液1mL，加60％(V/V)乙醇分别定容至刻度，摇匀，静置15min，作为待测溶液；于490-510nm波长处测定待测溶液的吸光度，以芦丁对照品溶液的吸光度(A)为纵坐标，对应芦丁对照品的浓度(C)为横坐标，计算得芦丁对照品的线性回归方程；
③中药复方板蓝根颗粒供试品溶液总黄酮的含量测定：
将中药复方板蓝根颗粒供试品溶液于490-510nm波长处测定吸光度，根据中药复方板蓝根颗粒供试品溶液的吸光度和得到的芦丁对照品的线性回归方程，测得中药复方板蓝根颗粒供试品溶液中总黄酮的含量，根据供试样品的质量与中药复方板蓝根颗粒的质量的比例，得到中药复方板蓝根颗粒中总黄酮的含量以芦丁计为1.27-1.30mg/g。
有益效果：本发明提供一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法。利用软电离质谱技术对中药复方板蓝根颗粒进行检测，根据得到的中药复方板蓝根颗粒的电喷雾指纹图谱中特征指纹峰的个数及强度，对中药复方板蓝根颗粒的质量进行初步评价；
考虑到中药复方板蓝根颗粒中含有多种核苷类成分，并且以尿苷为主，因此本发明以尿苷作为标准对照品，通过高效液相色谱测定，得到尿苷标准对照品对应色谱峰的峰面积，根据标准曲线测定供试样品中尿苷的含量；本发明还考虑到中药复方板蓝根颗粒中含有多种黄酮类成分，因此本发明利用紫外-可见分光光度法，采用芦丁作为标准对照品，硝酸铝与黄酮类化合物形成配合物的显色原理进行测定黄酮类成分，完成一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法，得到中药复方板蓝根颗粒中尿苷的含量为0.19-0.22mg/g；得到中药复方板蓝根颗粒中总黄酮的含量以芦丁计为1.27-1.30mg/g。本发明提供的一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法，既定性又定量，保证了中药复方板蓝根颗粒质量检测方法的科学性和先进性。
具体实施方式
实施例1
(1)复方板蓝根颗粒电喷雾指纹图谱测定
①复方板蓝根颗粒供试样品溶液的制备
称取复方板蓝根颗粒2g，加10mL水溶解，干燥后置于10mL容量瓶中，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，过滤，即为供试品溶液；
②复方板蓝根颗粒供试样品的电喷雾指纹图谱
取5μL供试品溶液，用甲醇稀释至100μL，做电喷雾质谱分析，电喷雾质谱实验条件如下：电喷雾电离源，正离子电离方式，喷雾电压为4.0kV，毛细管温度20℃，流动注入泵进样流速3μL/min，扫描范围质荷比(m/z)50-1000，在m/z100-350范围内，存在m/z104、m/z116、m/z133、m/z175、m/z182、m/z185、m/z203、m/z210、m/z287和m/z337离子。
②中药复方板蓝根颗粒供试样品的电喷雾指纹图谱
(2)复方板蓝根颗粒中尿苷的含量测定
①高效液相色谱实验条件：C18色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；柱温：20℃；流动相：水和甲醇；水与甲醇体积比为90∶10；洗脱时间：15min；紫外检测器检测波长：230nm；样品进样量：20μL；
②尿苷标准对照品溶液的配制：取1mg的尿苷标准对照品，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，配成尿苷标准对照品溶液；
③尿苷线性关系的考察：将尿苷标准对照品溶液以4、8、12、16、20μL进样，测得尿苷标准对照品的高效液相色谱峰面积；以所得尿苷标准对照品峰面积为纵坐标，对应尿苷标准对照品的进样质量为横坐标，计算得线性回归方程；
④复方板蓝根颗粒供试品溶液的高效液相色谱测定：将复方板蓝根颗粒供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到尿苷色谱峰的峰面积，根据尿苷标准对照品的线性回归方程，计算得供试品溶液中尿苷的质量，并结合供试品的质量与复方板蓝根颗粒的质量的比例得到复方板蓝根颗粒中尿苷的含量为0.20-0.21mg/g。
(3)复方板蓝根颗粒总黄酮含量测定
①芦丁标准对照品溶液的制备
精密称量20mg芦丁对照品，置于25mL容量瓶中，用60％(V/V)乙醇溶解并定容至25mL，摇匀，即为芦丁标准对照品溶液，备用；
②芦丁线性关系的考察
