CN115444861A - 一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，制备所述碳量子点的碳源为人体的组织细胞，将人体组织细胞与溶剂混合，使用微波对混合物进行加热，通过过滤及透析，透析液即为碳量子点的水溶液，透析液通过干燥得到粉末状碳量子点。其中，采用人体组织细胞作为碳源，制备碳量子点，保证碳量子点的同源性和降低治疗期间的免疫干扰。采用人体活组织或活细胞作为碳源，通过更加简便的一步微波辅助加热法，制备碳量子点。利用细胞液及组织液中的具有抗菌特性或对抗菌有利的氨基酸及其他成份对碳量子点进行原位表面修饰以实现超高正电功能化。利用细胞液或组织液中存在血红蛋白参与原位反应，可实现碳量子点荧光红移（甚至发射红光），这将极大促进碳量子点在700~1300nm的治疗窗口发挥作用。合成的碳量子点具有良好的生物相容性、抗耐药性、抗菌及抗生物膜性、细胞无毒性、靶向选择性、工艺简单、成本低廉，皮肤无刺激且对环境友好。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，特别涉及一种具有生物相容性、抗耐药性、抗菌及抗生物膜性、细胞无毒性、靶向选择性、工艺简单、成本低廉的皮肤无刺激的、环境友好型的碳量子点的制备方法。
背景技术
慢性难愈性感染创面中细菌耐药性及细菌生物膜问题尤为突出，常规消毒方式效果不佳，导致感染迁延不愈甚至不断进展，从而导致感染相关性重症，甚至危及生命，但目前针对慢性感染性创面的常规消毒手段较为单一，效果不佳，亟需有效的消毒方法降低创面细菌含量、延缓甚至终止感染创面进一步恶化，为后续保守/手术治疗提供良好的创面基础；此外，慢性难愈性感染创面其细菌谱与普通创面相比具有显著差异性，其感染致病菌具有耐药性强、细菌生物膜发生率高、常规消毒剂灭菌效果差等特点，因此，研发新型灭菌手段符合创面修复专科发展趋势，对慢性感染性创面的治疗及预防具有重要的临床意义。
慢性难愈性感染创面修复困难的主要原因是创面微环境存在着许多不利于创面修复的因素。其中一大因素是感染，开放营养丰富的创面将成为病原性微生物等优良的滋生场所，同时细菌等微生物繁殖代谢所产生的毒素又进一步促进组织细胞坏死。针对感染性创面，目前临床及文献报道中多采用各种抗生素作为主要治疗手段。然而，由于抗生素的长期和过度使用，引发细菌耐药性的上升，进一步造成耐药细菌及耐多药细菌的出现，从而导致现阶段常用的以抗生素为主的治疗方法已经无法完全满足日益增加的医疗诊治需求。
虽然已经报道的使用各种有机碳源、无机碳源及天然碳源等通过“自上而下”或“自下而上”的方法制备出了碳量子点，同时使用抗生素、多肽、赖氨酸、精氨酸等各种抗菌物质对碳量子点进行表面修饰，得到功能化的碳量子点在表现出超高正电性的同时，无论在体外抗菌实验中还是在小鼠等动物模型中，都具有良好的抗菌和组织修复能力，同时表现出良好的生物相容性及抗耐药性。但是针对人体而言，由于碳源的细胞亲合度、细胞免疫干扰或细胞分子机制等多种不确定性，还是无法保证所制备的碳量子点是否可在人体慢性难愈性创面中发挥理想作用而不产生免疫干扰。
本发明通过使用志愿者正常组织细胞为碳源，采用一步微波加热辅助法，合成具有生物相容性、抗耐药性、抗菌及抗生物膜性、细胞无毒性、靶向选择性、工艺简单、成本低廉的皮肤无刺激的、环境友好型的碳量子点。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
（1）采用人体组织细胞作为碳源，制备碳量子点，保证碳量子点的同源性和降低治疗期间的免疫干扰。
（2）采用人体活组织或活细胞作为碳源，通过更加简便的一步微波辅助加热法，制备碳量子点。
（3）利用细胞液及组织液中的具有抗菌特性或对抗菌有利的氨基酸及其他成份对碳量子点进行原位表面修饰以实现超高正电功能化。
（4）利用细胞液或组织液中存在血红蛋白参与原位反应，可实现碳量子点荧光红移（甚至发射红光），这将极大促进碳量子点在700~1300nm的治疗窗口发挥作用。
（5）合成的碳量子点具有良好的生物相容性、抗耐药性、抗菌及抗生物膜性、细胞无毒性、靶向选择性、工艺简单、成本低廉，皮肤无刺激且对环境友好。
本发明采取以下技术方案：一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，制备所述碳量子点的碳源为人体的组织细胞，将人体组织细胞与溶剂混合，使用微波对混合物进行加热，通过过滤及透析，透析液即为碳量子点的水溶液，透析液通过干燥得到粉末状碳量子点，包括以下步骤：
步骤一：将若干人体的组织细胞与溶剂混合，得到混合物A；
步骤二：使用微波对混合物A进行加热处理得到混合物B；
步骤三：将混合物B进行过滤得到滤液A；
步骤四：将滤液A透析得到透析液A；