用移液枪精密移取芦丁对照品溶液0、40、80、120、160、200μL，分别置6个25mL容量瓶中，分别加入0.05g/mL亚硝酸钠水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.10g/mL硝酸铝水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.04g/mL氢氧化钠水溶液1mL，加60％(V/V)乙醇分别定容至刻度，摇匀，静置15min，作为待测溶液；于500nm波长处测定待测溶液的吸光度，以芦丁对照品溶液的吸光度(A)为纵坐标，对应芦丁对照品的浓度(C)为横坐标，计算得芦丁对照品的线性回归方程；
③复方板蓝根颗粒供试品溶液总黄酮的含量测定：
将复方板蓝根颗粒供试品溶液于500nm波长处测定吸光度，根据复方板蓝根颗粒供试品溶液的吸光度和得到的芦丁对照品的线性回归方程，测得复方板蓝根颗粒供试品溶液中总黄酮的含量，根据供试样品的质量与复方板蓝根颗粒的质量的比例，得到复方板蓝根颗粒中总黄酮的含量以芦丁计为1.29-1.30mg/g，完成一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法。
实施例2
(1)复方板蓝根颗粒电喷雾指纹图谱测定
①复方板蓝根颗粒供试样品溶液的制备
称取复方板蓝根颗粒4g，加20mL水溶解，干燥后置于10mL容量瓶中，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，过滤，即为供试品溶液；
②复方板蓝根颗粒供试样品的电喷雾指纹图谱
取6μL供试品溶液，用甲醇稀释至200μL，做电喷雾质谱分析，电喷雾质谱实验条件如下：电喷雾电离源，正离子电离方式，喷雾电压为4.2kV，毛细管温度180℃，流动注入泵进样流速5μL/min，扫描范围质荷比(m/z)50-1000，在m/z100-350范围内，存在m/z104、m/z116、m/z133、m/z175、m/z182、m/z185、m/z203、m/z210、m/z287和m/z337离子。
(2)复方板蓝根颗粒中尿苷的含量测定
①高效液相色谱实验条件：C18色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；柱温：25℃；流动相：水和甲醇；水与甲醇体积比为92∶8；洗脱时间：20min；紫外检测器检测波长：254nm；样品进样量：5μL；
②尿苷标准对照品溶液的配制：取1mg的尿苷标准对照品，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，配成尿苷标准对照品溶液；
③尿苷线性关系的考察：将尿苷标准对照品溶液以4、8、12、16、20μL进样，测得尿苷标准对照品的高效液相色谱峰面积；以所得尿苷标准对照品峰面积为纵坐标，对应尿苷标准对照品的进样质量为横坐标，计算得线性回归方程；
④复方板蓝根颗粒供试品溶液的高效液相色谱测定：将复方板蓝根颗粒供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到尿苷色谱峰的峰面积，根据尿苷标准对照品的线性回归方程，计算得供试品溶液中尿苷的质量，并结合供试品的质量与复方板蓝根颗粒的质量的比例得到复方板蓝根颗粒中尿苷的含量为0.19-0.20mg/g。
(3)复方板蓝根颗粒总黄酮含量测定
①芦丁标准对照品溶液的制备
精密称量20mg芦丁对照品，置于25mL容量瓶中，用60％(V/V)乙醇溶解并定容至25mL，摇匀，即为芦丁标准对照品溶液，备用；
②芦丁线性关系的考察
用移液枪精密移取芦丁对照品溶液0、40、80、120、160、200μL，分别置6个25mL容量瓶中，分别加入0.05g/mL亚硝酸钠水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.10g/mL硝酸铝水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.04g/mL氢氧化钠水溶液1mL，加60％(V/V)乙醇分别定容至刻度，摇匀，静置15min，作为待测溶液；于490nm波长处测定待测溶液的吸光度，以芦丁对照品溶液的吸光度(A)为纵坐标，对应芦丁对照品的浓度(C)为横坐标，计算得芦丁对照品的线性回归方程；
③复方板蓝根颗粒供试品溶液总黄酮的含量测定：
将复方板蓝根颗粒供试品溶液于490nm波长处测定吸光度，根据复方板蓝根颗粒供试品溶液的吸光度和得到的芦丁对照品的线性回归方程，测得复方板蓝根颗粒供试品溶液中总黄酮的含量，根据供试样品的质量与复方板蓝根颗粒的质量的比例，得到复方板蓝根颗粒中总黄酮的含量以芦丁计为1.27-1.28mg/g，完成一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法。
实施例3
(1)复方板蓝根颗粒电喷雾指纹图谱测定
①复方板蓝根颗粒供试样品溶液的制备
称取复方板蓝根颗粒6g，加30mL水溶解，干燥后置于10mL容量瓶中，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，过滤，即为供试品溶液；