步骤五：将透析液A通过干燥得到粉末状碳量子点，本发明具有以下优点：合成的碳量子点具有良好的生物相容性、抗耐药性、抗菌及抗生物膜性、细胞无毒性、靶向选择性、工艺简单、成本低廉，皮肤无刺激且对环境友好。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，制备混合物A所使用的溶剂为水、乙醇、乙醚、丙酮、DMF、冰醋酸、氯仿、四氯化碳、甲苯、乙二醇、丙二醇等实验常用溶剂中的一种或几种溶剂的混合液。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，制备混合物A所用的溶剂水可为自来水、泉水、井水、引用纯净水、去离子水中的一种或者几种水的混合液，保证溶剂水中不含阻止实验成功的物质即可。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，人体的组织细胞的重量范围为0.0001g~1000kg。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，人体的组织细胞为人体内外各部位各器官的组织、细胞或组织及细胞的混合物。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，人体内外各部位各器官的组织可以是活组织也可以是死亡的组织。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，人体内外各部位各器官的细胞可以是活细胞也可以是死亡的细胞。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，人体组织细胞与溶剂的质量比例范围为1：0.001~1：10000。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，使用的微波可以用市面上售卖的各种微波炉及其他可产生微波的设备提供微波源，也可以用实验室专用的设备提供微波源，还可以用自制各种设备提供微波源。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，使用微波对混合物A进行加热处理的时间范围为0.01毫秒~10000分钟。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将混合物B进行过滤时，所用的过滤方法，可以是重力过滤、加压过滤、真空过滤、离心过滤或磁与真空过滤相结合过滤等的一种或几种方式。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，对混合物B进行过滤处理的次数范围为1~10000次。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，对混合物B进行过滤处理的滤膜的孔径范围为0.01μm~10000μm。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的透析膜可以是标准膜和生物技术膜中的一种或两种。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的透析膜的材质可以是再生纤维素(RC)、纤维素酯(CE)、聚偏二氟乙烯（PVDF）中的一种或几种。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的透析膜的形状为管状膜（或卷装透析管或透析袋）、即用透析装置(RDD)及平片膜中的一种或几种。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的卷装透析管分为干型、预湿型或预处理型中的一种或几种。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的即用透析装置(RDD)为Float-A-Lyzer G2、Tube-A-Lyzer和透析包中的一种或几种。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的平片膜为方片膜或圆片状膜中的一种或两种。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的透析时间范围为0.01毫秒~10000分钟。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用需透析次数范围为1 ~10000次。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用涉及的透析膜的截留分子量范围为10~18000。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将透析液A进行干燥时，所用的干燥方法为常压干燥、减压干燥、喷雾干燥、沸腾干燥或冷冻干燥中的一种或几种。
所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，使用微波对透析液A进行干燥处理的时间范围为0.01毫秒~10000分钟。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员可以更好地理解本发明，下面结合实施例对本发明技术方案进一步说明，但本发明并不受其限制。
一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，制备所需的碳源为人体的组织细胞，将人体组织细胞与溶剂混合，使用微波对混合物进行加热，通过过滤及透析，透析液即为碳量子点的水溶液，透析液通过干燥得到粉末状碳量子点。
抗菌性能及生物相容性测试：
测试前准备工作：
(1)试验所用菌种：革兰氏阳性菌（MRSA）和革兰氏阴性菌（MRAB）；
(2)营养肉汤配方：将胰蛋白胨(1g)、牛肉浸粉(0 .3g)、氯化钠(0 .5g)分别溶于100mL蒸馏水中，经125℃高压蒸汽灭菌25min处理；
(3)固体培养基配方：将胰蛋白胨(10g)、牛肉浸粉(3g)、氯化钠(5g)、琼脂(10g)溶于1000mL蒸馏水中，加热溶解。经125℃高压蒸汽灭菌25min处理；
(4)平板培养基制备：将已灭菌且未凝固的固体培养基快速倒入无菌培养皿中，每个培养皿(直径12cm)中大约注入15mL左右液体，水平放置，待室温冷却固化；
(5)菌悬液制备：接种环经酒精灯灭菌处理后，从斜面菌种上挑取适量菌体接种于已灭菌的营养肉汤中，在37℃左右培养18h，所得菌液浓度为108cells/mL。
体外抗菌光照影响测试：记录光照下细菌存活率。
碳量子点穿透细菌测试：在共焦激光扫描显微镜下，观察细菌与碳量子点孵育15分钟后的荧光特性。
体外抗菌实验：分别增加浓度和提高作用时间，观察碳量子点的抗菌能力。
体外毒性实验：用不同浓度的碳量子点与细菌共培养一段时间后，用CCK-8法检测3T3成纤维细胞的活性。
溶血实验：在与不同浓度的碳量子点孵育后，观察红细胞的溶血现象。
实施例1：
步骤一：将2g人体的活组织与20 mL蒸馏水混合，得到混合物A；
步骤二：使用家用微波炉（800W，格兰仕，中国）对混合物A进行加热处理10分钟得到混合物B；
步骤三：将混合物B进行离心过滤10次，约60分钟，得到滤液A；
步骤四：将滤液A用截留分子量为500的透析膜透析3次，约72小时，得到透析液A；
步骤五：将透析液A通过常温干燥72小时后得到粉末状碳量子点。
体外抗菌光照影响测试：为了更好地探索碳量子点的体外抗菌能力，选择一株典型的革兰氏阳性菌（MRSA）和一株革兰氏阴性菌（MRAB）。记录590 nm光照下细菌存活率大于97.5%，这表明光对MRAB或MRSA的存活率几乎没有影响。
碳量子点穿透细菌测试：在共焦激光扫描显微镜下，细菌与碳量子点（20µg/mL）孵育15分钟后显示出明亮的荧光，这表明碳量子点很容易进入细菌。
体外抗菌实验：随着碳量子点浓度的增加，MRAB或MRSA的存活率相应降低。对于MRAB，当碳量子点浓度上升至50µg/mL时，只有14.3%的菌落存在，但由于MRSA的细胞壁较厚，因此需要更多（浓度=100µg/mL）的碳量子点来杀死MRSA。
随着培养时间从0分钟延长到45分钟，细菌存活率分别从97.7%下降到3.3%（MRAB）和7.5%（MRSA）。为了测试PDT的加速抗菌效果，我们将培养时间固定在15分钟，然后用光照射细菌悬浮液（30 mW/cm2） 分别持续5、10和15分钟。照射15分钟后，在固体Luria肉汤琼脂平板上几乎没有发现菌落，这表明PDT可以加速MRAB或MRSA的完全杀灭。
细胞毒性测试：为了进一步评估碳量子点在辐射下的细胞毒性，将3T3成纤维细胞与碳量子点（0.1 mg/mL）孵育−1）在暴露于近红外光下10分钟后，用PBS洗涤24小时。由于碳量子点与细胞之间的弱结合，细胞存活率仍然超过90%。
溶血实验：纳米材料与人类主要血液成分的血液相容性是另一个重要的毒理学方面。本研究结果表明，在与不同浓度的碳量子点孵育3小时后，未观察到红细胞的明显溶血，而用去离子水处理的阳性对照组显示出严重溶血。
实施例2：
步骤一：将5g人体的活细胞与50 mL蒸馏水混合，得到混合物A；
步骤二：使用家用微波炉（500W，美的，中国）对混合物A进行加热处理20分钟得到混合物B；
步骤三：将混合物B进行真空过滤10次，约60分钟，得到滤液A；
步骤四：将滤液A用截留分子量为800的透析膜透析5次，约80小时，得到透析液A；
步骤五：将透析液A通过减压干燥48小时后得到粉末状碳量子点。