②复方板蓝根颗粒供试样品的电喷雾指纹图谱
取7μL供试品溶液，用甲醇稀释至300μL，做电喷雾质谱分析，电喷雾质谱实验条件如下：电喷雾电离源，正离子电离方式，喷雾电压为4.5kV，毛细管温度250℃，流动注入泵进样流速6μL/min，扫描范围质荷比(m/z)50-1000，在m/z100-350范围内，存在m/z104、m/z116、m/z133、m/z175、m/z182、m/z185、m/z203、m/z210、m/z287和m/z337离子。
(2)复方板蓝根颗粒中尿苷的含量测定
①高效液相色谱实验条件：C18色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；柱温：35℃；流动相：水和甲醇；水与甲醇体积比为93∶7；洗脱时间：22min；紫外检测器检测波长：265nm；样品进样量：10μL；
②尿苷标准对照品溶液的配制：取1mg的尿苷标准对照品，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，配成尿苷标准对照品溶液；
③尿苷线性关系的考察：将尿苷标准对照品溶液以4、8、12、16、20μL进样，测得尿苷标准对照品的高效液相色谱峰面积；以所得尿苷标准对照品峰面积为纵坐标，对应尿苷标准对照品的进样质量为横坐标，计算得线性回归方程；
④复方板蓝根颗粒供试品溶液的高效液相色谱测定：将复方板蓝根颗粒供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到尿苷色谱峰的峰面积，根据尿苷标准对照品的线性回归方程，计算得供试品溶液中尿苷的质量，并结合供试品的质量与复方板蓝根颗粒的质量的比例得到复方板蓝根颗粒中尿苷的含量为0.21-0.22mg/g。
(3)复方板蓝根颗粒总黄酮含量测定
①芦丁标准对照品溶液的制备
精密称量20mg芦丁对照品，置于25mL容量瓶中，用60％(V/V)乙醇溶解并定容至25mL，摇匀，即为芦丁标准对照品溶液，备用；
②芦丁线性关系的考察
用移液枪精密移取芦丁对照品溶液0、40、80、120、160、200μL，分别置6个25mL容量瓶中，分别加入0.05g/mL亚硝酸钠水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.10g/mL硝酸铝水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.04g/mL氢氧化钠水溶液1mL，加60％(V/V)乙醇分别定容至刻度，摇匀，静置15min，作为待测溶液；于510nm波长处测定待测溶液的吸光度，以芦丁对照品溶液的吸光度(A)为纵坐标，对应芦丁对照品的浓度(C)为横坐标，计算得芦丁对照品的线性回归方程；
③复方板蓝根颗粒供试品溶液总黄酮的含量测定：
将复方板蓝根颗粒供试品溶液于510nm波长处测定吸光度，根据复方板蓝根颗粒供试品溶液的吸光度和得到的芦丁对照品的线性回归方程，测得复方板蓝根颗粒供试品溶液中总黄酮的含量，根据供试样品的质量与复方板蓝根颗粒的质量的比例，得到复方板蓝根颗粒中总黄酮的含量以芦丁计为1.28-1.29mg/g，完成一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法。
实施例4
(1)复方板蓝根颗粒电喷雾指纹图谱测定
①复方板蓝根颗粒供试样品溶液的制备
称取复方板蓝根颗粒8g，加40mL水溶解，干燥后置于10mL容量瓶中，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，过滤，即为供试品溶液；
②复方板蓝根颗粒供试样品的电喷雾指纹图谱
取8μL供试品溶液，用甲醇稀释至400μL，做电喷雾质谱分析，电喷雾质谱实验条件如下：电喷雾电离源，正离子电离方式，喷雾电压为4.8kV，毛细管温度220℃，流动注入泵进样流速7μL/min，扫描范围质荷比(m/z)50-1000，在m/z100-350范围内，存在m/z104、m/z116、m/z133、m/z175、m/z182、m/z185、m/z203、m/z210、m/z287和m/z337离子。
(2)复方板蓝根颗粒中尿苷的含量测定
①高效液相色谱实验条件：C18色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃；流动相：水和甲醇；水与甲醇体积比为94∶6；洗脱时间：25min；紫外检测器检测波长：270nm；样品进样量：8μL；
②尿苷标准对照品溶液的配制：取1mg的尿苷标准对照品，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，配成尿苷标准对照品溶液；