体外抗菌光照影响测试：为了更好地探索碳量子点的体外抗菌能力，选择一株典型的革兰氏阳性菌（MRSA）和一株革兰氏阴性菌（MRAB）。记录590 nm光照下细菌存活率大于98%，这表明光对MRAB或MRSA的存活率几乎没有影响，与实施例1结果相近。
碳量子点穿透细菌测试：在共焦激光扫描显微镜下，细菌与碳量子点（20µg/mL）孵育10分钟后显示出明亮的荧光，这表明碳量子点很容易进入细菌，与实施例1结果相近。
体外抗菌实验：随着碳量子点浓度的增加，MRAB或MRSA的存活率相应降低。对于MRAB，当碳量子点浓度上升至50µg/mL时，只有16%的菌落存在，但由于MRSA的细胞壁较厚，因此需要更多（浓度=120µg/mL）的碳量子点来杀死MRSA，与实施例1结果相近。
随着培养时间从0分钟延长到45分钟，细菌存活率分别从97%下降到3.1%（MRAB）和7.2%（MRSA）。为了测试PDT的加速抗菌效果，将培养时间固定在15分钟，然后用光照射细菌悬浮液（40 mW/cm2） 分别持续5、10和15分钟。照射15分钟后，在固体Luria肉汤琼脂平板上几乎没有发现菌落，这表明PDT可以加速MRAB或MRSA的完全杀灭，与实施例1结果相近。
细胞毒性测试：将3T3成纤维细胞与碳量子点（0.1 mg/mL）孵育−1）在暴露于近红外光下10分钟后，用PBS洗涤24小时。由于碳量子点与细胞之间的弱结合，细胞存活率仍然超过91.5%，与实施例1结果相近。
溶血实验：在与不同浓度的碳量子点孵育3小时后，未观察到红细胞的明显溶血，而用去离子水处理的阳性对照组显示出严重溶血，与实施例1结果相近。
实施例3：
步骤一：将2g人体的活细胞、3g人体的活组织与50 mL蒸馏水混合，得到混合物A；
步骤二：使用家用微波炉（800W，格力，中国）对混合物A进行加热处理15分钟得到混合物B；
步骤三：将混合物B进行加压过滤10次，约72分钟，得到滤液A；
步骤四：将滤液A用截留分子量为600的透析膜透析6次，约72小时，得到透析液A；
步骤五：将透析液A通过冷冻干燥72小时后得到粉末状碳量子点。
体外抗菌光照影响测试：为了更好地探索碳量子点的体外抗菌能力，选择一株典型的革兰氏阳性菌（MRSA）和一株革兰氏阴性菌（MRAB）。记录590 nm光照下细菌存活率大于96%，这表明光对MRAB或MRSA的存活率几乎没有影响，与实施例1和实施例2结果相近。
碳量子点穿透细菌测试：在共焦激光扫描显微镜下，细菌与碳量子点（20µg/mL）孵育10分钟后显示出明亮的荧光，这表明碳量子点很容易进入细菌，与实施例1和实施例2结果相近。
体外抗菌实验：随着碳量子点浓度的增加，MRAB或MRSA的存活率相应降低。对于MRAB，当碳量子点浓度上升至50µg/mL时，只有14%的菌落存在，但由于MRSA的细胞壁较厚，因此需要更多（浓度=150µg/mL）的碳量子点来杀死MRSA，与实施例1和实施例2结果相近。
随着培养时间从0分钟延长到45分钟，细菌存活率分别从96%下降到3.6%（MRAB）和7.7%（MRSA）。为了测试PDT的加速抗菌效果，将培养时间固定在15分钟，然后用光照射细菌悬浮液（35 mW/cm2） 分别持续5、10和15分钟。照射15分钟后，在固体Luria肉汤琼脂平板上几乎没有发现菌落，这表明PDT可以加速MRAB或MRSA的完全杀灭，与实施例1和实施例2结果相近。
细胞毒性测试：将3T3成纤维细胞与碳量子点（0.1 mg/mL）孵育）在暴露于近红外光下10分钟后，用PBS洗涤24小时。由于碳量子点与细胞之间的弱结合，细胞存活率仍然超过92%，与实施例1和实施例2结果相近。
溶血实验：在与不同浓度的碳量子点孵育3小时后，未观察到红细胞的明显溶血，而用去离子水处理的阳性对照组显示出严重溶血，与实施例1和实施例2结果相近。
Claims (22)
1.一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，制备所述碳量子点的碳源为人体的组织细胞，将人体组织细胞与溶剂混合，使用微波对混合物进行加热，通过过滤及透析，透析液即为碳量子点的水溶液，透析液通过干燥得到粉末状碳量子点，包括以下步骤：
步骤一：将若干人体的组织细胞与溶剂混合，得到混合物A；
步骤二：使用微波对混合物A进行加热处理得到混合物B；
步骤三：将混合物B进行过滤得到滤液A；
步骤四：将滤液A透析得到透析液A；
步骤五：将透析液A通过干燥得到粉末状碳量子点，本发明具有以下优点：合成的碳量子点具有良好的生物相容性、抗耐药性、抗菌及抗生物膜性、细胞无毒性、靶向选择性、工艺简单、成本低廉，皮肤无刺激且对环境友好。
2.根据权利要求1所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，制备混合物A所使用的溶剂可为水、乙醇、乙醚、丙酮、DMF、冰醋酸、氯仿、四氯化碳、甲苯、乙二醇、丙二醇等实验常用溶剂中的一种或几种溶剂的混合液。