③尿苷线性关系的考察：将尿苷标准对照品溶液以4、8、12、16、20μL进样，测得尿苷标准对照品的高效液相色谱峰面积；以所得尿苷标准对照品峰面积为纵坐标，对应尿苷标准对照品的进样质量为横坐标，计算得线性回归方程；
④复方板蓝根颗粒供试品溶液的高效液相色谱测定：将复方板蓝根颗粒供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到尿苷色谱峰的峰面积，根据尿苷标准对照品的线性回归方程，计算得供试品溶液中尿苷的质量，并结合供试品的质量与复方板蓝根颗粒的质量的比例得到复方板蓝根颗粒中尿苷的含量为0.20-0.21mg/g。
(3)复方板蓝根颗粒总黄酮含量测定
①芦丁标准对照品溶液的制备
精密称量20mg芦丁对照品，置于25mL容量瓶中，用60％(V/V)乙醇溶解并定容至25mL，摇匀，即为芦丁标准对照品溶液，备用；
②芦丁线性关系的考察
用移液枪精密移取芦丁对照品溶液0、40、80、120、160、200μL，分别置6个25mL容量瓶中，分别加入0.05g/mL亚硝酸钠水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.10g/mL硝酸铝水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.04g/mL氢氧化钠水溶液1mL，加60％(V/V)乙醇分别定容至刻度，摇匀，静置15min，作为待测溶液；于505nm波长处测定待测溶液的吸光度，以芦丁对照品溶液的吸光度(A)为纵坐标，对应芦丁对照品的浓度(C)为横坐标，计算得芦丁对照品的线性回归方程；
③复方板蓝根颗粒供试品溶液总黄酮的含量测定：
将复方板蓝根颗粒供试品溶液于505nm波长处测定吸光度，根据复方板蓝根颗粒供试品溶液的吸光度和得到的芦丁对照品的线性回归方程，测得复方板蓝根颗粒供试品溶液中总黄酮的含量，根据供试样品的质量与复方板蓝根颗粒的质量的比例，得到复方板蓝根颗粒中总黄酮的含量以芦丁计为1.27-1.29mg/g，完成一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法。
实施例5
(1)复方板蓝根颗粒电喷雾指纹图谱测定
①复方板蓝根颗粒供试样品溶液的制备
称取复方板蓝根颗粒10g，加50mL水溶解，干燥后置于10mL容量瓶中，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，过滤，即为供试品溶液；
②复方板蓝根颗粒供试样品的电喷雾指纹图谱
取10μL供试品溶液，用甲醇稀释至500μL，做电喷雾质谱分析，电喷雾质谱实验条件如下：电喷雾电离源，正离子电离方式，喷雾电压为5.0kV，毛细管温度190℃，流动注入泵进样流速8μL/min，扫描范围质荷比(m/z)50-1000，在m/z100-350范围内，存在m/z104、m/z116、m/z133、m/z175、m/z182、m/z185、m/z203、m/z210、m/z287和m/z337离子。
(2)复方板蓝根颗粒中尿苷的含量测定
①高效液相色谱实验条件：C18色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；柱温：25℃；流动相：水和甲醇；水与甲醇体积比为95∶5；洗脱时间：30min；紫外检测器检测波长：280nm；样品进样量：12μL；
②尿苷标准对照品溶液的配制：取1mg的尿苷标准对照品，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，配成尿苷标准对照品溶液；
③尿苷线性关系的考察：将尿苷标准对照品溶液以4、8、12、16、20μL进样，测得尿苷标准对照品的高效液相色谱峰面积；以所得尿苷标准对照品峰面积为纵坐标，对应尿苷标准对照品的进样质量为横坐标，计算得线性回归方程；
④复方板蓝根颗粒供试品溶液的高效液相色谱测定：将复方板蓝根颗粒供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到尿苷色谱峰的峰面积，根据尿苷标准对照品的线性回归方程，计算得供试品溶液中尿苷的质量，并结合供试品的质量与复方板蓝根颗粒的质量的比例得到复方板蓝根颗粒中尿苷的含量为0.19-0.20mg/g。
(3)复方板蓝根颗粒总黄酮含量测定
①芦丁标准对照品溶液的制备
精密称量20mg芦丁对照品，置于25mL容量瓶中，用60％(V/V)乙醇溶解并定容至25mL，摇匀，即为芦丁标准对照品溶液，备用；
②芦丁线性关系的考察