3.根据权利要求1所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，人体的组织细胞的重量范围为0.0001g~1000kg。
4.根据权利要求1所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，人体的组织细胞为人体内外各部位各器官的组织、细胞或组织及细胞的混合物。
5.根据权利要求4所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，人体内外各部位各器官的组织可以是活组织也可以是死亡的组织。
6.根据权利要求4所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，人体内外各部位各器官的细胞可以是活细胞也可以是死亡的细胞。
7.根据权利要求2所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，使用的微波可以用市面上售卖的各种微波炉及其他可产生微波的设备提供微波源，也可以用实验室专用的设备提供微波源，还可以用自制各种设备提供微波源。
8.根据权利要求2所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，使用微波对混合物A进行加热处理的时间范围为0.01毫秒~10000分钟。
9.根据权利要求3所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将混合物B进行过滤时，所用的过滤方法，可以是重力过滤、加压过滤、真空过滤、离心过滤或磁与真空过滤相结合过滤等的一种或几种方式。
10.根据权利要求3所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，使用微波对混合物B进行过滤处理的次数范围为1~10000次。
11.根据权利要求3所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，使用微波对混合物B进行过滤处理的滤膜的孔径范围为0.01μm~10000μm。
12.根据权利要求4所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的透析膜可以是标准膜和生物技术膜中的一种或两种。
13.根据权利要求4所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的透析膜的材质可以是再生纤维素(RC)、纤维素酯(CE)、聚偏二氟乙烯（PVDF）中的一种或几种。
14.根据权利要求4所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的透析膜的形状为管状膜（或卷装透析管或透析袋）、即用透析装置(RDD)及平片膜中的一种或几种。
15.根据权利要求14所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的卷装透析管分为干型、预湿型或预处理型中的一种或几种。
16.根据权利要求9所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的即用透析装置(RDD)为Float-A-Lyzer G2、Tube-A-Lyzer和透析包中的一种或几种。
17.根据权利要求14所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的平片膜为方片膜或圆片状膜中的一种或两种。
18.根据权利要求4所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用的透析时间范围为0.01毫秒~10000分钟。
19.根据权利要求4所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用需透析次数范围为1 ~10000次。
20.根据权利要求4所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将滤液A进行透析时，所用涉及的透析膜的截留分子量范围为10~18000。
21.根据权利要求5所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，将透析液A进行干燥时，所用的干燥方法为常压干燥、减压干燥、喷雾干燥、沸腾干燥或冷冻干燥中的一种或几种。
22.根据权利要求5所述的一种治疗慢性难愈性感染创面的碳量子点的制备方法，其特征在于，使用微波对透析液A进行干燥处理的时间范围为0.01毫秒~10000分钟。
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