用移液枪精密移取芦丁对照品溶液0、40、80、120、160、200μL，分别置6个25mL容量瓶中，分别加入0.05g/mL亚硝酸钠水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.10g/mL硝酸铝水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.04g/mL氢氧化钠水溶液1mL，加60％(V/V)乙醇分别定容至刻度，摇匀，静置15min，作为待测溶液；于495nm波长处测定待测溶液的吸光度，以芦丁对照品溶液的吸光度(A)为纵坐标，对应芦丁对照品的浓度(C)为横坐标，计算得芦丁对照品的线性回归方程；
③复方板蓝根颗粒供试品溶液总黄酮的含量测定：
将复方板蓝根颗粒供试品溶液于495nm波长处测定吸光度，根据复方板蓝根颗粒供试品溶液的吸光度和得到的芦丁对照品的线性回归方程，测得复方板蓝根颗粒供试品溶液中总黄酮的含量，根据供试样品的质量与复方板蓝根颗粒的质量的比例，得到复方板蓝根颗粒中总黄酮的含量以芦丁计为1.27-1.28mg/g，完成一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法。
Claims (1)
1.一种中药复方板蓝根颗粒的质量检测方法，其特征在于步骤和条件如下：
(1)中药复方板蓝根颗粒电喷雾指纹图谱测定
①中药复方板蓝根颗粒供试样品溶液的制备
称取中药复方板蓝根颗粒2-10g，加10-50mL水溶解，干燥后置于10mL容量瓶中，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，过滤，即为供试品溶液；
②中药复方板蓝根颗粒供试样品的电喷雾指纹图谱
取5-10μL供试品溶液，用甲醇稀释至100-500μL，做电喷雾质谱分析，电喷雾质谱实验条件如下：电喷雾电离源，正离子电离方式，喷雾电压为4.0-5.0kV，毛细管温度180-250℃，流动注入泵进样流速3-8μL/min，扫描范围质荷比(m/z)50-1000，在m/z100-350范围内，存在m/z104、m/z116、m/z133、m/z175、m/z182、m/z185、m/z203、m/z210、m/z287和m/z337离子，
(2)中药复方板蓝根颗粒中尿苷的含量测定
①高效液相色谱实验条件：C18色谱柱：4.6mm×250mm，5μm；柱温：20-35℃；流动相：水和甲醇；水与甲醇体积比为90∶10-95∶5；洗脱时间：15-30min；紫外检测器检测波长：230-280nm；样品进样量：5-20μL；
②尿苷标准对照品溶液的配制：取1mg的尿苷标准对照品，加50％(V/V)甲醇定容至10mL，配成尿苷标准对照品溶液；
③尿苷线性关系的考察：将尿苷标准对照品溶液以4、8、12、16、20μL进样，测得尿苷标准对照品的高效液相色谱峰面积；以所得尿苷标准对照品峰面积为纵坐标，对应尿苷标准对照品的进样质量为横坐标，计算得线性回归方程；
④中药复方板蓝根颗粒供试品溶液的高效液相色谱测定：按照步骤①高效液相色谱实验条件，将中药复方板蓝根颗粒供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到尿苷色谱峰的峰面积，根据尿苷标准对照品的线性回归方程，计算得供试品溶液中尿苷的质量，并结合供试品的质量与中药复方板蓝根颗粒的质量的比例，得到中药复方板蓝根颗粒中尿苷的含量为0.19-0.22mg/g，
(3)中药复方板蓝根颗粒总黄酮含量测定
①芦丁标准对照品溶液的制备
称量20mg芦丁对照品，置于25mL容量瓶中，用60％(V/V)乙醇溶解并定容至25mL，摇匀，即为芦丁标准对照品溶液，备用；
②芦丁线性关系的考察
用移液枪精密移取芦丁对照品溶液0、40、80、120、160、200μL，分别置6个25mL容量瓶中，分别加入0.05g/mL亚硝酸钠水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.10g/mL硝酸铝水溶液0.2mL，摇匀，静置6min，再分别加入0.04g/mL氢氧化钠水溶液1mL，加60％(V/V)乙醇分别定容至刻度，摇匀，静置15min，作为待测溶液；于490-510nm波长处测定待测溶液的吸光度，以芦丁对照品溶液的吸光度(A)为纵坐标，对应芦丁对照品的浓度(C)为横坐标，计算得芦丁对照品的线性回归方程；
③中药复方板蓝根颗粒供试品溶液总黄酮的含量测定：
将中药复方板蓝根颗粒供试品溶液于490-510nm波长处测定吸光度，根据中药复方板蓝根颗粒供试品溶液的吸光度和得到的芦丁对照品的线性回归方程，测得中药复方板蓝根颗粒供试品溶液中总黄酮的含量，根据供试样品的质量与中药复方板蓝根颗粒的质量的比例，得到中药复方板蓝根颗粒中总黄酮的含量以芦丁计为1.27-1.30mg/g。
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